CN104245693B - 嘧啶类衍生物及其可药用盐、其制备方法及其在医药上的应用 - Google Patents

嘧啶类衍生物及其可药用盐、其制备方法及其在医药上的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及嘧啶类衍生物及其可药用盐、其制备方法及其在医药上的应用。具体而言，本发明涉及一种通式(I)所示嘧啶类衍生物及其可药用盐，其制备方法以及它们作为癌症治疗剂特别是作为PI3K激酶抑制剂的用途，其中通式(I)中的各取代基的定义与说明书中的定义相同。

Description

嘧啶类衍生物及其可药用盐、其制备方法及其在医药上的 应用
技术领域
本发明涉及一种新型嘧啶类衍生物及其可药用盐、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物以及其作为癌症治疗剂特别是作为PI3K激酶抑制剂的用途。
背景技术
在过去的半个世纪中，针对肿瘤治疗的研究取得了多方面的进展。随着对肿瘤基因学和生物学研究的不断深入，多个细胞内肿瘤相关的关键信号通路被发现。肿瘤细胞依赖这些通路实现胞外信号的胞内转导，调节自身持续增殖、浸润转移和抗凋亡等活动，一方面维持其恶性表型特征，另一方面通过调节特定基因及其蛋白产物对治疗产生耐受。研究发现，由磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-AKT-哺乳动物雷帕霉素靶点(mTOR)介导的传导途径在一些细胞过程，包括增殖和存活中起重要作用，并且这些途径的失调是广泛种类的人类癌症和其它疾病谱的致病因素(Katso等，Annual Rev.Cell Dev.Biol.，2001，17：615-617)。
哺乳动物雷帕霉素靶点蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)的主要作用是调节蛋白的合成翻译，因此成为肿瘤治疗的一个靶点，然而mTOR抑制剂本身属于免疫抑制剂，其副作用之一就是引发感染，对肺部的伤害极大(Peter Neuhaus 等，LiverTransplantation，2001，7(6)，473-384)。
PI3K-AKT通路作为最主要的信号通路之一，已成为肿瘤药物开发的优选靶标。
PI3K-AKT通路作为细胞内关键的信号通路，通过多种受体信号激活后参与细胞周期性生长、蛋白质合成、能量代谢以及存活凋亡等多个过程的精细调节。
磷脂酰肌醇3激酶(Phosphatidylinositide 3-kinase，PI3K)，属于脂激酶家族，依照其结构特征和底物选择性可以将其划分为3类。其中对1类PI3K研究最为深入，该类PI3K为异二聚体蛋白，分别由具有催化功能的亚基(p110α、p110β、p100δ和p100γ)和具有调节功能的亚基(p85α、p85β、p50α、p55α和p55γ)构成。Ia型PI3K酶亚基p110α和p110β均共同表达于各种细胞类型中，而p100δ表达更是受到白细胞群落和某些上皮细胞的限制。Ib型PI3K酶由与p101调节亚基相互作用的p110γ催化亚基组成，主要分布在白细胞、血小板和心肌细胞中。其中p85调节亚基通过与受体酪氨酸激酶的相互作用而被磷酸化激活，其氨基端含有SH3结构域和能与SH3结构域结合的脯氨酸富集区，其羧基端含有2个SH2结构域及1个p100结合的区域，p100亚基与蛋白激酶具有同源性，本身既具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的活性，又具有磷脂酰肌醇激酶的活性，可以将磷脂酰肌醇二磷酸(PI2P)转化为磷脂酰肌醇三磷酸(PI3P)，后者则可以进一步激活多个下游信号分子，完成胞外信号的继续传导。
研究表明，Ia型PI3K酶可以直接或间接地促使人类癌症发生(Vivanco和Sawyers，Nature Reviews Cancer，2002，2，489-501)。例如，基因PIK3CA在各种癌症中广泛被放大或发生突变，其编码的p110α亚型的催化位点中的激活突变与各种其它的肿瘤如结肠直肠部位和乳腺和肺的肿瘤有关。P100β在严重的上皮卵巢癌、乳腺癌以及PTEN缺失的肿瘤细胞系中的表达均有近5％的放大，p100δ与免疫抑制有关，常用于移植排斥和自身免疫性疾病当中。除了直接的作用外，Ia型PI3K可间接地导致由各种下游信号传导事件从而引发肿瘤。比如通过激活Akt，PI3K介导的信号传导事件的作用增加导致各种癌症。大量研究表明，不同PI3K亚型的分工不同，抑制恶性细胞的生长最好的方法是选择对某种p100亚型特异性更高的抑制剂而不是广泛抑制所有I型PI3K酶(Susan和Kenneth，Cancer Treatment Reviews，2013 Aug 26.pii：S0305-7372(13)00171-0)。目前临床上非选择性PI3K抑制剂已经观察到了不可避免的副作用，包括PI3K抑制剂常见的恶心、呕吐、腹泻、疲惫、转氨酶升高、高血糖症等。在选择性PI3K抑制剂中，由于PIK3CA/p110α是最常见的PI3K突变亚型，所以PI3Kα选择性抑制剂也是最有潜在抑瘤效果的抑制剂。同时，PI3Kα选择性抑制剂也可以最大程度的避免了临床上由于对PI3Kβ及PI3Kd抑制剂所带来的肺炎、嗜中性白血球减少症、血小板减少、贫血、转氨酶升高等副作用(Brana和Siu，BMC Medicine，2012，10：161)。
AKT，又被称为蛋白激酶B(Protein Kinase B)，属于丝氨酸(S473位点)/苏氨酸(T308位点)蛋白激酶，是PI3K主要的下游效应分子。生理状态下，AKT位于胞浆内，处于失活状态，当其暴露于各种刺激因素时，AKT被PI3K激活发生磷酸化，并募集至胞浆膜和转位到胞溶质或胞核，促进底物蛋白特定部位的丝氨酸、苏氨酸磷酸化，完成对诸如蛋白质合成，细胞增殖等过程的调节。
PI3K作为细胞功能的关键调节通路，其异常信号与原癌基因的活化有着密切的联系，对肿瘤的发生、发展过程均有着关键性的影响。作为肿瘤细胞中最常见的异常信号通路，由基因突变造成PI3K调节蛋白PTEN异常、AKT过量表达或过度活化等均能导致持续活化的PI3K信号。这些突变在多种实体肿瘤，如乳腺癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌、肝癌、消化道肿瘤等都普遍存在，并且与治疗耐受和不良预后紧密相关。因此可以预期，通过开发小分子化合物实现对PI3K的抑制作为肿瘤治疗药物具有良好的开发前景。
对于PI3K信号通路而言，目前已经有多个单独抑制PI3K活性的化合物处于开发和临床试验阶段。如由Novartis公司开发的PI3K抑制剂BKM-120，现处于针对乳腺癌的临床III期实验阶段。另一个PI3K抑制剂BYL-719，由Novartis公司开发用于治疗实体瘤、头颈癌，现也已处于临床II期阶段。目前公开了一系列的PI3K抑制剂的专利申请，其中包括WO2007084786、WO2009080694、WO2004048365。
为了达到更好的肿瘤治疗效果的目的，更好的满足市场需求，我们希望能开发出新一代的高效低毒的针对PI3K信号通路的抑制剂，特别作用于PI3K-α的抑制剂。本发明将提供一种新型结构的PI3K激酶抑制剂，对mTOR激酶无抑制作用，并发现具有此类结构的化合物具有良好的活性，并表现出优异的抗肿瘤细胞增殖的作用。
发明内容
本发明的目的在于提供通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐：
其中：
环A为单环杂芳基；
环B为饱和的环烷基或杂环基；
L为一个键或氧原子；
R1为烷基；
R2选自氢原子、烷基、羟基、卤素、烷氧基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-C(O)NR5R6、-C(O)R7、-C(O)OR7、-NHC(O)NR5R6或-NR5R6；
R3和R4各自独立地选自氢原子、烷基、烷氧基、卤素、羟基、氰基、芳基、杂芳基、-OR5或-NR5R6，其中所述烷基、烷氧基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自烷基、卤素、氰基、氨基、羟基、烯基、炔基、羧基或羧酸酯基的取代基所取代；且
R5、R6和R7各自独立地选自氢原子、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自羟基、烷基、卤素、烷氧基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基的取代基所取代。
在本发明一个优选的实施方案中，一种通式(II)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐：
其中：
G为氧原子或C(R8R9)；
环A为单环杂芳基；
R1为烷基；
R2为氢原子或烷基；
R3和R4如通式(I)中所述；且
R8和R9各自独立地选自氢原子、烷基、烷氧基、卤素、羟基、氰基、芳基、杂芳基、-OR5或-NR5R6，其中所述烷基、烷氧基、芳基或杂芳基任选进一步被一个或多个选自烷基、卤素、氰基、氨基、羟基、烯基、炔基、羧基或羧酸酯基的取代基所取代。
进一步，在本发明优选的实施方案中，一种通式(IIA)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐，
其中：G、环A、R2～R4如通式(II)所述。
在本发明另一优选的实施方案中，一种通式(III)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐：
其中：
环A为单环杂芳基；
环B为饱和的环烷基或杂环基；
R1为烷基；
R2为氢原子或烷基；且
R3和R4各自独立地选自氢原子、烷基或氨基，其中所述烷基任选进一步被一个或多个卤素所取代。
进一步，在本发明优选的实施方案中，一种通式(IIIA)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐：
其中：环A、环B、R2～R4如通式(III)所述。
进一步，在本发明优选的实施方案中，一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐，所述的R1为甲基。
进一步，在本发明优选的实施方案中，一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐，所述的环A为吡啶基或嘧啶基。
进一步，在本发明优选的实施方案中，一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐，所述的R2为烷基，优选为甲基。
进一步，在本发明优选的实施方案中，一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐，所述的R3和R4各自独立地选自氢原子、烷基、卤代烷基或氨基。
本发明典型的化合物包括，但不限于：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐。
本发明还提供一种通式(I-A)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式：
可作为合成通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式的中间体，其中：
环B、L、R1～R2的定义如通式(I)中所述，X为卤素。
本发明还提供一种制备通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐的方法，该方法包括：
通式(I-A)化合物与与环A取代的硼酸酯或硼酸在碱性条件下，经催化后进行偶联反应得到通式(I)化合物，
其中：X为卤素；环A、环B、L、R1～R4的定义如通式(I)中所述。
本发明进一步涉及一种药物组合物，其含有治疗有效量的本发明通式(I)所示的化合物或其可药用盐以及一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐，或包含其的药物组合物在制备治疗蛋白酪氨酸激酶介导的疾病，特别是PI3K激酶介导的疾病的药物中的用途。
本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐，或包含其的药物组合物在制备抑制PI3K-激酶的药物中的用途。
