CN104083461A - 一种药物组合物的新用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了含有下述重量配比的原料药制备而成的药物在制备治疗酒精成瘾或/和依赖的药物中的用途：附子或乌头3-10份,黄芪3-35份。本发明药物组合物能有效的消除酒精成瘾的心理与行为的“成瘾记忆”，具有良好的戒除酒精成瘾的作用，为临床用药提供了一种新的选择。

Description

一种药物组合物的新用途

技术领域

本发明涉及一种药物组合物的新用途。

背景技术

酒精成瘾是一种失控性的饮酒行为，主要表现为对获得酒精的强烈渴求，强迫性地饮酒，并且发展为酒精耐受和酒精依赖。与其它成瘾性药物所致疾病一样，酒精成瘾的核心特征是戒断后仍长期存在的复饮行为。

对于酒精依赖患者来说，如何消除酒精的“成瘾记忆”是从根本上实现治疗和成功的关键，由于患者往往存在对酒精的强烈渴望以及中毒症状的隐蔽性，在临床上要完全实现戒酒是非常困难的。目前针对酒精成瘾患者的治疗主要以药物治疗为主，美国FDA批准上市的针对酒瘾的药物主要有戒酒硫、纳曲酮和阿坎酸。这三种药物在临床使用中可能有一定效果，但对于消除酒精成瘾患者强烈的心理渴求、戒断之后的复饮行为的发生并没有作用，并且戒酒硫临床副作用大，纳曲酮存在相关的肝损害、其确切的疗效及机制仍需进一步研究。总的来说，西医对于酒精成瘾患者戒酒的治疗并没有取得理想的进展。

我国传统中医学，明确记载有使用中医药治疗酒精性疾病的历史至少上千年，形成了一套自身完整的而又独特的理论体系。认为酒为外在的湿热之邪，过量饮酒之后，首先损及脾胃，而脾又喜燥而恶湿，故湿浊内生从而阻滞中焦，脾土壅滞，近而肝络不畅，体内气、血、痰、瘀等病理产物与湿热相互瘀结，随着病情的发展最后累及肾脏，成为“顽疾”。并且传统中医学自古就有中草药能解酒毒、戒毒的文献记载。如在《神农本草经》中，就已记载：“葛根解诸毒”，唐·孙思邈《千金方》也有“葛根主解酒毒之说”，明代本草巨著《本草纲目》中解酒药的内容非常丰富，书中记载了解酒药约计100种，广泛分布于矿物药、动物药、植物药之中，至清代随着一系列有关戒毒的专著问世，中医药戒毒应运而生至今已有200多年的历史,积累了宝贵的经验,创立了一系列中医戒毒方法,包括单纯中医辨证戒断方药,中医辨证加鸦片递减戒毒方药,洋金花戒毒等,确立了扶正祛邪、滋阴助阳、补益脏腑、祛除烟毒、调畅气血等总的治疗原则。加之，中草药自身的高效、低毒、价廉、多靶点等优势，因此，中医药治疗酒精成瘾具有一定的优势。

附子，功能主治：回阳救逆，补火助阳，逐风寒湿邪；黄芪的功能主治：补气固表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌。目前已有将两味药物组合使用的报道，如申请号：200410013941.5；发明名称：一种治疗心动过缓的中药，一种治疗心动过缓的中药，由40～60％的黄芪和附子为原料加工得到的口服制剂。本发明经大鼠胺碘酮与心得安两种慢性心律模型的药效学试验证明，均可明显升高这两种模型心动过缓的心率。且长期服用安全、无毒副作用。

发明内容

本发明的技术方案是提供了一种药物组合物的新用途。

本发明提供了含有下述重量配比的原料药在制备治疗酒精成瘾或/和依赖的药物中的用途：附子或乌头3-10份,黄芪3-35份。

进一步优选地，所述的药物是由下述重量配比的原料药制备而成的制剂：

附子或乌头3-10份,黄芪3-35份。

更进一步优选地，所述的原料药重量配比为：附子或乌头5-10份,黄芪10-35份。

更进一步优选地，所述的原料药重量配比为：附子或乌头10份,黄芪35份。

其中，所述的附子为生附子和/或制附子；所述的乌头为川乌或草乌；所述的黄芪为生黄芪和/或炙黄芪。

所述的制剂是口服制剂。

其中，所述的口服制剂是颗粒剂、散剂、丸剂、胶囊剂、软胶囊剂、片剂或口服液。

所述的药物的制备方法包括如下步骤：

a、称取原料药；

b、将原料药直接打粉，或加水煎煮，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。

所述的药物是治疗长期饮酒导致脾胃湿热，日久湿从寒化，损伤阳气，形成的脾肾阳虚之证的药物。

为了消除酒精成瘾患者对于酒精强烈的精神渴求与戒断之后的高复饮率，本发明采用国际公认的研究药物性成瘾精神依赖的条件位置偏爱与行为依赖的行为敏化动物两种经典的动物模型，提供一种药效良好、低毒、多靶点、价廉的治疗酒精成瘾的理想药物组合物，及其制备方法和用途。

目前己公认“整体观念”、“辨证施治”、“复方使用”、“复方配伍用药如用兵”是中医最科学最有效的几大优势，其中“复方配伍用药如用兵”是菲常科学的中医药原创理论。中医组方中并药如行兵布阵那样环环相扣的严密配伍，是其优于西药配方的有效手段。中医方剂理论认为，每一方剂，不仅需要根据病因病机选择合适的药物妥善配伍，同时也应符合组方的基本结构，即“君、臣、佐、使”的组方配伍，所谓“君、臣、佐、使”的组方配伍，就是其建立在对疾病病机的全方位判断基础上的科学配比。中医用方通过多环节、多靶点整合调节的生物学机制，对酒精成瘾及依赖这样机制复杂难查、西医疗效、治疗非常困难的疾患或症状进行凋控，可以取得比西药更好、更彻底的治疗效果，而这种疗效是建立在上述中医传统原创理论的确切指导之上的，本发明组方遵循了这一原则。

