CN104055732A

CN104055732A - 卡贝缩宫素注射液和制法

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Publication number: CN104055732A
Application number: CN201410328600.0A
Authority: CN
Inventors: 吴国庆; 方专; 江威; 王敬; 张莲莲; 余茹; 苟治君; 赵东明
Original assignee: CHENGDU TIANTAISHAN PHARMACEUTICAL Co Ltd
Current assignee: CHENGDU TIANTAISHAN PHARMACEUTICAL CO LTD
Priority date: 2014-07-10
Filing date: 2014-07-10
Publication date: 2014-09-24
Anticipated expiration: 2034-07-10
Also published as: CN104055732B

Abstract

本发明属于医药技术领域，涉及一种缩宫素类似物，特别是涉及一种卡贝缩宫素，更特别地涉及一种具有优良制药性能的卡贝缩宫素注射液。本发明卡贝缩宫素其可用于选择性硬膜外或腰麻下剖腹产术后，以预防子宫收缩乏力和产后出血。本发明还涉及卡贝缩宫素注射液的制备方法。进一步地，本发明还涉及卡贝缩宫素注射液的医药用途。特别地，本发明涉及的卡贝缩宫素注射液，其中包含卡贝缩宫素、糖类和注射用水。

Description

卡贝缩宫素注射液和制法

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种缩宫素类似物，特别是涉及一种卡贝缩宫素，更特别地涉及一种具有优良制药性能的卡贝缩宫素注射液。本发明卡贝缩宫素其可用于选择性硬膜外或腰麻下剖腹产术后，以预防子宫收缩乏力和产后出血。本发明还涉及卡贝缩宫素注射液的制备方法。进一步地，本发明还涉及卡贝缩宫素注射液的医药用途。

背景技术

卡贝缩宫素(Carbetocin)，分子式C45H69N11O12S，分子量988.16，CAS登记号37025-55-1，化学名称：去氨-2-氧-甲基酪氨酸-1-κ缩宫素，其化学结构式：

卡贝缩宫素是一种合成的具有激动剂性质的长效催产素九肽类似物。硬膜外或腰麻下剖腹产术后可以立即单剂量静脉给药，以预防子宫张力不足和产后出血。

卡贝缩宫素的临床和药理特性与天然产生的催产素类似。像催产素一样，卡贝缩宫素与子宫平滑肌的催产素受体结合，引起子宫的节律性收缩，在原有的收缩基础上，增加其频率和增加子宫张力。在非妊娠状态下，子宫的催产素受体含量很低，在妊娠期间增加，分娩时达高峰。因此卡贝缩宫素对非妊娠的子宫没有作用，但是对妊娠的子宫和刚生产的子宫具有有效的子宫收缩作用。

不论是静脉注射还是肌肉注射卡贝缩宫素后，子宫迅速收缩，可在2分钟内达到一个明确强度。单剂量静脉注射卡贝缩宫素对子宫的活性作用可持续大约1个小时，因此足以预防刚生产后的产后出血。产后给予卡贝缩宫素后，在收缩的频率与幅度方面都比催产素要长，并且对有出血倾向、需额外使用缩宫素者，卡贝缩宫素耐受性好，与缩宫素一样有效甚至更有效。

目前临床常用的促进子宫缩收药物麦角新碱，会导致恶心、呕吐、高血压和冠脉痉挛等。卡贝缩宫素是一种长效的类催产素药物。与麦角新碱相比，使用卡贝缩宫素在预防阴道分娩妇女的产后出血方面同样有效，并且恶心、呕吐、高血压的发生比例显著降低。因此卡贝缩宫素在临床上有很好的应用前景，具有很高的开发价值。

产后出血是全球孕妇患病和死亡的最主要原因，每年导致125000名孕妇死亡及2000万名妇女患病，也是目前中国孕产妇死亡的首位原因，其发病率占分娩总数的2％～3％(徐玲等，《实用医学杂志》，2007年第23卷第18期，2940～2941)。近年来随着剖宫产率上升，手术并发症越来越被重视，剖宫产术产后出血率高达19.8％(高素云等，《世界中西医结合杂志》，2009年第4卷第9期，665～666)。

引起产后出血的主要原因为宫缩乏力，占70％～80％(徐玲等，《实用医学杂志》，2007年第23卷第18期，2940～2941)。降低发病率及病死率的关键在于及早预防产后子宫收缩乏力性出血。剖宫产手术中由于宫缩乏力、子宫切口撕裂损伤宫旁血管丛、胎盘粘连或植入、凝血功能异常等导致大出血，是剖宫产手术最危险的并发症，如何有效控制术中出血量是产科医生面临的问题(于爱芳，《实用临床医药杂志》，2009年第13卷第9期，82～83)。

目前产后出血的治疗方法有：按摩子宫，子宫收缩药物的应用，如缩宫素、麦角新碱、米索、卡孕栓，以及宫腔纱条填塞法，但有时效果不佳，需给予结扎或栓塞子宫动脉或髂内动脉，甚至子宫次全切或子宫切除术(徐玲等，《实用医学杂志》，2007年第23卷第18期，2940～2941)。缩宫素又名催产素，是最古老、临床使用最广泛的促宫缩剂，但其半衰期仅4～10min，体内作用时间短，需持续静滴或多次重复给药。当体内缩宫素受体位点饱和后，增加药量不再产生促宫缩作用，收缩子宫下段作用不明显，大量使用可致水中毒(于爱芳，《实用临床医药杂志》，2009年第13卷第9期，82～83)，部分患者对缩宫素不敏感，效果较差。

子宫肌瘤是女性生殖器官肿瘤中最常见的良性肿瘤，全子宫切除是传统的手术方式。腹腔镜技术是近年发展的微创治疗手段，可为女性保留子宫，但由于子宫的血流丰富，出血多仍是限制其应用的关键，甚至导致中转开腹。常用的促进子宫平滑肌收缩的方法是在子宫肌层注射催产素，有时术中需补充静脉滴注催产素，但收效甚微(沈怡等，《中国妇幼保健》，2010年第25卷，414～416)。

卡贝缩宫素(Carbetocin)，即[1-脱氨基-1-单羟基(2-氧-甲基酪氨酸)]催产素，是近年来新兴的长效催产素受体激动剂，是一种人工合成的缩宫素类似物，具有起效迅速、作用强效持久、使用便捷等特点，适合抢救用药。临床通常静脉给药，静脉注射后2分钟即产生促宫缩作用，对子宫体及子宫下段均有强烈收缩作用，半衰期40～50分钟，是缩宫素的10倍。静推后作用可持续60～120分钟(于爱芳，《实用临床医药杂志》，2009年第13卷第9期，82～83)。卡贝缩宫素可以在体内引起与天然激素相似的生理活性，使子宫收缩同步化、规律化和收缩增强并且延长收缩时间。在预防产后出血方面得到了一定范围的应用并收到了良好的效果(沈怡等，《中国妇幼保健》，2010年第25卷，414～416)。在高危病例预防性用药效果更好，明显降低产后出血，减少术后发病率，是更好的用药模式。产后静脉滴注缩宫素的同时静脉注射或子宫肌层、臀部肌内注射卡贝缩宫素可更有效预防产后出血，且无明显不良反应，值得基层医院推广(黄淑华等，《临床合理用药》，2010年5月第3卷第9期，83～84)。

