CN104237529A - 一种草鱼白细胞介素1β酶联免疫检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物技术领域，公开了一种草鱼白细胞介素1β(IL-1β)竞争抑制酶联免疫检测试剂盒，它包含如下组分：(1)酶标板；(2)辣根过氧化物酶标记的草鱼白细胞介素1β多克隆抗体浓缩液；(3)样品稀释液；(4)浓缩洗涤液；(5)浓缩包被液；(6)显色底物；(7)终止液；(8)草鱼白细胞介素1β标准品。本发明试剂盒具有操作简单，重现性、准确性和特异性良好，检测线性范围广的特点。

Description

一种草鱼白细胞介素1β酶联免疫检测试剂盒
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种草鱼白细胞介素1β竞争抑制酶联免疫检测试剂盒。 
背景技术
白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)是一种重要的炎症介质和免疫因子，在机体的免疫应答中发挥着广泛的调节作用，如激活T细胞、B细胞和自然杀伤细胞的活性,刺激巨噬细胞分泌细胞因子和前列腺素等炎症介质,此外还可充当神经系统和免疫系统间的传导信号,以监视生理失调和病原入侵。作为潜在的炎症介质和共刺激信号分子,白细胞介素1β可以促进前列腺素(PG)的合成和诱导发热,提高巨噬细胞的吞噬活性,并可调节其它细胞因子的表达。 
草鱼(Ctenopharyngodon idellus)属鲤形目鲤科雅罗鱼亚科草鱼属，是中国淡水养殖的四大家鱼之一，具有重要的经济价值。但草鱼抗病力和成活率较低，易患出血病、烂鳃病、赤皮病和肠炎病等，加之高密度养殖增加了水产动物之间病原体交叉感染的机会，使病害日益加剧，因此研究草鱼免疫系统的各类免疫反应及其机制十分必要。白细胞介素1β在草鱼免疫反应中具有广泛生物学活性，对免疫系统的调控发挥着必不可少的作用。但是，目前草鱼白细胞介素1β的分泌检测方法并没建立，主要因为草鱼白细胞介素1β与哺乳动物、两栖动物的白细胞介素1β分子结构差异较大，不能用其他物种的白细胞介素1β抗体来识别草鱼鱼白细胞介素1β。 
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种草鱼白细胞介素1β酶联免疫检测试剂盒。本发明还提供了该试剂盒的使用方法和用途。 
本发明利用重组表达的草鱼白细胞介素1β作为抗原包被酶标板以及免疫健康白兔制备多克隆抗体，再用辣根过氧化物酶(HRP)标记该多克隆抗体，然后加入经孵育后的待测样品和HRP标记的多克隆抗体混合液，让酶标板上重组草鱼白细胞介素1β与样品中的草鱼白细胞介素1β竞争结合抗体，通计算抑制率来检测样品中草鱼白细胞介素1β含量。 
本发明提供了一种草鱼白细胞介素1β酶联免疫检测试剂盒，它包含如下组分：(1)96孔可拆卸的酶标板；(2)辣根过氧化物酶标记的草鱼白细胞介素1β多克隆抗体浓缩液；(3)样品稀释液；(4)浓缩洗涤液；(5)浓缩包被液；(6)显色物底物；(7)终止液；(8)草鱼白细胞介素1β标准品。 
其中，上述草鱼白细胞介素1β多克隆抗体是以重组草鱼白细胞介素1β蛋白为抗原，免疫新西兰大白兔并利用多克隆抗体制备与纯化技术获得抗草鱼白细胞介素1β多克隆抗体，该抗体可与草鱼白细胞介素1β特异的结合。 
进一步地，上述重组草鱼白细胞介素1β蛋白是通过将草鱼IL-1β基因序列克隆到原核表达载体pET-30a(+)中，构建重组原核表达载体，并将此载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达所得(周红、杨潇、汪新艳，一种草鱼白细胞介素1β基因和蛋白及其重组表达方法，中国专利申请号：201010221742.9)。 
其中，上述辣根过氧化物酶标记的草鱼白细胞介素1β多克隆抗体为采用马来酰亚胺活化的辣根过氧化物酶标记试剂盒(购自上海西宝生物科技有限公司，货号：AZK0012A)标记的草鱼白细胞介素1β多克隆抗体。 
