CN104069174B

CN104069174B - 一种药物组合物及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN104069174B
Application number: CN201410321445.XA
Authority: CN
Inventors: 李振宇; 田园; 李振旭; 马春梅
Original assignee: Heilongjiang University of Chinese Medicine
Current assignee: Heilongjiang University of Chinese Medicine
Priority date: 2014-07-08
Filing date: 2014-07-08
Publication date: 2017-08-25
Anticipated expiration: 2034-07-08
Also published as: CN104069174A

Abstract

本发明涉及一种用于治疗心血管疾病的药物组合物及其制备方法和用途，特别是涉及一种以中药药材为原料制成的治疗心血管疾病的药物组合物。本发明的组合物由以下重量份配比的原料药制成：丹参20～40，三七5～15，刺五加10～30。在本发明进一步优选的实施方案中，所述组合物的重量份配比为：丹参30，三七10，刺五加20；丹参30，三七15，刺五加25或者丹参30，三七20，刺五加25。

Description

一种药物组合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和用途，特别是涉及一种以中药药材为原料制成的治疗心血管疾病的药物组合物及其制备方法和用途。

背景技术

根据我国流行病学调查，近五十年来不论在农村或城市，心脑血管疾病的发病率和死亡率均呈上升趋势。50-60年代我国人口死亡原因中心血管病和脑血管病分别居第五六位，1970年以后则分别上升至第二三位，心脑血管疾病死亡者已占全部疾病死因第一位。我国因心脑血管疾病死亡者占总死亡人口的份配比，已由1957年的12.07％上升到2001年的42.6％，每年死于心脑血管疾病者达200万，另有部分患者虽经抢救而幸存，但多数留下残疾，生活不能自理，给亲属及社会造成严重负担。心脑血管疾病也是西方国家人群死亡的主要原因。根据目前已有的流行病学资料推测，疾病的发展趋势是：到2020年，人类疾病死因排列顺序将有重大变化，但是冠心病和脑卒中仍将是人类死因的第一位和第二位。到那时，估算全球冠心病死亡人数将自1990年的630万增至1100万；脑卒中自440万增至770万。30年中循环系统死因构成将增高59.6％，冠心病和脑卒中分别增高74.6％和75％。这些资料充分说明，心脑血管疾病不仅是危害人类健康的主要疾病，更是目前和未来20年内人类致死、致残的“头号杀手”。

在心脑血管疾病的治疗药物中，中西药的应用各有侧重，中药以其副作用小的优势也占据较大的市场份额。例如：由人参、党参、当归、丹参、红花组成的益气活血方[祝维峰，山东中医学院学报，1994，18(5)]；由生脉饮加丹参、人参、三七、红花、元胡、山楂组成的丹芪生脉饮，[陈宇春，光明中医，1999，14(5)]；由人参、党参、麦冬、丹参、川芎、降香组成的冠心病基本方[王金荣等，辽宁中医杂志，2001，28(8)]；由丹参、延胡索、人参、三七、川芎、当归组成的舒心通脉片[王秀娥等，山东中医杂志，1997，16(8)]；等等。但以上临床处方和中成药均有一定的不足之处，或偏于益气，或偏于通阳，或偏于活血，临床上未得到全面推广。而且剂型多为传统的普通片剂、胶囊等，生产工艺较落后，有效成分含量低，无质量控制标准，因此，利用新技术开发新的治疗心血管疾病特别是冠心病的中药是广大医药工作者努力的目标。

三参冲剂，由丹参、刺五加和三七组成，三者之间的重量配比依次为25:1:1。刺五加又名“五加参”，三七又名“三七参”，二者与君药丹参组方，得名三参颗粒。临床用于冠心病、心绞痛、中风后遗症等。临床应用三十多年，疗效确切。但是其具有制备工艺落后，质量不可控的缺点。

专利文献CN101085008A公开了一种含刺五加治疗心血管疾病的组合物及其制剂，其重量配比为丹参20～97，三七2～79、刺五加3～35。

综合现有技术中的专利文献，关于三参中药组合物的配比不合理，并不能充分发挥三参中三味中药在治疗心血管疾病中的协同作用，而中药组合物的协同作用最大化，从而发挥中药组合物的最大疗效是中药领域技术人员一直追求的目标。

发明内容

本发明的目的之一在于克服现有技术的不足，提供一种治疗心血管疾病的药物组合物。

本发明的组合物由以下重量份配比的原料药制成：丹参20～40，三七5～15，刺五加10～30。

在本发明进一步地实施方案中，所述组合物由以下重量份配比的原料药制成：丹参30，三七10，刺五加20。

在本发明另一个实施方案中，所述组合物由以下重量份配比的原料药制成：丹参30，三七15，刺五加25。

在本发明另一个实施方案中，所述组合物由以下重量份配比的原料药制成：丹参30，三七20，刺五加25。

本发明的另一个目的是提供一种制备所述药物组合物的方法，具体步骤如下：

（1）取相应重量份的丹参药材，用6-10倍量的70%-95%的乙醇回流提取1.5小时，提取2次，滤过，减压浓缩，得丹参醇提浸膏；将滤渣以6-10倍量的水煎煮1小时，提取2次，滤过，减压浓缩，得丹参水提浸膏；