无论是腹腔镜下子宫肌瘤剔除术还是开腹子宫肌瘤剔除术术中应用卡贝缩宫素均可有效促进子宫收缩，减少术中出血量(沈怡等，《中国妇幼保健》，2010年第25卷，414～416)。徐玲等的研究表明卡贝缩宫素用于预防及治疗产后出血具有显著疗效，产后出血的发生率及产后2、24小时平均出血量均明显少于对照组，治疗性用药组93％有效(徐玲等，《实用医学杂志》，2007年第23卷第18期，2940～2941)。高素云等进行了一项比较缩宫素和卡贝缩宫素治疗效果的临床研究，对照组16例有效，无效7例；治疗组20例有效，无效2例。观察组产后出血发生率、术中及产后24小时出血量均明显优于对照组。卡贝缩宫素用于预防及治疗产后出血有显著疗效(高素云等，《世界中西医结合杂志》，2009年第4卷第9期，665～666)。郑涛等进行了一项卡贝缩宫素预防妊娠合并子宫肌瘤剖宫产后出血的随机对照临床研究，结果显示卡贝缩宫素能加强和保持合并子宫肌瘤的妊娠子宫的收缩，减少产后出血，可选择做为预防产后出血的一种新的药物治疗措施(郑涛等，《中国新药与临床杂志》，2009年12月，第28卷第12期，925～928)。王静芳比较了卡贝缩宫素和缩宫素预防妇女剖宫产术后出血的效果，卡贝缩宫素组产妇术中、产后2小时、产后24小时出血量均显著小于缩宫素组；缩宫素组产后出血发生率为12％，卡贝缩宫素组产后出血发生率为4％，卡贝缩宫素组产后出血的发生率低于缩宫素组(王静芳，《实用医技杂志》，2010年1月第17卷第1期，52～53)。然而由于价格贵，卡贝缩宫素目前还没有常规用药(于爱芳，《实用临床医药杂志》，2009年第13卷第9期，82～83)。

卡贝缩宫素用于选择性硬膜外或腰麻下剖腹产术后，以预防子宫收缩乏力和产后出血。临床上使用的该药品是溶液型注射液，包装规格是1ml:100微克，用法用量是：单剂量静脉注射100微克(1毫升)卡贝缩宫素，只有在硬膜外或腰麻醉下剖腹产术完成婴儿娩出后，缓慢地在1分钟内一次性给予。卡贝缩宫素可以在胎盘娩出前或娩出后给予，或遵医嘱。

卡贝缩宫素的主要药理作用如下：卡贝缩宫素是一种合成的具有激动剂性质的长效催产素九肽类似物。硬膜外或腰麻下剖腹产术后可以立即单剂量静脉给药，以预防子宫张力不足和产后出血。卡贝缩宫素的临床和药理特性与天然产生的催产素类似。像催产素一样，卡贝缩宫素与子宫平滑肌的催产素受体结合，引起子宫的节律性收缩，在原有的收缩基础上，增加其频率和增加子宫张力。在非妊娠状态下，子宫的催产素受体含量很低，在妊娠期间增加，分娩时达高峰。因此卡贝缩宫素对非妊娠的子宫没有作用，但是对妊娠的子宫和刚生产的子宫具有有效的子宫收缩作用。不论是静脉注射还是肌肉注射卡贝缩宫素后，子宫迅速收缩，可在2分钟内达到一个明确强度。单剂量静脉注射卡贝缩宫素对子宫的活性作用可持续大约1个小时，因此足以预防刚生产后的产后出血。产后给予卡贝缩宫素后，在收缩的频率与幅度方面都比催产素为长。研究表明，当硬膜外或腰麻下剖腹产术后立即单剂量静脉给予卡贝缩宫素100微克，在预防子宫张力不足和减少产后出血方面，卡贝缩宫素明显优于安慰剂。在产后的早期给予卡贝缩宫素也可以促进子宫的复旧。

卡贝缩宫素的主要毒理性质：在急性毒性研究中，大鼠静脉注射10毫克/千克考察LD50。记录所有的动物的临床表现(精神不振、耸背姿势、立毛、呼吸急促和运动不协调)。根据LD50的数值，100克大鼠给药剂量是1000微克，是人类使用剂量的10倍。20只大鼠分四组，每天静脉给卡贝缩宫素1.0毫克/千克。28天后没有发生于治疗有关的死亡或临床表现。16只雌性猎犬每天静脉给予卡贝缩宫素1.0毫克/千克/天，28天后，也没有死亡和与给药有关的临床征象。血液学、临床生化或尿液分析也没有出现与治疗相关的变化。卡贝缩宫素在致突变实验中没有发现致突变作用。

卡贝缩宫素的药代动力学性质为：对非妊娠妇女静脉给予卡贝缩宫素400微克后，其分布和清除半衰期分别为5.5±1.6分钟和41±11.9分钟，说明这些参数没有剂量依赖性。卡贝缩宫素从体内(全身和肾脏)的清除和分布容积没有剂量依赖，但是Cmax和AUC0-∞显示有随剂量增加而呈比例的变化。约0.7％的卡贝缩宫素以原型通过肾脏清除，说明它象催产素一样，主要由非肾脏途径清除。

目前临床上使用的卡贝缩宫素为1ml:100μg的小容量注射液，典型的产品如卡贝缩宫素注射液(Carbetocin injection，商品名巧特欣)，由加拿大Ferring Inc.进口(注册证号：H20110537)或在国内生产(国药准字H20093500)。该注射液不能热压灭菌，通常是以过滤除菌的方式灭菌，不能高温贮藏，也不能冷冻，例如该药品说明书中标注的贮藏条件为“2-8℃保存，不能冻存”，据信使用安瓿瓶密封在冰箱温度(2-8℃)能稳定24月。

尽管现有技术有诸多制备卡贝缩宫素药物组合物特别是其注射液的方法，然而由于卡贝缩宫素的化学性质敏感性，造成其品质要求苛刻，例如杂质控制要求严格和/或含量控制要求高等。因此，本领域技术人员仍然期待有新的方法获得具有优良品质的卡贝缩宫素药物组合物例如其注射液。

发明内容

尽管现有技术有诸多制备卡贝缩宫素药物组合物特别是其注射液的方法，然而由于卡贝缩宫素的化学性质敏感性，造成其品质要求苛刻，例如杂质控制要求严格和/或含量控制要求高等。因此，本发明的目的在于提供一种新的方法，以期获得具有优良品质的卡贝缩宫素药物组合物例如其注射液。

为此，本发明第一方面涉及一种卡贝缩宫素注射液，其中包含卡贝缩宫素、糖类和注射用水。

根据本发明第一方面任一实施方案的卡贝缩宫素注射液，其每1ml中卡贝缩宫素的量为50～150μg，例如为75～125μg，例如为90～110μg，例如约为100μg。

根据本发明第一方面任一实施方案的卡贝缩宫素注射液，其中所述的糖类选自：甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇、右旋糖苷、麦芽糖醇、果糖及其组合。

根据本发明第一方面任一实施方案的卡贝缩宫素注射液，其中所述的右旋糖苷是分子量为10000～2000000的右旋糖苷。在一个实施方案中，其中所述的右旋糖苷选自右旋糖苷10、右旋糖苷20、右旋糖苷40、右旋糖苷70、右旋糖苷110、或其组合。

根据本发明第一方面任一实施方案的卡贝缩宫素注射液，其每1ml中糖类的量为1～50mg，例如为2～40mg，例如为5～25mg，例如为5～20mg。已经出人意料地发现，在卡贝缩宫素注射液中添加本发明所述糖类可以非常有益地改善注射液的稳定性，特别是例如改善产品的氧化稳定性。

根据本发明第一方面任一实施方案的卡贝缩宫素注射液，其中所述水是作为注射液的溶媒存在的，其量通常是使得注射液体积扩增到规定值，特别是对于以水为溶媒的注射液，因此本领域技术人员在描述注注射液中的水的量时，通常不作具体描述，或者仅仅是指出其量是适量，或者指出其量是“余量”，或者指出其量是“适量，加至1ml”等类似表述。

根据本发明第一方面任一实施方案的卡贝缩宫素注射液，其中还可以包括pH调节剂。

根据本发明第一方面任一实施方案的卡贝缩宫素注射液，其中还包括pH调节剂，其选自盐酸、醋酸、磷酸、枸橼酸、酒石酸、氢氧化钠、三乙胺、精氨酸等。

根据本发明第一方面任一实施方案的卡贝缩宫素注射液，其中所述的pH调节剂的用量是使得该注射液的pH值达到3.0～6.0，例如为3.5～6.0，例如为4.0～5.5。

根据本发明第一方面任一实施方案的卡贝缩宫素注射液，其中还可以包括抗氧剂。在一个实施方案中，所述抗氧剂选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、亚硫酸钠、没食子酸丙酯、谷胱甘肽、硫脲、巯基乙酸、维生素E等。在一个实施方案中，所述卡贝缩宫素注射液每1ml中抗氧剂的量为0～10mg，0.1～10mg，例如为0.1～5mg，例如为0.1～5mg，例如为0.1～2mg。

