CN104248678A - 一种中药骨伤提取组合物及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中药骨伤提取组合物及其制备方法与应用，它是由当归10-50g、 赤芍10-30g、丹参10-40g、桃仁10-30g、续断10-20g、黄柏10-50g、防风10-60g 生地10-50g、红花10-35g、甘草10-80g组成。本发明通过生化指标检测、X光分析、组织学切片观察、骨组织形态计量学分析及骨密度测定、骨生长因子基因测定等证实经过提取工艺改进后的中药治疗骨折的效果更加好。进而从现代医学角度为中药促进骨愈合提供更为科学的依据，同时为后期该药的完全研发构建合理的理论平台做出贡献。

Description

一种中药骨伤提取组合物及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于中药制剂技术领域，涉及一种中药骨伤提取组合物，用于促进骨科常见、多发的骨折愈合。 

背景技术

骨或软骨组织的完整性或连续性遭到部分或全部破坏者称为骨折，是临床常见病、多发病。近年来，随着交通事业及国民经济的发展，且中国逐渐迈入老龄化社会，骨折成高发态势。据统计，我国每年有近1200万人因不同原因发生骨折，严重影响人类的健康和劳动能力。因此，如何在更复杂、更高要求的现代骨科疾病治疗中发挥中药的优势，并能更高效、更适合于临床使用，是现代骨科研究及发展的方向之一。 

中药治疗骨折历史悠久，中药具有明显加速骨折愈合作用，在此方面己积累了不少的经验。自1959年天津刘润田首次作了中药促进骨折愈合的研究报告以来，有关的实验研究报导更为广泛深入。胡美珠等首次以单味丹参针剂，注射于家兔及小鼠的的实验性骨折，证实有利于骨折的愈合。之后，单味中药的研究，如:九节茶、土鳖虫、自然铜、麦饭石、锻狗骨以及中草药藜豆提取的L-多巴等，都从不同的侧面、运用不同的方法证实能够使骨折愈合加快。由于单味中药的局限，相应的复方制剂具有更大的优越性，符合中医辨证施治的特点。七厘散、接骨七厘片、无名异冲剂、三花接骨散等一些临床上行之有效的药物，得到实验的验证。更值得一提的是许树柴等研究了经皮注射金葡液，表明能促进骨痴形成，血管增多，骨痂及疤痕明显，有促进骨缺损修复作用。为促进骨折愈合的中药针剂研究做了有益的尝试，显示其巨大的发展潜力。侯筱魁等对家兔桡骨骨折处外敷石氏三色膏，证实三色膏具有加速损伤后遗症反应，使之提前出现，毛细血管扩张，数量增多，显示了外敷药物的治疗作用。有人研究发现外用生肌橡皮膏可促进Volkman氏管内毛细血管周围的间充质细胞增生、分化成新生的肉芽组织-骨的肉芽岛，并覆盖在外露的骨干上，因而认为外用中药对于开放性骨折的愈合和创面的修复有良好的促进作用。更有不少学者从组织学、组织化学、生物力学等方面对骨折愈合过程进行动态观察，在对中药治疗的作用机理的探索上取得了很大进展。 

骨折愈合是一个复杂高度有序的生物学修复过程，这一过程受到自身和局部许多因素的影响和调节。如何促进骨折愈合，缩短骨折愈合周期，提高骨折愈合质量一直是骨科研究领域的热点问题。目前骨折后的常规治疗方法是将骨折处复位后再用石膏固定，依靠骨骼自身的再生能力使其自然愈合；对于比较严重的骨折患者，则需要进行手术治疗，用钢针、钢板、或髓内针或外固定架将骨折处固定。常规治疗方法辅以中药治疗可大大提高骨折的愈合。大量的中药药理实验研究表明，通过改善血液循环促进血肿的吸收和成骨部位微循环的建立，增加胶原的合成、促进钙盐沉积来提高骨痂质量，刺激骨生长因子的分泌与合成提高微量元素的含量、提高成骨细胞的活性及指数等可以促进骨折愈合。 

但是，目前国外对于药物促进骨折愈合的研究较少，国内研究中，虽然中药治疗骨折效果是肯定的，其促进骨折愈合的机理亦越来越多地被医学工作者揭示，但许多工作尚处于实验研究阶段，其机理及其与临床应用有机结合的探讨还有待进一步深入等等。利用生物力学，组织学、免疫组化等方法，研究应用中药作用于全身和骨折局部是一个值得进一步探讨研究的方向。 

