CN104168905B

CN104168905B - 使用乳双歧杆菌bl-04治疗呼吸道疾病

Info

Publication number: CN104168905B
Application number: CN201280028506.2A
Authority: CN
Inventors: D.普伊内; N.维斯特; A.克里普斯; S.拉廷恩
Original assignee: Danisco US Inc
Current assignee: Danisco US Inc
Priority date: 2011-06-10
Filing date: 2012-06-08
Publication date: 2018-12-04
Anticipated expiration: 2032-06-08
Also published as: WO2012168732A1; JP6153517B2; US20140112897A1; US20190269741A1; CN104168905A; GB201110095D0; US20210379126A1; EP2717889A1; EA031426B1; JP2014517003A; EP2717889B1; EA201490004A1; BR112013031659B1; US20180036353A1; ES2583695T3; BR112013031659A2

Abstract

本发明涉及一种治疗或预防受试者中呼吸道疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)BL04和／或乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)BL04的发酵产物和／或乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)BL04的细胞溶胞产物的组合物。

Description

使用乳双歧杆菌BL-04治疗呼吸道疾病

技术领域

本发明涉及治疗呼吸道疾病的方法和用于治疗呼吸道疾病的乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)BL-04的用途。

背景技术

根据澳大利亚健康与福利研究所(Australian Institute of Health andWelfare)2006年的报告，上呼吸道疾病URTI是全科治疗中第二常见的处理难题，并是儿童入院的一个重大原因(福利，2006年)。伴随这些感染而来的是巨大的经济负担。由于URTI四分之一的时间耗费在请假上(Leder等人，2003年)，同时经济学分析估计在美国呼吸道感染的直接花费为90亿美元(Dixon，1985年)。在许多情况下，这些疾病减少了社会互动、健康状态和幸福感(Hashem和Hall，2003年)。URTI可能对于人群中的少数群体具有日益重要的临床意义。保持不患呼吸道疾病对于运动员十分重要，因为有证据表明保持不患疾病的那些运动员比报告患有疾病的他们的对手表现得更好(Pyne等人，2001年)。减少这些感染的发病率表现出在经济上以及在社会层面上均具有大量益处。

存在若干安慰剂对照的临床研究，这些研究检测了单独的益生菌(de Vrese等人，2006年；Cox等人，2008年)以及与其他所谓的预防剂的结合(Pregliasco等人，2008年)对于常见呼吸道疾病的功效。这些研究表明，益生菌补充剂与安慰剂补充剂相比降低了疾病的数量、持续时间和严重程度(de Vrese等人，2005年；Winkler等人，2005年；de Vrese等人，2006年)。最近，对运动员群体(平均年龄27.0±11.6岁；平均值±标准偏差，自我报告的训练负荷：约10小时每周)的研究报道称定期摄取益生菌表现出有利于降低URTI的频率，其可能与在冬季训练与比赛期间更好地保持唾液IgA水平有关。这些研究表明，益生菌补充剂可能是有用的营养产品以降低常见传染病的频率、持续时间和严重程度。

发明人意外地发现，与健康的积极锻炼身体的成年人群体中的其他益生菌或安慰剂相比，在治疗和预防呼吸道疾病中使用乳双歧杆菌BL-04(Barrangou R.，et al；J.Bacteriol.191：4144-4151(2009)(Barrangou R.等人，《细菌学杂志》，第191卷，第4144-4151页，2009年))提供改善的益生菌效果。

发明内容

本发明以发明人意外发现在治疗和／或预防呼吸道疾病中使用益生菌乳双歧杆菌BL-04(购自丹麦哥本哈根，DK-1001，第17号邮箱，兰布洛格1号(Langebrogade1，PO Box17，DK-1001Copenhagen K，Denmark)的杜邦营养生物科学有限公司(DuPont NutritionBioSciences Aps)[以前为美国丹尼斯克公司(Danisco A/S)])能够提供有益结果为基础。尤其令人意外的是，这种细菌与其他益生菌以及益生菌的混合物相比具有改善的治疗效果。

乳双歧杆菌BL-04也称为动物乳双歧杆菌(Bifidobacterium animalis lactis)亚种BL-04，这些术语在本文中可互换使用。乳双歧杆菌BL-04还称为DGCC2908和RB4825。

乳双歧杆菌BL-04最初从健康成年人的粪便样本中分离，并且是已经使用的并作为菌株SD5219保存于美国典型培养物保藏中心(ATCC)安全仓库中的商业菌株(参见Barrangou R.，et al；J.Bacteriol.191：4144-4151(2009)(Barrangou R.等人，《细菌学杂志》，第191卷，第4144-4151页，2009年))。

这是公开可用的菌株。

发明人发现，向健康的积极锻炼身体的成年人施用乳双歧杆菌BL-04可以得到改善的涉及呼吸道疾病的严重程度、持续时间和频率的结果。在现有技术中，被描述为受益于益生菌的施用的患者群体通常为具有较差免疫系统的那些，即儿童和／或免疫失能的患者。这个意外的发现是令人惊讶的，因为健康的积极锻炼身体的成年人通常具有最强大的免疫系统，并因此仅会受到通常更难以防治的更严重或更致命的传染病感染。

因此，在本发明的一个方面，提供了包含乳双歧杆菌BL-04和／或乳双歧杆菌BL-04的发酵产物和／或乳双歧杆菌BL-04的细胞溶胞产物的组合物，其用于治疗或预防受试者中的呼吸道疾病。

在本发明的另一个方面，提供了用于治疗或预防呼吸道疾病的方法，该方法包括向受试者施用有效量的包含乳双歧杆菌BL-04和／或乳双歧杆菌BL-04的发酵产物和／或乳双歧杆菌BL-04的细胞溶胞产物的组合物。

在本发明的另一个方面，提供了乳双歧杆菌BL-04和／或乳双歧杆菌BL-04的发酵产物和／或乳双歧杆菌BL-04的细胞溶胞产物在制造用于治疗呼吸道疾病的药剂中的用途。

在本发明的另一个方面，提供了包含乳双歧杆菌BL-04和／或乳双歧杆菌BL-04的发酵产物和／或乳双歧杆菌BL-04的细胞溶胞产物的组合物，其用于改变受试者的药疗摄入量(如感冒药疗和／或流感药疗)。

在本发明的另一个方面，提供了用于改变受试者的药疗摄入量(如感冒药疗和／或流感药疗)的方法，该方法包括向受试者施用有效量的包含乳双歧杆菌BL-04和／或乳双歧杆菌BL-04的发酵产物和／或乳双歧杆菌BL-04的细胞溶胞产物的组合物。

在本发明的另一个方面，提供了乳双歧杆菌BL-04和／或乳双歧杆菌BL-04的发酵产物和／或乳双歧杆菌BL-04的细胞溶胞产物在制造用于改变受试者的药疗摄入量(如感冒药疗和／或流感药疗)的药剂中的用途。

具体实施方式

本发明的细节方面如下所述。一些细节方面部分地描述于单独的部分。这是为了便于参考，绝非进行限制。下文描述的所有实施方案同样适用于本发明的所有方面，除非上下文另外具体指明。

本文所用的术语“呼吸道疾病”是指上呼吸道疾病和下呼吸道疾病两者。本文所用的术语疾病与术语障碍是同义的。

在一个实施方案中，呼吸道疾病为上呼吸道疾病。

上呼吸道疾病包括(例如)扁桃体炎、中耳炎鼻炎(鼻粘膜发炎)；鼻窦炎或窦炎(鼻孔或鼻旁窦，包括额窦、筛窦、上颌窦和蝶窦发炎)；鼻咽炎(nasopharyngitis)、鼻咽粘膜炎(rhinopharyngitis)或感冒(鼻孔、咽、喉咽、悬雍垂和扁桃体发炎)；咽炎(咽、喉咽、悬雍垂和扁桃体发炎)；会厌炎或声门上炎(喉的上部和声门上区发炎)；喉炎(喉发炎)；喉气管炎(喉、气管和声门下区发炎)；以及气管炎(气管和声门下区发炎)。

在一个实施方案中，呼吸道疾病选自下列中的一者或多者：扁桃体炎、中耳炎鼻炎(鼻粘膜发炎)；鼻窦炎或窦炎(鼻孔或鼻旁窦，包括额窦、筛窦、上颌窦和蝶窦发炎)；鼻咽炎、鼻咽粘膜炎或感冒(鼻孔、咽、喉咽、悬雍垂和扁桃体发炎)；咽炎(咽、喉咽、悬雍垂和扁桃体发炎)；会厌炎或声门上炎(喉的上部和声门上区发炎)；喉炎(喉发炎)；喉气管炎(喉、气管和声门下区发炎)；以及气管炎(气管和声门下区发炎)。

在本发明的实施方案中，呼吸道疾病选自下列中的一者或多者：咽喉疼痛、打喷嚏、鼻塞、流鼻涕和咳嗽。

咽喉疼痛、打喷嚏、鼻塞、流鼻涕或咳嗽中的一者或多者是上呼吸道疾病的症状。

在一个实施方案中，根据本发明的组合物可以用于治疗或预防咽喉疼痛、打喷嚏、鼻塞、流鼻涕或咳嗽中的两者或更多者(包括三者或更多者；或四者或更多者；或全部)。

咽喉疼痛、打喷嚏、鼻塞、流鼻涕或咳嗽中的一者或多者是下列中的一者或多者的症状：扁桃体炎、中耳炎鼻炎(鼻粘膜发炎)；鼻窦炎或窦炎(鼻孔或鼻旁窦，包括额窦、筛窦、上颌窦和蝶窦发炎)；鼻咽炎、鼻咽粘膜炎或感冒(鼻孔、咽、喉咽、悬雍垂和扁桃体发炎)；咽炎(咽、喉咽、悬雍垂和扁桃体发炎)；会厌炎或声门上炎(喉的上部和声门上区发炎)；喉炎(喉发炎)；喉气管炎(喉、气管和声门下区发炎)；以及气管炎(气管和声门下区发炎)。

