CN104208348A - 一种具有调节免疫功能的中药制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种具有调节免疫功能的中药制剂,属于中药保健领域。本发明以黄芪为君药,补脾益肺、益气固表;山药为臣药,意在固本;绞股蓝作为佐药与山药共同固本、正本;人参作为使药,益气固表、康复元气。四味共奏补脾健脾、润肺益肺、清心安神、补气固表之功效。动物实验表明,本发明的药物具有增强免疫力功能的作用;临床试验证明,本发明的药物对因免疫力异常所致的各种亚健康和疾病均具有很好的调养作用。另外,本发明药物的原料均为药食同源的植物,无毒无副作用,是一种很好的保健产品。
Description
技术领域
本发明属于中药保健领域,涉及一种具有调节免疫功能的中药制剂。
背景技术
免疫是人体自身的防御机制,是识别并消灭外来入侵异物(病毒、细菌、真菌等),处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和被病毒感染组织细胞的能力。免疫力是人体识别和排除“异己”的生理反应,人体内执行这一功能的是免疫系统。“免疫”一词最早见于中国明代医书《免疫类方》,指的是“免除疫疠”,也就是防治传染病之意。免疫系统是由免疫器官、免疫细胞和免疫活性物质组成。人体共有三道免疫防线:第一道防线——是由皮肤和黏膜构成,可以阻挡病原体入侵,其分泌物(如乳酸、脂肪酸、胃酸和酶等)可以杀菌,其纤毛可以清除异物。第二道防线——是体液中的杀菌物质和吞噬细胞,对多种病原体都有防御作用,又叫非特异性免疫(即先天性免疫)。第三道防线——由免疫器官(胸腺、淋巴结和脾脏等)和免疫细胞(淋巴细胞)组成,其中B淋巴细胞“负责”体液免疫;T淋巴细胞“负责”细胞免疫,是在出生以后逐渐建立起来的后天防御功能。只有三道防线同时、完整、完好发挥免疫作用,健康才能更充分的得到保证。
免疫低下则易于被感染或患癌症或患心脑血管疾病;免疫力超常也会产生对身体有害的结果,如引发过敏反应、自身免疫疾病等。各种原因使免疫系统不能正常发挥保护作用,极易招致细菌、病毒、真菌等感染,因此免疫力低下最直接的表现就是容易患病。因经常患病则会加重机体的消耗,所以一般有体质虚弱、营养不良、精神萎靡、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍、血液循环不畅等表现。
目前人们调节免疫的方法很多,但各有优势又各有不足,所以研究开发以我国中药材资源优势和祖国医学理论优势为背景的、无毒无副作用的、质优价廉的产品有其巨大社会价值和经济价值。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有调节免疫功能的中药制剂。
本发明的中药制剂,是以黄芪、山药、绞股蓝、人参为原料药进行配伍。
黄芪:味甘、性温。归肺、脾经。补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌。用于气虚乏力,食少便溏,中气下陷,久泻脱肛,便血崩漏,表虚自汗,气虚水肿,痈疽难溃,久溃不敛,血虚痿黄,内热消渴等。黄芪含皂甙,蔗糖,多糖,多种氨基酸,叶酸,硒、锌、铜等多种微量元素。现代药理研究不标明,黄芪具有抗菌、抗病毒、抗缺氧、提高应激能力作用;通过促进蛋白质代谢扶正作用;改善心脏功能作用;调节体液免疫和细胞免疫作用;调节血压作用;保肝作用;调节血糖作用;降低血粘度作用;促进骨骼生长作用;促进造血作用;利尿作用、抗衰老作用。 山药:味甘、性平;入肺、脾、肾经;具有健脾补肺、益胃补肾、固肾益精、聪耳明目、助五脏、强筋骨、长志安神、延年益寿的功效。主治脾胃虚弱、倦怠无力、食欲不振、久泄久痢、肺气虚燥、痰喘咳嗽、肾气亏耗、腰膝酸软、下肢痿弱、消渴尿频、遗精早泄、带下白浊、皮肤赤肿、肥胖等病症。富含各种均衡的营养成分:蛋白质、脂肪、碳水化合物、膳食纤维、维生素A、胡萝卜素、维生素B1、维生素B2、烟酸(毫克)、维生素C、维生素E、钙、磷、钾、钠、镁、铁、锌、硒、铜、锰。药理作用有:调血糖作用;调节机体对非特异刺激反应性作用;对免疫功能的调节作用;促进小肠排空的作用;营养滋补作用;助消化作用;止泻作用;祛痰作用;抗衰老作用。
