CN104262263A - 一种N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂及其制备方法和应用 - Google Patents
一种N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂及其制备方法和应用，该抑制剂的结构式为其中R为单取代基或双取代基，取代基为烷基或卤素；R1为单取代基或双取代基，取代基为烷基或卤素。该系列抑制剂体外对ABL1激酶有一定的抑制作用，且能够抑制肿瘤细胞的增殖，可用于抗肿瘤药物的制备，尤其是CML(慢性粒细胞性白血病)药物。本发明提供的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法，具有原料易得，反应条件温和，反应过程操作简单，所用试剂便宜的优点。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，涉及一种抗癌化合物，特别涉及一种N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂及其制备方法和应用。
背景技术
慢性粒细胞白血病是发生于血液系统的恶性肿瘤，发病率较高，占成人白血病的15％～20％，在各年龄段均可发病，以中老年病例为常见，是威胁人类生命的主要疾病之一，其分子机制是Bcr-Abl激酶组成型激活。针对白血病的治疗，已从传统的化疗药物、干扰素治疗转向分子靶向治疗，克服了化疗药物靶向性低，毒副作用大的缺点。小分子靶向抑制剂的开发使得慢性粒细胞白血病的治疗取得了革命性的进展，但是，随着临床用药发现，Bcr-Abl激酶易发生耐药性突变、其他信号通路代偿性激活等均影响药物无法达到预期的治疗效果。因此新的针对耐药性突变的抗白血病药物的研究与开发是目前药学领域的热点和难点问题之一。
发明内容
本发明的目的在于提供一种N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂及其制备方法和应用，能够应用于抗癌药物的制备。
为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案来实现的：
一种N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂，具有如下结构式：
其中，R为单取代基或双取代基，取代基为烷基或卤素；R1为单取代基或双取代基，取代基为烷基或卤素。
所述的R为单取代基时，取代基位于苯环上胺基的邻位、间位或对位；R1为单取代基时，取代基位于苯环上羧基的邻位、间位或对位；
所述的R、R1为双取代基时，取代基相同或不同，取代位置相邻或相间。
一种N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法，包括以下操作：
1)4,6-二氯嘧啶与含有取代基的苯胺发生亲核取代反应制备6-氯-N-取代苯基嘧啶-4-胺；
2)6-氯-N-取代苯基嘧啶-4-胺与对羧基苯硼酸经Suzuki偶联反应制备4-(6-取代苯胺嘧啶-4-基)苯甲酸；
3)含有取代基的苯甲酸与哌嗪反应制备得到单酰胺化的哌嗪；
4)4-(6-取代苯胺嘧啶-4-基)苯甲酸与单酰胺化的哌嗪通过缩合反应，得到N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂。
所述步骤1)的具体操作为：将4,6-二氯嘧啶与含有取代基的苯胺溶于异丙醇中，在搅拌的条件下滴加浓硫酸，加热回流反应，反应完后冷却至室温，放在4℃冰箱中过夜，然后抽滤，干燥滤饼，得到6-氯-N-取代苯基嘧啶-4-胺粗品；
所述步骤2)的具体操作为：将6-氯-N-取代苯基嘧啶-4-胺粗品与对羧基苯硼酸溶于乙腈和水的混合溶剂中，加入碳酸铯、四(三苯基膦)钯，以氮气保护，在90℃下恒温反应24～48小时，反应完后热抽滤，将滤液蒸干除去乙腈，再用乙酸乙酯萃取、水相用浓盐酸调节至pH为弱酸性，析出固体，然后抽滤、干燥滤饼，得到4-(6-取代苯胺嘧啶-4-基)苯甲酸。
所述步骤3)的具体操作为：在冰浴条件下，将哌嗪加入浓盐酸中，然后在室温下搅拌反应过夜，再抽滤，干燥滤饼，得到哌嗪二盐酸盐；将含有取代基的苯甲酸用无水四氢呋喃溶解，加入CDI，室温反应2小时，然后将其逐滴加入到哌嗪二盐酸盐和哌嗪的饱和氯化钠溶液中，室温反应6小时，反应完后蒸干四氢呋喃，用乙酸乙酯萃取，水相用氢氧化钠溶液调至pH＝10，再用乙酸乙酯萃取，萃取的有机相用无水硫酸钠干燥、然后抽滤、蒸干乙酸乙酯，得到单酰胺化的哌嗪。
所述步骤4)的具体操作为：在冰浴条件下，将氯甲酸异丁酯滴加到含三乙胺的四氢呋喃中，搅拌至产生白色粘稠状胶体，然后向其中滴加4-(6-取代苯胺嘧啶-4-基)苯甲酸和三乙胺的四氢呋喃溶液，滴加完毕后撤去冰浴，在室温下反应过夜，生成活性酸酐，然后向其中滴加单酰胺化的哌嗪，在室温下反应24小时，反应结束后蒸干四氢呋喃，依次用饱和碳酸氢钠洗涤、乙酸乙酯萃取、萃取的有机相用无水硫酸钠干燥，最后抽滤、蒸干乙酸乙酯，得粗品，再经柱色谱分离得到N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂。
所述的对羧基苯硼酸的制备步骤为：对溴甲苯通过格式反应制备格式试剂对甲苯基溴化镁，格式试剂与硼酸三甲酯反应得到对甲基苯硼酸甲酯，对甲基苯硼酸甲酯水解得到对甲基苯硼酸，对甲基苯硼酸氧化得到对羧基苯硼酸。
