CN104119856A - 一类比率检测次氯酸的荧光探针及其在生物体系内的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一类可以用于比率检测次氯酸的荧光探针。具体的说，在次氯酸存在下，探针的荧光波长会发生变化。本发明提供了一种用于选择性检测溶液体系、细胞、动物组织或动物个体内次氯酸的比率荧光探针。本发明采用花菁染料作为荧光母体，在花菁母体中位上引入仲胺，利用花菁母体的高电子云密度而容易被次氯酸氧化的性质，以实现选择性地检测次氯酸；花菁母体被次氯酸氧化后，探针的荧光波长发生蓝移，原来的长波长荧光峰强度随次氯酸含量的增加而逐渐降低，新出现的短波长荧光峰强度逐渐升高，用于比率地检测次氯酸。
Description
技术领域
本发明涉及一类用于比率检测次氯酸（HClO）的荧光探针。具体的说，是一类在HClO存在下荧光波长发生变化的化合物，从而能够比率检测溶液体系、细胞、动物组织或动物个体内的次氯酸的荧光探针。
背景技术
次氯酸（HClO）作为生物体内的一种活性氧，对于生物体具有十分重要的意义。与生物体内的其他活性氧不同，次氯酸在日常生活中也广泛用作消毒剂、抗菌剂和漂白剂。细胞内源性的次氯酸是通过髓过氧化物酶MPO催化双氧水和氯离子产生的。次氯酸在生理条件下会分解为具有强氧化性的次氯酸根阴离子(ClO-),具有抗菌性能且能抵抗微生物入侵，在生物体的免疫系统内扮演着重要的角色。然而，当次氯酸浓度发生改变或者生物体功能紊乱时，次氯酸会引起生物体的一系列氧化损伤，从而导致呼吸损伤、缺血再灌注损伤、风湿性关节炎、心血管疾病、肾功能障碍、癌症及多种神经退行性疾病。因此，发展一种有效地检测次氯酸的方法具有重要的生物医学意义。
目前，研究人员已经报道了许多用于检测次氯酸的分析方法如电分析、电位测定、分光光度法、化学发光法、荧光探针法。其中荧光探针法对细胞损伤小，结合荧光共聚焦显微技术可以在活细胞中进行较高时间和空间分辨的可视化分析，是有效检测生命体内次氯酸的手段之一，具有更广阔的应用前景。而且荧光探针法中的比率型探针相对于荧光增强型探针能够有效地消除探针浓度，仪器效率，光漂白等影响，受外部环境的干扰较小，具有更大的优势。Joanna Shepherd等公开了一种检测次氯酸的荧光探针SNAPF（结构见图1，JoannaShepherd et al,Chemistry&Biology,2007,14,1221-1231），与次氯酸作用后荧光增强从而检测次氯酸的存在，但是该探针是基于荧光强度的变化来检测次氯酸的。Tetsuo Nagano等公开了一种检测次氯酸的荧光探针HySOx（结构见图1，Suguru Kenmoku et al,J.Am.Chem.Soc,2007,129,7313-7318）,与次氯酸作用后荧光增强，但是该探针也是荧光增强型探针。Chen Xinqi等公开了一种以罗丹明B为荧光团，二苯甲酰肼为次氯酸受体的荧光探针（结构见图1，XinqiChen et al,Chem.Eur.J.2008,14,4719-4724），与次氯酸作用后荧光发生位移，能够比率检测次氯酸。但是该探针没有用于生物体系检测。因此开发具有选择性，可用于生物体系中次氯酸比率检测的荧光探针具有重要意义。
发明内容
本发明就是针对上述问题，提供了一种可用于选择性检测溶液体系、细胞、动物组织或动物个体中次氯酸的比率荧光探针，此探针可以选择性地与次氯酸作用，作用后荧光波长发生位移。
为了实现本发明的上述目的，本发明采用如下技术方案：本发明采用花菁染料作为荧光母体，在花菁母体中位上引入仲胺，利用花菁母体的高电子云密度而容易被次氯酸氧化的性质，以实现选择性地检测次氯酸；花菁母体被次氯酸氧化后，探针的荧光波长发生蓝移，原来的长波长荧光峰强度随次氯酸含量的增加而逐渐降低，新出现的短波长荧光峰强度逐渐升高，用于比率地检测次氯酸。
所述的荧光探针的通式为：
通式Ⅰ：R1R2N-F
