CN104101700B - 一种金针菇液体菌种活力的快速检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明为一种金针菇液体菌种活力的快速检测试剂盒，主要由检测试剂一(TR1)、检测试剂二(TR2)，检测试剂三(TR3)、检测试剂四(TR4)、检测试剂五(TR5)、检测试剂六(TR6)及试剂盒溶剂组成。本发明还涉及所述试剂盒的应用方法。本发明可以快速有效地检验金针菇液体菌种中的菌丝体是否达到活力最旺盛时期，只有菌丝体的生长活力处于最旺盛时的菌种才能保证工厂化栽培金针菇出菇整齐，产量高且稳定。这种简便、快捷的方法非常适用于金针菇生产企业进行液体菌种生产控制，避免资源浪费，提高生产效益。
Description
技术领域
本发明涉及一种试剂盒，具体涉及一种金针菇液体菌种活力的快速检测试剂盒。
背景技术
近几年来，为了满足市场需求，采用液体菌种栽培金针菇成为发展趋势。与传统的固体菌种栽培模式相比，采用液体菌种具有生产周期短，菌龄一致，萌发快，出菇齐，活力强，污染率低等特点。在液体菌种培养过程中，液体菌种培养时间太短会造成后期金针菇子实体发育不良，影响出菇质量与产量；培养时间过长，菌种萌发力低下，菌种吃料慢、污染率高、生育期延长，也直接影响金针菇的产量和品质。因此，掌握金针菇液体菌种的最佳培养时间是工厂化生产高品质、高产量金针菇的关键。本发明是一种能简单快速地检测出液体菌种培养过程中菌种的活力何时处于最强的状态，可及时提供优良的生产菌种。这不仅为金针菇企业实现工厂化高效生产提供了技术方便，而且避免了资源浪费，使企业能够提高生产效率，增加经济效益。
此外，现行的金针菇液体菌种培养方面的研究多限于培养基配方的研究，对于各种不同的培养基，菌种活力的快速检测尚无相应的研究，而这在工厂化金针菇的生产中十分重要。迄今为止，企业一直期待能够有一种快速、简便的检测方法来确定液体菌种是否达到活力最旺盛阶段的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种能够快速确定金针菇液体菌种活力的试剂盒，以便工厂化生产企业快速确定金针菇液体菌种是否达到活力最强阶段，利于下一步的接种栽培，防止菌种过早或过晚接到栽培培养基上而造成不出菇或产量低、品质差等情况，造成液体菌种及栽培培养基的浪费。本发明人发现通过上述几种试剂可以快速有效地确定金针菇液体菌种是否达到最大活力。本发明基于此发现而得以完成。
本发明方法一般包括以下具体步骤：
(1)取金针菇发酵液0.2-0.5ml加入1号检测容器中；
(2)向TR1中加入ddH2O50ml，取TR10.1～0.8ml、TR2溶液0.1～0.8ml，
混匀加入1号检测容器中；
(3)向1号检测容器中滴加TR3含碘溶液0.1～5份；
(4)取金针菇发酵液0.2-0.5ml加入2号检测容器中；
(5)加入TR4溶液0.1～3.5份于2号检测容器中；
(6)取金针菇发酵液0.2-0.5ml加入3号检测容器中；
(7)加入TR5溶液0.1～5份于3号检测容器中；
(8)再加入TR6溶液0.4～5份于3号检测容器中；
(9)如果1号检测容器中溶液呈透明色，2号检测容器中溶液呈铁锈红色，3号检测容器中溶液呈鲜粉色，则为金针菇液体菌种活力最强阶段。
在本发明方法中：
(1)所用的金针菇发酵液为任意配方的培养基。
(2)检测试剂TR1为以下(1)～(4)任一项或多项：
a)TR1为固体粉末，包含0.5～2.5g的可溶性淀粉；
b)TR1为固体粉末，包含0.1～1.0g的磷酸氢二钠；
c)TR1为固体粉末，包含0.1～1.0g的柠檬酸；
d)TR1为固体粉末，包含0.5～2.5g的可溶性淀粉、0.1～1.0g的磷酸氢二钠和0.1～1.0g的柠檬酸。
(3)检测试剂TR2为以下(1)～(3)任一项或多项：
a)TR2为液体溶液，由0.1～1.5g的磷酸氢二钠溶于50ml的ddH2O中配制而成；
b)TR2为液体溶液，由0.1～1.0g的柠檬酸，溶于50ml的ddH2O中配制而成；
c)TR2为液体溶液，由0.1～1.0g的磷酸氢二钠和0.1～1.0g的柠檬酸，溶于50ml的ddH2O中配制而成。
(4)检测试剂TR3为含碘的溶液。
(5)检测试剂TR4由0.01～1.5％的愈创木酚或0.05mmol ABTS的0.1mmol醋酸缓冲液(pH5.0)组成。
(6)检测试剂TR5为以下(1)～(4)任一项或多项：
a)TR5由0.2～2g干酪素组成；