在一个实施方案中，呼吸道疾病为下呼吸道疾病。

下呼吸道疾病包括(例如)支气管炎、急性支气管炎、肺炎、肺脓肿。

在本发明的实施方案中，呼吸道疾病选自下列中的一者或多者：咳嗽伴随胸闷和咳嗽伴随气喘。

在本发明的一个实施方案中，呼吸道疾病选自以下两者：咳嗽伴随胸闷和咳嗽伴随气喘。

咳嗽伴随胸闷和咳嗽伴随气喘中的一者或多者是下呼吸道疾病的症状。

咳嗽伴随胸闷和咳嗽伴随气喘中的一者或多者是支气管炎、急性支气管炎、肺炎和肺脓肿中的一者或多者的症状。

在一个实施方案中，本发明涉及降低呼吸道疾病(如上呼吸道疾病或下呼吸道疾病)的发病率、持续时间或严重程度中的一者或多者(优选发病率)。

在另一个实施方案中，本发明涉及降低呼吸道疾病(如上呼吸道疾病或下呼吸道疾病)的症状的发病率、持续时间或严重程度(优选发病率)。

优选地，分别与未施用乳双歧杆菌BL-04的对照组受试者中呼吸道疾病或呼吸道疾病的症状的发病率(次数或频率)、持续时间或严重程度相比，施用乳双歧杆菌BL-04之后呼吸道疾病或呼吸道疾病的症状的发病率(次数或频率)、持续时间或严重程度降低。

在一个实施方案中，组合物对于降低表现出超过7天的症状的受试者中呼吸道疾病的发病率、持续时间或严重程度(优选发病率)特别有效。不期望受到理论的束缚，如果症状表现超过7天，这表明了严重的呼吸道疾病。在一个实施方案中，本发明的组合物对降低严重的呼吸道疾病的发病率、持续时间或严重程度(优选发病率)特别有效。

在一个实施方案中，术语“发病率”是指呼吸道疾病或其症状的次数和／或频率。在另一个实施方案中，术语“发病率”是指持续至少3天或至少5天或至少7天的呼吸道疾病或其症状的次数和／或频率。

在一个实施方案中，“预防”涉及持续至少3天或至少5天或至少7天的呼吸道疾病或其症状。在另一个实施方案中，“预防”涉及严重的呼吸道疾病或其症状。

本文所用的术语“乳双歧杆菌BL-04的发酵产物”是指通过在合适的培养基中培养(如发酵)乳双歧杆菌BL-04产生的组合物；或上清液或级分或它们的组分。在一个实施方案中，乳双歧杆菌BL-04的发酵产物是通过在合适的培养基中培养(如发酵)乳双歧杆菌BL-04产生的整个组合物。发酵产物可以在使用之前进行干燥。

在一个实施方案中，乳双歧杆菌BL-04的发酵产物可以包含活的乳双歧杆菌BL-04。在另一个实施方案中，乳双歧杆菌BL-04的发酵产物可以为无细胞发酵产物。无细胞发酵产物可以为通过在合适的培养基中培养(如发酵)乳双歧杆菌BL-04产生的乳双歧杆菌BL-04的发酵产物，其已经被改性以移除细菌细胞和／或使细菌细胞失活，从而提供无细胞发酵物。在另一个实施方案中，乳双歧杆菌BL-04的发酵产物可以包含可能完整的或裂解的非活乳双歧杆菌BL-04。

本文所用的术语“无细胞”是指发酵产物(优选发酵物)基本上不含活的细菌细胞，通常包含小于约10⁵个活的细菌细胞／毫升发酵产物，小于约10⁴个活的细菌细胞／毫升发酵产物，小于约10³个活的细菌细胞／毫升发酵产物，小于约10²个活的细菌细胞／毫升发酵产物，或小于约10个活的细菌细胞／毫升发酵产物。优选地，发酵产物基本上不含细胞，通常包含小于约10⁵个细胞／毫升发酵产物，小于约10⁴个细胞／毫升发酵产物，小于约10³个细胞／毫升发酵产物，小于约10²个细胞／毫升发酵产物，或小于约10个细胞／毫升发酵产物。

在一个方面，可以将一个或多个细胞与发酵产物(如发酵物)分离。可以通过本领域中已知的任何方法，包括通过离心和／或过滤完成此类分离。例如，可以过滤发酵产物(在多步骤过程中过滤一次或若干次)以移除如颗粒物、细胞等此类组分。作为另外一种选择或除此之外，可以通过离心将一个或多个细胞和／或多个孢子中的一个与发酵产物(如发酵物)分离，从而制备上清液。根据离心的速度和持续时间，上清液可以不含细胞(即，无细胞上清液)，或上清液可以包含细胞，可以将包含细胞的上清液进行过滤或进一步离心以提供无细胞上清液。

在某些方面，乳双歧杆菌BL-04的发酵产物可以为培养基的粗提物。

在某些方面，乳双歧杆菌BL-04的发酵产物可以包含在培养乳双歧杆菌BL-04后(如在结束时)存在的成分的混合物。因此，术语发酵产物可以包含除活性成分之外的其他组分，例如颗粒物、固体、培养过程中未利用的底物、碎片、培养基和细胞废物。

本文所用的术语“乳双歧杆菌BL-04的细胞溶胞产物”是指通过裂解乳双歧杆菌BL-04细胞产生的细胞碎片和流体。优选地，在乳双歧杆菌BL-04裂解之前分离其细胞。

优选地，通过下列方法裂解乳双歧杆菌BL-04细胞：在37℃下在补充有0.05％半胱氨酸的MRS(或另一个合适的培养基)中厌氧培养乳双歧杆菌BL-04；通过离心(6000rpm／5分钟)收获细菌细胞；抽吸上清液，并将沉淀物可选地在-70℃下冷冻；向1.5mL细菌细胞培养物的沉淀物中加入150μL T10E1(10mM Tris-HCl，pH7.5；1mM EDTA)并涡旋以再悬浮细胞沉淀物；将1μL Ready-Lyse^TM溶菌酶(Epicentre，Vol10，No.3，2003(Epicentre公司，第10卷，第3期，2003年))添加至细菌的各个再悬浮的沉淀物(来自1至1.5mL培养物)；在37℃下孵育30分钟过夜；将1μL蛋白酶K(50μg/μL)放入用于各个1至1.5mL培养物沉淀物的150μL2X T&C裂解溶液(二者均在MasterPure DNA纯化试剂盒中提供，或单独销售)中稀释；将150μL蛋白酶K/裂解溶液加入样品中并充分混合；在65℃至70℃下孵育15分钟，每5分钟进行短暂涡旋；冷却样品至37℃；将1μL核糖核酸酶A(5μg/μL，在试剂盒中提供，或单独销售)加入各样品中并充分混合；在37℃下孵育30分钟；将样品置于冰上。

可以使用用于革兰氏阳性菌的备选裂解方法裂解乳双歧杆菌BL-04，存在一些本领域的技术人员已知的此类方法。

乳双歧杆菌BL-04的发酵产物可以适当地为存在于从在以下条件下培养的乳双歧杆菌BL-04的培养物中分离出来的上清液相中的发酵产物：在37℃下在补充有0.05％半胱氨酸的MRS(或另一个合适的培养基)中厌氧培养。

在一个实施方案中，可以通过在培养基中培养细菌直至培养物在λ600的光密度达到至少0.6(优选0.6至1.5)可获得(优选获得)发酵产物；任选地，通过离心和／或过滤(例如，在25℃下离心5分钟，3000g和／或无菌过滤)移除细菌以得到包含一种或多种活性成分的无细胞发酵产物。

适当地，使用具有1.0％糖或无糖的MRS培养基可获得(优选获得)发酵产物。适当地，通过在37℃下培养细菌可获得(优选获得)发酵产物。适当地，通过厌氧培养细菌可获得(优选获得)发酵产物。

乳双歧杆菌BL-04的培养可以进行约1至约72小时(h)，约5至约60小时，或约10至约54小时或24至48小时。

在一个方面，可以进行培养直至发生营养物质枯竭(优选全部营养物质)。

在一个方面，培养持续一段有效时间以达到细菌生长的稳定期。

在培养过程中的温度可以从约30至约50℃，从约32至约40℃，或从约34至约38℃，或为约37℃。

在培养过程中的pH可以为从约5至约9，从约5至约6，从约6至约7，从约7至约8的pH。

在一个方面，优选地在通气条件下进行培养。

分批和连续培养是本领域的普通技术人员已知的。本发明的发酵产物可以使用分批或连续培养进行制备。

适当地，可以在培养过程中或在培养过程结束时收获发酵产物。

在一个方面，在指数期内或在指数期结束时收获本发明的发酵产物。

在一个方面，在稳定期或在稳定期内收获本发明的发酵产物。

在本发明的一个方面，可以在商业条件下在大桶中制备发酵产物。

在一个方面，在培养过程中(如在发酵过程中)搅动和／或搅拌培养物。

在一个方面，在培养过程中监测和／或控制氧化水平。

适当地，根据本发明的包含乳双歧杆菌BL-04或乳双歧杆菌BL-04的发酵产物或乳双歧杆菌BL-04的细胞溶胞产物的组合物在冷冻之前或之后可以为细菌悬浮液的形式，或为浓缩物的形式，或为干燥、冻干或冷冻的形式。无论使用何种形式，均可以冷冻菌株。