R1、R2分别为具有1～20个碳原子的烷基，含硝基、氨基、磺酸基、羟基、胺基、烷氧基、氰基、氟、氯、溴、碘中的一种或二种以上的取代基的1-20个碳原子的烷基，含取代基或不含取代基的苯环、萘环或蒽环，R1，R2可以相同或不相同；或者R1、R2间相连、并且与N原子形成5-10元环烷基结构；F为一甲川花菁母体、三甲川花菁母体、五甲川花菁母体或七甲川花菁母体。
如果带取代基的烷基中碳原子个数为n，那么取代基个数为1至2n+1个。
苯环、萘环或蒽环上的取代基为硝基，氨基，磺酸基，羟基，氨基，胺基，烷氧基、氰基，氟，氯，溴，碘中的一种或二种以上，取代基的个数为1-5个。
所述5-10元环烷基的环上带有O、N、S杂原子中的一种或二种以上，O、N或S的个数为1-2个。
所述5-10元环烷基的上不含取代基或含1-10个取代基的侧链，侧链的取代基为硝基、氨基、磺酸基、羟基、胺基、烷氧基、氰基、氟、氯、溴、碘中的一种或二种以上。
当F为七甲川花菁时，所述的荧光探针具有下述通式Ⅱ表示的化合物：
R1，R2同通式Ⅰ；
R3为C1～C20的烷基，最佳为C1～C10的烷基；
R4为C1～C20的烷基，最佳为C1～C10的烷基；
R5、R6分别为H、C1～C20的烷基、磺酸基、羧基、羟基、卤素、氨基、胺基、烷氧基、环烷基、氰基或硝基；R5、R6相同或不同；
X为F-,Cl-,Br-,I-,HSO3 -,ClO4 -,CN-,SCN-,HS-,NO3 -,H2PO4 -,HSO4 -,AcO-或BF4 -。
当R5或R6为环烷基时,与各自相连的苯环以单键的方式连接或以并环的方式连接。
通式Ⅰ可对次氯酸进行定性和/或定量检测。
用通式Ⅰ测定溶液体系、细胞、动物组织或动物个体中的次氯酸，其荧光波长发生位移且荧光强度随溶液体系、细胞、动物组织或动物个体内次氯酸的含量改变，能够对溶液体系、细胞、动物组织或动物个体中的次氯酸进行比率检测。
将浓度呈梯度变化的次氯酸水溶液分别加入通式Ⅰ的水溶液中，分别测定加入后各体系的短波长和长波长荧光强度的比值，然后以次氯酸溶液的浓度和加入后体系的短波长和长波长荧光强度的比值为横坐标、纵坐标作图，根据荧光强度比值，即可从图中读出溶液中次氯酸的含量。
具有通式Ⅱ结构的化合物用作荧光探针测定溶液体系、细胞、动物组织或动物个体中的次氯酸，其浓度为1μM-1mM。
通式Ⅱ所代表的化合物，本身荧光波长很长，可以特异性地与次氯酸迅速作用，同时出现一个短波长的荧光峰；
具有通式Ⅱ结构的化合物用作次氯酸的比率荧光探针测定溶液体系、细胞、动物组织或动物个体中的次氯酸，其荧光波长随溶液体系、细胞、动物组织或动物个体内的次氯酸而改变，能够对溶液体系、细胞、动物组织或动物个体中的次氯酸进行比率检测；也就是说，原来的长波长荧光峰强度逐渐降低，新出现的短波长荧光峰强度逐渐升高。
本发明的有益效果：
这类化合物用作次氯酸的比率荧光探针，在次氯酸存在下荧光波长发生位移，可用于次氯酸的比率检测。尤其是，这类化合物用作荧光探针，可用于溶液体系、细胞、动物组织或动物个体内次氯酸的比率检测，这对更准确、有效地研究次氯酸在生物体内的产生，进一步了解次氯酸的生理和毒理作用具有重要意义。
附图说明
图1背景技术中所举的已公开的次氯酸荧光探针结构示意图；
图2实施例中合成Cy7-NR1，Cy7-NR2，Cy7-NR3，Cy7-NR4，Cy7-NR5的反应方程式；
图3实施例1所采用的荧光探针Cy7-NR1在不同PH值下的短波长（566nm）与长波长（780nm）荧光强度比值I566/I780示意图；
图4实施例1-5所采用的荧光探针Cy7-NR1(图4a)，Cy7-NR2(图4b)，Cy7-NR3(图4c)，Cy7-NR4(图4d)，Cy7-NR5(图4e)对次氯酸的选择性示意图；图4a中：1、空白，2、次氯酸钠(15.0μM)，3、双氧水(250.0μM)，4、过氧化叔丁醇(250.0μM)，5、枯烯氢过氧化物(250.0μM)，6、超氧阴离子(250.0μM)，7、羟基自由基(250.0μM)，8、单线态氧(250.0μM)，9、一氧化氮(15.0μM)，10、过氧化亚硝酰(25.0μM)；图4b-e中:1、空白，2、次氯酸钠(15.0μM)，3、双氧水(250.0μM)，4、过氧化叔丁醇(250.0μM)，5、枯烯氢过氧化物(250.0μM)，6、超氧阴离子(250.0μM)，7、羟基自由基(250.0μM)，8、单线态氧(250.0μM)，9、一氧化氮(15.0μM)，10、过氧化亚硝酰(15.0μM)；
