CN104232518A

CN104232518A - 一种蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN104232518A
Application number: CN201410428209.8A
Authority: CN
Inventors: 程水源; 李琳玲; 王燕; 程华; 华娟; 袁红慧; 张雪花; 黄小花
Original assignee: Wuhan Polytechnic University
Current assignee: Wuhan Polytechnic University
Priority date: 2014-08-27
Filing date: 2014-08-27
Publication date: 2014-12-24
Anticipated expiration: 2034-08-27
Also published as: CN104232518B

Abstract

本发明涉及微生物领域，特别涉及一种蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂及其制备方法和应用。一种蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂，包含以下组分：按重量百分比计，蜡样芽孢杆菌冻干粉50-70％，助剂8-12％，稳定剂0.5-1.5％，紫外保护剂0.05-0.15％，余量为载体。通过以下方法制备：将各组分混合均匀，粉碎，制得目数不大于150目的粉剂，整个制备过程中温度保持在0～45℃。本发明提供的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂，对板栗等果实储藏过程中常见的真菌病害，如栗疫菌、黑葡萄穗霉、腐皮镰刀菌、扩展青霉、炭疽菌和黑曲霉等具有较好的抑制作用，对人畜无毒，成本低；能够很好的解决板栗室温贮藏问题，降低储藏成本。

Description

一种蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及微生物领域，具体而言，涉及一种蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂及其制备方法和应用。

背景技术

板栗，俗称“铁杆庄稼”，是我国重要的木本粮食树种之一。然而，板栗贮藏期间极易发生腐变，生产中常采取化学抑菌剂处理后低温冷藏等方式进行贮藏；其贮藏成本高，并且化学试剂的使用对人类健康及环境存在安全隐患。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂及其制备方法和应用，以解决上述的问题。

在本发明的实施例中提供的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)，2014年4月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCM 2014112，保藏名称为蜡样芽孢杆菌CE-D10.3.2，保藏地址为：中国，武汉，武汉大学，邮编：430072。

本发明实施例提供的一种蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂，包含以下组分：按重量百分比计，蜡样芽孢杆菌冻干粉50-70％，助剂8-12％，稳定剂0.5-1.5％，紫外保护剂0.05-0.15％，余量为载体。

优选地，所述蜡样芽孢杆菌冻干粉通过以下方法制备：

(a)、将所述蜡样芽孢杆菌培养至对数生长期，得到种子液；

(b)、将所述种子液以体积百分数为1～5％的接种量接种于种子罐中，所述种子罐的培养条件为：通气比1:0.9-1.1，搅拌转速150～200r/min，温度35～37℃，罐压0.015-0.020MPa，培养至活菌含量为1～3×10⁹cfu/ml，得到菌悬液；

(c)、在所述菌悬液中加入冷冻保护剂后放置于-75～-85℃超低温冰箱预冻2.5-3.5h；然后在-55～-65℃，真空度为95-105Pa，冻干20-30h；然后在0～45℃进行粉碎，得到所述蜡样芽孢杆菌冻干粉。

优选地，所述载体为白炭黑、轻质碳酸钙、硅藻土中的任一种。

优选地，所述分散剂为木质素磺酸钠、烷基萘磺酸缩聚物钠盐中的任一种；所述助剂包括润湿剂和分散剂，所述润湿剂为MorwetEFW和茶皂素中的任一种。

优选地，所述分散剂为木质素磺酸钠，所述润湿剂为MorwetEFW，且所述木质素磺酸钠与所述Morwet EFW的重量比为3：7～6:4。

优选地，所述稳定剂为碳酸钙或磷酸氢二钾。

优选地，所述紫外保护剂为β-环糊精。

本发明的实施例还提供了蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法，将各组分混合均匀，粉碎，制得目数不大于150目的粉剂，整个制备过程中温度保持在0～45℃。