在一个实施方案中，根据本发明的包含乳双歧杆菌BL-04的组合物不包含另外的微生物，如不包含另外的益生菌细菌。

在一个实施方案中，根据本发明的组合物包含乳双歧杆菌BL-04，以及(例如)赋形剂、稀释剂或载体。

适当地，根据本发明的包含乳双歧杆菌BL-04和／或乳双歧杆菌BL-04的发酵产物和／或乳双歧杆菌BL-04的细胞溶胞产物的组合物可以包含一种或多种添加剂。在干燥和／或低压冻干组合物的过程中可以适当地添加添加剂。

根据本发明使用的包含乳双歧杆菌BL-04的组合物可以包含10⁶至10¹²CFU细菌／克组合物，并且更具体地讲，10⁸至10¹²CFU细菌／克组合物，对于冻干形式优选10⁹至10¹²CFU／g。

适当地，根据本发明使用的包含乳双歧杆菌BL-04的组合物可以约10⁶至约10¹²CFU乳双歧杆菌BL-04／剂量，优选约10⁸至约10¹²CFU乳双歧杆菌BL-04／剂量的剂量施用。术语“每剂量”是指每天或每次摄入(优选每天)向受试者提供该量的乳双歧杆菌BL-04。例如，如果在食物中(例如在酸乳酪中)施用乳双歧杆菌BL-04，那么酸乳酪将优选地包含约10⁸至10¹²CFU乳双歧杆菌BL-04。然而，作为另外一种选择，该量的乳双歧杆菌BL-04可以分成多次施用，每次包含较小量的微生物负荷，只要受试者在任何具体时间内(例如每24h周期)获得的乳双歧杆菌BL-04的总量为约10⁶至约10¹²CFU乳双歧杆菌BL-04，优选10⁸至约10¹²CFU乳双歧杆菌BL-04。

根据本发明乳双歧杆菌BL-04的有效量可以为至少10⁶CFU微生物／剂量，优选约10⁶至约10¹²CFU微生物／剂量，优选约10⁸至约10¹²CFU微生物／剂量。

在一个实施方案中，优选地根据本发明使用的乳双歧杆菌BL-04可以约10⁶至约10¹²CFU微生物／天，优选约10⁸至约10¹²CFU微生物／天的剂量施用。因此，在该实施方案中的有效量可以为约10⁶至约10¹²CFU微生物／天，优选约10⁸至约10¹²CFU微生物／天。

在一个实施方案中，优选地根据本发明使用的乳双歧杆菌BL-04可以约10⁸至约10¹⁰CFU／天，优选约1×10⁹至3×10⁹CFU／天(例如约2×10⁹CFU微生物／天)的剂量施用。

CFU代表“菌落形成单位”。

在一个实施方案中，可以使用根据本发明的包含乳双歧杆菌BL-04和／或乳双歧杆菌BL-04的发酵产物和／或乳双歧杆菌BL-04的细胞溶胞产物的组合物以改变受试者的药疗摄入量(如感冒药疗和／或流感药疗)。

在一个实施方案中，术语“改变”是指“减少”。

药疗的改变和／或减少是指与安慰剂对照相比改变或减少。

安慰剂对照未施用根据本发明的包含乳双歧杆菌BL-04和／或乳双歧杆菌BL-04的发酵产物和／或乳双歧杆菌BL-04的细胞溶胞产物的组合物。安慰剂对照可以施用蔗糖。

本文所用的术语“药疗”优选地是指感冒药疗或流感药疗。这可以包括以下类型药疗中的一者或多者：喉咙痛治疗、黏膜炎治疗、咳嗽治疗、减充血剂、抗组胺剂、退烧药、止疼药、镇咳剂(止咳药)、抗生素或祛痰剂(用于稀释痰液)。

药疗可以包括或为下列中的一者或多者：减充血剂、抗组胺剂、退烧药、止疼药(如用于头疼和／或其他各种疼痛)、非甾体抗炎药(NSAID)、止咳药(或镇咳剂)、抗生素或祛痰剂(用于稀释痰液)。

止疼药可以包括以下活性成分中的一者或多者：例如扑热息痛、阿司匹林、布洛芬。

退烧药可以包括以下活性成分中的一者或多者：例如阿司匹林、布洛芬、水杨酸镁、萘普生。

减充血剂可以包括以下活性成分中的一者或多者：例如苯丙醇胺(PPA)和／或伪麻黄碱和／或去氧肾上腺素。

镇咳剂(或止咳药)可以包括(例如)福尔可定和／或那可丁。

祛痰剂可以包括以下活性成分中的一者或多者：例如愈创甘油醚、乙酰半胱氨酸或氨溴索。

抗组胺剂可以包括以下活性成分中的一者或多者：例如溴苯那敏；扑尔敏、乘晕宁、苯海拉明、多西拉敏；氯雷他定；西替利嗪或非索非那丁。

抗生素可以包括以下活性成分中的一者或多者：阿奇霉素、克拉霉素、地红霉素、红霉素、罗红霉素、醋竹桃霉素、青霉素、阿莫西林、莱莫西林(rimacillin)或氨苄青霉素。

本文所用的术语“药疗摄入量”是指受试者服用的(感冒和／或流感)药疗的总数和／或受试者使用(感冒和／或流感)药疗的总天数。

在一个实施方案中，可以使用根据本发明的包含乳双歧杆菌BL-04和／或乳双歧杆菌BL-04的发酵产物和／或乳双歧杆菌BL-04的细胞溶胞产物的组合物以减少受试者服用的感冒和／或流感药疗的总数和／或减少受试者使用感冒和／或流感药疗的总天数(如与安慰剂对照相比)。

根据本发明的包含乳双歧杆菌BL-04和／或乳双歧杆菌BL-04的发酵产物和／或乳双歧杆菌BL-04的细胞溶胞产物的组合物可以施用于或作为食物产品，或可以作为可药用组合物施用。

在一个实施方案中，本发明的方法或用途使受试者中的粒细胞(中性粒细胞)吞噬活性增加。优选地，这使活性增加至少1％、至少3％、至少5％、至少7％、至少10％、至少12％、至少15％、至少17％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％或至少50％。

在一个实施方案中，本发明的方法或用途使受试者中的单核细胞吞噬活性增加。优选地，这使活性增加至少1％、至少3％、至少5％、至少7％、至少10％、至少12％、至少15％、至少17％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％或至少50％。

在本发明的一个实施方案中，根据本发明的包含乳双歧杆菌BL-04和／或乳双歧杆菌BL-04的发酵产物和／或乳双歧杆菌BL-04的细胞溶胞产物的组合物包含至少一种另外的益生菌微生物，优选至少一种另外的益生菌细菌。

在本说明书中，术语“益生菌微生物”被定义为涵盖任何非病原性微生物，当施用足够量的活体(如活的)非病原性微生物时，其赋予宿主健康益处。这些益生菌菌株通常具有穿过消化道的上部后存活的能力。它们是非病原性无毒的，并且一方面通过与消化道内常居细菌群的生态相互作用发挥其对健康的有益作用，并且另一方面通过它们的能力以积极的方式经由“GALT”(肠道相关淋巴组织)影响免疫系统。根据益生菌的定义，当给定足够的量时，这些微生物具有穿过肠道后存活的能力，然而它们不能穿过肠屏障，并因此在胃肠道的内腔和／或壁中诱导产生其主要作用。然后，在施用期间它们形成常居细菌群的一部分。这种定植(或短暂定植)能够使益生菌微生物发挥有益作用，例如抑制细菌群中存在的潜在病原性微生物并与肠道的免疫系统相互作用。

在优选的实施方案中，另外的益生菌微生物为细菌，优选地为益生菌乳酸菌和／或益生菌双歧杆菌(Bifidobacterium)。

在一些实施方案中，细菌可以为来自下列属中的一者或多者的细菌：乳球菌属(Lactococcus)、链球菌属(Streptococcus)、片球菌属(Pediococcus)、肠球菌属(Enterococcus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、肉食杆菌属(Carnobacterium)、丙酸杆菌属(Propionibacterium)、双歧杆菌属、乳杆菌属(Lactobacillus)、短杆菌属(Brevibacterium)和漫游球菌属(Vagococcus)。在一个优选的实施方案中，所述至少一个另外的益生菌微生物选自乳杆菌属、链球菌属、肠球菌属、双歧杆菌、酵母菌属。

优选地，待根据本发明使用的另外的微生物是通常认为安全且优选经GRAS批准的微生物。

本领域技术人员将容易地认识到来自用于食品和／或农业工业及通常认为适于人类和／或动物食用的本文所述属内的微生物的具体菌种和或菌株。

优选地，根据本发明使用的另外的微生物是适于人类和／或动物食用的一种。

在一个实施方案中，优选地另外的微生物来自乳杆菌属或双歧杆菌属或是它们的混合物。适当地，微生物可以是来自嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、弯曲乳杆菌(L.curvatus)、鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus)、干酪乳杆菌(L.casei)、副干酪乳杆菌(L.paracasei)、唾液乳杆菌(L.salivarius)、乳双歧杆菌、动物双歧杆菌(B animalis)、长双歧杆菌(B.longum)、和／或两歧双歧杆菌(B.bifidum)菌种的菌株。在一个实施方案中，优选地微生物可以是来自嗜酸乳杆菌、弯曲乳杆菌、唾液乳杆菌和／或乳双歧杆菌菌种的菌株。

在一个实施方案中，优选地微生物来自链球菌属。

在一个实施方案中，优选地微生物来自肠球菌属。

优选地微生物可以是来自乳双歧杆菌菌种(例如乳双歧杆菌420或乳双歧杆菌HN019)的菌株。

对于一些实施方案，另外的微生物可以是不止一种的益生菌微生物(优选不止一种的益生菌)的混合物；不止一种的乳酸菌的混合物；或一种或多种益生菌微生物(优选益生菌)和一种或多种乳酸菌的混合物。优选地，混合物可以包括一种或多种来自乳杆菌属和／或双歧杆菌属的菌株。

