CN104095148A - 一种含动物肠道有益菌的产品制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种含动物肠道有益菌的产品制备方法，通过将包括嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）培菌及提取，混合、造粒、干燥等方法制备而成，该方法简单易行，容易操作；通过一种保护剂，可用于两种混合菌种，成功的获得了可以适用于两种菌种的保护剂，使得一次摄入可以获得双重保护。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，尤其是涉及一种含动物肠道有益菌产品的生产方法。
技术背景
肠道是动物消化系统中最长的也是最重要的器官。90%以上的营养物质要靠肠道吸收，故肠道被称作生命最大的宝库；同时又有90 %以上的毒素由肠道排出体外，故肠道又称作人体最大的排污厂。所以肠道健康与否对动物健康至关重要。健康动物的肠道内生活着400多种、数十万亿的细菌，根据对动物的作用，我们把这些细菌分为有益菌（90%）、有害菌（0.9%），这些细菌相互依存、相互制约，处于相对平衡状态，组成体内最大的微生态环境，成为维护人体健康的天然防线，共同完成营养吸收和毒素排泄的作用。对动物的消化吸收起着极其重要作用。肠道内微生态环境失调，有害菌产生的毒素被肠壁细胞吸收后会引起慢性中毒，引起各种疾病的衍生，甚至导致死亡。
有益菌又称为“益生菌”， 这一概念最早来源于希腊语，意思是“对生命有益”（for life）。人类最早利用的益生菌，就是乳酸菌，早在远古时代，人类的日常饮食中就已经含有乳酸发酵类的食品了。益生菌大体上可分成三大类，其中包括： ①乳杆菌类（如嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、拉曼乳杆菌等）； ②双歧杆菌类（如长双歧杆菌、金双歧、短双歧杆菌、卵形双歧杆菌、嗜热双歧杆菌等）； ③革兰氏阳性球菌（如粪链球菌、乳球菌、中介链球菌等）。此外，还有一些酵母菌与酶亦可归入益生菌的范畴。当人体住满足够的益生菌时，人就会处于健康的状态，但是一旦体内菌群失去平衡，比如菌种间比例发生大幅变化或者超出正常数值时，那么腹泻、过敏、胃口不佳、疲倦、免疫力低等一系列病症就会随之而来，人体的健康就会亮红灯，而这时适当添加益生菌，协助体内菌群平衡，才能让人重现健康状态。
国际上已对乳杆菌亚种菌株进行了大量的研究，含乳杆菌的食物几乎覆盖人类生活的方方面面。然而，虽然乳杆菌能够吸附在小肠和大肠中，但是当它们以活性菌的形式与食物一起制备并摄取时，由于pH很低的胃酸的存在，其经常在胃中就被灭活，从而无法以活菌的形式达到肠道中，也无法真正起到调节肠道菌群的作用。因此，如何将乳杆菌活菌能过顺利的经过胃酸和胆汁而不被灭菌，而是能够保持活性直到肠道中是乳酸菌研究的一个非常重要的分支。
目前，常用于保持乳酸菌活性的方法主要有两种：
（1） 通过筛选新的耐酸、耐胆汁菌株，例如:
CN1406274 A公开了一种“新颖的类干酪乳杆菌属菌株(类干酪乳杆菌类干酪亚种CSK01，Lactobacillusparacasei subsp.paracasei CSK 01〕，它采用下述步骤制得：(1)向胃肠炎患者给予从猪的胃粘液获得的乳酸菌；(2)在这些患者完全病愈后，再从他们的粪便中分离出乳酸菌；(3)进行16SrRNA测序和RAPD聚合酶链式反应鉴别出该细菌菌株。本发明的乳杆菌可粘附在胃和肠粘膜上，并在它们上面增殖，该乳杆菌可突出地抵抗酸性条件和胆汁质条件，并具有优异的抗细菌特性，从而可广泛用于开发新药、功能性食物、增进健康的添加剂等。”
CN1520754 A公开了一种“含有孢子型乳酸菌的水饮料制法”，其主要以内生孢子型乳酸菌为主要成份，先使乳酸菌内部产生具保护作用的内生孢子，使其呈现休眠状态存在于水溶液中，让乳酸菌在制成水饮料及喝入人体的过程中不会被消化道中的各种不利于乳酸菌的因子(如温度、唾液、胃酸等消化液)所伤害，使其在人体小肠肠道中苏醒，来发挥乳酸菌于肠道中的作用，以使乳酸菌饮料能达到其应有的增进肠道健康的效果。