（2）取相应重量份的刺五加和三七，用70-90%乙醇加热回流提取2小时，提取2次，滤过，减压浓缩，得刺五加和三七的醇提浸膏，

（3）将步骤1和2中的浸膏合并，减压干燥，混匀即得所述药物组合物。

进一步地，在步骤1中，丹参醇提条件为8倍量的90%的乙醇提取，丹参水提条件为8倍量的水煎煮，在步骤2中，乙醇的浓度为75%。

本发明的再一个目的是提供上述药物组合物在制备治疗心血管疾病药物中的用途。

本发明通过大量试验研究对传统的三参冲剂进行了优化，极大的提高了药效；有极大的临床应用价值，对改进中药复方的协同作用给出了一定的启示作用。

具体实施方式

下面将进一步的详细说明本发明。需要指出的是，以下说明仅仅是对本发明要求保护的技术方案的举例说明，并非对这些技术方案的任何限制。本发明的保护范围以所附权利要求书记载的内容为准。

实施例1

（1）取30kg的丹参药材，用8倍量的90%的乙醇回流提取1.5小时，提取2次，滤过，减压浓缩，得丹参醇提浸膏；将滤渣以8倍量的水煎煮1小时，提取2次，滤过，减压浓缩，得丹参水提浸膏；

（2）取20kg的刺五加和10kg三七，用75%乙醇加热回流提取2小时，提取2次，滤过，减压浓缩，得刺五加和三七的醇提浸膏，

实施例2-3

除中药重量配比不同外，其他制备方法均同实施例1，具体重量配比见下表：

试验例1

（1）动物心肌缺血模型的复制及给药方法

雄性SD大鼠，体重250±50g，每组10只。假手术组：灌服等量的水溶液；模型组：灌服等量的水溶液；各组动物均按体重灌胃给予受试药物(5ml/kg)。每天1次，共给药7次。在末次给药后30分钟，1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，将大鼠仰位固定于自制鼠板上。胸部剪毛、备皮，将心电图电极针埋在左下肢及右上肢皮下，于左侧剪断第四肋，用血管钳沿第四肋钝性分离肋间肌3cm长，打开胸腔,撑开肋骨，将心脏挤出胸腔。在左心耳下方2mm处用眼科针6-0丝线穿线，进针深度约1-1.5mm，宽约2-3mm，连同心大静脉一起结扎冠状动脉左前降支(假手术组只穿线不结扎)。结扎后把心脏迅速放回胸腔。心电图显示ST段显著抬高或异常Q波时;即表明急性心肌缺血造模成功。迅速缝合胸壁, 停止人工呼吸, 清除呼吸道分泌物, 缝合关闭气管，24 h后处死。结扎10 min心电图ST段没有变化者淘汰。

心肌缺血梗死面积百分比的测定：术后24 h，将麻醉后的大鼠打开胸腔，迅速取下心脏，置-20 ℃冷冻20 min，在结扎线以下将左心室切成厚度为2 mm的4-5片，放入1%TTC溶液中，在37 ℃水浴、避光条件下染色15 min，梗死区不着色（白色），非梗死区染成红色，1%多聚甲醛固定12 h，按照公式1用Image-J(NIH)软件计算梗死区面积百分比。心肌梗死面积百分比（S）% = 梗死区面积/左心室总面积×100%。

左室血流动力学指标测定：术后24 h，再次将大鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠（50 mg/kg）麻醉，然后静脉推注肝素全身抗凝，手术分离右颈总动脉后应用生理记录仪检测心脏血流动力学参数。插管至左心室记录压力曲线，记录左室最大收缩（+）和舒张（－）速率（±dp/dt max）。