中医学理论指导下，酒性湿，为辛温燥烈之品,长期饮酒,易耗气伤血,损阴及阳,累及肾脏,命门火衰，其成瘾机制的形成与脾、肾二脏的关系最为密切。酒为湿邪，脾喜躁而恶湿，饮酒初期湿邪入里，脾土先伤，湿从寒化，则脾阳不升，临床可见健忘、头晕等症。同时脾胃又为气血生化之源，为后天之本，肾藏先天之精,是生命本原,为先天之本，肾精及其化生的人体阴阳之气，赖脾气运化的水谷之精及其化生的谷气的不断充养和培养，方能充盛。脾虚水谷，寒湿困脾，清阳不升，不能滋养先天，病久可致肾脏失养，命门火衰，本虚标实互见,气、血、水俱病。成瘾患者在后期临床往往出现耳鸣心跳，肌肉关节、腰背部弥漫性疼痛，四肢困倦、消瘦，便秘或腹泻，早衰，阳痿，头胀眩晕，失眠，胸闷，心悸，厌食厌水，呕哕，脉缓或弦滑，舌淡胖苔白等脾肾阳虚的临床表现。

本发明药物由附子、黄芪两味药组成，其中君以附子功效温补脾肾之阳，化寒祛湿，直指酒精成瘾之主症，臣以黄芪益气健脾，补脾肾气血，两药合用共奏温阳健脾之功。全方制剂组方严谨，疗效确切。本发明药物组合物能有效的消除酒精成瘾的心理与行为的“成瘾记忆”，具有良好的戒除酒精成瘾的作用，为临床用药提供了一种新的选择。

附图说明

图1各组小鼠适应期的自主活动测试基线，由图可见,与正常对照组比较,中药组、酒精组、中药+酒精组各组小鼠的自主活动基线并没有统计学差异，P>0.05。

图2、经历10天5次小鼠自主活动测试结果显示：酒精组与盐水相比,在5次测试期间小鼠的自主活动次数明显增加具有显著统计学差异，^*P＜0.01.第4、5次测试期，小鼠的自主活动次数高于前3次，^#P<0.05；在第4、5次测试期，中药+酒精组与盐水对照组、中药组相比小鼠的自主活动次数增加明显有统计学差异，^▲P<0.05；在第2、3、4、5测试期,酒精模型组与中药+酒精组相比小鼠的活动次数具有显著统计学差异，^▼P<0.01.

图3：小鼠在激发阶段(3-3)分别接受酒精(2.2g/kg)、中药(1.8g/kg)、中药+酒精、盐水的激发结果显示：模型组酒精激发与盐水激发相比小鼠自主活动增加差异性显著*P＜0.01,模型组酒精激发与中药+酒精激发相比同样具有显著差异性^▲P<0.01，而在形成期(3-4)中药+酒精组在接受酒精激发后与盐水组激发相比，小鼠的自主活动次数并没有增加，没有统计学差异(P>0.05).

图4：在小鼠行为敏化表达期，酒精组小鼠多巴胺(DA)、谷氨酸(GLU)含量与盐水组相比显著升高(^*P<0.01),与酒精模型组相比，中药复方干预组小鼠的多巴胺(DA)、谷氨酸(GLU)水平明显减少(^#P<0.01).三组在γ一氨基丁酸(GABA)的组间比较中，我们发现与盐水对照组相比，酒精模型组(GABA)减少较显著(^*P<0.01),而中药干预组与酒精模型组相比，能够增加小鼠脑内(GABA)的释放(^#P<0.01)。

图5、在小鼠行为敏化表达期酒精组小鼠多巴胺(DA)、谷氨酸(GLU)含量与盐水组相比仍显著升高(^*P<0.01),与酒精模型组相比，中药复方干预组小鼠的多巴胺(DA)、谷氨酸(GLU)水平明显减少(^#P<0.01).同样的三组在γ一氨基丁酸(GABA)的组间比较中，我们发现与盐水对照组相比，酒精模型组(GABA)减少较显著(^*P<0.01),而中药干预组与酒精模型组相比，能够增加小鼠脑内(GABA)的释放(^#P<0.01)。

图6：小鼠在黑色箱子停留时间为609.97士4.466(S)，白色箱子停留时间为365.75士67.686(s)(P<0.01).

图7：经过10天5个训练周期后，测试期结果显示,中药组在白色伴药箱停留时间为249.58士20.586S,盐水组为268.33.士41.033S两组相比没有统计学差异(P>0.05).而酒精组小鼠在测试期白色伴药箱停留时间为546.67士57.917S,相对于生理盐水组具有显著性差异(^*P<0.01).

图8：中药干预组与酒精组在3个测试期的均可以显著抑制酒精诱导的小鼠CPP的形成(^*P<0.05),而到第3个测试阶段显示,中药干预组对于酒精诱导的CPP形成具有明显的抑制作用(^#P<0.01)。

图9:各组小鼠适应期的自主活动测试基线，由图可见,与正常对照组比较,中药组、酒精组、中药+酒精组各组小鼠的自主活动基线并没有统计学差异，P>0.05。

图10、经历10天5次小鼠自主活动测试结果显示：酒精组与盐水相比,在5次测试期间小鼠的自主活动次数明显增加具有显著统计学差异，^*P＜0.01.第4、5次测试期，小鼠的自主活动次数高于前3次，^#P<0.05；在第4、5次测试期，中药+酒精组与盐水对照组、中药组相比小鼠的自主活动次数增加明显有统计学差异，^▲P<0.05；在第2、3、4、5测试期,酒精模型组与中药+酒精组相比小鼠的活动次数具有显著统计学差异，^▼P<0.01.

图11：小鼠在激发阶段(3-3)分别接受酒精(2.2g/kg)、中药(1.8g/kg)、中药+酒精、盐水的激发结果显示：模型组酒精激发与盐水激发相比小鼠自主活动增加差异性显著^*P＜0.01,模型组酒精激发与中药+酒精激发相比同样具有显著差异性^▲P<0.01，而在形成期(3-4)中药+酒精组在接受酒精激发后与盐水组激发相比，小鼠的自主活动次数并没有增加，没有统计学差异(P>0.05).