绞股蓝:味甘、苦,性微寒。归肺经、脾经、肾经。 益气,安神,降血压,清热解毒,止咳祛痰。药理作用:增进消化吸收作用;保护胃黏膜作用;补脑安神作用;保护心脏功能作用;调节血脂作用;调节血压作用;减肥作用;抗过敏作用;抗癌抗肿瘤作用;抗氧化抗衰老作用;养颜美容作用;调节免疫功作用; 对血凝和血小板聚集的调节作用;调节睡眠作用;对脑缺血的保护作用;具有雄、雌激素样作用;抗突变作用。
人参,性平、味甘、微苦,微温。归脾、肺经、心经。大补元气,复脉固脱,补脾益肺,生津止渴,安神益智。主治劳伤虚损、食少、倦怠、反胃吐食、大便滑泄、虚咳喘促、自汗暴脱、惊悸、健忘、眩晕、头痛、阳痿、尿频、消渴、妇女崩漏、小儿慢惊及久虚不复,一切气血津液不足之症。人参被人们称为“百草之王”,有极大的食疗价值和药用价值。经现代研究证明,人参有以下药理作用:对中枢神经系统的调节作用;提高机体的适应性作用;调节心血管系统作用;抗休克作用;增强肝脏功能作用;对内分泌系统的调节作用;对物质代谢的调节作用;抗衰老作用。
本发明以黄芪为君药,补脾益肺、益气固表,从“气”入手。“气”能推动、温煦、固摄、防御、气化、营养;“气”能流布全身,行至脏腑表里、走至血脉内外;“气”是物质、能量、信息混合统一体,是人体生命的原动力。因此,“气”固则人体防御能力强大。山药为臣药,入上(肺)中(脾)下(肾)三焦,意在固本。脾为后天之本,脾得固则体健、则能康、则能荣;肺主皮毛,皮表得固则可安内、则御邪;肾为先天之本,容易虚损,所以要时常益肾固本。绞股蓝作为佐药,仍然从上(肺)中(脾)下(肾)三焦入手,与山药共同固本、正本。人参作为使药,益气固表、康复元气,四味共奏正本固本以调节免疫。
大量的试验和临床总结发现,本发明中药组合物的各原料药在以下重量份的范围内调整,都具有调节免疫功能。
基本配比:黄芪30-50份,山药20-40份,绞股蓝10-30份,人参5-15份。
优选配比:黄芪35-45份,山药25-35份,绞股蓝15-25份,人参8-12份。
最佳配比:黄芪40份,山药30份,绞股蓝20份,人参10份。
本发明的药物可以按中药药剂学的常规工艺和辅料制备成各种内服制剂。如胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、丸剂(包括水丸、蜜丸、糖衣丸、胶丸、肠溶丸或滴丸)或口服液。
下面通过动物试验报告说明发明药物增强免疫功能的效果。
1材料与方法
1.1样品来源及处理
本发明胶囊剂药物(双馨堂牌乐奇胶囊),人群推荐日摄入量为2.4 g /60kg BW(即0.04 g/kg BW);
样品配制:准确量取受试样品4g、8g、12g,分别用蒸馏水定容至200mL,供低、中、高剂量组小鼠灌胃用。
1.2实验动物及环境
SPF级昆明种雌性小鼠,18-22g,200只,由湖北省实验动物研究中心提供。实验动物生产许可证号:SCXK(鄂)2008-0005;实验动物使用许可证号:SYXK(鄂)2008-0014。动物饲养室温度为20-25℃,湿度为40-70%。
1.3剂量分组
按人群推荐日摄入量2. 4g/60kg BW扩大10、20、30倍设置低、中、高三个剂量组,即设计0.4 g、0.8g、1.2g/kg BW,共分五个实验组,每实验组包括阴性对照组、低、中、高剂量组,各剂量组实验动物数为10只。免疫实验一组进行迟发型变态反应实验;免疫实验二组进行淋巴器官/体重比值测定和碳廓清实验;免疫实验三组进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验和NK细胞活性测定;免疫实验四组进行血清溶血素的测定和抗体生成细胞检测;免疫实验五组进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。小鼠连续灌胃30天后开始试验。各实验组均按0.20ml/10g BW容量经口灌胃给予。
1.4试验方法
1.4. 1 ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验
