CN104155456B - 一种稳定性强的肌钙蛋白检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种稳定性强的肌钙蛋白检测试剂盒，包括组分1和组分2。各组分原料含量如下：组分1甘氨酸缓冲液（PH 7.6）、氯化钠150‑250mmol/L、烷基糖苷3g/L；组分2：MOPOS缓冲液25‑50mmol/L、羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒3g/L。本发明提供的试剂稳定性明显高于现有的同类试剂。
Description
技术领域
本发明涉及一种稳定性强的肌钙蛋白检测试剂盒，属临床体外检测试剂技术领域。
背景技术
肌钙蛋白，由T、C、I三亚基构成，和原肌球蛋白一起通过调节钙离子对横纹肌动蛋白ATP酶的活性来调节肌动蛋白和肌球蛋白相互作用。心肌钙蛋白I（cTnI）的分子量为22.5KD，其连同肌钙蛋白T和肌钙蛋白C构成结构复合物。在心脏中的细胞间钙信号肌动蛋白-肌球蛋白相互作用的转化过程中起着重要作用。人的cTnI与骨骼肌中的形式在结构上有所不同，它的氨基端上多了一个氨基酸残基。使得cTnI成为一个特异性的标志物。在心肌梗死（AMI）发生后，cTnI 便迅速释放入血液循环中。释放的模式和CK-MB相同（在AMI发生4-6个小时以后）。然而，CK-MB的水平在36-48小时后恢复正常，cTnI可以持续升高6-10天。在正常健康人体内，cTnI水平是非常低的，在骨骼肌受损的病人体内也检测不到cTnI。肌钙蛋白I具有高度心肌特异性和灵敏度，所以肌钙蛋白 I已成为目前最理想的心肌梗死标志物。
由于心肌肌钙蛋白特异地分布于心肌组织，作为心肌损伤的高敏感和特异性标志物，心肌肌钙蛋白对于检测急性冠状动脉综合征患者心肌缺血及危险分级具有重要意义。目前，心肌肌钙蛋白已成为诊断心肌梗死的首要标志物，也是独立于心电图之外可用于判断梗死灶范围大小及预后的重要血清学指标。同时，血液心肌肌钙蛋白浓度也可用于评判不稳定型心绞痛患者罹患心肌梗死和心源性死亡的危险率，也是判断冠心病患者是否应接受抗凝药物如血小板糖蛋白Ⅱh／Ⅲa受体拮抗剂治疗的惟一标志物。近来，心肌肌钙蛋白开始为诊断病毒性心肌炎及判断药物、病毒、大手术创伤等所致心肌受损的诊断和程度提供帮助。
cTnI的检测有多种方法，而胶乳增强免疫比浊法是近年来开展起来的一种高灵敏度、高特异性的检测方法。可直接在全自动生化仪上进行批量测定，因此在临床上已得到广泛应用。
本方法是一种胶乳增强免疫比浊法。将特异性抗体结合于胶乳颗粒表面，样本与胶乳颗粒在缓冲液中混合，样本中的TnI与胶乳颗粒表面的抗体结合，使相邻的胶乳颗粒彼此交联，在505nm波长下检测溶液浊度变化，变化程度与样本中的TnI含量成正比。
肌钙蛋白检测试剂盒（胶乳增强免疫比浊法）由于不需要昂贵的设备，可以实现自动化，检测灵敏度和特异性较高，且可测定大量标本，因此受到临床广泛推广。但是肌钙蛋白检测试剂盒（胶乳增强免疫比浊法）中由于存在大量胶乳颗粒，会使该试剂的稳定性受到影响，不利于试剂的长期保存，从而造成浪费的不良后果。
发明内容
针对于常规的肌钙蛋白检测试剂盒（胶乳增强免疫比浊法）存在的问题，本发明提供了一种稳定性强的肌钙蛋白检测试剂盒（胶乳增强免疫比浊法），该试剂盒与常规的肌钙蛋白检测试剂盒（胶乳增强免疫比浊法）相比，准确度和分析灵敏度不受影响，但稳定性比常规的检测试剂盒要好。
本发明是通过以下措施实现的：
一种稳定性强的肌钙蛋白检测试剂盒（胶乳增强免疫比浊法），包括组分1（R1）和组分2（R2），应用时体积比为R1：R2=3:1。各组分原料含量如下：
组分1（R1）：
甘氨酸缓冲液 PH 7.6
氯化钠 150-250mmol/L
烷基糖苷 3g/L；
组分2（R2）：
MOPOS缓冲液 25-50mmol/L
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒 3g/L。
本发明的有益效果：
本发明提供的稳定性强的肌钙蛋白检测试剂盒（胶乳增强免疫比浊法），通过在组分2中加入MOPOS缓冲液，解决了大量胶乳颗粒在溶液中不稳定这一难题，在试验中它能使胶乳颗粒稳定，且相对地中性，但不会影响胶乳颗粒的性质，从而有效地增强了试剂盒的稳定性，却不会对试剂的准确度和分析灵敏度产生影响，有利于该试剂在市场中进一步的推广。
附图说明
图1为实施例2检测结果与实施例1检测结果相关性图；
图2为实施例2检测结果与实施例1检测结果相关性图；
图3为实施例2检测结果与实施例1检测结果相关性图。
具体实施方式
为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步说明。
