CN104081209A - 测定红细胞上存在的抗原或结合至红细胞上存在的抗原的抗体的方法和设备 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于输血前两种血液样品之间血型匹配的测定试剂盒，所述试剂盒包括至少两个对应于第一和第二血液样品的组件(101，201)，每一组件包括至少两个测试单元(1)，每一测试单元(1)包括：-含有存在于红细胞上的抗原或能够结合至存在于红细胞上的抗原的抗体的试剂，和-可渗透游离红细胞(6)而不可渗透凝集红细胞的膜(2)，其中包含于用于所述第一组件(101)和所述第二组件(201)二者的所述第一测试单元中的抗体对应于第一血型而包含于用于所述第一组件(101)和所述第二组件(201)二者的所述第二测试单元中的抗体对应于第二血型。

Description

测定红细胞上存在的抗原或结合至红细胞上存在的抗原的抗体的方法和设备

技术领域

本发明涉及方法和设备，用于确定血型的类型而实施血液相容性输血前测试。

背景技术

由EP0542655和FR2673472已知，基于红细胞凝集利用玻璃珠从游离红细胞中分离出凝集的(红细胞凝集的，hemagglutinated)红细胞进行测试。一个缺点是，所述测试并非机械稳定的。另一个不便之处是，检测机器不能立即读取结果。不能明晰定义截止点(能够通过玻璃珠的颗粒尺寸)。这种方法能够直接用于实施涉及凝集抗体的测试。

然而，如果涉及非凝集抗体(例如在Coombs测试中的IgG抗体)，红细胞在培养期之后将会不得不首先进行冲洗，才能除去未结合的抗体。仅仅此时这些红细胞(敏化或未敏化)在抗球蛋白血清存在下能够引入测试系统中，随后才能发生凝集。因此，这种测试系统的缺点是，在抗球蛋白测试中培养阶段和洗涤阶段不能发生在同一个反应容器中。

根据EP0760103使用接枝膜也是已知的，在这种接枝膜上固定了一种或多种免疫球蛋白结合物质。敏化红细胞能够结合至这种可渗透的固相。其上不存在抗体(免疫球蛋白)的红细胞将不会结合至固相，并能够简单地使其通过，因为固相可渗透红细胞。测试并非基于红细胞凝集。

其它体外方法(参见，例如，WO2008/148890)包括使样品与其上附连红细胞或红细胞膜片段或其抗体的可区分(即，具有标记)的珠粒接触。然而，在进行分析步骤之前，应该消除尽可能多的未结合试剂才能降低背景噪声，而因此获得测试的良好特异性。洗涤条件过于剧烈则可能降低测试的灵敏度。

在通过使用捐献者的红血细胞(RBC)的输血中，存在人为错误的遗憾之处是与受体(即，被输血的个体)血液不相容，由溶血或红细胞凝集引发不良反应。仍有必要提供在非常合适输血地点的快速验证测试。

在输血医学中，还存在对简单的方法和设备的需要。为了提高输血的安全性，也需要对结果的明确正确的解释。这仍需要提供相容性测试，这种相容性测试需要通过重复测试才擅长于再次达到原始结果。有必要提供相容性测试，其能在机械应力作用下保持稳定。有必要提供相容性测试，其易于生产。

本发明因此旨在提供允许消除现有技术的缺点的方法和设备。

具体而言，本发明的一个方面旨在提供使得能够确定血型的类型和/或能够实施输血前的旁侧测试(beside test)以便能够避免输血错误的方法和设备。

本发明的某些方面旨在提供使之能够，例如通过省却像，例如，涉及IgG(G型免疫球蛋白)之时的洗涤这样的步骤，缩短相容性匹配所需的时间的方法和设备。

本发明的某些方面也旨在提供在非常合适的输血地点(POCT：护理测试点)通过提供便于携带或便于移动或便携式的配型必要设备而使之能够进行血型测试和/或相容性测试的方法和设备。

本发明还有一个目的是提供简单的方法和设备。

本发明的一些方面还旨在提供通过肉眼和/或机器自动地对结果进行明确而正确解释的方法和设备。后者(明确而正确解释)能够通过明确定义的分界点而获得。

本发明中的某些方面还旨在提供可再现的相容性测试。

本发明的一些方面还旨在提供机械应力如离心、压力和/或振动下保持稳定的相容性测试。机械应力可通过移动测试而引起。

本发明的某些方面还旨在提供易于生产的相容性测试。后者降低了生产成本。

发明内容

本发明涉及一种测定(检测存在)生物血液样品中存在的分析物(人工的或天然的)的方法，所述分析物是结合对的第一成员，结合对包括存在于红细胞上的抗原和结合至存在于红细胞上的抗原的抗体，所述方法包括以下步骤：

