CN104188990A - 绞股蓝皂苷XLV Ed在制备抗肝癌药物中的应用 - Google Patents

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绞股蓝皂苷XLV Ed在制备抗肝癌药物中的应用，涉及绞股蓝皂苷。所述绞股蓝皂苷XLVEd，名称为2-羟基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-20(S)-原人参二醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，白色粉末，分子式为C42H72O14，分子量为800。可通过酶法转化绞股蓝总皂苷的方法逐步分离纯化得到，制备方法简单、成本低。以肝癌为模型，通过体外抗肝癌模型测定表明，绞股蓝皂苷XLV Ed对人肝癌细胞SMMC7721、Bel7402的生长具有显著的抑制作用，还能使人肝癌细胞Bel7402中的DNA降解成小片段，促进人肝癌细胞死亡，进而抑制肝癌的生长。可在制备抗肝癌药物中应用。

Description

绞股蓝皂苷XLV Ed在制备抗肝癌药物中的应用
技术领域
本发明涉及绞股蓝皂苷，尤其是涉及绞股蓝皂苷XLV Ed在制备抗肝癌药物中的应用。 
背景技术
肿瘤(tumor)是一种常见病、多发病，其中恶性肿瘤(Malignant Tumor，Cancer)是目前危害人类健康最严重的一类疾病。根据我国卫生部公布的资料，2006年我国恶性肿瘤在农村和城市人口中死亡率均居第一位。而在诸多恶性肿瘤中，肝癌(Hetatocellular Carcinoma，HCC)属于最难治疗的一类，迄今仍缺乏理想的治疗药物，患者的死亡率常年居高不下，5年存活率低。全世界每年新发现的肝癌病人42.5％发生在中国，且年龄多为40～50岁。肝癌早期一般无临床症状，一旦出现典型的临床表现，通常已经属于中晚期，发生了癌转移。因此寻找一种有效的抗肝癌药物是我国当前的迫切要求。 
绞股蓝[Gynostemma Pentaphyllum(Thunb)Makino.]为葫芦科绞股蓝属植物，其主要药效成分为绞股蓝皂苷(gypenoside，GYP)。绞股蓝皂苷具有与人参皂苷相同的达玛烷型四环三萜的骨架，显示抗肿瘤、防止衰老、降低血糖血脂、镇静止痛及抗溃疡等药理活性，且毒副作用小，是近年来国内外研究的热点。本单位通过酶法转化绞股蓝总皂苷的方法，逐步分离纯化得到绞股蓝皂苷XLV Ed。国内有关绞股蓝皂苷XLV Ed的报道屈指可数，仅在中国发明专利CN103243147A中说明了绞股蓝皂苷XLV Ed可以从绞股蓝中提取得到，且150μg/ml浓度的绞股蓝皂苷XLV Ed在酵母细胞中存在65％生长抑制。绞股蓝皂苷XLV Ed在制备治疗肝癌药物中的用途是在本发明首次公开的，其用于肝癌的治疗具有具备突出的优点。 
发明内容
本发明的目的在于提供绞股蓝皂苷XLV Ed在制备抗肝癌药物中的应用。 
所述绞股蓝皂苷XLV Ed，名称为2-羟基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-20(S)-原人参二醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，白色粉末，分子式为C42H72O14，分子量为800，结构式为： 
所述绞股蓝皂苷XLV Ed，可以通过酶法转化绞股蓝总皂苷的方法，逐步分离纯化得到，其制备方法简单、成本低。 
本发明以肝癌为模型，通过体外抗肝癌模型测定表明，绞股蓝皂苷XLV Ed对人肝癌细胞SMMC7721、Bel7402的生长具有显著的抑制作用，抑制这2株人肝癌细胞生长的IC50值分别为43.03±1.65μg/mL、65.32±1.15μg/mL，其IC50值与比较公认的抗癌药物人参皂苷IH901相近。另外，绞股蓝皂苷XLV Ed还能使人肝癌细胞Bel7402中的DNA降解成小片段，促进人肝癌细胞死亡，进而抑制肝癌的生长。由此可见，绞股蓝皂苷XLV Ed可在制备抗肝癌药物中应用，具有良好的开发应用前景。 