图12在小鼠行为敏化表达期，酒精组小鼠多巴胺(DA)、谷氨酸(GLU)含量与盐水组相比显著升高(^*P<0.01),与酒精模型组相比，中药复方干预组小鼠的多巴胺(DA)、谷氨酸(GLU)水平明显减少(^#P<0.01).三组在γ一氨基丁酸(GABA)的组间比较中，我们发现与盐水对照组相比，酒精模型组(GABA)减少较显著(^*P<0.01),而中药干预组与酒精模型组相比，能够增加小鼠脑内(GABA)的释放(^#P<0.01)。

图13、在小鼠行为敏化表达期酒精组小鼠多巴胺(DA)、谷氨酸(GLU)含量与盐水组相比仍显著升高(^*P<0.01),与酒精模型组相比，中药复方干预组小鼠的多巴胺(DA)、谷氨酸(GLU)水平明显减少(^#P<0.01).同样的三组在γ一氨基丁酸(GABA)的组间比较中，我们发现与盐水对照组相比，酒精模型组(GABA)减少较显著(^*P<0.01),而中药干预组与酒精模型组相比，能够增加小鼠脑内(GABA)的释放(^#P<0.01)。

图14：小鼠在黑色箱子停留时间为589.97士4.466(S)，白色箱子停留时间为265.75士67.686(s)(P<0.01).

图15：经过10天5个训练周期后，测试期结果显示,中药组在白色伴药箱停留时间为249.58士20.586S,盐水组为268.33.士41.033S两组相比没有统计学差异(P>0.05).而酒精组小鼠在测试期白色伴药箱停留时间为553.67士57.917S,相对于生理盐水组具有显著性差异(^*P<0.01).

图16、中药干预组与酒精组在3个测试期均可以显著抑制酒精诱导的小鼠CPP的形成(^*P<0.05),而到第3个测试阶段显示,中药干预组对于酒精诱导的CPP形成具有明显的抑制作用(^#P<0.01)。

具体实施方式

实施例1本发明药物组合物的制备

取附子10g，黄芪30g。各药味按量称取，掺与足量的净水，文火煎煮附子1h以上去麻，后入黄芪煎煮。收集水煎液；药渣再加水煎煮2次，合并各次水煎液，即得汤剂。

本方中，附片用量稍大，取其温阳化湿之功。

实施例2本发明药物组合物的制备

取实施例1制备的汤剂，浓缩后，加适当淀粉、糊精混匀后制粒。

实施例3本发明药物组合物的制备

取乌头10g，黄芪30g。各药味按量称取，掺与适量的净水，文火煎煮附子1h以上去麻，后入黄芪煎煮。收集水煎液；药渣再加水煎煮2次，合并各次水煎液，浓缩后，干燥，加入适量糊精、可溶性淀粉制粒后，压片，即得片剂。

实施例4本发明药物组合物的制备

取附子10g，黄芪30g。各药味按量称取，先煎附子，文火煎煮1h去麻，后入黄芪煎1小时，收集水煎液；药渣再加水煎煮2次，合并各次水煎液，浓缩后，干燥后，加适量微晶纤维素，混匀后，装胶囊，即得胶囊剂。

实施例5本发明药物组合物的制备

取乌头10g，黄芪30g。各药味按量称取，掺与足量的净水，文火煎煮乌头1h以上去麻，后入黄芪煎煮。收集水煎液；药渣再加水煎煮2次，合并各次水煎液，即得汤剂。

本方中，乌头用量稍大，取其温阳化湿之功。

实施例6本发明药物组合物的制备

取实施例5制备的汤剂，浓缩后，加适当淀粉、糊精混匀后制粒。

实施例7本发明药物组合物的制备

取乌头10g，黄芪30g。各药味按量称取，掺与足量的净水，文火煎煮乌头1h以上去麻，后入黄芪煎煮。收集水煎液；药渣再加水煎煮2次，合并各次水煎液，浓缩后，干燥，加入适量糊精、可溶性淀粉制粒后，压片，即得片剂。

实施例8本发明药物组合物的制备

取乌头10g，黄芪30g。各药味按量称取，掺与足量的净水，文火煎煮乌头1h以上去麻，后入黄芪煎煮。收集水煎液；药渣再加水煎煮2次，合并各次水煎液，浓缩后，干燥后，加适量微晶纤维素，混匀后，装胶囊，即得胶囊剂。

以下通过药效学实验证明本发明的有益效果。

试验例1本发明药物对酒精成瘾小鼠行为敏化动物模型和条件位置偏爱模型影响的实验研究。

1.实验材料

1.1实验动物：3个月大雄性清洁级昆明株小鼠，进入实验室的体重25～30g之间。小鼠及饲料均由成都达硕动物实验公司提供，动物合格证编号：SCXK(11)2013-24。购入后置于成都中医药大学中医脏腑实验室(国家二级)饲养。

1.2实验药物：实施例1方法所述的原料用量及方法制备，由成都中医药大学药学院中药制剂研究室提供。批号：20130111；临床拟定剂量为每日服用原生药材40g,按成人体重一般60kg计算，人用剂量为原生药材0.66g/kg体重。实验室配成分别为5.94g/kg/d(相当于临床拟定剂量的9倍)。给药体积0.1ml/10g体重。

1.3实验器材：小鼠饲养装置、灌胃针(成都中医药大学实验室)，小鼠脑组织切取装置及液氮储存罐(成都里来生物科技有限公司)，CPP--100条件位置偏好实验仪、ZZ-6自发活动测试仪(成都泰盟科技有限公司)，计算机：型号：TFT185W80PS(冠捷显示科技有限公司)、酶标仪：型号：MultlskanMk3(赛默飞世尔仪器有限公司)、电子恒温水浴锅：型号DZKW-4(北京中兴伟业仪器有限公司)。