-用含有结合对的第二成员的试剂处理生物样品而在测试单元中产生红细胞凝集(hemagglutination)，

-通过可渗透游离红细胞而不可渗透红细胞凝集的膜过滤从游离红细胞中而分离出如果任何已经形成的红细胞凝集，和

-检测所述游离红细胞和/或所述红细胞凝集并关联样品中分析物的存在，其是通过检测所述膜下游的游离红细胞和/或膜上游的红细胞凝集。

有利的是，膜的孔尺寸的上限和下限能够进行组合而产生最佳的孔隙度(porosity)范围，这取决于生物样品的红细胞尺寸(即，主要取决于红细胞来源的物种)。膜的最低孔隙度限制是所涉及的物种游离细胞的直径；人RBC的直径为6～8μm。包括于孔隙度范围内的是涉及的游离细胞的2倍直径。优选膜具有6～25微米的孔隙度。

有利的是，膜没有分析物结合物质。

优选膜或其层选自由纺织薄巾(woven tissue)、无纺薄巾(non woventissue)、径迹蚀刻膜(track-etched membrane)和多孔膜或其组合组成的组。更优选膜或其层包含聚酰胺(或基本上由其组成)。

有利的是，过滤通过离心、毛细管、膜下游真空、膜的过压(overpressure)下游或其组合而促进。优选在真空或过压情况下，压力差应该进行调节而避免溶血。

优选待测定的分析物是红细胞上存在的血型抗原或结合至血型抗原的抗体。

优选游离红细胞或红细胞凝集通过光学装置，如优选IR吸收测定进行检测。可替换地或与光学检测组合地，检测能够通过视觉观察完成或进行检查。

有利的是，红细胞或红细胞凝集的检测采用无结合对的第二成员(空白的(blanco))的测定进行比较。

优选生物样品包括全血。

有利的是，至少两种分析物在两个独立的(分开的)测试单元中同时进行测定，第一分析物对应于A血型抗原或结合至所述抗原的抗体而第二分析物对应于B血型抗原或结合至所述抗原的抗体。

优选第三测试单元用于测定对应于Rh血型抗原或结合至所述抗原的抗体的分析物。

本发明的第二方面涉及一种验证(输血)相容性匹配的方法，其中两个生物样品的血型抗原或抗体通过本发明的方法基本上同时进行测试，两个生物样品对应于第一个体和第二个体而其中对结果进行比较用于相容性匹配(compatibility matching)。

有利的是，第一个体对应于供体，而第二个体对应于受体。更优选相容性匹配验证是在正当实施输血之前在护理点(受体房间)进行实施。

优选结果进一步与数据库中储存的预定数据比较。

本发明的第三方面涉及适用于根据本发明第二方面用于两样品之间(输血)相容性匹配的方法的试剂盒，所述试剂盒包括至少两个用于第一样品的测试单元和两个用于第二样品的测试单元，每个单元包括：

-含有存在于红细胞上的抗原或能够结合至存在于红细胞上的抗原的抗体的试剂，和

-可渗透游离红细胞而不可渗透凝集红细胞的膜，

其中包含于第一测试单元中用于第一样品和第二样品二者的抗原或抗体对应于第一血型(A)而包含于第二测试单元中用于第一样品和第二样品二者的抗原或抗体对应于第二血型(B)。

优选本发明的试剂盒进一步包括用于产生通过膜的生物样品的流(流动)的过滤促进(离心)装置。

有利的是，测试单元包含用于接收试剂和生物样品的第一空腔(cavity)和用于接收滤液的第二空腔，第一和第二空腔通过膜分隔。

有利的是，试剂盒进一步包含用于检测第二空腔中的游离红细胞和/或用于检测膜上红细胞凝集的光学装置。更优选在膜和第二空腔二者上都进行光学检测而改善测试的可靠性。

有利的是，对应于每一样品的测试单元组装于组件(assembly)中，一个组件对应于供体的血液样品，而一个组件对应于受体的血液样品。

优选每一组件例如通过聚合物注塑成型生产成一个部分。

本发明的另一方面涉及降低ABO相容性错误概率的方法，其中用于测定生物样品中分析物的方法用作POCT，所述分析物由存在于红细胞上的抗原或结合至红细胞上存在的抗原的抗体组成。优选在这种方法中通讯装置用于将测定方法的结果与中心实验室的数据库比较，容许进行相容性匹配的额外验证。

