CN104083635A - 具有皮肤营养保湿作用的药物组合物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有皮肤营养保湿作用的药物组合物及其制备方法与应用，本发明原材料均为天然活性提取物，对皮肤无刺激性。所述具有皮肤营养保湿作用的药物组合物，是采用如下的原料制备的：以小红参、铁皮石斛、天山雪莲、金莲花、大花红景天和纤花耳草的总质量计，小红参、铁皮石斛、天山雪莲、金莲花、大花红景天和纤花耳草，任一组分的质量百分比含量均不超过总质量的40％。本发明的药物组合物配方新颖合理，制备方法简单。动物实验和人体试验证实本发明的药物组合物皮肤营养保湿的效果显著，舒适性好，安全性高，功效成分不易破坏，较同类产品具有更好效果，具有十分广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物组合物及其制备方法，特别是一种具有皮肤营养保湿作用的化妆品用药物组合物及其制备方法，适用添加于膏类、霜类、乳类、液类(香水除外)的化妆品。
背景技术
水是保持皮肤健康形态的首要条件，皮肤含水量的多少决定皮肤是否稚嫩、丰满、亮泽与柔软。正常情况下皮肤贮存的水分约占人体所有水量的18％～20％，婴儿皮肤贮水量可高达80％。如果皮肤低于正常水平，就是缺水的皮肤，这样的皮肤往往是颜色暗淡、干燥、蜕皮甚至有细小褶皱的，就个人的主观感受上，过分干燥的皮肤多会伴随干燥、紧绷的感觉。正常的角质层中存在多种天然保湿因子，其中主要是氨基酸(40％)、吡咯烷酮羧酸(12％)、乳酸(12％)、糖(8.5％)、尿素(7％)以及氯、钠、钾等。(Verdier-Sévrain S，Bonté F.Skin hydration：a review on its molecular mechanisms[J].J Cosmet Dermatol，2007，6(2)：75-82)在我国，正常人皮肤表面含水量和皮脂含量因性别、年龄和部位的不同而有差异，其中1～33岁组男性前额皮肤含水量最高。(辛淑君、刘之力、史月君等.我国正常人皮肤表面皮脂和水分含量的研究[J].临床皮肤科杂志，2007，36(3)：131-133)如果皮肤极度缺水，人们就会出现皮肤干燥脱皮，眼角，嘴角和鼻梁上可以看到表情纹，脆弱敏感，常常泛红，缺少弹力等多种症状，这时候就需要外用保湿剂来缓解症状。(Crowther JM，Sieg A，Blenkiron P，et al.Measuring the effectsof topical moisturizers on changes in stratum corneum thickness，water gradients and hydration invivo[J].Br J Dermatol，2008，159(3)：567-577)也有不少公司开发出肤感良好的化妆品原料，如专利201210562483.5，该专利公开了一种皮肤保湿剂及其制备方法。以重量计，本发明由以下组分组成：肉豆蔻酸异丙酯：20～40，白油：20～40，蜂蜜：10～20，液体石蜡：10～20，凡士林3～8，羟乙基纤维素：1～3，硬脂酸单甘油酯：30～50，硬脂酸铝：2～5，香精：0.1～0.3，邻苯二甲基二丁酯：10～20，水：100～200。如专利201210562483.5，该专利公开了一种皮肤保湿组合物，具体包括水、磷脂、湿润剂和润肤剂。所述润肤剂是具有化学式R1-COO-R的脂肪族酸，湿润剂是具有最多八个碳原子的碳链长度的多羟基化合物。如专利201210090489.7，该专利公开了一种肝素用于皮肤保湿与美白及防止皮肤老化。本发明另关于一种用于保湿皮肤、美白皮肤及防止皮肤老化的医药组合物，其包含肝素。
由于不少化学品会对皮肤造成不可逆转的伤害，而天然植物化妆品不使用化学药品，对皮肤无刺激性，并能够帮助皮肤逐渐恢复正常功能，因此天然植物化妆品备受消费者青睐。我国运用中草药进行美容已有数千年历史，效果明显。中药。中医理论认为津液与美容的关系是很密切的。津液充足，可使皮肤有弹性、饱满湿润，不易老化；若津液不足，皮肤即可干瘪起皱，脱屑瘙痒，易于老化。由于保养不当、工作或生活环境、遗传因素或某些疾病，导致津液大量流失，使面部肌肤失去红润、光泽，无弹性、粗糙晦暗甚至萎黄。不少研究者对中草药的天然皮肤保湿成分进行开发，取得了不少有价值的成果。如专利201080005620.4该专利公开了用于皮肤保湿的组合物，其包含作为有效成分的野鼠尾草籽凝胶。如专利200780051804.2，该专利公开了一种用于缓解皮肤干燥症状的皮肤外用组合物，以及该外用物用作皮肤保湿化妆品的应用，所述外用组合物含有北玄参提取物作为主要成分和茯苓提取物作为活性成分。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种具有皮肤营养保湿作用的药物组合物及其用途。