（2）具体结果如下：

在所有试验例中，为了说明本发明的效果，特设置四个对比例，具体如下：

对比例1：丹参：三七：刺五加的重量配比为30:5:15，制备方法同实施例1；

对比例2：丹参：三七：刺五加的重量配比为30:25:30，制备方法同实施例1；

对比例3：参见专利CN101085008A中的实施例2；丹参：三七：刺五加的重量配比为20:2:3；

对比例4：参见《黑龙江省医院制剂规范》中三参冲剂，丹参：三七：刺五加的重量配比为25:1:1；

心肌缺血梗死面积：

*或**为药物组与模型组相比，T检验P<0.05或0.01，T检验P<0.05或0.01。

左室血流动力学指标：

*或**为药物组与模型组相比，T检验P<0.05或0.01， T检验P<0.05或0.01。

试验例2 对大鼠心肌细胞的影响

（1）大鼠心肌细胞原代培养方法：取出生24h内的SD乳鼠25只，心脏全部取出后，剔除心脏周边的血凝及纤维组织，消化液（0.125 %胰酶+0.05 %Ⅱ型胶原酶）消化，收集细胞，过滤除去未消化组织，接种于培养瓶中，置细胞培养箱（37 ℃，95 %O2+5 %CO2）中培养，用差速贴壁法去除纤维细胞，纯化心肌细胞。2 h后，吸出尚未贴壁的细胞悬液吹匀，调整密度至1×10^-6植入24孔板中（每孔500 μl），使细胞均匀分布，加入Brdu至0.1 mmol/L，24 h换液一次，以后每3-4 d换液一次。定期在倒置显微镜下观察细胞生长的情况，培养48 h后，随机分组进行实验。

将细胞以1×10⁶个/ml的密度接种于24孔板中，每孔500 μl。37℃、5 %CO₂饱和湿度条件下培养。原代心肌细胞培养72 h后，正常对照组和模型组以500 μl DMEM培养液正常培养，各给药组加入含10 %药液的DMEM培养液，孵育6 h后，用冰冷PBS冲洗2遍，模型组及给药组每孔加入500 μl经95 % N2-5 % O₂饱和的Tyrode液，然后将培养板放入一密闭容器内，持续通以混合气体（95 % N2-5 % O₂）30 min后密闭容器，放入孵箱缺氧12 h，模拟在体缺血模型。正常组洗净旧培养基后加入含10 g/L葡萄糖的Tyrode液500 μl，CO2培养箱中培养12 h。

每孔加入终浓度为0.5 mg/ml MTT无血清DMEM培养液500 μl培养4 h，然后倾去上清液，加入500 μl的DMSO，振摇10 min，用全自动酶标仪测定570nm处的吸光度值（OD570nm），用于定量细胞存活率。

将处理后的培养板每孔吸取200 μl培养上清液，根据LDH检测试剂盒说明，检测LDH活性。

（2）具体结果如下：

各单味药对缺氧缺糖的大鼠心肌细胞的影响，将丹参提取物为将丹参醇提和水提浸膏混合即得，刺五加和三七分别提取即得两味药的提取物，各提取物的制备方法同实施例1.

细胞存活率（MTT）及LDH活性：

分组	LDH（U/L）	细胞活性（%）
			假手术组	21.89±4.24	100
模型组	110.68±6.92 ^##	45.93±3.21 ^##
			丹参（15 mg/L）	103.27±5.67	50.95±3.71
丹参（30mg/L）	89.76±4.83	61.28±3.84
			丹参（45mg/ L）	75.72±4.39	67.64±4.22
三七（15 mg/L）	105.52±5.12	48.86±3.84
			三七（30 mg/L）	85.91±4.85	59.92±3.49
三七（45mg/ L）	76.76±5.33	64.64±4.41
			刺五加（15 mg/L）	99.49±4.85	48.56±3.36
刺五加（30 mg/L）	85.79±5.23	57.83±3.73
			刺五加（45mg/ L）	73.68±4.69	62.64±4.31
实施例1（30 mg/L）	44.59±5.82	89.37±3.94
			实施例2（30 mg/L）	48.39±4.87	85.75±4.18
实施例3（30 mg/L）	46.73±4.72	84.48±4.67
			对比例1（30 mg/L）	67.68±3.52	73.71±5.11
对比例2（30 mg/L）	65.49±4.84	70.27±4.49
			对比例3（30 mg/L）	70.19±4.62	67.46±4.39
对比例4（30 mg/L）	66.27±4.39	69.51±4.61

本发明内容仅仅举例说明了要求保护的一些具体实施方案，其中一个或更多个技术方案中所记载的技术特征可以与任意的一个或多个技术方案相组合，这些经组合而得到的技术方案也在本申请保护范围内，就像这些经组合而得到的技术方案已经在本发明公开内容中具体记载一样。

Claims

1.一种治疗心血管疾病的药物组合物的制备方法，其特征在于，所述药物组合物由以下重量份配比的原料药制成：丹参30，三七10，刺五加20，所述制备方法包括如下步骤：

（2）取相应重量份的刺五加和三七，用70-90%乙醇加热回流提取2小时，提取2次，滤过，减压浓缩，得刺五加和三七的醇提浸膏；

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤1中，丹参醇提条件为8倍量的90%的乙醇提取，丹参水提条件为8倍量的水煎煮。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤2中，乙醇的浓度为75%。

4.一种权利要求1-3所述的制备方法制备得到的药物组合物在制备用于治疗心血管疾病的药物中的用途。