1.4实验试剂：多巴胺(DA)ELISA检测试剂盒:Abcam公司生产，北京辉瑞生物科技有限公司分装，生产批号：E-30236。

谷氨酸(GLU)ELISA检测试剂盒:Abcam公司生产，北京辉瑞生物科技有限公司分装，生产批号：E-30324。

γ-氨基丁酸(GABA)ELISA检测试剂盒:Abcam公司生产，北京辉瑞生物科技有限公司分装，生产批号：E-31033。

2.实验设计及方案

2.1行为敏化实验

2.1.1实验装置ZZ-6小鼠自发活动分析系统：2排X3个的六宫格自发活动箱(同时测量六只小鼠自发活动、高分辨率的36个红外阵列探头装置及PC机数据通讯采集分析功能。材料为双层铝塑板，隔音隔光，具有通风装置。由红外探头记录动物活动状况,计算动物的自发活动次数。

2.1.2实验方法及实验流程

适应阶段:在适应性喂养一周的同时，称重所有的实验小鼠，灌胃等量的生理盐水后立即放入自主活动测试仪中，使小鼠能够适应测试的实验环境，时间为15分钟。第7天适应后，所有的小鼠放入自主活动测试仪中测试小鼠的自主活动基线，随后被随机分为4个大组。适应期的目的是让KM小鼠适应测试装置，排除环境、灌胃等因素对小鼠自主活动的影响，并记录它们正常的活动次数。

形成阶段：在测试自主活动基线后，小鼠在半小时之前灌胃中药或者盐水，随后灌胃(2.2g/kg)的酒精或者生理盐水，即形成盐水组+盐水组(s+s组，n＝40，中药组+盐水组(z+s，n＝40)，盐水组+酒精组(s+e，n＝40.)，中药组+酒精组(z+e,n＝40)在酒精或者生理盐水灌胃5min后立即放入测试仪中测试15分钟，实验隔天进行一次，总共10天、进行5次。在经历48小时转换期之后，激发阶段开始。

激发阶段：每个实验大组组，再次被组内随机分成4个亚组。药物激发阶段小鼠分别接受盐水，酒精组、中药组、中药+酒精组的激发，5min后立即放入自主活动测试仪中，测试15分钟。测试完成后，将盐水+盐水+酒精组(n＝10)，盐水+酒精组+酒精组(s+e+e，n＝10)小鼠，盐水+酒精组+中药组+酒精组(s+e+z+e，n＝10)小鼠，中药组+酒精组+酒精组(s+e+e，n＝10)小鼠，这4个亚组的小鼠立即断头处死，取脑组织，检测中脑边缘腹侧被盖区(VTA)及其投射区伏隔核的(NAC)的多巴胺(DA)，海马区、杏仁核区的谷氨酸(GLU)，腹侧被盖区(VTA)和NAC区的γ-氨基丁酸(GABA)这3个神经递质中药干预前后的变化。

2.2条件位置偏好实验(CPP)

2.2.1实验装置CPP-100条件位置偏爱测试仪：它通过将小鼠置于测试箱的灰色观察区域，然后观察实验动物在测试箱的三个(白色箱长×宽×高＝280×210×210mm、灰色箱长×宽×高＝120×210×210mm、黑色箱长×宽×高＝280×210×21mm)区域的活动情况，从而得到实验动物是喜好呆在暗色区域还是明色区域的定量结果数据，是用于评价药物的奖赏效应和寻找抗觅药行为的有效依据。

2.2.2实验步骤本实验采用偏性实验程序。实验分为预适应期、训练期、表达测试3个阶段,在整个实验过程中保证箱内光线、色调、气味等环境条件的一致。

预适应期(第-3～-1天)，将小鼠放入CPP箱中，由中间箱放入，打开闸门让其自由穿梭15分钟，每天一次，连续3天，并且每天灌胃生理盐水，以消除实验操作对小鼠的影响，第3天记录小鼠在黑、白、中间箱中停留的时间，记录15min时间内小鼠在不同区域中停留的时间,作为小鼠天然偏爱效应的指标,停留时间长的一侧作为非伴药箱,停留时间短的一侧作为伴药箱。并且剔除对黑箱和白箱有明显偏爱的小鼠(将在一侧停留时间>650S的剔除)。在本实验条件下，小鼠天然偏爱黑色，故我们采用有偏性的实验设计，选白箱为伴药箱，黑箱为非伴药箱。

形成期(第1～10天)，每只小鼠每天接受一次训练，酒精每隔一天给药一次。具体为，若第一天腹腔灌胃酒精(2.2g/kg)或者中药，放入伴药箱训练15分钟，则第二天皮下灌胃相同体积的生理盐水(NS)，放入非伴药箱训练15分钟。盐水对照组均注射生理盐水，中药复方在酒精灌胃之前半小时予以提前给药。依次类推，5个训练周期，形成4各组，即盐水组(s+s)、酒精对照组(e+s)、中药组(z+s)、中药干预组(z+e)。训练时间固定为每天上午的8点到9点之间。

测试期(第11天)，考虑训练前期小鼠天然偏爱差异并不显著，因此我们在第五天训练开始之后，每对酒精与生理盐水训练后为条件训练期，故在每个条件训练期后24小时，分别在第6、8、10天测试CPP的表达。在第11天的测试阶段，测试之前小鼠不给药直接放入中间箱打开隔板，测定15min内小鼠在伴药箱和非伴药箱的停留时间，测量小鼠CPP获得的情况。

2.3观察指标及检测方法

2.3.1采用ZZ-6小鼠自发活动测试仪测定行为敏化实验小鼠实验中的自发活动次数。

2.3.2采用CPP-100条件位置偏好测试仪测定CPP实验组各组小鼠在伴药箱和非伴药箱的停留时间。

2.3.3采用ELISA分析法测定小鼠脑组织，检测多巴胺、谷氨酸、γ-氨基丁酸的浓度水平。

3.统计学方法

各组实验数据均以表示，采用SPSS17.0软件进行统计分析，两组比较采用t检验；多组间比较采用One-Way ANOVA分析，然后用LSD法进行两两比较；行为敏化实验激发期多组间比较采用协方差分析方法。