本发明所述的具有皮肤营养保湿作用的药物组合物，是以小红参、铁皮石斛、天山雪莲、金莲花、大花红景天和纤花耳草为原料制备的，且任一组分的重量百分含量均不超过总量的40％；
具有皮肤营养保湿作用的药物组合物，是以如下质量份数的原料制备的：小红参1～60份，铁皮石斛1～60份，天山雪莲1～60份，金莲花1～60份，大花红景天1～60份，纤花耳草1～60份。
具有皮肤营养保湿作用的药物组合物，是以如下质量份数的原料制备的：小红参1～50份，铁皮石斛1～50份，天山雪莲1～50份，金莲花1～50份，大花红景天1～50份，纤花耳草1～50份。
优选的，所述具有皮肤营养保湿作用的药物组合物，是以如下重量份数的原料制备的：
小红参1～40份
铁皮石斛1～40份
天山雪莲1～40份
金莲花1～40份
大花红景天1～40份
纤花耳草1～40份
优选的，所述具有皮肤营养保湿作用的药物组合物，是以如下重量份数的原料制备的：
小红参2～35份
铁皮石斛2～35份
天山雪莲2～35份
金莲花2～35份
大花红景天2～35份
纤花耳草2～35份
优选的，所述具有皮肤营养保湿作用的药物组合物，是以如下重量份数的原料制备的：
小红参8～30份
铁皮石斛8～30份
天山雪莲8～30份
金莲花8～30份
大花红景天10～30份
纤花耳草10～30份
最优选的，是以如下重量份数的原料制备的：
小红参10份
铁皮石斛10份
天山雪莲10份
金莲花10份
大花红景天10份
纤花耳草10份
最优选的，是以如下重量份数的原料制备的：
小红参8份
铁皮石斛8份
天山雪莲8份
金莲花12份
大花红景天12份
纤花耳草12份
最优选的，是以如下重量份数的原料制备的：
小红参8份
铁皮石斛8份
天山雪莲8份
金莲花15份
大花红景天15份
纤花耳草15份
最优选的，是以如下重量份数的原料制备的：
小红参8份
铁皮石斛10份
天山雪莲10份
金莲花12份
大花红景天12份
纤花耳草12份
最优选的，是以如下重量份数的原料制备的：
小红参8份
铁皮石斛8份
天山雪莲8份
金莲花10份
大花红景天10份
纤花耳草15份
本发明所述的具有皮肤营养保湿作用的药物组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将上述的各个原料置于体积浓度为20％～80％的乙醇中浸泡2～48小时，浸泡用的乙醇用量为各个原料总重量的10～200倍，过滤，得浸泡液；
优选的，过滤残渣再用体积浓度为20％～80％的乙醇浸泡2～48小时，合并浸泡后的溶液，得浸泡液。
(2)浸泡液浓缩至原重量的2～5％，浓缩液用大孔树脂吸附，再用体积浓度5～95％的乙醇多次洗脱，收集洗脱液，即为所述的具有皮肤营养保湿作用的药物组合物；
优选的，乙醇的体积浓度为40％～95％；
所述大孔树脂采用美国罗姆一哈斯公司的XAD-2型大孔树脂，XAD-2型大孔树脂是以苯乙烯和丙酸酯为单体，加入乙烯苯为交联剂，甲苯、二甲苯为致孔剂，它们相互交联聚合形成了多孔骨架结构。浸泡液浓缩的方法为常规的减压浓缩。
试验证明，本发明的具有皮肤营养保湿作用的药物组合物，具有等多重作用，能够用于制备保湿肌肤的化妆品和皮肤的治疗性药物；
本发明还涉及一种皮肤保养化妆品，包括所述具有皮肤营养保湿作用的药物组合物和化妆品领域使用的辅料；
本发明还涉及一种皮肤的治疗性药物，包括权利要求所述的具有皮肤营养保湿作用的药物组合物和医学上可接受的载体。
尤其可以用于制备皮肤护理化妆品，包括霜剂、乳液、化妆水、凝胶剂、面膜、涂搽剂或洗剂；
制备皮肤护理化妆品时，可将制得的提取液组合物，经减压浓缩至原重量的10％～50％，得到组合物浓缩液，与已知的化妆品以及药品的基质或者辅料、载体、添加剂相混合，按照常规的方法进行制备，其中，所述组合物浓缩液占化妆品总重量的5％～10％。