制备对羧基苯硼酸的具体操作为：将镁条用饱和氯化铵溶液浸泡，除去表面的氧化镁，干燥至无水，然后放入烧瓶中，加热并不断抽取反应体系内的氧气，待反应体系冷却至室温，迅速向烧瓶内加入少许碘粒，抽真空，微热至镁条表面变为棕黄色，然后迅速升高温度，通过注射器向体系内缓慢注入对溴甲苯的四氢呋喃溶液引发反应，回流反应6小时后将其冷却至室温，在-30℃的低温搅拌条件下，缓慢注入硼酸三甲酯的四氢呋喃溶液反应过夜。接着对反应产物依次进行稀盐酸水解、乙酸乙酯萃取、无水硫酸钠干燥、抽滤、蒸干除去乙酸乙酯、重结晶、热抽滤，滤液置于4℃的冰箱中析出白色固体后抽滤，干燥得到对甲基苯硼酸。将对甲基苯硼酸溶于氢氧化钠溶液中，在冰浴条件下，通过恒压滴液漏斗缓慢加入高锰酸钾、四丁基溴化铵的水溶液，滴加完毕后，在室温下搅拌反应过夜，用少量乙醇淬灭反应体系，抽滤，滤液用浓盐酸调pH至酸性，析出白色固体，抽滤，滤饼干燥即为对羧基苯硼酸。
所述的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂在制备Bcr-Abl抑制剂药物中的应用。
所述的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。
所述的抗肿瘤药物为治疗白血病的药物。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供的具有抗肿瘤活性的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂，是一种新型的具有抗Bcr-Abl激酶活性的化合物，在体外对Bcr-Abl激酶具有良好的抑制活性，可用于白血病药物的制备。Bcr-Abl激酶在细胞信号转导和转化中发挥重要作用，它通过磷酸化和活化一系列下游底物，促使CML成熟粒细胞无限增生。Bcr-Abl在正常细胞中不表达，是治疗CML的理想靶标。Bcr-Abl抑制剂通过抑制Bcr-Abl激酶活性可达到治疗CML的目的。实验结果表明本发明所制备的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂能够有效地抑制Bcr-Abl的活性并抑制肿瘤细胞的生长和增殖，说明所制备的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂可用于制备Bcr-Abl抑制剂药物和抗肿瘤药物。
本发明提供的具有抗肿瘤活性的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法，具有原料易得，反应条件温和，反应过程操作简单，所用试剂便宜的优点。
本发明提供的具有抗肿瘤活性的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂，能够对K562白血病细胞抑制其细胞增殖活性和抑制与该疾病相关的Bcr-Abl激酶活性，可应用于白血病药物的制备。
附图说明
图1为N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂的合成路线图；
其中化合物1为4,6-二氯嘧啶，化合物2为取代的苯胺，化合物3为6-氯-N-取代苯基嘧啶-4-胺，化合物4为对溴甲苯，化合物5为对甲苯基溴化镁，化合物6为对甲基苯硼酸甲酯，化合物7为对甲基苯硼酸，化合物8为对羧基苯硼酸，化合物9为4-(6-取代苯胺嘧啶-4-基)苯甲酸，化合物10为哌嗪，化合物11为哌嗪二盐酸盐，化合物12为哌嗪一盐酸盐，化合物13为含有取代基的苯甲酸，化合物14为活性酰胺中间体，化合物15为单酰胺化的哌嗪，化合物16为最终目标化合物N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂。
图中标注的具体为：
(a).Mg,I2,THF,回流；(b).B(OCH3)3,-30℃；(c).HCl,rt；(d).KMnO4,TBAB,NaOH/H2O,rt；(e).i-PrOH,conc.H2SO4,回流；(f).Pd(Pph3)4,Cs2CO3,MeCN/H2O,90℃,N2；(g).CDI,THF,rt；(h).conc.HCl；(i).NaCl/H2O；(j).H2O,rt；(k).i-BuCOOCl,TEA,THF。
具体实施方式
本发明提供一种具有抗白血病活性的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂，该类Bcr-Abl抑制剂在体外体现出较好的抗白血病活性，能够应用于白血病药物的制备。
下面结合附图和实施例对本发明做详细的说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
本发明提供的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂，其化学结构式为：
其中，R为单取代基或双取代基，取代基为烷基或卤素；R1为单取代基或双取代基，取代基为烷基或卤素。
R为单取代基时，取代基位于苯环上胺基的邻位、间位或对位；
R1为单取代基时，取代基位于苯环上羧基的邻位、间位或对位；
R、R1为双取代基时，取代基相同或不同，取代位置相邻或相间。
下面结合图1中所示的合成路线和具体的合成实例来详细说明N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法和活性筛选方法。
实施例1
该抑制剂的结构式中，R1为氟原子，处于邻位，R为三氟甲基，处于对位，通过以下步骤制备(参见图1)：
1)4,6-二氯嘧啶与对三氟甲基苯胺发生亲核取代反应制备6-氯-N-[4-(三氟甲基)苯基]嘧啶-4-胺；
将4,6-二氯嘧啶3.88g(26mmol)和对三氟甲基苯胺3.3g(20mmol)溶于40ml异丙醇中，在搅拌的条件下，逐滴加入1.5ml浓硫酸，加热回流反应6小时，监测反应体系。冷却至室温后放在4℃冰箱中过夜，析出白色固体后抽滤，将滤饼放在烘箱中干燥，得到6-氯-N-[4-(三氟甲基)苯基]嘧啶-4-胺粗品4.9g，产率90％。
