CN103998933A - 鉴定调节苦味的化合物的测定 - Google Patents

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Abstract

本发明TAS2R受体TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的激动剂。将激动剂分配给这些受体使得鉴定调节苦味的化合物的测定成为可能。例如，本发明提供鉴定抑制由这些激动剂引起的苦味的化合物的方法。本发明还提供鉴定选择性抑制由这些激动剂引起的苦味的化合物的方法。本发明进一步提供鉴定模拟由这些激动剂引起的苦味的化合物的方法。本发明还提供鉴定增强由这些激动剂引起的苦味的化合物的方法。

Description

鉴定调节苦味的化合物的测定
相关申请的交叉引用
本申请要求2011年10月20日提交的美国临时申请61/549,693的优先权，所述申请通过引用整体并入本文。
发明领域
本发明涉及鉴定苦味调节剂的测定。
发明背景
味觉(如人的味觉)可以鉴别至少五种传统的味道：甜味、酸味、咸味、苦味和鲜味(美味)。包括植物、食物、食物成分和营养剂的许多营养物质包含促苦味剂和/或具有苦味。此外，对保持或改善健康重要的许多药物物质包含促苦味剂和/或具有苦味。虽然某些食品和消费品具有合乎需要的苦味，包括咖啡、啤酒和黑巧克力，但在许多情况下，消费者不喜欢这些苦味。例如，许多消费者不喜欢某些促苦味剂和/或苦味的感觉并且回避具有不希望的促苦味剂或苦味的食物或药物产品而偏好具有较低含量的不希望的促苦味剂或苦味减小或完全没有苦味的食物和药物产品。对含有不希望的促苦味剂和/或具有不希望的苦味的产品的这种排斥可能由存在于口腔和/或胃肠道中的苦味受体活化介导的促苦味剂和/或苦味的感觉所引起。在很多情况下，消费者不喜欢促苦味剂和/或苦味妨碍或抑制了食物的营养质量和安全的改善，因为不能使用希望的水平的包含促苦味剂和/或具有苦味的营养剂或防腐剂。此外，对某些药剂的促苦味剂或苦味的厌恶或排斥使使用这些药剂的处方方案的顺应性受到负面影响。
例如，在食品的制备中使用的一些添加剂、防腐剂、乳化剂和食材包含促苦味剂和/或具有苦味。虽然这些添加剂、防腐剂、乳化剂和食材可能影响食品的味道，但是它们可能对于改善食品的保存期限、营养质量或质地也是重要的。例如，高血压和心血管疾病的日益增加的趋势部分是由于西方饮食的高钠摄入。因此，用另一种咸味化合物代替氯化钠是合乎需要的。最常用的氯化钠替代物是氯化钾，氯化钾对一部分人来说除了具有咸味之外还具有苦味。氯化钾的苦味限制了它可以用于代替食物中的氯化钠而不给对它敏感的人群产生不希望的苦味的范围。
另一种常用的食品添加剂乳酸钠具有广泛的抗微生物作用，对抑制酸败和致病细菌的生长有效，并且通常在食品(例如肉和禽产品)中使用来延长保存期限并增加食物安全性。然而，由于其钠含量，乳酸钠作为防腐剂是不合要求的。乳酸钾具有类似的抗微生物性质，已经用于代替乳酸钠。然而，乳酸钾也与苦味相关，这种苦味限制了它可以用于代替食物中的乳酸钠而不引起不希望的苦味的范围。
此外，肥胖和糖尿病的日益增加的发病率部分是由于许多饮食的高糖摄入。因此，用另一种甜味化合物代替糖是合乎需要的。可以用于减少食物中的糖的人造和天然糖替代物往往与苦味相关，这也限制了其用于代替食物中的糖而不引起不利的苦味的范围。例如，常用的糖替代物是乙酰磺胺酸钾，其除了具有甜味之外也具有苦味。
不受理论限制，促苦味剂、促甜味剂和促鲜味剂和化合物通常通过G-蛋白偶联受体引发味觉反应，而促咸味剂和促酸味剂和化合物通常被假设是通过离子通道引发味觉反应。苦味受体属于诱导响应于促苦味剂的胞内钙浓度变化的G-蛋白偶联受体的TAS2R(也称为T2R)家族。TAS2R受体通过味蛋白(一种味道特异性的G-蛋白)起作用。有至少二十五种不同的TAS2R家族成员，显示苦味的感觉是复杂的，其涉及一些不同促味剂-受体相互作用。一些TAS2R成员，如TAS2R60，是不具有鉴定的配体的孤儿受体。能够调节口腔和/或胃肠道中的苦味受体的活化和/或信号传导的化合物可以有效地在食物和药物产品中获得促苦味剂或苦味物质的希望的使用水平，而不引起消费者由于感觉增加的水平的促苦味剂或苦味厌恶这些产品。在一些情况下，苦味受体和苦味的阻滞剂或调节剂可以通过存在于口腔和/或胃肠道中的苦味受体和/或味道转导信号传导机制减小促苦味剂和/或苦味的感觉。
传统上，在食物制备和药物中，使用甜味剂和其它促味剂(包括盐)来掩蔽苦味。然而，在一些情况下，这是不希望的或不足够的，因为它可能改变、掩蔽或影响食品中的其它味道/气味/感觉(例如，非苦味或希望的苦味)。此外，该途径很少能够完全地掩蔽存在于这些食品或药物中的苦味。因此，优选减小苦味的化合物而不是掩蔽剂，或除了掩蔽剂之外减小苦味的化合物是优选的。
因此，提供鉴定可以加入包含促苦味剂或具有苦味的食品、消费品和药物中的化合物的测定是合乎需要的，所述化合物用于消除、调节或减小所述促苦味剂或苦味的感觉或减小口腔和/或胃肠道中的苦味受体的相应活化。类似地，鉴定不活化其它苦味受体的化合物(即，具有脱靶影响的化合物)是合乎需要的。
发明概述
本发明基于申请人在本文公开的发现，即TAS2R受体TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的激动剂。将激动剂分配给这些受体使得鉴定调节苦味的化合物的测定成为可能。例如，本发明提供鉴定抑制由这些激动剂引起的苦味的化合物的方法。本发明还提供鉴定选择性抑制由这些激动剂引起的苦味的化合物的方法。本发明进一步提供鉴定模拟由这些激动剂引起的苦味的化合物的方法。本发明还提供鉴定增强由这些激动剂引起的苦味的化合物的方法。
鉴定抑制苦味的化合物的方法
本发明的一个方面提供鉴定抑制由KCl引起的苦味的化合物的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一细胞和第二细胞，其中第一和第二细胞各自表达选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的一者或多者的苦味受体，其中第一和第二细胞表达相同的一种或多种苦味受体；使第一细胞与活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的一者或多者的促味剂接触；使第二细胞与测试化合物和促味剂接触；测定第一和第二细胞的苦味受体活化；和比较第一细胞的苦味受体活化与第二细胞的苦味受体活化，其中如果第二细胞的苦味受体活性低于第一细胞的苦味受体活性，则测试化合物是由KCl引起的苦味的抑制剂。
在一些实施方案中，所述方法包括提供表达选自：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的一者或多者的苦味受体的细胞；使细胞与活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的一者或多者的促味剂接触；进行对苦味受体活化的第一测定；洗涤细胞；使细胞与测试化合物和促味剂接触；进行对苦味受体活化的第二测定；和比较第一测定的苦味受体活化与第二测定的苦味受体活化，其中如果第二测定的苦味受体活性低于第一测定的苦味受体活性，则测试化合物是由KCl引起的苦味的抑制剂。
本发明的另一方面提供鉴定抑制由乳酸钾引起的苦味的化合物的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一细胞和第二细胞，其中第一和第二细胞各自表达选自：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的一者或多者的苦味受体，其中第一和第二细胞表达相同的一种或多种苦味受体；使第一细胞与活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的一者或多者的促味剂接触；使第二细胞与测试化合物和促味剂接触；测定第一和第二细胞的苦味受体活化；和比较第一细胞的苦味受体活化与第二细胞的苦味受体活化，其中如果第二细胞的苦味受体活性低于第一细胞的苦味受体活性，则测试化合物是由乳酸钾引起的苦味的抑制剂。
在一些实施方案中，所述方法包括提供表达选自：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的一者或多者的苦味受体的细胞；使细胞与活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的一者或多者的促味剂接触；进行对苦味受体活化的第一测定；洗涤细胞；使细胞与测试化合物和促味剂接触；进行对苦味受体活化的第二测定；和比较第一测定的苦味受体活化与第二测定的苦味受体活化，其中如果第二测定的苦味受体活性低于第一测定的苦味受体活性，则测试化合物是由乳酸钾引起的苦味的抑制剂。
本发明的另一方面提供鉴定抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的化合物的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一细胞和第二细胞，其中第一和第二细胞各自表达选自：TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的一者或多者的苦味受体，其中第一和第二细胞表达相同的一种或多种苦味受体；使第一细胞与活化TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的一者或多者的促味剂接触；使第二细胞与测试化合物和促味剂接触；测定第一和第二细胞的苦味受体活化；和比较第一细胞的苦味受体活化与第二细胞的苦味受体活化，其中如果第二细胞的苦味受体活性低于第一细胞的苦味受体活性，则测试化合物是由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的抑制剂。
在一些实施方案中，所述方法包括提供表达选自：TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的一者或多者的苦味受体的细胞；使细胞与活化TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的一者或多者的促味剂接触；进行对苦味受体活化的第一测定；洗涤细胞；使细胞与测试化合物和促味剂接触；进行对苦味受体活化的第二测定；和比较第一测定的苦味受体活化与第二测定的苦味受体活化，其中如果第二测定的苦味受体活性低于第一测定的苦味受体活性，则测试化合物是由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的抑制剂。
在一些实施方案中，所述促味剂是KCl、乳酸钾、乙酰磺胺酸钾或普通苦味化合物。在一些实施方案中，所述普通苦味化合物是苯甲地那铵或糖精地那铵。
在一些实施方案中，所述苦味受体与G蛋白复合。在一些实施方案中，所述G蛋白是Gq蛋白、α转导素或α味蛋白。在一些实施方案中，所述Gq蛋白是Gα15蛋白。
在一些实施方案中，所述苦味受体活性是通过测量胞内钙浓度来测定的。在一些实施方案中，所述胞内钙浓度是使用诸如Fluo-4或钙-3染料的钙敏感性荧光染料测定的。
在一些实施方案中，本方法的细胞存在于体外细胞系中。在一些实施方案中，所述细胞存在于体外细胞系的小组中。
鉴定选择性抑制苦味的化合物的方法
本发明的一方面提供鉴定选择性抑制由KCl引起的苦味的化合物的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一和第二小组的细胞系，其中每个小组包括表达选自：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的一者或多者的苦味受体的细胞系，并且每种受体在至少一种细胞系中表达，且每个小组含有相同的细胞系；使第一小组中的每种细胞系与活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少两者的促味剂接触；使第二小组中的细胞系与测试化合物和促味剂接触；测定第一和第二小组中的每种细胞系的苦味受体活化；和比较第一小组中的每种细胞系的苦味受体活化与第二小组中相应细胞的苦味受体活化，其中如果与第一小组相比，第二小组中的选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少两者的苦味受体活性较低，则测试化合物是由KCl引起的苦味的选择性抑制剂。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在第二小组的至少三种细胞系中较低，其中所述细胞系选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60，则测试化合物选择性抑制由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在第二小组的至少四种细胞系中较低，其中所述细胞系选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60，则测试化合物选择性抑制由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在第二小组的至少五种细胞系中较低，其中所述细胞系选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60，则测试化合物选择性抑制由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在针对TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60细胞系的每一者的第二小组中较低，则测试化合物选择性抑制由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，第一和第二小组中的每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60，其中每种受体在每个小组的至少一种细胞系中表达。在一些实施方案中，与第一小组相比，在第二小组中所述测试化合物不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50和TAS2R55苦味受体活性。在一些实施方案中，将第一小组的每种细胞系在苦味受体活化测定之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。
本发明的另一方面提供鉴定选择性抑制由乳酸钾引起的苦味的化合物的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一和第二小组的细胞系，其中小组包括表达选自：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的一者或多者的苦味受体的细胞系，并且每种受体在至少一种细胞系中表达，且每个小组含有相同的细胞系；使第一小组中的每种细胞系与活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少两者的促味剂接触；使第二小组中的细胞系与测试化合物和促味剂接触；测定第一和第二小组中的每种细胞系的苦味受体活化；和比较第一小组中的每种细胞系的苦味受体活化与第二小组中相应细胞的苦味受体活化，其中如果与第一小组相比，第二小组中的选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少两者的苦味受体活性较低，则测试化合物是由乳酸钾引起的苦味的选择性抑制剂。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在第二小组的至少三种细胞系中较低，其中所述细胞系选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60，则测试化合物选择性抑制由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在第二小组的至少四种细胞系中较低，其中所述细胞系选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60，则测试化合物选择性抑制由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在第二小组的至少五种细胞系中较低，其中所述细胞系选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60，则测试化合物选择性抑制由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在第二小组的至少六种细胞系中较低，其中所述细胞系选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60，则测试化合物选择性抑制由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在第二小组的TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60细胞系的每一者中较低，则测试化合物选择性抑制由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，第一和第二小组中的每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60，其中每种受体在每个小组的至少一种细胞系中表达。在一些实施方案中，与第一小组相比，在第二小组中所述测试化合物不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50和TAS2R55苦味受体活性。在一些实施方案中，将第一小组的每种细胞系在苦味受体活化测定之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。