发明内容

本发明专利的主要目的是通过动物模型的科学实验数据来论证药效，从现代医学的角度探讨其促进骨愈合的作用机制，进而从现代医学角度为中药促进骨愈合提供更为科学的依据，开辟一种新的治疗途径，同时为后期该药的完全研发构建合理的理论平台做出贡献。 

为实现上述目的，本发明公开了如下的技术内容： 

一种中药骨伤提取组合物，其特征在于它是由下述重量中药材组成：

当归10-50g  赤芍 10-30g   丹参 10-40g    桃仁10-30g   续断 10-20g  

黄柏 10-50g  防风 10-60g   生地 10-50g   红花 10-35g   甘草10-80g。 

优选它是由下述重量中药材组成： 

当归10g  赤芍 10g   丹参 10g    桃仁10g   续断 10g  

黄柏 10g  防风 10g   生地 10g   红花 10g   甘草10g。

本发明进一步公开了中药骨伤提取组合物的提取方法： 

按原料配比称取各原料；按照正交实验结果所述全部药材水提2次，每次以10倍量水提取2小时，合并提取液，浓缩至50-60℃条件下相对密度为1.05-1.08，得到浓缩液A；将浓缩液A中加入体积百分比为95%的乙醇，沉淀、静置，得到上清液B；使得上清液B中乙醇体积百分比浓度为50%-70%；将上清液B浓缩至50-60℃条件下相对密度为1.05-1.08，得到浓缩液C；将浓缩液C减压干燥或喷雾干燥，得到干燥物；将得到的干燥物与药剂学可接受的药用辅料混合制成丸剂、片剂、胶囊或口服液。

本发明进一步公开了含有中药骨伤提取组合物的药物组合物包括：固体口服制剂、液体口服制剂、注射剂等剂型。 

本发明含有中药骨伤提取组合物的药物组合物与制剂学上可接受的固体或液体载体结合，以及使之任意地与制剂学上可接受的辅助剂和赋形剂结合制备成微粒或微球。固体剂型包括片剂、分散颗粒、胶囊、缓释片、缓释微丸等等。固体载体可以是至少一种物质，其可以充当稀释剂、香味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、崩解剂以及包裹剂。惰性固体载体包括磷酸镁、硬脂酸镁、滑粉糖、乳糖、果胶、丙二醇、聚山梨酯80、糊精、淀粉、明胶、纤维素类物质例如甲基纤维素、微晶纤维素、低熔点石蜡、聚乙二醇、甘露醇、可可脂等。液体剂型包括溶剂、悬浮液例如注射剂、粉剂等。 

本发明更进一步公开了中药骨伤提取组合物在制备改善血液循环、促进钙盐沉积提高成骨细胞活性促进骨愈合药物中的应用。特别是在促进骨折愈合药物中的应用。 

本发明的中药骨伤提取组合物（骨伤Ⅰ号）源自内蒙古民间验方，其处方有当归、赤芍、丹参、桃仁、续断、黄柏、防风、生地、红花、甘草等。药方中的当归补血活血；赤芍、丹参活血化瘀，消肿止痛；桃仁、红花活血祛瘀；生地清热凉血；续断散瘀血、利关节、续伤段。诸药合用，共奏活血化瘀、气血通畅之效，使新血生长，静脉畅通，骨折续合。在临床应用多年，疗效确切。 

本课题旨在通过动物模型的建立，观察对兔胫骨骨折愈合疗效。通过生化指标检测、X光分析、组织学切片观察、骨组织形态计量学分析及骨密度测定、骨生长因子基因测定等证实经过提取工艺改进后的中药治疗骨折的效果更佳。通过动物模型的科学实验数据来论证药效。从现代医学的角度探讨其促进骨愈合的作用机制，进而从现代医学角度为中药促进骨愈合提供更为科学的依据，同时为后期该药的完全研发构建合理的理论平台做出贡献。 

本发明更加详细的生产工艺及疗效如下： 

一、本发明专利的处方组成及剂量：

当归10g  赤芍 10g   丹参 10g    桃仁10g   续断 10g  

黄柏 10g  防风 10g   生地 10g   红花 10g   甘草10g 

二、生产工艺（要和描述的提取方法相对应，请核对）： 

  正交试验设计醇提及水提工艺：

根据10味药材有效成份的理化性质分别进行醇提及水提，确定因素分别为醇浓度、加醇量、提取时间、提取次数及加水量、提取时间、提取次数，每个因素选择三水平，见下面：

按照正交试验选择出的最佳工艺进行放大实验：将药材醇提后进行水提，两液合并浓缩定容。

三、动物实验：

（1）建立动物模型：

1)实验动物：

选取雄性新西兰大白兔，150只，随机分为三组，即实验组、对照组、空白对照组，每组50只；实验组：选用骨伤I号，剂量是根据人的服用量换算成动物的等同剂量，然后X兔子的耐受量4倍，人的剂量每天18g生药，换算到兔子身上，每只兔子按2500g的标准体重，换算的给药剂量为2.25g；对照组：选用接骨七厘片: 013 g 生药/粒, 由珠海金沙 ( 湖南) 制药有限公司生产。实验时将药物用蒸馏水配制成浓度为 0.075 g 生药/m l 溶液； 空白对照组：等体积蒸馏水。