附图说明

图1表示在测试之前根据本发明一个优选实施方式所用的测试单元的实例。

图2表示在测试之后根据本发明一个优选实施方式所用的测试单元的实例，其中游离红细胞正通过膜。

图3表示测试之后根据本发明一个优选实施方式所用的测试单元的实例，其中膜上有凝集的红细胞。

图4表示本发明一个实施方式中所用的示例性设备。

图5表示用于检测供体样品的组件(第一组件)的实例。

图6表示用于接收受体样品的组件(第二组件)的实例。

图7表示具有第一和第二组件的旋转支架的实例。

附图标号(Figure keys)

1.测试单元

2，102，202.膜

3.与试剂混合的生物样品

4.膜支架

5.密封圈

6.包含游离红细胞的液体

7.凝集的红细胞

8.基本上无红细胞的滤液

9，109，209.第一空腔(上部腔室)，a，b和r标号(indices)对应于A和B血型，而r对应于参照物(或对照单元)

10，110，210.第二空腔(下部腔室)，a，b和r标号对应于A和B血型，而r对应于参照物(或对照单元)

11.马达(发动机、动力装置，motor)

12.转子

13.用于传感转子位置的光学传感器

14.用于传感转子位置的位置传感器

15.LED

16.位置标记

17.IR LED

18.IR传感器

19，330.转子轴

101第一组件

201第二组件

300旋转支架

具体实施方式

在本发明中，“输血前两种血液样品之间的血型匹配”或“输血前血液相容性测试”被认为是等价的，因为实施血型测试是为了验证供体和受体之间的血型相容性。

本发明的各方面涉及测定存在于RBC上的抗原(Ag)或结合至存在于红细胞上的抗原(Ag)的抗体(Ab)。

本发明的这些方面优选涉及测定血型Ag或结合至血型Ag的Ab。本发明的方面优选涉及测定血型抗原或结合至血型抗原的抗体。

事实上，在红细胞的表面上天然或人工存在，id est RBC，膜抗原，尤其是血型(或系统)抗原或病毒抗原，能够被免疫系统识别。红细胞上存在的血型抗原预想是指ABO血型系统的不完全清单的任何抗原(具有A抗原、B抗原，A和B抗原同时表达)或H抗原，恒河猴系统的任何抗原(具有D、E、e和C或c抗原)，凯尔(Kell)系统的任何抗原(具有K或k抗原)，达菲(Duffy)系统的任何抗原(Fya、Fyb)，基德(Kidd)系统的任何抗原(Jka、Jkb)或其它系统的任何抗原，如MNSS、Lewis、Lu、P1、Lea、Leb、Cw、M、N、S、s等。

临床上最有意义的Ag系统是ABO RBC Ag系统，这是独一无二的，因为大多数人个体都会对那些Ag产生Ab而并不对其进行主动免疫。因此，个体的RBC可以呈现A、B或A和B的Ag。约40％的人群并没有携带任何这些Ag，而因此，分类或分型为O型或零型。O型个体的血液中的血浆或血清具有抗A和B型二者Ag的Ab。然而，AB型个体血液中的血浆或血清并没有表现出对A型或B型Ag的Ab。因此，A型个体血液中的血浆或血清具有抗B型Ag的Ab，而B型个体血液中的血浆或血清具有抗A型Ag的Ab。

在ABO Ag系统中的不相容性会造成强烈的不良反应，这可以通过将第一个体如供体匹配于第二个体如受体而加以防止。理想情况下，供体和受体应属于同一血型；然而，在缺乏同型供体时，替代血型只要受体的血清或血浆中不携带抗供体RBC的天然Ab则都可以适用。因此，O型是万能供体，因为其RBC将不会与抗A或抗B Ab反应，这存在于所有其他血型的血液中。AB型的个体能够接收所有血型的血液，因为他们不具有对其任何的Ab。

个体的RBC可携带恒河猴(Rh)(或D)抗原(Ag)(Rh<+>或Rh阳性)或不携带(Rh->或Rh阴性)。不像ABO Ag系统，抗Rh(抗D)Ab通常不存在于血液Rh阴性个体中。这种Ab在用Rh阳性血液输血或由Rh阳性胎儿的妊娠所致的免疫增强作用之后仍然会产生于Rh阴性个体中。除了ABO血型之外，还可能要完成供体和受体之间的Rh匹配才能防止在Rh-阴性个体中产生Rh Ab和在可能携带抗Rh Ab的个体中防止不良反应。