本发明根据中药理论，从大量的天然药物中，选用了小红参、铁皮石斛、天山雪莲、金莲花、大花红景天和纤花耳草为原料，制备获得了所述的具有皮肤营养保湿作用的组合物，其中，所述的小红参选用茜草科茜草属植物云南茜草Rubia yunnanensis(Franch)Diels的干燥根，铁皮石斛选用兰科石斛属多年生附生草本植物Dendrobium candidum Lindl.的干燥茎；天山雪莲选用菊科风毛菊属植物Saussurea involucrate(Kar.et Kir.)Sch.Bip.的干燥地上部分；金莲花选用毛莨科金莲花属的植物Trollius chinensis Bunge的干燥花；纤花耳草选用纤花耳草科植物纤花耳草Saxifragga stolonifera Curt.的全草。；大花红景天选用景天科红景天属多年生草本植物Rhodiola crenulata(Hook.f.Thomson)H.Ohba的干燥根。
根据《中国药典》和文献记载：
小红参是云南特产药材，其为茜草科茜草属植物云南茜草Rubia yunnanensis(Franch)Diels的根，又名滇紫参，小活血，小红药。《云南中草药》记载其能“温经通络，调养气血”。小红参具有温经通络、活血祛风、软坚破积和养血补血之功效，小红参临床应用广泛，毒副作用小，用于治疗风寒湿痹、皮下结节、跌打损伤和血痰等多种疾病。现代研究证实小红参对银屑病有显著的治疗作用，能提高皮肤活性，并有抗癌功效。
铁皮石斛为兰科石斛属多年生附生草本植物Dendrobium candidum Lindl.新鲜或干燥茎，铁皮石斛主要分布于西南和江南各省，是我国传统名贵药材之一，具有益胃生津、滋阴清热等功效。
天山雪莲为菊科风毛菊属植物Saussurea involucrate(Kar.et Kir.)Sch.Bip.的干燥地上部分，主要生长在我国新疆天山、阿尔泰山雪线附近的岩缝中，天山雪莲具有补肾活血、强筋骨、营养神经、调节异常体液之功效，用于治疗风湿性关节炎、关节疼痛、肺寒咳嗽、白带过多等疾病。现代研究表明天山雪莲具有良好的抗炎、抗风湿、镇痛、强心、抗氧化等作用，其中含有黄酮类、内酯类、生物碱等多种成分，其中黄酮类是主要药效成分。
金莲花为毛莨科金莲花属的植物Trollius chinensis Bunge的干燥花，味辛性凉无毒。功能清热解毒。治目赤肿痛，恶毒大疮。据现代医学研究：其种子含葡萄糖金莲橙，果皮含绿原酸和少量黄酮类。根茎、叶柄，特别是叶中含异槲皮甙。花含多种类胡萝卜素、山奈酚葡萄糖甙等成分。
大花红景天是景天科红景天属多年生草本植物Rhodiola crenulata(Hook.f.Thomson)H.Ohba，红景天具有抗缺氧、抗疲劳、抗辐射、抗病毒、抗肿瘤、改善心血管系统等多种功能，被誉为“高原人参”。大花红景天的主要药用成分是红景天苷和酪醇。
纤花耳草为茜草科耳草属植物Hedyotis tenelliflora Blume的全草，又名虾子草、鸡口舌，味辛性凉无毒，功能清热解毒，消肿止痛。在民间主要用于治疗肿瘤、毒蛇咬伤、肾炎、肝炎等疾病。
目前，国内外尚未见将小红参、铁皮石斛、天山雪莲、金莲花、大花红景天和纤花耳草提取物的组合物用于具有皮肤营养保湿作用的相关报道。
综上所述，本发明人阅读了大量文献，依据皮肤屏障和保湿剂的基本原理，利用动物模型进行高通量筛选，终于发现具有显著肌肤营养保湿作用的药物组合物。本发明的药物组合物经人体临床试验证实效果显著，安全性好。所涉及的成分具有效果明确、安全性好、无任何副作用和在化妆品配方中稳定的特点；与现有同类产品相比，具有效果显著的特点，是一种新型的外用皮肤营养保湿药物。
具体实施方式
实施例1
在室温下，取小红参、铁皮石斛、天山雪莲、金莲花、大花红景天和纤花耳草各10公斤，用体积浓度70％的乙醇600公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度70％的乙醇600公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后，减压浓缩20倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度50％的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。
实施例2