优选地，上述多克隆抗体的浓度为5mg/ml。 
其中，上述样品稀释液为含0.2％牛血清白蛋白(BSA)的洗涤液，每升稀释液中含KH2PO40.2g，Na2HPO42.9g，NaCl8.0g，BSA2.0g，吐温-200.5ml，PH7.4； 
其中，上述浓缩洗涤液为含0.5％吐温-20的0.2M磷酸盐缓冲液，每升浓缩洗涤液中含KH2PO42.0g，Na2HPO429.0g，NaCl80.0g，吐温-205.0ml，PH7.4； 
其中，上述浓缩包被液为0.5M的碳酸盐缓冲液，每升浓缩包被液中含NaCO315.9g，NaHCO329.3g，PH9.6。 
其中，显色物底物TMB为可溶型单组分TMB底物溶液(购自天根生化科技有限公司，货号:PA107-02)。 
其中，上述终止液为2M硫酸溶液。 
其中，上述草鱼白细胞介素1β标准品为按1mg每管分装的重组草鱼白细胞介素1β蛋白。 
本发明还提供了上述试剂盒的使用方法，它包括如步骤： 
(1)包被：将浓缩包被液稀释10倍即为包被液，以包被液将重组草鱼白细胞介素1β蛋白稀释至2μg/mL，根据待检样品数量，按100μl每孔加入酶标板孔中，4℃孵育过夜后甩干孔内液体，每孔加入洗涤液300μl，洗涤3次，每次3分钟。 
(2)封闭：将浓缩洗涤液稀释10倍即为洗涤液，用洗涤液溶解5％脱脂奶粉、0.3％BSA即为封闭液，每孔加入封闭液300μl，室温封闭两小时后，甩干，每孔加入洗涤液300μl，洗涤3次，每次3分钟。 
(3)酶标抗体与抗原的孵育：用样品稀释液将重组草鱼白细胞介素1β蛋白分别稀释到1ng/mL、2.5ng/mL、5ng/mL、7.5ng/mL、10ng/mL、15ng/mL作为标准品，样品稀释液作为阴性对照，分别取标准品50μl、待测样品50μl、样品稀释液50μl与50μl适当稀释的辣根过氧化物酶标记的草鱼白细胞介素1β多克隆抗体混匀后室温孵育2小时；待酶标板封闭、洗涤后，加入上述抗原抗体混合液，室温孵育2小时。 
(4)显色：甩干孔内液体，每孔加入洗涤液300μl，洗涤5次，每次3分钟。洗涤后甩干孔内液体，然后每孔加入100μl显色底物TMB，37℃反应30分钟后每孔加入50μl 2MH2SO4终止反应。 
(5)读数、结果处理：采用酶标仪在450nm波长下读取吸光度值，根据所得数据计算样品抑制率，样品抑制率％＝(阴性对照吸光值-标准品或待测样品吸光值)/阴性样品吸光值×100％，最后以标准品抑制率为纵坐标，标准品浓度的对数为横坐标制作标准曲线，通过标准曲线求出待测样品中草鱼白细胞介素1β的浓度。 
本发明进一步提供了上述试剂盒在制备草鱼免疫调节功能检测试剂中的用途。 
本发明以重组草鱼白细胞介素1β蛋白作为抗原，建立了检测草鱼白细胞介素1β的ELISA方法，为检测草鱼血清或细胞培养上清中白细胞介素1β的蛋白表达水平提供了快速高效的检测手段，该法稳定可靠，且成本较低。 
附图说明
图1草鱼白细胞介素1βELISA检测的标准曲线。 
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。 
实施例1本发明试剂盒的组成及其使用方法 
1.本发明试剂盒的组成 
(1)96孔可拆卸酶标板； 
(2)辣根过氧化物酶标记的草鱼白细胞介素1β多克隆抗体浓缩液； 
(3)样品稀释液：含0.2％牛血清白蛋白(BSA)的洗涤缓冲液，每升稀释缓冲液中含KH2PO40.2g，Na2HPO42.9g，NaCl8.0g，BSA2.0g，吐温-200.5ml，PH7.4； 
(4)浓缩洗涤液：含0.5％吐温-20的0.2M磷酸盐缓冲液，每升浓缩洗涤液中含KH2PO42.0g，Na2HPO429.0g，NaCl80.0g，吐温-205.0ml，PH7.4； 
(5)浓缩包被液：0.5M的碳酸盐缓冲液，每升浓缩包被液中含NaCO315.9g，NaHCO329.3g，PH9.6； 