根据本发明第一方面任一实施方案的卡贝缩宫素注射液，其中还可以包含防腐剂。在一个实施方案中，所述防腐剂选自尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、尼泊金丁酯、苯甲醇、三氯叔丁醇及其组合。在一个实施方案中，所述卡贝缩宫素注射液每1ml中防腐剂的量为0～10mg，例如为0.1～10mg，例如为0.2～7.5mg，例如为0.5～5mg。

根据本发明第一方面任一实施方案的卡贝缩宫素注射液，其中还可以包含磷脂。在一个实施方案中，所述磷脂是选自下列中的一种或多种：大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、脑磷脂、肌酐、肌醇磷脂、溶血磷脂、磷脂酸、磷脂酰甘油、硬脂酰/棕榈酰/油酰磷脂酰胆碱、硬脂酰/棕榈酰/油酰磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、氢化磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油和磷脂酰肌醇、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、油酰磷脂酰胆碱。

在一个实施方案中，其中所述磷脂是选自天然磷脂或合成磷脂中的一种或多种。在一个实施方案中，其中所述天然磷脂是选自下列中的一种或多种：大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、脑磷脂、肌酐、肌醇磷脂、溶血磷脂、磷脂酸、磷脂酰甘油。在一个实施方案中，其中所述合成磷脂是选自下列中的一种或多种：硬脂酰/棕榈酰/油酰磷脂酰胆碱，或硬脂酰/棕榈酰/油酰磷脂酰乙醇胺及其衍生物。在一个实施方案中，其中所述合成磷脂是选自下列中的一种或多种：硬脂酰和/或棕榈酰和/或油酰磷脂酰胆碱，或硬脂酰和/或棕榈酰和/或油酰磷脂酰乙醇胺及其衍生物。在一个实施方案中，其中所述磷脂是选自下列中的一种或多种：磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine，PC)、氢化PC、磷脂酸(phosphatidic acid，PA)、磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine，PS)、磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine，PE)、磷脂酰甘油(phosphatidyglycerol，PPG)和磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol，PI)。在一个实施方案中，其中所述磷脂是选自下列中的一种或多种：大豆卵磷脂、脑磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、油酰磷脂酰胆碱(POPC)、蛋黄卵磷脂、油酰磷脂酰胆碱(POPC)。在一个实施方案中，其中所述磷脂是大豆卵磷脂和/或蛋黄卵磷脂。

根据本发明第一方面任一实施方案的卡贝缩宫素注射液，其每1ml中磷脂的量为0～10mg，例如为0.5～10mg，例如为0.75～7.5mg，例如为1～5mg。已经出人意料地发现，在卡贝缩宫素注射液中添加本发明所述磷脂可以非常有益地改善注射液的稳定性，特别是例如改善产品的在遭遇冰冻环境的稳定性。

根据本发明第一方面任一实施方案的卡贝缩宫素注射液，其中还任选地包含渗透压调节剂，例如其选自氯化钠、葡萄糖、甘露醇等，其量例如是使得注射液的渗透压调节至与生理渗透压等渗或稍高渗的程度。例如其中可以还包含0～1％的氯化钠、或者还包含0～5％的葡萄糖、或者还包含0～10％的甘露醇。

根据本发明第一方面任一实施方案的卡贝缩宫素注射液，其每1ml中包含：

卡贝缩宫素，其量为50～150μg(例如为75～125μg，例如为90～110μg，例如约为100μg)；

糖类，其量为1～50mg(例如为2～40mg，例如为5～25mg)；和

注射用水，适量，加至1ml。

糖类，其量为1～50mg(例如为2～40mg，例如为5～25mg)；

pH调节剂，其量为调节该注射液的pH值达到3.0～6.0(例如为3.5～6.0，例如为4.0～5.5)；和

注射用水，适量，加至1ml。

糖类，其量为1～50mg(例如为2～40mg，例如为5～25mg)；

磷脂，其量为0～10mg(例如为0.5～10mg，例如为0.75～7.5mg，例如为1～5mg)；

注射用水，适量，加至1ml。

根据本发明第一方面任一实施方案的卡贝缩宫素注射液，其照【有关物质检查法】法测定，按杂质峰面积与主峰峰面积之比所得的百分数表示，计算杂质的含量，其中[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素小于1.5％、[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素小于1.5％、[Gly9OH]-卡贝缩宫素小于1.5％、卡贝缩宫素亚砜I小于0.8％、和/或卡贝缩宫素亚砜II小于0.8％。

根据本发明第一方面任一实施方案的卡贝缩宫素注射液，其照【有关物质检查法】法测定，按杂质峰面积与主峰峰面积之比所得的百分数表示，计算杂质的含量，其中[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素小于1.2％、[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素小于1.2％、[Gly9OH]-卡贝缩宫素小于1.2％、卡贝缩宫素亚砜I小于0.7％、和/或卡贝缩宫素亚砜II小于0.7％。

根据本发明第一方面任一实施方案的卡贝缩宫素注射液，其照【有关物质检查法】法测定，按杂质峰面积与主峰峰面积之比所得的百分数表示，计算杂质的含量，其中[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素小于1.0％、[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素小于1.0％、[Gly9OH]-卡贝缩宫素小于1.0％、卡贝缩宫素亚砜I小于0.6％、和/或卡贝缩宫素亚砜II小于0.6％。

进一步地，本发明第二方面提供了制备卡贝缩宫素注射液的方法，其包括以下步骤：

(1)使各种物料溶解于处方量的70～90％注射用水中；

(2)任选地用pH调节剂调节溶液的pH值至规定值；

(3)补加水至处方全量，用0.22um微孔滤膜过滤除菌，密封分装于无菌玻璃瓶中，即得。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述卡贝缩宫素注射液中包含卡贝缩宫素、糖类和注射用水。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述卡贝缩宫素注射液每1ml中卡贝缩宫素的量为50～150μg，例如为75～125μg，例如为90～110μg，例如约为100μg。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述卡贝缩宫素注射液中所述的糖类选自：甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇、右旋糖苷、麦芽糖醇、果糖及其组合。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述卡贝缩宫素注射液中所述的右旋糖苷是分子量为10000～2000000的右旋糖苷。在一个实施方案中，其中所述的右旋糖苷选自右旋糖苷10、右旋糖苷20、右旋糖苷40、右旋糖苷70、右旋糖苷110、或其组合。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述卡贝缩宫素注射液其每1ml中糖类的量为1～50mg，例如为2～40mg，例如为5～25mg，例如为5～20mg。已经出人意料地发现，在卡贝缩宫素注射液中添加本发明所述糖类可以非常有益地改善注射液的稳定性，特别是例如改善产品的氧化稳定性。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述卡贝缩宫素注射液中所述水是作为注射液的溶媒存在的，其量通常是使得注射液体积扩增到规定值，特别是对于以水为溶媒的注射液，因此本领域技术人员在描述注注射液中的水的量时，通常不作具体描述，或者仅仅是指出其量是适量，或者指出其量是“余量”，或者指出其量是“适量，加至1ml”等类似表述。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述卡贝缩宫素注射液中还可以包括pH调节剂。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述卡贝缩宫素注射液中还包括pH调节剂，其选自盐酸、醋酸、磷酸、枸橼酸、酒石酸、氢氧化钠、三乙胺、精氨酸等。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述卡贝缩宫素注射液中所述的pH调节剂的用量是使得该注射液的pH值达到3.0～6.0，例如为3.5～6.0，例如为4.0～5.5。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述卡贝缩宫素注射液中还可以包括抗氧剂。在一个实施方案中，所述抗氧剂选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、亚硫酸钠、没食子酸丙酯、谷胱甘肽、硫脲、巯基乙酸、维生素E等。在一个实施方案中，所述卡贝缩宫素注射液每1ml中抗氧剂的量为0～10mg，0.1～10mg，例如为0.1～5mg，例如为0.1～5mg，例如为0.1～2mg。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述卡贝缩宫素注射液中还可以包含防腐剂。在一个实施方案中，所述防腐剂选自尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、尼泊金丁酯、苯甲醇、三氯叔丁醇及其组合。在一个实施方案中，所述卡贝缩宫素注射液每1ml中防腐剂的量为0～10mg，例如为0.1～10mg，例如为0.2～7.5mg，例如为0.5～5mg。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述卡贝缩宫素注射液中还可以包含磷脂。在一个实施方案中，所述磷脂是选自下列中的一种或多种：大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、脑磷脂、肌酐、肌醇磷脂、溶血磷脂、磷脂酸、磷脂酰甘油、硬脂酰/棕榈酰/油酰磷脂酰胆碱、硬脂酰/棕榈酰/油酰磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、氢化磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油和磷脂酰肌醇、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、油酰磷脂酰胆碱。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述卡贝缩宫素注射液每1ml中磷脂的量为0～10mg，例如为0.5～10mg，例如为0.75～7.5mg，例如为1～5mg。已经出人意料地发现，在卡贝缩宫素注射液中添加本发明所述磷脂可以非常有益地改善注射液的稳定性，特别是例如改善产品的在遭遇冰冻环境的稳定性。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述卡贝缩宫素注射液中还任选地包含渗透压调节剂，例如其选自氯化钠、葡萄糖、甘露醇等，其量例如是使得注射液的渗透压调节至与生理渗透压等渗或稍高渗的程度。例如其中可以还包含0～1％的氯化钠、或者还包含0～5％的葡萄糖、或者还包含0～10％的甘露醇。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述卡贝缩宫素注射液每1ml中包含：