2)兔胫骨骨折模型的建立； 

实验组给予骨伤I号胃管注入, 剂量为2.25g/kg ,对照组给予接骨七厘片胃管注入，剂量为 0.12g/kg , 空白对照组胃管注入等体积蒸馏水, 以上用药每天 1 次, 全程给药, 在同一条件下喂养。

四、标本取材。 

观察指标: 

1)一般情况: 连续观察3组实验动物术前及术后食量、活动度、反应度、手术切口情况、局部伤口愈合以及患肢的肿胀情况，取材后观察骨折处骨的连接情况，骨端骨痂增生情况。

2)组织形态学检查:于治疗后4周、8周、12周时，分三批处死实验组、对照组和空白组实验动物，空白组作对照。取出胫骨标本，观察骨修复的大体情况，然后将获得标本用10%甲醛固定，己骨化的标本脱钙2周，石蜡包埋，5μm连续切片，HE染色，封片后镜下组织学观察。 

3) 血液流变学测定:给药后 4周处死兔每组各10只,肝素抗凝取血, 测定血液流变值 [ 全血粘度 ( 高切 、 低切) 及血浆粘度 ] 。 

4) 组织学检查结果： 

术后第4周实验组骨折断端间有大量的新生编织骨、少量软骨细胞，并见丰富的新生血管，不规则骨髓腔形成；空白对照组断端间主要为软骨连接，并可见纤维细胞，少量新生编织骨生长，新生血管较少。术后第8周实验组已基本骨性愈合, 骨髓腔沟通；空白对照组断端间由新生编织骨连接，出现不规则的骨髓腔。依据Nillson 等组织学分级标准, 以骨愈合性质、骨痂形成量及骨髓出现情况为分析指标，对每个标本组织学观察结果评分，然后进行统计学处理，结果见表 2。

5) 生物力学测定: 

给药后第4周、8周及第16 周处死兔每组各 10 只，取出桡骨标本，将桡骨两端固定于材料力学测定仪的上下两个夹具上，使夹具间桡骨长度为 4cm，骨折线位于中点处，在桡骨完全松弛下调零。通过与材料力学测定仪相联的计算机设定最大拉伸负荷 300 N ，拉伸速度25 mm/min，并用计算机记录负荷-滑动距离曲线。a:2mm裂隙抗张强度：拉伸实验开始后，用游标卡尺测量桡骨裂隙长度，达2 mm时读取负荷值, 即为2 mm 裂隙抗张强度。它表示骨折愈合后的桡骨抵抗裂隙形成的能力；b:断裂抗张强度: 负荷-滑动距离曲线上曲线陡直下降处的负荷即为断裂抗张强度。

    

6)放射学检查

分别于治疗后4周、8周、12周时拍摄胫骨正侧位X线片，以动态观察骨折线、骨痂生长情况、骨痂量及骨小梁形成情况。依据柴本甫等的骨折愈合评分标准行x线片肉眼观察比较，依据x线骨痂量、骨痂密度、骨折断端边缘的变化和骨痂边缘情况分为l-4级，分别给1-4分，然后计算总得分，各组行t检验。

7)骨生长因子测定 

    分别于治疗后4周、8周、12周处死实验动物，行RT-PCR测定，了解骨形态发生蛋白（BMP）在治疗过程中表达情况的变化。无菌条件下取骨折愈合处的骨痂快速冻于液氮中，24小时后转存于-80℃低温冰箱，采用Trizol技术提取总RNA后逆转录，将逆转录产物扩增后凝胶电泳，电泳结果利用凝胶图像分析软件BandScan5.0测出目的基因和内参基因β-actin的灰度值，结果以二者的比值表示，进行两个样本均数比较的t检验。