（2）通过添加保护剂使得乳酸菌与胃酸隔绝以避免其被胃酸灭活，例如，CN103013972A公开了一种用微胶囊包裹的干酪乳杆菌，已达到能够抵抗胃酸等恶劣环境的目的。
虽然通过筛选新的菌珠能够制备出耐胃酸、耐胆汁的乳酸菌产品，但是筛选新的菌种需要耗费大量的时间和金钱，还具有不确定性。而微胶囊等包埋工艺由于将乳酸菌进行隔离，不仅工艺复杂，无法保证到肠内的活菌率，无法实现胃部的保健调节效果，同时产生的产品还需要额外的调味，不然则口感差，不易为消费者所接受。
发明内容
基于上述原因，本发明的目的在于提供一种含动物肠道有益菌的产品的制备方法及由该方法制备的菌粉。既能够在食用时通过胃酸和胆汁而不被灭活，同时工艺简单、口感好，能同时起到即保护胃部又能保健肠部的效果，易为消费者所接受。
本发明的目的是这样实现的：
一种含肠道有益菌的产品的制备方法，包括嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）培菌及提取，混合、造粒、干燥等技术，主要包括以下特征：
A、菌种培养：
（1）斜面菌种：将嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）、采用MRS固体培养基灭菌、冷却接种，在5%CO2、37℃条件下厌氧培养48小时，置于4℃冰箱内保藏；将枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）采用土豆琼脂培养基灭菌、冷却接种，在37℃条件下培养24小时，置于4℃冰箱内保藏；
（2）三角瓶种：将经过保藏的嗜酸乳杆菌用MRS液体培养基灭菌、冷却接种，在5%CO2、37℃条件下厌氧培养36小时；将经过保藏的枯草芽孢杆菌用土豆培养基灭菌、冷却接种，在37℃条件下摇瓶培养24小时；
（3）发酵罐培养：发酵罐培养用玉米水解为葡萄糖、滤清后实消，加入灭菌后的尿素为氮源，冷却到37℃接种，培养中期流加灭菌后的氨水调节pH值。接种是将三角培养好的二株菌种子分另接入不同的发酵罐，进行分批培养，大型发酵罐还需加入一级种子罐，用对数期末期种子接种。嗜酸乳杆菌在5%CO2、37℃条件下厌氧培养48小时；枯草芽孢杆菌在37℃条件下通气培养36小时，待大部分形成芽孢后成熟。
B、离心：分别将培养成熟的嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌在3000r/min离心15min，收集菌泥；无菌水洗涤，再3000r/min离心15min，收集菌泥，洗涤3次；
C、制粒：将嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌进行联合制粒，首先将嗜酸乳杆菌泥和枯草芽孢杆菌泥以1～6：1～8的比例混合，取混合后的菌泥2份，5份可溶性淀粉、0.5份海藻糖、0.5份阿拉伯胶、2份羧甲基纤维素钠混合均匀，得到混合物。将混合物用造粒机制成粒径为0.5mm-1mm的含活性嗜酸乳杆菌和活性枯草芽孢杆菌的颗粒。
D、将含活性嗜酸乳杆菌和活性枯草芽孢杆菌的颗粒置于45℃的流化床进行低温干燥。
E、混合：6份活性干嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌颗粒、0.2份木聚糖酶、0.4份β-葡聚糖酶、3.8份沸石粉混合均匀即成。
优选的，将嗜酸乳杆菌泥和枯草芽孢杆菌泥以1：3.7的比例混合；还优选将嗜酸乳杆菌泥和枯草芽孢杆菌泥以5：1的比例混合。根据本发明的制备方法制得的产品中含有≧8×109cfu/g的嗜酸乳杆菌和≧3×1010cfu/g的枯草芽孢杆菌。
本发明具有以下有益效果
（1）采用乳酸菌、枯草芽孢杆菌增殖发酵后，分别加入可溶性淀粉、海藻糖、阿拉伯胶、羧甲基纤维素钠等保护剂，经造粒、低温干燥制成含活性干乳酸菌、枯草芽孢杆菌产品，再加入木聚糖酶、β-葡聚糖酶等混合制成益生菌的产品，获得了能够耐胃酸和耐胆汁的乳酸菌产品，该方法简单易行，容易操作；
（2）首次尝试了通过一种保护剂，用于两种混合菌种，通过混合菌种的发酵特点，成功的获得了可以适用于两种菌种的保护剂，使得一次摄入可以获得双重保护。