糖类，其量为1～50mg(例如为2～40mg，例如为5～25mg)；和

注射用水，适量，加至1ml。

糖类，其量为1～50mg(例如为2～40mg，例如为5～25mg)；

注射用水，适量，加至1ml。

糖类，其量为1～50mg(例如为2～40mg，例如为5～25mg)；

注射用水，适量，加至1ml。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述卡贝缩宫素注射液如本发明第一方面任一实施方案所述。

在本发明上述制备方法的步骤中，虽然其描述的具体步骤在某些细节上或者语言描述上与下文具体实施方式部分的制备例中所描述的步骤有所区别，然而，本领域技术人员根据本发明全文的详细公开完全可以概括出以上所述方法步骤。

本发明的任一方面的任一实施方案，可以与其它实施方案进行组合，只要它们不会出现矛盾。此外，在本发明任一方面的任一实施方案中，任一技术特征可以适用于其它实施方案中的该技术特征，只要它们不会出现矛盾。下面对本发明作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

本发明涉及的注射液的药物活性物质是卡贝缩宫素，其化学名称：去氨-2-氧-甲基酪氨酸-1-κ缩宫素，化学结构式：分子式为：C45H69N11O12S，分子量为：988.1。

本发明卡贝缩宫素注射液用于选择性硬膜外或腰麻下剖腹产术后，以预防子宫收缩乏力和产后出血。临床上使用本发明溶液型注射液，包装规格典型可以是1ml:100微克，用法用量是：单剂量静脉注射100微克(1毫升)卡贝缩宫素，只有在硬膜外或腰麻醉下剖腹产术完成婴儿娩出后，缓慢地在1分钟内一次性给予。本发明卡贝缩宫素注射液可以在胎盘娩出前或娩出后给予，或遵医嘱。

具体实施方式

通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。

通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。以下实施例进一步说明本发明，而不是限制本发明。在下面的例子中，使用的pH调节剂(在本发明中亦即酸碱调节剂)，如无另外说明，是1M氢氧化钠溶液或者1M醋酸溶液，其用量是使制备的水针剂达到以下例子中所规定的值或范围。

下文制备步骤为了举例的目的，并基于各举例的可比较性而作了某些具体描述，本领域技术人员根据已有知识完全可以从中概括得到本发明制备水针剂的方法。在下面配液制备各种组合物中，如未另外说明，每批的总配液量为1000ml。但是列明配方和制备过程时，对于水针剂，以每1ml药液中的组成阐明配方和制法。在分装时，每瓶药液量为1ml。

另外，在需要时，水针剂的不溶性微粒检查的方法照中国药典2010版二部附录IX C不溶性微粒检查法中的“第一法(光阻法)”进行。

一、检查方法

1、【有关物质检查法】

本有关物质检查法，适用于检测制备的卡贝缩宫素粗品、精制品以及所配制的药物组合物例如注射液等物料中的各种杂质的含量。具体如下：

照中国药典2010年版二部附录VD的高效液相色谱法进行测定；

取供试品适量，精密称定，用空白溶剂(取超纯水适量，用醋酸调节pH值为3～4，即得)制成每1ml约0.8mg的溶液作为供试品溶液(注射液成品不稀释直接测定)；

取杂质对照品[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素适量，用空白溶剂制成1.0mg/ml的杂质对照品溶液；

取供试品溶液1ml，加杂质对照品溶液25ul混匀即为系统适用性溶液；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(本发明使用的具体色谱柱为Waters Delta-Pak100A，150mm×3.9mm，5um，亦可使用相当的色谱柱)；

以磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾6.355g，磷酸氢二钠二水合物3.563g，加水溶液并定容至1000ml，用冰醋酸调节pH至6.5)为流动相A，乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；

梯度洗脱程序为：

时间(分钟)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	80	20
35	65	35
			36	20	80
40	20	80
			42	80	20
50	80	20

流速1ml/min，检测波长220nm，柱温40℃；

分别取系统适用性溶液和供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，记录色谱图；卡贝缩宫素峰的保留时间应不小于15min，[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素与卡贝缩宫素的分离度应不小于1.5；

以卡贝缩宫素峰计，其理论塔板数应不低于6000，拖尾因子应为0.8～1.3，卡贝缩宫素峰峰面积的RSD不得过2％(n＝6)；

计算下列杂质的含量(按杂质峰面积与主峰峰面积之比所得的百分数表示)：

[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素(其相对于主峰的保留时间约为0.97，典型地在0.95～0.99范围内)、

[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素(其相对于主峰的保留时间约为1.04，典型地在1.02～1.06范围内)、

[Gly9OH]-卡贝缩宫素(其相对于主峰的保留时间约为0.73，典型地在0.71～0.75范围内)、

卡贝缩宫素亚砜I(其相对于主峰的保留时间约为0.68，典型地在0.64～0.70范围内)、

卡贝缩宫素亚砜II(其相对于主峰的保留时间约为0.80，典型地在0.78～0.82范围内)，

对于作为药用原料药的卡贝缩宫素而言，通常可以规定其中[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素应小于1.0％、[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素应小于1.0％、[Gly9OH]-卡贝缩宫素应小于1.0％、卡贝缩宫素亚砜I应小于0.3％、卡贝缩宫素亚砜II应小于0.4％。

在本发明中，卡贝缩宫素各氨基酸次序可示例性地标示如下：

[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素各氨基酸次序可示例性地标示如下：

[Gly⁹OH]-卡贝缩宫素各氨基酸次序可示例性地标示如下：

卡贝缩宫素亚砜I和卡贝缩宫素亚砜II分别是硫原子氧化成亚砜后在硫原子上呈R构型和S构型。其它以上述类似方式标明的杂质亦具有类似含义或者是本领域已知的。

2、【含量测定】

本含量测定法，适用于检测制备的卡贝缩宫素粗品、精制品以及所配制的药物组合物例如注射液等物料中的卡贝缩宫素的含量。具体如下：

照中国药典2010年版二部附录VD的高效液相色谱法进行测定；

取卡贝缩宫素对照品适量，精密称定，用空白溶剂(取超纯水适量，用醋酸调节pH值为3～4，即得)制成每1ml含0.1mg的溶液作为对照品溶液；

以注射液作为供试品溶液；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(本发明使用的具体色谱柱为YMC-Pack ODS-AQ，150mm×4.6mm，3um，亦可使用相当的色谱柱)；

以磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾6.355g，磷酸氢二钠二水合物3.563g，加水溶液并定容至1000ml)—乙腈(74：26)为流动相；

流速1ml/min，检测波长220nm，柱温40℃；

取卡贝缩宫素对照品溶液20ul，注入液相色谱仪，记录色谱图，卡贝缩宫素峰的保留时间应不小于10min，以卡贝缩宫素峰计，其理论塔板数应不低于6000，拖尾因子应为0.8～1.3，卡贝缩宫素峰峰面积的RSD不得过2％(n＝6)；