4.实验结果

4.1行为敏化的实验结果

4.1.1实验适应期各组小鼠的自主活动基线比较：如图1所示为各组小鼠适应期的自主活动测试基线，由图可见,与正常对照组比较,中药组、酒精组、中药+酒精组各组小鼠的自主活动基线并没有统计学差异，P>0.05。

4.1.2中药复方本发明重复给药对小鼠自主活动的影响:图2所示为小鼠10天5次测试期间，盐水组，中药组，酒精组(2.2g/kg)，中药+酒精组各组之间自主活动的比较。重复测量方差分析的结果显示交互作用时间×处理(F＝18.573，P<0.01，予以Huynh-Feldt法矫正)，时间因素(F＝40.098，P<0.01，予以Huynh-Feldt法矫正)，处理因素(F＝198.010，P<0.01)，各处理组之间随着随着测试天数的变化连趋势有着显著的差异。Bonferroniposttests法进行多重比较的结果显示，第4、5次测试小鼠总的自主活动次数显著高于前三组(P<0.01)。中药组与盐水对照组之间小鼠的自主活动没有统计学差异(P>0.05)，提示中药复方本身对小鼠的自主活动并没有影响。酒精模型组与盐水组对照组相比在5次测试期间小鼠的自主活动具有明显的统计学差异(P<0.01),提示酒精组小鼠的自主活动明显高于盐水对照组，酒精能够引起小鼠的高活动性。在第1、2、3次测试结果显示，中药+酒精组与盐水组、中药组相比小鼠的自主活动并没有差异(P>0.05),而在第4、5次中药+酒精组小鼠的活动次数高于盐水对照组，中药组(P<0.05)。中药+酒精组与酒精模型组相比，在第2、3、4、5次测试期小鼠的自主活动次数明显低于酒精模型组，提示在酒精灌胃之前，予以中药复方能够减少酒精诱导的小鼠自主活动次数，即说明中药复方对酒精诱导的小鼠行为敏化的形成过程具有作用。

4.1.3中药复方本发明本身对小鼠行为敏化形成期与表达期的影响(图3)

4.1.3.1中药复方本发明本身对小鼠行为敏化形成与表达的影响。

如图3-1所示，中药复方，分别接受酒精(2.2g/kg)、中药(1.8g/kg)、中药+酒精激发下各组小鼠的自主活动次数并没有差异性(P>0.05)，提示中药复方对小鼠行为敏化模型形成与表达并没有作用。

4.1.3.2酒精诱导的小鼠行为敏化动物模型的建立。

如图3-2所示，酒精模型组接受酒精激发之后，与盐水激发相比小鼠的自主活动表现出差异性显著(P<0.01)，表明由酒精诱导的小鼠行为敏化动物模型已经建立。

4.1.3.3中药复方本发明联合酒精干预对小鼠行为敏化表达的影响。如图3--3所示：酒精模型组在接受中药激发后，与盐水激发组相比小鼠的自主活动次数并没有统计学差异(P>0.05),提示复方并不能影响酒精组小鼠行为敏化的表达。而在小鼠予以酒精激发之前半小时，我们予以中药复方提前灌胃，结果显示与单纯酒精激发组相比，中药+酒精组激发对小鼠行为敏化的表达具有显著的抑制作用，两组存在显著差异性(P<0.01)，提示中药复方与酒精联合应用能够显著抑制酒精诱导的小鼠行为敏化的表达。

4.1.3.4中药复方本发明联合酒精干预对小鼠行为敏化形成的影响。

如图3-4所示，中药+酒精组在接受酒精激发后与盐水组激发相比，小鼠的自主活动次数并没有增加，没有统计学差异(P>0.05)。提示在经过10天中药与酒精联合、重复给药后，中药+酒精组小鼠没有形成行为敏化，而接受相同剂量酒精灌胃后的小鼠在酒精激发后(图3-4)，显示出显著的小鼠行为敏化，证明中药复方对小鼠的行为敏化的形成具有抑制作用。

4.1.4中药复方本发明对由酒精诱导的小鼠行为敏化动物模型形成期多巴胺(DA)、谷氨酸(GLU)、γ-氨基丁酸(GABA)含量的变化(图4)。在由酒精诱导的小鼠行为敏化形成期，酒精行为敏化组小鼠多巴胺(DA)、谷氨酸(GLU)含量与盐水组相比显著升高(P<0.01)。中药复方干预组的多巴胺(DA)、谷氨酸(GLU)水平与盐水对照组相比并没有差异(P>0.05),而与酒精模型组相比，中药复方干预组小鼠的多巴胺(DA)、谷氨酸(GLU)水平明显减少(P<0.01)。同样的，在γ-氨基丁酸(GABA)三组的组间比较中，我们发现，与盐水对照组相比，酒精模型组(GABA)减少较显著(P<0.01),而中药干预组与酒精敏化模型组相比，能够增加小鼠脑内(GABA)的释放。

4.1.5本发明中药复方对由酒精诱导的小鼠行为敏化动物模型表达期多巴胺(DA)、谷氨酸(GLU)、γ-氨基丁酸(GABA)含量的变化(图5)。在由酒精诱导的小鼠行为敏化的表达期，中药复方干预组小鼠的多巴胺(DA)、谷氨酸(GLU)水平与酒精模型组相比，明显减少(P<0.01)。同样的，在γ-氨基丁酸(GABA)三组的组间比较中，中药干预组与酒精敏化模型组相比，能够增加小鼠脑内(GABA)的释放。

4.2条件位置偏好实验(CPP)的实验结果

4.2.1小鼠的天然偏好效应实验(图6)：如图6所示,小鼠在900S的预测试时间中,在黑色盒子停留时间为609.97士4..466S，365.75士67.686(P<0.01)。结果提示,小鼠对四周为黑色、底面为粗糙网状盒子具有天然偏爱性,因此,我们采用有偏性的实验设计将白色盒子作为伴药盒,黑色盒子作为非伴药盒。