在室温下，取小红参8公斤、铁皮石斛8公斤、天山雪莲8公斤、金莲花12公斤、大花红景天12公斤和纤花耳草12公斤，用体积浓度50％的乙醇1200公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度50％的乙醇1200公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后，减压浓缩40倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度40％的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。
实施例3
在室温下，取小红参8公斤、铁皮石斛8公斤、天山雪莲8公斤、金莲花15公斤、大花红景天15公斤和纤花耳草15公斤，用体积浓度80％的乙醇1000公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度80％的乙醇1000公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后浓缩25倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度60％的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。
实施例4
在室温下，取小红参8公斤、铁皮石斛10公斤、天山雪莲10公斤、金莲花12公斤、大花红景天12公斤和纤花耳草12公斤，用体积浓度30％的乙醇2000公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度30％的乙醇2000公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后浓缩50倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度50％的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。
实施例5
在室温下，取小红参8公斤、铁皮石斛8公斤、天山雪莲8公斤、金莲花10公斤、大花红景天10公斤和纤花耳草15公斤，用体积浓度60％的乙醇1200公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度60％的乙醇1200公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后浓缩30倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度80％的乙醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。
实施例6
将实施例1所获得的液体采用减压浓缩，浓缩至原重量的10％～50％，得药物组合物浓缩液，用于制备具有皮肤营养保湿作用的精华液，，组分的重量百分比如下：
生产工艺：搅拌下将A和B相分别加热至70℃，至全部溶解混合均匀，然后在70℃条件下将B相加入A相中，至形成W/Q型乳剂。搅拌均匀后，冷却至室温即得。
实施例7
药物组合物具有皮肤营养保湿作用的动物实验研究报告：下述实验中，所用的药物提取物的组合物为实施例2的药物组合物。
1材料与方法
1.1实验动物C3H小鼠，SPF(无特定病原体)级，购于北京唯通利华动物有限公司。在广州中医药大学科技产业园药物安全性评价中心动物房饲养并实验。
1.2实验材料及仪器7500型荧光定量Real-time PCR(美国ABI公司)；Qiagen RNA提取试剂盒(上海贝基生物科技有限公司)；含有10％本发明营养保湿提取物的生理盐水(自制)；10％尿素霜：广州中医药大学科技产业园现代中成药工程中心生产；生理盐水：南京正大天晴制药；脱毛膏：VICHY，EMB03094；中性蛋白酶(dispase)：Gibco17105-041；胰酶：Gibco25300-054。
1.3实验分组实验小鼠共30只，分为A、B、C3组，每组10只。A组：涂抹具有面部营养保湿作用的精华液(众合国际生物有限公司出品)；B组：涂抹尿素霜；C组：涂抹生理盐水，均每天1次。