本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐，或包含其的药物组合物在制备治疗癌症或组织增生类疾病的药物中的用途，其中所述的癌症选自黑素瘤、乳头状甲状腺肿瘤、胆管癌、结肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、肺癌、食道癌、脑癌、恶性淋巴肿瘤、肝、胃、肾、膀胱、前列腺、乳腺和胰腺的癌和肉瘤、以及皮肤、结肠、甲状腺、肺和卵巢的原发和复发性实体瘤或者白血病、头颈癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤，优选为乳腺癌。
本发明还涉及一种治疗蛋白酪氨酸激酶介导的疾病，特别是PI3K激酶介导的疾病的方法，其包括给予所需患者治疗有效量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐，或包含其的药物组合物。
本发明还涉及一种抑制PI3K激酶活性的方法，其包括给予所需患者治疗有效量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐，或包含其的药物组合物。
换言之，本发明涉及一种治疗癌症或组织增生类疾病的方法，其包括给予所需患者治疗有效量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐，或包含其的药物组合物，其中所述的癌症选自黑素瘤、乳头状甲状腺肿瘤、胆管癌、结肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、肺癌、食道癌、脑癌、恶性淋巴肿瘤、肝、胃、肾、膀胱、前列腺、乳腺和胰腺的癌和肉瘤、以及皮肤、结肠、甲状腺、肺和卵巢的原发和复发性实体瘤或者白血病、头颈癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤，优选为乳腺癌。
本发明还涉及作为治疗蛋白酪氨酸激酶介导的疾病，特别是PI3K激酶介导的疾病的药物的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐，或包含其的药物组合物。
本发明还涉及作为抑制PI3K激酶活性的药物的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐，或包含其的药物组合物。
本发明还涉及作为治疗癌症或组织增生类疾病的药物的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐，或包含其的药物组合物，其中所述的癌症选自黑素瘤、乳头状甲状腺肿瘤、胆管癌、结肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、肺癌、食道癌、脑癌、恶性淋巴肿瘤、肝、胃、肾、膀胱、前列腺、乳腺和胰腺的癌和肉瘤、以及皮肤、结肠、甲状腺、肺和卵巢的原发和复发性实体瘤或者白血病、头颈癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤，优选为乳腺癌。
含活性成分的药物组合物可以是适用于口服的形式，例如片剂、糖锭剂、锭剂、水或油混悬液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊，或糖浆剂或酏剂。可按照本领域任何已知制备药用组合物的方法制备口服组合物，此类组合物可含有一种或多种选自以下的成分：甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以提供悦目和可口的药用制剂。片剂含有活性成分和用于混合的适宜制备片剂的无毒的可药用的赋形剂。这些赋形剂可以是惰性赋形剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、玉米淀粉或藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶、聚乙烯吡咯烷酮或阿拉伯胶和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。这些片剂可以不包衣或可通过掩盖药物的味道或在胃肠道中延迟崩解和吸收，因而在较长时间内提供缓释作用的已知技术将其包衣。例如，可使用水溶性味道掩蔽物质，例如羟丙基甲基纤维素或羟丙基纤维素，或延长时间物质例如乙基纤维素、醋酸丁酸纤维素。
也可用其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合的硬明胶胶囊，或其中活性成分与水溶性载体例如聚乙二醇或油溶媒例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合的软明胶胶囊提供口服制剂。
水悬浮液含有活性物质和用于混合的适宜制备水悬浮液的赋形剂。此类赋形剂是悬浮剂，例如羧基甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和阿拉伯胶；分散剂或湿润剂可以是天然产生的磷脂例如卵磷脂，或烯化氧与脂肪酸的缩合产物例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物，例如十七碳亚乙基氧基鲸蜡醇(heptadecaethyleneoxy cetanol)，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇衍生的部分酯的缩合产物，例如聚环氧乙烷山梨醇单油酸酯，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的缩合产物，例如聚环氧乙烷脱水山梨醇单油酸酯。水混悬液也可以含有一种或多种防腐剂例如尼泊金乙酯或尼泊金正丙酯、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂，例如蔗糖、糖精或阿司帕坦。
油混悬液可通过使活性成分悬浮于植物油如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油，或矿物油例如液体石蜡中配制而成。油悬浮液可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可加入上述的甜味剂和矫味剂，以提供可口的制剂。可通过加入抗氧化剂例如丁羟茴醚或α-生育酚保存这些组合物。
通过加入水可使适用于制备水混悬也的可分散粉末和颗粒提供活性成分和用于混合的分散剂或湿润剂、悬浮剂或一种或多种防腐剂。适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂可说明上述的例子。也可加入其他赋形剂例如甜味剂、矫味剂和着色剂。通过加入抗氧化剂例如抗坏血酸保存这些组合物。
本发明的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油例如橄榄油或花生油，或矿物油例如液体石蜡或其混合物。适宜的乳化剂可以是天然产生的磷脂，例如大豆卵磷脂和由脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或偏酯例如山梨坦单油酸酯，和所述偏酯和环氧乙烷的缩合产物，例如聚环氧乙烷山梨醇单油酸酯。乳剂也可以含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和抗氧剂。可用甜味剂例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖配制糖浆和酏剂。此类制剂也可含有缓和剂、防腐剂、着色剂和抗氧剂。
药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可在使用的可接受的溶媒和溶剂中有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳。例如将活性成分溶于大豆油和卵磷脂的混合物中。然后将油溶液加入水和甘油的混合物中处理形成微乳。可通过局部大量注射，将注射液或微乳注入患者的血流中。或者，最好按可保持本发明化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度，可使用连续静脉内递药装置。这种装置的实例是Deltec CADD-PLUS.TM.5400型静脉注射泵。
药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液，例如1，3-丁二醇中制备的溶液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。为此目的，可使用包括合成甘油单或二酯在内的任何调和固定油。此外，脂肪酸例如油酸也可以制备注射剂。
可按用于直肠给药的栓剂形式给予本发明化合物。可通过将药物与在普通温度下为固体但在直肠中为液体，因而在直肠中会溶化而释放药物的适宜的无刺激性赋形剂混合来制备这些药物组合物。此类物质包括可可脂、甘油明胶、氢化植物油、各种分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混合物。
本领域技术人员所熟知的，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定以下因素：所用特定化合物的活性、病人的年龄、病人的体重、病人的健康状况、病人的行被、病人的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合等；另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、通式化合物(I)的日用量或可药用的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。
发明详述
除非有相反陈述，否则下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。
“烷基”指饱和的脂族烃基团，包括1至20个碳原子的直链和支链基团。优选含有1至10个碳原子的烷基，更优选含有1至6个碳原子的烷基。非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2，3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2，3-二甲基戊基、2，4-二甲基戊基、2，2-二甲基戊基、3，3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2，3-二甲基己基、2，4-二甲基己基、2，5-二甲基己基、2，2-二甲基己基、3，3-二甲基己基、4，4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2，2-二乙基戊基、正癸基、3，3-二乙基己基、2，2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2，3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基或羧酸酯基。
术语“烯基”指至少由两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上定义的烷基，例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3-丁烯基等。优选C2-10烯基，更优选C2-6烯基，最优选C2-4烯基。烯基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基或羧酸酯基。
术语“炔基”指至少由两个碳原子和至少一个碳-碳三键组成的如上所定义的烷基，例如乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-、2-或3-丁炔基等。优选C2-10炔基，更优选C2-6炔基，最优选C2-4炔基。炔基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基或羧酸酯基。
“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包括3至20个碳原子，优选包括3至12个碳原子，更优选环烷基环包含3至10个碳原子，最优选环烷基环包含3至6个碳原子。单环环烷基的非限制性实施例包含环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等，优选环丙基、环己烯基。多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。环烷基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基或羧酸酯基。
