CN104041911A - 一种复配型生物防腐剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种复配型生物防腐剂，其特征在于：该复配型生物防腐剂是由300～800mg/L的富马酸一钠和200～500mg/L的聚赖氨酸按照1：9～11:1的比例复配后再加入0.02～0.04%的茶多酚组成的。本发明的复配型生物防腐剂具有安全高效、无毒无副作用的特点，同时抗菌广谱性好、最低抑菌浓度低，不但可以抑制食品中菌落的生长，还能维持水分含量、感官品质以及多种气味成分，本发明适用于食品保鲜，尤其适用于休闲鱼片的保鲜，具有很好的运用前景。

Description

一种复配型生物防腐剂
技术领域
本发明涉及一种防腐剂，尤其是一种复配型生物防腐剂。
背景技术
虽然食品的样式和类型多种多样，但是作为食品特性的安全性、营养性和感官性三个方面却一直未变，而且安全性作为三者之首备受人们关注[吴湘生.论我国水产加工业发展的新思路[J].冷饮与速冻食品工业,2004,10(4):37-42.]。
进年来，休闲鱼片作为一种色、香、味俱全的即食性的休闲食品备受消费者喜爱，在其广受欢迎的同时，休闲鱼片的品质保证仍然很受关注。防腐保鲜是维持食品品质和安全性的重要举措，现今使用最多的防腐剂是山梨酸（钾）、苯甲酸（钠）等化学防腐剂，虽然它们的抑菌效果很好，但是其化学物质本身存在的对人体的有害性日益凸显，因此，为休闲鱼片寻找安全、高效的防腐剂迫在眉睫。
富马酸一钠（Monosodium Fumarate）又称反丁烯二酸钠分子式为C4H3NaO4,白色结晶状粉末，无臭，略带特殊酸味，熔点约为290℃，溶于水（6.89g/100mL，25℃），可以螯合金属离子，是富马酸和碳酸钠中合成单钠盐后结晶而得。[吴正奇.高安全性生物型防腐剂的研究进展[J].中国食物与营养,2006,(10):23-25.]
富马酸一钠作为一种新型的防腐保鲜剂，主要用于水产品和肉糜类食品中，在国外（日本、韩国、美国为主）应用较为广泛。聚赖氨酸为淡黄色粉末，其结构式如（I）
（I）ε-PL Structure diagram
吸湿性较聚赖氨酸吸湿性较强，不受酸碱影响并且对热稳定（120℃，20min），能抑制耐热菌，对革兰氏阴性、阳性菌均有抑制效果，但遇铜离子可能因与其结合而失活[ShimaS,Matsuoka H,Iwamoto T,et al.Antimicrobial action of ε-poly-L-lysine[J].Antibiot1984,37:1449-1455.]。
聚赖氨酸富马酸一钠和聚赖氨酸作为生物性防腐剂，与化学性防腐剂相比具有很好的安全性，而且与其它生物型防腐剂（溶菌酶、Nisin、那他霉素等）相比，不仅可以有效地抑制革兰氏阳性菌，还可以有效地抑制革兰氏阴性菌的生长，抑菌谱更广[Ostendrop J G.Natamycin.Antonie van Leeuwenhoek.1981,47:170-171.；幸治梅,刘勤晋.微生物防腐剂及其在食品工业中的应用[J].中国食品添加剂,2003,4:86-87.]。而茶多酚是全天然的抗氧化性物质，具有抗氧化能力强，无毒副作用，无异味等特点，将茶多酚参入其它有机物（主要是食品）中，能够延长食品贮存期，防止食品退色，提高纤维素稳定性，从而有效保护食品的各种营养成份。茶多酚对肉类及其腌制品如香肠、肉食罐头腊肉等，具有良好的保质抗损效果，并有消除臭味、腥味，防止氧化变色的作用[顾柄枢.茶与茶多酚开发前瞻[J].食品与健康,1999,3:4.]。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种复配型生物防腐剂，具有安全高效、无毒无副作用的特点，同时抗菌广谱性好，不但可以抑制食品中菌落的生长，还能维持水分含量、感官品质以及多种气味成分
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：该复配型生物防腐剂是由300～800mg/L的富马酸一钠和200～500mg/L的聚赖氨酸按照1：9～11:1的体积比例复配后再加入0.02～0.04%的茶多酚组成的。就是富马酸一钠和聚赖氨酸的比例是体积比；茶多酚的百分含量是占总的该复配型生物防腐剂的质量含量。
作为优选，所述复配型生物防腐剂是由600mg/L的富马酸一钠和400mg/L的聚赖氨酸按照7：1的比例复配后再加入0.03%的茶多酚组成的。