除了A、B和Rh Ag之外，RBC可以携带各种其它Ag，这些有时称为亚型。类似于Rh Ag(和自然中的大多数Ag)，对那些Ag的Ab通常不存在于人血中，但可能由于先前的输血或Ag携带胎儿的妊娠而产生。这种Ab称为意外(抗体)。

抗RBC抗原的某些抗体被认为是“不完全(抗体)”，因为它们不能够直接凝集RBC，而需要加入抗球蛋白(库姆斯(Coombs)氏试剂)才能促进凝集。

这种试剂可能包含利斯(Liss)介质和/或库姆斯试剂。

在本发明中，要测试的生物样品可能来自人类，包括出生前的发育阶段。可替换地，要测试的生物样品可能源自具有多种抗原分子的任何动物。动物可以是，例如，狗，其中迄今为止已经识别出了八种不同的血型，猫，其中已经有三种血型，....

生物样品预想是指任何无论是生理学还是病理学上包含红细胞或抗红细胞抗体的体液或组织活检。后者能够是杂交瘤的上清液。作为生物样品，因此可以提及的是血液样品，而尤其是全血样品或血液细胞沉淀样品(pellet sample)(或血袋)，或任何其它血液制剂，而且还有在其包含血液或抗体时的唾液、汗液、泪液、母乳、粪便或尿液。使用血浆或血清样品也是可能的。所述生物样品也能够是混合物，包括：体液，组织活检，血液样品，其它血液制剂、血浆、血清、唾液、汗液、泪液、母乳、粪便或尿液。

结合至红细胞上存在的抗原(Ag)的抗体(Ab)指示任何抗红细胞携带的抗原分子(antigenic molecule)的抗体或任何抗红细胞抗体。

根据本发明，Ab是指IgA、IgD、IgE、IgG和/或IgM(M型免疫球蛋白)。

抗体是指任何完全抗体或包含或由至少一个抗原结合位点构成的抗体功能片段(高变部分)构成，其允许所述抗体结合至抗原化合物的至少一个抗原决定基(抗原决定簇，antigenic determinant)。以抗体片段为例，可以提及的是Fab、Fab'和F(Ab')2片段以及还有scFv链(单链可变片段)，dsFv链(双链可变片段)等。

试剂所含的抗体可以是多克隆或单克隆抗体。本发明上下文中能够使用的单克隆抗体或多克隆抗体的制备来自常规技术；Ab可例如以或商购。

正如图1～3中所示，膜2从其不可渗透的凝集红细胞7中分离出其可渗透的游离红细胞6。

膜2有利地不会与分析物的组分和/或与试剂的组分发生反应。

本发明的膜2或其层有利地选自由纺织薄巾、无纺薄巾和多孔聚合物膜如径迹蚀刻膜或其组合组成的组中。纺织薄巾由于廉价而降低了生产成本。纺织薄巾具有清晰的孔道。多孔聚合物膜和径迹蚀刻膜具有对例如由组装过程所致的变形较不敏感的进一步的优点。

本发明的膜2优选由一个单层构成。实际上，膜可以例如通过网格(grid)机械地支撑。

有利的是，本发明的膜2是一种聚合物膜，聚合物优选选自由尼龙、纤维素酯聚合物、硝化纤维素、聚偏二氟乙烯(PVDF)、聚四氟乙烯(PTFE)、聚醚砜、聚碳酸酯、聚酯及其组合组成的组中。

本发明的膜2的孔隙度优选是单分散的。对于具有尺寸良好定义的尺寸孔隙度，单分散的膜有利地表现出良好定义的通过截止值(pass-throughcutoff)，从而提高了本发明方法的可靠性。径迹蚀刻膜表现出这种单分散的孔隙度，具有窄尺寸分散的另一个优点。

本发明的膜具有经选择可渗透游离红细胞而不可渗透凝集红细胞的孔隙度。因此，膜2的孔道有利地大于或等于约6、约9或约11μm，而等于或小于约25、约20、约16、约14或约13μm。所示的上限和下限能够进行组合而获得最佳的孔隙度范围，这取决于生物样品中红细胞尺寸(即，主要取决于红细胞来源的物种)。膜的最低孔隙度限制是来自物种的所涉及游离细胞的直径；人RBC的直径为6～8μm。孔隙度范围内包括的是所涉及的游离细胞的2倍直径。如果涉及单个IgM，则五基数红细胞凝集(pentamerous hemagglutination)直径为约16μm。在实践中，涉及多个IgM而因此直径将大于16μm。