方法:无菌取脾,置于盛有适量无菌Hank’s 液平皿中,用镊子轻轻将脾磨碎,制成单个细胞悬液。经200目筛网过滤,用Hank’s液洗2次,每次离心10min(1000r/min)。然后将细胞悬浮于lmL的完全培养液中,用台酚兰染色计数活细胞数(应在95%以上),调整细胞浓度为3 ×10s个/mL。将每一份脾细胞悬液分两孔加入24孔培养板中,每孔lmL,—孔加75μLConA液(相当于7.5μg/mL),另一孔作为对照,置5%CO2 , 37 ℃ CO2孵箱中培养72h。培养结束前4h,每孔轻轻吸去上清液0.7mL,加入0. 7mL不含小牛血清的 RPMI1640培养液,同时加入MTT (5mg/mL) 50μL/孔,继续培养4h。培养结束后,每孔加入lmL酸性异丙醇,吹打混匀,使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板中,每 个孔作3个平行孔(100μL/孔),用酶标仪以570nm波长测定光密度值。
1. 4. 2二硝基氟苯(DNFB)诱导迟发型变态反应(DTH)
方法:耳肿胀法。用1%DNFB(以1:1的丙酮麻油溶液配制)致敏小鼠后,第5天再用DNFB 攻击右耳,24h后处死动物剪下左右耳壳用打孔器取下直径8mm的耳片,称重,以左右耳的 重量之差来表示DTH的程度。
1.4.3血清溶血素的测定
方法:血凝法。取羊血,用生理盐水洗涤3次,每次离心(2000r/min) l0min。将压积 SRBC用生理盐水配成2% (v/v)的细胞悬液,每只鼠腹腔注射0.2mL进行免疫。4天后, 摘除眼球取血于离心管内,放置约lh,将凝固血与管壁剥离,使血清充分析出,2000r/min 离心l0min,收集血清。
凝集反应:用生理盐水将血清倍比稀释,将不同稀释度的血清分别置于微量血凝实验板 内,每孔100μL,再加入100μL 0.5% (v/v) SRBC悬液,混匀,放入湿润的平盘内并加盖,于37℃温箱孵育3h,观察血球凝集程度。根据血清凝聚程度的级别计算出抗体积数。
1.4.4腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验
方法:半体内法。制备20%的鸡红细胞悬液;每只鼠腹腔注射lmL该悬液,30min后处死动物,将其仰位固定于鼠板上,开腹,经腹腔注入生理盐水2mL,转动鼠板lmin,然后吸出腹腔洗液lmL,平均分滴于2片载玻片上,37℃温育30min;育毕用生理盐水漂洗,晾干,以体积比1:1的丙酮甲醇溶液固定,4%Giemsa-磷酸缓冲液染色3min,再用蒸馏水漂洗晾干。油镜下计数100个巨噬细胞,按下式计算吞噬率和吞噬指数:
吞噬率(%) = 吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100
吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数。
1.4.5小鼠碳廓清试验
方法:按体重从小鼠尾静脉注入稀释的印度墨汁(10mL/kg),待墨汁注入,立即计时注入墨汁后2、10min,分别从内眦静脉丛取血20μL,并立即将其加到 2mL0.1% Na2CO3溶液中。 各吸0.lmL于96孔酶标板中,用酶标仪在600nm波长处测光密度值(OD),以Na2CO3溶液作 阴性对照。
将小鼠处死,取肝脏和脾脏,用滤纸吸干脏器表面血污,分别称重。
以吞噬指数表示小鼠碳廓清的能力。按下式计算吞噬指数a。受试样品组的吞噬指数显著高于对照组,可判定该项实验结果阳性。
K=LgOD1 - lgOD2 /t2-t1,吞噬指数a =体重/(肝重+脾重)×K1/3。
1.4. 6抗体生成细胞检测
取脱纤维的羊血,用生理盐水洗涤3次,每次离心(2000r/min) 10min, 每只鼠经腹腔注射2%(v/v)SRBC 0.2mL。将SRBC免疫4天后的小鼠颈椎脱臼处死,取出脾脏,放在盛装有Hank’s液的小平皿内,轻轻磨碎脾脏,制成细胞悬液,经200目筛网过滤,离心 (1000/min) 10min,用Hank’s液洗2遍,最后将细胞悬浮在5mLRPMI1640培养液中,计数细胞,并将细胞浓度调整为5×106个/mL。