（3）首次发现了嗜酸酵母菌与枯草芽孢杆菌对抗胃酸和抗胆汁有显著的协同效应，二者同时使用时，能够有效的提高其抗胃酸和耐胆汁的能力。
附图说明
图1本发明活性乳酸菌生产工艺流程图。
具体实施方式
下面结合实施例并对照附图对本发明作进一步详细说明。应当理解，凡是本领域技术人员根据本发明的内容不需要付出创造性的劳动就能够想到的基本改进都在本发明的保护范围之内。
实施例1
一种含肠道有益菌的产品的制备方法，具体步骤如下：
A、菌种培养：
（1）斜面菌种：将嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）、采用MRS固体培养基灭菌、冷却接种，在5%CO2、37℃条件下厌氧培养48小时，置于4℃冰箱内保藏；将枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）采用土豆琼脂培养基灭菌、冷却接种，在37℃条件下培养24小时，置于4℃冰箱内保藏；
（2）三角瓶种：将经过保藏的嗜酸乳杆菌用MRS液体培养基灭菌、冷却接种，在5%CO2、37℃条件下厌氧培养36小时；将经过保藏的枯草芽孢杆菌用土豆培养基灭菌、冷却接种，在37℃条件下摇瓶培养24小时；
（3）发酵罐培养：发酵罐培养用玉米水解为葡萄糖、滤清后实消，加入灭菌后的尿素为氮源，冷却到37℃接种，培养中期流加灭菌后的氨水调节pH值。接种是将三角培养好的二株菌种子分另接入不同的发酵罐，进行分批培养，大型发酵罐还需加入一级种子罐，用对数期末期种子接种。嗜酸乳杆菌在5%CO2、37℃条件下厌氧培养48小时；枯草芽孢杆菌在37℃条件下通气培养36小时，待大部分形成芽孢后成熟。
B、离心：分别将培养成熟的嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌在3000r/min离心15min，收集菌泥；无菌水洗涤，再3000r/min离心15min，收集菌泥，洗涤3次；
C、制粒：将嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌进行联合制粒，首先将嗜酸乳杆菌泥和枯草芽孢杆菌泥以1：3.7的比例混合，取混合后的菌泥2份，5份可溶性淀粉、0.5份海藻糖、0.5份阿拉伯胶、2份羧甲基纤维素钠混合均匀，得到混合物。将混合物用造粒机制成粒径为0.5mm-1mm的含活性嗜酸乳杆菌和活性枯草芽孢杆菌的颗粒。
D、干燥：将含活性嗜酸乳杆菌和活性枯草芽孢杆菌的颗粒置于45℃的流化床进行低温干燥。
E、混合：6份活性干嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌的颗粒、0.2份木聚糖酶、0.4份β-葡聚糖酶、3.8份沸石粉混合均匀即成。
实施例2
一种含肠道有益菌的产品的制备方法，具体步骤如下：
A、菌种培养：
（1）斜面菌种：将嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）、采用MRS固体培养基灭菌、冷却接种，在5%CO2、37℃条件下厌氧培养48小时，置于4℃冰箱内保藏；将枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）采用土豆琼脂培养基灭菌、冷却接种，在37℃条件下培养24小时，置于4℃冰箱内保藏；
（2）三角瓶种：将经过保藏的嗜酸乳杆菌用MRS液体培养基灭菌、冷却接种，在5%CO2、37℃条件下厌氧培养36小时；将经过保藏的枯草芽孢杆菌用土豆培养基灭菌、冷却接种，在37℃条件下摇瓶培养24小时；
（3）发酵罐培养：发酵罐培养用玉米水解为葡萄糖、滤清后实消，加入灭菌后的尿素为氮源，冷却到37℃接种，培养中期流加灭菌后的氨水调节pH值。接种是将三角培养好的二株菌种子分另接入不同的发酵罐，进行分批培养，大型发酵罐还需加入一级种子罐，用对数期末期种子接种。嗜酸乳杆菌在5%CO2、37℃条件下厌氧培养48小时；枯草芽孢杆菌在37℃条件下通气培养36小时，待大部分形成芽孢后成熟。