图5（a）表示实施例1所采用的荧光探针Cy7-NR1的荧光光谱随次氯酸根浓度变化的示意图；图5（b）表示实施例所采用的荧光探针Cy7-NR1短波长与长波长荧光强度比值I566/I780随次氯酸根浓度变化的线性拟合曲线；
图6a、b、c、d、e、f、g、h、i、j表示实施例1所采用的荧光探针Cy7-NR1用于比率检测细胞内次氯酸的共聚焦显微镜照片。
具体实施方式
实施例用于进一步说明本发明，但本发明不限于实施例。
如图2所示，实施例所采用的探针化合物的结构用代号Cy7-NR1,Cy7-NR2，Cy7-NR3，Cy7-NR4，Cy7-NR5表示，合成探针化合物所用的花菁母体用代号Cy7-Cl表示。
实施例1(Cy7-NR1的合成与性质)：
Cy7-NR1的合成：氮气下，0.60g Cy7-Cl（可购买获得）和1.07g吗啉溶于25ml N,N-二甲基甲酰胺中，加热至90℃反应3小时。真空下蒸去溶剂，所得固体经柱层析纯化得目标化合物Cy7-NR1。
Cy7-NR1：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.77(d,J=12Hz,2H),7.37-7.32(m,4H),7.16(t,J=8Hz,2H),7.03(d,J=8Hz,2H),5.93(d,J=16Hz,2H),4.11-4.06(m,4H),3.98(t,J=4Hz,4H),3.72(t,J=4Hz,4H),2.56(t,J=6Hz,4H),1.88(t,J=6Hz,2H),1.69(s,12H),1.44(t,J=6Hz,6H).13C NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):171.78,168.91,142.16,141.59,140.39,128.65,125.31,123.97,122.10,109.57,96.91,68.31,55.01,48.30,39.05,28.84,25.32,21.69,12.0.
HRMS:m/z C38H48N3O+Calcd 562.3797,found 562.2762.
pH对Cy7-NR1溶液荧光的影响：pH采用PBS缓冲溶液控制。于10ml比色管中加入5.0μM Cy7-NR1，再加入10ml浓度为20mM的PBS，摇匀溶液，平衡6min后，将上述工作液加入石英池中测定荧光光谱。荧光强度随PH的变化如图3所示。图3表明在PH7.0～10.0的范围内Cy7-NR1的短波长与长波长荧光强度比值I566/I780没有明显变化，即在PH7.0～10.0的体系中，都可以使用Cy7-NR1比率检测次氯酸。
Cy7-NR1对次氯酸的选择性:于10ml比色管中加入5.0μMCy7-NR1，再加入10ml浓度为20mM的PBS(pH=7.4)，摇匀，然后加入各种待测物（各待测物量见附图说明，空白实验不加待测物）。摇匀溶液，平衡6min，将工作液倒进石英池测定荧光光谱。Cy7-NR1对次氯酸的选择性如图4a所示。图4a表明Cy7-NR1对次氯酸具有很好的选择性，体系短波长与长波长荧光强度比值增强。测定条件下双氧水、过氧化叔丁醇、枯烯氢过氧化物、超氧阴离子、羟基自由基、单线态氧、一氧化氮、过氧化亚硝酰等基本不能使探针短波长与长波长荧光强度比值I566/I780增强。
Cy7-NR1对次氯酸的定量检测：于10ml比色管中加入5.0μMCy7-NR1，再加入再加入10ml浓度为20mM的PBS(pH=7.4)，摇匀，然后加入不同浓度次氯酸钠。摇匀溶液，平衡6min，将工作液倒进石英池测定荧光光谱，取各荧光光谱短波长和长波长的荧光强度最大值作比值I566/I780，输入软件OriginPro 8.0,得到线性工作曲线。
定容后次氯酸钠浓度：1.0,2.5,4.0,5.0,7.5,10.0,15.0,20.0μM.