2)对溴甲苯经格氏反应、酯化、水解、氧化反应制备对羧基苯硼酸；
将镁条3.6g(150mmol)用饱和氯化铵溶液浸泡10分钟，水洗5次除去表面的氧化镁和无机盐，无水四氢呋喃冲洗两遍后放在红外快速干燥箱内烘干，然后放入两颈烧瓶中，加热并不断抽取反应体系内的氧气，待反应体系冷却至室温，迅速向两颈烧瓶内加入3粒碘粒，抽真空，微热至镁条表面变为棕黄色后迅速升高温度，通过注射器向体系内缓慢注入对溴甲苯17.1g(100mmol)的四氢呋喃溶液50ml引发反应，加热回流反应6小时后将反应体系冷却至室温，置于-30摄氏度低温恒温搅拌反应浴中，缓慢注入硼酸三甲酯14.1g(150mmol)的四氢呋喃溶液50ml反应过夜。加入2mol/L盐酸100ml水解5小时、乙酸乙酯萃取三遍、合并有机相用无水硫酸钠干燥、抽滤、蒸干除去乙酸乙酯、重结晶(重结晶所用溶剂：水)、热抽滤、滤液置于4℃冰箱中析出白色固体抽滤、干燥得到对甲基苯硼酸7.3g，产率55％。将对甲基苯硼酸7.3g(53.67mmol)溶于1mol/L161mL氢氧化钠溶液中，在冰浴条件下，通过恒压滴液漏斗缓慢加入高锰酸钾25.44g(161mmol)、四丁基溴化铵0.54g(1.67mmol)水溶液537ml，滴加完毕，撤去冰浴，室温搅拌反应过夜，用20ml乙醇淬灭反应体系1小时，抽滤，滤液用浓盐酸调pH至2析出白色固体，抽滤，滤饼干燥即为对羧基苯硼酸粗品7.0g,产率80％；
3)6-氯-N-[4-(三氟甲基)苯基]嘧啶-4-胺与对羧基苯硼酸经Suzuki偶联反应制备4-(6-{[4-(三氟甲基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)苯甲酸；
将6-氯-N-[4-(三氟甲基)苯基]嘧啶-4-胺2.7g(10mmol)、对羧基苯硼酸(4-羧基苯硼酸)2g(12mmol)、碳酸铯10g(30mmol)、四(三苯基膦)钯(四三苯基磷钯)0.6g(0.5mmol)于250ml圆底烧瓶内，加入乙腈、水各50ml，氮气保护，90℃恒温反应48小时。趁热抽滤，滤液蒸干乙腈，用乙酸乙酯20ml萃取两遍，水相用6mol/L盐酸调pH至5，析出白色固体，抽滤，滤饼置于烘箱内干燥，即得到4-(6-{[4-(三氟甲基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)苯甲酸粗品2.88g，产率80％。
4)邻氟苯甲酸与哌嗪通过缩合反应制备1-(2-氟苯甲酰基)哌嗪；
将100g浓盐酸(12mol/L)置于250ml的圆底烧瓶，在冰浴的条件下，缓慢加入40g无水哌嗪，加完后，撤去冰浴，室温反应过夜，抽滤，滤饼置于烘箱内干燥，所得白色固体即为哌嗪二盐酸盐。称取7g邻氟苯甲酸(0.05mol)溶于20ml干燥的四氢呋喃，缓慢加入CDI8.9g(0.055mol)，室温下反应4h后将反应液通过恒压滴液漏斗滴加到溶有哌嗪二盐酸盐20g(0.125mol)、无水哌嗪10g(0.125mol)、氯化钠14g的60ml水溶液中室温反应5小时后抽滤，滤液蒸干除去THF，10ml乙酸乙酯萃取一遍，NaOH饱和溶液调pH至10，用乙酸乙酯萃取3遍后合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥过夜，抽滤，旋干乙酸乙酯，所得的白色晶体即为1-(2-氟苯甲酰基)哌嗪粗品4.7g，产率45％。
5)4-(6-{[4-(三氟甲基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)苯甲酸与1-(2-氟苯甲酰基)哌嗪通过缩合反应，得到的化合物即为目标化合物6-(4-{[4-(2-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基]羰基}苯基)-N-[4-(三氟甲基)苯基]嘧啶-4-胺。
量取20ml无水THF于100ml的圆底烧瓶，加入三乙胺4ml，置于冰浴中并搅拌10min，待反应体系冷却，滴加氯甲酸异丁酯1.5ml(10mmol)反应10min形成白色粘稠状胶体。将反应物4-(6-{[4-(三氟甲基)苯基]氨基}嘧啶-4-基)苯甲酸1.8g(5mmol)与三乙胺2.5ml溶于干燥THF中，通过恒压滴液漏斗缓慢滴加进去，滴加完毕后撤去冰浴，室温反应10小时，加入反应物1-(2-氟苯甲酰基)哌嗪1.56g(7.5mmol)，室温反应24小时。蒸干四氢呋喃，40ml乙酸乙酯稀释，饱和碳酸氢钠溶液洗三遍，饱和氯化钠洗一遍，有机相用无水硫酸钠干燥过夜，抽滤，蒸干乙酸乙酯，柱色谱分离(P:E＝1:5)得到目标物6-(4-{[4-(2-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基]羰基}苯基)-N-[4-(三氟甲基)苯基]嘧啶-4-胺白色固体0.4g，产率15％。
所得化合物结构如下所示：
理化性质：m.p＝325～326℃；EI-MS(m/z):549.0[M]+。
氢谱核磁共振数据：1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ10.2(s,1H),8.9(s,1H),,8.05-8.19(m,2H),7.98(d,J＝8.0Hz,2H),7.71(d,J＝8.0Hz,2H),7.58-7.67(m,2H),7.49-7.56(m,1H),7.39-7.48(m,1H),7.40(s,1H),7.19-7.35(m,2H)，3.39-3.91(m,8H)。
实施例2
该抑制剂的结构式中，R1为氟原子，处于邻位，R为氟原子，处于邻位，通过以下步骤制备(参见图1)：
1)4,6-二氯嘧啶与邻氟苯胺发生亲核取代反应制备6-氯-N-(2-氟苯基)嘧啶-4-胺；