实施例1（对比例）
组分1（R1）：
组分1（R1）：
甘氨酸缓冲液 PH 7.6
氯化钠 150mmol/L
表面活性剂 3g/L
组分2（R2）：
甘氨酸缓冲液 PH 7.6
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒 3g/L。
使用时采用具有双试剂功能的全自动生化分析仪，如东芝40全自动分析仪等，利用双试剂终点法进行测定。将R1和R2按照3:1的比例放置到对应的试剂位上，在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、标准品和样本，操作如表1：
表1肌钙蛋白I检测试剂检测方法
计算：肌钙蛋白I浓度＝（∆A测定÷∆A标准）×C标准
实施例2
甘氨酸缓冲液 PH 7.6
氯化钠 150mmol/L
烷基糖苷 3g/L；
组分2（R2）：
MOPOS缓冲液 25mmol/L
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒 3g/L。
使用方法同上。
实施例3
甘氨酸缓冲液 PH 7.6
氯化钠 250mmol/L
烷基糖苷 3g/L；
组分2（R2）：
MOPOS缓冲液 50mmol/L
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒 3g/L。
使用方法同上。
实施例4
甘氨酸缓冲液 PH 7.6
氯化钠 200mmol/L
烷基糖苷 3g/L；
组分2（R2）：
MOPOS缓冲液 40mmol/L
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒 3g/L。
使用方法同上。
准确度验证实验：
应用实施例2、3、4的试剂盒与实施例1试剂盒进行对比，对40个样本进行检测，检测的结果如附图1-图3：通过附图中检测数据可知，实施例2、3、4检测试剂盒与实施例1检测试剂盒的检测结果相关性分别为0.9974、0.9975、0.9980，均大于要求的0.990，相关性比较好，表明本发明的试剂盒与常规的肌钙蛋白检测试剂盒（胶乳增强免疫比浊法）有高度一致性，证明其准确性不受影响。
线性相关性验证实验：
找到肌钙蛋白高值样本为25.15µg/L，用生理盐水进行系列稀释，配制6个不同浓度的样本，依次为25.15µg/L、20.12µg/L、15.09µg/L、10.06µg/L、5.03µg/L、0µg/L浓度的样本，每个浓度水平各样本分别测定三次，分别取其平均值。分别利用实施例1、2、3、4的试剂进行检测。检测结果如表所示：
检测结果显示，实施例1—实施例4检测结果相关性均大于0.990，达到产品标准要求，说明在试剂中加入MOPOS缓冲液不会降低试剂检测的线性相关性。
稳定性验证实验：
在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存试剂，检测四种实施例试剂的稳定性。四种试剂每月选取同一样本测定其吸光度三次，取平均值，与新鲜的实施例1试剂检测结果进行对比，从而确定试剂的稳定时间。
检测数据如下表：
实验结果显示，实施例1试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存15个月稳定，而实施例2、3、4试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存24个月稳定，说明在试剂中加入MOPOS缓冲液能有效的提高肌钙蛋白检测试剂盒的稳定性。
本发明提供的稳定性强的肌钙蛋白检测试剂盒（胶乳增强免疫比浊法），在试剂R2中通过加入一定量的MOPOS缓冲液能够有效的提高肌钙蛋白检测试剂盒（胶乳增强免疫比浊法）的稳定性，而对试剂的准确度和分析灵敏度没有影响。因此，本发明提供的稳定性强的肌钙蛋白检测试剂盒（胶乳增强免疫比浊法）有利于在市场中进一步的推广使用。
Claims (1)
1.一种稳定性强的肌钙蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括体积比为3:1的组分1和组分2，各组分的原料及含量如下：
组分1：
甘氨酸缓冲液 PH 7.6
氯化钠 150-250mmol/L
烷基糖苷 3g/L；
组分2：
MOPOS缓冲液 25-50mmol/L
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒 3g/L。
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