统计方法 

各实验数据采用SPSS16.0软件包分析，计量资料以均数±标准差(Ⅹ±S)表示，组间比较用t检验或方差分析。

本发明的实验结果表明： 

（1）骨伤I号组和接骨七里片组与空白对照组相比，差异有显著性，骨伤I号和接骨七里片可以很好的促进骨折愈合。

（2）第8周、第16周骨伤I号组促进骨折愈合疗效优于接骨七里片组。 

（3）骨伤I号对于早期骨折愈合及后期骨折修复均有促进作用。 

本发明公开的中药骨伤提取组合物与现有技术相比所具有的积极效果在于： 

（1）本发明公开的中药骨伤提取组合物（骨伤Ⅰ号）具有改善血液循环、促进钙盐沉积、促进胶原蛋白的合成、提高成骨细胞活性的效果。

（2）本发明公开的中药骨伤提取组合物（骨伤Ⅰ号）药物浓度纯、疗程短、疗效好且稳定，无毒副作用、无禁忌症。 

（3）本发明公开的中药骨伤提取组合物（骨伤Ⅰ号）主要用于骨科常见、多发骨折的治疗，具有促进骨折愈合的效果。 

附图说明： 

图1  2012年6月24日实验组5号兔骨折模型；    

图2  2012年7月3日实验组5号兔经过骨伤I号治疗后X线情况；

图3  2012年7月27日实验组5号兔经过骨伤I号治疗后X线情况，与7月3日相比，可见骨痂形成。

具体实施方式

下面结合实施例说明本发明，这里所述实施例的方案，不限制本发明，本领域的专业人员按照本发明的精神可以对其进行改进和变化，所述的这些改进和变化都应视为本发明的范围内，本发明的范围和实质都有权利要求来限定；其中所述中药材、所用到的试剂均由市售。 

实施例1 

（1）处方组成：

当归10g  赤芍 10g   丹参 10g    桃仁10g   续断 10g  

黄柏 10g  防风 10g   生地 10g   红花 10g   甘草10g 

（2）提取方法：

按原料配比称取各原料；按照正交实验结果所述全部药材水提2次，每次以10倍量水提取2小时，合并提取液，浓缩至50-60℃条件下相对密度为1.05-1.08，得到浓缩液A；将浓缩液A中加入体积百分比为95%的乙醇，沉淀、静置，得到上清液B；使得上清液B中乙醇体积百分比浓度为50%-70%；将上清液B浓缩至50-60℃条件下相对密度为1.05-1.08，得到浓缩液C；将浓缩液C减压干燥或喷雾干燥，得到干燥物；将得到的干燥物与药剂学可接受的药用辅料混合制成丸剂、片剂、胶囊或口服液。

实施例2 

（1）处方组成：

当归10g  赤芍 130g   丹参 10g    桃仁30g   续断 10g  黄柏 50g  防风 10g   生地50g   红花 10g   甘草80g。 

（2）提取方法同实施例1。 

实施例3 

当归50g  赤芍 30g   丹参 14g    桃仁30g   续断 10g  黄柏 50g  防风 60g   生地 10g   红花 10g   甘草80g。 

提取方法同实施例1。 

实施例4 

当归40g  赤芍 25g   丹参 40g    桃仁25g   续断 20g  黄柏 45g  防风 55g   生地 38g   红花 35g   甘草75g。提取方法同实施例1。

实施例5：制备片剂 

实施例1得到的活性成分100g，加微晶纤维素10g，乳糖10g，交联PVP5g，压片，得片剂，每片为0.4g。

实施例6：制备颗粒剂 

实施例2得到的活性成分500g，加糊精100g，木糖醇400g，枸橼酸1g，阿斯巴甜1g制粒，得颗粒剂，每袋为0.6g。 

Claims (5)

1.一种中药骨伤提取组合物，其特征在于它是由下述重量中药材组成：

当归10-50g  赤芍 10-30g   丹参 10-40g    桃仁10-30g   续断 10-20g  

黄柏 10-50g  防风 10-60g   生地 10-50g   红花 10-35g   甘草10-80g。

2.权利要求1所述的中药骨伤提取组合物，其中它是由下述重量中药材组成：

当归10g  赤芍 10g   丹参 10g    桃仁10g   续断 10g  

黄柏 10g  防风 10g   生地 10g   红花 10g   甘草10g。

3.权利要求1或2所述中药骨伤提取组合物，其中的组合物为固体口服制剂、液体口服制剂或注射剂。

4.权利要求1或2所述中药骨伤提取组合物在制备改善血液循环、促进钙盐沉积提高成骨细胞活性促进骨折愈合药物中的应用。

5.权利要求1或2所述中药骨伤提取组合物在制备促进骨折愈合药物中的应用。