空斑的测定:将表层培养基(lg琼脂糖加双蒸水至100mL)加热溶解后,放入45-50℃水浴保温,与等量pH=7.2~7.4,2倍浓度的Hank’s液混合,分装小试管,每管0.5mL,再向管内加50μL 10%SRBC(v/v,用SA缓冲液配制),20μL脾细胞悬液(5×106个/mL),迅速混匀,倾倒于己刷琼脂糖薄层的玻片上,做平行片,待琼脂凝固后,将玻片水平扣放在片架上,放入二氧化碳培养箱中孵育1.5h,然后用SA缓冲液稀释的补体(1:8)加入玻片架凹槽内,继续温育1.5h后,计数溶血空斑数。
1.4.7 NK细胞活性测定
方法:乳酸脱氢酶(LDH)测定法。
靶细胞的传代(YAC-1细胞):实验前24h将靶细胞进行传代培养。用前以Hank’s液洗3次,用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×105个/mL。
脾细胞悬液的制备(效应细胞):无菌取脾,置于盛有适量无菌Hank’ s液的小平皿中,用镊子轻轻将脾磨碎,制成单细胞悬液。经200目筛网过滤,用Hank’s液洗2次,每次离心10min (1000r/min)。弃上清将细胞浆弹起,加入0.5mL灭菌水20秒,裂解红细胞后再加入0.5mL 2倍Hank’s液及 8mLHanks液,1000r/min,10min离心,用lmL含10%小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬,用1%冰醋酸稀释后计数(活细胞数应在95%以上),用台酚兰染色计数活细胞数(应在95%以上),最后用RPM11640完全培养液调整细胞浓度为2 ×107个/mL。
NK细胞活性检测:取靶细胞和效应细胞各100μL(效靶比50:1),加入U型96孔培养板中:靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μL,靶细胞最大释放孔加靶细胞和1%NP40各100μL;上述各项均设三个平行孔,于37℃、5%CO2培养箱中培养4h,然后将96孔培养板以1500r/min离心5min,每孔吸取上清100μL置平底96孔培养板中,同时加入LDH基质液100μL,根据室温不同反应3~10min,每孔加入lmol/L的HCL30μL,在酶标仪490nm处测定光密度值(OD)。
按下式计算NK细胞活性,受试样品组的NK细胞活性显著高于对照组的NK细胞活性, 即可判定该项实验结果阳性。
NK细胞活性(%)= 反应孔OD-自然释放孔OD ×100
最大释放孔OD-自然释放孔OD
2结果
2.1双馨堂牌乐奇胶囊对小鼠体重的影响:双馨堂牌乐奇胶囊对小鼠体重无明显影响,
各剂量组与阴性对照组比较P>0.05,见表1、表2、表3、表4、表5。
2.2双馨堂牌乐奇胶囊对动物淋巴器官/体重比值的影响:见表6。双馨堂牌乐奇胶囊对小鼠胸腺/体重比值和脾脏/体重比值无明显影响,各剂量组与阴性对照组比较均为P>0. 05。
2.3双馨堂牌乐奇胶囊脾淋巴细胞转化实验结果:双馨堂牌乐奇胶囊高剂量组能显著性增强ConA诱导的脾淋巴细胞增殖能力,与阴性对照组比较P<0.05,见表7。
2.4双馨堂牌乐奇胶囊对小鼠迟发型变态反应的影响:双馨堂牌乐奇胶囊高剂量组能显著性增强小鼠对DNFB诱发的DTH反应,与阴性对照组比较p<0.05,见表7。
2.5双馨堂牌乐奇胶囊对小鼠血清溶血素滴度水平的影响:双馨堂牌乐胶囊高剂量组能显著性升高血清溶血素含量,与阴性对照组比较P<0.05。见表8。
双馨堂牌乐奇胶囊腹腔巨噬细胞吞嗤鸡红细胞实验结果:双馨堂牌乐奇胶囊高剂量组能明显提高吞噬率、吞噬指数,与阴性对照组比较均P<0.05,见表9。
2.7双馨堂牌乐奇胶囊碳廓清实验结果:双馨堂牌乐奇胶囊高剂量组能显著提高小鼠碳廓淸吞噬指数,与阴性对照组比较P<0.05。见表10。
2.8双馨堂牌乐奇胶囊抗体生成细胞检测实验结果:双馨堂牌乐奇胶囊高剂量组能明显 提高抗体生成细胞数量,与阴性对照组比较P<0.05,见表11。
2.9双馨堂牌乐奇胶囊NK细胞活性实验结果:双馨堂牌乐奇胶囊各剂量组均不能明显增强小鼠NK细胞活性,与阴性对照组比较P>0.05,见表12。
3结论