(6)显色底物：可溶型单组分TMB底物溶液； 
(7)终止液：2M硫酸溶液； 
(8)草鱼白细胞介素1β标准品：按1mg每管分装的重组草鱼白细胞介素1β蛋白。商品化的试剂盒组成见表1： 
表1 本发明试剂盒的主要组分 
2.本发明试剂盒的制备方法 
(1)免疫原的制备 
将草鱼白细胞介素1β基因序列克隆到原核表达载体pET-30a(+)中，构建重组原核表达载体，并将此载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，经1mM IPTG诱导表达重组蛋白白细胞介素1β，该蛋白主要以可溶形式表达，采用Ni2+亲和层析和凝胶过滤层析纯化得到重组草鱼白细胞介素1β蛋白(周红、杨潇、汪新艳，一种草鱼白细胞介素1β基因和蛋白及其重组表达方法，中国专利申请号：201010221742.9)。 
(2)草鱼白细胞介素1β多克隆抗体的制备 
选取4只2月龄、体重1.5-2kg的健康新西兰大白兔，雌雄各半，每两只为一个实验组，将免疫原用生理盐水溶解，配成2mg/mL的溶液后与等量的完全弗氏佐剂混合用搅拌法将其乳化，乳化直至将一滴乳剂滴入水中不散开漂在水面上为止。初次免疫将乳化好的试剂于兔子背部多点注射，每只注射1mL。初次免疫后进行4次加强免疫,加强免疫用弗氏不完全佐剂乳化，加强免疫用肌肉注射，每隔10天加强免疫一次，剂量与初次免疫相同。最后一次加强免疫后从耳缘静脉才却，采用直接酶联免疫法测定抗体效价，确定抗体效价可用后耳静脉和心脏同时放血获得抗血清，收集于50mL离心管中。将此抗血清经过高速离心并过滤后进行纯化，最后将抗体保存在含有50％甘油、0.05％NaN3的PBS溶液中，-20℃冷冻保存。 
(3)草鱼白细胞介素1β多克隆抗体的辣根过氧化物酶标记 
采用马来酰亚胺活化的辣根过氧化物酶标记试剂盒(购自上海西宝生物科技有限公司，货号：AZK0012A)标记的草鱼白细胞介素1β多克隆抗体，酶标抗体的终浓度为5mg/ml。 
(4)样品稀释液、洗涤液、终止液的配制 
所述样品稀释液为含0.2％牛血清白蛋白(BSA)和0.05％吐温-20的0.02M磷酸盐缓冲液，称取KH2PO40.2g，Na2HPO42.9g，NaCl8.0g，BSA2.0g，去离子水溶解，定容至1000ml,pH7.4，再加0.5ml吐温-20； 
所述浓缩洗涤液为含0.5％吐温-20的0.2M磷酸盐缓冲液，称取KH2PO42.0g，Na2HPO429.0g，NaCl80.0g，去离子水溶解，定容至1000ml，pH7.4，再加5ml吐温-20； 
终止液为2M硫酸溶液，即量取111.2ml浓硫酸，去离子水稀释，定容至1000ml。 
(5)酶标多抗稀释度的确定 
经过棋盘滴定法确定辣根过氧化物酶标记的草鱼白细胞介素1β多克隆抗体的最适稀释倍数。 
3.本发明试剂盒的检测方法 
(1)包被：将浓缩包被液稀释10倍即为包被液，以包被液将重组草鱼白细胞介素1β蛋白稀释至2μg/mL，根据待检样品数量，按100μl每孔加入酶标板孔中，4℃孵育过夜后甩干孔内液体，每孔加入洗涤液300μl，洗涤3次，每次3分钟。 
(2)封闭：将浓缩洗涤液稀释10倍即为洗涤液，用洗涤液溶解5％脱脂奶粉、0.3％BSA即为封闭液，每孔加入封闭液300μl，室温封闭两小时后，甩干，每孔加入洗涤液300μl，洗涤3次，每次3分钟。 
(3)酶标抗体与抗原的孵育：用样品稀释液将重组草鱼白细胞介素1β蛋白分别稀释到1ng/mL、2.5ng/mL、5ng/mL、7.5ng/mL、10ng/mL、15ng/mL作为标准品，样品稀释液作为阴性对照，待测样品可以为草鱼血清或草鱼细胞培养物的上清，并可根据需要用样品稀释液进行稀释；分别取标准品50μl、待测样品50μl、样品稀释液50μl与50μl适当稀释的辣根过氧化物酶标记的草鱼白细胞介素1β多克隆抗体混匀后室温孵育2小时；待酶标板封闭、洗涤后，加入上述抗原抗体混合液，室温孵育2小时。 