所述绞股蓝皂苷XLV Ed在制备抗肝癌药物中的应用至今未见报道，由于其对于人肝癌细胞的抑制活性显著，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于肝癌的防治显然具有显著的进步。 
附图说明
图1为绞股蓝皂苷XLV Ed对人肝癌细胞SMMC7721、Bel7402的抑制作用。在图1中，横坐标为绞股蓝皂苷XLV Ed浓度(μg/mL)，纵坐标为对细胞的抑制率(％)；曲线a为肝癌细胞SMMC7721，曲线b为肝癌细胞Bel7402。 
图2为绞股蓝皂苷XLV Ed对人肝癌细胞SMMC7721、Bel7402抑制作用的相差显微观察(放大倍数200倍)。 
图3为绞股蓝皂苷XLV Ed对人肝癌细胞Bel7402作用。在图3中，横坐标为PI(碘化丙啶)检测器中细胞DNA含量，纵坐标为检测器所检测到的细胞数量Events；A：对照组，B：50μg/mL绞股蓝皂苷LVII组。 
具体实施方式
以下实施例将结合附图对本发明作进一步的说明。 
1、细胞毒活性测定 
测定方法：将待测样品(阳性对照人参皂苷IH901，绞股蓝皂苷XLV Ed前提物绞股蓝总皂苷，绞股蓝皂苷XLV Ed)用DMSO(二甲基亚砜)配成50mg/mL的浓度，12000rpm离心10min后，吸取上清液作为样品测定液。将处于对数生长期的人肝癌细胞SMMC7721和Bel7402，按照每孔5000个细胞接种入96孔板中，在5％CO2培养箱中37℃温育24h，然后加入一系列含有不同浓度梯度测定样品的培养基200μL继续培养。加药组和对照组均设4个复孔，每个板均设有8个空白对照孔(不加细胞仅加等量培养基)。经过药物处理72h后吸掉上清液，每孔加100μL的MTT[1mg/mL，3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑噻唑蓝]后置于37℃温育4～8h，终止培养，小心吸弃上清，每孔加入150μL的DMSO使结晶物充分溶解，用微孔板快速振荡器振荡20min，于492nm测定各孔的光吸收值A。 
细胞毒活性：根据吸光度值计算样品作用后的细胞相对抑制率。计算公式为： 
根据测定数据和计算值绘制人参皂苷IH901、绞股蓝总皂苷与绞股蓝皂苷XLV Ed对人肝癌细胞株SMMC7721和Bel7402的抑制曲线(图1)。并利用SPSS统计软件计算各样品对细胞的半数抑制率IC50值(表1)。 
表1.绞股蓝总皂苷和绞股蓝皂苷XLV Ed对人肝癌细胞抑制作用的IC50值 
2、细胞死亡检测 
将人肝癌细胞Bel7402接种于60mm培养皿中，加入50μg/mL绞股蓝皂苷XLV Ed共同培养72h(方法同实施例1)，并做好对照。经过含0.1％RNase A的5mg/ml PI避光处理10min后，用流式细胞仪检测。 
结果表明，绞股蓝皂苷XLV Ed组在人肝癌细胞Bel7402的亚G1峰分别从2.20％上升到15.37％(图3，亚G1峰即图中M2，表明DNA含量低于正常2倍体含量的细胞数量)。由此可见，绞股蓝皂苷XLV Ed能够使得人肝癌细胞Bel7402中DNA降解，分解成小的片段，促进人肝癌细胞死亡，进而抑制肝癌的生长(图3，Events：细胞数量；PI：碘化丙啶；M2：亚G1期细胞，M1：其他周期细胞)。 

Claims (1)

1.绞股蓝皂苷XLV Ed在制备抗肝癌药物中应用，所述绞股蓝皂苷XLV Ed的名称为2-羟基-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-20(S)-原人参二醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，白色粉末，分子式为C42H72O14，分子量为800，结构式为：
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