将4,6-二氯嘧啶3.88g(26mmol)和邻氟苯胺2.2(20mmol)溶于40ml异丙醇中，在搅拌的条件下，缓慢滴加1.5ml浓硫酸，加热回流反应6小时后监测反应体系。反应完成后冷却至室温，放入4℃冰箱中过夜，析出白色固体后抽滤，将滤饼放在烘箱中干燥，得到6-氯-N-(2-氟苯基)嘧啶-4-胺粗品4.0g，产率92％。
2)对溴甲苯经格氏反应、酯化、水解、氧化反应制备对羧基苯硼酸；
制备方法与实施例1的步骤2)相同。
3)6-氯-N-(2-氟苯基)嘧啶-4-胺与对羧基苯硼酸经Suzuki偶联反应制备4-{6-[(2-氟苯基)氨基]嘧啶-4-基}苯甲酸；
将6-氯-N-(2-氟苯基)嘧啶-4-胺2.2g(10mmol)、对羧基苯硼酸(4-羧基苯硼酸)2g(12mmol)、碳酸铯10g(30mmol)、四三苯基磷钯0.6g(0.5mmol)置于250ml圆底烧瓶内，加入乙腈、水各50ml，氮气保护，90摄氏度恒温反应36小时。趁热抽滤，将滤液蒸干乙腈，用乙酸乙酯20ml萃取一遍，水相用6mol/L盐酸调pH至5，析出白色固体，抽滤，滤饼置于烘箱内干燥，即得到4-{6-[(2-氟苯基)氨基]嘧啶-4-基}苯甲酸粗品2.5g，产率83％。
4)邻氟苯甲酸与哌嗪通过缩合反应制备1-(2-氟苯甲酰基)哌嗪；
将100g浓盐酸(12mol/L)置于250ml的圆底烧瓶，在冰浴的条件下，缓慢加入40g无水哌嗪。加完后，撤去冰浴，室温反应过夜，抽滤，滤饼置于烘箱内干燥，所得白色固体即为哌嗪二盐酸盐。称取7g邻氟苯甲酸(0.05mol)溶于20ml干燥的四氢呋喃，缓慢加入CDI8.9g(0.055mol)，室温下反应4h后将滤液通过恒压滴液漏斗滴加到溶有哌嗪二盐酸盐20g(0.125mol)、无水哌嗪10g(0.125mol)、氯化钠14g的60ml水溶液中，室温反应5小时。反应完全后抽滤，滤液蒸干除去THF，10ml乙酸乙酯萃取一遍，加NaOH饱和溶液调pH至10，乙酸乙酯萃取3遍，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥过夜，抽滤，旋干乙酸乙酯，所得的白色晶体即为1-(2-氟苯甲酰基)哌嗪粗品4.7g，产率45％。
5)4-{6-[(2-氟苯基)氨基]嘧啶-4-基}苯甲酸与1-(2-氟苯甲酰基)哌嗪通过缩合反应，得到的化合物即为目标化合物6-(4-{[4-(2-氟苯基)哌嗪-1-基]羰基}苯基)-N-(2-氟苯基)嘧啶-4-胺。
量取20ml无水THF于100ml的圆底烧瓶，加入三乙胺4ml，置于冰浴中并搅拌10min待反应体系温度下降后，滴加氯甲酸异丁酯1.5ml(10mmol)，反应10min生成白色粘稠状胶体。将反应物4-{6-[(2-氟苯基)氨基]嘧啶-4-基}苯甲酸1.5g(5mmol)与三乙胺2.5ml溶于干燥THF中，通过恒压滴液漏斗缓慢加进去，滴加完毕后，撤去冰浴，室温反应10小时，TLC监测活性中间体的生成，然后加入反应物1-(2-氟苯甲酰基)哌嗪1.56g(7.5mmol)，室温反应24小时。反应完成后蒸干四氢呋喃，40ml乙酸乙酯稀释，饱和碳酸氢钠溶液洗三遍，饱和氯化钠洗一遍，有机相用无水硫酸钠干燥过夜，抽滤，蒸干乙酸乙酯，柱色谱分离(P:E＝1:5)得到目标物6-(4-{[4-(2-氟苯基)哌嗪-1-基]羰基}苯基)-N-(2-氟苯基)嘧啶-4-胺白色固体0.39g，产率17％。
所得化合物结构如下所示：
理化性质：m.p＝198～199℃；EI-MS(m/z):498.9[M]+。
氢谱核磁共振数据：1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ9.475(d,J＝12Hz,1H),8.695(d,J＝12Hz,1H),8.11-8.02(m,2H),7.66-7.53(m,6H),7.36-7.25(m,3H),7.24-7.12(m,2H),3.84-3.43(m,8H)。
实施例3
该化合物的结构式中，R1为氟原子，处于邻位，R为乙酰基，处于间位，脂肪胺为哌嗪，通过以下步骤制备(参见图1)：
1)4,6-二氯嘧啶与1-(3-氨基苯基)乙酮发生亲核取代反应制备1-{3-[(6-氯嘧啶-4-基)氨基]苯基}乙酮；
将4,6-二氯嘧啶3.88g(26mmol)和1-(3-氨基苯基)乙酮2.7g(20mmol)溶于40ml异丙醇中，在搅拌的条件下，逐滴加入1.5ml浓硫酸，加热回流反应6小时后监测反应体系。反应完全后冷却至室温，放入4℃冰箱中过夜，析出白色固体后抽滤，将滤饼放在烘箱中干燥，得到1-{3-[(6-氯嘧啶-4-基)氨基]苯基}乙酮粗品4.5g，产率91％。
2)对溴甲苯经格氏反应、酯化、水解、氧化反应制备对羧基苯硼酸；
制备方法与实施例1的步骤2)相同。
3)1-{3-[(6-氯嘧啶-4-基)氨基]苯基}乙酮与对羧基苯硼酸经Suzuki偶联反应制备4-{6-[(3-乙酰基苯基)苯基]嘧啶-4-基}苯甲酸；
将1-{3-[(6-氯嘧啶-4-基)氨基]苯基}乙酮2.5g(10mmol),4-羧基苯硼酸2g(12mmol)、碳酸铯10g(30mmol)、四三苯基磷钯0.6g(0.5mmol)置于250ml圆底烧瓶内，加入乙腈、水各50ml，氮气保护，90摄氏度恒温反应36小时。趁热抽滤，将滤液蒸干乙腈，用乙酸乙酯20ml萃取一遍，水相用6mol/L盐酸调pH至5，析出白色固体，抽滤，滤饼置于烘箱内干燥，即得到4-{6-[(3-乙酰基苯基)苯基]嘧啶-4-基}苯甲酸粗品2.8g，产率85％。
4)邻氟苯甲酸与哌嗪通过缩合反应制备1-(2-氟苯甲酰基)哌嗪；
将100g浓盐酸(12mol/L)置于250ml的圆底烧瓶，在冰浴的条件下，缓慢加入40g无水哌嗪。加完后，撤去冰浴，室温反应过夜，抽滤，滤饼置于烘箱内干燥，所得白色固体即为哌嗪二盐酸盐。