本发明还提供了蜡样芽孢杆菌在贮藏保鲜中的应用。

本发明还提供了蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂在贮藏保鲜中的应用。

本发明实施例中提供的蜡样芽胞杆菌是由板栗坚果中分离筛选而来，属于板栗内生菌，对人畜及环境无害；本发明实施例中提供的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂，对板栗等果实储藏过程中常见的真菌病害，如栗疫菌、黑葡萄穗霉、腐皮镰刀菌、扩展青霉、炭疽菌和黑曲霉等具有较好的抑制作用，对人畜无毒，成本低；能够很好的解决板栗室温贮藏问题，降低储藏成本。本发明的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂在生产中没有用到有机溶剂，降低了生产过程中和产品中的污染，不会产生溶剂中毒；不会造成对人类健康的危害，以及对环境的污染等问题，具有重要的环保意义。

附图说明

图1示出了本发明实施例3中各载体、润湿剂及分散剂与蜡样芽胞杆菌CE-D10.3.2相容性检测数据的柱状图。

具体实施方式

下面通过具体的实施例子并结合附图对本发明做进一步的详细描述。

实施例1

蜡样芽孢杆菌的筛选

蜡样芽孢杆菌CE-D10.3.2是从湖北省罗田县耐储藏板栗品种“玫瑰红”坚果中通过分离、纯化以及筛选步骤获得的。

采用形态特征、生理生化实验确定为蜡样芽胞杆菌，通过分子生物学鉴定法16S rDNA同源序列比对，比对结果为同源性为100％，最终确定该菌株为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)。

实施例2

蜡样芽孢杆菌冻干粉的制备

(1)蜡样芽孢杆菌CE-D10.3.2接种到灭菌的LB液体培养基中，37℃，100～120r/min条件下振荡培养至对数生长期，得到种子液，LB液体培养基配方为：胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化钠10g/L，pH＝7.4～7.6；

(2)将种子液按照1～5％(V/V)％的接种量，接种于种子罐中，种子罐中的培养基为通步骤(1)的LB液体培养基，在以下条件下进行培养：通气比1:0.9-1.1，搅拌转速150～200r/min，温度35～37℃，罐压0.015-0.020MPa，培养时间为46～48h，得到活菌含量为1～3×10⁹cfu/mL的菌悬液；

(3)在菌悬液中加入5％的甘油冷冻保护剂后，放置于-75～-85℃超低温冰箱预冻2.5-3.5h；然后在-55～-65℃，真空度为95-105Pa，冻干20-30h；控制低温(0～45℃)在气流粉碎机中粉碎后，即得蜡样芽孢杆菌冻干粉，将其置于4℃保存，若长期保存需要真空密封。制得的蜡样芽孢杆菌冻干粉中含菌量≥10¹⁰cfu/g，活菌率≥85％。

实施例3

蜡样芽胞杆菌可湿性粉剂的制备及优化

1.各载体、润湿剂及分散剂与蜡样芽胞杆菌CE-D10.3.2相容性检测

将载体(白炭黑、轻质碳酸钙、硅藻土、膨润土、高岭土、玉米粉、滑石粉，细度均通过325目筛)，润湿剂(十二烷基硫酸钠、烷基奈磺酸盐、茶皂素、十二烷基苯磺酸钠)，及分散剂(木质素磺酸钠、聚乙烯醇、烷基萘磺酸缩聚物钠盐、六偏磷酸钠、羧甲基纤维素纳)各按照5％的比例分别加入100mL LB液体培养基中(胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化钠10g/L，pH＝7.4～7.6)混匀，灭菌后接入1mL蜡样芽胞杆菌CE-D10.3.2种子液，37℃，100～120r/min条件下振荡培养24h。以不加载体、润湿剂及分散剂的培养液作为对照，每处理重复3次，采用平板菌落计数法，测定培养液中菌体含量，以此考察各组分对CE-D10.3.2的生物相容性。

以不加载体的培养液作为对照，每个处理重复3次，采用平板菌落计数法，测定培养液中菌体含量，以此鉴定各组分对蜡样芽胞杆菌CE-D10.3.2的生物相容性。得到的结果如图1所示。

从图1可以看出，膨润土、滑石粉、十二烷基硫酸钠和羧甲基纤维素纳对蜡样芽胞杆菌CE-D10.3.2的菌体生长影响较大，与对照相比，添加上述物质后，菌体生长率下降大于40％，其它物质成分对菌体的生物相容性较高。