b)TR5由pH3～8的磷酸缓冲液组成；
c)TR5由0.01～0.4％甲酚红指示剂组成；
d)TR5由0.01～0.1mg苯甲酸钠组成。
(7)检测试剂TR6为酚酞指示剂或0.01～0.4％甲酚红指示剂。
(8)根据本发明试剂盒，其中包括多个用于吸取检测试剂的容器。
(9)根据本发明试剂盒，其中所述容器选自：玻璃瓶、塑料瓶；检测容器为0.2-1.5ml的离心管。
(10)本发明提供了一种信息说明资料，其中基本上记载了本发明所述的方法。
(11)在一个实施方案中，该信息说明资料是呈选自下列的形式：纸质文件(包括但不限于文件单页、小册子、刊物)、磁介质、光盘、软件、电子出版物、网络出版物等，以及它们的组合。
(12)本发明提供一种试剂盒，其中包括：六个试剂盒容器，盛装试剂盒容器中的TR1、TR2、TR3、TR4、TR5、TR6试剂，至少30个检测容器，试剂盒的使用说明信息。
(13)根据本发明试剂盒，其中所述使用说明信息附着于试剂盒或者容器上。
(14)根据本发明试剂盒，其中所述使用说明信息基本上记载了快速检测金针菇液体菌种最大活力的方法。
(15)根据本发明试剂盒，其中试剂盒容器盛装固体1～50g，盛装液体1～50ml。
(16)本发明试剂盒的主要特点是：结构简单，携带、使用方便；测定准确率高，可以快速有效地检测出金针菇液体菌种是否达到活力最旺盛阶段，便于下一步的接种。
(17)本发明提供的方法可以快速有效地检测金针菇液体菌种是否达到最大活力阶段，这种简便，快捷的方法非常适用于工厂化生产企业对生产过程进行控制，提高效率，避免浪费。
(18)本发明的试剂盒结构简单，携带方便。本发明方法鉴别准确率高，
可以快速有效地检测出金针菇液体菌种是否达到生长最旺盛阶段。
本发明能快速简便的确定金针菇液体菌种的最大活力生长点，避免在生产过程中原料的浪费，提高接种质量，降低污染率，为金针菇工厂化生产提供技术支持。以下结合附图说明本方法的效果及意义。
附图说明
图1是试剂TR1、TR2、TR3协同检测前后对比。
图2是试剂TR4检测前后对比。
图3是试剂TR5、TR6协同检测前后对比。
具体实施方式
(1)下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅用于更详细具体地说明之用，而不应理解为以任何形式限制本发明。
(2)本发明对试验中所使用的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。
实施例
A、本发明检测试剂的配制例
(1)试剂TR1例1
配方：可溶性淀粉 1g。
配制方法：将配方量的可溶性淀粉加ddH2O50ml，搅拌溶解混匀即得。(2)试剂TR2例2
配方：磷酸氢二钠 1.4g，柠檬酸 0.7g，ddH2O50ml。
配制方法：将配方量的磷酸氢二钠和柠檬酸加ddH2O50ml，搅拌溶解混匀即得。
(3)试剂TR3例3
配方：I20.64g，KI1.25g，ddH2O50ml。
配制方法：将配方量的I2及KI加ddH2O50ml，搅拌溶解混匀即得。
(4)试剂TR4例4
配方：20μl的愈创木酚，0.05mmol ABTS的0.1mmol醋酸缓冲液(pH5.0)。
配制方法：20μl的愈创木酚用0.05mmol ABTS的0.1mmol醋酸缓冲液(pH5.0)定容至50ml，搅拌溶解混匀即得。
(5)试剂TR5例5
配方：干酪素1g
配制方法：干酪素1g用pH7.2的磷酸缓冲液定容至50ml，搅拌溶解混匀即得。
(6)试剂TR6例6
配方：酚酞指示剂。
B、本发明试剂盒例
(1)试剂盒例
本试剂盒由5支50ml盛装TR1-5的塑料瓶和1支50ml盛装TR6的棕色玻璃瓶组成，盒体为纸质，盒体上印有使用说明。还可以在该试剂盒中配备检测容器离心管。
C、本发明试剂盒应用例
应用例1
1)取配方一金针菇液体培养液0.5ml(配方一为：玉米粉5％、麸皮0.5％、酵母粉0.5％，葡萄糖2％、KH2PO40.1％、MgSO40.05％、CaCO30.2％、维生素B11mg)加入1号检测容器中；
2)向TR1加入ddH2O50ml，取试剂TR10.1～0.8ml，TR2溶液0.1～1.3ml，混匀加入上述检测容器中；
3)向1号检测容器中滴加TR3含碘溶液0.1～5份；
4)取配方一金针菇液体培养液0.5ml加入2号检测容器中；
5)加入TR4溶液0.1～3.5份于上述检测容器中；
6)取配方一金针菇液体培养液0.5ml加入3号检测容器中；
7)加入TR5溶液0.1～7份于上述检测容器中；