本发明的另一方面提供鉴定选择性抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的化合物的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一和第二小组的细胞系，其中所述小组包括表达选自：TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的一者或多者的苦味受体的细胞系，且每种受体在至少一种细胞系中表达并且每种受体在至少一种细胞系中表达且每个小组含有相同的细胞系；使第一小组中的每种细胞系与活化TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少两者的促味剂接触；使第二小组中的细胞系与测试化合物和促味剂接触；测定第一和第二小组中的每种细胞系的苦味受体活化；和比较第一小组中的每种细胞系的苦味受体活化与第二小组中相应细胞的苦味受体活化，其中如果与第一小组相比，在第二小组中选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少两者的苦味受体活性较低，则测试化合物是由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的选择性抑制剂。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在第二小组的至少三种细胞系中较低，其中所述细胞系选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44，则测试化合物选择性抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在第二小组的至少四种细胞系中较低，其中所述细胞系选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44，则测试化合物选择性抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在第二小组的至少五种细胞系中较低，其中所述细胞系选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44，则测试化合物选择性抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在第二小组的至少六种细胞系中较低，其中所述细胞系选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44，则测试化合物选择性抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在第二小组的TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44细胞系的每一者中较低，则测试化合物选择性抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，第一和第二小组中的每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60，其中每种受体在每个小组的至少一种细胞系中表达。在一些实施方案中，与第一小组相比，在第二小组中所述测试化合物不诱导TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60苦味受体活性。在一些实施方案中，将第一小组的每种细胞系在苦味受体活化测定之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。
在一些实施方案中，所述促味剂是KCl、乳酸钾、乙酰磺胺酸钾或普通苦味化合物。在一些实施方案中，所述普通苦味化合物是苯甲地那铵或糖精地那铵。
在一些实施方案中，所述苦味受体与G蛋白复合。在一些实施方案中，所述G蛋白是Gq蛋白、α转导素或α味蛋白。在一些实施方案中，所述Gq蛋白是Gα15蛋白。
在一些实施方案中，所述苦味受体活性是通过测量胞内钙浓度来测定的。在一些实施方案中，所述胞内钙浓度是使用诸如Fluo-4或钙-3染料的钙敏感性荧光染料测定的。
在一些实施方案中，本方法的细胞存在于体外细胞系中。在一些实施方案中，所述细胞存在于体外细胞系的小组中。
鉴定模拟苦味的化合物的方法
本发明的一方面提供鉴定模拟由KCl引起的苦味的化合物的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一和第二小组的细胞系，其中小组包括表达选自：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的一种或多种苦味受体的细胞系，并且每种受体在至少一种细胞系中表达且每个小组含有相同的细胞系；使第一小组中的每种细胞系与阴性对照接触；使第二小组中的每种细胞系与测试化合物接触；测定第一和第二小组中的每种细胞系的苦味受体活化；和比较第一小组中的每种细胞系的苦味受体活化与第二小组中相应细胞的苦味受体活化，其中与第一小组相比，如果在第二小组中所述测试化合物诱导TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60苦味受体活性，则测试化合物模拟由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，第一和第二小组中的每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60，其中每种受体在每个小组的至少一种细胞系中表达。在一些实施方案中，与第一小组相比，在第二小组中所述测试化合物不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50和TAS2R55苦味受体活性。在一些实施方案中，将第一小组的每种细胞系在苦味受体活化测定之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。在一些实施方案中，所述阴性对照是添加测试化合物之前的测定缓冲液。
本发明的另一方面提供鉴定模拟由乳酸钾引起的苦味的化合物的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一和第二小组的细胞系，其中小组包括表达选自：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的一种或多种苦味受体的细胞系，并且每种受体在至少一种细胞系中表达且每个小组含有相同的细胞系；使第一小组的每种细胞系与阴性对照接触；使第二小组中的每种细胞系与测试化合物接触；测定第一和第二小组中的每种细胞系的苦味受体活化；和比较第一小组中的每种细胞系的苦味受体活化与第二小组中相应细胞的苦味受体活化，其中如果与第一小组相比，在第二小组中所述测试化合物诱导TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60苦味受体活性，则测试化合物模拟由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，第一和第二小组中的每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60，其中每种受体在每个小组的至少一种细胞系中表达。在一些实施方案中，与第一小组相比，在第二小组中所述测试化合物不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50和TAS2R55苦味受体活性。在一些实施方案中，将第一小组的每种细胞系在苦味受体活化测定之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。在一些实施方案中，所述阴性对照是添加测试化合物之前的测定缓冲液。
本发明的另一方面提供鉴定模拟由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的化合物的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一和第二小组的细胞系，其中小组包括表达选自：TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的一种或多种苦味受体的细胞系，并且每种受体在至少一种细胞系中表达且每个小组含有相同的细胞系；使第一小组的每种细胞系与阴性对照接触；使第二小组中的每种细胞系与测试化合物接触；测定第一和第二小组中的每种细胞系的苦味受体活化；和比较第一小组中的每种细胞系的苦味受体活化与第二小组中相应细胞的苦味受体活化，其中如果与第一小组相比，在第二小组中所述测试化合物诱导TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44苦味受体活性，则测试化合物模拟由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，第一和第二小组中的每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60，其中每种受体在每个小组的至少一种细胞系中表达。在一些实施方案中，与第一小组相比，在第二小组中所述测试化合物不诱导TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60苦味受体活性。在一些实施方案中，将第一小组的每种细胞系在苦味受体活化测定之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。在一些实施方案中，所述阴性对照是添加测试化合物之前的测定缓冲液。
在一些实施方案中，所述苦味受体与G蛋白复合。在一些实施方案中，所述G蛋白是Gq蛋白、α转导素或α味蛋白。在一些实施方案中，所述Gq蛋白是Gα15蛋白。
在一些实施方案中，苦味受体活性是通过测量胞内钙浓度来测定的。在一些实施方案中，胞内钙浓度是使用诸如Fluo-4或钙-3染料的钙敏感性荧光染料来测定的。
在一些实施方案中，本方法的细胞存在于体外细胞系中。在一些实施方案中，所述细胞存在于体外细胞系的小组中。
鉴定增强苦味的化合物的方法
本发明的一方面提供鉴定增强由KCl引起的苦味的化合物的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一细胞和第二细胞，所述细胞各自表达选自：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的一种或多种苦味受体；使第一细胞与活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的一者或多者的促味剂接触；使第二细胞与测试化合物和促味剂接触；测定第一和第二细胞的苦味受体活化；和比较所述第一细胞的苦味受体活化与所述第二细胞的苦味受体活化，其中如果第二细胞的苦味受体活性高于第一细胞的苦味受体活性，则测试化合物是由KCl引起的苦味促进剂。在一些实施方案中，所述方法包括提供表达选自：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的一者或多者的苦味受体的细胞；使细胞与活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的一者或多者的促味剂接触；进行对苦味受体活化的第一测定；洗涤细胞；使细胞与测试化合物和促味剂接触；进行对苦味受体活化的第二测定；和比较第一测定的苦味受体活化与第二测定的苦味受体活化，其中如果第二测定的苦味受体活性高于第一测定的苦味受体活性，则测试化合物是由KCl引起的苦味的促进剂。
本发明的另一方面提供鉴定增强由乳酸钾引起的苦味的化合物的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一细胞和第二细胞，所述细胞各自表达选自：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的一者或多者的苦味受体；使第一细胞与活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的一者或多者的促味剂接触；使第二细胞与测试化合物和促味剂接触；测定第一和第二细胞的苦味受体活化；和比较所述第一细胞的苦味受体活化与所述第二细胞的苦味受体活化，其中如果第二细胞的苦味受体活性高于第一细胞的苦味受体活性，则测试化合物是由乳酸钾引起的苦味的促进剂。在一些实施方案中，所述方法包括提供表达选自：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的一者或多者苦味受体；使细胞与活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的一者或多者的促味剂接触；进行对苦味受体活化的第一测定；洗涤细胞；使细胞与测试化合物和促味剂接触；进行对苦味受体活化的第二测定；和比较第一测定的苦味受体活化与第二测定的苦味受体活化，其中如果第二测定的苦味受体活性高于第一测定的苦味受体活性，则测试化合物是由乳酸钾引起的苦味的促进剂。
本发明的另一方面提供鉴定增强由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的化合物的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一细胞和第二细胞，所述细胞各自表达选自：TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的一者或多者的苦味受体；使第一细胞与活化TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的一者或多者的促味剂接触；使第二细胞与测试化合物和促味剂接触；测定第一和第二细胞的苦味受体活化；和比较第一细胞的苦味受体活化与第二细胞的苦味受体活化，其中如果第二细胞的苦味受体活性高于第一细胞的苦味受体活性，则测试化合物是由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的促进剂。在一些实施方案中，所述方法包括提供表达选自：TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的一者或多者的苦味受体；使细胞与活化TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的一者或多者的促味剂接触；进行对苦味受体活化的第一测定；洗涤细胞；使细胞与测试化合物和促味剂接触；进行对苦味受体活化的第二测定；和比较第一测定的苦味受体活化与第二测定的苦味受体活化，其中如果第二测定的苦味受体活性高于第一测定的苦味受体活性，则测试化合物是由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的促进剂。
在一些实施方案中，所述促味剂是KCl、乳酸钾、乙酰磺胺酸钾或普通苦味化合物。在一些实施方案中，所述普通苦味化合物是苯甲地那铵或糖精地那铵。
在一些实施方案中，所述苦味受体与G蛋白复合。在一些实施方案中，所述G蛋白是Gq蛋白、α转导素或α味蛋白。在一些实施方案中，所述Gq蛋白是Gα15蛋白。
在一些实施方案中，所述苦味受体活性是通过测量胞内钙浓度来测定的。在一些实施方案中，所述胞内钙浓度是使用诸如Fluo-4或钙-3染料的钙敏感性荧光染料来测定的。
在一些实施方案中，本方法的细胞存在于体外细胞系中。在一些实施方案中，所述细胞存在于体外细胞系的小组中。
确定促苦味剂是否存在于组合物中的方法
本发明的一方面提供确定KCl是否存在于组合物中的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一和第二小组的细胞系，其中每种细胞系表达选自以下的一种或多种苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60，并且每种受体在至少一种细胞系中表达且每个小组含有相同的细胞系；使第一小组的每种细胞系与阴性对照接触；使第二小组中的每种细胞系与组合物接触；测定第一和第二小组中的每种细胞系的苦味受体活化；和比较第一小组中的每种细胞系的苦味受体活化与第二小组中相应细胞的苦味受体活化，其中如果与第一小组相比在第二小组中组合物诱导TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60苦味受体活性，并且与第一小组相比在第二小组中组合物不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50和TAS2R55苦味受体活性，则KCl存在于组合物中。在一些实施方案中，将第一小组的每种细胞系在苦味受体活化测定之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。在一些实施方案中，所述阴性对照是添加组合物之前的测定缓冲液。
本发明的另一方面提供确定乳酸钾是否存在于组合物中的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一和第二小组的细胞系，其中每种细胞系表达选自以下的一种或多种苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60，并且每种受体在至少一种细胞系中表达且每个小组含有相同的细胞系；使第一小组的每种细胞系与阴性对照接触；使第二小组中的每种细胞系与组合物接触；测定第一和第二小组中的每种细胞系的苦味受体活化；和比较第一小组中的每种细胞系的苦味受体活化与第二小组中相应细胞的苦味受体活化，其中与第一小组相比在第二小组中组合物诱导TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60苦味受体活性，并且与第一小组相比在第二小组中组合物不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50和TAS2R55苦味受体活性，则乳酸钾存在于组合物中。在一些实施方案中，将第一小组的每种细胞系在苦味受体活化测定之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。在一些实施方案中，所述阴性对照是添加组合物之前的测定缓冲液。