(4)显色：甩干孔内液体，每孔加入洗涤液300μl，洗涤5次，每次3分钟。洗涤后甩干孔内液体，然后每孔加入100μl显色底物TMB，37℃反应30分钟后每孔加入50μl 2MH2SO4终止反应。 
(5)读数、结果处理：采用酶标仪在450nm波长下读取吸光度值，根据所得数据计算样品抑制率(样品抑制率％＝(阴性对照吸光值-标准品或待测样品吸光值)/阴性样品吸光值×100％)，最后以标准品抑制率为纵坐标，标准品浓度的对数为横坐标制作标准曲线，通过标准曲线求出待测样品中草鱼白细胞介素1β的浓度。 
实施例2本发明试剂盒可靠性的验证 
1.本发明试剂盒的线性范围检测 
(1)方法：将配好的重组草鱼白细胞介素1β标准系列溶液(0、0.4、2、10、50、100ng/ml)按上述ELISA检测方法进行检测，计算各浓度的抑制率。以抑制率为纵坐标，重组草鱼白细胞介素1β溶液浓度的对数为横坐标，绘制出标准抑制曲线。 
(2)结果：竞争ELISA结果及相关参数见表2，标准抑制曲线见图1，可见在0.4-100ng/m1范围内，本发明试剂盒具有良好的线性。 
表2 竞争抑制ELISA结果的相关参数 
(3)结论：本发明试剂盒试剂盒具有良好的线性范围。 
2.本发明试剂盒结果重现性的检测 
(1)方法：以浓度分别为70、5、1ng/ml的草鱼白细胞介素1β溶液检验试剂盒的精密度测试，批间重复6次。 
(2)结果：如表3所示，不同浓度标准溶液的吸光值变异系数(CV％)均小于10％，最大为7.4％。 
表3 不同浓度标准溶液的吸光值变异系数(n＝6) 
(3)结论：本发明试剂盒检测结果变异系数小，结果重现性好。 
3.本发明试剂盒结果准确性检测 
(1)方法：通过计算加标回率来测试草鱼白细胞介素1β检验试剂盒的准确性，取空白细胞培养基加入不同量的重组草鱼白细胞介素1β，进行ELISA检测，计算加标回收率。 
(2)结果：见表4， 
表4 样品加标回收率 
(3)结论：本发明试剂盒结果准确性高。 
4.本发明试剂盒特异性的检测 
(1)方法：为验证该试剂盒的特异性，针对重组草鱼白细胞介素1β、重组草鱼干扰素γ、重组草鱼白细胞介素10、重组草鱼肿瘤坏死因子α、牛血清白蛋白进行ELISA特异性交叉反应测试。 
(2)结果：见表5，本发明试剂盒与目标蛋白的交叉反应率为100％，与其他蛋白的交叉反应率均小于0.05％。 
表5 重组草鱼白细胞介素1β与其它蛋白的交叉反应 
(3)结论：本发明试剂盒特异性好。 
综上：本发明试剂盒操作简单，重现性、准确性和特异性良好，检测线性范围广。 
本领域的普通技术人员将会意识到，这里所述的实施例是为了帮助读者理解本发明的原理，应被理解为发明的保护范围并不局限于这样的特别陈述和实施例。凡是根据上述描述做出各种可能的等同替换或改变，均被认为属于本发明的权利要求的保护范围。 

Claims (7)

1.一种草鱼白细胞介素1β酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：它包含如下组分： 
(1)酶标板； 
(2)辣根过氧化物酶标记的草鱼白细胞介素1β多克隆抗体浓缩液； 
(3)样品稀释液； 
(4)浓缩洗涤液； 
(5)浓缩包被液； 
(6)显色底物； 
(7)终止液； 
(8)草鱼白细胞介素1β标准品。 
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述草鱼白细胞介素1β多克隆抗体由如下方法制备： 
(1)以重组草鱼白细胞介素1β蛋白为抗原，免疫新西兰大白兔； 
(2)利用多克隆抗体制备与纯化技术获得抗草鱼白细胞介素1β多克隆抗体。 
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述辣根过氧化物酶标记的草鱼白细胞介素1β多克隆抗体是由马来酰亚胺活化的辣根过氧化物酶标记的草鱼白细胞介素1β多克隆抗体。 
