CN104077949A - 一种叶绿体色素纸层析分离方法 - Google Patents

Abstract

一种叶绿体色素纸层析分离方法，涉及一种色素纸层析分离方法，首先制备色素提取液，于避光处保存备用。然后，制作圆柱滤纸。最后，进行点样，将点样色素用电吹风吹干后，在其中央制一小孔，把圆柱滤纸一端插入其中，另一端即底座端置于装有展层剂的培养皿内，将点样的圆形滤纸置于培养皿上，此时层析开始进行。待四条色带（胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a和叶绿素b）均分离出即可。该方法在提高层析分离效果，如色带颜色纯正、色带边缘清晰的同时，降低层析容器投资（节省投资60%），减少层析滤纸处理繁琐以及丙酮做提取剂、四氯化碳做展层剂所产生的毒性污染。该分离方法分离效果好，省时省力而且减少环境污染和毒性。

Description

一种叶绿体色素纸层析分离方法

技术领域

本发明涉及一种色素纸层析分离方法，特别是涉及一种叶绿体色素纸层析分离方法。

背景技术

已有的叶绿体色素纸层析的分离方法常用展层缸或试管做层析容器、滤纸条做固定相、四氯化碳作展层剂、丙酮作提取液的纸层析分离叶绿体色素的方法，其缺点是展层缸或试管有一定高度，滤纸条置入困难，易碰到容器内壁影响层析效果；此外滤纸条较长层析费时、处理繁琐，用高毒有机溶剂四氯化碳做展层剂，不仅分离色带界限不清而且污染环境，同时单一丙酮作提取剂也是对人体有害。

发明内容

本发明的目的在于提供一种叶绿体色素纸层析分离方法，该方法设计了一种圆形滤纸作固定相、石油醚—丙酮作展层剂、丙酮—乙醇作提取剂。该分离方法分离效果好，省时省力而且减少环境污染和毒性。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种叶绿体色素纸层析分离方法，所述方法包括以下过程：

a.提取色素：将洗净的新鲜植物叶片去除粗大叶脉，剪成碎块，放入研钵中，加入提取剂和碳酸钙，研磨成匀浆后再加入提取剂，然后用过滤，过滤后的残渣再用提取剂洗涤数次，直至洗涤残渣后过滤出的提取剂无色为止，上述多次用提取剂洗涤植物叶片残渣后过滤出的液体即色素提取液，放暗处备用； 

b.制作圆柱滤纸：剪一张长方形滤纸，将滤纸长边一侧剪成许多窗帘状细条，把长方形滤纸卷成一根小圆柱，长方形滤纸中的窗帘状细条置于一端，并将窗帘状细条向外散开，形成底座，上述由上部为圆柱和下部为窗帘状细条构成的滤纸称为圆柱滤纸；

c、分离色素：取一张圆形滤纸，用滴管吸取植物色素提取液小心滴在滤纸的中央，滴两到三滴，将其用电吹风吹干备用；用滴管吸取植物色素提取液滴在滤纸的中央的动作称为点样；将石油醚—丙酮展层剂倒入培养皿，铺满皿底；

d.点样干燥后的圆形滤纸，在其色素的中央制一个小孔，将做好的圆柱滤纸的上端插入其中，圆柱滤纸底座即窗帘状细条浸入培养皿中的展层剂，点样的圆形滤纸放在培养皿上，层析即开始进行；培养皿中的展层剂沿着圆柱滤纸向上扩散，当展层剂扩散到圆形滤纸中的点样色素时，展层剂便在圆形滤纸上扩散，点样色素随展层剂的扩散得以分离；当展层剂扩散到圆形滤纸边缘附近时，点样色素全部分开，在圆形滤纸上形成四条同心圆形的色素带，至此层析结束。

所述的一种叶绿体色素纸层析分离方法，所述提取剂为丙酮—乙醇1:1，v/v混合液。

所述的一种叶绿体色素纸层析分离方法，所述展层剂石油醚—丙酮的比例为10:1，v/v。

本发明的优点与效果是：

本发明提供了一种叶绿体色素纸层析的分离方法，用培养皿作层析容器，方便易得，减少投资；圆形滤纸代替长形滤纸处理方法简单，扩散速度快，省时省力；丙酮—乙醇（1:1，v/v）混合液做提取剂不仅提取效果好，而且降低了由使用单一丙酮作提取剂产生的毒性；与四氯化碳作展层剂相比，使用石油醚—丙酮（10:1，v/v）混合液作展层剂分离出的四条色素带颜色纯正、边缘整齐，无锯齿状，色带间界限清晰，分离效果好；同时也减少了四氯化碳高毒带来的污染。

该方法在提高层析分离效果，如色带颜色纯正、色带边缘清晰的同时，降低层析容器投资（节省投资60%）, 减少层析滤纸处理繁琐以及丙酮做提取剂、四氯化碳做展层剂所产生的毒性污染。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明作进一步详述。