与现有技术相比，本发明的优点在于：是由富马酸一钠和聚赖氨酸复配后再加入茶多酚得到，具有安全高效、无毒无副作用的特点，同时抗菌广谱性好、最低抑菌浓度低，不但可以抑制食品中菌落的生长，还能维持水分含量、感官品质以及多种气味成分。本发明的复配生物防腐剂可用于食品保鲜中，尤其适用于休闲鱼片的保鲜，具有很好的运用前景。
附图说明
图1是富马酸一钠浓度梯度下抑菌圈大小；
图2是聚赖氨酸浓度梯度下的抑菌圈大小；
图3是富马酸一钠和聚赖氨酸的最佳配比测定；
图4是37℃保藏下休闲鱼片的水分含量变化
图5是47℃保藏下休闲鱼片的水分含量变化；
图6是37℃保藏下不加该复配型生物防腐剂的休闲鱼片的LO图分析；
图7是37℃保藏下加该复配型生物防腐剂的休闲鱼片的LO图分析；
图8是37℃下该复配型生物防腐剂对休闲鱼片中甲烷的影响；
图9是47℃下该复配型生物防腐剂对休闲鱼片中甲烷的影响；
图10是37℃下该复配型生物防腐剂对休闲鱼片中芳香成分的影响；
图11是37℃下该复配型生物防腐剂对休闲鱼片中氮氧化合物的影响；
图12是37℃下该复配型生物防腐剂对休闲鱼片中硫化物的影响。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
一种复配型生物防腐剂，是由300～800mg/L的富马酸一钠和200～500mg/L的聚赖氨酸以1：9～11:1体积比复配后再加入0.02～0.04%的茶多酚得到的。
优选的配比是：是由600mg/L的富马酸一钠和400mg/L的聚赖氨酸以7：1复配后再加入0.03%的茶多酚得到的。
下面用具体实验数据对本发明做进一步详细描述：
1材料与方法
1.1材料与仪器
1.1.1实验菌种
大肠杆菌（Escherichiacoli，E.coli）、沙门氏菌（salmonella）、荧光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescens)、金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、藤黄八叠球菌(Sarcina lutea)，来源于浙江省海洋学院食品与药学学院511实验室。
黄曲霉（Aspergillus flavus Link）、黑根霉（Rhizopus nigricans Ehrenberg）、葡萄汁酵母（Saccharomyces uvarum）、啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C.Hansen），采购于北京北纳创联生物技术研究院。
1.1.2实验材料
休闲鱼片:将鲜活的马面鲀去鳞、头、内脏，洗净，取下两片鱼肉，将鱼片在清水中漂洗，然后蒸熟，熟后置于烘箱中烘至适当水分含量（20%左右），制成不添加任何添加剂的休闲鱼片材料。
1.1.3实验试剂
富马酸一钠白色结晶体，纯度为95%，食品级，采购于郑州亿之源化工产品有限公司；
ε-聚赖氨酸淡黄色粉末，纯度为98%，食品级，采购于南京赛泰斯生物科技有限公司；
茶多酚浅黄色粉末，纯度为99%，食品级，采购于河南腾达化工。
1.1.4实验仪器与器材
玻璃培养皿90mm               北京华兴科诺；
高压灭菌锅YXQ-LS-30SII       上海博讯实业有限公司医疗设备厂；
超净工作台HS-1300-U          苏州安泰空气技术有限公司；
恒温恒湿培养箱HWS-270        宁波东南仪器有限公司；
干燥烘箱DHG-9140A            上海精宏实验设备有限公司；
紫外可见分光光度计U-2800     HITACHIHIGH-TECHNOLOGIES
CORPORATION；
均质器FJ300-SH               上海标本模型厂制造；
水分测定仪梅特勒HG63         上海右一仪器有限公司；
便携式电子鼻PEN3             北京盈盛恒泰科技有限责任公司；
显微镜N-180M                 上海丽驰计量仪器有限公司。
1.2实验方法
实验主要以研究富马酸一钠和聚赖氨酸为主，因该复配型生物防腐剂的主要成分为富马酸一钠和聚赖氨酸，茶多酚主要用于去除富马酸一钠略带的酸味并发挥其抗氧化的作用。
1.2.1富马酸一钠和聚赖氨酸的最低抑菌浓度测定