“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包括3至20个环原子，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包括3至12个环原子，其中1～4个是杂原子，更优选杂环基环包含3至10个环原子，更优选杂环基环包含5至6个环原子。单环杂环基的非限制性实施例包含吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基、吡喃基、四氢呋喃基等。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。杂环基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基或羧酸酯基。
“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，更优选苯基和萘基，最优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，非限制性实施例包含：
芳基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基或羧酸酯基。
“单环杂芳基”指包含1至4个杂原子，5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子包括氧、硫和氮。优选为5至10元。杂芳基优选为是5元或6元的单环杂芳基，例如噻唑基、吡唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等，优选吡啶基或嘧啶基。杂芳基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基或羧酸酯基。
“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(未取代的环烷基)，其中烷基、环烷基的定义如上所述。非限制性实施例包含甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。烷氧基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自为烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基或羧酸酯基。
一个“键”指用“-”表示的一个共价键。
“卤代烷基”指烷基被一个或多个卤素取代，其中烷基的定义如上所述。
“羟基”指-OH基团。
“羟烷基”指被羟基取代的烷基，其中烷基的定义如上所述。
“卤素”指氟、氯、溴或碘。
“氨基”指-NH2。
“氰基”指-CN。
“硝基”指-NO2。
“苄基”指-CH2-苯基。
“氧代基”指＝O。
“羧基”指-C(O)OH。
“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)或(环烷基)，其中烷基、环烷基的定义如上所述。
“氨基保护基”是为了使分子其它部位进行反应时氨基保持不变，用易于脱去的基团对氨基进行保护。非限制性实施例包含甲酰基、烷基羰基、烷氧基羰基、苯甲酰基、芳烷基羰基、芳烷氧基羰基、三苯甲基、邻苯二甲酰基、N，N-二甲基氨基亚甲基、取代的甲硅烷基等。这些基团可任选地被选自卤素、烷氧基或硝基中的1-3个取代基所取代。氨基保护基优选为叔丁氧羰基。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
本发明的合成方法
为了完成本发明的合成目的，本发明采用如下的合成技术方案：
一种制备通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐的方法，该方法包括：
2，4，6-三卤代嘧啶(a)与环B化合物(b)在碱性条件下溶剂中反应得到二卤代嘧啶化合物(c)，二卤代嘧啶化合物(c)与取代的吗啡啉化合物在碱性条件下溶剂中反应得到吗啡啉取代的嘧啶化合物(I-A)；或者吗啡啉取代的二卤代嘧啶化合物(d)与环B化合物(b)在碱性条件下溶剂中反应得到吗啡啉取代的嘧啶化合物(I-A)；吗啡啉取代的嘧啶化合物(I-A)与环A取代的硼酸酯或硼酸在碱性条件下，于溶剂中经催化剂催化进行偶联反应得到通式(I)化合物。其中X为卤素；环A、环B、L、R1～R4的定义如通式(I)化合物中所述。
碱性条件的试剂包括有机碱和无机碱类，所述的有机碱类包括但不限于N，N-二异丙基乙胺、三乙胺、正丁基锂或叔丁醇钾，所述的无机碱类包括但不限于碳酸铯、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾或氢化钠。
催化剂包括但不限于双(三苯基膦)二氯化钯，[1，1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯，四-三苯基膦钯、二氯化钯、醋酸钯或三(二亚苄基丙酮)二钯。
所用溶剂包括但不限于：N-甲基吡咯烷酮、四氢呋喃、甲醇、乙醇、乙二醇二甲醚、水、乙腈、二氯甲烷、1，4-二氧六环、二甲基亚砜或N，N-二甲基甲酰胺。
一种制备通式(II)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐的方法，该方法包括：
2，4，6-三卤代嘧啶(a)与氮杂环化合物(e)在碱性条件下溶剂中反应得到氮杂环取代的二卤代嘧啶化合物(f)，氮杂环取代的二卤代嘧啶化合物(f)与取代的吗啡啉化合物在碱性条件下溶剂中反应得到吗啡啉取代的嘧啶化合物(II-A)；或者吗啡啉取代的二卤代嘧啶化合物(d)与氮杂环化合物(e)在碱性条件下溶剂中反应得到吗啡啉取代的嘧啶化合物(II-A)；吗啡啉取代的嘧啶化合物(II-A)与环A取代的硼酸酯或硼酸在碱性条件下，于溶剂中经催化剂催化进行偶联反应得到通式(II)化合物。其中X为卤素；环A、G、R1～R4的定义如通式(II)化合物中所述。
碱性条件的试剂包括有机碱和无机碱类，所述的有机碱类包括但不限于N，N-二异丙基乙胺、三乙胺、正丁基锂或叔丁醇钾，所述的无机碱类包括但不限于碳酸铯、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾或氢化钠。
催化剂包括但不限于双(三苯基膦)二氯化钯，[1，1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯，四-三苯基膦钯、二氯化钯、醋酸钯或三(二亚苄基丙酮)二钯。
所用溶剂包括但不限于：N-甲基吡咯烷酮、四氢呋喃、甲醇、乙醇、乙二醇二甲醚、水、乙腈、二氯甲烷、1，4-二氧六环、二甲基亚砜或N，N-二甲基甲酰胺。
一种制备通式(III)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物形式，及其可药用盐的方法，该方法包括：
2，4，6-三卤代嘧啶(a)与羟基取代的环B化合物(g)在碱性条件下溶剂中反应得到二卤代嘧啶化合物(h)，二卤代嘧啶化合物(h)与取代的吗啡啉化合物在碱性条件下溶剂中反应得到吗啡啉取代的嘧啶化合物(III-A)；或者吗啡啉取代的二卤代嘧啶化合物(d)与羟基取代的环B化合物(g)在碱性条件下溶剂中反应得到吗啡啉取代的嘧啶化合物(III-A)；吗啡啉取代的嘧啶化合物(III-A)与环A取代的硼酸酯或硼酸在碱性条件下，于溶剂中经催化剂催化进行偶联反应得到通式(III)化合物。其中X为卤素；环A、环B、R1～R4的定义如通式(III)化合物中所述。
碱性条件的试剂包括有机碱和无机碱类，所述的有机碱类包括但不限于N，N-二异丙基乙胺、三乙胺、正丁基锂或叔丁醇钾，所述的无机碱类包括但不限于碳酸铯、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾或氢化钠。
催化剂包括但不限于双(三苯基膦)二氯化钯，[1，1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯，四-三苯基膦钯、二氯化钯、醋酸钯或三(二亚苄基丙酮)二钯。
所用溶剂包括但不限于：N-甲基吡咯烷酮、四氢呋喃、甲醇、乙醇、乙二醇二甲醚、水、乙腈、二氯甲烷、1，4-二氧六环、二甲基亚砜或N，N-二甲基甲酰胺。
具体实施方式
以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制本发明的范围。
本发明实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。
实施例
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
MS的测定用FINNIGAN LCQAd(ESI)质谱仪(生产商：Thermo，型号：Finnigan LCQadvantage MAX)。
HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪(Sunfire C18 150×4.6mm色谱柱)和Waters 2695-2996高压液相色谱仪(Gimini C18 150×4.6mm色谱柱)。
激酶平均抑制率及IC50值的测定用NovoStar酶标仪(德国BMG公司)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.9mm～1.0mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自ABCR GmbH & Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶远化学科技(AccelaChemBio Inc)、达瑞化学品等公司。
实施例中无特殊说明，反应能够均在氩气氛或氮气氛下进行。
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。
氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
加压氢化反应使用Parr 3916EKX型氢化仪和清蓝QL-500型氢气发生器或HC2-SS型氢化仪。
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
微波反应使用CEM Discover-S 908860型微波反应器。
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂的体系有：A：二氯甲烷和甲醇体系，B：正己烷和乙酸乙酯体系，C：石油醚和乙酸乙酯体系，D：丙酮，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节。
纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：A：二氯甲烷和甲醇体系，B：正己烷和乙酸乙酯体系，C：二氯甲烷和丙酮体系，D：为正己烷和丙酮体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。
实施例1
2，6-双((S)-3-甲基吗啉)-[4，5’-联嘧啶]-2’-胺
第一步
(3S，3’S)-4，4’-(6-氯嘧啶-2，4-二基)双(3-甲基吗啉)
将(S)-4-(2，6-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉(200mg，0.81mmol，采用“专利申请WO2008032064”公开的方法制备而得)溶解于3mL乙醇中，加入(S)-3-甲基吗啉(91mg，0.90mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.5mL，2.43mmol)，于65℃下反应12小时。减压浓缩反应液，加入10mL水，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(10mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，用薄层色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物(3S，3’S)-4，4’-(6-氯嘧啶-2，4-二基)双(3-甲基吗啉)1a(110mg，白色固体)，产率：43.6％。