本发明首先制备色素提取液，于避光处保存备用。然后，制作圆柱滤纸。最后，进行点样，将点样色素用电吹风吹干后，在其中央制一小孔，把圆柱滤纸一端插入其中，另一端即底座端置于装有展层剂的培养皿内，将点样的圆形滤纸置于培养皿上，此时层析开始进行。待四条色带（胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a和叶绿素b）均分离出即可。

实施例：

1.色素的提取

将洗净的新鲜植物叶片去除粗大叶脉，称取2g剪成碎块，放入研钵中，向研钵中加入5ml提取剂和少许碳酸钙，研磨成匀浆后再加入提取剂15ml，然后用纱布过滤，过滤后的残渣再用提取剂洗涤数次，直至洗涤残渣后过滤出的提取剂无色为止，上述多次用提取剂洗涤植物叶片残渣后过滤出的液体即色素提取液，放暗处备用；所述的提取剂为丙酮—乙醇（1:1，v/v）混合液。

2. 圆柱滤纸的制作

剪一张长约5cm，宽约3cm的长方形滤纸，之后将长方形滤纸长边一侧剪成许多窗帘状细条，每个细条长约为1cm、宽约为2mm，把长方形滤纸卷成一根小圆柱，长方形滤纸中的窗帘状细条置于一端，并将窗帘状细条向外散开，形成底座，上述由上部为圆柱和下部为窗帘状细条构成的滤纸称为圆柱滤纸。

3、色素的分离

取一张圆形滤纸，用滴管吸取植物色素提取液小心滴在滤纸的中央，滴两到三滴，将其用电吹风吹干备用；这样用滴管吸取植物色素提取液滴在滤纸的中央的动作称为点样；将石油醚—丙酮（10:1，v/v）展层剂倒入培养皿，铺满皿底。

4.点样干燥后的圆形滤纸，在其色素的中央制一个小孔，将做好的圆柱滤纸的上端插入其中，圆柱滤纸底座即窗帘状细条浸入培养皿中的展层剂，点样的圆形滤纸放在培养皿上，层析即开始进行。培养皿中的展层剂沿着圆柱滤纸向上扩散，当展层剂扩散到圆形滤纸中的点样色素时，展层剂便在圆形滤纸上扩散，点样色素随展层剂的扩散得以分离；当展层剂扩散到圆形滤纸边缘附近时，点样色素全部分开，在圆形滤纸上形成四条同心圆形的色素带，至此层析结束。

Claims (3)

1.一种叶绿体色素纸层析分离方法，其特征在于，所述方法包括以下过程：

a.提取色素：将洗净的新鲜植物叶片去除粗大叶脉，剪成碎块，放入研钵中，加入提取剂和碳酸钙，研磨成匀浆后再加入提取剂，然后用过滤，过滤后的残渣再用提取剂洗涤数次，直至洗涤残渣后过滤出的提取剂无色为止，上述多次用提取剂洗涤植物叶片残渣后过滤出的液体即色素提取液，放暗处备用； 

b.制作圆柱滤纸：剪一张长方形滤纸，将滤纸长边一侧剪成许多窗帘状细条，把长方形滤纸卷成一根小圆柱，长方形滤纸中的窗帘状细条置于一端，并将窗帘状细条向外散开，形成底座，上述由上部为圆柱和下部为窗帘状细条构成的滤纸称为圆柱滤纸；

c、分离色素：取一张圆形滤纸，用滴管吸取植物色素提取液小心滴在滤纸的中央，滴两到三滴，将其用电吹风吹干备用；用滴管吸取植物色素提取液滴在滤纸的中央的动作称为点样；将石油醚—丙酮展层剂倒入培养皿，铺满皿底；

d.点样干燥后的圆形滤纸，在其色素的中央制一个小孔，将做好的圆柱滤纸的上端插入其中，圆柱滤纸底座即窗帘状细条浸入培养皿中的展层剂，点样的圆形滤纸放在培养皿上，层析即开始进行；培养皿中的展层剂沿着圆柱滤纸向上扩散，当展层剂扩散到圆形滤纸中的点样色素时，展层剂便在圆形滤纸上扩散，点样色素随展层剂的扩散得以分离；当展层剂扩散到圆形滤纸边缘附近时，点样色素全部分开，在圆形滤纸上形成四条同心圆形的色素带，至此层析结束。

2.根据权利要求1所述的一种叶绿体色素纸层析分离方法，其特征在于，所述提取剂为丙酮—乙醇1:1，v/v混合液。

3.根据权利要求1所述的一种叶绿体色素纸层析分离方法，其特征在于，所述展层剂石油醚—丙酮的比例为10:1，v/v。