根据本发明使用的另外的微生物(优选乳杆菌属，例如嗜酸乳杆菌、唾液乳杆菌和弯曲乳杆菌)优选地为革兰氏阳性菌株。

它可以有利地为用同质发酵型新陈代谢引起乳酸产生的过氧化氢酶阴性菌株。

根据本发明使用的另外的微生物(优选乳杆菌属，例如嗜酸乳杆菌、唾液乳杆菌和弯曲乳杆菌)还可以产生积极抵抗其他微生物的细菌素，例如莴苣苦素。

优选地，根据本发明使用的另外的微生物(优选乳杆菌属，例如嗜酸乳杆菌、唾液乳杆菌和弯曲乳杆菌)在酸性pH条件下具有良好的胃蛋白酶抗性、良好的胰酶抗性和／或良好的胆汁盐耐受性。

在一个实施方案中，根据本发明的另外的微生物(优选乳杆菌属，例如嗜酸乳杆菌)可以是被描述为“疏水性”，即对极性或非极性的疏水性有机溶剂(例如正癸烷、氯仿、十六烷或二甲苯)具有很强的亲和力的微生物(优选乳杆菌属，例如嗜酸乳杆菌)。

根据本发明优选的嗜酸乳杆菌可以为嗜酸乳杆菌PTA-4797。嗜酸乳杆菌的这种菌株已经被位于法国布洛涅-比朗库专邮区92512，阿方加罗沿河路26号的罗地亚化学公司(Rhodia Chimie，26，quai Alphonse Le Gallo，92512BOULOGNE-BILLANCOURT CedexFrance)根据布达佩斯条约在美国典型培养物保藏中心(ATCC)注册，其中它以注册号PTA-4797记录。

应当理解，可以将根据本发明的组合物配制成药剂、食物产品或饮食补充剂。在一个优选的实施方案中，将组合物配制成饮食补充剂。

有利的是，在产品为食品的情况下，乳双歧杆菌BL-04和／或乳双歧杆菌BL-04的发酵产物和／或乳双歧杆菌BL-04的细胞溶胞产物在提供食物产品供零售商销售的正常的“保质期”或“有效期”内保持有效(如细菌一直为活的)。优选地，应该延长有效时间超过此类日期，直到当食品开始出现腐败变质的正常的保鲜期结束。所期望的时间长度以及正常的架存期将因食品不同而有所变化并且那些本领域技术人员应认识到架存期将视食品类型、食品尺寸、储存温度、处理条件、包装材料和包装设备而有所变化。

优选地，本发明的方法和用途引起至少一个细胞因子的表达的调节。优选地，细胞因子选自GM-CSF、IL-1RA、IL-6、IL-8、IL10、TNF-α和INF-γ。

在一个实施方案中，本发明的组合物和／或发酵产物中的乳双歧杆菌BL-04是活的。

术语“活的”是指具有代谢活性或能够分化的微生物(细菌)。

在一个优选的实施方案中，组合物包含活的乳双歧杆菌BL04。

在一些实施方案中，在形成本发明的包含乳双歧杆菌BL04的组合物之前，将乳双歧杆菌BL04(如活细胞)从其中培养乳双歧杆菌BL04的培养基或发酵产物中分离出来。

受试者

本文所用的术语“受试者”意指动物。优选地，受试者为哺乳动物，包括例如牲畜(包括牛、马、猪、鸡和羊)，以及人类。在本发明的一些方面，动物为伴侣动物(包括宠物)，例如狗或猫。在本发明的一些方面，受试者可以适当地为人类。

在一个实施方案中，受试者为人类。

在一个实施方案中，受试者可以为女性。

在一个实施方案中，受试者可以为男性。

在一个实施方案中，受试者不是儿童。本文所用的术语“儿童”是指7岁或年龄更小的人。

在一个实施方案中，受试者为8岁或年龄更大的人。

在一个实施方案中，受试者为16岁或年龄更大的人。

在一个实施方案中，受试者为18岁或年龄更大的人。

在一个实施方案中，受试者不是免疫失能的受试者。

在一个实施方案中，受试者是健康的受试者。

在一个实施方案中，受试者不是运动性免疫抑制的受试者。

在一个实施方案中，受试者不是运动员，如不是优选运动员，如不是长跑运动员。

在一个实施方案中，受试者是健康的积极锻炼身体的成年人。本文所用的成年人是指18岁或年龄更大的人。

在一个实施方案中，受试者具有完全发展的以及未失能的免疫系统。

优点

发明人意外地发现，与健康的积极锻炼身体的成年人中的其他益生菌或安慰剂相比，使用乳双歧杆菌BL-04显著降低了呼吸道疾病(如URTI和／或下呼吸道疾病)或呼吸道疾病的症状的发病率、持续时间和／或严重程度。

令人惊奇的是，已经使用双歧杆菌的单个菌株(如单独地或组合物中没有另外的微生物)发现了该效果。

本发明的一个优点是乳双歧杆菌BL-04显著降低了URTI和下呼吸道疾病的发病率、持续时间和／或严重程度；或显著降低了URTI和下呼吸道疾病的症状的发病率、持续时间和／或严重程度。

这是双歧杆菌的菌株首次显示出对URTI和下呼吸道疾病或对URTI和下呼吸道疾病的症状有效果。

重要地是受试者为健康的积极锻炼身体的成年人。这与以前在儿童或免疫抑制的个体中(即在他们的免疫系统未完全发展或在某些方面受到挑战的个体中)进行的研究形成对比。一些研究集中于优秀运动员(如长跑运动员)，同样这些个体经过紧张的训练并患有运动性免疫抑制。

在这种情况下，发明者意外地在非免疫抑制个体中发现了有益效果。

此外，本发明的发明人意外地发现，即使当不在合生元组合物或具有维生素和／或矿物质的组合物中时，乳双歧杆菌BL-04也可以显著降低呼吸道疾病(如URTI和／或下呼吸道疾病)或呼吸道疾病的症状的发病率、持续时间和／或严重程度。

本发明的发明人发现，单独地使用乳双歧杆菌BL-04可以获得本文观察到的有益效果。这可以得到许多优点，包括简化补充剂的制备和／或降低补充剂的制备和补充剂自身的成本。

另外的优点是可以在没有额外的益生菌的情况下使用乳双歧杆菌BL-04，这具有简化了关于补充剂的稳定性问题的优点。因此，本发明的一个优点是当技术人员仅关心单个细菌而不是不止一种细菌的稳定性时，包含乳双歧杆菌BL-04的组合物(如单独地或在不存在另一个微生物的情况下)更易稳定。

除此之外或作为另外一种选择，在组合物中使用单个细菌菌株与混合的菌株组合物相比可以具有降低组合物的使用成本的优点。

本发明的显著的另外的优点是，发明人意外地发现根据本发明的组合物(包含乳双歧杆菌BL-04)的用途可以用于改变或减少受试者摄入的药疗。

因此，本发明可以有利地减少个体使用的药疗。这包括减少个体使用的下列药剂中的一者或多者的量：减充血剂、抗组胺剂、退烧药、止疼药(如用于头疼和／或其他各种疼痛)、非甾体抗炎药(NSAID)、止咳药(或镇咳剂)、抗生素或祛痰剂(用于稀释痰液)。

药剂

本文所用的涉及本发明的术语“药剂”涵盖人类医学和兽医学中使用的用于人和动物的药剂。此外，本文所用的术语“药剂”是指任何提供治疗和／或有益效果的物质。本文所用的术语“药剂”不一定限制于需要上市许可证的物质，但可以包括可用于化妆品、保健品、食物(包括例如饲料和饮料)和自然疗法中的物质。

治疗

应当理解，本文所有对治疗的引用包括根治性治疗、姑息治疗和预防性治疗。

基本上纯的形式和／或分离的形式

对于某些方面而言，根据本发明的微生物和／或发酵产物和／或细胞溶胞产物可以是基本上纯的形式或可以是分离的形式。

术语“基本上纯的形式”用于表明根据本发明的微生物和／或发酵产物和／或细胞溶胞产物以高水平存在。当微生物和／或发酵产物和／或细胞溶胞产物为基本上纯的形式时，微生物和／或发酵产物和／或细胞溶胞产物有利地为存在于组合物中的主要组分。优选地，其以超过30％、超过50％、超过75％、超过90％或甚至超过95％的水平存在，所述水平相对于研究中的总体组合物基于干重／干重计进行测定。

在非常高的水平(如在超过90％、超过95％或超过99％的水平)下，微生物和／或发酵产物和／或细胞溶胞产物可以被视为是“分离的”。

可以基本上不含在其他情况下可能与该物质结合的一种或多种污染物的形式提供本发明的生物活性物质(包括多肽、核酸分子、通过筛选识别／可识别的碳水化合物、通过筛选识别／可识别的脂质、通过筛选识别／可识别的部分等)。因此，例如，它们可以基本上不含一种或多种潜在污染性的多肽和／或核酸分子。它们可以基本上不含其他细胞组分(如细胞膜、细胞质等)的形式提供。当组合物基本上不含给定污染物时，污染物将处于低水平(如处于少于10％、少于5％或少于1％的水平，基于上述干重／干重计)。

与其他组分的组合

用于本发明的乳双歧杆菌BL04和／或其发酵产物和／或其细胞溶胞产物可以与其他组分组合使用。因此，本发明也涉及组合。乳双歧杆菌BL04和／或其发酵产物和／或其细胞溶胞产物在本文中可以被称为“本发明的组合物”。