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述多克隆抗体的浓度为5mg/ml。 
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于： 
所述样品稀释液为含0.2％牛血清白蛋白的洗涤液，每升稀释液中含KH2PO40.2g，Na2HPO42.9g，NaCl8.0g，牛血清白蛋白2.0g，吐温-200.5ml，PH7.4； 
所述浓缩洗涤液为含0.5％吐温-20的0.2M磷酸盐缓冲液，每升浓缩洗涤液中含KH2PO42.0g，Na2HPO429.0g，NaCl80.0g，吐温-205.0ml，PH7.4； 
所述浓缩包被液为0.5M的碳酸盐缓冲液，每升浓缩包被液中含NaCO315.9g，NaHCO329.3g，PH9.6； 
所述显色物底物为可溶型单组分TMB底物溶液； 
所述终止液为2M硫酸溶液； 
所述草鱼白细胞介素1β标准品为按1mg每管分装的重组草鱼白细胞介素1β蛋白。 
6.权利要求1-5任意一项所述试剂盒的使用方法，其特征在于：它包含如下步骤： 
(1)包被：将浓缩包被液稀释10倍即为包被液，以包被液将重组草鱼白细胞介素1β蛋白稀释至2μg/mL，根据待检样品数量，按100μl每孔加入酶标板孔中，4℃孵育过夜后甩干孔内液体，每孔加入洗涤液300μl，洗涤3次，每次3分钟。 
(2)封闭：将浓缩洗涤液稀释10倍即为洗涤液，用洗涤液溶解5％脱脂奶粉、0.3％牛血清白蛋白即为封闭液，每孔加入封闭液300μl，室温封闭两小时后，甩干，每孔加入洗涤液300μl，洗涤3次，每次3分钟。 
(3)酶标抗体与抗原的孵育：用样品稀释液将重组草鱼白细胞介素1β蛋白分别稀释到1ng/mL、2.5ng/mL、5ng/mL、7.5ng/mL、10ng/mL、15ng/mL作为标准品，样品稀释液作为阴性对照；分别取各浓度的标准品50μl、待测样品50μl、样品稀释液50μl与50μl适当稀释的辣根过氧化物酶标记的草鱼白细胞介素1β多克隆抗体混匀后室温孵育2小时；待酶标板封闭、洗涤后，加入上述抗原抗体混合液，室温孵育2小时。 
(4)显色：甩干孔内液体，每孔加入洗涤液300μl，洗涤5次，每次3分钟；洗涤后甩干孔内液体，然后每孔加入100μl显色底物TMB，37℃反应30分钟后每孔加入50μl 2MH2SO4终止反应。 
(5)读数、结果处理：采用酶标仪在450nm波长下读取吸光度值；根据所得数据计算样品抑制率，样品抑制率％＝(阴性对照吸光值-标准品或待测样品吸光值)/阴性样品吸光值×100％；最后以标准品抑制率为纵坐标，标准品浓度的对数为横坐标制作标准曲线，通过标准曲线求出待测样品中草鱼白细胞介素1β的浓度。 
7.权利要求1-5任意一项所述的试剂盒在制备草鱼免疫调节功能检测试剂中的用途。 
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107118275A (zh) * 2017-07-03 2017-09-01 苏州大学 一种抗鱼类IL‑1β卵黄抗体及其制备方法
CN109752561A (zh) * 2019-01-23 2019-05-14 日照岚山生化制品有限公司 一种猪松弛素的酶联免疫检测试剂盒
CN111273028A (zh) * 2020-02-25 2020-06-12 芜湖天明生物技术有限公司 rhTSG-6直接竞争ELISA法定量检测试剂盒及其使用方法和应用
CN113267629A (zh) * 2021-05-13 2021-08-17 广东优尼德生物科技有限公司 一种抗核抗体谱检测试剂盒及其制备方法
CN114280306A (zh) * 2021-05-27 2022-04-05 中国农业科学院植物保护研究所 牛筋草epsps蛋白elisa检测试剂盒及检测方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101892241A (zh) * 2010-07-09 2010-11-24 电子科技大学 一种草鱼白细胞介素1β基因和蛋白及其重组表达方法