称取7g邻氟苯甲酸(0.05mol)溶于20ml干燥的四氢呋喃，缓慢加入CDI8.9g(0.055mol)，室温下反应4h，将生成的活性酰胺反应液通过恒压滴液漏斗滴加到溶有哌嗪二盐酸盐20g(0.125mol)、无水哌嗪10g(0.125mol)、氯化钠14g的60ml水溶液中，室温反应5小时。反应完全后抽滤、滤液蒸干除去THF、10ml乙酸乙酯萃取一遍、NaOH饱和溶液调pH至10、乙酸乙酯萃取3遍后合并有机相、有机相用无水硫酸钠干燥过夜、抽滤、旋干乙酸乙酯，所得的白色晶体即为1-(2-氟苯甲酰基)哌嗪粗品4.7g，产率45％。
5)4-{6-[(3-乙酰基苯基)苯基]嘧啶-4-基}苯甲酸与1-(2-氟苯甲酰基)哌嗪通过缩合反应，得到的化合物即为目标化合物1-(3-{[6-(4-{[4-(2-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基]羰基}苯基)嘧啶-4-基]氨基}苯基)乙酮。
量取20ml无水THF于100ml的圆底烧瓶，加入三乙胺4ml，置于冰浴中并搅拌10min待反应体系温度下降后，滴加氯甲酸异丁酯1.5ml(10mmol)反应10min，形成白色粘稠状胶体。将反应物4-{6-[(3-乙酰基苯基)苯基]嘧啶-4-基}苯甲酸1.6g(5mmol)与三乙胺2.5ml溶于干燥THF中，通过恒压滴液漏斗缓慢加进去，滴加完毕后，撤去冰浴，室温反应10小时，TLC监测反应活性中间体的生成。加入反应物1-(2-氟苯甲酰基)哌嗪1.56g(7.5mmol)室温反应24小时。
反应完成后蒸干四氢呋喃、40ml乙酸乙酯稀释、饱和碳酸氢钠溶液洗三遍，饱和氯化钠洗一遍，有机相用无水硫酸钠干燥过夜、抽滤、蒸干乙酸乙酯，柱色谱分离(P:E＝1:5)得到目标物1-(3-{[6-(4-{[4-(2-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基]羰基}苯基)嘧啶-4-基]氨基}苯基)乙酮白色固体0.47g，产率18％。
所得化合物结构如下所示：
理化性质：m.p＝244～246℃；EI-MS(m/z):523.1[M]+。
氢谱核磁共振数据：1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ9.98(s,1H),8.79(s,1H),8.28(s,1H),8.17-8.02(m,3H),7.69-7.58(m,3H),7.57-7.49(m,2H),7.48-7.41(m,1H),7.40-7.25(m,3H),3.85-3.37(m,8H),2.62-2.58(s,3H)。
实施例4
该抑制剂的结构式中，R1为三氟甲基，处于间位，R为甲氧基，处于间位，通过以下步骤制备(参见图1)：
1)4,6-二氯嘧啶与间甲氧基苯胺发生亲核取代反应制备6-氯-N-(3-甲氧苯基)嘧啶-4-胺；
将4,6-二氯嘧啶3.88g(26mmol)和间甲氧基苯胺2.46g(20mmol)溶于40ml异丙醇中，在搅拌的条件下，逐滴加入1.5ml浓硫酸，加热回流反应6小时监测反应体系。反应完全后冷却至室温，放入4℃冰箱中过夜，析出白色固体后抽滤，将滤饼放在烘箱中干燥，得到6-氯-N-(3-甲氧苯基)嘧啶-4-胺粗品4.4g，产率95％。
2)对溴甲苯经格氏反应、酯化、水解、氧化反应制备对羧基苯硼酸；
制备方法与实施例1的步骤2)相同。
3)6-氯-N-(3-甲氧苯基)嘧啶-4-胺与对羧基苯硼酸经Suzuki偶联反应制备4-{6-[(3-甲氧苯基)氨基]嘧啶-4-基}苯甲酸；
将6-氯-N-(3-甲氧苯基)嘧啶-4-胺2.4g(10mmol)、4-羧基苯硼酸2g(12mmol)、碳酸铯10g(30mmol)、四三苯基磷钯0.6g(0.5mmol)置于250ml圆底烧瓶内，加入乙腈、水各50ml，氮气保护，90℃恒温反应48小时。趁热抽滤，滤液蒸干乙腈，用乙酸乙酯20ml萃取一遍，水相用6mol/L盐酸调pH至5，析出白色固体，抽滤，滤饼置于烘箱内干燥，即得到4-{6-[(3-甲氧苯基)氨基]嘧啶-4-基}苯甲酸粗品2.7g，产率84％。
4)间三氟甲基苯甲酸与哌嗪通过缩合反应制备1-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪；
将100g浓盐酸(12mol/L)置于250ml的圆底烧瓶，在冰浴的条件下，缓慢加入40g无水哌嗪。加完后，撤去冰浴，室温反应过夜，抽滤，滤饼置于烘箱内干燥，所得白色固体即为哌嗪二盐酸盐。称取间三氟甲基苯甲酸9.5g(0.05mol)溶于20ml干燥的四氢呋喃，缓慢加入CDI8.9g(0.055mol)室温下反应4h后将反应液通过恒压滴液漏斗滴加到溶有哌嗪二盐酸盐20g(0.125mol)、无水哌嗪10g(0.125mol)、氯化钠14g的60ml水溶液中，室温反应5小时。反应完全后抽滤，滤液蒸干除去THF，10ml乙酸乙酯萃取一遍，NaOH饱和溶液调pH至10，乙酸乙酯萃取3遍后合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥过夜，抽滤，旋干乙酸乙酯，所得的白色晶体即为1-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]粗品6.5g，产率50％。
5)4-{6-[(3-甲氧苯基)氨基]嘧啶-4-基}苯甲酸与1-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪通过缩合反应，得到的化合物即为目标化合物N-(3-甲氧苯基)-6-[4-({4-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪-1-基}羰基)苯基]嘧啶-4-胺。