本发明的另一方面提供确定乙酰磺胺酸钾是否存在于组合物中的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一和第二小组的细胞系，其中每种细胞系表达选自以下的一种或多种苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60，并且每种受体在至少一种细胞系中表达且每个小组含有相同的细胞系；使第一小组的每种细胞系与阴性对照接触；使第二小组中的每种细胞系与组合物接触；测定第一和第二小组中的每种细胞系的苦味受体活化；和比较第一小组中的每种细胞系的苦味受体活化与第二小组中相应细胞的苦味受体活化，其中如果与第一小组相比在第二小组中组合物诱导TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44苦味受体活性，并且与第一小组相比在第二小组中组合物不诱导TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60苦味受体活性，则乙酰磺胺酸钾存在于组合物中。在一些实施方案中，将第一小组的每种细胞系在苦味受体活化测定之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。在一些实施方案中，所述阴性对照是添加组合物之前的测定缓冲液。
在一些实施方案中，所述组合物是食品提取物。在一些实施方案中，所述组合物包含药物活性成分。
在一些实施方案中，所述苦味受体与G蛋白复合。在一些实施方案中，所述G蛋白是Gq蛋白、α转导素或α味蛋白。在一些实施方案中，所述Gq蛋白是Gα15蛋白。
在一些实施方案中，苦味受体活性是通过测量胞内钙浓度来测定的。在一些实施方案中，胞内钙浓度是使用诸如Fluo-4或钙-3染料的钙敏感性荧光染料来测定的。
在一些实施方案中，本方法的细胞存在于体外细胞系中。在一些实施方案中，所述细胞存在于体外细胞系的小组中。
本发明具体的实施方案在以下编号的段落中示出：
1.一种鉴定抑制由KCl引起的苦味的化合物的方法，其包括：
a)提供第一和第二细胞，
其中每种细胞表达独立选自以下的一种或多种苦味受体：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60苦味受体，并且
其中每种细胞表达相同的一种或多种苦味受体；
b)使所述第一细胞与促味剂接触，
其中所述促味剂活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60苦味受体的一者或多者；
c)使所述第二细胞与测试化合物和所述促味剂接触；
d)测定所述第一和第二细胞的苦味受体活化；和
e)比较所述第一细胞的苦味受体活化与所述第二细胞的苦味受体活化，
其中如果所述第二细胞的苦味受体活性低于所述第一细胞的苦味受体活性，则测试化合物是由KCl引起的苦味的抑制剂。
2.一种鉴定抑制由乳酸钾引起的苦味的化合物的方法，其包括：
a)提供第一和第二细胞，
其中每种细胞表达独立选自以下的一种或多种苦味受体：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60苦味受体，并且
其中每种细胞表达相同的一种或多种苦味受体；
b)使所述第一细胞与促味剂接触，
其中所述促味剂活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60苦味受体的一种或多种；
c)使所述第二细胞与测试化合物和所述促味剂接触；
d)测定所述第一和第二细胞的苦味受体活化；和
e)比较所述第一细胞的苦味受体活化与所述第二细胞的苦味受体活化，
其中如果所述第二细胞的苦味受体活性低于所述第一细胞的苦味受体活性，则测试化合物是由乳酸钾引起的苦味的抑制剂。
3.根据段落1-2中任一项所述的方法，其中所述促味剂是KCl、乳酸钾或普通苦味化合物。
4.根据段落1-3中任一项所述的方法，其中所述苦味受体与G蛋白复合。
5.根据段落4所述的方法，其中所述G蛋白是Gq蛋白、α转导素或α味蛋白。
6.根据段落5所述的方法，其中所述Gq蛋白是Gα15蛋白。
7.根据段落1-6中任一项所述的方法，其中所述苦味受体活性是通过测量胞内钙浓度来测定的。
8.根据段落7所述的方法，其中所述胞内钙浓度是使用钙敏感性荧光染料来测定的。
9.根据段落8所述的方法，其中所述钙敏感性荧光染料是Fluo-4或钙-3染料。
10.根据段落1-9中任一项所述的方法，其中所述第一和第二细胞存在于体外细胞系中。
11.根据段落1-9中任一项所述的方法，其中所述第一和第二细胞存在于体外细胞系小组中。
12.根据段落1-11中任一项所述的方法，其中所述普通苦味化合物是是苯甲地那铵或糖精地那铵(denatonium saccharide)。
13.一种鉴定选择性抑制由KCl引起的苦味的化合物的方法，其包括：
a)提供第一和第二小组的细胞系，
其中每种细胞系包括表达选自以下的苦味受体的细胞：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60苦味受体，
其中每种受体在至少一种细胞系中表达，并且
其中所述第一和第二小组包括相同的细胞系；
b)使所述第一小组中的每种细胞系与促味剂接触，
其中所述促味剂活化选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少两者；
c)使所述第二小组中的每种细胞系与测试化合物和所述促味剂接触；
d)测定每种细胞系的苦味受体活化；
其中，如果与第一小组相比，在第二小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少两者的苦味受体活性较低，则测试化合物是由KCl引起的苦味的选择性抑制剂。
14.根据段落13所述的方法，其中与第一小组相比，在第二小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少三者的苦味受体活性较低。
15.根据段落13所述的方法，其中与第一小组相比，在第二小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少四者的苦味受体活性较低。
16.根据段落13所述的方法，其中与第一小组相比，在第二小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少五者的苦味受体活性较低。
17.根据段落13所述的方法，其中与第一小组相比，在第二小组中TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的苦味受体活性较低。
18.根据段落13-17中任一项所述的方法，其中每个小组包括表达选自以下的苦味受体的细胞系：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60苦味受体，
其中每种受体在至少一种细胞系中表达，并且
其中第一和第二小组包括相同的细胞系。
19.根据段落18所述的方法，其中与第一小组相比，在第二小组中测试化合物不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50和TAS2R55苦味受体活性。
20.一种鉴定选择性抑制由乳酸钾引起的苦味的化合物的方法，其包括：
a)提供第一和第二小组的细胞系，
其中每种细胞系包括表达选自以下的苦味受体的细胞：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60苦味受体，
其中每种受体在至少一种细胞系中表达，并且
其中所述第一和第二小组包括相同的细胞系；
b)使所述第一小组中的每种细胞系与促味剂接触，
其中所述促味剂活化选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少两者；
c)使所述第二小组中的每种细胞系与测试化合物和所述促味剂接触；
d)测定每种细胞系的苦味受体活化；
其中，如果与第一小组相比，在第二小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少两者的苦味受体活性较低，则测试化合物是由乳酸钾引起的苦味的选择性抑制剂。
21.根据段落20所述的方法，其中与第一小组相比，在第二小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少三者的苦味受体活性较低。
22.根据段落20所述的方法，其中与第一小组相比，在第二小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少四者的苦味受体活性较低。
23.根据段落20所述的方法，其中与第一小组相比，在第二小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少五者的苦味受体活性较低。
24.根据段落20所述的方法，其中与第一小组相比，在第二小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少六者的苦味受体活性较低。
25.根据段落13所述的方法，其中与第一小组相比，在第二小组中TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的苦味受体活性较低。
26.根据段落20-25中任一项所述的方法，其中每个小组包括表达选自以下的苦味受体的细胞系：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60苦味受体，
其中每种受体在至少一种细胞系中表达，并且
其中第一和第二小组包括相同的细胞系。
27.根据段落26所述的方法，其中与第一小组相比，在第二小组中测试化合物不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50和TAS2R55苦味受体活性。
28.根据段落13-27中任一项所述的方法，其中所述促味剂是KCl、乳酸钾或普通苦味化合物。
29.根据段落13-28中任一项所述的方法，其中所述苦味受体与G蛋白复合。
30.根据段落29所述的方法，其中所述G蛋白是Gq蛋白、α转导素或α味蛋白。
31.根据段落30所述的方法，其中所述Gq蛋白是Gα15蛋白。
32.根据段落28-31中任一项所述的方法，其中苦味受体活性是通过测量胞内钙浓度来测定的。
33.根据段落32所述的方法，其中胞内钙浓度是使用钙敏感性荧光染料来测定的。
34.根据段落33所述的方法，其中所述钙敏感性荧光染料是Fluo-4或钙-3染料。
35.根据段落28-34中任一项所述的方法，其中所述普通苦味化合物是苯甲地那铵或糖精地那铵。
36.根据段落13-34中任一项所述的方法，其中将来自第一小组的细胞系在苦味受体活化测定之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。
37.一种鉴定增强由KCl引起的苦味的化合物的方法，所述方法包括：
a)提供第一和第二细胞，
其中每种细胞表达独立选自以下的一种或多种苦味受体：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60苦味受体；
b)使所述第一细胞与促味剂接触，
其中所述促味剂活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60苦味受体的一者或多者；
c)使所述第二细胞与测试化合物和所述促味剂接触；
d)测定所述第一和第二细胞的苦味受体活化；和
e)比较所述第一细胞的苦味受体活化与所述第二细胞的苦味受体活化，
其中如果所述第二细胞的苦味受体活性高于所述第一细胞的苦味受体活性，则测试化合物增强由KCl引起的苦味。
38.一种鉴定增强由乳酸钾引起的苦味的化合物的方法，其包括：
a)提供第一和第二细胞，
其中每种细胞表达独立选自以下的一种或多种苦味受体：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60苦味受体；
b)使所述第一细胞与促味剂接触，
其中所述促味剂活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60苦味受体的一种或多种；
c)使所述第二细胞与测试化合物和所述促味剂接触；
d)测定所述第一和第二细胞的苦味受体活化；和
e)比较所述第一细胞的苦味受体活化与所述第二细胞的苦味受体活化，
其中如果所述第二细胞的苦味受体活性高于所述第一细胞的苦味受体活性，则测试化合物增强由乳酸钾引起的苦味。
39.根据段落37-38中任一项所述的方法，其中所述促味剂是KCl、乳酸钾或普通苦味化合物。
40.根据段落37-39中任一项所述的方法，其中所述苦味受体与G蛋白复合。
41.根据段落40所述的方法，其中所述G蛋白是Gq蛋白、α转导素或α味蛋白。
42.根据段落41所述的方法，其中所述Gq蛋白是Gα15蛋白。
43.根据段落37-42中任一项所述的方法，其中所述苦味受体活性是通过测量胞内钙浓度来测定的。
44.根据段落43所述的方法，其中所述胞内钙浓度是使用钙敏感性荧光染料来测定的。
45.根据段落44所述的方法，其中所述钙敏感性荧光染料是Fluo-4或钙-3染料。
46.根据段落37-45中任一项所述的方法，其中所述细胞存在于体外细胞系中。
47.根据段落37-45中任一项所述的方法，其中所述细胞存在于一组体外细胞系中。
48.根据段落39-47中任一项所述的方法，其中所述普通苦味化合物是苯甲地那铵或糖精地那铵。
49.根据段落37-48中任一项所述的方法，其中将所述第一细胞在苦味受体活化测定之后洗涤，以提供所述第二细胞。
50.一种鉴定抑制由KCl引起的苦味的化合物的方法，其包括：
a)提供细胞，
其中所述细胞表达选自以下的一种或多种苦味受体：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60苦味受体；
b)使所述细胞与促味剂接触，
其中所述促味剂活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60苦味受体的一者或多者；
c)测定所述细胞的苦味受体活化；
d)洗涤所述细胞；
e)使所述细胞与测试化合物和促味剂接触；
f)测定所述细胞的苦味受体活化；和
g)比较步骤(c)中的所述细胞的苦味受体活化与步骤(f)中的所述细胞的苦味受体活化，
其中如果步骤(f)中的苦味受体活性低于步骤(c)中的苦味受体活性，则测试化合物是由KCl引起的苦味的抑制剂。
51.一种鉴定抑制由乳酸钾引起的苦味的化合物的方法，其包括：
a)提供细胞，
其中所述细胞表达选自以下的一种或多种苦味受体：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60苦味受体；
b)使所述细胞与促味剂接触，
其中所述促味剂活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60苦味受体的一种或多种；
c)测定所述细胞的苦味受体活化；
d)洗涤所述细胞；
e)使所述细胞与测试化合物和促味剂接触；
f)测定所述细胞的苦味受体活化；和
g)比较步骤(c)中的所述细胞的苦味受体活化与步骤(f)中的所述细胞的苦味受体活化，
其中如果步骤(f)中的苦味受体活性低于步骤(c)中的苦味受体活性，则测试化合物是由乳酸钾引起的苦味的抑制剂。
52.根据段落50-51中任一项所述的方法，其中所述促味剂是KCl、乳酸钾或普通苦味化合物。
53.根据段落50-52中任一项所述的方法，其中所述苦味受体与G蛋白复合。
54.根据段落53所述的方法，其中所述G蛋白是Gq蛋白、α转导素或α味蛋白。
55.根据段落54所述的方法，其中所述Gq蛋白是Gα15蛋白。
56.根据段落50-55中任一项所述的方法，其中苦味受体活性是通过测量胞内钙浓度来测定的。
57.根据段落56所述的方法，其中所述胞内钙浓度是使用钙敏感性荧光染料来测定的。
58.根据段落57所述的方法，其中所述钙敏感性荧光染料是Fluo-4或钙-3染料。
59.根据段落50-58中任一项所述的方法，其中所述细胞存在于体外细胞系中。
60.根据段落50-58中任一项所述的方法，其中所述细胞存在于一组体外细胞系中。
61.根据段落52-60中任一项所述的方法，其中所述普通苦味化合物是苯甲地那铵或糖精地那铵。
附图简述
图1表明在所有线中，所有二十五种苦味细胞系对内源性受体激动剂异丙肾上腺素的响应是高度一致的。百分比响应(Y-轴)作为异丙肾上腺素浓度(X-轴)的函数来作图，并且将结果拟合成曲线以计算EC50值(半数最大受体活化的浓度)。对于所有二十五种细胞系，EC50值大约为4.9±0.41nM。
图2表明六种受体显示对KCl(20mM)有稳健的功能响应，这显示这些六种受体特别适于检测KCl。其余的十九种受体无一提供超过阈值(40％)的功能响应。
图3提供(A)响应于在表达KCl-特异性受体的细胞系中的KCl添加的KCl信号传导的剂量-响应曲线，和(B)响应于在表达KCl-特异性受体的细胞系中缓冲液添加的KCl信号传导的剂量-响应曲线。Y-轴代表荧光(RFU)。在(A)中，X-轴代表log KCl浓度(M)。在无KCl添加的(B)中的X-轴反映了log(A)中的KCl浓度(M)。
图4表明七种受体显示对乳酸钾(20mM)稳健的功能响应，这表明这些七种受体特别适于检测乳酸钾。其余的十八种受体无一提供超过阈值(40％)的功能响应。
图5表明七种受体显示对乙酰磺胺酸钾(20mM)稳健的功能响应，这表明这些七种受体特别适于检测乙酰磺胺酸钾。其余的十八种受体无一提供超过阈值(40％)的功能响应。
图6表明所有二十五种细胞系对KCl、乳酸钾和乙酰磺胺酸钾的功能反应性。
发明详述
为了本文描述的发明可被完全理解，示出以下详述。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与为本发明所属领域的普通技术人员通常理解的那些术语相同的含义。尽管与本文描述的那些方法和材料类似或等效的方法和材料可于本发明的实践或测试中，但以下描述适合的方法和材料。所述材料、方法和实施例仅为示例性的，并非意在限制。本文提及的所有出版物、专利和其它文件均为了所有目的以引用方式并入。