1.4实验方法先用脱毛膏将小鼠上腹部毛发去除，按分组分别每天在每只小鼠腹部涂抹0.5mL/cm的皮肤屏障保剂/尿素霜/生理盐水，吸收后放入饲养盒中，30天后处死取皮肤。皮肤用dispase分离表皮，通过胰酶分离成单个角质形成细胞。用Trizol抽提角质形成细胞中的RNA，并逆转录成cDNA后通过实时定量PCRSYBRGREEN法(QIAGEN204143)。PCR的引物序列及条件如下：aqp3senlse：5’TTGGTGGCCAAGTGTC3’；aqp3antisense：5’GTCTCTCCAGTGCATAGAT3’；β-actin Sense：5’TGTATGCCTCTGGTCGTACC3’；β-actin antisense：5’CAGGTCCAGACGCAGGATG3’。94℃2min；94℃40s；62℃30s；72℃
20s；35个循环。
1.5统计学方法结果用One-way ANOVA t检验。
结果
表1 三种不同方法处理后AQP3mRNA表达量
注：与A组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
研究结果表明(详见表1)，与生理盐水相比，本发明的药物组合物能够显著下调AQP3mRNA的表达量(P＜0.01)，且比尿囊素的作用更强(P＜0.05)，这说明本发明的药物组合物能够减缓未成熟角质形成细胞的增值，恢复皮肤屏障功能。
采用其它实施例的具有皮肤营养保湿作用的药物组合物进行实验，结果也证明具有相同的作用。
实施例8
药物组合物具有皮肤营养保湿作用的临床试验研究报告：下述临床试验中，所用的药物提取物的组合物为实施例6的化妆品配方制备的具有皮肤营养保湿作用的精华液(众合国际生物有限公司出品)。
1.材料与方法
1.1测试对象的选择
总共纳入30名24～42岁的女性志愿者，纳入标准：女性，在本地居住5年以上；以室内工作为主，无高剂量日晒；测量部位无皮肤病或可以影响皮肤的全身性疾病；皮肤无光过敏史，无化妆品过敏史；对研究目的和内容知情同意，能按要求随访者。排除标准：已知对受试产品中的成分过敏者；精神病患者；处于怀孕期、哺乳期或分娩后半年内者；有严重肝肾疾病、自身免疫性疾病(如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎)、HIV感染者：近12个月内被诊断为皮肤肿瘤并接受治疗者；正在使用和/或在试验前14天内口服或外用了试验禁用的药物(糖皮质激素、免疫抑制剂及抗过敏药)；正在使用或试验前1个月使用过其他同类产品者。
1.3测试仪器采用Sebumeter SM810皮脂测量仪(德国Courage Khazaka公司)测量皮肤表面皮脂含量，采用Comeumter CM820皮肤水分测量仪(德国Courage Khazaka公司)测量皮肤水分含量。皮脂含量和皮肤水分含量的单位均为au(arbitrary unit)。
1.4测试条件无阳光直射，无风，工作环境温度为22～24℃，相对湿度为50％～60％，测量前确认志愿者当天没有使用化妆品，志愿者清洁面部静息20分钟，使皮温与室内温度达到一致，以便利的姿势躺在床上，受测部位用玉兰油深度滋润香皂(广东宝洁公司)清洗前和清洗后1h，依次进行皮脂、水分的检测。
1.5涂抹方法测试对象连续使用30d，每天早晨、晚上睡前洗脸后在面部涂抹具有面部营养保湿作用的精华液(众合国际生物有限公司出品)，涂抹量以略见涂抹层即可。
测试部位应用皮脂分泌测试仪对患者双侧鼻翼部位进行皮脂分泌测定；应用角质层含水量测试仪对患者双侧颧骨最高部位进行角质层含水量测定，每个部位测10次，去掉最高值和最低值后取平均值。
1.6.安全性评价在复诊时对受试者进行不良反应评价，询问受试者靶部位原症状是否加重或出现新的皮损，如瘙痒、干燥、脱屑、刺痛、红肿、脱屑等症状及是否妨碍日常生活。重度：不良反应妨碍日常活动，受试者自觉症状显著，不能忍受，需要停用；中度：不良反应妨碍日常生活，受试者自觉症状明显，但可忍受，无须停用受试产品；轻度：可耐受不良反应，受试者偶能感受到。对出现不良反应的受试者，医生对其进行斑贴试验.以确定不良反应和试验产品的因果关系。负责医生认为受试者不适合继续试验，或受试者要求停止，即停止该受试者的试验，并记录停止原因和时间。
1.7.统计学处理采用SSPS11.5软件进行自身前后配对t检验。
2.结果