量取20ml无水THF于100ml的圆底烧瓶，加入三乙胺4ml，置于冰浴中并搅拌10min待反应体系温度下降后，滴加氯甲酸异丁酯1.5ml(10mmol)反应10min生成白色粘稠状胶体。将反应物4-{6-[(3-甲氧苯基)氨基]嘧啶-4-基}苯甲酸1.6g(5mmol)与三乙胺2.5ml溶于干燥THF中，通过恒压滴液漏斗缓慢滴加到上述溶液中，滴加完毕后，撤去冰浴，室温反应10小时，TLC监测。反应生成活性酸酐中间体后，加入反应物1-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪1.9g(7.5mmol)，室温反应24小时。反应完成后蒸干四氢呋喃，40ml乙酸乙酯稀释，饱和碳酸氢钠溶液洗三遍，饱和氯化钠洗一遍，有机相用无水硫酸钠干燥过夜，抽滤，蒸干乙酸乙酯，柱色谱分离(P:E＝1:5)得到目标物N-(3-甲氧苯基)-6-[4-({4-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪-1-基}羰基)苯基]嘧啶-4-胺白色固体0.5g，产率18％。
所得化合物结构如下所示：
理化性质：m.p＝84～86℃；EI-MS(m/z):561.3[M]+。
氢谱核磁共振数据：1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.80(s,1H),8.76(s,1H),8.10(d,J＝6.9Hz,2H),7.87–7.74(m,3H),7.61–7.56(m,2H),7.44(s,1H),7.33–7.20(m,4H),6.64(d,J＝6.2Hz,1H),3.77(s,3H),3.66–3.32(m,8H)。
实施例5
该抑制剂的结构式中，R1为氟原子，处于3位和4位，R为甲氧基，处于对位，通过以下步骤制备(参见图1)：
1)4,6-二氯嘧啶与对甲氧基苯胺发生亲核取代反应制备6-氯-N-(4-甲氧苯基)嘧啶-4-胺；
将4,6-二氯嘧啶3.88g(26mmol)和对甲氧基苯胺2.46g(20mmol)溶于40ml异丙醇中，在搅拌的条件下，逐滴加入1.5ml浓硫酸，加热回流反应6小时监测反应体系。反应完全后冷却至室温，放入4℃冰箱过夜，析出白色固体后抽滤，将滤饼放在烘箱中干燥，得到6-氯-N-(4-甲氧苯基)嘧啶-4-胺粗品4.3g，产率93％。
2)对溴甲苯经格氏反应、酯化、水解、氧化反应制备对羧基苯硼酸；
制备方法与实施例1的步骤2)相同。
3)6-氯-N-(4-甲氧苯基)嘧啶-4-胺与对羧基苯硼酸经Suzuki偶联反应制备4-{6-[(4-甲氧苯基)氨基]嘧啶-4-基}苯甲酸；
将6-氯-N-(4-甲氧苯基)嘧啶-4-胺2.4g(10mmol)，4-羧基苯硼酸2g(12mmol)，碳酸铯10g(30mmol)，四三苯基磷钯0.6g(0.5mmol)，置于250ml圆底烧瓶内，加入乙腈、水各50ml，氮气保护，90摄氏度恒温反应48小时。趁热抽滤，将滤液蒸干乙腈，用乙酸乙酯20ml萃取一遍，水相用6mol/L盐酸调pH至5，析出白色固体，抽滤，滤饼置于烘箱内干燥，即得到4-{6-[(4-甲氧苯基)氨基]嘧啶-4-基}苯甲酸粗品2.8g，产率86％。
4)3,4-二氟苯甲酸与哌嗪通过缩合反应制备1-(3,4-二氟苯甲酰基)哌嗪；
将100g浓盐酸(12mol/L)置于250ml的圆底烧瓶，在冰浴的条件下，缓慢加入40g无水哌嗪。加完后，撤去冰浴，室温反应过夜，抽滤，滤饼置于烘箱内干燥，所得白色固体即为哌嗪二盐酸盐。称取3,4-二氟苯甲酸7.9g(0.05mol)溶于20ml干燥的四氢呋喃，缓慢加入CDI8.9g(0.055mol)，室温下反应4h后将反应液通过恒压滴液漏斗滴加到溶有哌嗪二盐酸盐20g(0.125mol)、无水哌嗪10g(0.125mol)、氯化钠14g的60ml水溶液中，室温反应5小时。反应完全后抽滤，滤液蒸干除去THF，10ml乙酸乙酯萃取一遍，NaOH饱和溶液调pH至10，乙酸乙酯萃取3遍后合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥过夜，抽滤，旋干乙酸乙酯，所得的白色晶体即为1-(3,4-二氟苯甲酰基)哌嗪粗品5.4g，产率48％。
5)4-{6-[(4-甲氧苯基)氨基]嘧啶-4-基}苯甲酸与1-(3,4-二氟苯甲酰基)哌嗪通过缩合反应，得到的化合物即为目标化合物6-(4-{[4-(3,4-二氟苯甲酰基)哌嗪-1-基]羰基}苯基)-N-(4-甲氧苯基)嘧啶-4-胺。
量取20ml无水THF于100ml的圆底烧瓶，加入三乙胺4ml，置于冰浴中并搅拌10min待反应体系温度下降后，滴加氯甲酸异丁酯1.5ml(10mmol)反应10min，生成白色粘稠状胶体。将反应物4-{6-[(4-甲氧苯基)氨基]嘧啶-4-基}苯甲酸1.6g(5mmol)与三乙胺2.5ml溶于干燥THF中，通过恒压滴液漏斗缓慢加入上述溶液中，滴加完毕后，撤去冰浴，室温反应10小时，TLC监测活性酸酐中间体的生成。加入反应物1-(3,4-二氟苯甲酰基)哌嗪1.7g(7.5mmol)，室温反应24小时。反应完成后蒸干四氢呋喃，40ml乙酸乙酯稀释，饱和碳酸氢钠溶液洗三遍，饱和氯化钠洗一遍，有机相用无水硫酸钠干燥过夜，抽滤，蒸干乙酸乙酯，柱色谱分离(P:E＝1:5)得到目标物6-(4-{[4-(3,4-二氟苯甲酰基)哌嗪-1-基]羰基}苯基)-N-(4-甲氧苯基)嘧啶-4-胺白色固体0.3g，产率13％。
所得化合物结构如下所示：
理化性质：Mp228-231℃,EI-MS(m/z):529.1[M]+。