本发明的组合包含本发明的组合物和适于人类和动物食用且能够为食用者提供医学或生理学益处的另一组分。

本发明的组合的其他组分包括聚葡萄糖(例如)和／或麦芽糖糊精和／或乳糖醇。可以任选地将这些其他组分添加至组合物中以辅助干燥过程并帮助微生物的存活。

其他合适组分的另外的例子包括如下中的一者或多者：增稠剂、胶凝剂、乳化剂、粘合剂、结晶改良剂、甜味剂(包括人造甜味料)、流变改性剂、稳定剂、抗氧化剂、染料、酶、载体、溶媒、赋形剂、稀释剂、润滑剂、调味剂、着色物质、助悬剂、崩解剂、制粒粘合剂等。这些其他组分可以是天然的。这些其他的组分可通过使用化学和／或酶学技术来制备。

在一个实施方案中，微生物和／或其发酵产物和／或其细胞溶胞产物可以是胶囊化的。

在一个优选的实施方案中，用于本发明的微生物和／或其发酵产物和／或其细胞溶胞产物可以与一种或多种脂质组合使用。

例如，用于本发明的微生物和／或其发酵产物和／或其细胞溶胞产物可以与一种或多种脂质微胶粒组合使用。脂质微胶粒可为简单脂质微胶粒或复杂脂质微胶粒。

脂质微胶粒可以为两性物质的取向分子的聚集体。

脂质微胶粒可以为在溶液中与形成其的化学物质以平衡状态存在的两性物质的取向分子的胶体尺寸的聚集体。胶束通常为带电的。在水溶液中，胶束聚集体的各分子取向为它们的极性基团指向含水介质，而它们的疏水部分指向胶束中心。

脂质微胶粒可以包含脂质和／或油。

本文所用的术语“增稠剂或胶凝剂”是指通过减缓或防止粒子(不可混溶液的小滴、空气或不溶性固体)运动而防止分离的产品。在单独的水合分子引起粘度增加，从而减缓分离时，发生增稠。当水合的分子连接而形成可捕获粒子的三维网络，由此使这些粒子固定时发生胶凝。

本文所用的术语“稳定剂”定义为防止产品(例如食物产品)随时间推移发生变化的成分或成分组合。

本文所用的术语“乳化剂”指防止乳液发生分离的成分(例如食物产品成分)。乳液是两种不混溶的物质，一种以小滴存在，包含于另一者中。乳液可以由水包油构成，其中小滴或分散相为油而连续相为水；或由油包水构成，其中水变成分散相而连续相为油。也可通过使用乳化剂使泡沫(其是液包气)和混悬液(其为液固混悬液)稳定。通气可以发生于三相系统中，其中空气被液体油截留，然后被通过乳化剂稳定的团聚的脂肪晶体稳定。乳化剂具有与水具有亲和力的极性基团(亲水性)以及吸引到油的非极性基团(亲油性)。它们被吸收到两种物质的界面上，从而形成起到稳定乳液作用的界面膜。乳化剂的亲水／亲油性能受分子结构影响。这些性能通过亲水／亲油平衡(HLB)值确定。低HLB值表明较大的亲油趋势，用于稳定油包水乳液。高HLB值属于亲水性乳化剂，通常用于水包油乳液中。这些值来源于简单的系统。因为食品通常包含影响乳化性能的其他成分，因此HLB值并不总是用于乳化剂选择的可靠指导。

本文所用的术语“粘合剂”指通过物理或化学反应将产品粘合在一起的成分(例如食物成分)。例如，在“胶凝”期间，水被吸收，从而提供结合效果。然而，粘合剂可吸收其他液体(例如油)，从而将其保持在产品中。在本发明的上下文中，粘合剂将通常用于固体或低水分产品(例如烘焙产品：甜点、甜甜圈、面包等等)中。

本文所用的术语“晶体改性剂”指影响脂肪或水的结晶的成分(例如食物成分)。由于两个原因冰晶的稳定是重要的。首先从分离角度来看，与产品稳定性直接相关。产品经过越多的冷冻／融化循环，形成的冰晶越大。这些大的晶体可以破坏天然存在的产品结构(如细胞壁)或通过“激活(elation)”形成的产品结构。因为水不再被保持在适当的位置，产品在融化之后可能表现出脱水收缩或液体渗出。第二，在产品是在冷冻时被食用的情况下，这些大的晶体会产生令人不快的砂砾般的口感。

“载体”或“溶媒”是指适于化合物施用的材料，包括本领域已知的任何无毒且不会以有害方式与组合物的任何组分发生相互作用的材料，例如任何液体、凝胶、溶剂、液体稀释剂、增溶剂等。

营养上可接受的载体的例子包括(例如)水、盐溶液、醇、有机硅、蜡、石油凝胶、植物油、聚乙二醇、丙二醇、脂质体、糖、明胶、乳糖、直链淀粉、硬脂酸镁、滑石粉、表面活性剂、硅酸、粘性石蜡、香料油、脂肪酸甘油单酯和脂肪酸甘油二酯、石油醚脂肪酸酯、羟甲基-纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等等。

赋形剂的例子包括如下中的一者或多者：微晶纤维素和其他纤维素、乳糖(lactose)、柠檬酸钠、碳酸钙、二碱式磷酸钙、甘氨酸、淀粉、乳糖(milk sugar)和高分子量聚乙二醇。

崩解剂的例子包括如下中的一者或多者：淀粉(优选玉米、马铃薯或木薯淀粉)、淀粉乙醇酸钠、交联羧甲基纤维素钠和某些复合硅酸盐。

制粒粘合剂的例子包括如下中的一者或多者：聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、蔗糖、麦芽糖、明胶和阿拉伯胶。

润滑剂的例子包括如下中的一者或多者：硬脂酸镁、硬脂酸、山嵛酸甘油酯和滑石粉。

稀释剂的例子包括如下中的一者或多者：水、乙醇、丙二醇和丙三醇以及它们的组合。

其他的组分可同时使用(例如当它们混合在一起时或者甚至当它们通过不同的途径递送时)或者依序使用(例如它们可通过不同的途径递送)。

优选地，当本发明的组合物与任何其他组分混合时，微生物一直为活的。

本文所用的术语“适于动物或人类食用的组分”是指这样的化合物，其被添加到或可添加到本发明的组合物作为补充剂，该补充剂可对食用者有营养好处，可以是纤维替代物，或者对食用者具有一般有益的效果。该成分可以用于大量不同的需要凝胶化、组织化、稳定、悬浮、形成膜和结构化、保留汁液而不增加多余粘度的产品中。优选地，该成分将能够提高活的培养物的架存期和稳定性。

组分可以是益生元，例如藻酸酯、黄原胶、果胶、刺槐豆胶(LBG)、菊粉、瓜尔胶、低聚半乳糖(GOS)、低聚果糖(FOS)、聚葡萄糖(如)、乳糖醇、低聚乳果糖、大豆低聚糖、异麦芽酮糖、低聚异麦芽糖、低聚葡萄糖和低聚木糖。

待用于本发明组合中的组合物的最佳量将取决于待处理的产品和／或产品与组合物的接触方法和／或其预期用途。用于组合物中的活的微生物的量应该是足够有效的量，并在提高包含所述组合物的食物产品的香味、风味、味淡、稠度、组织、质地、口感、粘度、结构和／或感官特性、营养和／或健康益处中保持足够有效的量。该有效时间的长度应延伸最多至至少利用该产品的时间。

浓缩物

用于本发明中的组合物可以是浓缩物形式。通常这些浓缩物包含基本上高浓度的乳双歧杆菌BL04，(如活的乳双歧杆菌BL04)和／或其发酵产物和／或其细胞溶胞产物。

浓缩物形式的散剂、颗粒剂和液体组合物可用水稀释或再悬浮于水或其他合适的稀释剂(例如适当的生长培养基，例如乳或矿物质或植物油)中，以产生可供使用的组合物。

可根据本领域已知的方法制备浓缩物形式的本发明的组合。

在本发明的一个方面中，以浓缩形式的组合物接触产品。优选地，产品与喷雾干燥和／或再悬浮的组合物接触。

可通过本领域已知的方法喷雾干燥或冷冻干燥本发明的组合物。

使用喷雾干燥方法制备粒子的典型方法涉及溶解于适当溶剂中的固体材料(如发酵培养基中微生物的培养物)。或者，可将材料悬浮或乳化于非溶剂中以形成混悬液或乳液。可任选在该阶段添加其他成分(如上文所论述的)或诸如抗微生物剂、稳定剂、染料和辅助干燥过程的试剂之类的组分。

然后使溶液雾化以形成小滴的细雾。小滴立刻进入干燥室中，在其中其接触干燥气体。溶剂由小滴蒸发进干燥气体中而固化小滴，从而形成粒子。随后从干燥气体分离粒子并收集。

产品

在本发明中可以使用任何可以受益于组合物的产品。包括(但不限于)乳制品和乳制品的衍生产品、饮食补充剂和医药产品。

以举例的方式，本发明的组合物可以作为成分用于如下物质：软饮料、果酱或包含乳清蛋白的饮品、保健茶、可可饮料、乳饮料和乳酸菌饮料、酸奶和饮料型酸奶、奶酪、冰淇淋、冰糕和甜点、糖果、饼干糕点和蛋糕混合料、小吃、均衡食物和饮品、水果馅料、保健釉、巧克力焙烤食品馅、干酪饼味馅料、水果味糕点馅料、糕点和炸面图糖霜、速食烘焙馅料奶油、饼干用馅料、即用型烘焙馅料、低卡路里馅料、成人营养饮品、酸化大豆／果汁饮品、无菌／杀菌巧克力饮料、酒吧混合饮品、饮料粉、钙强化大豆／纯的和巧克力味奶、钙强化咖啡饮品。