富马酸一钠和聚赖氨酸的最低抑菌浓度测定以荧光假单胞杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、藤黄八叠球菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、黄曲霉、黑根霉、葡萄汁酵母和啤酒酵母为实验菌种，采用二倍稀释法（也即常量肉汤稀释法），基本步骤是：用灭菌生理盐水校正菌液浓度至0.5麦氏比浊标准（108cfu/g），用灭菌肉汤将其进行1:100稀释后备用；接着分别配置好浓度为1280μg/mL（做真菌的最低抑菌浓度时配为6400μg/mL）的富马酸一钠和聚赖氨酸溶液，准备24支无菌试管（12支排成一排，A、B两排），每排除第1管加入1.6mL肉汤外，其余每管加入1mL肉汤；然后在A拍第1管加入0.4mL1280μg/mL富马酸一钠溶液，在B拍第1管加入0.4mL1280μg/mL聚赖氨酸溶液，混匀，吸取1mL至第2管，混匀，如此操作至第11管，并从第11管中吸取1mL弃去，每排的第12管为不含富马酸一钠或聚赖氨酸的生长对照管；最后在每管内接种1mL菌液，使得每管所对应的富马酸一钠或聚赖氨酸浓度为128μg/mL、64μg/mL、32μg/mL、16μg/mL、8μg/mL、4μg/mL、2μg/mL、1μg/mL、0.5μg/mL、0.25μg/mL、0.125μg/mL（做真菌的最低抑菌浓度时为640μg/mL、320μg/mL、160μg/mL、80μg/mL、40μg/mL、20μg/mL、10μg/mL、5μg/mL、2.5μg/mL、1.25μg/mL、0.625μg/mL），每种菌再做2个平行组，37±1℃培养18-24h后与对照管对比观察，将开始出现澄清不浑浊现象的试管前后的各两管做培养实验，培养皿上未生长出菌落的浓度即为最低抑菌浓度。[HrishA.Nature(London),1951,167:1031-1032.；12韩景田,叶路,屈野等.食盐对十三种细菌标准菌株最低抑菌浓度测定[J].中国卫生检验杂志,1999,9(6):755-760.]
1.2.2富马酸一钠和聚赖氨酸最佳抑菌浓度的确定
用灭菌水在超净台中准确配制浓度梯度为200、300、400、500、600、700、800mg/L（为精确实验，后在抑菌圈最大的梯度附近找4～5个点再进行实验）的富马酸一钠溶液和浓度梯度为200、250、300、350、400、450、500mg/L的聚赖氨酸溶液[13]。先将配置好的108cfu/g的大肠杆菌菌液用灭菌的干净棉签均匀地涂布在已经凝固的营养培养基表面，在每个培养皿上放三个牛津杯（一个做空白对照）。每个牛津杯中注入200μL富马酸一钠溶液或聚赖氨酸溶液，对照组加入200μL无菌水，另外每个浓度各再做两个平行。对每个培养皿做好记号，放在37℃恒温恒湿培养箱中培养24h后取出测量抑菌圈直径。1.2.3最佳配比的测定
以大肠杆菌为实验菌种，采用1.2.2中初步复配实验得到的富马酸一钠和聚赖氨酸的佳抑菌浓度，设P为最佳抑菌浓度下的富马酸一钠和聚赖氨酸的体积比，令P为1:9、1:7、1:5、1:3、1:1、3:1、5:1、7:1、9:1、11:1，每个配比均加入0.03%的茶多酚并且均做三个平行，仍以牛津杯法测定抑菌圈直径。
1.2.4该复配型生物防腐剂的抑菌谱研究
将最佳抑菌浓度下的的富马酸一钠和聚赖氨酸以及该复配型生物防腐剂三者分别用于材料中的15种菌中，测定各自的抑菌圈直径，进行比较，各自再做两个平行。
1.2.5该复配型生物防腐剂最佳抑菌稀释度的测定
以荧光假单胞杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、藤黄八叠球菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、黄曲霉、黑根霉、葡萄汁酵母和啤酒酵母为实验菌种，将该复配型生物防腐剂依次稀释为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8的稀释度，每种菌准备9支试管，每支试管加入1mL的106cfu/g的菌液，然后1-8支试管分别加入1mL的以上稀释度的该复配型生物防腐剂，每种菌再做2个平行组，其余的培养和测定操作与1.2.1一致。
1.2.6该复配型生物防腐剂的应用实验——运用在休闲食品中