CN102608332A (zh) * 2012-03-22 2012-07-25 电子科技大学 一种草鱼白细胞介素10酶联免疫检测方法
JP2013051909A (ja) * 2011-09-02 2013-03-21 Univ Of Miyazaki サイトカイン遺伝子を利用したマルチプレックスｒｔ−ｐｃｒによる魚類健康診断法
CN102998457A (zh) * 2012-07-12 2013-03-27 电子科技大学 草鱼肿瘤坏死因子alpha的竞争抑制酶联免疫检测方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101892241A (zh) * 2010-07-09 2010-11-24 电子科技大学 一种草鱼白细胞介素1β基因和蛋白及其重组表达方法
JP2013051909A (ja) * 2011-09-02 2013-03-21 Univ Of Miyazaki サイトカイン遺伝子を利用したマルチプレックスｒｔ−ｐｃｒによる魚類健康診断法
CN102608332A (zh) * 2012-03-22 2012-07-25 电子科技大学 一种草鱼白细胞介素10酶联免疫检测方法
CN102998457A (zh) * 2012-07-12 2013-03-27 电子科技大学 草鱼肿瘤坏死因子alpha的竞争抑制酶联免疫检测方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PABLO PELEGRIN,ET AL: "Production and mechanism of secretion of interleukin-1β from the marine fish gilthead seabream", 《DEVELOPMENTAL AND COMPARATIVE IMMUNOLOGY》 *
何江帅等: "鲤鱼白细胞介素-1β全长cDNA的克隆？鉴定及其差异表达分析", 《安徽农业科学》 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107118275A (zh) * 2017-07-03 2017-09-01 苏州大学 一种抗鱼类IL‑1β卵黄抗体及其制备方法
CN107118275B (zh) * 2017-07-03 2020-06-12 苏州大学 一种抗鱼类IL-1β卵黄抗体及其制备方法
CN109752561A (zh) * 2019-01-23 2019-05-14 日照岚山生化制品有限公司 一种猪松弛素的酶联免疫检测试剂盒
CN111273028A (zh) * 2020-02-25 2020-06-12 芜湖天明生物技术有限公司 rhTSG-6直接竞争ELISA法定量检测试剂盒及其使用方法和应用
CN113267629A (zh) * 2021-05-13 2021-08-17 广东优尼德生物科技有限公司 一种抗核抗体谱检测试剂盒及其制备方法
CN113267629B (zh) * 2021-05-13 2022-06-24 广东优尼德生物科技有限公司 一种抗核抗体谱检测试剂盒及其制备方法
CN114280306A (zh) * 2021-05-27 2022-04-05 中国农业科学院植物保护研究所 牛筋草epsps蛋白elisa检测试剂盒及检测方法
CN114280306B (zh) * 2021-05-27 2023-05-05 中国农业科学院植物保护研究所 牛筋草epsps蛋白elisa检测试剂盒及检测方法

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