图5（a）表示随次氯酸钠浓度的变化体系荧光强度比值I566/I780的变化，表明随次氯酸根浓度的增加，体系荧光强度比值I566/I780明显增强；图5（b）表示荧光强度比值I566/I780随次氯酸钠浓度变化的线性拟合曲线，线性拟合曲线的线性回归常数为0.9903，表明探针能定量的测定次氯酸的浓度。
Cy7-NR1用于细胞内次氯酸的比率检测：Murine RAW264.7macrophage细胞按照American type Tissue Culture Collection规定进行培养。10.0uM Cy7-NR1孵育RAW264.7细胞5分钟，用生理盐水洗涤3次，置于共聚焦荧光显微镜下拍照，搜集发射波长由550到650nm范围内的荧光，结果如图6a所示，搜集发射波长由700到800nm范围内的荧光，结果如图6b所示；然后5.0mM次氯酸钠孵育细胞10分钟，用生理盐水洗涤3次，共聚焦显微镜拍照，搜集发射波长由550到650nm范围内的荧光，结果如图6c所示，搜集发射波长由700到800nm范围内的荧光，结果如图6d所示，短波长范围内的荧光强度I550-650明显增强，而长波长处的荧光强度I700-800明显降低；加入次氯酸前后的共聚焦图片利用Olympus Micro FV10-ASW软件作短波长范围内与长波长范围内的荧光强度比值图I550-650/I700-800，得到图6e，6f（图6e的比率尺在左边，图6f的在右边），可以看出加入次氯酸之后（图6f）的荧光强度比值比加入之前的要大（图6e）。图6g表示加入次氯酸之前细胞的明场，图6h表示加入次氯酸之后细胞的明场，图6i表示图6e和6g的叠加，图6j表示图6f和6h的叠加。
实施例2(Cy7-NR2的合成与对次氯酸的选择性)：
Cy7-NR2的合成：氮气下，0.60g Cy7-Cl（可购买获得）和10当量的哌啶溶于25ml N,N-二甲基甲酰胺中，加热至90℃反应3小时。真空下蒸去溶剂，所得固体经柱层析纯化得目标化合物Cy7-NR2。
Cy7-NR2:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.55(d,J=16Hz,2H),7.34-7.27(m,4H),7.11(t,J=8Hz,2H),6.95(d,J=8Hz,2H),5.75(d,J=12Hz,2H),3.97(t,J=6Hz,4H),3.67-3.64(m,4H),2.50(t,J=6Hz,4H),1.92-1.82(m,8H),1.66(s,12H),1.38(t,J=8Hz,6H).HRMS:m/z C39H50N3 +Calcd 560.4005,found560.3985.
Cy7-NR2对次氯酸的选择性：于10ml比色管中加入5.0μMCy7-NR2，再加入10ml浓度为20mM的PBS(pH=7.4)，摇匀，然后加入各种待测物（各待测物量见附图说明，空白实验不加待测物）。摇匀溶液，平衡6min，将工作液倒进石英池测定荧光光谱。Cy7-NR2对次氯酸的选择性如图4b所示。图4b表明Cy7-NR2对次氯酸具有很好的选择性，体系短波长与长波长荧光强度比值增强。测定条件下双氧水、过氧化叔丁醇、枯烯氢过氧化物、超氧阴离子、羟基自由基、单线态氧、一氧化氮、过氧化亚硝酰等基本不能使探针短波长与长波长荧光强度比值I566/I780增强。
实施例3(Cy7-NR3的合成与对次氯酸的选择性)：
Cy7-NR3的合成：氮气下，0.60g Cy7-Cl（可购买获得）和10当量的哌嗪溶于25ml N,N-二甲基甲酰胺中，加热至90℃反应3小时。真空下蒸去溶剂，所得固体经柱层析纯化得目标化合物Cy7-NR3。
Cy7-NR3:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.85(d,J=12Hz,2H),7.42(d,J=8Hz,2H),7.36(t,J=6Hz,2H),7.19(t,J=8Hz,2H),7.05(d,J=8Hz,2H),5.90(d,J=16Hz,2H),4.05(t,J=8Hz,8H),3.53(s,4H),2.52(t,J=6Hz,4H),1.88-1.85(m,2H),1.80(s,12H),1.44(t,J=8Hz,6H).HRMS:m/z C38H49N4 +Calcd561.3957,found 561.3971.