将休闲鱼片分为A、B、C、D四组，每组分装8个包装袋，每个包装袋内装（40±1）g体积相似（10cm×20cm×0.5cm）的薄长方体状休闲鱼片，A组和B组的鱼片各均匀涂抹15mL无菌的该复配型生物防腐剂，C组和D组的鱼片各均匀涂抹15mL无菌的灭菌水。将包装袋内的气体排出并密封，放入恒温恒湿培养箱中，选取食品储存期加速测试法温度为37℃，相对湿度60%（与商业储存湿度相同）；47℃，相对湿度60%。[14]37℃保藏下的休闲鱼片第1d、3d、5d、7d、9d、11d、13d、15d测定鱼片的感官品质、水分含量、菌落总数和电子鼻气味四项指标；47℃保藏下的休闲鱼片第1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d、8d测定鱼片的上述四项指标，每项指标的测定分别做3个平行，记录实验结果并处理分析。
2结果与分析
2.1富马酸一钠和聚赖氨酸的最低抑菌浓度测定
将所有试管置于37±1℃恒温恒湿培养箱中培养18-24h后，在适宜光线下观察各排试管中菌的生长情况并结合培养实验，得出实验中8种菌的最低抑菌浓度如下表：
表1富马酸一钠和聚赖氨酸的最低抑菌浓度（MIC）测定
Table1 The MIC detection of Monosodium Fumarate and Ploy-lysine
从上表可见富马酸一钠和聚赖氨酸的最低抑菌浓度都比较低，均不超过128mg/L。聚赖氨酸与富马酸一钠相比，聚赖氨酸的10种菌的最低抑菌浓度值普遍比富马酸一钠的低（枯草芽孢杆菌和葡萄汁酵母除外），且两种抑菌药物的最低抑菌浓度中霉菌和酵母菌的最低抑菌浓度值大多比革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌小。最低抑菌浓度是测量抑菌药物的抗菌活性大小的一个指标，它从侧面反映了抑菌药物的抑菌性大小。因此，由实验可知，富马酸一钠和聚赖氨酸的抑菌性较好，对于食品中经常出现的几种菌具有很好的抑制作用。
2.2富马酸一钠和聚赖氨酸最佳抑菌浓度的确定
测量各个浓度下培养基中的抑菌圈直径，每个浓度梯度下的三个平行取其平均值作为实验值，得富马酸一钠最佳抑菌浓度预确定结果如图1所示，
从图2可以发现抑菌圈的直径都比较大，均超过14.5mm，可见富马酸一钠的抑菌性较好。抑菌圈直径大小的走势是先逐渐增大，到横坐标为600mg/L时抑菌圈直径最大，此时其大小达到16.65mm，且当浓度大于600mg/L时，抑菌圈直径不增反减。因此，可以确定富马酸一钠单独使用时的最佳抑菌浓度为600mg/L。
聚赖氨酸的抑菌圈实验结果如图2所示，由图2的抑菌圈大小可以看出，聚赖氨酸的抑菌性较富马酸一钠弱，其抑菌圈直径的大小在8-11mm之间，抑菌圈大小的变化也不是很大。根据图形先增后减的趋势，发现当聚赖氨酸的浓度为400mg/L时抑菌圈直径最大，此时其大小为10.02mm。因此，可以得出聚赖氨酸单独使用时的最佳抑菌浓度为400mg/L。
2.3该复配型生物防腐剂最佳配比的确定
测量10个配比比例下的抑菌圈直径，如图3，
由图3先增后减的图形变化趋势可知：7:1是富马酸一钠和聚赖氨酸组成复合型生物防腐剂的最佳配比。试验研究显示（见图1和图2）富马酸一钠在最佳抑菌浓度条件下抑菌圈直径为16.65mm，聚赖氨酸在最佳抑菌浓度条件下的抑菌圈直径为10.02mm（单独使用抑菌效果不明显），而该复配型生物防腐剂在最佳配比下的抑菌圈直径达到19.81mm，表明该复配型生物防腐剂的抑菌效果得到了显著提高。因此，该复配型生物防腐剂为浓度是600mg/L的富马酸一钠与400mg/L的聚赖氨酸以7:1比例复配后再加上0.03%的茶多酚配制而成。
2.4该复配型生物防腐剂的抑菌谱研究
实验所得的15种菌的抑菌谱数据如表2：
表2抑菌谱实验数据统计
Table 2 Antibacterial spectrum data
由表2可见：该复配型生物防腐剂对革兰氏阳性、革兰氏阴性细菌均有很好的抑制效果，对耐热性的枯草芽孢杆菌、嗜冷菌（如荧光假单胞杆菌）也有很好的抑菌性，并且该复配型生物防腐剂对于15种细菌的抑菌圈直径大多比单独使用时要大；对霉菌和酵母菌的抑菌效果虽然相比细菌而言要差一些，但也有一定的抑菌效果，并且复合时比单独使用的效果好。由此可见该复配型生物防腐剂的抑菌效果普遍比单独使用时要强，抑菌谱变广，具有很好的抑菌效果。另外，聚赖氨酸的抑菌性虽然没有富马酸一钠好，但加入聚赖氨酸可以很好地扩大该复配型生物防腐剂的抑菌谱。
2.5该复配型生物防腐剂最低抑菌稀释度测定