4.2.2中药复方本发明自身的位置偏爱及酒精诱导的小鼠CPP的建立(图7)：如图7所示，经过10天5个训练期后，测试期中药组在白色伴药箱停留时间为259.58士20.586S,盐水组为268.33.士41.033S两组相比没有统计学差异(P>0.05),提示中药复方组自身对小鼠的天然位置偏爱选择没有影响。而酒精组小鼠在测试期白色伴药箱停留时间为546.67士57.917S,相对于生理盐水组具有显著性差异(P<0.01),结果提示酒精(2.2g/kg)可以诱导小鼠条件位置性偏爱形成。

4.2.3中药复方本发明对酒精诱导小鼠CPP形成期影响(图8)：如图8所示，与酒精组相比，中药复方呈时程相关性抑制酒精诱导的小鼠条件位置偏爱的形成过程。中药复方在3个测试期的结果显示均可以显著抑制酒精诱导的小鼠CPP的形成(P<0.05),而到第3个测试阶段显示,中药对于酒精诱导的CPP形成具有明显的抑制作用(P<0.01)。

5.结论

本发明复方不仅能降低酒精引起的小鼠高活动性，对酒精诱导的小鼠行为敏化的形成和表达都有显著抑制的作用，表明本发明复方能够干预酒精成瘾小鼠躯体依赖的形成及戒酒之后发生的复饮行为。CPP实验中，本发明复方具有防止酒精诱导的小鼠条件位置偏好模型的形成，即能够干预小鼠对于的精神依赖的形成。至为关键的是，本发明复方能够减少小鼠中脑边缘奖赏系统DA、Glu神经递质的释放，增加抑制性神经递质GBBA的传递，从而奠定了本发明防治小鼠中枢神经系统的可塑性变化的神经生物学基础，从而起到戒除酒精成瘾心理与行为依赖的作用，为中医药防治酒精成瘾及酒精依赖提供新的治法和制剂。

试验例2本发明药物对酒精成瘾小鼠行为敏化动物模型和条件位置偏爱模型影响的实验研究。

1.实验材料

1.1实验动物：3个月大雄性清洁级昆明株小鼠，进入实验室的体重25～30g之间。小鼠及饲料均由由成都达硕动物实验公司提供，动物合格证编号：SCXK(11)2013-24。购入后置于成都中医药大学中医脏腑实验室(国家二级)饲养。

1.2实验药物：实施例5所述的原料用量及方法制备，由成都中医药大学药学院中药制剂研究室提供。批号：20130111；临床拟定剂量为每日服用原生药材40g,按成人体重一般60kg计算，人用剂量为原生药材0.66g/kg体重。实验室配成分别为5.94g/kg/d(相当于临床拟定剂量的9倍)。给药体积0.1ml/10g体重。

1.3实验器材：小鼠饲养装置、灌胃针(成都中医药大学实验室)，小鼠脑组织切取装置及液氮储存罐(成都里来生物科技有限公司)，CPP--100条件位置偏好实验仪、ZZ-6自发活动测试仪(成都泰盟科技有限公司)，计算机：型号：TFT185W80PS(冠捷显示科技有限公司)、酶标仪：型号：MultlskanMk3(赛默飞世尔仪器有限公司)、电子恒温水浴锅：型号DZKW-4(北京中兴伟业仪器有限公司)。

1.4实验试剂：多巴胺(DA)ELISA检测试剂盒:Abcam公司生产，北京辉瑞生物科技有限公司分装，生产批号：E-30236。

谷氨酸(GLU)ELISA检测试剂盒:Abcam公司生产，北京辉瑞生物科技有限公司分装，生产批号：E-30324。

γ-氨基丁酸(GABA)ELISA检测试剂盒:Abcam公司生产，北京辉瑞生物科技有限公司分装，生产批号：E-31033。

2.实验设计及方案

2.1行为敏化实验

2.1.1实验装置ZZ-6小鼠自发活动分析系统：2排X3个的六宫格自发活动箱(同时测量六只小鼠自发活动、高分辨率的36个红外阵列探头装置及PC机数据通讯采集分析功能。材料为双层铝塑板，隔音隔光，具有通风装置。由红外探头记录动物活动状况,计算动物的自发活动次数。

2.1.2实验方法及实验流程

适应阶段:在适应性喂养一周的同时，称重所有的实验小鼠，灌胃等量的生理盐水后立即放入自主活动测试仪中，使小鼠能够适应测试的实验环境，时间为15分钟。第7天适应后，所有的小鼠放入自主活动测试仪中测试小鼠的自主活动基线，随后被随机分为4个大组。适应期的目的是让KM小鼠适应测试装置，排除环境、灌胃等因素对小鼠自主活动的影响，并记录它们正常的活动次数。

形成阶段：在测试自主活动基线后，小鼠在半小时之前灌胃中药或者盐水，随后灌胃(2.2g/kg)的酒精或者生理盐水，即形成盐水组+盐水组(s+s组，n＝40，中药组+盐水组(Z+S，n＝40)，盐水组+酒精组(s+e，n＝40.)，中药组+酒精组(Z+E,N＝40)在酒精或者生理盐水灌胃5min后立即放入测试仪中测试15分钟，实验隔天进行一次，总共10天、进行5次。在经历48小时转换期之后，激发阶段开始。

激发阶段：每个实验大组组，再次被组内随机分成4个亚组。药物激发阶段小鼠分别接受盐水，酒精组、中药组、中药+酒精组的激发，5min后立即放入自主活动测试仪中，测试15分钟。测试完成后，将盐水+盐水+酒精组(n＝10)，盐水+酒精组+酒精组(s+e+e，n＝10)小鼠，盐水+酒精组+中药组+酒精组(s+e+z+e，n＝10)小鼠，中药组+酒精组+酒精组(s+e+e，n＝10)小鼠，这4个亚组的小鼠立即断头处死，取脑组织，检测中脑边缘腹侧被盖区(VTA)及其投射区伏隔核的(NAC)的多巴胺(DA)，海马区、杏仁核区的谷氨酸(GLU)，腹侧被盖区(VTA)和NAC区的γ-氨基丁酸(GABA)这3个神经递质中药干预前后的变化。

2.2条件位置偏好实验(CPP)