2.130名志愿者使用前后皮肤皮脂含量和角质层含水量比较表2显示，30名志愿者使用本发明的药物组合物30d后皮肤皮脂含量显著性升高(P＜0.05)，角质层的含水量亦明显升高(P＜0.01)。
表2 使用前后30名志愿者皮肤皮脂含量和角质层含水量比较
注：与使用前比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
产品安全性评估使用前后均未发生不良反应，无1例志愿者脱落。整个研究过程未发生与该试验产品相关的不良反应事件。
采用其它实施例的具有皮肤营养保湿作用的药物组合物进行临床试验，结果也证明具有相同的作用。
实施例9
具有皮肤营养保湿作用的药物组合物的皮肤刺激性实验研究报告：通过动物试验，来观察本发明的具有皮肤营养保湿作用药物组合物对家兔皮肤的刺激性。下述实验中，所用的药物提取物的组合物为实施例4的药物组合物。
1动物
16只普通级成年健康新西兰兔，雌雄各半，2.5kg～3.Skg，购买于广东省医学实验动物中心，实验动物生产许可证号为SCXK(粤)2008-0002，动物合格证号：粤2012A008。饲养于新南方药物安全性评价中心普通区动物房F4房(实验动物房合格证号：0060590。)，试验期间，室温20℃～22℃，湿度40％～67％，照明12h/12h昼夜明暗交替。本实验中所使用的药物组合物为本发明实施例1的药物组合物，浓度为1.0g生药/mL。
2方法
依据中华人民共和国卫生部《化妆品卫生规范(2007年版)》，采用同体自身左右侧对比法，左侧给予空白基质(生理盐水)，右侧给予1.0g/mL的药物组合物。给药前准备：给药前24h，采用剃毛法去除家兔背部脊柱两侧被毛，去毛范围左、右各约3cm×3cm，涂抹面积2.5cm×2.5cm，勿损伤皮肤。给药：取受试物约0.5mL涂抹在右侧皮肤上，左侧涂生理盐水作为对照，每天涂抹1次，连续14d。从第二天开始，每次涂抹前要被毛。将药液0.5mL浸透2.5cm×2.5cm的双层医用纱布片，覆盖于已去毛的皮肤，覆盖一层硫酸纸，再用无刺激性胶布和固定带固定。固定约4h后去除受试物，用温水清除残留受试物。一小时后观察结果。
3结果
在本实验条件下，连续涂抹1.0g/mL的药物组合物14天对家兔皮肤无刺激性反应(具体见表3)。
表3 1.0.g/mL药物组合物对家兔多次皮肤刺激性试验结果
实施例10
具有皮肤营养保湿作用的药物组合物的皮肤致敏性实验研究报告：通过动物试验，来观察本发明的具有皮肤营养保湿作用药物组合物对Hartley豚鼠皮肤的致敏性。本实验中所使用的药物组合物为本发明实施例5的药物组合物。
1动物
选用普通级Hartley豚鼠50只，雌雄各半，体重范围180～250g，购买于广东省医学实验动物中心，实验动物生产许可证号为SCXK(粤)2008-0002，动物合格证号：粤2013A008。饲养于新南方药物安全性评价中心普通区动物房F4房(实验动物房合格证号：0060590。)，试验期间，室温20℃～22℃，湿度40％～67％，照明12h/12h昼夜明暗交替。按编号对豚鼠进行皮肤染色，用饱和苦味酸溶液(黄色)染色标记个位数，用2％硝酸银溶液(咖啡色)染色标记十位数；按性别分开饲养，每一笼盒放5只豚鼠，笼盒外贴上标签，标示专题编号、动物类别、组别、性别、给药途径、笼号、动物编号及预计试验起止日期等信息。本实验中所使用的药物组合物为本发明实施例1的药物组合物，浓度为1.0g生药/mL。
2方法
依据国家《药品注册管理办法》、《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》。随机分为阴性对照组、阳性对照组、药物组合物组，其中阴性对照组10只豚鼠，其余各组20只豚鼠。各组豚鼠雌雄各半。先后进行诱导致敏和激发接触实验，两个实验之间相隔10天的洗脱期。诱导接触实验方法为前24h备皮，剪去豚鼠脊柱两侧各2cm×2cm区域的被毛。阳性对照组：取2.5％2，4-二硝基氯代苯的丙酮溶液0.2g，分别用两层纱布(2.5em×2.5cm)和一层保鲜薄膜覆盖，以无刺激纱布覆盖6h，移去覆盖物，用温水清除残留受试样品，第7天和第14天，以同样方法重复一次；在阴性对照组动物相同部位涂蒸馏水0.4ml，药物组合物组涂0.5ml。按同样的步骤进行诱导接触。激发接触则是在末次给受试物致敏接触后14天(即实验第28天)，在实验组和阴性对照组豚鼠背部备皮处涂敷0.5ml，封包和固定，6h后去掉受试物，立刻观察，然后于24h、48h、72h再次观察皮肤过敏反应情况。阳性对照组用2.5％2，4-二硝基氯代苯的丙酮溶液0.2g，阴性对照组动物相同部位涂蒸馏水0.4ml。在致敏后1h、24h及激发后24h和48h观察给药局部皮肤红斑、水肿和其他异常反应。按皮肤过敏反应评分标准对皮肤红斑和水肿进行评分，并计算各组的过敏反应发生率，按皮肤过敏性评价标准判断过敏反应发生程度。过敏反应发生率＝(组内出现皮肤红斑、水肿或全身过敏反应的动物数/该组动物总数)×100％。