优选膜通过密封环5(即，垫圈(washer))固定到测试单元1的内部。优选密封环是橡胶。

可替换地，膜2能够胶合(胶粘)或焊接至测试单元的内部。焊接可以通过热、超声波、激光或射频密封工艺完成。组装还能够通过使用合适的胶和/或溶剂结合进行实施。

优选在膜的固定期间最小化机械应力。因此，膜的孔隙度保持不变。这对于对机械应力敏感的纺织或无纺膜尤其如此。

有利的是，膜2水平固定于测试单元的内部。

优选膜2位于：

·测试单元1的顶部，

·测试单元1顶部和距离测试单元1顶部三分之一处之间，

·距离测试单元1顶部0.5cm，

·测试单元1半程和距离测试单元1顶部三分之一处之间，

·测试单元1半程处或

·测试单元1半程和距离测试单元1底部三分之一处之间。

优选跨膜2的过滤通过离心、毛细作用、测试单元底部的真空、测试单元顶部的过压或其组合进行促进。在真空或过压的情况下，压力差应该进行调节而避免溶血。压力差例如能够通过活塞引起，所述活塞位于测试单元的顶部(过压)或底部(真空)。

测试单元1可以是一个测试管、样品管、微量离心(Eppendorf)管等。有利的是，测试单元1是由血液生物相容性材料制成。能够使用由聚丙烯、聚甲基戊烯或聚碳酸酯制成的测试单元。高化学品耐受性的聚丙烯管(0.5mL、1.5mL或2mL)，可能无增滑剂(slip agent)、杀生物剂或增塑剂，其在固定角式转子(fixed-angle rotor)中可能具有高达25,000×g的离心稳定性，在水平转子(swing-bucket rotor)中具有高达70,000×g的离心稳定性。

测试单元优选经定尺寸而含有约0.01～约2.5mL，优选约0.02～约1mL，优选0.04～约0.4mL的最大体积。

测试单元1可具有盖子和/或与特定血源一致的颜色。模块(mould)和/或条形码系统(bar code system)只能允许某些测试单元在某些位置携带特定血源。本段中描述的措施都是为了避免人为错误。

优选测试单元包含培养室，在培养室中能够发生抗体和抗原之间的结合。可替换地，Ab与Ag之间的结合能够发生于测试单元(非膜固定于其内的测试单元)中。

正如图1中所示，测试单元1优选包含形成培养室、用于接收试剂和生物样品3的第一空腔9，和用于接收滤液(6或8)的第二空腔10，第一和第二空腔通过膜2分隔。

有利的是，培养室中的时间包括40～300秒，优选40～120秒。

有利的是，培养室预先填充所有试剂(除了要测试的生物样品之外)。

优选测试单元经过构造而允许游离红细胞在测试单元1的底部能够通过人眼或检测机器清晰可见。优选测试单元1是透明的。

有利的是，“测试单元的底部”包括略高于测试单元实际内底的高度；这就避免在例如应该已经凝集而还没有结合的若干游离RBC通过膜2时产生假阳性结果。

在1.5mL微量离心管的情况下，检测水平具有从测试单元内底向上最小3mm的高度。管的内部高度与检测水平的比率为约12。

优选测试单元1经过构造而允许红细胞凝集7，在膜2顶部，能够通过人眼或检测机器清晰可见。

甚至更加优选测试单元1如此而使游离红细胞6在测试单元的底部而红细胞凝集3在膜2的顶部能够同时通过人眼或检测机器可见。

请注意，“底部”，“在…之下”在本文中应该理解为如果过滤通过重力发生，即“底部”或“在…之下”是膜的下游，而“在..之上”或“在…上面”是膜相对于过滤流的上游。

优选游离红细胞6和红细胞凝集7的检测通过光学装置，优选包括发光二极管15和光传感器13进行实施。所述光学检测中所使用的光的波长可以是红外(IR)、近红外(NIR)、紫外(UV)或可见光。

有利的是，该方法用于在单独的测试单元中同时测定至少2种分析物，如A和B血型。额外的(附加的)测试单元可以有利地用于测定其它血型或亚型，如恒河猴血型(Rhesus)。

作为进一步的优点，本发明的方法可以同时实施于第一个体和第二个体的生物样品上。对于测试输血过程中供体/受体相容性，这是特别引人关注的。有利的是，相容性测试是在护理点、仅当输血给予之前进行实施，验证血袋(供体)的血液和要输血的患者(受体)的血液之间的相容性。在实际输血之前的片刻同时测试供体的血液和患者血液降低了人为错误的风险。