精密量取对照品溶液和供试品溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算所测供试品中的卡贝缩宫素含量，即得。

对于作为药物组合物的卡贝缩宫素注射液而言，通常可以规定其含卡贝缩宫素(C45H69N11O12S)应为标示浓度的90％～110％。

3、【醋酸含量测定】

本醋酸含量测定法，适用于检测制备的卡贝缩宫素粗品、精制品以及所配制的药物组合物例如注射液等物料中的醋酸的含量。具体如下：

照中国药典2010年版二部附录VD的高效液相色谱法进行测定；

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(在本发明中使用YMC ODS AQ柱，250×4.6mm，5um，亦可使用市售的类似规格的柱子)；

以硫酸盐缓冲液(取无水磷酸二氢钠13.8g，用900ml水溶解，用85％磷酸调pH至3.5，加水至1000ml，混匀)为流动相，检测波长205nm；流速1ml/min；柱温为室渐；

量取三氟醋酸40ul，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，取上述溶液与0.8mg/ml的醋酸对照品溶液按体积比1：1混合，制成系统适用性溶液；

量取系统适用性溶液40ul，注入液相色谱仪，记录色谱图，三氟醋酸峰的保留时间应在4.6±0.5min；醋酸峰的保留时间应在6.4±0.5min；

取供试品适量，精密称定，用水制成每1ml约8.0mg的溶液作为供试品溶液；另取冰醋酸适量，用水制成每1ml中约含0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg的醋酸对照品溶液；

分别精密量取对照品溶液及供试品溶液40ul，注入液相色谱仪，记录色谱图，按标准曲线法以峰面积计算供试品中的醋酸含量。

对于作为药用原料药的卡贝缩宫素而言，通常可以规定其中醋酸含量不超过5.0％。

4、【水分测定】

本水分测定法，适用于检测制备的卡贝缩宫素粗品、精制品等物料中的水分的含量。具体如下：

取供试品，照中国药典2010年版二部附录VIIIM第一法检查。

对于作为药用原料药的卡贝缩宫素而言，通常可以规定其中含水分不超过6.0％。

5、【制备卡贝缩宫素原料药】

通过以下步骤1至步骤15制备得到可作为药用原料药的卡贝缩宫素。

步骤1：制备Fmoc-Gly-树脂

将100.00g的Fmoc-Rink Amide MBHA resin加入到玻璃反应柱中，该树脂的替代度为1.0mmol/g。加入500ml的DMF溶胀，然后加入DCM的500ml/次洗涤3次，再加入DMF500ml/次洗涤3次。向玻璃反应柱内加入配制好的50％哌啶/DMF溶液500ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF500ml/次洗涤6次。取少量树脂利用茚三酮反应(Kaiser Test)，以下简称KT，具体检测方法详见以下茚三酮检测方法)做检测，显蓝色。若不显蓝色，则需重新进行此步。保护氨基酸以及缩合试剂的投料量为3倍当量，称取Fmoc-Gly-OH89.19g及TBTU96.32g、HOBt40.54g、DIEA38.77g，加入DMF搅拌溶解，搅拌均匀后加入到玻璃反应柱内，搅拌反应24小时。KaiserTest监测反应程度，直至反应完成。反应完毕后，抽去反应液，用DMF500ml/次洗涤3次，再用DCM500ml/次洗涤3次，抽干，倒出，放入真空干燥箱干燥12小时。取出称重，为104.4g，测定替代度为0.85mmol/g。

上述(以及下文使用的)用于中间体控制的茚三酮检测方法(KaiserTest，KT)，测定方法如下：

试剂的配制：(1)1g茚三酮溶于20ml无水乙醇，(2)3.2g苯酚溶于4ml无水乙醇，(3)0.4ml KCN储液(0.01M KCN)溶于19.6ml吡啶；

检测方法：在待检测的树脂中将上述三种试剂按1：1：1比例依次各滴加2滴，通过颜色观察来判断反应是否完全，此法灵敏度达到99％以上；若溶液及树脂为黄色，则表明树脂上无残留－NH2；若溶液及树脂为紫色、淡蓝色或蓝色，则表明树脂上仍有残留的－NH2，颜色越深，表明残留的－NH2越多，肽的耦联反应越不完全，需延长反应时间。

步骤2：制备Fmoc-Leu-Gly-树脂

将104.4g的Fmoc-Gly-树脂加入到玻璃反应柱中，加入DCM500ml/次洗涤3次，再加入DMF500ml/次洗涤3次。向玻璃反应柱内加入配制好的50％哌啶/DMF溶液500m1，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF500ml/次洗涤6次。取少量树脂利用茚三酮反应(Kaiser Test)做检测，显蓝色。若不显蓝色，则需重新进行此步。称取Fmoc-Leu-OH94.00g及TBTU85.4lg、HOBt35.94g、DIEA34.38g，加入DMF搅拌溶解。完全溶解后，将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应3小时。取样，用DMF洗涤6次，Kaiser Test监测反应程度，直至反应完成。抽去反应液，用DMF500ml/次洗涤6次。

步骤3：制备Fmoc-Pro-Leu-Gly-树脂

向玻璃反应柱内加入配制好的50％哌啶/DMF溶液500ml，搅拌反应30mm，抽除反应液，加入DMF500ml/次洗涤6次。取少量树脂利用茚三酮反应(Kaiser Test)做检测，显蓝色。若不显蓝色，则需重新进行此步。称取Fmoc-Pro-OH89.75g及TBTU85.41g、HOBt35.94g、DIEA34.38g，加入DMF搅拌溶解。完全溶解后，将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应3小时。取样，用DMF洗涤6次，KaiserTest监测反应程度，直至反应完成。抽去反应液，用DMF500ml/次洗涤6次。

步骤4：制备Fmoc-Cys(Trt)-Pro-Leu-Gly-树脂

向玻璃反应柱内加入配制好的50％哌啶/DMF溶液500ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF500ml/次洗涤6次。取少量树脂利用茚三酮反应(Kaiser Test)做检测，显蓝色。若不显蓝色，则需重新进行此步。称收Fmoc-Cys(Trt)-OH155.80g及TBTU85.41g、HOBt35.94g、DIEA34.38g，加入DMF搅拌溶解。完全溶解后，将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应5小时。取样，用DMF洗涤6次，KaiserTest监测反应程度，直至反应完成。抽去反应液，用DMF500ml/次洗涤6次。

步骤5：制备Fmoc-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Leu-Gly-树脂

向玻璃反应柱内加入配制好的50％哌啶/DMF溶液500ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF500ml/次洗涤6次。取少量树脂利用茚三酮反应(Kaiser Test)做检测，显蓝色。若不显蓝色，则需重新进行此步。称取Fmoc-Asn(Trt))-OH158.72g及TBTU85.41g、HOBt35.94g、DIEA34.38g，加入DMF搅拌溶解。完全溶解后，将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应5小时。取样，用DMF洗涤6次，Kaiser Test监测反应程度，直至反应完成。抽去反应液，用DMF500ml/次洗涤6次。

步骤6：制备Fmoc-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Leu-Gly-树脂

向玻璃反应柱内加入配制好的50％哌啶/DMF溶液500ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF500ml/次洗涤6次。取少量树脂利用茚三酮反应(Kaiser Test)做检测，显蓝色。若不显蓝色，则需重新进行此步。称取Fmoc-Gln(Trt)-OH162.45g及TBTU85.41g、HOBt35.94g、DIEA34.38g，加入DMF搅拌溶解。完全溶解后，将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应6小时。取样，用DMF洗涤6次，Kaiser Test监测反应程度，直至反应完成。抽去反应液，用DMF500ml/次洗涤6次。

步骤7：制备Fmoc-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Leu-Gly-树脂

向玻璃反应柱内加入配制好的50％哌啶/DMF溶液500ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF500ml/次洗涤6次。取少量树脂利用茚三酮反应(Kaiser Test)做检测，显蓝色。若不显蓝色，则需重新进行此步。称取Fmoc-Ile-OH97.73g及TBTU85.41g、HOBt35.94g、DIEA34.38g，加入DMF搅拌溶解。完全溶解后，将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应3.5小时。取样，用DMF洗涤6次，Kaiser Test监测反应程度，直至反应完成。抽去反应液，用DMF500ml/次洗涤6次。