B、离心：分别将培养成熟的嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌在3000r/min离心15min，收集菌泥；无菌水洗涤，再3000r/min离心15min，收集菌泥，洗涤3次；
C、制粒：将嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌进行联合制粒，首先将嗜酸乳杆菌泥和枯草芽孢杆菌泥以5：1的比例混合，取混合后的菌泥2份，5份可溶性淀粉、0.5份海藻糖、0.5份阿拉伯胶、2份羧甲基纤维素钠混合均匀，得到混合物。将混合物用造粒机制成粒径为0.5mm-1mm的含活性嗜酸乳杆菌和活性枯草芽孢杆菌的颗粒。
D、干燥：将含活性嗜酸乳杆菌及活性枯草芽孢杆菌的颗粒置于45℃的流化床进行低温干燥。
E、混合：6份活性干嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌的颗粒、0.2份木聚糖酶、0.4份β-葡聚糖酶、3.8份沸石粉混合均匀即成。
实施例3
一种含肠道有益菌的产品的制备方法，具体步骤如下：
A、菌种培养：
（1）斜面菌种：将嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）、采用MRS固体培养基灭菌、冷却接种，在5%CO2、37℃条件下厌氧培养48小时，置于4℃冰箱内保藏；将枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）采用土豆琼脂培养基灭菌、冷却接种，在37℃条件下培养24小时，置于4℃冰箱内保藏；
（2）三角瓶种：将经过保藏的嗜酸乳杆菌用MRS液体培养基灭菌、冷却接种，在5%CO2、37℃条件下厌氧培养36小时；将经过保藏的枯草芽孢杆菌用土豆培养基灭菌、冷却接种，在37℃条件下摇瓶培养24小时；
（3）发酵罐培养：发酵罐培养用玉米水解为葡萄糖、滤清后实消，加入灭菌后的尿素为氮源，冷却到37℃接种，培养中期流加灭菌后的氨水调节pH值。接种是将三角培养好的二株菌种子分另接入不同的发酵罐，进行分批培养，大型发酵罐还需加入一级种子罐，用对数期末期种子接种。嗜酸乳杆菌在5%CO2、37℃条件下厌氧培养48小时；枯草芽孢杆菌在37℃条件下通气培养36小时，待大部分形成芽孢后成熟。
B、离心：分别将培养成熟的嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌在3000r/min离心15min，收集菌泥；无菌水洗涤，再3000r/min离心15min，收集菌泥，洗涤3次；
C、制粒：将嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌分别进行制粒，取菌泥2份，5份可溶性淀粉、0.5份海藻糖、0.5份阿拉伯胶、2份羧甲基纤维素钠混合均匀，得到混合物。将混合物用造粒机制成粒径为0.5mm-1mm的含活性嗜酸乳杆菌和活性枯草芽孢杆菌的颗粒。
D、干燥：将含活性嗜酸乳杆菌和活性枯草芽孢杆菌的颗粒分别置于45℃的流化床进行低温干燥。
E、混合：取5份活性干嗜酸乳杆菌颗粒、1份活性干枯草芽孢杆菌颗粒、0.2份木聚糖酶、0.4份β-葡聚糖酶、3.8份沸石粉混合均匀即成。
实施例4
一种含肠道有益菌的产品的制备方法，具体步骤如下：
A、菌种培养：
（1）斜面菌种：将嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）、采用MRS固体培养基灭菌、冷却接种，在5%CO2、37℃条件下厌氧培养48小时，置于4℃冰箱内保藏；
（2）三角瓶种：将经过保藏的嗜酸乳杆菌用MRS液体培养基灭菌、冷却接种，在5%CO2、37℃条件下厌氧培养36小时；
（3）发酵罐培养：发酵罐培养用玉米水解为葡萄糖、滤清后实消，加入灭菌后的尿素为氮源，冷却到37℃接种，培养中期流加灭菌后的氨水调节pH值。接种是将三角培养好的菌种接入发酵罐，进行分批培养，大型发酵罐还需加入一级种子罐，用对数期末期种子接种。嗜酸乳杆菌在5%CO2、37℃条件下厌氧培养48小时；