MS m/z(ESI)：313.2[M+1]
第二步
5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷)嘧啶-2-胺
将5-溴代嘧啶-2-胺(3.48g，20mmol)溶解于100mL二氧六环中，依次加入4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-双(1，3，2-二氧杂硼烷)(7.62g，30mmol)，[1，1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(500mg，2mmol)和醋酸钾(3.91g，40mmol)，氩气置换三次，于85℃下反应12小时。过滤，减压浓缩滤液，用石油醚打浆所得残余物，得到粗品标题产物5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷)嘧啶-2-胺1b(5.4g，白色固体)。
MS m/z(ESI)：222.2[M+1]
第三步
2，6-双((S)-3-甲基吗啉)-[4，5’-联嘧啶]-2’-胺
将(3S，3’S)-4，4’-(6-氯嘧啶-2，4-二基)双(3-甲基吗啉)1a(200mg，0.64mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺和水中，依次加入5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷)嘧啶-2-胺1b(212mg，0.96mmol)，双(三苯基膦)二氯化钯(45mg，0.06mmol)和碳酸钾(178mg，1.28mmol)，氩气置换三次，于90℃下反应12小时。向反应液中加入20mL水，用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，用薄层色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物2，6-双((S)-3-甲基吗啉)-[4，5’-联嘧啶]-2’-胺1(120mg，白色固体)，产率：50.6％。
MS m/z(ESI)：372.2[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.93(s，2H)，7.02(s，2H)，6.54(s，1H)，4.64(s，1H)，4.45(s，1H)，4.30-4.32(d，1H)，4.21-4.23(d，1H)，3.91-3.94(d，2H)，3.66-3.70(d，2H)，3.56-3.59(m，2H)，3.42-3.46(m，2H)，3.07(t，2H)，1.14-1.16(d，6H)
实施例2
5-(2，6-双((R)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺
第一步
(R)-4-(2，6-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉
将2，4，6-三氯嘧啶(500mg，2.73mmol)溶解于30mL乙醇中，加入N，N-二异丙基乙胺(2mL，10.92mmol)。置于冰水浴中，缓慢加入(R)-3-甲基吗啉(935mg，6.83mmol)，升至65℃下反应12小时。减压浓缩反应液，用薄层色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物(R)-4-(2，6-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉2a(550mg，白色固体)，产率：81.2％。
MS m/z(ESI)：250.1[M+1]
第二步
(3R，3’R)-4，4’-(6-氯嘧啶-2，4-二基)双(3-甲基吗啉)
将(R)-4-(2，6-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉2a(550mg，2.22mmol)溶解于10mLN-甲基吡咯烷酮中，加入(R)-3-甲基吗啉(270mg，2.66mmol)和碳酸铯(1.4g，4.44mmol)，升至95℃下反应12小时。向反应液中加入20mL水，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，用薄层色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物(3R，3’R)-4，4’-(6-氯嘧啶-2，4-二基)双(3-甲基吗啉)2b(220mg，白色固体)，产率：31.8％。
MS m/z(ESI)：313.2[M+1]
第三步
5-(2，6-双((R)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺
将(3R，3’R)-4，4’-(6-氯嘧啶-2，4-二基)双(3-甲基吗啉)2b(220mg，0.71mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺和水(V/V＝5∶1)中，依次加入5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺2c(306mg，1.06mmol，采用“专利申请WO2007084786”公开的方法制备而得)，双(三苯基膦)二氯化钯(50mg，0.07mmol)和碳酸钾(196mg，1.42mmol)，氩气置换三次，于95℃下反应12小时。向反应液中加入20mL水，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，用薄层色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物5-(2，6-双((R)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺2(80mg，白色固体)，产率：25.8％。
MS m/z(ESI)：439.2[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.15(s，1H)6.80(s，1H)6.70(s，2H)6.15(s，1H)4.57(s，1H)4.31(s，1H)4.18-4.21(d，1H)4.09-4.22(d，1H)3.89(t，2H)3.69(t，2H)3.42-3.47(m，2H)3.33-3.38(m，2H)3.02-3.06(m，2H)1.14-1.16(d，6H)
实施例3
5-(2，6-双((S)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺
第一步
5-(2，6-双((S)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺
将(3S，3’S)-4，4’-(6-氯嘧啶-2，4-二基)双(3-甲基吗啉)1a(160mg，0.51mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺和水(V/V＝15∶7)中，依次加入5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺2c(221mg，0.77mmol，采用“专利申请WO2007084786”公开的方法制备而得)，双(三苯基膦)二氯化钯(36mg，0.05mmol)和碳酸钾(140mg，1.02mmol)，氩气置换三次，于90℃下反应12小时。向反应液中加入20mL水，用乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(20mL×2)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，用薄层色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物5-(2，6-双((S)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺3(50mg，白色固体)，产率：22.3％。
MS m/z(ESI)：439.2[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.15(s，1H)，6.80(s，1H)，6.71(s，2H)，6.15(s，1H)，4.59(s，1H)，4.32(s，1H)，4.20-4.21(d，1H)，4.07(s，1H)，3.92(t，2H)，3.68(t，2H)，3.52-3.58(m，2H)，3.36-3.70(m，2H)，3.03-3.07(m，2H)，1.14-1.16(d，6H)
实施例4
(S)-1-(6-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-(3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)哌啶-4-醇
第一步
(S)-1-(6-氯-2-(3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)哌啶-4-醇
将(S)-4-(4，6-二氯嘧啶-2-基)-3-甲基吗啉4a(100mg，0.40mmol，采用“专利申请WO2008032064”公开的方法制备而得)，4-羟基-哌啶(45mg，0.44mmol)和碳酸铯(263mg，0.81mmol)溶解于3mL N，N-二甲基甲酰胺中，加热至95℃，搅拌反应12小时。加入20mL乙酸乙酯，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(30mL)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩滤液，得到粗品标题产物(S)-1-(6-氯-2-(3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)哌啶-4-醇4b(0.13g，黄色油状物)，产物不经纯化直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI)：313.2[M+1]
第二步
(S)-1-(6-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-(3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)哌啶-4-醇
将粗品(S)-1-(6-氯-2-(3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)哌啶-4-醇4b(130mg，0.40mmol)，5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺2c(174mg，0.61mmol)，[1，1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(29mg，0.04mmol)和碳酸钠(128mg，1.21mmol)溶解于6mL N，N-二甲基甲酰胺和水(V∶V＝5∶1)中，加热至90℃，搅拌反应12小时。加入20mL乙酸乙酯，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(30mL)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩滤液，用薄层色谱法以展开剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物(S)-1-(6-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-(3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)哌啶-4-醇4(10mg，黄色油状物)，产率：5.6％。