对润湿剂来说：烷基奈磺酸盐、茶皂素和十二烷基苯磺酸钠与蜡样芽胞杆菌CE-D10.3.2相容性较好。

对分散剂来说：木质素磺酸钠、聚乙烯醇、烷基萘磺酸缩聚物钠盐和六偏磷酸钠与蜡样芽胞杆菌CE-D10.3.2相容性较好。

去除对菌体生长量影响较大(与对照相比生长量下降大于40％)的载体和助剂，使用其余材料进行后续优化试验。

2.载体的筛选

选择上述检测对蜡样芽胞杆菌CE-D10.3.2的生物相容性较高的载体物质：白炭黑、轻质碳酸钙、硅藻土、高岭土、玉米粉分别与蜡样芽胞杆菌CE-D10.3.2冻干原粉按照4：6的质量比进行混合均匀，以不含载体的冻干原粉为对照，分别在室温中贮藏15d后测定菌体存活率及悬浮率，筛选出最适载体。结果如表1所示。

表1载体对蜡样芽胞杆菌CE-D10.3.2菌体生长的影响

从表1可以看出，白炭黑、轻质碳酸钙、硅藻土、高岭土、玉米粉对蜡样芽胞杆菌CE-D10.3.2的菌体生长影响较较小，与菌体的生物相容性较高；其中，考虑到悬浮率和存活率，优选地，所述载体为白炭黑、轻质碳酸钙、硅藻土中的任一种。其中，以硅藻土最佳。

3.润湿剂和分散剂的筛选以及其最佳配比的筛选

3.1润湿剂和分散剂的筛选

将本实施例1中初步确定的与菌株生物相容性较好的润湿剂：烷基奈磺酸盐(Morwet EFW)、茶皂素、十二烷基苯磺酸钠分别与蜡样芽孢杆菌冻干粉、硅藻土按照60：30：10的质量比例混合均匀，测定各制剂的悬浮率和润湿时间，得到表2。悬浮率越高，分散性越好，润湿时间越短，润湿性越好，以此来选择最佳的润湿剂和分散剂组合。

表2润湿剂对制剂性质的影响

从表2中可以看出，Morwet EFW的悬浮率最高，且润湿时间最短，因此，优选Morwet EFW作为制剂的润湿剂。

将本实施例1中初步确定的与菌株生物相容性较好的分散剂：木质素磺酸钠、聚乙烯醇、烷基萘磺酸缩聚物钠盐(Morwet D-425)、六偏磷酸钠分别与冻干原粉、硅藻土按照60：30：10的质量比例混合均匀，测定各制剂的悬浮率和润湿时间，得到表3。悬浮率越高，分散性越好，润湿时间越短，润湿性越好，以此来选择最佳的润湿剂和分散剂组合。

表3分散剂对制剂性质的影响

分散剂	悬浮率(％)	润湿时间(s)
			木质素磺酸钠	80.64	72.51
聚乙烯醇	68.23	83.45
			Morwet D-425	86.49	102.36
六偏磷酸钠	70.43	86.80

从表3中可以看出，以烷基萘磺酸缩聚物钠盐作为分散剂，虽然制剂的悬浮率最高，达到86.49％，但其润湿时间却高达102.36s，说明其润湿性较差。与之相比，木质素磺酸钠的悬浮率虽然下降了5.85％，但是其润湿时间仅为72.51s。

可湿性粉剂的润湿性和分散性是两个相互依存的指标，并且一部分润湿剂还具有一定的分散作用，而部分分散剂也具有一定的润湿作用；因此，在筛选润湿剂和分散剂时需综合考虑悬浮率和润湿时间指标。因此，优选木质素磺酸钠作为制剂的分散剂。

通过上述综合考虑，最终选择木质素磺酸钠和Morwet EFW分别作为分散剂和润湿剂进行复配。

3.2润湿剂和分散剂最佳配比的筛选

将分散剂(木质素磺酸钠)与润湿剂(Morwet EFW)分别按质量比1:9、2:8、3:7、4:6、5:5、6:4、7:3、8:2、9:1的比例混合均匀后，分别与冻干原粉、硅藻土按照60：30：10的质量比例混合均匀，测定各制剂的悬浮率和润湿时间，结果如表4所示。