组合物还可以用作食物产品中的成分，例如美式软干酪酱、用于搓碎和切碎的干酪的抗结块剂、土豆条蘸料、奶油干酪、干混鞭顶无脂酸奶油、冷冻／融化奶制鞭奶油、冷冻／融化稳定鞭顶、低脂肪和低盐的天然切达干酪、低脂肪的瑞士酸乳酪、充气的冷冻甜点、硬包装的冰淇淋、易标记的更经济和保存延长的硬包装冰淇淋、低脂肪冰淇淋：软性食品、烤肉味调味料、干酪蘸酱、生干酪上的稀奶油、干混的意大利白酱、混合的乳酪调味料、干混的西红柿酱等。

对于某些方面，优选地，本发明可用于酸乳酪生产，例如发酵的酸奶饮品、酸乳酪、饮料型酸奶、干酪、发酵奶油、奶类甜点等。

适当地，组合物还可以用作干酪应用、肉类应用或包含保护性培养物的应用中的一者或多者的成分。

本发明还提供了制备食品或食品成分的方法，该方法包括将根据本发明的组合物与其他食品成分混合。

有利地，本发明涉及与本发明的组合物(以及任选地与其他组分／成分)接触的产品，其中组合物以能够改进产品的营养和／或健康益处的量使用。

本文所用的术语“接触”是指将本发明的组合物间接或直接施加至产品中。可使用的施加方法的例子包括(但不限于)在包含组合物的材料中处理产品、通过将组合物与产品混合而直接施加、将组合物喷涂至产品表面上或将产品浸入组合物的制剂中。

当本发明的产品为食品时，本发明的组合物优选地与产品混合。作为另外一种选择，食品的乳液或原始成分中可以包含组合物。在另一种备选形式中，组合物可以被用作调料、浇汁、着色剂混合物等。

对于一些施加而言，重要的是，使组合物在待影响／处理的产品表面上可用或可用于待影响／处理的产品表面。这使得组合物能赋予如下有利特性中的一者或多者：营养和／或健康益处。

本发明的组合物可以应用于以控制量的活的微生物来点缀、涂覆和／或浸渍产品。

食物

本发明的组合物可用作食物或用于食物的制备。在此，术语“食物”被广义地使用，包括人类的食物以及动物的食物(即饲料)。在优选的方面，食物是给人类食用的。

取决于用途和／或应用的模式和／或施用的模式，食物可以为溶液的形式或作为固体。

当用作食物(如功能性食物)或用于食物制备时，本发明的组合物可以与下列物质中的一者或多者结合使用：营养上可接受的载体、营养上可接受的稀释剂、营养上可接受的赋形剂、营养上可接受的辅助剂、营养活性成分。

优选地，组合物用于发酵牛奶或蔗糖强化牛奶或具有蔗糖和／或麦芽糖的乳品培养基，其中生成的含有组合物的所有组分(即所述的根据本发明的微生物)的培养基可以作为成分以合适的浓度(例如以提供日剂量10⁶至10¹⁰CFU的最终产品中的浓度)添加至酸奶中。根据本发明的微生物可以在酸乳酪发酵之前或之后使用。

对于某些方面，根据本发明的微生物或根据本发明的组合物用作或用于制备动物饲料(例如牲畜饲料，特别是家禽(例如鸡)饲料)或宠物食品。

食物成分

本发明的组合物可以用作食物成分和／或饲料成分。

本文所用的术语“食物成分”或“饲料成分”包括这样的配制物，其为功能性食物或食品或可作为营养补充剂添加至功能性食物或食品。

取决于用途和／或应用的模式和／或施用的模式，食物成分可以为溶液的形式或作为固体。

食物补充剂

本发明的组合物可以为(或可以添加至)食物补充剂。

功能性食物

本发明的组合物可以为(或可以添加至)功能性食物。

如本文所用，术语“功能性食物”是指不仅能够提供营养效果，而且还能够使食用者获得进一步的有益效果的食物。

因此，功能性食物为具有赋予该食物除了纯粹营养效果之外的特定功能(例如医学或生理有益效果)的掺入其中的组分或成分(如本文描述的那些)的一般食物。

尽管对功能性食物没有法律定义，但对该领域感兴趣的大多数团体都认可功能性食物为除了基础的营养效果之外具有特定保健效果而销售的食物。

某些功能性食物为营养制品。这里，术语“营养制品”意指这样的食物，其不仅能提供营养效果和／或口味满足，而且还能使食用者获得治疗(或其他有利)效果。营养制品跨越食物和药物之间的分界线。

益生菌

对于某些应用，据信本发明的组合物中的活的乳双歧杆菌BL04可以发挥益生菌培养物的作用。向本发明的组合物添加另外的益生菌和／或益生元也在本发明的范畴内。

这里，益生元为：

“非消化性食物成分，其通过选择性刺激一种或有限数量的有益细菌的生长和／或活性而有利地影响宿主”。

本文所用的术语“益生菌培养物”定义活微生物(例如，包括细菌或酵母)，其在(例如)以足够数量摄入或局部施加时可有利地影响宿主生物体，即通过赋予宿主生物体一种或多种可证实的健康益处。益生菌可改善一种或多种粘膜表面的微生物平衡。例如，粘膜表面可为肠、尿道、呼吸道或皮肤。本文所用的术语“益生菌”也涵盖可刺激免疫系统的有益分枝且同时减少粘膜表面(例如肠)中的炎性反应的活微生物。

尽管对于益生菌摄取无下限或上限，但已提出，至少10⁶至10¹²、优选至少10⁶至10¹⁰、优选10⁸至10⁹CFU作为日剂量将可在宿主生物(例如人类)中有效实现有益的健康效果。

除了根据本发明的微生物可以具有的益生菌效果，提供作为可以与组合物一起包含在组合中的其他化合物的益生元也在本发明的范围内。包含本发明的组合物的组合中的益生元组分具有减缓大肠中的发酵的特征。这种益生元可对肠道菌群产生积极效果，特别是在结肠的左侧，即尤其容易患病特别是肠癌和溃疡性结肠炎的肠道区域。

益生元通常是不在上消化道中降解或吸收的非消化性碳水化合物(低聚糖或多糖)或糖醇。用于商业产品中且根据本发明有用的已知益生元包括菊粉(低聚果糖或FOS)和低聚反式半乳糖(GOS或TOS)。其他合适的益生元包括帕拉金糖低聚糖、大豆低聚糖、龙胆低聚糖、木糖低聚物、不可降解的淀粉、乳蔗糖、乳酮糖、乳糖醇、麦芽糖醇、聚葡萄糖(即)等。

在一个实施方案中，本发明涉及根据本发明的乳双歧杆菌BL04和／或其发酵产物和／或其细胞溶胞产物与益生元的组合。

益生元可以与根据本发明的微生物和／或其发酵产物和／或其细胞溶胞产物同时(如与其一起的混合物或通过相同或不同途径同时递送)或在其之后(如通过相同或不同途径)施用。

合生元

本发明还设想将益生元和益生菌两者与本发明的组合物一起用作组合中的成分，当它们组合时，便成为合生元。此举的目的是将有益细菌的作用和对人体自身的有益细菌的刺激结合。此类混合物的开发和消费具有很大的潜力，因为它们中的一些可以良好的显示强效的协同营养和／或健康效果。

因此，本发明的组合物可以特别设计为包含能够向食用者提供合生元效果的不同组分。

药物

本发明的组合物可以用作药物或用于药物的制备。此处，术语“药物”以广义使用，包括用于人类的药物以及用于动物的药物(即兽医应用)。在优选的方面，药物是用于人类用途和／或用于畜牧业。

药物可以用于治疗的目的，其实质上可以是根治性的或姑息的或预防性的。药物甚至可以用于诊断目的。

当用作或用于制备药物时，本发明的组合物可以与下列物质中的一者或多者结合使用：药学上可接受的载体、药学上可接受的稀释剂、药学上可接受的赋形剂、药学上可接受的辅助剂、药学活性成分。

取决于用途和／或应用的模式和／或施用的模式，药物可以为溶液的形式或作为固体。

药物成分

本发明的微生物可以用作药物成分。此处，组合物可以是唯一的活性组分或其可以是大量(即两种或更多种)活性组分中的至少一种。

取决于用途和／或应用的模式和／或施用的模式，药物成分可以为溶液的形式或作为固体。

形式

本发明的微生物和／或其发酵产物和／或其细胞溶胞产物可以任何合适的形式使用，无论是单独地还是与其他组分或成分组合存在。同样，包含本发明的组合物和其他组分和／或成分(即成分-例如食物成分、功能性食物成分或药物成分)的组合可以任何合适的形式使用。

本发明的微生物或本发明的组合物可以固体或液体制剂或其备选形式使用。固体制剂的例子包括(但不限于)片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂和散剂，它们可以是可湿性的、喷雾干燥的或冷冻干燥的。液体制剂的例子包括但不限于水性、有机或水性-有机溶液剂、混悬剂和乳剂。

合适的形式的例子包括如下中的一者或多者：片剂、丸剂、胶囊剂、阴道栓剂、溶液剂或混悬剂，其可含有矫味剂或着色剂，用于即刻释放、延迟释放、调节释放、持续释放、脉冲释放或受控释放的应用。

以举例的方式，如果本发明的组合物是以片剂的形式使用(例如用作功能性成分)，该片剂还可以包含下列中的一者或多者：赋形剂，例如微晶纤维素、乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙、二碱式磷酸钙和甘氨酸；崩解剂，例如淀粉(优选玉米、马铃薯或木薯淀粉)、淀粉乙醇酸钠、交联羧甲基纤维素钠和某些复合硅酸盐；制粒粘合剂，例如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、蔗糖、明胶和阿拉伯树胶；还可以包括润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸、山嵛酸甘油酯和滑石粉。