Cy7-NR3对次氯酸的选择性：于10ml比色管中加入5.0μMCy7-NR3，再加入10ml浓度为20mM的PBS(pH=7.4)，摇匀，然后加入各种待测物（各待测物量见附图说明，空白实验不加待测物）。摇匀溶液，平衡6min，将工作液倒进石英池测定荧光光谱。Cy7-NR3对次氯酸的选择性如图4c所示。图4c表明Cy7-NR3对次氯酸具有很好的选择性，体系短波长与长波长荧光强度比值增强。测定条件下双氧水、过氧化叔丁醇、枯烯氢过氧化物、超氧阴离子、羟基自由基、单线态氧、一氧化氮、过氧化亚硝酰等基本不能使探针短波长与长波长荧光强度比值I566/I780增强。
实施例4(Cy7-NR4的合成与对次氯酸的选择性)：
Cy7-NR4的合成：氮气下，0.60g Cy7-Cl（可购买获得）和10当量的硫代吗啉溶于25ml N,N-二甲基甲酰胺中，加热至90℃反应3小时。真空下蒸去溶剂，所得固体经柱层析纯化得目标化合物Cy7-NR4。
Cy7-NR4:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.89(d,J=12Hz,2H),7.39-7.34(m,4H),7.20(t,J=6Hz,2H),7.09(d,J=8Hz,2H),6.00(d,J=16Hz,2H),4.16-4.11(m,4H),3.73(t,J=4Hz,4H),2.90(t,J=6Hz,4H),2.56(t,J=6Hz,4H),1.88(t,J=6Hz,2H),1.74(s,12H),1.44(t,J=6Hz,6H).13C NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):171.32,169.75,142.19,142.07,140.57,130.90,128.83,128.73,127.76,124.38,122.12,109.93,98.36,65.55,56.38,48.60,39.39,30.57,29.35,28.58,25.50,21.58,19.17,13.70,12.13..HRMS:m/z C38H48N3S+Calcd 578.3569,found578.5587.
Cy7-NR4对次氯酸的选择性：于10ml比色管中加入5.0μMCy7-NR4，再加入10ml浓度为20mM的PBS(pH=7.4)，摇匀，然后加入各种待测物（各待测物量见附图说明，空白实验不加待测物）。摇匀溶液，平衡6min，将工作液倒进石英池测定荧光光谱。Cy7-NR4对次氯酸的选择性如图4d所示。图4d表明Cy7-NR4对次氯酸具有很好的选择性，体系短波长与长波长荧光强度比值增强。测定条件下双氧水、过氧化叔丁醇、枯烯氢过氧化物、超氧阴离子、羟基自由基、单线态氧、一氧化氮、过氧化亚硝酰等基本不能使探针短波长与长波长荧光强度比值I560/I780增强。
实施例5(Cy7-NR5的合成与对次氯酸的选择性)：
Cy7-NR5的合成：氮气下，0.60g Cy7-Cl（可购买获得）和10当量的二甲胺和三乙胺溶于25ml N,N-二甲基甲酰胺中，加热至90℃反应3小时。真空下蒸去溶剂，所得固体经柱层析纯化得目标化合物Cy7-NR5。
Cy7-NR5:1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):7.47(d,J=12Hz,2H),7.32-7.28(m,4H),7.08(t,J=8Hz,2H),6.93(d,J=8Hz,2H),5.67(d,J=12Hz,2H),3.97-3.91(m,4H),3.65(s,6H),2.51(t,J=6Hz,4H),1.88-1.82(m,2H),1.66(s,12H),1.37(t,J=8Hz,6H).13C NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):175.32,166.96,162.55,142.55,140.62,140.19,128.28,122.87,122.15,121.95,108.45,93.74,47.88,47.80,38.28,36.53,34.85,31.45,29.51,25.39,21.62,11.64.HRMS:m/z C36H46N3 +Calcd 520.3692,found520.3690.