B、离心：将培养成熟的嗜酸乳杆菌收集菌泥；无菌水洗涤，再3000r/min离心15min，收集菌泥，洗涤3次；
C、制粒：将嗜酸乳杆菌泥2份，5份可溶性淀粉、0.5份海藻糖、0.5份阿拉伯胶、2份羧甲基纤维素钠混合均匀，得到混合物。将混合物用造粒机制成粒径为0.5mm-1mm的含活性嗜酸乳杆菌的颗粒。
D、干燥：将含活性嗜酸乳杆菌的颗粒分别置于45℃的流化床进行低温干燥。
E、混合：取6份活性干嗜酸乳杆菌颗粒、0.2份木聚糖酶、0.4份β-葡聚糖酶、3.8份沸石粉混合均匀即成。
实施例5
一种含肠道有益菌的产品的制备方法，具体步骤如下：
A、菌种培养：
（1）斜面菌种：将枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）采用土豆琼脂培养基灭菌、冷却接种，在37℃条件下培养24小时，置于4℃冰箱内保藏；
（2）三角瓶种：将经过保藏的枯草芽孢杆菌用土豆培养基灭菌、冷却接种，在37℃条件下摇瓶培养24小时；
（3）发酵罐培养：发酵罐培养用玉米水解为葡萄糖、滤清后实消，加入灭菌后的尿素为氮源，冷却到37℃接种，培养中期流加灭菌后的氨水调节pH值。接种是将三角培养好的菌种接入发酵罐，进行分批培养，大型发酵罐还需加入一级种子罐，用对数期末期种子接种；枯草芽孢杆菌在37℃条件下通气培养36小时，待大部分形成芽孢后成熟。
B、离心：将培养成熟的枯草芽孢杆菌在3000r/min离心15min，收集菌泥；无菌水洗涤，再3000r/min离心15min，收集菌泥，洗涤3次；
C、制粒：将枯草芽孢杆菌菌泥2份，5份可溶性淀粉、0.5份海藻糖、0.5份阿拉伯胶、2份羧甲基纤维素钠混合均匀，得到混合物。将混合物用造粒机制成粒径为0.5mm-1mm的含活性枯草芽孢杆菌的颗粒。
D、干燥：将含活性枯草芽孢杆菌的颗粒置于45℃的流化床进行低温干燥。
E、混合：取6份活性干嗜酸乳杆菌颗粒、0.2份木聚糖酶、0.4份β-葡聚糖酶、3.8份沸石粉混合均匀即成。
实施例6
一种含肠道有益菌的产品的制备方法，具体步骤如下：
A、菌种培养：
（1）斜面菌种：将嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）、采用MRS固体培养基灭菌、冷却接种，在5%CO2、37℃条件下厌氧培养48小时，置于4℃冰箱内保藏；将枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）采用土豆琼脂培养基灭菌、冷却接种，在37℃条件下培养24小时，置于4℃冰箱内保藏；
（2）三角瓶种：将经过保藏的嗜酸乳杆菌用MRS液体培养基灭菌、冷却接种，在5%CO2、37℃条件下厌氧培养36小时；将经过保藏的枯草芽孢杆菌用土豆培养基灭菌、冷却接种，在37℃条件下摇瓶培养24小时；
（3）发酵罐培养：发酵罐培养用玉米水解为葡萄糖、滤清后实消，加入灭菌后的尿素为氮源，冷却到37℃接种，培养中期流加灭菌后的氨水调节pH值。接种是将三角培养好的二株菌种子分另接入不同的发酵罐，进行分批培养，大型发酵罐还需加入一级种子罐，用对数期末期种子接种。嗜酸乳杆菌在5%CO2、37℃条件下厌氧培养48小时；枯草芽孢杆菌在37℃条件下通气培养36小时，待大部分形成芽孢后成熟。
B、离心：分别将培养成熟的嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌在3000r/min离心15min，收集菌泥；无菌水洗涤，再3000r/min离心15min，收集菌泥，洗涤3次；
C、制粒：将嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌进行联合制粒，首先将嗜酸乳杆菌泥和枯草芽孢杆菌泥以5：1的比例混合，取混合后的菌泥2份， 0.5份海藻糖、混合均匀，得到混合物。将混合物用造粒机制成粒径为0.5mm-1mm的含活性嗜酸乳杆菌和活性枯草芽孢杆菌的颗粒。
D、干燥：将含活性嗜酸乳杆菌及活性枯草芽孢杆菌的颗粒置于45℃的流化床进行低温干燥。