下面的优选实施方式公开了多部件试剂盒(a kit of parts)，其进一步简化了在护理点的本发明的使用，而一些优选实施方式进一步降低了出错的风险。

根据一个特别优选的实施方式，用于输血前测试两种血液样品之间血型匹配的试剂盒包括两个组件101，201，一个组件对应于供体而另一个对应于受体，每一组件包括至少两个用于检测至少2种血型的测试单元，而所述至少两个测试单元与接收供体或受体的样品的通道通信，应用中血液样品在每个组件中的至少两个测试单元之间进行分配(divide)。

优选每一组件中的至少两个测试单元对应于A和B血型，而测试单元的上部空腔预填充相应的血型抗体。

有利的是，试剂盒的两个组件进一步包括用作对照单元的无抗体第三测试单元。

优选对应于供体(血袋)或受体的组件包括避免它们之间任何混淆的装置。

通常，血袋的样本存在于两端密封的塑料管段中。因此，避免供体和受体之间混淆的一个便利措施是在用于接收样品的通信通道末端增加一个能刺穿对应于供体的组件之上的所述塑料管的空心钉(spike)。钉应当足够长而获得塑料管内部之间通信以采集样品，如果太短则不能从由隔膜封闭的标准血液样品管采集样品。优选钉直接模铸成为组件的部件，并且其为塑料钉，不能刺穿受体的皮肤，在此避免了受体样品和供体样品之间的混淆。

通常血液样品在采样之后通过隔膜进行封闭的标准血液样品管中取自受体。一种取出受体样品的便利措施是使用隔膜，操作这种系统的人使用注射器通过样品管隔膜从标准血液样品管中取出样品，并随后在受体组件隔膜中引入注射针。

有利地，供体和受体组件具有略微不同的形状，使得它们不能在相容性测试机器中发生置换。在测试机器中的支架300上的突出(protrusion)331，332能够用于获得这样的特性，所述突出对应于在这些组件中的不同底切(undercut)。

供体和受体部件也优选包含光学标记335，334，用于检查其在相容性测试机器中的存在，并用于验证其对于这些结果光学读取的位置。

本发明还公开了一种设备，用于自动测定供体和受体之间的血型相容性，所述设备包括旋转支架(300)，用于支撑第一组件(101)和第二组件(201)，所述旋转支架(300)适合在使用中通过离心产生通过膜(2)的血液样品的流(动)。

优选设备进一步包括用于检测膜上凝集红细胞(7)的存在，或膜下游(10)红细胞(6)存在的光学传感器。

有利的是，每一组件包含光学标记(335，334)，用于检查两个组件的存在，并用于将光学传感器与组件对准。

优选设备进一步包括用于将相容性测试的结果与储存于数据库中的预定相容性数据进行比较的通信装置。

以下提及的实施例都是在室温下实施的。

实施例

在本实验中使用的设备示意性地示于图4中。其包括：

-绕纵轴20旋转并由电动机11控制的转子12，所述转子包括六个位置，每个位置能够接收一个由直径1cm而长度3.8cm的聚丙烯管制成的测试单元1；

-每个管由一个通过11μm孔隙度的膜2与下部腔室10分隔开的约200μL的上部腔室9构成；

-膜2包括一块直径47mm网格数215，6％尼龙94％空孔(emptiness)的微孔膜(密理博微孔滤膜，Millipore)，孔隙度11μm。膜2通过橡胶密封圈5保持位置。

-每个管定位于转子12中，如此而使它们每一个的底部在每次旋转时都会中断LED17和光传感器18(二者都在IR区内)之间的路径；

-离心设备具有最大1200转/分钟(的速率)；

-光学密度在每一测试单元的底部用LED17和光传感器18进行测量。结果作为一个分值(任意单位，基于比较数据(comparative data))给出。基线为200-300。

方法(程序)的描述

在第一和第四测试单元中，将50μL的单克隆Ab抗-A(Novaclone^TM鼠单克隆，由Dominion biologicals limited for Immucor Gamma生产)和50μL分别来自第一和第二个体的全血进行混合。

在第二和第五测试单元中，将50μL单克隆Ab抗-B(Novaclone^TM鼠单克隆，由Dominion biologicals limited for Immucor Gamma生产)和50μL分别来自第一和第二个体的全血进行混合。