在该说明书通篇中，词语“包括/包含(comprise)”或变体诸如“包括/包含(comprises，comprising)”将被理解为暗示包括所述的整数或整数组，但不排除任何其它整数或整数组。此外，除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数且复数术语应包括单数。术语“或更多”和“至少”可在本文中互换使用。例如“两个/两种或更多个/更多种”和“至少两个/至少两种”可互换使用。类似地，术语“小于/少于”或“大于/高于”可在本文中互换使用，例如，“A小于/少于B”和“B大于/高于A”可互换使用。
术语“激动剂”、“增效剂”或“活化剂”是指增加苦味受体活性从而导致胞内分子的数量或分布或者酶的活性变化的一种化合物或物质，这是苦味受体胞内信号传导路径的一部分。所述胞内分子的实例包括但不限于游离钙、环腺苷酸(cAMP)、肌醇单磷酸、肌醇二磷酸或肌醇三磷酸。所述酶的实例包括但不限于腺苷酸环化酶、磷脂酶-C、G蛋白偶联受体激酶。
术语“拮抗剂”、“抑制剂”或“阻滞剂”是指降低苦味受体活性从而导致胞内分子的数量或分布或者酶的活性变化的一种化合物或物质，这是苦味受体的胞内信号传导路径一部分。所述胞内分子的实例包括但不限于游离钙、环腺苷酸(cAMP)、肌醇单磷酸、肌醇二磷酸或肌醇三磷酸。所述酶的实例包括但不限于腺苷酸环化酶、磷脂酶-C、G蛋白偶联受体激酶。如本文所用，抑制剂、拮抗剂或阻滞剂可作用于所有或特定亚类的苦味受体。所述抑制剂、拮抗剂或阻滞剂可将TAS2R受体的活性降低至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％。
术语“人造甜味剂”和“糖替代物”是指带来甜味但具有比糖低的热能的食品添加剂。在一些情况下，“人造甜味剂”或“糖替代物”的热能可忽略不计。
如本文所用的术语“苦”或“苦味”是指在检测促苦味剂之后产生的感觉或味觉。以下属性可导致苦味：涩味、苦涩味、金属味、苦金属味以及异味、余味和包括但不限于冻灼味和纸板味的不良味道、和/或这些味道的任何组合。需要注意的是，在本领域，术语“异味”常与“苦味”意义相同。不受理论的限制，苦味的多样性可反映出大量苦味受体和这些受体对促苦味剂的差分检测。如本文所用的苦味包括促苦味剂对苦味受体的活化。如本文所用的苦味还包括促苦味剂对苦味受体的活化及随后的下游信号传导。如本文所用的苦味还包括在促苦味剂刺激之后信号传导路径的活化。如本文所用的苦味进一步包括由苦味受体检测促苦味剂之后的信号传导引起的感觉。如本文所用的苦味进一步包括由使苦味受体与促苦味剂接触之后的信号传导引起的感觉。苦味可以在脑中感觉到。
术语“苦味受体”是指促苦味剂可结合其上的受体，通常为细胞表面受体。苦味受体可存在于口腔和/或口外组织中，如，于整个胃肠道(包括胃、肠和结肠)的味觉样(taste-like)激素分泌细胞中。苦味受体还可存在于体外，诸如在包括但不限于基于细胞的测定或结合测定的测定中。
术语“促苦味剂”、“苦味配体”或“苦味化合物”是指活化苦味受体或可被苦味受体检测的化合物和/或为受试者带来苦味感觉的化合物。“促苦味剂”还指联合以活化苦味受体或可被苦味受体检测和/或为受试者带来苦味感觉的多个化合物。“促苦味剂”进一步是指受试者摄入时经酶修饰活化苦味受体或被苦味受体检测和/或为受试者带来苦味感觉的化合物。因为苦味感觉可能随个体不同而变化，所以与其它个体对相同化合物感觉到的那类苦味相比，某些个体可能把“促苦味剂”描述为带来不同种类的苦味的化合物。术语促苦味剂还指带来苦味的化合物。
术语“细胞系”或“克隆细胞系”是指一类细胞，其都是单一原细胞的后代。如本文所用，将细胞系体外维持在细胞培养物中，并且可以等份的形式冷冻以建立克隆细胞库。
术语“消费品”是指用于个人使用和/或被受试者消耗的保健和美容产品。消费品可以以任何形式存在，包括但不限于液体、固体、半固体、片剂、胶囊、锭剂、条状(strip)、粉剂、凝胶剂、胶、糊剂、浆液、糖浆、气溶胶和喷雾剂。消费品的非限制性实例包括保健营养品、营养补充剂、口红、唇膏、皂、洗发剂、胶、粘合剂(如牙科粘合剂)、牙膏、口服镇痛药、口气清新剂(breath freshener)、漱口剂、牙齿增白剂和其它洁齿剂。
术语“接触”是指拮抗剂、激动剂、调节剂、促味剂或测试化合物与多肽(如，TAS2R受体)或表达多肽的宿主细胞之间的任何相互作用，从而至少两种组分中的任一个可以在液相中(例如在溶液中或在悬浮液中)独立于彼此，或可结合至固相，例如以基本上平面的形式或以颗粒、微粒(pearl)等的形式。所述多肽可为TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55或TAS2R60。类似地，所述宿主细胞可表达TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55、TAS2R60或其组合。
术语“饮食”通指由受试者消耗的食品和/或饮料。受试者的“饮食”还包括受试者摄取的任何消费品或药物组合物。
术语“可食用的组合物”是指适于消耗的组合物，通常经由口腔(尽管消耗可经由非口途径诸如吸入来发生)。可食用的组合物可以任何形式存在，包括但不限于液体、固体、半固体、片剂、锭剂、粉剂、凝胶剂、胶、糊剂、浆液、糖浆、气溶胶和喷雾剂。如本文所用，可食用的组合物包括食品、药物组合物和消费品。术语食用的组合物还指例如膳食和营养补充剂。如本文所用，可食用组合物还包括可置口腔内但不被吞咽的组合物，包括专业的牙科产品，诸如牙科治疗、填充物、包装材料、模具和抛光剂。术语“可食用的(comestible)”是指类似的组合物，并且通常用作为术语“可食用的(edible)”的同义词。
术语“有效量”是指足够产生期望的性质或结果的量。例如，本发明测定中使用的化合物的有效量是能够降低与促苦味剂相关的苦味感觉的量。通常，本发明测定中使用的化合物的有效量是能够抑制促苦味剂对苦味受体活化的量。可选地，本发明测定中使用的化合物的有效量是在另一种促苦味剂的存在下能够活化苦味受体的量。
术语“气味调节剂”是指当添加至可食用的组合物(诸如食品)时，修饰(如，掩蔽、消除、减小、降低或增加)存在于所述可食用组合物中的气味(如，甜味、咸味、鲜味、酸味或苦味)的感觉的化合物或化合物的混合物。
短语“功能性苦味受体”是指以与在正常表达苦味受体而未工程化的细胞中的苦味受体大体上相同的方式，响应于已知的活化剂或已知的抑制剂的苦味受体。苦味受体行为可通过例如生理活动和药理学响应来确定。生理活动包括但不限于苦味感觉。药理学响应包括但不限于胞内分子的数量或分布或者酶活性的改变，当使苦味受体与调节剂接触时，这是苦味受体的胞内信号传导路径的一部分。例如，药理学响应可包括当苦味受体被活化时胞内游离钙的增加，或者当苦味受体被阻断时胞内游离钙的降低。
术语“调节剂”是指主动或被动改变苦味受体的结构、构象、生物化学或生物物理性质或功能性的化合物或物质。所述调节剂可为苦味受体激动剂(增效剂或活化剂)或拮抗剂(抑制剂或阻滞剂)，包括部分激动剂或拮抗剂、选择性激动剂或拮抗剂和反向激动剂，并且可为别构调节剂。即使一种物质或化合物的调节活性在不同条件或浓度下或根据苦味受体的不同形式(如天然存在的形式vs.突变体形式)及苦味受体的不同的天然存在的等位基因变体(如由于多态性)而变化，所述物质或化合物仍是调节剂。如本文所用，调节剂可影响苦味受体的活性、苦味受体对另一种调节化合物的响应或者苦味受体的选择性。调节剂还可改变另一种调节剂影响苦味受体功能的能力。调节剂可作用于所有苦味受体或特定亚类的苦味受体。所述调节剂包括但不限于增效剂、活化剂、抑制剂、激动剂、拮抗剂和阻滞剂。
如本文所用，术语“天然”蛋白(如苦味受体)是指不具有随附或插入其中的异源氨基酸序列的蛋白质。例如，本文使用的“天然苦味受体”包括不具有在多肽水平表达的标签序列的苦味受体。尽管将苦味受体称之为天然，申请人并非意在排除包含氨基酸取代、突变或缺失的苦味受体变体，或者为天然存在或之前已知的受体蛋白的片段或剪接形式的变体。
术语“脱靶效应”是指非目标味道受体的不期望的调节、活化或抑制。例如，如果苦味调节剂意在调节苦味受体的具体亚类的活性，并且其还调节其它苦味受体或其它味道受体(诸如甜味受体和鲜味受体)的活性，则苦味调节剂显示出脱靶效应。类似地，如果味道调节剂意在调节由于促苦味剂导致的苦味，且如果其调节由于另一种促味剂导致的味道或如果其本身带有味道，则味道调节剂显示出脱靶效应。苦味调节剂的脱靶效应可导致鲜味、甜味、酸味、鲜味和/或苦味的活化或抑制。
术语“百万分之一”和“ppm”可用于指食物工业中溶液的低浓度。例如，在1000ml溶剂中的一克溶质的浓度为1000ppm，和在1000ml溶剂中的千分之一克(0.001g)溶质的浓度为1ppm。因此，每升一毫克的浓度(即1mg/L)等于1ppm。
与氨基酸和/或核苷酸序列结合的短语“百分比同一性的”或“百分比同一性”是指在两个不同序列之间的相似性。该百分比同一性可通过标准比对算法来测定，例如，Altshul等描述的基本局部比对工具(Basic Local Alignment Tool)(BLAST)((1990)J.Mol.Biol.,215:403410)；Needleman等的算法((1970)J.Mol.Biol.,48:444453)；或Meyers等的算法((1988)Comput.Appl.Biosci.,4:1117)。一组参数可为Blosum62评分矩阵，其空位罚分为12，空位延伸罚分为4，和移码空位罚分为5。两个氨基酸或核苷酸序列之间的百分比同一性也可使用E.Meyers和W.Miller算法((1989)CABIOS,4:11-17)来确定，所述算法已经并入到使用PAM120权重残基表，空位长度罚分为12且空位罚分为4的ALIGN程序(版本2.0)内。所述百分比同一性通常通过比较类似长度的序列来计算。蛋白质分析软件使用测量分配给各种取代、缺失和其它修饰(包括保守氨基酸取代)的相似性匹配类似序列。例如，GCG Wisconsin软件包(Accelrys,Inc.)含有诸如“Gap”和“Bestfit”的程序，其可与默认参数一同使用以确定密切相关的多肽(诸如来自不同生物体物种的同源多肽)之间或者野生型蛋白和其突变体之间的序列同一性。参见，如GCG版本6.1。多肽序列还可使用FASTA来比较，所述FASTA使用默认或推荐参数。GCG版本6.1.中的程序FASTA(如，FASTA2和FASTA3)提供查询和搜索序列之间的最佳重叠区的比对和百分比序列同一性(Pearson,MethodsEnzymol.183:63-98(1990)；Pearson,Methods Mol.Biol.132:185-219(2000))。用于同一性比较的多肽序列的长度通常将至少为约16个氨基酸残基，通常为至少约20个残基，更通常为至少约24个残基，典型为至少约28个残基，并且优选为超过约35个残基。用于同一性比较的DNA序列的长度通常将为至少约48个核酸残基，通常为至少约60个核酸残基，更通常为至少约72个核酸残基，典型为至少约84个核酸残基，并且更优选为超过约105个核酸残基。
术语“苦味的感觉”、“咸味的感觉”、“味道的感觉”和相似术语是指受试者对具体味道或气味的意识。
术语“选择性苦味调节剂”是指调节由于特定促苦味剂引起的苦味而不调节任何其它促味剂或带有其本身味道的化合物。例如，选择性抑制由KCl引起的苦味的化合物降低由KCl引起的苦味而不增加或降低由另一种促味剂(包括其它促苦味剂)引起的味道。在一些实施方案中，选择性苦味调节剂是具体苦味受体或具体亚类的苦味受体的激动剂或拮抗剂。例如，选择性抑制由KCl引起的苦味的化合物拮抗TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的一者或多者的苦味受体活性，而不活化或抑制任何其它味道受体(包括其它苦味受体)。
由于术语“稳定表达”和“瞬时表达”将被本领域技术人员所理解，术语“稳定的”或“稳定表达”意在区分本发明的细胞和细胞系与瞬时表达的细胞。
术语“严格条件”或“严格杂交条件”描述了用于将一种或多种核酸探针与核酸样品杂交并洗涤去除未与样品中目标核酸的特异性结合的探针的温度和盐条件。严格条件为本领域技术人员所已知，并可见于Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,N.Y.(1989),6.3.1-6.3.6。水性和非水性方法描述于该文献中，并且可采用任何一种。严格杂交条件的实例是在6X SSC中在约45℃下的杂交，随后在0.2X SSC，0.1％SDS中在60℃下至少洗涤一次。严格杂交条件的另一个实例是在6X SSC中在约45℃下杂交，随后在0.2X SSC，0.1％SDS中在65℃下至少洗涤一次。严格条件包括在0.5M磷酸钠，7％SDS中在65℃下杂交，随后在0.2X SSC，1％SDS中在65℃下至少洗涤一次。
术语“受试者”是指哺乳动物。在优选的实施方案中，所述受试者是人。在一些实施方案中，受试者是家养或实验动物，包括但不限于居家宠物，诸如狗、猫、猪、兔、大鼠、小鼠、沙土鼠、仓鼠、豚鼠和雪貂。在一些实施方案中，受试者是家畜。家畜的非限制性实例包括：羊驼、野牛、骆驼、牛、鹿、猪、马、美洲驼、骡、驴、绵羊、山羊、兔、驯鹿和牦牛。
术语“甜味”是指例如由糖引发的味道。引发甜味的组合物的非限制性实例包括葡萄糖、蔗糖、果糖、糖精、环氨酸盐、阿司帕坦、乙酰氨基磺酸钾、三氯蔗糖、阿力甜和纽甜。甜味的量或组合物的甜味可通过如味道测试来确定。
术语“普通苦味化合物”是指活化所有二十五种苦味受体的化合物。普通苦味化合物的非限制性实例包括苯甲地那铵和糖精地那铵。
本发明提供鉴定调节苦味的化合物的测定。例如，本发明提供鉴定抑制由KCl、乳酸钾或乙酰磺胺酸钾引起的苦味的化合物的方法。本发明还提供鉴定选择性抑制由KCl、乳酸钾或乙酰磺胺酸钾引起的苦味的化合物的方法。本发明进一步提供鉴定模拟由KCl、乳酸钾或乙酰磺胺酸钾引起的苦味的化合物的方法。本发明还提供鉴定增强由KCl、乳酸钾或乙酰磺胺酸钾引起的苦味的化合物的方法。本发明另外提供确定KCl、乳酸钾或乙酰磺胺酸钾是否存在于组合物中的方法。
表达苦味受体的细胞和细胞系
本发明涉及使用表达或已经工程化以表达一种或多种苦味受体的细胞和细胞系的体外测定。在一些实施方案中，本发明的细胞或细胞系表达一种或多种功能性苦味受体。
根据本发明的一个实施方案，用编码苦味受体的核酸转染所述细胞和细胞系。在其它实施方案中，所述细胞和细胞系内源性表达苦味受体。在一些实施方案中，用编码苦味受体或突变型苦味受体的等位基因变体(即，多态性)的核酸转染所述细胞和细胞系。本发明的细胞系可稳定表达引入的苦味受体。在另一个实施方案中，所述细胞和细胞系具有活化的苦味受体以用于通过基因活化进行的表达。在一些实施方案中，所述苦味受体是天然苦味受体。
在具体的实施方案中，由于工程化的基因活化，所述细胞和细胞系表达内源性苦味受体，即内源性基因表达的活化，其中所述活化并非天然发生于未进行适当处理的细胞中。工程化基因的活化可开启内源性苦味受体的表达，例如其中内源性苦味受体并不在未进行适当处理的细胞系中表达。可选地，工程化基因的活化可导致内源性苦味受体表达水平的提高，例如在不进行适当处理的情况下，内源性基因在所述细胞系中的表达水平不期望地低，例如对于细胞系中苦味受体的功能测定并不足够。可选地，工程化基因的活化可用于过表达内源性苦味受体，例如以用于从细胞系分离内源性苦味受体。工程化基因的活化可通过本领域技术人员已知的多种方法来实现。例如，可通过如在组成型或诱导型启动子的控制下将表达转录因子或反式激活因子的核酸引入至细胞内，来过表达或者诱导表达基因转录的一种或多种转录因子或者反式激活因子。如果已知内源性基因是在诱导型启动子的控制下，则可通过将所述细胞暴露于已知的基因诱导剂而诱导表达。此外，编码内源性基因本身的核酸可被导入细胞内，以获得由于基因组中拷贝数增加而导致的基因表达水平提高。此外，内源性基因表达的某些已知的抑制剂(所述抑制剂由细胞表达)可在细胞中使用本领域已知的技术(如RNAi)敲低或甚至敲除，从而增加内源性基因的表达。
在一些实施方案中，细胞和细胞系稳定表达一种或多种苦味受体。在一些实施方案中，表达的苦味受体当被激动剂活化时增加胞内游离钙。在一些实施方案中，增效剂、激动剂或活化剂可为小分子、化学部分、多肽、抗体或食物提取物。在其它实施方案中，表达的苦味受体当被拮抗剂抑制时降低胞内游离钙。在一些实施方案中，抑制剂、拮抗剂或阻滞剂可为小分子、化学部分、多肽、抗体或食物提取物。增效剂、激动剂、活化剂、抑制剂、拮抗剂或阻滞剂可作用于所有或特定亚类的苦味受体。
根据本发明，由细胞或细胞系表达的苦味受体可来自任何哺乳动物，所述动物包括大鼠、小鼠、兔、山羊、狗、母牛、猪或灵长类动物。在优选的实施方案中，所述苦味受体是人苦味受体。