E、混合：6份活性干嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌的颗粒、0.2份木聚糖酶、0.4份β-葡聚糖酶、3.8份沸石粉混合均匀即成。
实施例7
一种含肠道有益菌的产品的制备方法，具体步骤如下：
A、菌种培养：
（1）斜面菌种：将嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）、采用MRS固体培养基灭菌、冷却接种，在5%CO2、37℃条件下厌氧培养48小时，置于4℃冰箱内保藏；将枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）采用土豆琼脂培养基灭菌、冷却接种，在37℃条件下培养24小时，置于4℃冰箱内保藏；
（2）三角瓶种：将经过保藏的嗜酸乳杆菌用MRS液体培养基灭菌、冷却接种，在5%CO2、37℃条件下厌氧培养36小时；将经过保藏的枯草芽孢杆菌用土豆培养基灭菌、冷却接种，在37℃条件下摇瓶培养24小时；
（3）发酵罐培养：发酵罐培养用玉米水解为葡萄糖、滤清后实消，加入灭菌后的尿素为氮源，冷却到37℃接种，培养中期流加灭菌后的氨水调节pH值。接种是将三角培养好的二株菌种子分另接入不同的发酵罐，进行分批培养，大型发酵罐还需加入一级种子罐，用对数期末期种子接种。嗜酸乳杆菌在5%CO2、37℃条件下厌氧培养48小时；枯草芽孢杆菌在37℃条件下通气培养36小时，待大部分形成芽孢后成熟。
B、离心：分别将培养成熟的嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌在3000r/min离心15min，收集菌泥；无菌水洗涤，再3000r/min离心15min，收集菌泥，洗涤3次；
C、制粒：将嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌进行联合制粒，首先将嗜酸乳杆菌泥和枯草芽孢杆菌泥以5：1的比例混合，取混合后的菌泥2份，5份可溶性淀粉、0.5份海藻糖、0.5份阿拉伯胶、2份羧甲基纤维素钠混合均匀，得到混合物。将混合物用造粒机制成粒径为0.5mm-1mm的含活性嗜酸乳杆菌和活性枯草芽孢杆菌的颗粒。
D、干燥：将含活性嗜酸乳杆菌及活性枯草芽孢杆菌的颗粒置于45℃的流化床进行低温干燥，即成。
下面通过胃酸试验和胆汁试验的结果来说明本发明的有益效果：
（1） 胃酸试验
试验方法：
参考J.E.Holcombe等，(1991)，Cult.Dairy Prod.J.，26(3)：4-5以及US 5711977A中所公开的方法，以产品在中性(pH7)及仿胃酸环境(pH 2)中的存活菌数作为测试指标。取各实施例制得的产品0.1g，添加10ml的生理食盐水溶液(0.85％NaCl，pH 7)， 先以竹签将菌体搅散，再振荡均匀，然后分别取0.5ml经散浮的菌液置于pH 7及pH 2的生理食盐水溶液中，于37℃的恒温培养箱内静置 2小时后，分别测其存活菌数。试验结果列于下表中：
表1 耐胃酸试验结果
注：其中A表示嗜酸乳杆菌，B表示枯草芽孢杆菌
一般来说，乳酸菌的其生长环境只能达到pH 3.2至4.5，而在胃中极低pH的环境(pH 2.0至3.2)将严重影响它的存活。胃酸pH值会随胃内容物进入时间及种类而有pH 1.5～4.5之不同，平均历时2小时，故试验时采用pH 2作为代表，且因酸性物质与盐酸相似，故以经盐酸调整pH值为2的生理食盐水(0.85％NaCl/0.01 N HCl系统)，于37℃下处理2小时后测试存活的菌数，并与pH 7的对照组作比较。
试验结果显示，经不同pH值，37℃-2h处理后，采用本发明的方法处理的嗜酸乳杆菌的菌数只降低2.36个log值，枯草亚芽孢杆菌的菌数仅降低5.73个log值，相比之下，无论是单独对每种菌分别进行制粒后再混合，还是单独使用一种菌，其菌数都会在胃酸条件下大幅降低，特别是枯草芽孢杆菌的降低更为显著。同时如果仅仅在制粒时仅仅加入海藻糖，或是后续没有加入木聚糖酶和β-葡聚糖酶都会大大影响其在胃酸中的稳定性（具体参见表1），说明两种菌在抗胃酸方面具有协调效用，而且可溶性淀粉、阿拉伯胶、羧甲基纤维素、木聚糖酶、β-葡聚糖酶也对其耐酸性具有显著的提升作用。