氢谱核磁共振数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝8.66(s,1H),8.07(d,J＝7.2Hz,2H),7.57(d,J＝6.3Hz,6H),7.38-7.28(m,1H),7.16(s,1H),6.95(d,J＝8.6Hz,2H),3.76(s,3H),3.74-3.38(m,8H)。
下面测定本发明提供的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂对Bcr-Abl激酶的抑制活性，测定方法具体如下：
激酶ABL1和底物Abltide购自Signal-Chem公司，选用Promega公司的ADP-GlobTM Kinase Assays检测试剂盒检测目标化合物的抑酶活性，操作方法按照试剂盒说明进行。
将ATP(1mM)用buffer(2×)(Tris 80mM,MgCl220mM,BSA 0.2mg/mL,DTT2mM)稀释80倍配制成ATP(125μM)的buffer(2×)溶液；将125μM的ATP溶液和Abltide溶液体积1:1混合配制成ATP(62.5μM)-Abltide(0.5μg/μl)的混合溶液备用；ABL1激酶溶液用buffer(1×)(Tris 40mM,MgCl210mM,BSA 0.1mg/mL,DTT 1mM)稀释100倍配制成ABL1(10ng/μl)的buffer(1×)溶液备用；
将目标化合物(N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂)和阳性对照药(Imatinib)用buffer(1×)分别配制成1.5×10-5mol/L,1.5×10-6mol/L，1.5×10-7mol/L，1.5×10-8mol/L，1.5×10-9mol/L，1.5×10-10mol/L浓度梯度的样品溶液，于384孔板上每孔依次加入2μL ATP-Abltide的混合溶液，1μL样品溶液，2μL酶溶液；空白孔加3μL缓冲液和2μLATP-Abltide的混合溶液；对照孔加2μL ATP-Abltide的混合溶液，1μL缓冲液，2μL酶溶液，加毕，30℃下孵育60min；加入ADP-Glo试剂5μL，在25℃下孵育40min；加入Kinase detection试剂，在25℃下孵育30min。采用PerkinElmer多功能酶标仪的化学发光模块测定每孔的发光值，计算化合物对ABL1的抑制率和IC50。
N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂的结构式如下：
N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂对Bcr-Abl激酶抑制活性的结果，如表1所示：
表1.抑制剂对Bcr-Abl激酶的抑制活性结果(IC50)
结果显示N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂对Bcr-Abl激酶具有较强的抑制活性，且部分N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂的活性与阳性药伊马替尼相当。Bcr-Abl激酶在细胞信号转导和转化中发挥重要作用，它通过磷酸化和活化一系列下游底物，促使CML成熟粒细胞无限增生，Bcr-Abl在正常细胞中不表达，是治疗CML的理想靶标。Bcr-Abl抑制剂通过抑制Bcr-Abl激酶活性可达到治疗CML的目的。
下面进行N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂的抗细胞活性筛选：采用MTT法检验N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂对K562细胞的生长抑制活性。
本发明提供的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂具有抗肿瘤作用，对肿瘤细胞有体外抑制增殖活性效果，在人白血病细胞(K562细胞)中具有抑制肿瘤细胞的增殖活性效果，可以用于对白血病的治疗。
取对数生长期的人白血病细胞(K562细胞)，用RPMI1640培养基稀释成104个/mL的细胞溶液，平行接种于96孔培养板中(2000个/孔)，每孔接种体积为200μL，37℃、5％CO2培养箱中培养12h。
每孔加入不同浓度的待测化合物(N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂)20μL，使孔中化合物的终浓度为：1.5×10-7mol/L，1.5×10-6mol/L，1.5×10-5mol/L，1.5×10-4mol/L，每个浓度设3个复孔，阴性对照加细胞不加化合物，设6个复孔，尼罗替尼为阳性对照，继续培养48h；
每孔加入MTT(5mg/mL)10μL，使孔中MTT的终浓度0.5mg/mL，37℃培养箱孵育4h，小心吸弃上清，每孔加DMSO 150μL，振荡15min，酶联免疫检测仪测量各孔490nm处的紫外吸收值(OD值)，然后计算细胞抑制率，并根据抑制率求出IC50值；
细胞抑制率的计算公式为：
抑制率％＝(对照孔平均OD值-用药组平均OD值)/对照孔平均OD值×100％
检测结果显示：N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂对K562细胞具有不同程度的体外抑制作用。
本发明提供的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂对肿瘤细胞抑制结果见表2。
表2.抑制剂对K562细胞的抑制活性结果(IC50)