3结果：
激发接触实验后24、48h，由不知道实验内容的专业人员根据《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》评判是否出现皮肤致敏反应(表4)，致敏反应评分≥2分时，判定该动物皮肤致敏反应阳性，计算致敏率(≥2分动物数/该组动物总数×100％)，并按《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》中皮肤致敏反应试验分级标准判定本发明的药物组合物对豚鼠皮肤的致敏强度(表5)。
表4 皮肤致敏反应程度评分标准
首先计算每一观察时间点各组积分均值，然后计算观察期限内每天每只动物积分均值，按《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》进行评价。按下列公式计算每天每只动物平均积分。
表5 皮肤致敏反应程度分级标准
激发后24h、48h，阴性对照组、药物组合物组的豚鼠激发部位皮肤均未出现红斑、水肿情况，也未出现其它异常反应，过敏反应发生率均为0，过敏反应评价均为未见皮肤过敏反应。
激发后24h，阳性对照组豚鼠激发部位皮肤全部出现红斑，过敏反应发生率为100％，过敏反应评价为极强致敏。激发后48h，阳性对照组豚鼠激发部位皮肤仍全部有红斑，过敏反应发生率为100％，过敏反应评价仍为极强致敏。
4结论
在本实验条件下，药物组合物对Hartley豚鼠皮肤进行3次致敏和1次激发后未见皮肤过敏反应。
Claims (9)
1.具有皮肤营养保湿作用的药物组合物，其特征在于：是以小红参、铁皮石斛、天山雪莲、金莲花、大花红景天和纤花耳草为原料制备的，且任一组分的重量百分含量均不超过总量的40％。
2.根据权利要求1所述的具有皮肤营养保湿作用的药物组合物，其特征在于，是以如下质量份数的原料制备的：小红参1～60份，铁皮石斛1～60份，天山雪莲1～60份，金莲花1～60份，大花红景天1～60份，纤花耳草1～60份。
3.根据权利要求2所述的具有皮肤营养保湿作用的药物组合物，其特征在于，是以如下质量份数的原料制备的：小红参1～50份，铁皮石斛1～50份，天山雪莲1～50份，金莲花1～50份，大花红景天1～50份，纤花耳草1～50份。
4.根据权利要求1～3任一项所述的具有皮肤营养保湿作用的药物组合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
第一步：将上述的各个原料置于体积浓度为20％～80％的乙醇中浸泡，浸泡用的乙醇用量为各个原料总重量的10～200倍，过滤，得浸泡液；
第二步：浸泡液浓缩至原重量的2～5％，浓缩液用大孔树脂吸附，再用体积浓度为5～95％的乙醇洗脱，收集洗脱液，即为所述的具有皮肤营养保湿作用的药物组合物。
5.根据权利要求4所述的的具有皮肤营养保湿作用的药物组合物的制备方法，其特征在于：第一步中，所述的乙醇浸泡时间为2～48小时；或各个原料先用乙醇浸泡2～48小时，残渣再用乙醇浸泡2～48小时，合并浸泡后的溶液，得浸泡液。
6.根据权利要求4所述的具有皮肤营养保湿作用的药物组合物的制备方法，其特征在于：第二步中，所述洗脱用乙醇的体积浓度为40％～95％。
7.根据权利要求1～3任一项所述的具有皮肤营养保湿作用的药物组合物的用途，其特征在于：用于制备皮肤保养化妆品或皮肤的治疗性药物。
8.皮肤保养化妆品，包括权利要求1～3任一项所述的具有皮肤营养保湿作用的药物组合物和化妆品领域使用的辅料。
9.皮肤的治疗性药物，包括权利要求1～3任一项所述的具有皮肤营养保湿作用的药物组合物和医学上可接受的载体。
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