对于该复配型生物防腐剂的最低抑菌稀释度测定的实验结果如表3：
表3该复配型生物防腐剂的最低抑菌稀释度测定
Table 3 The determination of minimum inhibitory dilution of the complex type ofbiological preservatives
从表3的结果发现，在稀释度很高的情况下（枯草芽孢杆菌除外），该复配型生物防腐剂仍然具有抑菌性，可见，该复配型生物防腐剂的抑菌效果较好，可以很好地抑制微生物的生长。结合文献对富马酸一钠、聚赖氨酸[张宗舟,赵紫平.DMF的抑菌谱研究[J].中国酿造,2005,10:12-13.]和该复配型防腐剂的抑菌谱测定，这也从侧面反映了该复配型生物防腐剂抑菌的广谱性。原因1983年VaaraM等已经找到，他们发现聚阳离子能破坏G-细菌的外膜，从而进一步杀死细菌[VaaraM,VaaraT.polycations sensitizeentric baceria to antibiotics.Antimicrob Agents Chemother,1983,24:114-122.]。1992年VaaraM等研究又发现，聚赖氨酸是通过吸附在G-细菌的外膜上释放出大量的脂多糖，破坏细菌外膜，而起到抑菌作用的[VaaraM,Agents that increase the permeability of theoutermembrane[J].MicrobiolRev,1992,56:395-411.]。查阅很多的文献报道了解到[刘慧,徐红华,王明丽等.聚赖氨酸抑菌性能的研究[J].东北农业大学学报,2000,31(3):297.]，目前的许多生物防腐剂都不能抑制革兰氏阴性菌，这也是使得生物防腐剂的使用受限的主要原因，而本实验研究为生物防腐剂扩大了抑菌谱，这是一种广谱抑菌防腐剂。
2.6该复配型生物防腐剂对休闲鱼片各项指标的影响
2.6.1菌落总数和感官指标
表437℃下添加该复配型生物防腐剂对休闲鱼片菌落总数、感官品质标变化的影响
Table4 Effect on total bacterial colonies and perceptions quality changing of Leisure filletswith the complex type of biological preservatives under 37℃
表5在47℃下添加该复配型生物防腐剂对休闲鱼片菌落总数、感官品质变化的影响
Table5 Effect on total bacterial colonies and perceptions quality changing of Leisure filletswith the complex type of biological preservatives under 47℃
表4和表5分别是37℃、47℃下休闲鱼片菌落总数和感官品质随保藏时间的变化。两表相比较，发现保藏温度对于休闲鱼片菌落总数和感官品质有一定的影响，37℃时添加该复配型生物防腐剂的鱼片菌落总数超标是在第13d，而47℃时却在5d；同样，37℃时不添加该复配型生物防腐剂的鱼片菌落总数超标是在第9d，而47℃时却在4d，且各个保藏时间下47℃下菌落总数均大大多于37℃。同时，37℃时休闲鱼片的感官品质的变化也比47℃时要缓慢，品质保留时间更长。可见较低的保藏温度有利于休闲鱼片的贮藏。分别研究表4和表5，发现添加该复配型生物防腐剂的鱼片菌落总数都要小于不添加该复配型生物防腐剂的鱼片。所以，该复配型生物防腐剂在一定程度上可以有效地抑制休闲鱼片中菌落的生长，并且可以很好地延缓其品质的变化。
2.6.2水分含量的变化
使用水分测定仪测定鱼片的水分含量，将37℃和47℃下休闲鱼片水分含量随保藏时间的变化整理后得图4和图5，
分别比较图4和图5中添加该复配型生物防腐剂与不添加该复配型生物防腐剂的图线变化，发现添加该复配型生物防腐剂的休闲鱼片的水分含量几乎都高于不添加该复配型生物防腐剂的鱼片，只是由于休闲鱼片本身的水分含量并不高，所以两者的差距不是很明显，但是仍然可以得出该复配型生物防腐剂在休闲鱼片保藏过程中具有一定的维持水分含量的作用，这对于维持鱼片口感品质具有重要贡献。比较图4和图5，发现相同保藏时间下，47℃时休闲鱼片的水分含量减少得要比37℃时快，这主要是因为保藏温度是影响保藏品水分含量的重要因素。因此，保藏过程中也要注意尽量避免高温。