（2）胆盐耐受性试验
一、实验操作程序：
取各实施例制得的产品0.1g，添加10ml的生理食盐水溶液(0.85％NaCl，pH 7)， 先以竹签将菌体搅散，再振荡均匀，然后分别取0.1ml经散浮的菌液置于接种物接种于 10mL含0.3％牛胆汁的MRS肉汤(MRSO)中，于 37℃培养24小时后，计数其残存菌数，其中Δlog菌数值＝log(出始菌数-MRSO 肉汤的菌数)，而Δlog菌数值越小（可为负数），表示试验菌株的胆盐耐受性越佳。试验结果列于表2中。
表2 各实施例样品耐胆汁试验结果
注：其中A表示嗜酸乳杆菌，B表示枯草芽孢杆菌
从表2中，可以看出，本发明的制备方法制得的产品对于胆盐有较好的耐受性，尽管经过24小时后，嗜酸乳酸菌和枯草芽孢杆菌的菌数都有所下降，但是其log值都还在7以上，因而都还处于健康促进特性的活菌数范围内。
Claims (5)
1.一种含动物肠道有益菌的产品制备方法，包括嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）培菌及提取，混合、造粒、干燥等技术，主要包括以下特征：
A、菌种培养：
（1）斜面菌种：将嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）、采用MRS固体培养基灭菌、冷却接种，在5%CO2、37℃条件下厌氧培养48小时，置于4℃冰箱内保藏；将枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）采用土豆琼脂培养基灭菌、冷却接种，在37℃条件下培养24小时，置于4℃冰箱内保藏；
（2）三角瓶种：将经过保藏的嗜酸乳杆菌用MRS液体培养基灭菌、冷却接种，在5%CO2、37℃条件下厌氧培养36小时；将经过保藏的枯草芽孢杆菌用土豆培养基灭菌、冷却接种，在37℃条件下摇瓶培养24小时；
（3）发酵罐培养：发酵罐培养用玉米水解为葡萄糖、滤清后实消，加入灭菌后的尿素为氮源，冷却到37℃接种，培养中期流加灭菌后的氨水调节pH值；接种是将三角培养好的二株菌种子分另接入不同的发酵罐，进行分批培养，大型发酵罐还需加入一级种子罐，用对数期末期种子接种；嗜酸乳杆菌在5%CO2、37℃条件下厌氧培养48小时；枯草芽孢杆菌在37℃条件下通气培养36小时，待大部分形成芽孢后成熟；
B、离心：分别将培养成熟的嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌在3000r/min离心15min，收集菌泥；无菌水洗涤，再3000r/min离心15min，收集菌泥，洗涤3次；
C、制粒：将嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌进行联合制粒，首先将嗜酸乳杆菌泥和枯草芽孢杆菌泥以1～6：1～8的比例混合，取混合后的菌泥2份，5份可溶性淀粉、0.5份海藻糖、0.5份阿拉伯胶、2份羧甲基纤维素钠混合均匀，得到混合物；将混合物用造粒机制成粒径为0.5mm-1mm的含活性嗜酸乳杆菌和活性枯草芽孢杆菌的颗粒；
D、将含活性嗜酸乳杆菌和活性枯草芽孢杆菌的颗粒置于45℃的流化床进行低温干燥；
E、混合：6份活性干嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌颗粒、0.2份木聚糖酶、0.4份β-葡聚糖酶、3.8份沸石粉混合均匀即成。
2.一种如权利要求1所述的含动物肠道有益菌的产品制备方法，其特征在于将嗜酸乳杆菌泥和枯草芽孢杆菌泥以1：3.7的比例混合。
3.一种如权利要求1所述的含动物肠道有益菌的产品制备方法，其特征在于将嗜酸乳杆菌泥和枯草芽孢杆菌泥以5：1的比例混合。
4.一种由权利要求1-3中任一项权利要求的制备方法制得的产品。
5.一种如权利要求4所述的产品，其特征在于其产品中含有≧8×109cfu/g的嗜酸乳杆菌和≧3×1010cfu/g的枯草芽孢杆菌。
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