MS m/z(ESI)：439.2[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.17(s，1H)，7.52-7.55(m，1H)，6.82(s，2H)，6.53(s，1H)，4.64(s，1H)，4.45(s，1H)，4.30-4.32(m，1H)，4.21-4.23(m，1H)，3.91-3.94(m，2H)，3.80-3.86(m，4H)，3.61-3.64(m，5H)，3.50-3.53(m，2H)，1.37(d，3H)
实施例5
(S)-4-(4-(2-(二氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)-6-吗啉嘧啶-2-基)-3-甲基吗啉
第一步
(S)-4-(4-氯-6-(2-(二氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)嘧啶-2-基)-3-甲基吗啉
将(S)-4-(4，6-二氯嘧啶-2-基)-3-甲基吗啉4a(410mg，1.61mmol)，2-(二氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑5a(324mg，1.94mmol)和碳酸钠(530mg，4.96mmol)溶解于10mL二甲基乙酰胺中，加热至90℃，搅拌反应12小时。加入20mL乙酸乙酯，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(30mL)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩滤液，得到粗品标题产物(S)-4-(4-氯-6-(2-(二氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)嘧啶-2-基)-3-甲基吗啉5b(0.70g，黄色油状物)，产物不经纯化直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI)：380.1[M+1]
第二步
(S)-4-(4-(2-(二氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)-6-吗啉嘧啶-2-基)-3-甲基吗啉
将(S)-4-(4-氯-6-(2-(二氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)嘧啶-2-基)-3-甲基吗啉5b(700mg，1.61mmol)和5mL吗啉溶解于5mL吡啶中，加热至120℃，搅拌反应4小时。减压浓缩反应液，加入20mL乙酸乙酯，用饱和氯化铵溶液洗涤(30mL)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩滤液，用薄层色谱法以展开剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物(S)-4-(4-(2-(二氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)-6-吗啉嘧啶-2-基)-3-甲基吗啉5(180mg，浅黄色固体)，产率：26.0％。
MS m/z(ESI)：431.3[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.95(s，1H)，7.69(s，1H)，7.45(s，2H)，6.12(s，1H)，4.66-4.71(m，1H)，4.31-4.37(dd，1H)，4.00-4.05(dd，1H)，3.86(m，5H)，3.64-3.82(m，6H)，3.55-3.63(m，1H)，3.30-3.58(m，2H)，1.37(d，3H)
实施例6
反式-4-(6-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-((S)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基氧基)-N，N-二甲基环己烷甲酰胺
第一步
反式-4-羟基-N，N-二甲基环己烷甲酰胺
将反式-4-羟基环己烷甲酸6a(500mg，3.47mmol)，二甲基胺(340mg，4.17mmol)，1-乙基-3-(3′-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(1.33g，6.94mmol)和1-羟基苯并三唑(47mg，0.35mmol)溶解于11mL三氟醋酸和二氯甲烷(V∶V＝1∶10)中，搅拌反应12小时。加入5mL水，减压浓缩反应液，得到粗品标题产物反式-4-羟基-N，N-二甲基环己烷甲酰胺6b(0.70g，浅黄色油状物)，产物不经纯化直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI)：172.2[M+1]
第二步
反式-4-(6-氯-2-((S)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基氧基)-N，N-二甲基环己烷甲酰胺
将氢化钠(24mg，0.60mmol)溶解于5mL四氢呋喃中，冷却至0℃，加入2mL粗品反式-4-羟基-N，N-二甲基环己烷甲酰胺6b(103mg，0.60mmol)的四氢呋喃溶液，搅拌1小时，加入(S)-4-(4，6-二氯嘧啶-2-基)-3-甲基吗啉4a(100mg，0.40mmol)，搅拌反应12小时。加入5mL水，减压浓缩反应液，得到粗品标题产物反式-4-(6-氯-2-((S)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基氧基)-N，N-二甲基环己烷甲酰胺6c(0.20g，黄色油状物)，产物不经纯化直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI)：383.2[M+1]
第三步
反式-4-(6-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-((S)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基氧基)-N，N-二甲基环己烷甲酰胺
将粗品反式-4-(6-氯-2-((S)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基氧基)-N，N-二甲基环己烷甲酰胺6c(200mg，0.40mmol)，5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺2c(174mg，0.61mmol)，[1，1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(29mg，0.04mmol)和碳酸钠(128mg，1.21mmol)溶解于6mL N，N-二甲基甲酰胺和水(V∶V＝5∶1)中，加热至90℃，搅拌反应12小时。减压浓缩反应液，用制备分离法纯化所得残余物，得到标题产物反式-4-(6-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-((S)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基氧基)-N，N-二甲基环己烷甲酰胺6(20mg，黄色油状物)，产率：9.8％。MS m/z(ESI)：509.5[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.09(s，1H)，6.83(s，1H)，6.67(s，2H)，6.21(s，1H)，3.82-3.87(m，2H)，3.77(s，1H)，3.63-3.66(m，5H)，3.45(s，6H)，2.84-2.86(m，2H)，2.41(s，1H)，2.24(s，2H)，1.89(s，2H)，1.72-1.75(m，2H)，1.37(d，3H)
实施例7
(S)-5-(2-(3-甲基吗啡啉)-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)嘧啶-4-基)-4-三氟甲基吡啶-2-胺
第一步
(S)-4-(4-氯-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)嘧啶-2基)-3-甲基吗啡啉
氩气保护下，将钠氢(24mg，0.60mmol)悬浮于5mL的四氢呋喃中，冰浴到0℃下，慢慢滴加2H-四氢吡喃-4-醇(62mg，0.60mmol)的四氢呋喃溶液，并在此温度下持续搅拌1小时，然后加入(S)-4-(4，6-二氯嘧啶-2-基)-3-甲基吗啉4a(100mg，0.40mmol，采用“专利申请WO2008032064”公开的方法制备而得)，并在室温条件下过夜，次日，加入冰水5mL淬灭反应，加入20mL乙酸乙酯，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(30mL)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩滤液，得到粗品标题产物(S)-4-(4-氯-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)嘧啶-2基)-3-甲基吗啡啉7a(0.2g，浅黄色油状物)，产物不经纯化直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI)：314.12[M+1]
第二步
(S)-5-(2-(3-甲基吗啡啉)-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)嘧啶-4-基)-4-三氟甲基吡啶-2-胺
将粗品(S)-4-(4-氯-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)嘧啶-2基)-3-甲基吗啡啉7a(0.2g，0.4mmol)，5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺2c(174mg，0.60mmol)，[1，1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(29mg，0.04mmol)和碳酸钠(128mg，1.21mmol)溶解于6mL N，N-二甲基甲酰胺和水(V∶V＝5∶1)中，加热至90℃，搅拌反应12小时。加入20mL乙酸乙酯，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(30mL)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩滤液，用薄层色谱法以展开剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物(S)-5-(2-(3-甲基吗啡啉)-6-((四氢-2H-吡喃-4-基)氧基)嘧啶-4-基)-4-三氟甲基吡啶-2-胺7(60mg，黄色固体)，产率：34％。
MS m/z(ESI)：440.4[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.15(s，1H)，6.88(s，1H)，6.69(s，2H)，6.20(s，1H)，3.82-3.87(m，2H)，3.76-3.80(m，2H)，3.55-3.68(m，5H)，2.84-2.86(m，1H)，2.41(s，2H)，2.24(s，2H)，1.82-1.85(m，2H)，1.37(d，3H)
实施例8
(S)-5-(6-环丙烷-2-(3-甲基吗啡啉)嘧啶-4-基)-4-三氟甲基吡啶-2-胺
第一步
(S)-4-(4-氯-6-环丙烷嘧啶-2-基)-3-甲基吗啡啉
氩气保护下，将(S)-4-(4，6-二氯嘧啶-2-基)-3-甲基吗啉4a(100mg，0.40mmol，采用“专利申请WO2008032064”公开的方法制备而得)，环丙烷硼酸(42mg，0.48mmol)，醋酸钯(5mg，0.02mmol)，三苯基膦(11.3mg，0.04mmol)，磷酸钾三水合物(319mg，1.2mmol)混悬于5mL的甲苯中，在110℃反应6小时，加入冰水5mL淬灭反应，加入30mL乙酸乙酯，水相用乙酸乙酯萃取(15mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(20mL)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩滤液，得到粗品标题产物(S)-4-(4-氯-6-环丙烷嘧啶-2-基)-3-甲基吗啡啉8a(0.12g，黑色油状物)，产物不经纯化直接进行下一步反应。