第三和第六测试单元是含有50μL分别来自第一个体和第二个体的全血和50μL生理血清(来自B Braun的无菌NaCl溶液0.9％)的阴性对照。

这六个单元置于转子中并以900转/分钟速率离心。转子直径为约20cm。

结果：

实施例1

标准血液样品收集于柠檬酸盐(Citrate)、EDTA或SAGM中。

在三个不同的聚丙烯管中，将50μL全血与50μL抗-A单克隆Ab(抗-A Novaclone^TM鼠单克隆，Dominion biologicals limited for Immucor Gamma生产)，抗-B单克隆Ab(抗-B Novaclone^TM鼠单克隆，Dominion biologicalslimited for Immucor Gamma生产)或无菌NaCl溶液0.9％(获自B Braun)任一种混合。培养时间为60秒。每一混合物都转移至固定于管(1.5mL微量离心管)内部的膜(一块直径47mm，网格数215，6％尼龙94％空孔的微孔膜(Millipore)，孔隙度11μm)的顶部，之后在3min期间内以900转/分钟进行离心。通过橡胶密封圈，膜水平安装于距离微量离心管单元顶部0.5cm处。

光密度通过每一单元底部的IR LED和IR传感器进行测定。

结果给出分值。当红细胞凝集并未形成于膜上时，观察到分值高于600(最高800)。当红细胞凝集的确形成于膜上时，观察到分数低于600。基线是200-300。

将结果与实验室的常规方法如凝胶技术(可获自DiaMed)的那些结果比较，在这些实验室常规方法中12.5μL0.8％的RBC悬浮液和50μL抗体的混合物通过离心(加速度约90g)而被迫进入凝胶中。凝集RBC不能穿透凝胶而留在凝胶的顶部。未凝集的细胞渗透过凝胶柱而到达其底部。小尺寸凝集体进入凝胶柱中，但并未到达其底部。

这两种血型技术的结果为：

26A，9B和220，对于柠檬酸盐，

18A，9B，20和1AB，对于EDTA，和

14A，26B和140，对于SAGM。

实施例2

病理学样品收集于EDTA中。在三个不同的聚丙烯管中，将50μL全血与50μL抗-A单克隆Ab((抗-A Novaclone^TM鼠单克隆，Dominionbiologicals limited for Immucor Gamma生产)，抗-B单克隆Ab(抗-BNovaclone^TM鼠单克隆，Dominion biologicals limited for Immucor Gamma生产)或无菌NaCl溶液0.9％(获自B Braun)任一种混合。培养时间为60秒。每一种混合物都转移至固定于管内部的膜(一块直径47mm，网格数215，6％尼龙94％空孔的微孔膜(Millipore)，孔隙度11μm)的顶部，之后在3min期间以900转/分钟进行离心。

光密度通过每一单元底部的IR LED和IR传感器进行测定。

结果给出分值。当红细胞凝集并未形成于膜上时，观察到分值高于600(最高800)。当红细胞凝集的确形成于膜上时，观察到分值低于600。基线是200-300。

这两种血型技术的结果为：

2A，1B和40，对于7名患有镰状细胞性贫血的患者，

0A，2B，80和0AB，对于10名贫血症患者(Hb：5.8-7.7g/dL；HCT：17.5-23.9)，

1A，1B和20，对于4名新生儿(减弱的抗原表达)和

24个一致的结果，对于24个来自小红细胞症(microcytose)患者的样品(MCV：57-79fl)

由上所提及的比较数据能够很明显地推断AB0血型得以验证。

实施例3

在18个不同的测试单元中，将50μL大红细胞症(macrocytose)患者(MCV：101-135fl)的全血与50μL无菌NaCl溶液0.9％(获自B Braun)混合。每种混合物直接转移至固定于管(1.5mL微量离心管)内部的膜(一块直径47mm，网格数215，6％尼龙94％空孔的微孔膜(Millipore)，孔隙度11μm)的顶部，之后在3分钟期间以900转/分钟进行离心。通过橡胶密封圈，膜水平安装于距离微量离心管单元顶部0.5cm处。

无论MCV值为多少，RBC都完全通过。这证实了甚至对于病理学样品所选膜孔隙度的适宜性。

Claims (20)

1.一种用于测试输血前两种血液样品之间血型匹配的测定试剂盒，所述试剂盒包括对应于第一和第二血液样品的至少两个组件(101，201)，每一组件包括至少两个测试单元(1)，每一测试单元(1)包括：

-含有能够结合至存在于红细胞上的抗原的抗体的试剂，和

-可渗透游离红细胞(6)而不可渗透凝集红细胞的膜(2，102，202)，

其中包含于用于所述第一组件(101)和所述第二组件(201)二者的所述第一测试单元的所述抗体对应于第一血型而包含于用于所述第一组件(101)和所述第二组件(201)二者的所述第二测试单元的所述抗体对应于第二血型。