步骤8：制备Fmoc-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Pro-Leu-Gly-树脂

向玻璃反应柱内加入配制好的50％哌啶/DMF溶液500ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF500ml/次洗涤6次。取少量树脂利用茚三酮反应(Kaiser Test)做检测，显蓝色。若不显蓝色，则需重新进行此步。称取Fmoc-Tyr(Me)-OH111.06g及TBTU85.41g、HOBt35.94g、DIEA34.38g，加入DMF搅拌溶解。完全溶解后，将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应4小时。取样，用DMF洗涤6次，KaiserTest监测反应程度，直至反应完成。抽去反应液，用DMF500ml/次洗涤6次。

步骤9：制备Fmoc-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys-Pro-Leu-Gly-树脂

向玻璃反应柱内加入配制好的1％TFA/DCM溶液500ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF500ml/次洗涤6次。

步骤10：制备Fmoc-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(CH2CH2CH2COOH)-Pro-Leu-Gly-树脂

向玻璃反应柱内加入溴丁酸44.42g及DIEA34.38g，加入500mlDMF搅拌溶解，反应30分钟。取样，用DMF洗涤6次，用Ellman反应监测巯基反应程度，直至反应完成。抽去反应液，用DMF500ml/次洗涤6次。

步骤11：制备H-Tyr(Me)-Ilc-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(CH2CH2CH2COOH)-Pro-Leu-Gly-树脂

向玻璃反应柱内加入配制好的50％哌啶/DMF溶液500ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF500ml/次洗涤6次。

步骤12：环化

称取TCTU94.57g及DIEA34.38g加入1100ml中搅拌溶解，完全溶解后加入到反应柱内，氮气吹搅反应90min。反应完毕后，取样，用DMF洗涤6次，Kaiser Test监测反应程度，直至反应完成。抽去反应液，用DMF1100ml/次洗涤3次，再用DCM1100ml/次洗涤3次，抽干，倒出。

步骤13：裂解

将环化后的树脂加入到圆底烧瓶中，加入配制好的裂解试剂(TFA：十二烷基硫醇：水：甲酸＝95：2：1：2)2200ml，搅拌反应120min。过滤，树脂用TFA洗涤3次。合并滤液，缓慢沉降到20000ml的无水乙醚中。静置2h后开始离心，离心完毕后用冰无水乙醚2200ml/次离心洗涤6次，将得到的粗肽放入冰箱过夜，冷冻干燥，即得卡贝缩宫素粗品。

步骤14：纯化

使用制备型HPLC法进行纯化，纯化条件为：

流动相A：0.2％醋酸水溶液，

流动相B：0.2％醋酸甲醇溶液，

流动相C：1M醋酸氨溶液；

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶(C18)柱，5μm，50×250mm；

进样量：6L；

流速：100ml/min；

检测波长：220nm；

梯度：

时间(min)

A

B

C

0	0％	0％	100％
				30	0％	0％	100％
30.1	95％	5％	0％
				40	95％	5％	0％
40.1	50％	50％	0％
				70	50％	50％	0％
70.1	40％	60％	0％
				100	40％	60％	0％
100.1	90％	10％	0％
				110	90％	10％	0％

将得到的粗肽馏分减压干燥后加水30000ml溶解，溶液用0.45μm的微孔滤膜过滤。滤液按照纯化条件上样，收集目的峰溶液，并将收集的溶液浓缩。

步骤15：转盐和冻干

将步骤14得到的样品溶液通过脱盐柱，使用流动相0.2％醋酸水溶液，收集最后主峰。

将上述经脱盐柱收集到的样品溶液放入冻干机中，低温(-60℃)结冰，冻实；在真空下控制温度上升至-8℃，水线消失后将温度缓慢拉升至60℃冻干24小时，即得本发明典型的可作为药用原料药的贝卡缩宫素，其可称为贝卡缩宫素原料1。

获得的卡贝缩宫素经测定：醋酸含量<4.0％，含水分<4.5％，以无水与无醋酸物计算含C45H69N11O12S为98.63％；杂质含量：

[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素含量0.45％、

[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素含量0.24％、

[Gly⁹OH]-卡贝缩宫素含量0.11％、

卡贝缩宫素亚砜I含量0.16％、

卡贝缩宫素亚砜II含量0.25％。

6、【制备卡贝缩宫素原料药】

照CN103467573A(201310392663.8，翰宇)说明书[0054]至[0063]段的方法制备得到卡贝缩宫素。照本发明方法测试，醋酸含量<4.0％，含水分<4.5％，以无水与无醋酸物计算含C45H69N11O12S为98.87％；杂质含量：[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素含量0.46％、[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素含量0.38％、[Gly⁹OH]-卡贝缩宫素含量0.92％、卡贝缩宫素亚砜I含量0.22％、卡贝缩宫素亚砜II含量0.27％。该贝卡缩宫素满足该品种本领域常规的质量要求，因而其可作为药用原料药，其可称为贝卡缩宫素原料2。

二、制备卡贝缩宫素注射液的实施例部分

以下制备卡贝缩宫素注射液的各个实施例，如未另外说明，所用的原料药是贝卡缩宫素原料1。

实施例1：制备卡贝缩宫素注射液

配方：

卡贝缩宫素	0.1mg，
		右旋糖苷40	10mg，
pH调节剂	适量，调节pH值至4.0，
		注射用水	适量，加至1ml。

制法：

(1)将各固体辅料与卡贝缩宫素溶解于适量注射用水中，使溶液体积达到理论处方体积的80％(即约0.8ml，下同)；

(2)用酸碱调节剂调节溶液的pH值至规定值；

(3)加注射用水至1ml，向药液中添加0.05％活性炭，在搅拌下吸附热原30分钟，脱碳过滤。滤液经0.22μm钛棒过滤器过滤，再经0.22μm微孔滤膜除菌过滤，1ml药液灌装于灭菌安瓿内，封口。该样品的编号记为Ex1。

补充例1：制备卡贝缩宫素注射液

参照实施例1的配方，不同的仅是将其中的卡贝缩宫素的量分别改为75μg/ml、90μg/ml、110μg/ml、125μg/ml，得到4批注射液编号分别记为B11、B12、B13、B14。

补充例2：制备卡贝缩宫素注射液

参照实施例1的配方，不同的仅是将其中的右旋糖苷40量分别改为0mg、1mg、2.5mg、5mg、15mg、20mg、30mg、40mg、50mg，得到9批注射液编号分别记为B21、B22、B23、B24、B25、B26、B27、B28、B29。

补充例3：制备卡贝缩宫素注射液

参照实施例1的配方，不同的仅是将其中的右旋糖苷40分别替换为等量的右旋糖苷10、右旋糖苷20、右旋糖苷70、右旋糖苷110、甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇，得到9批注射液编号分别记为B31、B32、B33、B34、B35、B36、B37、B38、B39。

补充例4：制备卡贝缩宫素注射液

参照实施例1的配方，不同的仅是将其中的右旋糖苷40分别替换为5mg的右旋糖苷10、右旋糖苷20、右旋糖苷70、右旋糖苷110、甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇，得到9批注射液编号分别记为B41、B42、B43、B44、B45、B46、B47、B48、B49。

补充例5：制备卡贝缩宫素注射液

参照实施例1的配方，不同的仅是将其中的右旋糖苷40分别替换为20mg的右旋糖苷10、右旋糖苷20、右旋糖苷70、右旋糖苷110、甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇，得到9批注射液编号分别记为B51、B52、B53、B54、B55、B56、B57、B58、B59。

试验例1：注射液的稳定性考察

取以上实施例1以及补充例1～补充例5所得各批次的注射液，在28℃条件下密封、避光放置6个月(在本发明中，此种相对于其贮藏温度而言的高温处置方式可称为高温6月、28℃6月、高温6月处置、28℃6月处置等)，计算在此条件下每个试样在处置前(0月)、后(6月)以下各杂质的含量(杂质峰面积与主峰峰面积之比所得的百分数表示)：[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素、[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素、[Gly9OH]-卡贝缩宫素、卡贝缩宫素亚砜I、卡贝缩宫素亚砜II。并计算每个试样中，各杂质在6个月时相对于在该试样中该杂质在0月时的含量增加百分数(例如对于试样Ex1，其中的杂质卡贝缩宫素亚砜I的含量增加百分数是指：该试样的该杂质6月含量减去0月含量再除以0月含量再乘以100％所得的结果，以％表示)。