表4木质素磺酸钠和Morwet EFW最佳配比的筛选

配比	悬浮率(％)	润湿时间(s)
			1:9	68.47	37.34
2:8	72.35	39.75
			3:7	79.23	43.82
4:6	81.69	50.17
			5:5	84.25	62.42
6:4	86.37	68.57
			7:3	89.42	74.55
8:2	92.55	80.36
			9:1	95.78	93.44

从表4可以看出，随着分散剂比重的增加，悬浮率越来越高，但是随之润湿时间也越长。优选地，木质素磺酸钠和Morwet EFW的重量比为3：7-6:4时，其悬浮率达到79％以上，润湿时间为43-69s之间。更优选地，木质素磺酸钠和Morwet EFW的重量比为4:6时，润湿时间可控制在1min之内，悬浮率控制在80％以上，制剂的悬浮率与润湿时间的综合效果好。

4.稳定剂筛选

在已筛选得到的分散剂、润湿剂以及载体配方的基础上，将重量百分数为1％的三种稳定剂CaCO₃、黄原胶、K₂HPO₄分别添加进去，然后混合均匀，将其分别在54℃下贮藏15d；同时，以不添加稳定剂作为对照(CK)。利用稀释平板法测定各制剂的菌体分解率、悬浮率以及润湿时间，得到表5。

表5稳定剂对制剂性质的影响

稳定剂	菌体分解率(％)	悬浮率(％)	润湿时间(s)
				CaCO₃	6.14	75.29	67.48
黄原胶	10.03	64.36	71.29
				K₂HPO₄	4.87	82.23	56.21
CK	28.52	51.47	150.15

从表5可以看出，碳酸钙和磷酸氢二钾的菌体分解率低于10％，悬浮率大于75％，润湿时间在55-70之间，优选地，所述稳定剂为碳酸钙或磷酸氢二钾。其中，磷酸氢二钾的菌体分解率为4.87％，悬浮率大于80％，润湿时间小于60s，说明磷酸氢二钾可以有效的减少热贮环境下蜡样芽孢杆菌的分解，并且同时制剂的悬浮率和润湿时间并未受较大影响，更优选地，所述稳定剂为磷酸氢二钾。

此外，添加适量的稳定剂，不但能减少制剂在贮存期间有效成分的分解，还能增强其黏度，防止有效成分的沉降。

5.紫外保护剂的筛选

考虑到太阳中的紫外线会威胁、杀死活菌体，因此，紫外保护剂的添加在可湿性粉剂的制备中是非常必要的。在筛选到的稳定剂、助剂以及载体的基础上，分别加入重量百分数为0.1％的紫外光保护剂，将其稀释后分别涂布在平板上，置于距离紫外灯(20W)30cm处照射24h、48h，同时以不加紫外(UV)保护剂作为对照(CK)，利用稀释平板法测算菌体分解率，选择最佳紫外光保护剂。

表6 UV保护剂对制剂性质的影响

从表6中可以看出，制剂中添加β-环糊精作为紫外保护剂，紫外照射处理24h和48h后菌体分解率均最低，因此，优选β-环糊精作为紫外保护剂。

本实施例中，菌体分解率测定办法具体为：用梯度稀释法将菌液稀释至适当浓度(以方便通过血球板计数法测定为宜)，测定菌体含量，贮藏之前测定的含量为m1，处理后测定含量为m2，则菌体分解率＝(m1-m2)/m1；

悬浮率测定参照GB/T14825-2006，润湿时间测定参照GB/T5451-2001《中华人民共和国国家标准》。

实施例4

根据实施例3的数据，制备蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂，可以制成如下成分含量的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂：

1.蜡样芽孢杆菌冻干粉50％，木质素磺酸钠和Morwet EFW8％，碳酸钙0.5％，，β-环糊精0.05％，余量为白炭黑，其中，木质素磺酸钠和Morwet EFW的质量比为3:7；

2.蜡样芽孢杆菌冻干粉60％，烷基萘磺酸缩聚物钠盐和茶皂素10％，碳酸钙1％，β-环糊精0.1％，余量为轻质碳酸钙，其中，烷基萘磺酸缩聚物钠盐和茶皂素的质量比为4:6；