2.根据权利要求1所述的测定试剂盒，其中包含于每一组件的所述第一测试单元的所述抗体对应于血型A而包含于每一组件的所述第二测试单元的所述抗体对应于血型B。

3.根据权利要求1或2所述的测定试剂盒，其中所述试剂盒的所述至少两个组件中的每一个进一步包括无抗体的第三测试单元(110r，210r)，用作对照单元。

4.根据前述权利要求中任一项所述的测定试剂盒，其中所述试剂盒的所述至少两个组件中的每一个进一步包括额外的测试单元(110r，210r)，其含有对应于恒河猴(Rh)血型的抗体。

5.根据前述权利要求中任一项所述的测定试剂盒，其中每一测试单元(1)包含用于接收所述试剂和生物样品(3)的第一空腔(9，109a，109b，209a，209b)和用于接收滤液(6或8)的第二空腔(10，110a，110b，210a，210b)，所述第一空腔和所述第二空腔通过所述膜(2，102，202)分隔。

6.根据前述权利要求中任一项所述的测定试剂盒，其中每一组件包含用于接收血液样品和在每一组件的所述测试单元之间分布所述血液样品的装置。

7.根据权利要求6所述的测定试剂盒，其中用于接收对应于所述第一血液样品的所述组件(101)的血液样品的装置进一步包括用于从血袋采集血液样品的装置(120)，所述装置不适于接收从个体直接采集的样品。

8.根据权利要求7所述的测定试剂盒，其中用于接收对应于所述第一血液样品的所述组件(101)的血液样品的装置进一步包括能够刺穿血袋的塑料管以采集血液样品的空心针(120)，而所述空心针(120)不能从个体直接采集血液样品。

9.根据权利要求6～8中任一项所述的测定试剂盒，其中用于接收对应于所述第二血液样品的所述组件(201)的血液样品的装置进一步包括用于接收来自注射器的血液样品的装置(220)，所述装置不适于从血袋或血袋管道直接采集样品。

10.根据权利要求9所述的测定试剂盒，其中用于接收对应于所述第二血液样品的所述组件(101)的血液样品的装置进一步包括能够接收来自注射器的血液样品的母鲁尔接头或隔膜。

11.根据前述权利要求中任一项所述的测定试剂盒，进一步包括一种设备，所述设备包括用于支撑所述第一组件(101)和所述第二组件(201)的旋转支架(300)，所述旋转支架(300)适于通过离心在使用中产生通过所述膜(2)的所述血液样品的流。

12.根据权利要求11所述的测定试剂盒，其中所述设备进一步包括一个或多个光学传感器，用于检测所述膜上的凝集红细胞(7)或所述膜下游的红细胞(6)的存在。

13.根据权利要求12所述的测定试剂盒，其中每一组件包含用于检查两个组件的存在和用于将所述光学传感器与所述组件对准的光学标记(335，334)。

14.根据权利要求11～13任一项所述的测定试剂盒，其中所述设备进一步包括用于将相容性测试的结果与储存于数据库中的预定相容性数据进行比较的通信装置。

15.一种通过测定生物样品中存在的分析物来验证两个生物样品之间相容性匹配的方法，所述分析物是结合对的第一成员，所述结合对由存在于红细胞上的抗原和结合至所述存在于红细胞上的抗原的抗体组成，所述结合对对应于血型抗原/抗体，所述方法包括以下步骤：

-用含有所述结合对的第二成员的试剂处理所述生物样品而在两个独立的测试单元(1)中产生红细胞凝集，

-通过可渗透游离红细胞(6)和不可渗透红细胞凝集的膜(2)过滤从所述游离红细胞(6)中分离如果已经生成的任何所述红细胞凝集(7)，和

-检测所述游离红细胞(6)和/或所述红细胞凝集(7)并通过检测所述膜(2)下游的游离红细胞(6)和/或所述膜(2)上游的红细胞凝集(7)关联所述样品中所述分析物的存在，两个生物样品的所述血型抗原或抗体同时进行测试，所述两个生物样品对应于第一个体和第二个体，且其中比较结果以用于相容性匹配。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述游离红细胞(6)和/或所述红细胞凝集(7)通过光学装置进行检测。

17.根据权利要求15～16中任一项所述的方法，其中所述生物样品包括全血。

18.根据权利要求15～17中任一项所述的方法，其中同时测定至少两种分析物用于两个独立的测试单元(1)中的两个生物样品，第一分析物对应于A血型抗原或结合至所述抗原的抗体，而所述第二分析物对应于B血型抗原或结合至所述抗原的抗体。

19.根据权利要求15～18中任一项所述的方法，其中两个额外的测试单元(1)用于验证所述两个生物样品之间的Rh相容性。

20.根据权利要求15～19中任一项所述的方法，其中所述结果进一步与数据库中储存的预定数据进行比较。