在一些实施方案中，本发明的细胞或细胞系可包含：编码人TAS2R1的核苷酸序列(SEQ ID NO:2)；编码人TAS2R3的核苷酸序列(SEQ ID NO:3)；编码人TAS2R4的核苷酸序列(SEQ ID NO:4)；编码人TAS2R5的核苷酸序列(SEQ ID NO:5)；编码人TAS2R7的核苷酸序列(SEQ ID NO:6)；编码人TAS2R8的核苷酸序列(SEQ ID NO:7)；编码人TAS2R9的核苷酸序列(SEQ ID NO:8)；编码人TAS2R10的核苷酸序列(SEQ ID NO:9)；编码人TAS2R13的核苷酸序列(SEQ IDNO:10)；编码人TAS2R14的核苷酸序列(SEQ ID NO:11)；编码人TAS2R16的核苷酸序列(SEQ ID NO:12)；编码人TAS2R38的核苷酸序列(SEQ ID NO:13)；编码人TAS2R39的核苷酸序列(SEQ IDNO:14)；编码人TAS2R40的核苷酸序列(SEQ ID NO:15)；编码人TAS2R41的核苷酸序列(SEQ ID NO:16)；编码人TAS2R43的核苷酸序列(SEQ ID NO:17)；编码人TAS2R44的核苷酸序列(SEQ IDNO:18)；编码人TAS2R45的核苷酸序列(SEQ ID NO:19)；编码人TAS2R46的核苷酸序列(SEQ ID NO:20)；编码人TAS2R47的核苷酸序列(SEQ ID NO:21)；编码人TAS2R48的核苷酸序列(SEQ IDNO:22)；编码人TAS2R49的核苷酸序列(SEQ ID NO:23)；编码人TAS2R50的核苷酸序列(SEQ ID NO:24)；编码人TAS2R55的核苷酸序列(SEQ ID NO:25)；编码人TAS2R60的核苷酸序列(SEQ IDNO:26)；或其任何组合。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自以下的核苷酸序列：与SEQ ID NO:2-26的任一者有80％、85％、90％、95％、98％或99％序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自以下的核苷酸序列：与SEQ ID NO:2-26的任一者具有95％序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自以下的核苷酸序列：与SEQ ID NO:2-26的任一者具有80％、85％、90％、95％、98％或99％序列同一性的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列编码具有TAS2R活性的多肽。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自以下的核苷酸序列：与SEQ ID NO:2-26的任一者具有95％序列同一性的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列编码具有TAS2R活性的多肽。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自以下的核苷酸序列：在严格条件下与SEQID NO:2-26的任一者杂交的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自以下的核苷酸序列：包括SEQ ID NO:2-26的任一者的成熟形式的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自以下的核苷酸序列：为SEQ ID NO:2-26的任一者的变体的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自以下的核苷酸序列：为SEQ ID NO:2-26的任一者的片段的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自以下的核苷酸序列：SEQ ID NO:2-26的任一者的核苷酸序列溶蛋白性裂解产物的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含核苷酸序列选自以下：为SEQ ID NO:2-26的任一者的直向同源物(ortholog)的核苷酸序列。此类直向同源物为本领域所熟知。在一些实施方案中，与SEQ IDNO:2-26的任一者相比，核苷酸序列具有五个或更少、四个或更少、三个或更少、两个或更少，或者一个或更少的保守取代。
在一些实施方案中，本发明的细胞或细胞系可包含编码人TAS2R1(SEQ ID NO:28)；人TAS2R3(SEQ ID NO:29)；人TAS2R4(SEQ ID NO:30)；人TAS2R5(SEQ ID NO:31)；人TAS2R7(SEQ IDNO:32)；人TAS2R8(SEQ ID NO:33)；人TAS2R9(SEQ ID NO:34)；人TAS2R10(SEQ ID NO:35)；人TAS2R13(SEQ ID NO:36)；人TAS2R14(SEQ ID NO:37)；人TAS2R16(SEQ ID NO:38)；人TAS2R38(SEQ ID NO:39)；人TAS2R39(SEQ ID NO:40)；人TAS2R40(SEQID NO:41)；人TAS2R41(SEQ ID NO:42)；人TAS2R43(SEQ ID NO:43)；人TAS2R44(SEQ ID NO:44)；人TAS2R45(SEQ ID NO:45)；人TAS2R46(SEQ ID NO:46)；人TAS2R47(SEQ ID NO:47)；人TAS2R48(SEQ ID NO:48)；人TAS2R49(SEQ ID NO:49)；人TAS2R50(SEQ ID NO:50)；人TAS2R55(SEQ ID NO:51)；人TAS2R60(SEQID NO:52)；或其组合的多核苷酸序列。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自以下的核苷酸序列：与编码SEQ ID NO:28-52的任一者的核苷酸序列具有80％、85％、90％、95％、98％或99％序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自以下的核苷酸序列：与编码SEQ ID NO:28-52的任一者的核苷酸序列具有95％序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自以下的核苷酸序列：与编码SEQ ID NO:28-52的任一者的核苷酸序列具有80％、85％、90％、95％、98％或99％序列同一性的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列编码具有TAS2R活性的多肽。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自以下的核苷酸序列：与编码SEQ ID NO:28-52的任一者的核苷酸序列具有95％序列同一性的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列编码具有TAS2R活性的多肽。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自以下的核苷酸序列：在严格杂交条件下与编码SEQ ID NO:28-52的任一者的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自以下的核苷酸序列：编码SEQ ID NO:28-52的任一者的成熟形式的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自以下的核苷酸序列：为编码SEQ ID NO:28-52的任一者的核苷酸序列的变体的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自以下的核苷酸序列：为编码SEQ ID NO:28-52的任一者的核苷酸序列的片段的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自以下的核苷酸序列：编码SEQ ID NO:28-52的任一者的核苷酸序列的核苷酸序列溶蛋白性裂解产物。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自以下的核苷酸序列：为编码SEQ IDNO:28-52的任一者的核苷酸序列的直向同源物的核苷酸序列。此类直向同源物为本领域所熟知。在一些实施方案中，与SEQ ID NO:28-52的任一者相比，所述核苷酸序列编码具有五个或更少、四个或更少、三个或更少、两个或更少，或者一个或更少的保守氨基酸取代的TAS2R受体。
在一些实施方案中，本发明的细胞或细胞系可包含人TAS2R1(SEQ ID NO:28)；人TAS2R3(SEQ ID NO:29)；人TAS2R4(SEQ IDNO:30)；人TAS2R5(SEQ ID NO:31)；人TAS2R7(SEQ ID NO:32)；人TAS2R8(SEQ ID NO:33)；人TAS2R9(SEQ ID NO:34)；人TAS2R10(SEQ ID NO:35)；人TAS2R13(SEQ ID NO:36)；人TAS2R14(SEQ ID NO:37)；人TAS2R16(SEQ ID NO:38)；人TAS2R38(SEQ ID NO:39)；人TAS2R39(SEQ ID NO:40)；人TAS2R40(SEQ ID NO:41)；人TAS2R41(SEQ ID NO:42)；人TAS2R43(SEQ ID NO:43)；人TAS2R44(SEQ ID NO:44)；人TAS2R45(SEQ ID NO:45)；人TAS2R46(SEQ ID NO:46)；人TAS2R47(SEQ ID NO:47)；人TAS2R48(SEQ ID NO:48)；人TAS2R49(SEQ ID NO:49)；人TAS2R50(SEQID NO:50)；人TAS2R55(SEQ ID NO:51)；人TAS2R60(SEQ ID NO:52)；或其组合。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自以下的TAS2R受体：与SEQ ID NO:28-52的任一者具有80％、85％、90％、95％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自与SEQ ID NO:28-52的任一者具有95％序列同一性的氨基酸序列的TAS2R受体。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自与SEQ ID NO:28-52的任一者具有80％、85％、90％、95％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列的TAS2R受体，其中所述TAS2R受体具有TAS2R受体活性。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自与SEQ ID NO:28-52的任一者具有95％序列同一性的氨基酸序列的TAS2R受体，其中所述TAS2R受体具有TAS2R受体活性。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自SEQ ID NO:28-52的任一者的成熟形式的TAS2R受体。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自SEQ ID NO:28-52的任一者的变体的TAS2R受体。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自SEQ ID NO:28-52中任一者的片段的TAS2R受体。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自SEQ ID NO:28-52中任一者的溶蛋白性裂解产物的TAS2R受体。在一些实施方案中，所述细胞或细胞系包含选自SEQ ID NO:28-52中任一者的直向同源物的TAS2R受体。此类直向同源物为本领域所述熟知。在一些实施方案中，与SEQ ID NO:28-52的任一者相比，所述TAS2R受体具有五个或更少、四个或更少、三个或更少、两个或更少，或者一个或更少的保守氨基酸取代。
编码苦味受体的核酸可为DNA、合成DNA、基因组DNA cDNA、RNA、双链DNA或单链DNA。在一些实施方案中，与编码野生型苦味受体的核酸序列相比，所述核酸包含可能或不可能产生氨基酸取代的一个或多个突变。在一些其它实施方案中，与在给定群体中编码某些苦味受体的最常存在的核酸序列相比，所述核酸包含一个或多个天然存在的等位基因变体。天然存在的等位基因变体包括天然存在的相同苦味受体的不同氨基酸序列，如由于等位变异或多态性在给定群体中观察到的那些。在一些实施方案中，编码苦味受体的核酸是片段。在一些实施方案中，所述片段编码具有TAS2R活性的多肽。在一些实施方案中，所述片段包含SEQ ID NO:2-26的至少30个、至少40个、至少50个、至少60个、至少80个、至少100个、至少125个、至少150个、至少175个、至少200个、至少250个、至少300个、至少400个、至少500个、至少600个、至少700个、至少800个、至少850个或至少900个核苷酸。
多态性在人类基因组中是常见的现象。发生于苦味受体基因内或附近的多态性可通过如上调或下调它们的表达水平或通过改变它们的氨基酸序列来影响它们的表达或改变它们的功能。附录表1显示独特多态性的参考数目，包括与人TAS2R基因相关的单核苷酸多态性(“SNP”)、在每个参考序列中SNP的位置和SNP的描述。参考数目可在美国生物技术信息中心(National Center for BiotechnologyInformation)(“NCBI”；Bethesda，MD)的单核苷酸多态性数据库(“dbSNP”)中搜索。
已研究和记录了导致编码序列多态性的人苦味受体基因的等位变异。参见，如Ueda等,“Identification of coding single-nucleotidepolymorphisms in human taste receptor genes involving bitter tasting”,Biochem Biophys Res Commun285:147-151,2001；Wooding等,“Natural selection and molecular evolution in PTC,a bitter-taste receptorgene,”Am.J.Hum,Genet.74:637-646,2004；和Kim等,“Worldwidehaplotype diversity and coding sequence variation at human bitter tastereceptor loci”,Human Mutation26:199-204,2005。附录表2是在不同的人苦味受体的编码序列中的天然变异的列表。人苦味受体、它们编码序列的SEQ ID NO，和蛋白序列于前三列中列出。核苷酸变化和它们在每个编码序列内的位置(如通过其SEQ ID NO鉴定)分别显示于“核苷酸变化”和“核苷酸变化的位置”列中。在每个苦味受体内的氨基酸改变(如通过其SEQ ID NO鉴定)使用单字母缩写显示于“描述”列中。它们的位置参考每个相应的SEQ ID NO，显示于“氨基酸改变的位置”列中。此外，“描述”列还含有那些变异的标识符，其可在NCBI的dbSNP中搜索。“特征标识符”是由UniProt蛋白知识库(UniProtProtein Knowledgebase)分配给一些变异的独特且稳定的特征标识符，所述UniProt蛋白知识库由欧洲生物信息研究所(EuropeanBioinformatics Institute)(Cambridge，United Kingdom)托管。它们可在UniProt中搜索。“NA”表示到目前为止UniProt还没有分配的特征标识符。
人味觉的变异是熟知的现象。不希望被理论所束缚，苦味的变异可涉及苦味受体的多态性。例如，苯硫脲(PTC)的一种受体hTAS2R38的多态性已与检测丙硫氧嘧啶(PROP)的能力相关(Kim等,“Positionalcloning of the human quantitative trait locus underlying taste sensitivityto phenylthiocarbamide”,Science299:1221-1225,2003；Wooding等,2004)。有三种常见的多态性存在于TAS2R38基因-A49P、V262A和I296V-其组合以形成两种常见的单倍型和几种其它非常罕见的单倍型。所述两种常见单倍型是AVI(常称为“味盲”)和PAV(常称为“尝味者(taster)”)。改变这些单倍型的组合将产生纯合子-PAV/PAV和AVI/AVI-及杂合子PAV/AVI。这些基因型可占据PTC尝味能力变异的高达85％：具有两份拷贝的PAV多态性的人报道PTC比TAS2R38杂合子更苦，并且具有两份拷贝的AVI/AVI多态性的人通常报道PTC大体上是无味的。猜测这些多态性通过改变G-蛋白-结合结构域影响味道。在一些实施方案中，本发明的细胞或细胞系可包含编码人PAVTAS2R38的多核苷酸序列(SEQ ID NO:54)。在一些实施方案中，本发明的细胞或细胞系可包含人PAV TAS2R38(SEQ ID NO:54)。
此外，群体中一个对天然植物化合物芦荟素和马兜铃酸的苦味非常敏感的亚类已遗传了hTAS2R43基因中的某些多态性。不具有该等位基因的人不能尝到低浓度的这些化合物。所述hTAS2R43敏感性等位基因还使得人们对糖精的苦味更加敏感。此外，与hTAS2R43敏感性等位基因密切相关的某些hTAS2R44等位基因还使得人们对糖精的苦味更加敏感。群体的一些亚类不具有某些hTAS2R基因，这促进了不同个体之间的味觉差异。苦味基因的多态性也已与疾病如糖尿病(TAS2R9)和酒精中毒(TAS2R16)风险增加相关。使用稳定表达异源性天然存在的苦味受体、或者其等位基因变体或多晶型物(polymorph)、或者具有并非天然存在的一个或多个突变(如，随机突变或定点突变)的其突变体形式的细胞和细胞系的测定，都在本发明的范围内。
包含苦味受体、其突变体形式、或其天然存在的等位基因变体的细胞和细胞系可用于鉴定苦味受体功能的调节剂，所述调节剂包括对具体苦味受体突变体形式或者天然存在的等位基因变体特异的调节剂。因此，所述细胞和细胞系可用于获得关于苦味受体的单独天然形式或突变体形式或天然存在的等位基因变体的性质、活性和作用的信息，并用于鉴定对具体天然或突变体形式或天然存在的等位基因变体，或者对天然或突变体形式或天然存在的等位基因变体的亚类具有活性的苦味受体调节剂。这些调节剂可用作为治疗剂，所述治疗剂差异性靶向处于疾病状态或组织中的修饰的苦味受体形式。因为苦味受体体内的多态性例如可促进不期望的活性或疾病状态，所以本发明的细胞和细胞系还可用于筛选调节剂的治疗用途，其中突变体形式或天然存在的等位基因变体的响应变化可为期望的。所述细胞和细胞系还可用于鉴定仅对苦味受体的天然或突变体形式或天然存在的等位基因变体的亚类具有活性的调节剂。