2.2.1实验装置CPP-100条件位置偏爱测试仪：它通过将小鼠置于测试箱的灰色观察区域，然后观察实验动物在测试箱的三个(白色箱长×宽×高＝280×210×210mm、灰色箱长×宽×高＝120×210×210mm、黑色箱长×宽×高＝280×210×21mm)区域的活动情况，从而得到实验动物是喜好呆在暗色区域还是明色区域的定量结果数据，是用于评价药物的奖赏效应和寻找抗觅药行为的有效依据。

2.2.2实验步骤本实验采用偏性实验程序。实验分为预适应期、训练期、表达测试3个阶段,在整个实验过程中保证箱内光线、色调、气味等环境条件的一致。

预适应期(第-3～-1天)，将小鼠放入CPP箱中，由中间箱放入，打开闸门让其自由穿梭15分钟，每天一次，连续3天，并且每天灌胃生理盐水，以消除实验操作对小鼠的影响，第3天记录小鼠在黑、白、中间箱中停留的时间，记录15min时间内小鼠在不同区域中停留的时间,作为小鼠天然偏爱效应的指标,停留时间长的一侧作为非伴药箱,停留时间短的一侧作为伴药箱。并且剔除对黑箱和白箱有明显偏爱的小鼠(将在一侧停留时间>650S的剔除)。在本实验条件下，小鼠天然偏爱黑色，故我们采用有偏性的实验设计，选白箱为伴药箱，黑箱为非伴药箱。

形成期(第1～10天)，每只小鼠每天接受一次训练，酒精每隔一天给药一次。具体为，若第一天腹腔灌胃酒精(2.2g/kg)或者中药，放入伴药箱训练15分钟，则第二天皮下灌胃相同体积的生理盐水(NS)，放入非伴药箱训练15分钟。盐水对照组均注射生理盐水，中药复方在酒精灌胃之前半小时予以提前给药。依次类推，5个训练周期，形成4各组，即盐水组(s+s)、酒精对照组(e+s)、中药组(z+s)、中药干预组(z+e)。训练时间固定为每天上午的8点到9点之间。

测试期(第11天)，考虑训练前期小鼠天然偏爱差异并不显著，因此我们在第五天训练开始之后，每对酒精与生理盐水训练后为条件训练期，故在每个条件训练期后24小时，分别在第6、8、10天测试CPP的表达。在第11天的测试阶段，测试之前小鼠不给药直接放入中间箱打开隔板，测定15min内小鼠在伴药箱和非伴药箱的停留时间，测量小鼠CPP获得的情况。

2.3观察指标及检测方法

2.3.1采用ZZ-6小鼠自发活动测试仪测定行为敏化实验小鼠实验中的自发活动次数。

2.3.2采用CPP-100条件位置偏好测试仪测定CPP实验组各组小鼠在伴药箱和非伴药箱的停留时间。

2.3.3采用ELISA分析法测定小鼠脑组织，检测多巴胺、谷氨酸、γ-氨基丁酸的浓度水平。

3.统计学方法

各组实验数据均以表示，采用SPSS17.0软件进行统计分析，两组比较采用t检验；多组间比较采用One-Way ANOVA分析，然后用LSD法进行两两比较；行为敏化实验激发期多组间比较采用协方差分析方法。

4.实验结果

4.1行为敏化的实验结果

4.1.1实验适应期各组小鼠的自主活动基线比较：如图9所示为各组小鼠适应期的自主活动测试基线，由图可见,与正常对照组比较,中药组、酒精组、中药+酒精组各组小鼠的自主活动基线并没有统计学差异，P>0.05。

4.1.2中药复方本发明重复给药对小鼠自主活动的影响:图10所示为小鼠10天5次测试期间，盐水组，中药组，酒精组(2.2g/kg)，中药+酒精组各组之间自主活动的比较。重复测量方差分析的结果显示交互作用时间×处理(F＝19.473，P<0.01，予以Huynh-Feldt法矫正)，时间因素(F＝41.098，P<0.01，予以Huynh-Feldt法矫正)，处理因素(F＝198.030，P<0.01)，各处理组之间随着随着测试天数的变化连趋势有着显著的差异。Bonferroniposttests法进行多重比较的结果显示，第4、5次测试小鼠总的自主活动次数显著高于前三组(P<0.01)。中药组与盐水对照组之间小鼠的自主活动没有统计学差异(P>0.05)，提示中药复方本身对小鼠的自主活动并没有影响。酒精模型组与盐水组对照组相比在5次测试期间小鼠的自主活动具有明显的统计学差异(P<0.01),提示酒精组小鼠的自主活动明显高于盐水对照组，酒精能够引起小鼠的高活动性。在第1、2、3次测试结果显示，中药+酒精组与盐水组、中药组相比小鼠的自主活动并没有差异(P>0.05),而在第4、5次中药+酒精组小鼠的活动次数高于盐水对照组，中药组(P<0.05)。中药+酒精组与酒精模型组相比，在第2、3、4、5次测试期小鼠的自主活动次数明显低于酒精模型组，提示在酒精灌胃之前，予以中药复方能够减少酒精诱导的小鼠自主活动次数，即说明中药复方对酒精诱导的小鼠行为敏化的形成过程具有作用。

4.1.3中药复方本发明本身对小鼠行为敏化形成期与表达期的影响(图11)

4.1.3.1中药复方本发明本身对小鼠行为敏化形成与表达的影响。

如图11-1所示，中药复方，分别接受酒精(2.2g/kg)、中药(1.8g/kg)、中药+酒精激发下各组小鼠的自主活动次数并没有差异性(P>0.05)，提示中药复方对小鼠行为敏化模型形成与表达并没有作用。

4.1.3.2酒精诱导的小鼠行为敏化动物模型的建立。

如图11-2所示，酒精模型组接受酒精激发之后，与盐水激发相比小鼠的自主活动明显增加表现出显著的差异性(P<0.01)，表明由酒精诱导的小鼠行为敏化动物模型已经建立。