结果显示所制备的抑制剂能够抑制肿瘤细胞的生长，说明本发明提供的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂对肿瘤细胞的增殖抑制效果良好，可应用于抗肿瘤药物的制备。
本发明提供的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂，是新型的具有Bcr-Abl激酶抑制活性的化合物，其体外对Bcr-Abl激酶有很好的抑制活性，鉴于Bcr-Abl激酶与慢性粒细胞白血病的发生发展密切相关。Bcr-Abl抑制剂通过抑制Bcr-Abl激酶的活性能够有效地抑制癌细胞的增殖，诱导癌细胞分化和凋亡，可达到治疗肿瘤的目的；实验结果表明所制备的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂能够抑制肿瘤细胞的生长，而且部分抑制剂对Bcr-Abl激酶抑制活性和阳性药相当，说明所制备的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂可用于抗肿瘤药物的制备。
Claims (10)
1.一种N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂，其特征在于，具有如下结构式：
其中，R为单取代基或双取代基，取代基为烷基或卤素；R1为单取代基或双取代基，取代基为烷基或卤素。
2.如权利要求1所述的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂，其特征在于，所述的R为单取代基时，取代基位于苯环上胺基的邻位、间位或对位；R1为单取代基时，取代基位于苯环上羧基的邻位、间位或对位；
所述的R、R1为双取代基时，取代基相同或不同，取代位置相邻或相间。
3.权利要求1或2所述的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法，其特征在于，包括以下操作：
1)4,6-二氯嘧啶与含有取代基的苯胺发生亲核取代反应制备6-氯-N-取代苯基嘧啶-4-胺；
2)6-氯-N-取代苯基嘧啶-4-胺与对羧基苯硼酸经Suzuki偶联反应制备4-(6-取代苯胺嘧啶-4-基)苯甲酸；
3)含有取代基的苯甲酸与哌嗪反应制备得到单酰胺化的哌嗪；
4)4-(6-取代苯胺嘧啶-4-基)苯甲酸与单酰胺化的哌嗪通过缩合反应，得到N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂。
4.根据权利要求3所述的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤1)的具体操作为：将4,6-二氯嘧啶与含有取代基的苯胺溶于异丙醇中，在搅拌的条件下滴加浓硫酸，加热回流反应，反应完后冷却至室温，放在4℃冰箱中过夜，然后抽滤，干燥滤饼，得到6-氯-N-取代苯基嘧啶-4-胺粗品；
所述步骤2)的具体操作为：将6-氯-N-取代苯基嘧啶-4-胺粗品与对羧基苯硼酸溶于乙腈和水的混合溶剂中，加入碳酸铯、四(三苯基膦)钯，以氮气保护，在90℃下恒温反应24～48小时，反应完后热抽滤，将滤液蒸干除去乙腈，再用乙酸乙酯萃取、水相用浓盐酸调节至pH为弱酸性，析出固体，然后抽滤、干燥滤饼，得到4-(6-取代苯胺嘧啶-4-基)苯甲酸。
5.根据权利要求3所述的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤3)的具体操作为：在冰浴条件下，将哌嗪加入浓盐酸中，然后在室温下搅拌反应过夜，再抽滤，干燥滤饼，得到哌嗪二盐酸盐；将含有取代基的苯甲酸用无水四氢呋喃溶解，加入CDI，室温反应2小时，然后将其逐滴加入到哌嗪二盐酸盐和哌嗪的饱和氯化钠溶液中，室温反应6小时，反应完后蒸干四氢呋喃，用乙酸乙酯萃取，水相用氢氧化钠溶液调至pH＝10，再用乙酸乙酯萃取，萃取的有机相用无水硫酸钠干燥、然后抽滤、蒸干乙酸乙酯，得到单酰胺化的哌嗪。
6.根据权利要求3所述的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤4)的具体操作为：在冰浴条件下，将氯甲酸异丁酯滴加到含三乙胺的四氢呋喃中，搅拌至产生白色粘稠状胶体，然后向其中滴加4-(6-取代苯胺嘧啶-4-基)苯甲酸和三乙胺的四氢呋喃溶液，滴加完毕后撤去冰浴，在室温下反应过夜，生成活性酸酐，然后向其中滴加单酰胺化的哌嗪，在室温下反应24小时，反应结束后蒸干四氢呋喃，依次用饱和碳酸氢钠洗涤、乙酸乙酯萃取、萃取的有机相用无水硫酸钠干燥，最后抽滤、蒸干乙酸乙酯，得粗品，再经柱色谱分离得到N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂。
7.根据权利要求3所述的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂的制备方法，其特征在于，所述的对羧基苯硼酸的制备步骤为：对溴甲苯通过格式反应制备格式试剂对甲苯基溴化镁，格式试剂与硼酸三甲酯反应得到对甲基苯硼酸甲酯，对甲基苯硼酸甲酯水解得到对甲基苯硼酸，对甲基苯硼酸氧化得到对羧基苯硼酸。
8.权利要求1或2所述的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂在制备Bcr-Abl抑制剂药物中的应用。
9.权利要求1或2所述的N,6二苯基嘧啶-4-胺类Bcr-Abl抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于：所述的抗肿瘤药物为治疗白血病的药物。
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