用于产生细胞和细胞系的宿主细胞可以其天然状态表达一种或多种内源性苦味受体或者缺乏对任何苦味受体的表达。在所述细胞或细胞系表达一种或多种其本身的苦味受体(也称为“内源性”苦味受体)的情况下，异源性苦味受体可与细胞或细胞系的一种或多种内源性苦味受体之一相同。例如，编码细胞或细胞系内源性苦味受体的核酸可被引入至所述细胞或细胞系内，以增加在细胞或细胞系中的编码苦味受体的基因拷贝数，使得与未引入核酸的细胞或细胞系相比，在所述细胞或细胞系中以较高的水平表达所述苦味受体。所述宿主细胞可为原代细胞、生殖细胞或干细胞，包括胚胎干细胞。所述宿主细胞还可为永生化细胞。原代或永生化宿主细胞可源自真核生物的中胚层、外胚层或内胚层。所述宿主细胞可为内皮细胞、表皮细胞、间充质细胞、神经细胞、肾细胞、肝细胞、造血细胞或免疫细胞。例如，所述宿主细胞可为肠隐窝或绒毛细胞、克拉拉细胞、结肠细胞、肠细胞、杯状细胞、肠嗜铬细胞、肠内分泌细胞。所述宿主细胞可为真核细胞、原核细胞、哺乳动物细胞、人细胞、灵长类动物细胞、牛科动物细胞、猪科动物细胞、猫科动物细胞、啮齿类动物细胞、有袋类动物细胞、鼠科动物细胞或其它细胞。所述宿主细胞还可为非哺乳动物，诸如酵母、昆虫、真菌、植物、低等真核生物和原核生物。由于缺乏由可与目标相互作用的细胞提供的表达产物，此类宿主细胞可以较高的可能性提供针对测试苦味受体调节剂的更有差异的背景。在优选的实施方案中，所述宿主细胞是哺乳动物细胞。可用于产生本发明的细胞或细胞系的宿主细胞的实例包括但不限于：人胚胎肾293T细胞、建立的神经元细胞系、嗜铬细胞、成神经细胞瘤成纤维细胞、横纹肌肉瘤、背根神经节细胞、NS0细胞、CV-1(ATCC CCL70)、COS-1(ATCCCRL1650)、COS-7(ATCC CRL1651)、CHO-K1(ATCC CCL61)、3T3(ATCC CCL92)、NIH/3T3(ATCC CRL1658)、HeLa(ATCC CCL2)、C127I(ATCC CRL1616)、BS-C-1(ATCC CCL26)、MRC-5(ATCC CCL171)、L-细胞、HEK-293(ATCC CRL1573)和PC12(ATCC CRL-1721)、HEK293T(ATCC CRL-11268)、RBL(ATCC CRL-1378)、SH-SY5Y(ATCC CRL-2266)、MDCK(ATCC CCL-34)、SJ-RH30(ATCC CRL-2061)、HepG2(ATCC HB-8065)、ND7/23(ECACC92090903)、CHO(ECACC85050302)、Vero(ATCC CCL81)、Caco-2(ATCC HTB37)、K562(ATCC CCL243)、Jurkat(ATCC TIB-152)、Per.C6(Crucell，Leiden，The Netherlands)、Huvec(ATCC人原代PCS100-010，小鼠CRL2514，CRL2515，CRL2516)、HuH-7D12(ECACC01042712)、293(ATCC CRL10852)、A549(ATCC CCL185)、IMR-90(ATCC CCL186)、MCF-7(ATC HTB-22)、U-2OS(ATCC HTB-96)、T84(ATCC CCL248)，或任何建立的细胞系(极化或非极化的)或可从诸如美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)(ATCC，10801University Blvd.Manassas,Va.20110-2209USA)或欧洲细胞培养物收集中心(European Collection of Cell Cultures)(ECACC，Salisbury Wiltshire SP40JG England)的资源库获取的任何细胞系。
如将被本领域技术人员所理解的那样，任何适合与宿主细胞一起使用的载体可用于将编码TAS2R受体的核酸引入至宿主细胞内。包括各种TAS2R受体的载体可为相同类型或不同类型。可用于引入编码核酸的TAS2R受体至宿主细胞内的载体的实例包括但不限于质粒、包括逆转录病毒和慢病毒的病毒、粘粒、人工染色体，并可包括例如Pcmv-Script、pcDNA3.1Hygro、pcDNA3.1neo、pcDNA3.1puro、pSV2neo、pIRES puro、pSV2zeo、pFN11A(BIND)pGL4.31、pFC14A(7)CMVpFC14K(7)CMVpFN24A(Halo7)CMVd3pFN24K(Halo7)CMVd3HaloTagTMpHT2、pACT、pAdVAntageTM、-MAX、pBIND、3-Basic、3-Control、3-增强子、3-启动子、pCI、pCMVTNTTM、pG5luc、pSI、pTARGETTM、pTNTTM、pF12A RMpF12K RMpReg neo、pYES2/GS、pAd/CMV/V5-DEST载体、pAd/PL-DESTTM 载体、pDESTTM,27载体、pEF-DEST51载体、pcDNATM-DEST47载体、pCMV/Bsd载体、pEF6/His A,B,&c、pcDNATM6.2-DEST、pLenti6/TR、pLP-AcGFP1-C、pLPS-AcGFP1-N、pLP-IRESneo、pLP-TRE2、pLP-RevTRE、pLP-LNCX、pLP-CMV-HA、pLP-CMV-Myc、pLP-RetroQ、pLP-CMVneo。在一些实施方案中，所述载体包括表达控制序列，诸如组成型或条件型启动子。本领域的普通技术人员将能够选择合适的序列。例如，适合的启动子包括但不限于CMV、TK、SV40和EF-1α。在一些实施方案中，所述启动子是可诱导的、温度调节的、组织特异性的、可抑制的、热激、发育的、细胞谱系特异性的、真核、原核或时空的启动子，或者以上任何一者或多者的未修饰的或诱变的、随机化的、搅乱顺序的组合或重组。在其它实施方案中，TAS2R受体通过基因活化表达，其中通过同源重组将外源性启动子插入宿主细胞基因组中，以驱动TAS2R受体基因的表达，所述TAS2R受体基因正常来讲并不在宿主细胞中表达。在一些实施方案中，编码TAS2R受体的基因是游离基因。编码TAS2R受体的核酸优选地被组成性表达。
可通过熟知的方法，将包括编码TAS2受体的序列或TAS2R信号传导路径的组分序列和任选编码可选择标记的核酸的核酸引入至所选宿主细胞内。所述方法包括但不限于转染、病毒递送、蛋白或多肽介导的插入、共沉淀法、基于脂质的递送试剂(脂转染)、细胞转染(cytofection)、脂多胺递送、枝状聚合体递送试剂(dendrimer deliveryreagent)、电穿孔或机械递送。转染试剂的实例为GENEPORTER、GENEPORTER2、LIPOFECTAMINE、LIPOFECTAMINE2000、FUGENE6、FUGENE HD、TFX-10、TFX-20、TFX-50、OLIGOFECTAMINE、TRANSFAST、TRANSFECTAM、GENESHUTTLE、TROJENE、GENESILENCER、X-TREMEGENE、PERFECTIN、CYTOFECTIN、SIPORT、UNIFECTOR、SIFECTOR、TRANSIT-LT1、TRANSIT-LT2、TRANSIT-EXPRESS、IFECT、RNAI SHUTTLE、METAFECTENE、LYOVEC、LIPOTAXI、GENEERASER、GENEJUICE、CYTOPURE、JETSI、JETPEI、MEGAFECTIN、POLYFECT、TRANSMESSANGER、RNAiFECT、SUPERFECT、EFFECTENE、TF-PEI-KIT、CLONFECTIN和METAFECTINE。
在另一方面，细胞和细胞系表达G蛋白。G蛋白有两个家族，异源三聚体G蛋白和单体G蛋白。异源三聚体G蛋白被G蛋白偶联受体(“GPCR”)活化，并包括三个亚基：Gα、Gβ和Gγ。如本文所用，术语G蛋白包括这些亚基的任何一个，例如Gα或其组合，以及具有所有三个亚基的异源三聚体G蛋白。在失活状态中，Gα、Gβ和Gγ形成三聚体。β和γ亚基彼此紧密结合，并且被称为β-γ复合物。Gα在配体结合至GPCR之后从Gβγ上分离下来。所述Gβγ复合物在其GDP-GTP交换之后从Gα亚基上释放出来。Gβγ复合物可活化其它第二信使或门离子通道。Gα的四个家族包括：通过活化腺苷酸环化酶来增加cAMP合成的Gs(刺激性)；抑制腺苷酸环化酶的Gi(抑制性)；G12/13家族调节各种细胞运动过程(即细胞骨架，细胞连接)；和刺激钙信号传导和磷脂酶C的Gq。单体G蛋白与异源三聚体G蛋白的α亚基是同源的。任何G蛋白可在本发明的细胞或细胞系中表达，所述G蛋白包括但不限于转导素(如，GNAT1、GNAT2和鸟嘌呤核苷酸-结合蛋白G(t))、味蛋白(如，GNAT3鸟嘌呤核苷酸结合蛋白和α转导素3)、人GNA15(鸟嘌呤核苷酸结合蛋白(G蛋白)α15(Gq类；同义词GNA16)和小鼠Gα15，及它们的嵌合体蛋白如Gα15-GNA15(也称为Gα15-Gα16)。在优选的实施方案中，所述G蛋白是小鼠Gα15(SEQ IDNO:53)。在另一个优选的实施方案中，所述G蛋白是人GNA15(SEQID NO:1)或是由包含SEQ ID NO:27的核酸编码的人G蛋白。所述G蛋白还可为任何哺乳动物G蛋白，诸如但不限于附录表3中列出的任何哺乳动物G蛋白。由所述细胞稳定表达的G蛋白对于所述细胞可为内源性的。可选地，所述G蛋白的稳定表达可为将编码G蛋白的核酸稳定转染至细胞内的结果。稳定表达异源性G蛋白的细胞为本领域已知，如HEK293/Gα15细胞(Chandrashekar等,“T2Rs functionas bitter taste receptors”,Cell100:703-711,2000；Bufe等,“The humanTAS2R16 receptor mediates bitter taste in response toβ-glucopyranosides”,Na Genet32:397-401)。在其它实施方案中，编码G蛋白的核酸和编码苦味受体的核酸可被连续地转染至宿主细胞内，编码G蛋白的核酸首先被转染或者编码苦味受体的核酸首先被转染。在其它实施方案中，编码G蛋白的核酸和编码苦味受体的核酸可被在相同或不同载体上共转染至宿主细胞内。因此，对稳定表达G蛋白和苦味受体的细胞的选择同样可连续或同时进行。可用于稳定表达G蛋白的细胞或细胞系与可用于如上所解释的稳定表达苦味受体的那些细胞或细胞系相同。
在本发明的一些实施方案中，本发明的细胞或细胞系共表达一种或多种苦味受体和其它蛋白。在优选的实施方案中，所述其它蛋白为至少一种其它味道受体，诸如甜味(TAS1R2/TAS1R3)受体或鲜味(TAS1R1/TAS1R3)受体。在一些实施方案中，本发明的细胞系小组包括表达苦味受体的细胞系和表达其它味道受体的细胞系(诸如甜味(TAS1R2/TAS1R3)受体或鲜味(TAS1R1/TAS1R3)受体)。与苦味受体共表达的蛋白质可通过任何机制表达，诸如但不限于在宿主细胞中内源性表达或由载体异源性表达。此外，在本发明的其它实施方案中，多于一种类型的苦味受体可在细胞或细胞系中稳定表达。
此外根据本发明，表达苦味受体的天然存在形式或其天然存在的等位基因变体的细胞和细胞系，以及表达苦味受体的突变体形式的细胞和细胞系，可对胞内游离钙水平进行表征。在一些实施方案中，本发明的细胞和细胞系表达具有“生理相关”活性的苦味受体。如本文所用，生理相关性是指表达苦味受体的细胞或细胞系的一种性质，借此所述苦味受体当被活化时以与相同类型的天然存在的苦味受体那样方式引起胞内游离钙增加，并且当用相同的化合物调节时以与相同类型的天然存在的苦味受体将响应方式相同的方式对调节剂响应。本发明的苦味受体-表达细胞和细胞系，包括苦味受体的一些突变体形式和苦味受体的一些天然存在的等位基因变体，优选在适合的测定(诸如测量胞内游离钙的测定)中显示与正常表达天然苦味受体的细胞可比较的功能。此类测定为本领域技术人员所已知(Nahorski,“Pharmacology of intracellular signaling pathways,”Brit.J.Pharm.147:S38-S45,2000))。此类比较用于确定细胞或细胞系的生理相关性。使用一组训练有素的味道测试人员进行的“啜饮和吐出(Sipand spit)”味道测试还可用于进一步验证在本发明的细胞和细胞系中的苦味受体的生理相关性。使用经由筛选苦味受体的天然或突变体形式或其天然存在的等位基因变体鉴定的调节剂的啜饮和吐出的味道测试的结果可用于验证这些不同形式的生理相关性。
在一些实施方案中，细胞和细胞系响应于调节剂并增加胞内游离钙，苦味受体的生理范围是EC50或IC50值。如本文所用，EC50是指在所述细胞或细胞系中诱导半数最大活化响应(half-maximalactivating response)所需的化合物或物质的浓度。如本文所用，IC50是指在所述细胞或细胞系中诱导半数最大抑制响应(half-maximalinhibitory response)所需的化合物或物质的浓度。EC50和IC50值可使用本领域熟知的技术来测定，例如化合物或物质浓度与苦味受体-表达细胞系的响应相关的剂量-响应曲线。
为了使得苦味受体表达细胞和细胞系，人们可使用例如美国专利6,692,965和国际专利公布WO/2005/079462中描述的技术。这些文件都为了所有目的通过引用整体并入本文。该技术提供对百万个细胞的实时评估，使得可选择任何期望数目的克隆(数百至数千个克隆)。使用诸如流式细胞分选(如，用FACS机器)或磁性细胞分选(如，用MACS机器)的细胞分选技术，每孔一个细胞可自动以高的统计置信度沉积于培养容器(诸如96孔培养板)中。所述技术的速率和自动化使得多基因细胞系能够容易分离。为了使得苦味受体表达细胞和细胞系，人们还可使用例如国际专利公布WO2009/102569和WO2010/088633中描述的技术。这些文件都为了所有目的通过引用整体并入本文。该技术提供产生与生理性质匹配的细胞和细胞系的自动化方法。此类方法可用于产生适用于高通量筛选潜在苦味受体调节剂的细胞系小组。
使用所述技术，每种苦味受体的RNA序列可使用信号传导探针(还称为分子信标或荧光探针)检测。在一些实施方案中，所述分子信标识别如上所述的目标标签序列。在另一个实施方案中，所述分子信标识别在苦味受体编码序列本身内的序列。信号传导探针可通过设计包含分别与标签的RNA序列或苦味受体编码序列互补的一部分的探针，来针对RNA标签或苦味受体编码序列。如果使用，则这些相同的技术可用于检测G蛋白的RNA序列。
鉴定调节苦味的化合物的方法
一方面，本发明提供鉴定调节苦味的化合物的方法。在一些实施方案中，所述方法是基于体外细胞的测定，以如筛选苦味受体调节剂；评估物质的苦味；产生用于结晶学和结合研究的蛋白；和研究化合物选择性和剂量、受体/化合物结合动力学和稳定性及受体表达对细胞生理机能(如，电生理机能、蛋白质运输、蛋白质折叠和蛋白质调节)的作用。
在一些实施方案中，基于体外细胞的测定使用表达以上讨论的苦味受体细胞和细胞系。表达苦味受体各种组合的细胞和细胞系可单独或一起使用以鉴定苦味受体调节剂(包括对特定苦味受体或者苦味受体的突变体形式或天然存在的等位基因变体特异的那些)，并获得关于独立形式的活性的信息。
调节剂包括改变苦味受体或其突变体形式或天然存在的等位基因变体的活性的任何物质或化合物。所述调节剂可为苦味受体激动剂(增效剂或活化剂)或拮抗剂(抑制剂或阻滞剂)，包括部分激动剂或拮抗剂、选择性激动剂或拮抗剂及反向激动剂，并且可为别构调节剂。即使一种物质或化合物的调节活性在不同条件或浓度下或根据苦味受体的不同形式(如，突变体形式和天然存在的等位基因变体)改变，这种物质或化合物仍是调节剂。在其它方面，调节剂可改变另一种调节剂影响苦味受体作用的能力。例如，一种不被拮抗剂抑制的苦味受体形式的调节剂可产生易被拮抗剂抑制的此种形式的苦味受体。
通过基于苦味受体对各种调节剂的响应使体内形式的苦味受体的身份与已知形式的苦味受体的身份相关联，细胞和细胞系可用于鉴定不同形式的苦味受体在不同苦味受体病状中的作用。这使得能够选择对此类苦味受体-相关的病状或其它生理条件有较强针对性治疗的疾病-或组织-特异性的苦味受体调节剂。例如，因为许多天然存在的苦味化合物是有毒性的，所以苦味受体可作为避免摄取有毒的食物化合物的警告传感器。在胃肠粘膜中表达的苦味受体可能参与在内腔中的营养剂和有害物质的功能检查，并使得肠道准备吸收它们或引发保护性响应。它们还可通过活化肠-脑神经通路参与食物摄取的控制。因此，使用本发明的细胞系和方法鉴定的苦味受体调节剂可在多种背景下用于调节营养吸收，如以控制肥胖者的食欲和/或减少肠道内的营养吸收，或以控制营养不良患者的饥饿感和/或以增加营养吸收和/或食物能量。苦味受体调节剂还可用于鉴定苦味化合物、进一步表征苦味受体的特定化学或结构基元或重要残基(影响它们结合性质)、鉴定广泛、温和或选择性适合与配体结合的苦味受体、基于它们的结合特性定义苦味受体的组合和亚类、使孤儿苦味受体脱孤、使用此类数据用于苦味受体的分子建模或药物设计，和确定各种苦味受体在何种组织中有活性。
为了鉴定苦味受体调节剂，表达细胞或细胞系的苦味受体可在以下条件下暴露于测试化合物，其中与适合的对照(如，不暴露于测试化合物的细胞)相比，苦味受体将期望起作用并然后检测到苦味受体活性在统计学上有显著变化(如，p<0.05)。使用已知激动剂或拮抗剂的阳性和/或阴性对照和/或表达不同苦味受体或其突变体形式或天然存在的等位基因变体的细胞还可使用。在一些实施方案中，待检测和/或测量的苦味受体活性是胞内游离钙水平的变化。本领域的普通技术人员将理解各种测定参数可被优化，如信噪比。
在又一方面，本发明提供鉴定针对孤儿苦味受体的配体的方法，即本发明提供使苦味受体脱孤的方法。在没有已知调节剂的情况下，表达苦味受体的细胞或细胞系可使用化合物或提取文库来筛选，以产生针对受体的表达特征。任选地，可将具有类似特征的受体(如果有的话)分在一组，并用已知的苦味化合物筛选结合一种或多种受体的一种或多种配体。一旦配体被鉴定，则所述结果可进一步被味道测试所证实。任选地，所述细胞和细胞系稳定表达天然(即无标签)苦味受体，因此使用该方法鉴定的配体是准确和相关的。
在一些实施方案中，包括细胞系集合的一种或多种细胞或细胞系暴露于测试化合物。在一些实施方案中，包括细胞系集合的一种或多种细胞或细胞系暴露于多种测试化合物(例如，测试化合物文库)。测试化合物文库可使用本发明的细胞系来筛选以鉴定一种或多种调节剂。所述测试化合物可为包括小分子、多肽、肽、肽模拟物、抗体或其抗原结合部分的化学部分。在抗体的情况下，它们可为非人抗体、嵌合抗体、人源化抗体或完全人抗体。抗体可为包含任何抗体的重链和轻链或抗原结合部分的完全互补物的完整抗体，包括抗体片段(诸如Fab，Fab’，F(ab’)2，Fd，Fv，dAb等)、单链抗体(scFv)、单结构域抗体、重链或轻链可变区的所有或抗原结合部分)。
在一些实施方案中，一种或多种细胞或细胞系，包括细胞系的集合，在促苦味剂的存在下暴露于测试化合物或多种测试化合物。在一些实施方案中，所述促苦味剂是活化苦味受体亚类的“特异性促苦味剂”。在一些实施方案中，所述促苦味剂是活化每种苦味受体的“普通苦味化合物”。普通苦味化合物的非限制性实例包括苯甲地那铵或糖精地那铵。降低促苦味剂对苦味受体活性诱导的测试化合物是促苦味剂的抑制剂。增加促苦味剂对苦味受体活性诱导的测试化合物是促苦味剂的促进剂。