4.1.3.3中药复方本发明联合酒精干预对小鼠行为敏化表达的影响。如图11-3所示：酒精模型组在接受中药激发后，与盐水激发组相比小鼠的自主活动次数并没有统计学差异(P>0.05),提示复方并不能影响酒精组小鼠行为敏化的表达。而在小鼠予以酒精激发之前半小时，我们予以中药复方提前灌胃，结果显示与单纯酒精激发组相比，中药+酒精组激发对小鼠行为敏化的表达具有显著的抑制作用，两组存在显著差异性(P<0.01)，提示中药复方与酒精联合应用能够显著抑制酒精诱导的小鼠行为敏化的表达。

4.1.3.4中药复方本发明联合酒精干预对小鼠行为敏化形成的影响。

如图11-4所示，中药+酒精组在接受酒精激发后与盐水组激发相比，小鼠的自主活动次数并没有增加，没有统计学差异(P>0.05)。提示在经过10天中药与酒精联合、重复给药后，中药+酒精组小鼠没有形成行为敏化，而接受相同剂量酒精灌胃后的小鼠在酒精激发后，显示出显著的小鼠行为敏化，证明中药复方对小鼠的行为敏化的形成具有抑制作用。

4.1.4中药复方本发明对由酒精诱导的小鼠行为敏化动物模型形成期多巴胺(DA)、谷氨酸(GLU)、γ-氨基丁酸(GABA)含量的变化(图12)。在由酒精诱导的小鼠行为敏化形成期，酒精行为敏化组小鼠多巴胺(DA)、谷氨酸(GLU)含量与盐水组相比显著升高(P<0.01)。中药复方干预组的多巴胺(DA)、谷氨酸(GLU)水平与盐水对照组相比并没有差异(P>0.05),而与酒精模型组相比，中药复方干预组小鼠的多巴胺(DA)、谷氨酸(GLU)水平明显减少(P<0.01)。同样的，在γ-氨基丁酸(GABA)三组的组间比较中，我们发现，与盐水对照组相比，酒精模型组(GABA)减少较显著(P<0.01),而中药干预组与酒精敏化模型组相比，能够增加小鼠脑内(GABA)的释放。

4.1.4中药复方本发明对由酒精诱导的小鼠行为敏化动物模型表达期多巴胺(DA)、谷氨酸(GLU)、γ-氨基丁酸(GABA)含量的变化(图13)。在由酒精诱导的小鼠行为敏化的表达期，中药复方干预组小鼠的多巴胺(DA)、谷氨酸(GLU)水平与酒精模型组相比，明显减少(P<0.01)。同样的，在γ-氨基丁酸(GABA)三组的组间比较中，中药干预组与酒精敏化模型组相比，能够增加小鼠脑内(GABA)的释放。

4.2条件位置偏好实验(CPP)的实验结果

4.2.1小鼠的天然偏好效应实验(图14)：如图14所示,小鼠在900S的预测试时间中,在黑色盒子停留时间为589.97士4.466S，386.75士67.686(P<0.01)。结果提示,小鼠对四周为黑色、底面为粗糙网状盒子具有天然偏爱性,因此,我们采用有偏性的实验设计将白色盒子作为伴药盒,黑色盒子作为非伴药盒。

4.2.2中药复方本发明自身的位置偏爱及酒精诱导的小鼠CPP的建立(图15)：如图15所示，经过10天5个训练期后，测试期中药组在白色伴药箱停留时间为249.58士20.586S,盐水组为268.33.士41.033S两组相比没有统计学差异(P>0.05),提示中药复方组自身对小鼠的天然位置偏爱选择没有影响。而酒精组小鼠在测试期白色伴药箱停留时间为533.67士57.917S,相对于生理盐水组具有显著性差异(P<0.01),结果提示酒精(2.2g/kg)可以诱导小鼠条件位置性偏爱形成。

4.2.3中药复方本发明对酒精诱导小鼠CPP形成期影响(图16)如图16所示，与酒精组相比，中药复方呈时程相关性抑制酒精诱导的小鼠条件位置偏爱的形成过程。中药复方在3个测试期的结果显示均可以显著抑制酒精诱导的小鼠CPP的形成(P<0.05),而到第3个测试阶段显示,中药对于酒精诱导的CPP形成具有明显的抑制作用(P<0.01)。

5.结论

本发明复方不仅能降低酒精引起的小鼠高活动性，对酒精诱导的小鼠行为敏化的形成和表达都有显著抑制的作用，表明本发明复方能够干预酒精成瘾小鼠躯体依赖的形成及戒酒之后发生的复饮行为。CPP实验中，本发明复方具有防止酒精诱导的小鼠条件位置偏好模型的形成，即能够干预小鼠对于的精神依赖的形成。至为关键的是，本发明复方能够减少小鼠中脑边缘奖赏系统DA、Glu神经递质的释放，增加抑制性神经递质GBBA的传递，从而奠定了本发明防治小鼠中枢神经系统的可塑性变化的神经生物学基础，从而起到戒除酒精成瘾心理与行为依赖的作用，为中医药防治酒精成瘾及酒精依赖提供新的治法和制剂。

Claims (9)

1.含有下述重量配比的原料药在制备治疗酒精成瘾或/和依赖的药物中的用途：附子或乌头3-10份,黄芪3-35份。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的药物是由下述重量配比的原料药制备而成的制剂：

附子或乌头3-10份,黄芪3-35份。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述的原料药重量配比为：附子或乌头5-10份,黄芪10-35份。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述的原料药重量配比为：附子或乌头10份,黄芪35份。

5.根据权利要求1-4任意一项所述的用途，其特征在于：所述的附子或乌头为生附子和/或制附子；所述的乌头为川乌或草乌；所述的黄芪为生黄芪和/或炙黄芪。

6.根据权利要求1-5任意一项所述的用途，其特征在于：所述的制剂是口服制剂。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述的口服制剂是颗粒剂、散剂、丸剂、胶囊剂、软胶囊剂、片剂或口服液。

8.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的药物的制备方法包括如下步骤：

a、称取原料药；

b、将原料药直接打粉，或加水煎煮，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。

9.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的药物是治疗长期饮酒导致脾胃湿热，日久湿从寒化，损伤阳气，形成的脾肾阳虚之证的药物。