Cy7-NR5对次氯酸的选择性：于10ml比色管中加入5.0μMCy7-NR5，再加入10ml浓度为20mM的PBS(pH=7.4)，摇匀，然后加入各种待测物（各待测物量见附图说明，空白实验不加待测物）。摇匀溶液，平衡6min，将工作液倒进石英池测定荧光光谱。Cy7-NR5对次氯酸的选择性如图4e所示。图4e表明Cy7-NR5对次氯酸具有很好的选择性，体系短波长与长波长荧光强度比值增强。测定条件下双氧水、过氧化叔丁醇、枯烯氢过氧化物、超氧阴离子、羟基自由基、单线态氧、一氧化氮、过氧化亚硝酰等基本不能使探针短波长与长波长荧光强度比值I560/I780增强。
Claims (9)
1.一类比率检测次氯酸的荧光探针，其特征在于：所述的荧光探针的通式为：
通式Ⅰ：R1R2N-F
R1、R2分别为具有1～20个碳原子的烷基，含硝基、氨基、磺酸基、羟基、胺基、烷氧基、氰基、氟、氯、溴、碘中的一种或二种以上的取代基的1-20个碳原子的烷基，含取代基或不含取代基的苯环、萘环或蒽环，R1，R2可以相同或不相同；或者R1、R2间相连、并且与N原子形成5-10元环烷基结构；F为一甲川花菁母体、三甲川花菁母体、五甲川花菁母体或七甲川花菁母体。
2.根据权利要求1所述的荧光探针，其特征在于：
如果带取代基的烷基中碳原子个数为n，那么取代基个数为1至2n+1个。
3.根据权利要求1所述的荧光探针，其特征在于：
苯环、萘环或蒽环上的取代基为硝基，氨基，磺酸基，羟基，氨基，胺基，烷氧基、氰基，氟，氯，溴，碘中的一种或二种以上，取代基的个数为1-5个。
4.根据权利要求1所述的荧光探针，其特征在于：
所述5-10元环烷基的环上带有O、N、S杂原子中的一种或二种以上，O、N或S的个数为1-2个。
5.根据权利要求1或4所述的荧光探针，其特征在于：所述5-10元环烷基的上不含取代基或含1-10个取代基的侧链，侧链的取代基为硝基、氨基、磺酸基、羟基、胺基、烷氧基、氰基、氟、氯、溴、碘中的一种或二种以上。
6.根据权利要求1所述的荧光探针，其特征在于：当F为七甲川花菁时，所述的荧光探针具有下述通式Ⅱ表示的化合物：
R1，R2同通式Ⅰ；
R3为C1～C20的烷基，最佳为C1～C10的烷基；
R4为C1～C20的烷基，最佳为C1～C10的烷基；
R5、R6分别为H、C1～C20的烷基、磺酸基、羧基、羟基、卤素、氨基、胺基、烷氧基、环烷基、氰基或硝基；R5、R6相同或不同；
X为F-,Cl-,Br-,I-,HSO3 -,ClO4 -,CN-,SCN-,HS-,NO3 -,H2PO4 -,HSO4 -,AcO-或BF4 -。
7.根据权利要求6所述的荧光探针，其特征在于：当R5或R6为环烷基时,与各自相连的苯环以单键的方式连接或以并环的方式连接。
8.一种权利要求1-7任一所述的荧光探针在比率检测次氯酸中的应用，其特征在于：通式Ⅰ可对次氯酸进行定性和/或定量检测。
9.根据权利要求8所述的荧光探针在比率检测次氯酸中的应用，其特征在于：用通式Ⅰ测定溶液体系、细胞、动物组织或动物个体中的次氯酸，其荧光波长发生位移且荧光强度随溶液体系、细胞、动物组织或动物个体内次氯酸的含量改变，能够对溶液体系、细胞、动物组织或动物个体中的次氯酸进行比率检测。
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