根据送检单位提供的人群推荐日摄入量2.4g/60kg BW扩大10、20、30倍设置低、 中、高三个剂量组,即0.4 g、0.8g、1.2g/kg BW,另设阴性对照组。采用SPF级昆明种小鼠,连续灌胃给予,30天后开始检测有关指标。实验结果以P<0.05判断为差异有显著性,结果显示:与阴性对照组比较,1)各剂量组小鼠体重、淋巴器官/体重比值差异均无显著性;2)高剂量组能明显增强ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力;3)高剂量组能明显增强二硝基氟苯诱导的小鼠迟发型变态反应;4)高剂量组能明显升高小鼠血清溶血素含量;5)高剂量组能明显增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能;6)高剂量组能明显增强小鼠碳廓清能力;7)高剂量组能明显增强抗体生成细胞能力;8)各剂量组均不能显著性增强小鼠NK细胞活性。按照增强免疫力功能作用评价程序规定,该受试物具有增强免疫力功能作用。
临床试验证明,本发明的药物对因免疫力异常所致的各种亚健康和疾病均具有很好的调养作用。另外,本发明的药物的原料均为药食同源的植物,无毒无副作用,同时是一种很好的保健产品。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明药物的组分及其制备作进一步说明。
实施例1、本发明片剂药物的制备
配方:黄芪40份,山药30份,绞股蓝20份,人参10份。
工艺:按中药药剂学制备片剂的常规工艺和辅料制备成片剂药物。
实施例2、本发明胶囊剂药物的制备
配方:黄芪30份,山药20份,绞股蓝10份,人参5份。
工艺:按中药药剂学制备胶囊剂的常规工艺和辅料制备成胶囊剂药物。
实施例3、本发明散剂药物的制备
配方:黄芪50份,山药40份,绞股蓝30份,人参15份。
工艺:按中药药剂学制备散剂的常规工艺和辅料制备成散剂药物。
实施例4、本发明颗粒剂药物的制备
配方:黄芪35份,山药25份,绞股蓝15份,人参8份。
工艺:按中药药剂学制备颗粒剂的常规工艺和辅料制备成颗粒剂药物。
实施例5、本发明滴丸剂药物的制备
配方:黄芪45份,山药35份,绞股蓝25份,人参12份;
工艺:按中药药剂学制备滴丸剂的常规工艺和辅料制备成滴丸剂药物。
实施例6、本发明水丸剂药物的制备
配方:黄芪40份,山药30份,绞股蓝20份,人参10份。
工艺:按中药药剂学制备水丸剂的常规工艺和辅料制备成水丸剂药物。
实施例7、本发明蜜丸剂药物的制备
配方:黄芪40份,山药30份,绞股蓝20份,人参10份;
工艺:按中药药剂学制备蜜丸剂的常规工艺和辅料制备成蜜丸剂药物。
实施例8、本发明口服液药物的制备
配方:黄芪40份,山药30份,绞股蓝20份,人参10份。
工艺:按中药药剂学制备口服液的常规工艺和辅料制备成口服液。
实施例9、本发明肠溶丸剂药物的制备
配方:黄芪40份,山药30份,绞股蓝20份,人参10份。
工艺:按中药药剂学制备肠溶丸的常规工艺和辅料制备成肠溶丸剂药物。
实施例10、本发明微型胶囊剂药物的制备
配方:黄芪40份,山药30份,绞股蓝20份,人参10份。
工艺:按中药药剂学制备微型胶囊的常规工艺和辅料制备成微型胶囊剂。
上述各实施例中,各原料的配比均以重量份计。
Claims (5)
1.一种具有调节免疫功能的中药制剂,是以黄芪、山药、绞股蓝、人参为原料药,按药剂学的常规工艺和辅料制备成的内服制剂。
2.如权利要求1所述具有调节免疫功能的中药制剂,其特征在于:所述各原料药按以下重量份进行配比:黄芪30-50份,山药20-40份,绞股蓝10-30份,人参5-15份。
3.如权利要求1所述具有调节免疫功能的中药制剂,其特征在于:所述各原料药按以下重量份进行配比:黄芪35-45份,山药25-35份,绞股蓝15-25份,人参8-12份。
4.如权利要求1所述具有调节免疫功能的中药制剂,其特征在于:所述各原料药按以下重量份进行配比:黄芪40份,山药30份,绞股蓝20份,人参10份。
5.如权利要求1所述一种具有调节免疫功能的中药制剂,其特征在于:所述内服制剂为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、口服液。
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