8)再加入TR6溶液0.4～5份于3号检测容器中；
9)1号检测容器中溶液呈透明色，2号检测容器中溶液呈铁锈红色，3号检测容器中溶液呈鲜粉色，确定为金针菇液体菌种活力最强阶段。
应用例2
1)取配方二金针菇液体培养液0.5ml(配方二为：玉米粉3％、麸皮1％、酵母粉0.5％，葡萄糖2％、KH2PO40.1％、MgSO40.05％、CaCO30.2％、维生素B11mg)加入1号检测容器中；
2)向TR1加入ddH2O50ml，取TR10.1～0.8ml，TR2溶液0.1～1.3ml，混匀加入上述检测容器中；
3)向1号检测容器中滴加TR3含碘溶液0.1～5份；
4)取配方二金针菇液体培养液0.5ml加入2号检测容器中；
5)加入TR4溶液0.1～3.5份于上述检测容器中；
6)取配方二金针菇液体培养液0.5ml加入3号检测容器中；
7)加入TR5溶液0.1～7份于上述检测容器中；
8)再加入TR6溶液0.4～5份于3号检测容器中；
9)1号检测容器中溶液呈透明色，2号检测容器中溶液呈铁锈红色，3号检测容器中溶液呈鲜粉色，确定为金针菇液体菌种活力最强阶段。
以上通过具体的实施例对本发明进行了说明，但本发明并不限于这些具体的实施例。本领域技术人员应当理解，还可以对本发明做各种修改、等同替换、变化等等。但是，这些变换只要未偏离本发明的精神，都应在本发明的保护范围之内。另外，本申请说明书和权利要求书所使用的一些术语并不是限制性的，仅仅是为了便于描述。
Claims (3)
1.一种金针菇液体菌种活力的快速检测试剂盒，其特征在于，主要由TR1、TR2、TR3、TR4、TR5和TR6六种检测试剂组成；
所述检测试剂TR1为以下(1)～(4)任一项或多项组成：
(1)TR1为固体粉末，包含0.5～2.5g的可溶性淀粉；
(2)TR1为固体粉末，包含0.1～1.0g的磷酸氢二钠；
(3)TR1为固体粉末，包含0.1～1.0g的柠檬酸；
(4)TR1为固体粉末，包含0.5～2.5g的可溶性淀粉、0.1～1.0g的磷酸氢二钠和0.1～1.0g的柠檬酸；
所述检测试剂TR2为以下(5)～(7)任一项或多项组成：
(5)TR2为液体溶液，由0.1～1.5g的磷酸氢二钠溶于50ml的ddH2O中配制而成；
(6)TR2为液体溶液，由0.1～1.0g的柠檬酸溶于50ml的ddH2O中配制而成；
(7)TR2为液体溶液，由0.1～1.0g的磷酸氢二钠和0.1～1.0g的柠檬酸溶于50ml的ddH2O中配制而成；
所述检测试剂TR3为含碘的溶液；
所述检测试剂TR4由0.01～1.5％的愈创木酚和pH＝5.0的0.05mmol ABTS的0.1mmol醋酸缓冲液组成；
所述检测试剂TR5为以下(8)～(11)任一项或多项组成：
(8)TR5由0.2～2g干酪素组成；
(9)TR5由pH3～8的磷酸缓冲液组成；
(10)TR5由0.01～0.4％甲酚红指示剂组成；
(11)TR5由0.01～0.1mg苯甲酸钠组成；
所述检测试剂TR6为酚酞指示剂或0.01～0.4％甲酚红指示剂。
2.根据权利要求1所述的金针菇液体菌种活力的快速检测试剂盒，其特征在于：其中包括：至少六个容器、盛装在该容器中的检测试剂和该试剂盒的使用说明信息。
3.一种如权利要求1所述的金针菇液体菌种活力的快速检测试剂盒的使用方法，其特征是包括以下步骤：
(1)取金针菇发酵液0.2-0.5ml加入1号检测容器中；
(2)向TR1加入ddH2O50ml，取TR10.1～0.8ml，TR2溶液0.1～1.3ml，混匀加入上述检测容器中；
(3)向1号检测容器中滴加TR3含碘溶液0.1～5份；
(4)取金针菇发酵液0.5ml加入2号检测容器中；
(5)加入TR4溶液0.1～3.5份于2号检测容器中；
(6)取金针菇发酵液0.5ml加入3号检测容器中；
(7)加入TR5溶液0.1～7份于上述检测容器中；
(8)再加入TR6溶液0.4～5份于3号检测容器中；
(9)如果1号检测容器中溶液呈透明色，2号检测容器中溶液呈铁锈红色，3号检测容器中溶液呈鲜粉色，则为金针菇液体菌种活力最强阶段。
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| 金针菇固体培养几种胞外酶活力变化的研究;李蕤等;《中国食用菌》;20021231;第21卷(第1期);12-14 * |
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