第二步
(S)-5-(6-环丙烷-2-(3-甲基吗啡啉)嘧啶-4-基)-4-三氟甲基吡啶-2-胺
氩气保护下，将粗品(S)-4-(4-氯-6-环丙烷嘧啶-2-基)-3-甲基吗啡啉8a(0.12g，0.4mmol)，5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺2c(174mg，0.60mmol)，[1，1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(29mg，0.04mmol)和碳酸钠(128mg，1.21mmol)混悬于6mL N，N-二甲基甲酰胺和水(V∶V＝5∶1)中，加热至90℃，搅拌反应12小时。加入20mL乙酸乙酯，水相用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(30mL)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩滤液，用薄层色谱法以展开剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物(S)-5-(6-环丙烷-2-(3-甲基吗啡啉)嘧啶-4-基)-4-三氟甲基吡啶-2-胺8(10mg，白色固体)，产率：7％。
MS m/z(ESI)：380.3[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.15(s，1H)，7.70(s，2H)，7.55(s，1H)，6.55(s，1H)，4.33-4.40(m，1H)，4.01-4.08(m，1H)，3.81-3.86(m，1H)，3.74-3.78(m，1H)，3.56-3.66(m，2H)，3.36-3.43(m，1H)，3.01(s，1H)，1.37(d，3H)，1.28-1.31(m，2H)，1.22-1.26(m，2H)
实施例9
(S)-5-(2-(3-甲基吗啡啉)-6-吗啡啉嘧啶-4-基)-4-三氟甲基吡啶-2-胺
第一步
(S)-4-(4-氯-6-吗啡啉嘧啶-2-基)-3-甲基吗啡啉
氩气保护下，将(S)-4-(4，6-二氯嘧啶-2-基)-3-甲基吗啉4a(300mg，1.21mmol，采用“专利申请WO2008032064”公开的方法制备而得)，吗啡啉(116mg，1.33mmol)，碳酸铯(789mg，2.42mmol)，混悬于5mL的N，N-二甲基甲酰胺中，在95℃反应12小时，加入冰水5mL淬灭反应，加入30mL乙酸乙酯，水相用乙酸乙酯萃取(15mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(20mL)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩滤液，用薄层色谱法以展开剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物(S)-4-(4-氯-6-吗啡啉嘧啶-2-基)-3-甲基吗啡啉9a(0.2g，白色固体)，产率：55％。
MS m/z(ESI)：299.1[M+1]
第二步
(S)-5-(2-(3-甲基吗啡啉)-6-吗啡啉嘧啶-4-基)-4-三氟甲基吡啶-2-胺
氩气保护下，将(S)-4-(4-氯-6-吗啡啉嘧啶-2-基)-3-甲基吗啡啉9a(0.2g，0.67mmol)，5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺2c(290mg，1.0mmol)，[1，1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(50mg，0.067mmol)和碳酸钾(185mg，1.34mmol)混悬于13mL N，N-二甲基甲酰胺和水(V∶V＝10∶3)中，加热至100℃，搅拌反应12小时。加入冰水20mL淬灭反应，加入30mL乙酸乙酯，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(30mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，用薄层色谱法以展开剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物(S)-5-(2-(3-甲基吗啡啉)-6-吗啡啉嘧啶-4-基)-4-三氟甲基吡啶-2-胺9(25mg，白色固体)，产率：8.8％。
MS m/z(ESI)：425.2[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.30(s，1H)，6.85(s，1H)，6.01(s，1H)，4.94(s，2H)，4.74(s，1H)，4.34-4.36(d，1H)，3.97(s，1H)，3.80-3.86(m，6H)，3.61-3.64(m，5H)，3.5(d，1H)，1.30(s，3H)
实施例10
6-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-吗啡啉-N-(1-(四氢-2H-吡喃-4-基)哌啶-4-基)嘧啶-4-胺
第一步
6-氯-2-吗啡啉N-(1-(四氢-2H-吡喃-4-基)哌啶-4-基)嘧啶-4-胺
氩气保护下，将4-(4，6-二氯嘧啶-2-基)吗啡啉10a(680mg，2.92mmol，采用“专利申请WO2005007646”公开的方法制备而得)，1-(四氢-2H-吡喃-4-基)哌啶-4-胺(650mg，3.5mmol，采用“专利申请WO2007036711”公开的方法制备而得)，碳酸铯(1.4g，4.38mmol)，混悬于5mL的N-甲基吡咯烷酮中，在90℃反应1.5小时，加入冰水10mL淬灭反应，加入30mL乙酸乙酯，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(40mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，得到标题产物粗品6-氯-2-吗啡啉-N-(1-(四氢-2H-吡喃-4-基)哌啶-4-基)嘧啶-4-胺10b(750mg，黄色固体)，产率：67.6％。
MS m/z(ESI)：382.2[M+1]
第二步
6-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-吗啡啉-N-(1-(四氢-2H-吡喃-4-基)哌啶-4-基)嘧啶-4-胺
氩气保护下，将6-氯-2-吗啡啉-N-(1-(四氢-2H-吡喃-4-基)哌啶-4-基)嘧啶-4-胺10b(380mg，1mmol)，5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺2c(432mg，1.5mmol)，[1，1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(70mg，0.1mmol)和碳酸钾(276mg，2mmol)混悬于6mL N，N-二甲基甲酰胺和水(V∶V＝5∶1)中，加热至90℃，搅拌反应12小时。加入冰水20mL淬灭反应，加入30mL乙酸乙酯，水相用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤(30mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，用制备HPLC纯化所得残余物，得到标题产物6-(6-氨基-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-吗啡啉-N-(1-(四氢-2H-吡喃-4-基)哌啶-4-基)嘧啶-4-胺10(20mg，白色固体)，产率：5％。
MS m/z(ESI)：508.3[M+1]
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.07(s，1H)，6.79(s，1H)，6.66(s，2H)，5.87(s，1H)，3.82-3.87(d，2H)，3.77(s，1H)，3.63-3.66(m，10H)，2.84-2.86(d，2H)，2.43(s，1H)，2.24(t，2H)，1.89(s，2H)，1.61-1.63(d，2H)，1.39-1.42(m，4H)，1.24(s，1H)
实施例11
5-(2-吗啉代-6-(2-氧杂-7-氮杂螺[4.5]癸烷-7-基)嘧啶-4-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺
第一步
2-氧杂-7-氮杂螺[4.5]癸烷
将2-氧杂-7-氮杂螺[4.5]癸烷-7-羧酸叔丁酯11a(1.2g，5.0mmol)加入到氯化氢的1，4-二氧六环溶液(4N，20mL)中，加毕，搅拌反应4小时。滴加饱和碳酸氢钠溶液至反应液pH为7～8，加入20mL水，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到标题产物2-氧杂-7-氮杂螺[4.5]癸烷11b(700mg，黄色油状物)，直接进行下步反应。
第二步
7-(6-氯-2-吗啉代嘧啶-4-基)-2-氧杂-7-氮杂螺[4.5]癸烷
将4-(4，6-二氯嘧啶-2-基)吗啉10a(300mg，1.3mmol)、2-氧杂-7-氮杂螺[4.5]癸烷11b(343mg，1.9mmol)和碳酸铯(1.3g，3.9mmol)加入到15mL的N-甲基吡咯烷酮中，搅拌均匀，反应液加热至95℃，继续搅拌反应2小时。反应液倒入30mL水中，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到标题产物7-(6-氯-2-吗啉代嘧啶-4-基)-2-氧杂-7-氮杂螺[4.5]癸烷11c(440mg，棕色油状物)，产率：100％。
MS m/z(ESI)：339.2[M+1]
第三步
5-(2-吗啉代-6-(2-氧杂-7-氮杂螺[4.5]癸烷-7-基)嘧啶-4-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺
氩气氛下，将7-(6-氯-2-吗啉代嘧啶-4-基)-2-氧杂-7-氮杂螺[4.5]癸烷11c(400mg，1.2mmol)、5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺2c(510mg，1.8mmol)、[1，1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(87mg，0.12mmol)和碳酸钠(250mg，2.4mmol)依次加入到24mL的1，4-二氧六环和水的混合溶剂中(V∶V＝5∶1)，加热至90℃，搅拌反应16小时。反应液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物5-(2-吗啉代-6-(2-氧杂-7-氮杂螺[4.5]癸烷-7-基)嘧啶-4-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺11(5mg，浅灰色固体)，产率：1.0％。
MS m/z(ESI)：463.4[M-1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.28(s，1H)，6.86(s，1H)，6.05(s，1H)，5.02(s，2H)，4.00-3.87(m，2H)，3.82-3.80(m，8H)，3.76-3.61(m，4H)，3.46-3.42(m，2H)，1.92-1.86(m，2H)，1.76-1.64(m，4H)
实施例12
5-(2-吗啉代-6-(2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)嘧啶-4-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺
第一步
8-(6-氯-2-吗啉代嘧啶-4-基)-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷
将4-(4，6-二氯嘧啶-2-基)吗啉10a(330mg，1.4mmol)、2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷12a(300mg，2.0mmol，采用公知的方法“Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，2002，12(13)，1759-1762”制备而得)和碳酸铯(925mg，2.8mmol)加入到15mL的N-甲基吡咯烷酮中，搅拌均匀，反应液加热至95℃，继续搅拌反应2小时。反应液倒入30mL水中，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到标题产物8-(6-氯-2-吗啉代嘧啶-4-基)-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷12b(400mg，棕色液体)，产率：83.2％。
MS m/z(ESI)：339.2[M+1]
第二步
5-(2-吗啉代-6-(2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)嘧啶-4-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺
氩气氛下，将8-(6-氯-2-吗啉代嘧啶-4-基)-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷12b(100mg，0.3mmol)、5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺2c(127mg，0.4mmol)、[1，1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(21mg，0.03mmol)和碳酸钠(70mg，0.6mmol)依次加入到12mL的1，4-二氧六环和水的混合溶剂中(V∶V＝5∶1)，加热至85℃，搅拌反应16小时。反应液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物5-(2-吗啉代-6-(2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)嘧啶-4-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺12(5mg，黄色固体)，产率：3.6％。
MS m/z(ESI)：465.2[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.33(s，1H)，6.91(s，1H)，6.07(s，1H)，5.10(s，2H)，3.87-3.67(m，12H)，3.21-2.90(m，4H)，1.87-1.84(m，2H)，1.77-1.67(m，4H)
实施例13
5-(2-吗啉代-6-(5H-吡咯并[3，4-b]吡啶-6(7H)-基)嘧啶-4-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺
第一步
4-(4-氯-6-(5H-吡咯并[3，4-b]吡啶-6(7H)-基)嘧啶-2-基)吗啉
将4-(4，6-二氯嘧啶-2-基)吗啉10a(400mg，1.7mmol)、6，7-二氢-5H-吡咯并[3，4-b]吡啶二盐酸盐13a(400mg，2.1mmol)和碳酸铯(2.2g，6.9mmol)加入到15mL的N-甲基吡咯烷酮中，搅拌均匀，反应液加热至95℃，继续搅拌反应2小时。反应液倒入30mL水中，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到标题产物4-(4-氯-6-(5H-吡咯并[3，4-b]吡啶-6(7H)-基)嘧啶-2-基)吗啉13b(240mg，黄色固体)，产率：44.0％。
MS m/z(ESI)：318.1[M+1]
第二步
5-(2-吗啉代-6-(5H-吡咯并[3，4-b]吡啶-6(7H)-基)嘧啶-4-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺
氩气氛下，将4-(4-氯-6-(5H-吡咯并[3，4-b]吡啶-6(7H)-基)嘧啶-2-基)吗啉13b(240mg，0.8mmol)、5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺2c(326mg，1.1mmol)、[1，1′-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(26mg，0.08mmol)和碳酸钠(160mg，1.5mmol)依次加入到24mL的1，4-二氧六环和水的混合溶剂中(V∶V＝5∶1)，加热至100℃，搅拌反应7小时。反应液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物5-(2-吗啉代-6-(5H-吡咯并[3，4-b]吡啶-6(7H)-基)嘧啶-4-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺13(10mg，浅黄色固体)，产率：3.0％。
MS m/z(ESI)：444.4[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.64(s，1H)，8.11-8.0(m，2H)，7.81(d，1H)，7.39(s，1H)，7.04-7.00(m，2H)，6.09(s，1H)，5.06(s，2H)，4.92(s，2H)，3.92-3.83(m，8H)
实施例14
5-(2-((R)-3-甲基吗啉)-6-((S)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺
第一步
(S)-4-(6-氯-2-((R)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉
将(S)-4-(2，6-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉(2.27g，9.15mmol，采用专利申请“WO2008032064”公开的方法制备而得)溶解于18mL N，N-二甲基甲酰胺中，氩气置换三次，冰浴冷却至0℃，加入碳酸钾(2.53g，18.30mmol)，滴加(R)-3-甲基吗啉(1.37g，13.72mmol)，升温至99℃下反应18小时。加入180mL乙酸乙酯，有机相用水(80mL×3)和饱和氯化钠溶液(80mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，粗产物用石油醚打浆16小时，得到标题产物(S)-4-(6-氯-2-((R)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉14a(2.04g，白色固体)，产率：71.3％。
MS m/z(ESI)：313.2[M+1]
第二步
5-(2-((R)-3-甲基吗啉)-6-((S)-3-甲基吗啉)嘧啶-4基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺
将(S)-4-(6-氯-2-((R)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉14a(1.83g，5.86mmol)溶解于30mL乙二醇二甲醚中，加入5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺2c(4.22g，14.65mmol)和15mL 2M碳酸钠溶液，搅拌5分钟，氩气置换三次，加入(1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁)二氯化钯(214mg，0.29mmol)，氩气置换三次，于90℃下反应1小时。向反应液中加入100mL乙酸乙酯，有机相用水(50mL×2)和饱和氯化钠溶液(50mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系D纯化所得残余物，粗产物用丙酮和正己烷(V/V＝1∶40)的混合溶剂打浆16小时，得到标题产物5-(2-((R)-3-甲基吗啉)-6-((S)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺14(1.45g，白色固体)，产率：56.4％。
MS m/z(ESI)：439.2[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.28(s，1H)，6.79(s，1H)，5.93(s，1H)，4.82(s，2H)，4.71(dd，1H)，4.29(d，2H)，3.75-3.95(m，3H)，3.71-3.74(m，4H)，3.54-3.58(m，2H)，3.23-3.27(m，2H)，1.28(t，6H).
实施例15
5-(6-((R)-3-甲基吗啉)-2-((S)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺
第一步
(R)-4-(6-氯-2-((S)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉
将(R)-4-(2，6-二氯嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉2a(2.48g，10mmol)溶解于20mLN，N-二甲基甲酰胺中，氩气置换三次，冰浴冷却至0℃，加入碳酸钾(2.76g，20mmol)，滴加(S)-3-甲基吗啉(1.50g，15mmol)，升温至99℃下反应18小时。加入150mL乙酸乙酯，有机相用水(50mL×3)和饱和氯化钠溶液(50mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，粗产物用石油醚打浆16小时，得到标题产物(R)-4-(6-氯-2-((S)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉15a(2g，白色固体)，产率：64.0％。
MS m/z(ESI)：313.2[M+1]
第二步
5-(6-((R)-3-甲基吗啉)-2-((S)-3-甲基吗啉)嘧啶-4基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺
将(R)-4-(6-氯-2-((S)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)-3-甲基吗啉15a(2g，6.39mmol)溶解于34mL乙二醇二甲醚中，加入5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺2c(4.60g，15.98mmol)和17mL 2M碳酸钠溶液，搅拌5分钟，氩气置换三次，加入(1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁)二氯化钯(234mg，0.32mmol)，氩气置换三次，于90℃下反应1小时。向反应液中加入100mL乙酸乙酯，有机相用水(50mL×2)和饱和氯化钠溶液(50mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩滤液，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系D纯化所得残余物，粗产物用丙酮和正己烷(V/V＝1∶40)的混合溶剂打浆16小时，得到标题产物5-(6-((R)-3-甲基吗啉)-2-((S)-3-甲基吗啉)嘧啶-4-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-胺15(250mg，白色固体)，产率：8.9％。
MS m/z(ESI)：439.2[M+1]
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.28(s，1H)，6.79(s，1H)，5.93(s，1H)，4.82(s，2H)，4.71(dd，1H)，4.29(d，2H)，3.75-3.95(m，3H)，3.71-3.74(m，4H)，3.54-3.58(m，2H)，3.23-3.27(m，2H)，1.28(t，6H).