结果：

对于Ex1，其[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素含量增加百分数为63％、[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素含量增加百分数为47％、[Gly9OH]-卡贝缩宫素含量增加百分数为56％、卡贝缩宫素亚砜I含量增加百分数为52％、卡贝缩宫素亚砜II含量增加百分数为47％；

对于B11、B12、B13、B14、B24、B25、B26，其[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素、[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素、[Gly9OH]-卡贝缩宫素三者的含量增加百分数均在为42％～65％范围内，卡贝缩宫素亚砜I和卡贝缩宫素亚砜II二者的含量增加百分数均在为45％～60％范围内，显示这些试样5个杂质的增加都相对较低；

对于B21、B22、B23、B27、B28、B29这6个少用或多用右旋糖苷40的，B31至B39、B41至B49、B51至B59这27个不用右旋糖苷40而改用其它辅料的，其[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素、[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素、[Gly9OH]-卡贝缩宫素三者的含量增加百分数均在为40％～73％范围内，卡贝缩宫素亚砜I的含量增加百分数均在为193％～331％范围内，和卡贝缩宫素亚砜II二者的含量增加百分数均在为185％～367％范围内，显示这些试样[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素、[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素、[Gly9OH]-卡贝缩宫素三者的增加都相对较低，但是两个亚砜杂质却出现显著的增长；

另外，上述全部注射液试样，在0月时的五个杂质与原料药中五个相应杂质的含量相比无显著区别，各注射液中5个杂质的含量均是原料中相应杂质含量的90～145％范围内，例如原料药中[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素含量为0.45％，由它制成的注射液Ex1在0月时[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素含量为0.53％，即该注射液中杂质[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素的含量是原料中该杂质含量的118％(0.53÷0.45×100％)。

实施例2：制备卡贝缩宫素注射液

配方：

卡贝缩宫素	0.1mg，
		右旋糖苷40	10mg，
大豆卵磷脂	2.5mg，
		pH调节剂	适量，调节pH值至4.0，
注射用水	适量，加至1ml。

制法：

(2)用酸碱调节剂调节溶液的pH值至规定值；

(3)加注射用水至1ml，向药液中添加0.05％活性炭，在搅拌下吸附热原30分钟，脱碳过滤。滤液经0.22μm钛棒过滤器过滤，再经0.22μm微孔滤膜除菌过滤，1ml药液灌装于灭菌安瓿内，封口。该样品的编号记为Ex2。

补充例6：制备卡贝缩宫素注射液

参照实施例2的配方，不同的仅是将其中的大豆卵磷脂的量分别替换为0.2mg、0.5mg、1mg、5mg、10mg、20mg，或者将大豆卵磷脂分别替换为1mg、2.5mg、5mg的蛋黄卵磷脂，得到9批注射液编号分别记为B61、B62、B63、B64、B65、B66、B67、B68、B69。

补充例7：制备卡贝缩宫素注射液

参照实施例2的配方，不同的仅是将其中的大豆卵磷脂分别替换为2mg、4mg的吐温80，2mg、4mg的十二烷基硫酸钠，2mg、4mg的泊洛沙姆；或者参照实施例2的配方，不同的仅是将其中的卡贝缩宫素的量分别改为75μg/ml、125μg/ml，得到8批注射液编号分别记为B71、B72、B73、B74、B75、B76、B77、B78。

试验例2：注射液的稳定性考察

试样：Ex1，B11、B12、B13、B14，B24、B25、B26、B27、B28、B29，Ex2，B61、B62、B63、B64、B65、B66、B67、B68、B69，B71、B72、B73、B74、B75、B76、B77、B78。

考察方式：将各个用安瓿瓶密封包装的注射液在15℃的温度处置放置2天，再在零下8℃的温度处置放置2天，由此完成一个高低温循环的过程，由此再进行四个这样的循环(共进行五个这样的循环，合计20天，这一处理方式在本发明中可称为高低温循环处理或其它类似表述)。对于每一个注射液试样，测定它们在进行高低温循环处理前(0天)、后(20天)样品中的活性成分卡贝缩宫素的含量(即相对于标示量的百分含量)，计算各试样20天时卡贝缩宫素相对于该试样在0天时的相对含量，即20天含量除以0天含量再乘以100％所得结果。

结果：试样Ex1、B11、B12、B13、B14、B24、B25、B26、B27、B28、B29这些未添加磷脂，B61、B62、B65、B66这些添加较少量或者过多量磷脂，B71、B72、B73、B74、B75、B76这些添加吐温、SDS、泊洛沙姆的注射液，经高低温循环处理后卡贝缩宫素相对含量均在83～88％范围内；而Ex2、B63、B64、B67、B68、B69、B77、B78这些添加适量磷脂的注射液经高低温循环处理后卡贝缩宫素相对含量均在96～99％范围内。这表明，添加适量磷脂有助于注射液耐受冰冻环境，这对于需要2-8℃贮藏的卡贝缩宫素注射液是极为有利的，它可以避免注射液在冷库存放时偶然遇到过低温度的非规定贮藏环境所造成的产品变化。

另外，对Ex2，B61、B62、B63、B64、B65、B66、B67、B68、B69，B71、B72、B73、B74、B75、B76、B77、B78各试样照试验例1的方法考察注射液的稳定性，结果：对于全部试样，其[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素、[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素、[Gly9OH]-卡贝缩宫素三者的含量增加百分数均在为46％～63％范围内，卡贝缩宫素亚砜I和卡贝缩宫素亚砜II二者的含量增加百分数均在为41％～66％范围内，表明这些添加有右旋糖苷的试样在经高温处置后5个杂质的增加都相对较低。

实施例3：制备卡贝缩宫素注射液

配方：

卡贝缩宫素2	0.1mg，
		右旋糖苷40	10mg，
亚硫酸氢钠	1mg，

三氯叔丁醇	2mg，
		氯化钠	9mg，
pH调节剂	(枸橼酸)适量，调节pH值至3.5，
		注射用水	适量，加至1ml。

参照实施例1的方法制备，得到注射液Ex3。

实施例4：制备卡贝缩宫素注射液

配方：

卡贝缩宫素	0.09mg，
		右旋糖苷40	8mg，
谷胱甘肽	1mg，
		尼泊金乙酯	2mg，
葡萄糖	50mg，
		pH调节剂	(醋酸/氢氧化钠)适量，调节pH值至6.0，
注射用水	适量，加至1ml。

参照实施例1的方法制备，得到注射液Ex4。

实施例5：制备卡贝缩宫素注射液

配方：

卡贝缩宫素2	0.11mg，
		右旋糖苷40	12mg，
硫代硫酸钠	1mg，
		苯甲醇	2mg，
葡萄糖	40mg，
		pH调节剂	(醋酸/氢氧化钠)适量，调节pH值至5.5，
注射用水	适量，加至1ml。

参照实施例1的方法制备，得到注射液Ex5。

实施例6～8：制备卡贝缩宫素注射液

分别参照实施例3～5的配方和方法，不同的仅是在注射液中补充添加2.5mg大豆卵磷脂、2.5mg蛋黄卵磷脂、2.5mg蛋黄卵磷脂，得到三个注射液分别为Ex6、Ex7、Ex8。

补充例8：制备卡贝缩宫素注射液

照CN102144965A(201010526006.4，健元)说明书实施例1、实施例2、实施例3、实施例4的配方和制法，以及照CN102228678A(201110169532.4，翰宇)说明书实施例1、实施例2、实施例3的配方和制法，制备得到七个注射液试样，分别依次标记为B81、B82、B83、B84、B85、B86、B87。

试验例3：注射液的稳定性考察

试样：Ex3、Ex4、Ex5未添加磷脂的本发明注射液，Ex6、Ex7、Ex8添加磷脂的本发明注射液，B81、B82、B83、B84、B85、B86、B87照现有技术方法得到的注射液。