一些苦味调节剂和测试化合物可显示出脱靶效应。优选地，所述苦味调节剂或测试化合物是选择性苦味调节剂，并且不显示出脱靶效应。
本发明的体外测定可使用细胞或细胞系的集合进行。在优选的实施方案中，细胞或细胞系的集合包括表达25种苦味受体和/或其变体的每一者的细胞或细胞系。此类小组可用于确定化合物的标靶对比脱靶活性，或者受体在纯苦味对比相关味道(即，涩味或金属味)中的作用。
在一些实施方案中，在基于细胞、功能性、高通量的筛选(HTS)中，如使用96孔、384孔、1536孔或较高的板规格(plate format)，测试大化合物集合的苦味受体调节活性。在一些实施方案中，测试化合物或多种测试化合物(包括测试化合物文库)可使用本发明的多于一种的细胞或细胞系(包括细胞系的集合)来筛选。如果使用各自表达不同的天然存在的或突变体苦味受体分子的多种细胞或细胞系，则人们可鉴定对多种苦味受体或其突变体形式或天然存在的等位基因变体有效的调节剂，或者可选地对具体苦味受体或其突变体形式或天然存在的等位基因变体特异的并且不调节其它苦味受体或其它形式的苦味受体的调节剂。在表达人苦味受体的细胞或细胞系的情况下，所述细胞可暴露于测试化合物来鉴定调节(增加或降低)苦味受体活性的化合物以用于治疗特征为不期望的苦味受体活性的疾病或疾患，或者降低或消失期望的苦味受体活性。
在一些实施方案中，在暴露至测试化合物之前，本发明的细胞或细胞系可通过例如酶的预处理来修饰，所述酶包括哺乳动物或其它动物的酶、植物酶、细菌酶、来自裂解细胞的酶、蛋白修饰酶、脂质修饰酶和口腔、胃肠道、胃或唾液中的酶。此类酶可包括例如激酶、蛋白酶、磷酸酶、糖苷酶、氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂解酶、异构酶、连接酶等。可选地，所述细胞和细胞系可先暴露于所述测试化合物，随后进行处理以鉴定化合物，所述化合物改变了处理对苦味受体的修饰。
鉴定和测量GPCR活化的测定为本领域所熟知。参见，如,“G-protein coupled receptors(Signal Transduction Series),”CRC Press1999；第1版；编者Haga和Berstein。任何适用于检测GPCR活化的测定可用于本发明的方法中，以评估潜在苦味受体调节剂对苦味受体活化的作用。此类测定的实例包括离子敏感型或膜电压荧光指示剂。在静息状态下，这些染料可渗透膜，从而暴露于细胞，使得它们能够基于浓度梯度进入细胞。一旦进入，细胞酶将染料转化为膜-不可渗透形式，将所述染料俘获(trapping)。膜不可渗透形式的染料通常还对例如游离胞内钙高度敏感，从而当用特定强度或波长的光刺激时，钙结合使得染料变为荧光的。因此，响应于GPCR活化的胞内钙释放可使用与结合钙的膜-可渗透染料来测量。此类染料包括Indo-1、Fura-2、Fluo-3、Fluo-4、Rhod-2、Rhod-5N、钙黄绿素、钙黄绿素蓝、cytoCalcein紫罗兰(cytoCalcein Violet)、Quin-2、Quest Fluo-8HTM、QuestFluo-8LTM、Quest Fluo8TM、Quest Rhod-4TM、腔肠素和钙-3。在具体实施方案中，GPCR活化使用Fluo-4或钙-3萤光来测量。在一些实施方案中，测定缓冲液(即负载溶液)不包括丙磺舒。胞内钙水平可使用例如荧光显微镜检术、流式细胞术、荧光光谱法和荧光微板读取器，通过测量来自响应于钙结合的此类染料的荧光来测量。大多数荧光指示剂来源于BAPTA螯合剂，其掺入了响应于钙的光-诱导的-电子转移体系。例如，Molecular Devices Corp.的和FlexStationTM仪器、Hamamatsu Corp.的FDSS和BMG Technologies的NOVOstarTM持续监测胞内钙水平的变化，从而以时间依赖性荧光信号的方式提供受体活性的动态读出。因此，这些仪器实现钙的高通量测量用于GPCR研究。
GPCR活性还可通过测量以下来评估：腺苷酸环化酶活性、IP3/Ca2+信号传导、磷脂酶C/胞内Ca2+信号传导、GTP酶活性、GTP结合、微生理计/生物传感器测定(参见，如,Hafner,2000,Biosens.Bioelectron.15:149-158)、花生四烯酸水平(参见，如,Gijon等,2000,J.Biol.Chem.,275:20146-20156)、cAMP/cGMP水平(通过放射免疫测定或用结合蛋白，参见，如,Horton和Baxendale,1995,Methods Mol.Biol.41:91-105)、二酰甘油(DAG)水平、肌醇三磷酸(IP3)水平、蛋白激酶C活性和/或MAP激酶活性。
鉴定调节由KCl引起的苦味的化合物的方法
根据另一方面，本发明提供鉴定调节由KCl引起的苦味的化合物方法。在一些实施方案中，所述方法鉴定调节、抑制或增强KCl对苦味受体的活化的化合物。在一些实施方案中，所述方法鉴定调节、抑制或增强KCl及随后的下游信号传导对苦味受体的活化的化合物。在一些实施方案中，所述方法鉴定调节、抑制或增强在由KCl刺激之后信号传导路径活化的化合物。在一些实施方案中，所述方法鉴定调节、抑制或增强由KCl引起的苦味感觉的化合物。如下实施例2所示，KCl活化苦味受体TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60。因此，调节KCl对TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60苦味受体的一者或多者活化的化合物应为由KCl引起的苦味的调节剂。在一些实施方案中，所述化合物抑制KCl对TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60苦味受体的一者或多者的活化。在此类实施方案中，所述化合物是由KCl引起的苦味的抑制剂。在一些实施方案中，所述化合物增强KCl对TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60苦味受体的一者或多者的活化。在此类实施方案中，所述化合物是由KCl引起的苦味的促进剂。在一些实施方案中，所述化合物活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60苦味受体的一者或多者。在此类实施方案中，所述化合物模拟由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，使用活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60苦味受体的一者或多者的促味剂，进行以上公开的鉴定调节苦味的化合物的任何方法。在一些实施方案中，所述促味剂选自KCl、乳酸钾、乙酰磺胺酸钾和普通苦味化合物。在一些实施方案中，所述普通苦味化合物是苯甲地那铵或糖精地那铵。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为5mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM或50mM。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为约5mM、约10mM、约15mM、约20mM、约25mM、约30mM、约35mM、约40mM、约45mM或约50mM。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为至少5mM、至少10mM、至少15mM、至少20mM、至少25mM、至少30mM、至少35mM、至少40mM、至少45mM或至少50mM。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为至少约5mM、至少约10mM、至少约15mM、至少约20mM、至少约25mM、至少约30mM、至少约35mM、至少约40mM、至少约45mM或至少约50mM。
在一些实施方案中，所述测试化合物调节、抑制或增强TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的两者或更多者的KCl-诱导的活化。在一些实施方案中，所述测试化合物调节、抑制或增强TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的三者或更多者的KCl诱导的活化。在一些实施方案中，所述测试化合物调节、抑制或增强TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的四者或更多者的KCl-诱导的活化。在一些实施方案中，所述测试化合物调节、抑制或增强TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的五者或更多者的KCl-诱导的活化。在一些实施方案中，所述测试化合物调节、抑制或增强TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的每一者的KCl-诱导的活化。
如上所述，在该部分中描述的鉴定调节由KCl引起的苦味的化合物的任何方法中，所述方法使用的苦味受体可与G-蛋白复合。可使用上述的任何G-蛋白。在一些实施方案中，所述G-蛋白是Gq蛋白、α转导素或α味蛋白。在一些实施方案中，所述Gq蛋白是Gα15蛋白。
在该部分中描述的鉴定调节由KCl引起的苦味的化合物的任何方法中，上述任何测定可用于测量苦味受体活性。在一些实施方案中，所述苦味受体活性是通过测量胞内钙浓度来测定的。在一些实施方案中，胞内钙浓度是使用钙敏感性荧光染料测量的。在一些实施方案中，所述钙敏感性荧光染料选自Indo-1、Fura-2、Fluo-3、Fluo-4、Rhod-2、Rhod-5N、钙黄绿素、钙黄绿素蓝、cytoCalcein紫罗兰、Quin-2、QuestFluo-8HTM、Quest Fluo-8LTM、Quest Fluo8TM、Quest Rhod-4TM、腔肠素和钙-3。在具体的实施方案中，所述钙敏感性荧光染料是Fluo-4或钙-3。
在一些实施方案中，所述方法包括提供选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的一种或多种苦味受体；使一种或多种苦味受体与活化所述一种或多种苦味受体的促味剂接触；测量一种或多种苦味受体的活性；洗涤一种或多种苦味受体；使一种或多种苦味受体与促味剂和测试化合物接触；和测量一种或多种苦味受体的活性。如果一种或多种苦味受体由促味剂引起的活性不同于一种或多种苦味受体由促味剂和测试化合物引起的活性，则所述测试化合物调节由KCl引起的苦味。如果一种或多种苦味受体由促味剂引起的活性高于一种或多种苦味受体由促味剂和测试化合物引起的活性，则所述测试化合物抑制由KCl引起的苦味。如果一种或多种苦味受体由促味剂引起的活性低于一种或多种苦味受体由促味剂和测试化合物引起的活性，则所述测试化合物增强由KCl引起的苦味。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使所述受体在洗涤之前或之后与所述测试化合物接触。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使一种或多种苦味受体与促味剂接触之前、同时或之后，使一种或多种苦味受体与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法包括提供第一一种或多种苦味受体和第二一种或多种苦味受体，所述苦味受体各自选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60；使第一一种或多种苦味受体与活化所述一种或多种苦味受体的促味剂接触；测量第一一种或多种苦味受体的活性；使第二一种或多种苦味受体与促味剂和测试化合物接触；和测量第二一种或多种苦味受体活性。如果第一一种或多种苦味受体的活性不同于第二一种或多种苦味受体的活性，则所述测试化合物调节由KCl引起的苦味。如果第一一种或多种苦味受体的活性高于第二一种或多种苦味受体的活性，则所述测试化合物抑制由KCl引起的苦味。如果第一一种或多种苦味受体的活性低于第二一种或多种苦味受体的活性，则所述测试化合物增强由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，将第一一种或多种苦味受体在测量活性之后洗涤，以提供第二一种或多种苦味受体。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使第二一种或多种苦味受体与促味剂接触之前、同时或之后，使第二一种或多种苦味受体与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法包括提供表达一种或多种苦味受体的细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60；使细胞与活化一种或多种苦味受体的促味剂接触；测量一种或多种苦味受体的活性；洗涤细胞；使细胞与促味剂和测试化合物接触；和测量一种或多种苦味受体的活性。如果一种或多种苦味受体由促味剂引起的活性不同于一种或多种苦味受体由促味剂和测试化合物引起的活性，则所述测试化合物调节由KCl引起的苦味。如果一种或多种苦味受体由促味剂引起的活性高于一种或多种苦味受体由促味剂和测试化合物引起的活性，则所述测试化合物抑制由KCl引起的苦味。如果一种或多种苦味受体由促味剂引起的活性低于一种或多种苦味受体由促味剂和测试化合物引起的活性，则所述测试化合物增强由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，所述细胞存在于体外细胞系中。在一些实施方案中，所述细胞存在于一组体外细胞系中。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使所述细胞在洗涤之前或之后与所述测试化合物接触。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使细胞与促味剂接触之前、同时或之后，使细胞与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法包括提供表达一种或多种苦味受体的第一细胞和表达一种或多种苦味受体的第二细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60；使第一细胞与活化所述一种或多种苦味受体的促味剂接触；测量第一细胞的苦味受体活性；使第二细胞与促味剂和测试化合物接触；和测量第二细胞的苦味受体活性。如果第一细胞的苦味受体活性不同于第二细胞的苦味受体活性，则所述测试化合物调节由KCl引起的苦味。如果第一细胞的苦味受体活性高于第二细胞的苦味受体活性，则所述测试化合物抑制由KCl引起的苦味。如果第一细胞的苦味受体活性低于第二细胞的苦味受体活性，则所述测试化合物增强由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，第一和第二细胞存在于体外细胞系中。在一些实施方案中，第一和第二细胞存在于体外细胞系的一个或多个小组中。在一些实施方案中，将第一细胞在测量苦味受体活性之后洗涤以提供第二细胞。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使第二细胞与促味剂接触之前、同时或之后使第二细胞与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括提供表达一种或多种苦味受体的第三细胞和表达一种或多种苦味受体的第四细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60；其中第三和第四细胞中的一种或多种苦味受体是相同的；并且其中第三和第四细胞中的一种或多种苦味受体不同于第一和第二细胞中的苦味受体。在一些实施方案中，所述方法进一步包括提供表达一种或多种苦味受体的第五细胞和表达一种或多种苦味受体的第六细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60；其中第五和第六细胞中的一种或多种苦味受体是相同的；并且其中第五和第六细胞中的一种或多种苦味受体不同于第一、第二、第三和第四细胞中的苦味受体。在一些实施方案中，所述方法进一步包括提供表达一种或多种苦味受体的第七细胞和表达一种或多种苦味受体的第八细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60；其中第七和第八细胞中的一种或多种苦味受体是相同的；并且其中第七和第八细胞中的一种或多种苦味受体不同于第一、第二、第三、第四、第五和第六细胞中的苦味受体。在一些实施方案中，所述方法进一步包括提供表达一种或多种苦味受体的第九细胞和表达一种或多种苦味受体的第十细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60；其中第九和第十细胞中的一种或多种苦味受体是相同的；并且其中第九和第十细胞中的一种或多种苦味受体不同于第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七和第八细胞中的苦味受体。在一些实施方案中，所述方法进一步包括提供表达一种或多种苦味受体的第十一细胞和表达一种或多种苦味受体的第十二细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60；其中第十一和第十二细胞中的一种或多种苦味受体是相同的；并且其中第十一和第十二细胞中的一种或多种苦味受体不同于第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九和第十细胞中的苦味受体。在此类实施方案中，所述方法包括使第三、第五、第七、第九和/或第十一细胞与活化一种或多种苦味受体的促味剂接触；测量第三、第五、第七、第九和/或第十一细胞的的苦味受体活性；使第四、第六、第八、第十和/或第十二细胞与促味剂和测试化合物接触；和测量第四、第六、第八、第十和/或第十二细胞的苦味受体活性。如果第三、第五、第七、第九和/或第十一细胞的苦味受体活性分别不同于第四、第六、第八、第十和/或第十二细胞的苦味受体活性，则所述测试化合物调节由KCl引起的苦味。