2.6.3气味的变化
2.6.3.1主要气味成分分析
用PEN3型电子鼻测定完各个保藏时间下休闲鱼片的气味变化后，再使用PEN3系统自带的数据处理系统对数据进行LO分析，由于实验所得37℃和47℃下的LO分析结果一致，而37℃更接近于休闲鱼片的商业储藏温度20℃，因此以37℃下的LO图（图6）加以分析。
LO分析也即传感器最敏感气味的探究：观察图6和图7，得到图6中数据对于LO分析的总贡献率（横坐标的mainaxis值加上纵坐标的mainaxis值之和）为97.511%，图7中数据对于LO分析的总贡献率为98.819%，可见数据的可靠性很好。此外还发现电子鼻对于加和不加该复配型生物防腐剂的休闲鱼片最敏感的气味都是甲烷（横坐标值最大的点所代表的为传感器最敏感气味），但是不加该复配型生物防腐剂的休闲鱼片更加敏感（横坐标的值约为0.65），而加该复配型生物防腐剂的相对而言小些，约为0.57。因此气味中甲烷的指标变化最能反映该复配型生物防腐剂的效果。
2.6.3.2敏感气味成分的变化
从图8和图9来看，47℃下休闲鱼片中甲烷的G0/G值要略低于37℃下的值，这一方面是该复配型生物防腐剂的作用，另一方面是37℃下的休闲鱼片的水分含量略高的关系。此外，分别比较两图中加该复配型生物防腐剂和不加该复配型生物防腐剂的两条图线，发现不加该复配型生物防腐剂休闲鱼片中的甲烷的G0/G值基本都小于加该复配型生物防腐剂的休闲鱼片。而甲烷作为芳香类烷烃的前提物质，是鱼片散发鱼肉香的一种形式[CAPORASOF,SINKJD,DIMICKPS,etal.Volatile flavor constituents of ovineadipose tissue[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,1977,25(6):1230-1234.]。同时，甲烷的存在有利于防止或减弱腐败气体的产生。因此，加该复配型生物防腐剂可以有效防止腐败气体的产生。
2.6.3.3其它气味成分
如图10、11、12所示，可以明显地看出37℃下加该复配型生物防腐剂和不加的休闲鱼片在芳香成分、氮氧化合物以及硫化物三种气体成分的差别。芳香成分存在的量是鱼肉新鲜度的一个表征，芳香成分的存在，有利于提高水产食品的感官特性，对于风味的维持起到一定作用，同时也可以间接地作为评定休闲鱼片品质的一项指标。从图10可以发现，该复配型生物防腐剂对于休闲鱼片的芳香成分具有很好的维持作用，在第11d开始两条图线逐渐靠近，这是因为此时添加该复配型生物防腐剂的休闲鱼片也变质了。从图11看，37℃下加该复配型生物防腐剂和不加的休闲鱼片含氮化合物差别较大，加该复配型生物防腐剂后的休闲鱼片中的氮氧化合物的G0/G值几乎都低于不加的，而氮氧化合物的多少是判定休闲鱼片品质好坏的直接也是重要指标，所以对休闲鱼片中氮氧化合物研究很重要。从图12看，加该复配型生物防腐剂的休闲鱼片中的硫化物几乎都要高于不加的，而图12显示的硫化物主要是芳香成分的硫化物，这些硫化物（芳香成分）对于休闲鱼片的风味具有维持作用，对于鱼肉的品质也有辅助作用。因此，可以得出该复配型生物防腐剂具有减缓休闲鱼片产生腐败气味和维持其特有的芳香气味的结论。
2.6.4货架期计算
根据食品储存期加速测试法测定休闲鱼片添加该复配型生物防腐剂前后的货架期[任亚妮,车振明,靳学敏等.应用ASLT法预测软面包的货架期[J].食品研究与开发,2011,32(2):156-158.]。设定两个温度分别为37℃和47℃，由前面表4和表5的实验结果进行计算。表4和表5显示，休闲鱼片在37℃下的检测情况下添加该复配型生物防腐剂的保质期为11d或12d，不添加该复配型生物防腐剂的保质期为7d或8d；休闲鱼片在47℃下的检测情况下添加该复配型生物防腐剂的保质期为4d，不添加该复配型生物防腐剂的保质期为3d。计算货架期需要用到以下两个公式[华春珍,李珊,徐立群等.苯唑西林和万古霉素对金葡菌的抑菌圈直径和最低抑菌浓度的关系[J].杭州师范学院学报(自然科学版),2005,4(6):423-425.；David Kilcast，Persis Subramaniam.Stablityand shelf-life of food[M].Woodhead Publishing Limited and CRC Press LLC，CambridgeEngland，2000:1-13，107-123.]