测试例：
生物学评价
测试例1、本发明化合物对PI3K激酶活性的测定
体外PI3K激酶活性通过以下的方法进行测试。
本实验使用的PI3K激酶：PI3K-alpha(PI3K-α，Invitrogen，货号PV4788)，PI3K-beta(PI3K-β，Carna，货号11-102)，PI3K-delta(PI3K-，Invitrogen，货号PV 5273)，PI3K-gamma(PI3K-，Invitrogen，货号PV4786)。
以下所述的体外细胞实验可测定受试化合物对PI3K激酶的增殖抑制活性，测试化合物根据实验所需浓度溶解于二甲基亚砜。配制1×缓冲液，每10mL 1×缓冲液加10μLDTT。用1×缓冲液稀释ATP得到10μM ATP溶液。将适量PIP2：PS Lipid底物(Invitrogen，货号PV5100)，PI3K(PI3K-alpha，PI3K-beta，PI3K-delta，PI3K-gamma)酶与1×缓冲液混合。往各EP管中分别加入50μl ATP溶液，1μL测试化合物DMSO溶液(对照和空白中只加1μL纯DMSO)及50μL上述酶-底物混合液(对照中只加50μL 1×缓冲液)。各管充分混匀后，于37℃孵育45分钟后，再于4℃放置10分钟。各测试化合物不同浓度及对照，空白各设2个平行孔。各孔加50μL上述反应体系及50μL Kinase-反应液(购买于Promega，货号V3772)，混合后室温振荡1小时后用BIOTEK FLX800荧光分析仪测定各孔化学发光读值。
本发明化合物的活性
本发明化合物的PI3K激酶(PI3K-α，PI3K-β，PI3K-δ和PI3K-γ)生化抑制活性通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见表1。
表1本发明化合物对PI3K激酶(PI3K-α、PI3K-β、PI3K-δ、PI3K-γ)的活性抑制的IC50
结论：本发明优选化合物对PI3K激酶(PI3K-α)活性具有明显的抑制作用，对PI3K激酶(PI3K-β、PI3K-δ、PI3K-γ)活性的抑制作用较弱，本发明优选化合物对PI3K激酶(PI3K-α)的抑制具有选择性。
本发明优选化合物的不同的异构体对PI3K激酶(PI3K-α)的抑制活性差异较大，实施例3化合物对PI3K-α的抑制活性显著高于实施例2、14和15化合物；同时本发明化合物的吗啉环上的取代基个数对PI3K激酶(PI3K-α)抑制的选择性影响很大，两个吗啉环上均被甲基取代的S构型化合物对PI3K激酶(PI3K-α)抑制的选择性高于只有一个吗啉环被甲基取代的化合物，如实施例3、14和15化合物对PI3K激酶(PI3K-α)抑制的选择性显著强于实施例9化合物。
测试例2、本发明化合物对mTOR激酶的活性抑制的测定
体外mTOR激酶活性的抑制通过以下的方法进行测试。
本实验用K-LISATM mTOR(重组体)活性试剂盒(Activity Kit)，货号：CBA104，购于MERCK。
以下所述的体外细胞实验可测定受试化合物对mTOR激酶的抑制活性，测试化合物根据实验所需浓度溶解于二甲基亚砜中，将底物包被在微孔板上。配制1x缓冲液，用1x缓冲液稀释ATP和DTT得到200μM ATP和2000μM DTT溶液，将适量mTOR酶与1x缓冲液混合，终浓度2ng/μL。向每个微孔板中分别加入50μL ATP和DTT溶液，1μL测试化合物DMSO溶液(对照和空白中只加1μL纯DMSO)及50μL上述酶溶液(对照中只加50μL 1x缓冲液)。各管充分混匀后，于30℃孵育45分钟后，用洗液洗板，控干，重复3次，加入一抗，孵育1小时。用洗液洗板，控干，重复3次，加入二抗，孵育1小时。用洗液洗板，控干，重复3次，加入TMB，显色5～15分钟。加入终止液终止反应。在novostar酶标仪上，以450nm波长测吸光值。化合物的IC50值可通过不同浓度下受试化合物对于mTOR活性的抑制数值计算得出。
本发明化合物的活性
本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见表2。
表2本发明化合物对m-TOR激酶的活性抑制的IC50
结论：本发明优选化合物对mTOR激酶活性的抑制作用较弱。
测试例3、本发明化合物对突变型PI3K-α激酶活性的测定
体外突变型PI3K-α激酶活性通过以下的方法进行测试。
本实验使用的突变型PI3K-α激酶为PI3-Kinase(p110α(H1047R)/p85α)，货号：14-792；PI3 Kinase(p110α(E545K)/p85α)，货号：14-783；PI3-Kinase(p110α(E542K)/p85α)，货号：14-782，均购于millipore公司。
以下所述的体外细胞实验可测定受试化合物对突变型PI3K-α激酶的增殖抑制活性，测试化合物根据实验所需浓度溶解于二甲基亚砜。配制1×缓冲液，每10mL 1×缓冲液加10μL DTT。用1×缓冲液稀释ATP得到10μM ATP溶液。将适量PIP2：PS Lipid底物(Invitrogen，货号PV5100)，突变型PI3K激酶((p110α(H1047R)/p85α)，(p110α(E545K)/p85α)，p110α(E542K)/p85α))酶与1×缓冲液混合。往各EP管中分别加入50μl ATP溶液，1μL测试化合物DMSO溶液(对照和空白中只加1μL纯DMSO)及50μL上述酶-底物混合液(对照中只加50μL 1×缓冲液)。各管充分混匀后，于37℃孵育45分钟后，再于4℃放置10分钟。各测试化合物不同浓度及对照，空白各设2个平行孔。各孔加50μL上述反应体系及50μL Kinase-反应液(购买于Promega，货号V3772)，混合后室温振荡1小时后用BIOTEK FLX800荧光分析仪测定各孔化学发光读值。
本发明化合物的活性
本发明化合物的对突变型PI3K-α激酶生化抑制活性通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见表3。
表3本发明优选化合物对突变型PI3K-α激酶的活性抑制的IC50
结论：本发明优选化合物对突变型PI3K-α激酶活性具有明显的抑制作用。
测试例4、本发明化合物对乳腺癌细胞株MCF-7的增殖抑制测定
下面的体外试验是用来测定本发明化合物对乳腺癌细胞株细胞株-MCF-7的增殖抑制活性。
以下所述的体外细胞试验可测定受试化合物对乳腺癌细胞株的增殖抑制活性，其活性可用IC50值来表示。此类试验的一般方案如下：首先将MCF-7细胞(购于Institute ofbiochemistry and cell biology)以适宜细胞浓度4000个细胞/mL介质接种在96孔培养板上，然后将细胞在二氧化碳恒温箱内37℃进行培养，让它们生长至过夜，更换培养基为加有一系列浓度递度(10000nM、1000nM、100nM、10nM、1nM、0.1nM)受试化合物溶液的培养基，将培养板重新放回培养箱，连续培养72个小时。72小时后，可用CCK8(细胞计算试剂盒8(CellCounting Kit-8)，货号：CK04，购于Dojindo)方法进行测试化合物对于抑制细胞增殖活性。IC50值可通过一系列不同浓度下，受试化合物对于细胞的抑制数值进行计算。
本发明化合物活性本发明化合物生物活性由上述分析所得，计算所得的IC50值如下表4：
表4本发明化合物对MCF-7细胞的增殖抑制的IC50
结论：本发明优选化合物均对MCF-7细胞具有明显的增殖抑制活性。
药代动力学评价
测试例5、本发明实施例3的药代动力学测试
1、摘要
以SD大鼠为受试动物，应用LC/MS/MS法测定了大鼠灌胃给予实施例3化合物后不同时刻血浆中的药物浓度。研究本发明的化合物在大鼠体内的药代动力学行为，评价其药动学特征。
2、试验方案
2.1试验药品
实施例3化合物。
2.2试验动物
健康成年SD大鼠4只，雌雄各半，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，动物生产许可证号：SCXK(沪)2008-0016。
2.3药物配制
称取适量样品，加入0.5％ CMC-Na，超声制成0.5mg/mL混悬液。
2.4给药
SD大鼠4只，雌雄各半，禁食一夜后分别灌胃给药，剂量为5.0mg/kg，给药体积10mL/kg。
3、操作
于给药前及给药后0.5、1、2、4、6、8、11、24、48小时采血0.1mL，置于EDTA抗凝试管中，3500rpm离心10分钟，分离血浆，于-20℃保存。给药后2小时进食。
用LC/MS/MS法测定灌胃给药后大鼠血浆中的待测化合物含量。分析方法的线性范围为1.00-2000ng/mL，定量下限为1.00ng/mL；血浆样品经沉淀蛋白预处理后进行分析。
4、药代动力学参数结果
本发明化合物的药代动力学参数如下：
结论：本发明优选化合物的药代吸收良好，具有明显的药代吸收效果。

Claims (5)

1.一种化合物及其可药用盐，其中所述化合物选自：
2.一种药物组合物，所述药物组合物含有治疗有效量的根据权利要求1所述的化合物及其可药用盐，以及一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。
3.根据权利要求1所述的化合物及其可药用盐或根据权利要求2所述的药物组合物在制备治疗蛋白酪氨酸激酶介导的疾病的药物中的用途。
4.根据权利要求1所述的化合物及其可药用盐或根据权利要求2所述的药物组合物在制备抑制PI3K激酶介导的疾病的药物中的用途。
5.根据权利要求1所述的化合物及其可药用盐或根据权利要求2所述的药物组合物在制备治疗癌症的药物中的用途，其中所述的癌症为乳腺癌。
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