用于制备这些形式的营养上可接受的载体的例子包括(例如)水、盐溶液、醇、有机硅(silicone)、蜡、石油凝胶、植物油、聚乙二醇、丙二醇、脂质体、糖、明胶、乳糖、直链淀粉、硬脂酸镁、滑石粉、表面活性剂、硅酸、粘性石蜡、香水油、脂肪酸甘油单酯和脂肪酸甘油二酯、石油醚(petroethral)脂肪酸酯、羟甲基-纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等等。

用于这些形式的优选赋形剂包括乳糖(lactose)、淀粉、纤维素、乳糖(milksugar)或高分子量聚乙二醇。

对于水性混悬剂和／或酏剂而言，可将本发明的组合物与各种甜味剂或矫味剂、着色物质或染料、与乳化剂和／或助悬剂以及与稀释剂(例如水、丙二醇和甘油)以及它们的组合进行组合。

形式还可以包括明胶胶囊；纤维胶囊、纤维片剂等；或甚至纤维饮料。

形式的进一步例子是例如以乳膏的形式。对于一些方面，微生物和／或其代谢物可以包括于药用乳膏和／或化妆用乳膏(例如防晒霜和／或晒后修复霜)中。

在一个方面，根据本发明的组合物可以气溶胶形式施用，例如通过鼻喷剂，例如用于施用于呼吸道。

实例结合以下实例和附图来进一步描述本发明，其中：

图1示出了用于表示本发明的实验的示意图。

图2示出了详细说明受试者的招募、流程和分析的临床试验报告统一标准(CONSORT)的流程图。

方法

实验方法：本研究涉及来自社会的健康的积极锻炼身体的个体的双盲安慰剂对照实验，以确定在2010年6月至2010年10月的150天之间补充益生菌是否降低了冬季期间的URTI(图1)。有两个实验组，安慰剂组和益生菌组，包括157名男性、152名女性共309名健康的积极锻炼身体的成年人，这两个实验组人数相当。参与者完成14天的准备期，在此期间停止使用所有益生菌和益生菌补充剂／强化食物以及免疫调节药疗或补充剂。在基线取样之后，受试者进入150天的增补期。要求所有的参与者保持记录每日疾病日记以记录疾病的模式(持续时间和严重程度)。从每组中选择用于免疫和微生物学功能的二级分析的参与者群体。每个参与者群体提供血液和粪便样本以及咽喉拭子，以检测补充剂对肠微生物群和上呼吸道微生物群、天然免疫功能(自然杀伤细胞功能和吞噬作用)的指标的效果。收集唾液样本，但分析将取决于是否鉴定出有益的临床结果。二级分析涉及收集去亚洲旅行的受试者的粪便拭子，以用于测定在旅行期间益生菌补充剂是否降低了抗生素耐受性大肠杆菌(Escherichia coli)的定植。

伦理委员会许可由澳大利亚体育学院(2010年2月19日)和格里菲斯大学(2010年3月11日)的伦理委员会授予。

受试者和招募

该研究招募了268名健康的积极锻炼身体的社会人士。在身体活动和疾病测量的统计分析中包括其中226名个体。包括在统计分析中的那些受试者特性在表1中详细说明。小组之间不存在本质区别。

入选标准：

根据要求每周进行最少三次锻炼的参与者的身体活动水平确定入选该研究。

排除标准：

要求所有参与者声明他们对可能影响潜在免疫功能的饮食和／或增补剂的使用。排除服用免疫调节药疗的所有参与者，包括进行基于类固醇的抗哮喘治疗的那些。还排除在之前的一个月内进行抗生素治疗的受试者。排除具有任何胃肠疾病症状(例如克罗恩病、乳糜泻和相关病症)的受试者。

初级结果测量：

初级临床结果测量的是研究期间中参与者中的URI疾病。要求受试者在研究期间在日常疾病日志上记录URTI和胸腔疾病的任何症状。简而言之，URTI的症状包括咽喉疼痛、打喷嚏、鼻塞或流鼻涕和咳嗽。下呼吸道疾病的症状包括咳嗽伴随胸闷和／或咳嗽伴随气喘。当连续数天记录两种或更多种症状时，对疾病的发作症状进行分类。根据症状对那一天日常活动的影响，将积极锻炼身体的个体的症状的功能性影响或严重程度自我评定为轻度、中度或重度：轻度-无变化，中度-日常活动减少，以及重度-完全停止活动。

二级结果测量

知觉压力和复原力：在增补之前和之后通过问卷调查测量参与者的知觉压力和复原力。心理和社会因素代表可以影响免疫力和健康的压力源。在增补之前和结束时所有受试者进行康纳戴维森韧性问卷调查。

来自每个治疗组的参与者的群体(乳双歧杆菌BL-04小组中53名，安慰剂小组中51名)提供用于后续二级结果测量的样本。

粪便微生物学

·细菌总数(真细菌)：

·粪便样本中细菌群的量化：

这些群可以包括(但不限于)拟杆菌门(Bacteroidetes)、肠杆菌科(Enterobacteriaceae)、乳杆菌属、双歧杆菌属梭菌属(Clostridium)XIV群和其他梭菌群，艰难梭状芽胞杆菌(Clostridium difficile)、柯林斯菌(Collinsella)、大肠杆菌、肠球菌属、普拉梭菌(Faecalibacterium prausnitzii)、罗氏菌属(Roseburia spp.)、韦荣氏球菌属(Veillonella spp.)和硫酸盐还原菌。用qPCR和／或其他相关非培养方法进行细菌量化。通过qPCR分析咽喉拭子细菌将集中于特别相关的细菌群，其可以包括(但不限于)金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、肺炎球菌属(Pneumococcus spp.)和链球菌属。

·抗生素耐受性大肠杆菌：

·嗜酸乳杆菌NCFM和乳双歧杆菌Bi-07和乳双歧杆菌BL-04：

血清

·自然杀伤细胞活性

·吞噬作用

数据分析

使用实用方法对益生菌治疗的临床和生理效果做出推论(结论)。该方法已经在若干文章(6)中进行了详细说明。该方法还符合国际医学杂志编辑委员会用于评估临床实验的指南。用该方法的优点来解决以假设检验和统计意义为基础的方法的一些缺点是公认的。该方法基于其中效果的真值中不确定性的范围落在临床上重要的值的阈值内的情况。真值中的不确定性为置信区间。因为在该研究中有许多效果，将99％的保守水平选为置信区间；换句话讲，每个效果的真值有99％的机会落在从数据中为其计算的置信区间内。当置信区间包括基本上为在一些积极和消极意义(例如有益的和有害的)上的值时，效果可能同时是有益的和有害的，在此推论，效果为不确定的或不清楚的。否则，推断效果是清楚的，指定给效果的量级是可观察到的量级，例如有益的、不重要的或有害的差值。

选择作为临床上重要的阈值对于研究中不同类型的结果变量有所不同。对于变量，例如基于3分制的症状的强度，以简单的平均值差值，即益生菌平均值减安慰剂平均值来分析益生菌治疗的效果。对于这种效果，默认阈值是在两组受试者标准偏差之间汇集的平均值等于0.20的正负差值。达到最小重要效果的方法被称为标准化方法，并提供用于中等效果、大效果和巨大效果(标准偏差为0.60、1.20和2.0)的阈值。这样，我们为其选择量级阈值的其他变量是每100天服用的药疗的数量、身体活动的强度、每周锻炼的天数、每周总锻炼小时数、每周总活动负荷(每周锻炼强度的乘积和锻炼天数的总和)以及针对它们作为任何治疗效果的机理的潜在作用而测量的唾液样本中的变量。将训练小时数和训练负荷的测量值在分析之前进行对数转化以使治疗的效果作为百分数进行适当分析，但要确定效果的量级以用于对数转化的变量。唾液测量值也在分析之前进行对数转化，但用于这些变量的可变性和效果通常比用于训练变量的可变性和效果大得多，并因此表示成因子。

表示或涉及症状的存在或次数的变量的量级阈值必须用不同的方法测定，因为将标准偏差用于此类变量是不合适的。所考虑的变量是每100天给定症状的发作次数、每100天症状的总天数和每100天症状的总负荷(每100天症状强度的乘积和症状的天数的总和)。按以下比率分析基于所有这些变量的益生菌治疗的效果：益生菌组的平均值除以安慰剂组的平均值。我们将比率1.10(即，益生菌组中变量的平均值大10％)认为是显著提升的阈值。因此，出于统计原因，益生菌组中显著下降的阈值为1／1.2或0.83的比率。这些比率类似于公共健康的研究中疾病和伤害的危险比，流行病学家认为1.1至1.3的危险比代表危险显著提升。遗憾的是，至今未就代表危险适度上升和下降、大幅上升和下降以及极大上升和下降的阈值达成共识。

使用线性权重因子来分析定义为在增补开始和结束之后2周的“肩”周期中的数据，以向基线期和全面治疗期分配合适的训练评分和症状评分比率。因此，在开始治疗的第一天，将受试者的值的13／14分配给基线期并将1／14分配给治疗期。在肩期的第二天，分数为12／14和2／14，以此类推。

还考虑来自基线期的数据。当记录基线值时，通常通过从治疗评分中减去基线评分来调节在基线期的受试者之间的差异。该策略通常使治疗效果的精度大于单独分析治疗评分所提供的精度，并从而允许使用较小的样本尺寸。然而，通常未意识到，仅当分析的变量是合理可靠时(即，受试者的评分在治疗实验前和治疗实验后始终倾向于彼此不同)，以这种方式调节基线评分得到较好的精度。在该研究中，分析仅作为治疗评分的症状和训练变量。明显地，对于仅治疗分析而言，对症状的治疗效果更精确，然而对于治疗-基线变化，对训练的效果更精确：明显地，与其疾病症状相比，受试者的训练更可靠并由基线监测明确定义。因此，对于症状提供仅治疗分析，而对于训练提供治疗-基线分析。为做出是使用仅治疗分析还是治疗-基线分析的决定，刻意避免对效果量级的检测，而仅集中于比较治疗效果的估算精度。唾液变量还按照治疗-基线分析提供。