3.蜡样芽孢杆菌冻干粉60％，木质素磺酸钠和Morwet EFW10％，磷酸氢二钾1％，β-环糊精0.1％，余量为硅藻土，其中，木质素磺酸钠和Morwet EFW的质量比为4:6；

4.蜡样芽孢杆菌冻干粉70％，木质素磺酸钠和茶皂素12％，碳酸钙1.5％，β-环糊精0.15％，余量为硅藻土，其中，木质素磺酸钠和茶皂素的质量比为5:5；

5.蜡样芽孢杆菌冻干粉60％，烷基萘磺酸缩聚物钠盐和Morwet EFW 10％，磷酸氢二钾0.5％，β-环糊精0.1％，余量为硅藻土，其中，烷基萘磺酸缩聚物钠盐和Morwet EFW的质量比为6:4；

6.蜡样芽孢杆菌冻干粉70％，木质素磺酸钠和Morwet EFW12％，磷酸氢二钾1.5％，β-环糊精0.15％，余量为硅藻土，其中，木质素磺酸钠和Morwet EFW的质量比为4:6。

将上面6种配方的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂制备成成品，制备方法为：将每个配方中的各组分含量混合均匀，控制温度在0～45℃，在气流粉碎机中粉碎混合，过150目筛，即得最终产品。

将制备的蜡样芽胞杆菌可湿性粉剂溶解于无菌水中，进行梯度稀释，利用滴液法检测可湿性粉剂中有效成分含量。对成品的各指标进行测定，悬浮率测定参考GB/T 14825-2006，润湿时间测定参考GB/T 5451-2001，细度测定参考GB/T16150-1995，pH值测定参考GB/T1601-1993，水分测定参考GB/T1600-2001。

各配方制备的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂各指标均符合农药可湿性粉剂的质量要求。并且通过对SD大鼠的毒性试验，得到制得的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂在使用中不会使人或动物中毒，可将其应用于田间及野外环境。根据我国农药的急性毒性分级属于农药中的微毒类，即最低毒类。在板栗采后保鲜中的应用效果非常好。以下仅以第3种配方制备的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂为例进行说明。

其中，第3种配方制备的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂结果显示蜡样芽胞杆菌可湿性粉剂菌体含量为2.46×10⁹CFU/g，pH值7.6，水分含量2％，悬浮率82.27％，润湿时间51.43s，99.3％通过325目筛，各指标均符合农药可湿性粉剂的质量要求。

实施例5

以第3种配方制备的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂(蜡样芽孢杆菌冻干粉60％，木质素磺酸钠和Morwet EFW 10％，磷酸氢二钾1％，β-环糊精0.1％，余量为硅藻土，其中，木质素磺酸钠和Morwet EFW的质量比为4:6)为例进行蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂的安全性测定。

选健康的成年SD大鼠(Sprague-Dawley)，体重在180～220g之间，雌雄各半，按SD大鼠体重计，设四个质量剂量组5、50、500和5000mg/kg，分别为组1-4。

每个剂量组20只SD大鼠，雌雄各半，采用口灌方式给大鼠喂食蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂，观察SD大鼠的中毒表现和死亡情况，观察期限10d；利用寇氏法求出LD50(半数致死量)，进行毒性分级，得到表7。

计算公式：m＝X_k-i(Σp-0.5)

式中m：lgLD50

X_k：最大剂量的对数值

Σp：各剂量组死亡率总和

i：向邻两组对数值之差

表7 SD大鼠经口染毒死亡情况

生物安全性是微生物农药产业化的前提，蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂的急性经口毒理学实验结果如表7，表明：雄、雌SD大鼠急性经口LD50为5000.35mg/kg，大于5000mg/kg，根据我国农药的急性毒性分级属于农药中的微毒类，即最低毒类。因此，蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂在使用中不会使人或动物中毒，可将其应用于田间及野外环境。

实施例6

以第3种配方制备的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂(蜡样芽孢杆菌冻干粉60％，木质素磺酸钠和Morwet EFW 10％，磷酸氢二钾1％，β-环糊精0.1％，余量为硅藻土，其中，木质素磺酸钠和Morwet EFW的质量比为4:6)为例说明蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂在板栗采后保鲜中的应用。