温差为10℃的2个任意温度下的储存期的比率Q10有以下公式：
计算商业储存温度20℃，湿度60%时的货架期的最终公式为：
θs(T1)=θs(T2)×Q10ΔT/10      （2）
式中：θS(T1)为指定温度T1下的货架寿命；θS(T2)为特定温度T2下的货架寿命；ΔT为T1与T2的温度差。即得正常存储条件下的货架期。
由公式（1）和实验结果得：
添加该复配型生物防腐剂的休闲鱼片的
不添加该复配型生物防腐剂的休闲鱼片的
由公式（2）得商业储存温度20℃，湿度60%时的各个货架期为：
添加该复配型生物防腐剂的休闲鱼片的货架期为：
θs(T1)=θs(T2)×Q10 ΔT/10=12×31.7=78d
θs(T1)=θs(T2)×Q10 ΔT/10=11×2.751.7=61d
所以得到添加该复配型生物防腐剂的休闲鱼片的货架期为61d～78d。
不添加该复配型生物防腐剂的休闲鱼片的货架期为：
θs(T1)=θs(T2)×Q10 ΔT/10=8×2.671.7=42d
θs(T1)=θs(T2)×Q10 ΔT/10=7×2.331.7=29d
所以得到不添加该复配型生物防腐剂的休闲鱼片的货架期为29d～42d。
由以上计算可以得到：商业储存温度20℃、湿度60%时，不添加该复配型生物防腐剂的休闲鱼片的货架期为29d～42d，而添加该复配型生物防腐剂的休闲鱼片的货架期为61d～78d。发现添加该复配型生物防腐剂可以有效延长休闲鱼片的货架期，但是与市售的货架期仍有一定距离，主要是原料鱼片的水分含量（28%）要高于市售休闲鱼片的水分含量（低于20%），而水分含量是影响鱼片贮藏的主要因素之一。因此在使用该复配型生物防腐剂时还应控制好商品（休闲鱼片）的水分含量。
3结论与前景
该复配型生物防腐剂是一种抑菌效果较为明显的生物性防腐剂，最低抑菌浓度低，抑菌谱较为广泛，并且具有很好的安全性。运用在休闲鱼片中，从实验结果可以看出该复配型生物防腐剂具有很好的运用前景，不但可以抑制休闲鱼片中菌落的生长，还能维持水分含量、感官品质以及多种气味成分。但是，实验同时也表明，要使得该复配型生物防腐剂发挥更好的效果，休闲鱼片在加工过程中也应该有效地控制其水分含量，保藏过程中也应该尽量在低温环境下。

Claims (2)

1.一种复配型生物防腐剂，其特征在于：该复配型生物防腐剂是由300～800mg/L的富马酸一钠和200～500mg/L的聚赖氨酸按照1：9～11:1的体积比例复配后再加入0.02～0.04%的茶多酚组成的，茶多酚的百分含量是占总的该复配型生物防腐剂的质量含量。
2.根据权利要求1所述的复配型生物防腐剂，其特征在于：所述复配型生物防腐剂是由600mg/L的富马酸一钠和400mg/L的聚赖氨酸按照7：1的比例复配后再加入0.03%的茶多酚组成的。
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