考察1：各试样，照试验例1的方法考察注射液的稳定性，结果：

对于Ex3、Ex4、Ex5、Ex6、Ex7、Ex8，其[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素、[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素、[Gly9OH]-卡贝缩宫素三者的含量增加百分数均在为44％～68％范围内，卡贝缩宫素亚砜I和卡贝缩宫素亚砜II二者的含量增加百分数均在为43％～62％范围内；

对于B81、B82、B83、B84、B85、B86、B87，其[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素、[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素、[Gly9OH]-卡贝缩宫素三者的含量增加百分数均在为42％～76％范围内，卡贝缩宫素亚砜I的含量增加百分数均在为185％～306％范围内，和卡贝缩宫素亚砜II二者的含量增加百分数均在为195％～352％范围内。

考察2：各试样，照试验例2的方法考察注射液的稳定性，结果：

对于Ex3、Ex4、Ex5、B81、B82、B83、B84、B85、B86、B87，经高低温循环处理后卡贝缩宫素相对含量均在85～89％范围内；

对于Ex6、Ex7、Ex8，经高低温循环处理后卡贝缩宫素相对含量均在96～98％范围内。

试验例4：注射液的性质考察

试样：Ex1，B11、B12、B13、B14，B24、B25、B26，Ex2，B63、B64、B67、B68、B69，Ex3，Ex4，Ex5，Ex6、Ex7、Ex8这些具有本发明特征的注射液，在约5℃温度下放置24月，测定这些试样在此期间前、后的活性成分含量以及杂质。

结果：全部试样，在此24月前、后的卡贝缩宫素含量均在标示量的95～103％范围内；

全部试样，在此24月前、后，[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素含量均小于1.0％、[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素含量均小于1.0％、[Gly9OH]-卡贝缩宫素含量均小于1.0％、卡贝缩宫素亚砜I含量均小于0.6％、卡贝缩宫素亚砜II含量均小于0.6％。

以上结果显示本发明注射液具有良好的性质。

对于注射液而言，在严格维持在规定的贮藏条件下，其如发明所述高低温循环所造成的问题是可以避免的，因此，即使仅仅是考虑本发明添加右旋糖苷，这一技术特征所获得的技术效果亦是本领域技术人员根本无法预期的。

产业适用性

本发明提供了一种卡贝缩宫素的药物组合物例如注射液。本发明的卡贝缩宫素药物组合物可用于硬膜外或腰麻下剖腹产术后可以立即单剂量静脉给药，以预防子宫张力不足和产后出血。

Claims

1.卡贝缩宫素注射液，其中包含卡贝缩宫素、糖类和注射用水。

2.根据权利要求1的卡贝缩宫素注射液，其特征在于以下任一项或多项：

(1)其每1ml中卡贝缩宫素的量为50～150μg，例如为75～125μg，例如为90～110μg，例如约为100μg；

(2)所述糖类选自：甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇、右旋糖苷、麦芽糖醇、果糖及其组合；

(3)所述右旋糖苷是分子量为10000～2000000的右旋糖苷；

(4)所述右旋糖苷选自右旋糖苷10、右旋糖苷20、右旋糖苷40、右旋糖苷70、右旋糖苷110、或其组合；

(5)其每1ml中糖类的量为1～50mg，例如为2～40mg，例如为5～25mg，例如为5～20mg。

3.根据权利要求1至2的卡贝缩宫素注射液，其特征在于以下任一项或多项：

(1)其中还可以包括pH调节剂；

(2)其中还包括pH调节剂，其选自盐酸、醋酸、磷酸、枸橼酸、酒石酸、氢氧化钠、三乙胺、精氨酸等；

(3)所述的pH调节剂的用量是使得该注射液的pH值达到3.0～6.0，例如为3.5～6.0，例如为4.0～5.5。

4.根据权利要求1至3的卡贝缩宫素注射液，其特征在于以下任一项或多项：

(1)其中还可以包括抗氧剂；

(2)所述抗氧剂选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、亚硫酸钠、没食子酸丙酯、谷胱甘肽、硫脲、巯基乙酸、维生素E等；

(3)所述卡贝缩宫素注射液每1ml中抗氧剂的量为0～10mg，0.1～10mg，例如为0.1～5mg，例如为0.1～5mg，例如为0.1～2mg。

5.根据权利要求1至4的卡贝缩宫素注射液，其特征在于以下任一项或多项：

(1)其中还可以包含防腐剂；

(2)所述防腐剂选自尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、尼泊金丁酯、苯甲醇、三氯叔丁醇及其组合；

(3)所述卡贝缩宫素注射液每1ml中防腐剂的量为0～10mg，例如为0.1～10mg，例如为0.2～7.5mg，例如为0.5～5mg。

6.根据权利要求1至5的卡贝缩宫素注射液，其特征在于以下任一项或多项：

(1)其中还可以包含磷脂；

(2)所述磷脂是选自下列中的一种或多种：大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、脑磷脂、肌酐、肌醇磷脂、溶血磷脂、磷脂酸、磷脂酰甘油、硬脂酰/棕榈酰/油酰磷脂酰胆碱、硬脂酰/棕榈酰/油酰磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、氢化磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油和磷脂酰肌醇、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、油酰磷脂酰胆碱；

(3)所述磷脂是选自天然磷脂或合成磷脂中的一种或多种；

(4)所述天然磷脂是选自下列中的一种或多种：大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、脑磷脂、肌酐、肌醇磷脂、溶血磷脂、磷脂酸、磷脂酰甘油；

(5)所述磷脂是大豆卵磷脂和/或蛋黄卵磷脂；

(6)其每1ml中磷脂的量为0～10mg，例如为0.5～10mg，例如为0.75～7.5mg，例如为1～5mg。

7.根据权利要求1至6的卡贝缩宫素注射液，其中还任选地包含渗透压调节剂，例如其选自氯化钠、葡萄糖、甘露醇等。

8.权利要求1的卡贝缩宫素注射液，其每1ml中包含：

卡贝缩宫素，其量为50～150μg(例如为75～125μg，例如为90～110μg，例如约为100μg)，

糖类，其量为1～50mg(例如为2～40mg，例如为5～25mg)，和

注射用水，适量，加至1ml；

或者，其每1ml中包含：

糖类，其量为1～50mg(例如为2～40mg，例如为5～25mg)，

pH调节剂，其量为调节该注射液的pH值达到3.0～6.0(例如为3.5～6.0，例如为4.0～5.5)，和

注射用水，适量，加至1ml；

或者，其每1ml中包含：

糖类，其量为1～50mg(例如为2～40mg，例如为5～25mg)，

磷脂，其量为0～10mg(例如为0.5～10mg，例如为0.75～7.5mg，例如为1～5mg)，

注射用水，适量，加至1ml。

9.权利要求1的卡贝缩宫素注射液，其照【有关物质检查法】法测定，按杂质峰面积与主峰峰面积之比所得的百分数表示，计算杂质的含量，其中[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素小于1.5％、[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素小于1.5％、[Gly9OH]-卡贝缩宫素小于1.5％、卡贝缩宫素亚砜I小于0.8％、和/或卡贝缩宫素亚砜II小于0.8％；或者，其照【有关物质检查法】法测定，按杂质峰面积与主峰峰面积之比所得的百分数表示，计算杂质的含量，其中[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素小于1.2％、[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素小于1.2％、[Gly9OH]-卡贝缩宫素小于1.2％、卡贝缩宫素亚砜I小于0.7％、和/或卡贝缩宫素亚砜II小于0.7％；或者，其照【有关物质检查法】法测定，按杂质峰面积与主峰峰面积之比所得的百分数表示，计算杂质的含量，其中[D-Cys⁶]-卡贝缩宫素小于1.0％、[D-Asn⁵]-卡贝缩宫素小于1.0％、[Gly9OH]-卡贝缩宫素小于1.0％、卡贝缩宫素亚砜I小于0.6％、和/或卡贝缩宫素亚砜II小于0.6％。

10.制备权利要求1-9任一项所述卡贝缩宫素注射液的方法，其包括以下步骤：

(1)使各种物料溶解于处方量的70～90％注射用水中；

(2)任选地用pH调节剂调节溶液的pH值至规定值；