1.蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂直接对板栗实腐病的防治

为了评价本发明中制备的可湿性粉剂对板栗贮藏期栗实腐烂的防治效果，分别设置5个处理：蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂100倍液、500倍液、1000倍液；70％甲基托布津可湿性粉剂1000倍液；以清水作为对照；选取无病害、虫眼的栗实，喷到栗实上有一层雾珠但是不形成水珠往下流为止，放置于室温(20～25℃条件)下贮存30d，切开栗实统计栗实发病率。每个处理200个栗实，试验重复三次。30天后，统计结果见表8。

表8蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂对板栗病害的防治效果

备注：发病率后缀的字母是用来表示差异是否显著：字母相同，表示差异不显著；字母不相同，表示差异显著(P<5％)。

从表8可以看出，不同稀释度的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂与CK组相比，效果差异均差异显著。特别是，蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂100倍液对板栗采后病害的防效达到82.47％，与市售常用有效杀菌剂70％甲基托布津可湿性粉剂的1000倍液的防效相当。因此，可以使用蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂100倍液直接用于防治板栗采后病害。

2.蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂在板栗常温贮藏保鲜中的应用

蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂结合干燥、无虫、无菌的谷壳、锯末，木屑，竹木粉等农林废料作为介质，保持一定的通风和湿度，可以较好的解决板栗采后常温长期保存问题。

具体做法如下：(1)将谷壳、锯末，木屑，竹木粉等介质经高锰酸钾熏蒸灭虫，充分干燥处理；

(2)将蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂100～500倍液喷湿介质中并搅拌，使其湿度达到50％左右；

(3)选取无虫眼、无明显病害的板栗，用蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂100倍液浸泡10～20min，取出稍干，栗实表面不形成明显水珠即可；

(4)将预处理好的板栗散布于预处理的介质中，保持适度通风和湿度(40％～55％)，室温在4～30℃范围，经实验测定，3～5个月后板栗的保鲜率仍可达90％以上。

本发明实施例中提供的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂，对板栗等果实储藏过程中常见的真菌病害，如栗疫菌、黑葡萄穗霉、腐皮镰刀菌、扩展青霉、炭疽菌和黑曲霉等具有较好的抑制作用，对人畜无毒，成本低。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.蜡样芽孢杆菌，其特征在于，保藏号为CCTCC M 2014112，保藏名称为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)CE-D10.3.2。

2.一种蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂，其特征在于，包含以下组分：按重量百分比计，蜡样芽孢杆菌冻干粉50-70％，助剂8-12％，稳定剂0.5-1.5％，紫外保护剂0.05-0.15％，余量为载体。

3.根据权利要求2所述的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂，其特征在于，所述蜡样芽孢杆菌冻干粉通过以下方法制备：

(a)、将所述蜡样芽孢杆菌培养至对数生长期，得到种子液；

4.根据权利要求2所述的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂，其特征在于，所述载体为白炭黑、轻质碳酸钙、硅藻土中的任一种。

5.根据权利要求2所述的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂，其特征在于，所述助剂包括润湿剂和分散剂，所述分散剂为木质素磺酸钠、烷基萘磺酸缩聚物钠盐中的任一种；所述润湿剂为Morwet EFW和茶皂素中的任一种。

6.根据权利要求5所述的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂，其特征在于，所述分散剂为木质素磺酸钠，所述润湿剂为Morwet EFW，且所述木质素磺酸钠与所述Morwet EFW的重量比为3：7～6:4。

7.根据权利要求2所述的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂，其特征在于，所述稳定剂为碳酸钙或磷酸氢二钾；优选地，所述紫外保护剂为β-环糊精。

8.权利要求1-7任一项所述的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法，其特征在于，将各组分混合均匀，粉碎，制得目数不大于150目的粉剂，整个制备过程中温度保持在0～45℃。

9.权利要求1所述的蜡样芽孢杆菌在贮藏保鲜中的应用。

10.权利要求2-7任一项所述的蜡样芽孢杆菌可湿性粉剂在贮藏保鲜中的应用。