通过被称为自助法的经验方法估算症状评分的置信限，因为通常的分析方法包括难以证明包括症状的持续时间的测量值的假设。自助法还与培训测量一起使用。使用写入统计分析系统中的程序进行这些分析。

治疗

补充剂Z包含组合的嗜酸乳杆菌NCFM和乳双歧杆菌Bi-07，用于每种细菌的剂量为5×10⁹CFU／天，因此总剂量为10⁹CFU／天。

补充剂X包含乳双歧杆菌BL-04，剂量为2×10⁹CFU／天。

安慰剂补充剂Y包含蔗糖。

补充剂Z和X是掺入冷饮(无饮用酒精并且饮料不是热的)中的冷冻干燥的细菌。

结果

图2中示出详细说明受试者的招募、流程和分析的临床试验报告统一标准的流程图。

受试者详情

物理和生理特性：各组包括的用于分析的受试者的特性的详细信息在表1中进行详细说明。在性别、年龄或体重指标方面各组之间没有本质区别。

表1

各组中包括的用于分析的个体的特性。平均值±标准偏差。

依从性

由各组中参与者完成的依从性详情和平均增补天数在表2中进行详细说明。

表2

由三个治疗组的每一组中的参与者在研究过程中完成的依从性程度和平均增补天数。

不良反应

在增补的开始阶段，四名受试者发生了腹泻和绞痛。这些受试者中的三名退出并且在第三天症状消失。一名受试者退出是因为与增补一起开始的头疼，包括从服用指定的补充剂一段时间之后。一名受试者在开始增补之后产生荨麻疹并退出。一名受试者在到亚洲旅行之后发生肠道疼痛。旅行日期与服用该补充剂的日期一致，并且该受试者退出。

饮食信息

有关各个治疗组中纤维摄入量的饮食信息在表3中。在纤维供应方面各组之间没有本质的区别。

表3

按治疗组和性别在研究中点(Mid)、研究结束(End)以及两个时间点的平均值(Mean)处的每日纤维的标准供应数量。

身体活动信息

在研究过程中参与者训练详情按治疗组在表4中示出。在身体活动模式方面各组之间没有本质区别。

表4

研究过程中的受试者训练。基于1至10分制为强度评分；训练负荷是训练强度的乘积和以任意单位的训练持续时间的总和。

疾病的发作

上呼吸道疾病

益生菌补充剂对于不同持续时间的呼吸道疾病的发作次数的效果列于表5a中。乳双歧杆菌BL04降低了持续时间较长的呼吸道疾病的次数。此外，随着疾病的发作变长，该效果更加明显。

胸腔感染(下呼吸道感染)

乳双歧杆菌对胸腔感染的效果在表5b中。与乳双歧杆菌BL04对URTI的效果类似，与持续较短时间的发作相比，增补降低了持续5天的胸腔感染发作的次数。

疾病的模式

在治疗过程中在益生菌组和安慰剂组之间上呼吸道疾病的频率、持续时间、严重程度和组合负荷的差值在表6中示出。与安慰剂相比，服用BL-04的那些具有低得多的疾病负荷和持续时间。根据性别，这些降低在女性中比在男性中更加明显。

表6

在治疗过程中在益生菌组和安慰剂组之间胸腔疾病(下呼吸道疾病)的频率、持续时间、严重程度和组合负荷的差值在表7中示出。与安慰剂相比，在BL-04中胸腔感染症状的严重程度降低。

表7

在治疗过程中各组之间药疗利用的频率、持续时间、严重程度和组合负荷的差值在表8中示出。简而言之，BL-04中的参与者与安慰剂中的参与者相比具有低得多的药疗利用总数和药疗利用的总天数。当按性别检测时，男性中保持效果但女性中较少如此。

表8

结论

结果表明，用乳双歧杆菌BL-04补充使上呼吸道疾病和下呼吸道疾病的数量大大降低，并使URTI和下呼吸道病症的严重程度和持续时间降低。

全部数据分析

在99％置信区间处的中期数据分析表明，乳双歧杆菌BL-04可有效预防呼吸道感染和降低对与呼吸道感染相关的药疗的需求(参见表5a、5b、6、7和8)。鼓舞人心的中期结果保证全部数据分析，如下所示。

全部数据分析(n=399)是以临床意义检验以及统计意义检验两者的测定为基础的。使用传统的95％置信区间测定统计意义。对于临床意义检验，与安慰剂组相比，将用于临床相关性的预定义阈值设置为症状降低20％。

如表9中所示，用乳双歧杆菌Bl-04治疗显著降低了上呼吸道疾病的症状。对于具有较长持续时间的疾病(即更严重的疾病发作)降低效果更强。与安慰剂相比，持续7天或更久的疾病降低了46％。在疾病持续时间的所有类别(3天、5天和7天或更久)中，降低值等于或大于预定义的临床意义的临界值。令人意外的是，BL-04对上呼吸道疾病的效果强于NCFM和Bi-07的组合。这是特别意外的，因为BL-04益生菌以低于益生菌组合的剂量施用。

BL-04以及NCFM和Bi-07的组合在降低下呼吸道胸腔感染中效果相同(参见表9)。单独的分析还表明，NCFM和Bi-07的组合以及作为单个菌株的BL-04对疾病发作的持续时间均具有显著的降低效果。

表9：

表9：益生菌补充剂对上呼吸道疾病和下呼吸道疾病患病率，以及感冒和流感药疗利用率的效果按疾病持续时间划分。超过预定义的临床意义的临界值(降低20％)的效果用粗体标记。比起组合的NCFM和Bi-07组与安慰剂相比，Bl-04组与安慰剂相比能够更高地降低患病率。

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26.Welfare，2006Australian Institute of Health and Welfare2006，Australia’s Health2006，Australia’s health no.10Cat.No.AUS73.Canberra：AIHW.Page107(福利，2006年，澳大利亚健康与福利研究所2006年，澳大利亚2006年健康报告，《澳大利亚健康》，第10期，分类号AUS73，堪培拉：AIHW，第107页)

27.West，N.P.，D.B.Pyne，J.M.Kyd，G.M.C.Renshaw，P.Fricker，andA.W.Cripps.The effect of exercise on innate nucosal immunity.British Journalof Sports Medicirne，2008(West，N.P.、D.B.Pyne、J.M.Kyd、G.M.C.Renshaw、P.Fricker和A.W.Cripps，锻炼对先天粘膜免疫的效果，《英国运动医学杂志》，2008年)。

28.West，N.P.，D.B.Pyne，G.Renshaw，and A.W.Cripps.Antimicrobial peptidesand proteins，exercise and innate mucosal immunity.FEMS Immunol MedMicrobiol.48：293-304，2006(West，N.P.、D.B.Pyne、G.Renshaw和A.W.Cripps，抗菌肽和蛋白质、锻炼和先天粘膜免疫，《欧洲微生物学会联合会免疫学与医学微生物学》，第48卷，第293-304页，2006年)。

29.Winkler P et al.，Effect of a dietary supplement containingprobiotic bacteria plus vitamins and minerals on common cold infections andcellular immune parameters，Int.J Clin.Pharmacol.Ther.，2005Jul，vol.43，no.7，p318-326(Winkler P等人，包含益生菌加上维生素和矿物质的饮食补充剂对感冒感染和细胞免疫参数的效果，《国际临床药理学与治疗学杂志》，2005年7月，第43卷，第7期，第318-326页)。

Claims

1.乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)BL04和/或乳双歧杆菌(Bifidobacteriumlactis)BL04的发酵产物和/或乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)BL04的细胞溶胞产物在制造用于治疗或预防受试者中呼吸道疾病的组合物中的用途，其中所述组合物不包含另外的微生物。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述呼吸道疾病为上呼吸道疾病。

3.根据权利要求1所述的用途，其中所述呼吸道疾病为下呼吸道疾病。

4.根据权利要求1或权利要求2所述的用途，其中所述呼吸道疾病选自下列中的一者或多者：扁桃体炎、中耳炎、鼻炎、窦炎、鼻咽炎、感冒、咽炎、会厌炎、喉炎、喉气管炎和气管炎。

5.根据权利要求1或权利要求2所述的用途，其中所述呼吸道疾病选自下列中的一者或多者：咽喉疼痛、打喷嚏、鼻塞、流鼻涕和咳嗽。

6.根据权利要求1或权利要求2所述的用途，其中所述呼吸道疾病是鼻窦炎。

7.根据权利要求1或权利要求2所述的用途，其中所述呼吸道疾病是鼻咽粘膜炎。

8.根据权利要求1或权利要求2所述的用途，其中所述呼吸道疾病是声门上炎。

9.根据权利要求1或权利要求3所述的用途，其中所述呼吸道疾病选自下列中的一者或多者：支气管炎、肺炎和肺脓肿。

10.根据权利要求1或权利要求3所述的用途，其中所述呼吸道疾病选自下列中的一者或多者：咳嗽伴随胸闷和咳嗽伴随气喘。

11.根据权利要求1或权利要求3所述的用途，其中所述呼吸道疾病是急性支气管炎。

12.根据权利要求1至3中任一项所述的用途，其中在所述受试者中粒细胞的吞噬活性增加。

13.根据权利要求1至3中任一项所述的用途，其中在所述受试者中单核细胞的吞噬活性增加。

14.根据权利要求1至3中任一项所述的用途，其中所述用途是预防性的。

15.乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)BL-04和/或乳双歧杆菌(Bifidobacteriumlactis)BL-04的发酵产物和/或乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)BL-04的细胞溶胞产物在制造用于改变受试者的药物摄入量的药剂中的用途，其中所述药剂不包含另外的微生物，并且其中所述药物是呼吸道疾病药物。