如果第四、第六、第八、第十和/或第十二细胞的苦味受体活性分别低于第三、第五、第七、第九和/或第十一细胞的苦味受体活性，则所述测试化合物抑制由KCl引起的苦味。如果第四、第六、第八、第十和/或第十二细胞的苦味受体活性分别高于第三、第五、第七、第九和/或第十一细胞中的苦味受体活性，则所述测试化合物增强由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一和/或第十二细胞存在于体外细胞系中。在一些实施方案中，第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一和/或第十二细胞存在于体外细胞系的一个或多个小组中。在一些实施方案中，将第三、第五、第七、第九和/或第十一细胞在测量苦味受体活性之后洗涤，以分别提供第四、第六、第八、第十和/或第十二细胞。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使第四、第六、第八、第十和/或第十二细胞与促味剂接触之前、同时或之后，使第四、第六、第八、第十和/或第十二细胞与所述测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法包括提供一组细胞系，其中每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60，其中每种受体在至少一种细胞系中表达；使每种细胞系与活化选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的四者或更多者的促味剂接触；测量每种细胞系的苦味受体活性；洗涤每种细胞系；使每种细胞系与促味剂和测试化合物接触；和测量每种细胞系的苦味受体活性。如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时，选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的四种或更多种细胞系的的苦味受体活性不同，则所述测试化合物选择性调节由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的五种或更多种细胞系中不同。在一些实施方案中，苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60细胞系中不同。如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时，选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的四种或更多种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的五种或更多种细胞系中较高。在一些实施方案中，苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60细胞系中较高。如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时，选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的四种或更多种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的五种或更多种细胞系中较低。在一些实施方案中，苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60细胞系中较低。在一些实施方案中，如果化合物不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50和TAS2R55苦味受体活性，则所述测试化合物选择性调节、抑制或活化由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，所述小组是体外细胞系的匹配小组。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使细胞系与所述测试化合物在洗涤之前或之后接触。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使每种细胞系与促味剂接触之前、同时或之后，使每种细胞系与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法包括提供一组细胞系，其中所述小组包括表达选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的苦味受体的细胞系，其中每种受体在至少一种细胞系中表达；使每种细胞系与活化选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少两者的促味剂接触；测量每种细胞系的苦味受体活性；洗涤每种细胞系；使每种细胞系与促味剂和测试化合物接触；和测量每种细胞系的苦味受体活性。在一些实施方案中，在每个小组中的每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60，其中每种受体在至少一种细胞系中表达。如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时，选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少两种细胞系的苦味受体活性不同，则所述测试化合物选择性调节由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少三种细胞系中不同，则所述测试化合物选择性调节由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的细胞系的至少四种中不同，则所述测试化合物选择性调节由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少五种细胞系中不同，则所述测试化合物选择性调节由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60细胞系的每一者中不同，则所述测试化合物选择性调节由KCl引起的苦味。如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时，选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少两种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的细胞系的至少三种中较高，则所述测试化合物选择性抑制由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的细胞系的至少四种中较高，则所述测试化合物选择性抑制由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的细胞系的至少五种中较高，则所述测试化合物选择性抑制由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60细胞系的每一者中较高，则所述测试化合物选择性抑制由KCl引起的苦味。如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时，选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少两种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的细胞系的至少三种中较低，则所述测试化合物选择性增强由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的细胞系的至少四种中较低，则所述测试化合物选择性增强由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的细胞系的至少五种中较低，则所述测试化合物选择性增强由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60细胞系的每一者中较低，则所述测试化合物选择性增强由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果化合物不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50和TAS2R55苦味受体活性，则所述测试化合物选择性调节、抑制或活化由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，所述小组是体外细胞系的匹配小组。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使细胞系与所述测试化合物在洗涤之前或之后接触。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使每种细胞系与促味剂接触之前、同时或之后，使每种细胞系与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法包括提供第一小组的细胞系和第二小组的细胞系，其中每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60苦味受体，其中每种受体在至少一种细胞系中表达，并且其中所述第一和第二小组包括相同的细胞系；使第一小组中的每种细胞系与活化选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的四种或更多种的促味剂接触；测量第一小组中的每种细胞系的苦味受体活性；使第二小组中的每种细胞系与促味剂和测试化合物接触；和测量第二小组中的每种细胞系的苦味受体活性。如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的细胞系的四种或更多种的苦味受体活性不同，则所述测试化合物选择性调节由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的五种或更多种细胞系中不同。在一些实施方案中，苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60细胞系中不同。如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的四种或更多种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的五种或更多种细胞系中较高。在一些实施方案中，苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60细胞系中较高。如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的四种或更多种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的五种或更多种细胞系中较低。在一些实施方案中，苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60细胞系中较低。在一些实施方案中，如果与第一小组相比，在第二小组中测试化合物不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50和TAS2R55苦味受体活性，则所述测试化合物选择性调节、抑制或活化由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，第一和第二小组是体外细胞系的匹配的小组。在一些实施方案中，将第一小组的细胞系在测量其苦味受体活性之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。换言之，第一和第二小组的细胞系是相同的，所述洗涤步骤在第一测量步骤和第二接触步骤之间。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使细胞系与所述测试化合物在洗涤之前或之后接触。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使第二小组中的每种细胞系与促味剂接触之前、同时或之后，使第二小组中的每种细胞系与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法包括提供第一小组的细胞系和第二小组的细胞系，其中每个小组包括表达选自以下的苦味受体的细胞系：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60苦味受体，其中每种受体在至少一种细胞系中表达，并且其中所述第一和第二小组包括相同的细胞系；使第一小组中的每种细胞系与活化选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少两种的促味剂接触；测量第一小组中的每种细胞系的苦味受体活性；使第二小组中的每种细胞系与促味剂和测试化合物接触；和测量第二小组中的每种细胞系的苦味受体活性。在一些实施方案中，第一和第二小组中的每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60，其中每种受体在每个小组的至少一种细胞系中表达。如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的细胞系的至少两种的苦味受体活性不同，则所述测试化合物选择性调节由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的细胞系的至少三种中不同，则所述测试化合物选择性调节由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的细胞系的至少四种中不同，则所述测试化合物选择性调节由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的细胞系的至少五种中不同，则所述测试化合物选择性调节由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60细胞系的每一者中不同，则所述测试化合物选择性调节由KCl引起的苦味。如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少两种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少三种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少四种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少五种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60细胞系的每一者中较高，则所述测试化合物选择性抑制由KCl引起的苦味。如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少两种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少三种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少四种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少五种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60细胞系的每一者中较低，则所述测试化合物选择性增强由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第一小组相比，在第二小组中测试化合物不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50和TAS2R55苦味受体活性，则所述测试化合物选择性调节、抑制或活化由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，第一和第二小组是体外细胞系的匹配的小组。在一些实施方案中，将第一小组的细胞系在测量其苦味受体活性之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。换言之，第一和第二小组的细胞系是相同的，所述洗涤步骤在第一测量步骤和第二接触步骤之间。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使细胞系与所述测试化合物在洗涤之前或之后接触。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使第二小组中的每种细胞系与促味剂接触之前、同时或之后，使第二小组中的每种细胞系与测试化合物接触。
在一些实施方案中，鉴定由KCl引起的苦味的调节剂的以上任何方法所用的促味剂选自KCl、乳酸钾、乙酰磺胺酸钾和普通苦味化合物。在一些实施方案中，所述普通苦味化合物是苯甲地那铵或糖精地那铵。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为5mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM或50mM。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为约5mM、约10mM、约15mM、约20mM、约25mM、约30mM、约35mM、约40mM、约45mM或约50mM。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为至少5mM、至少10mM、至少15mM、至少20mM、至少25mM、至少30mM、至少35mM、至少40mM、至少45mM或至少50mM。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为至少约5mM、至少约10mM、至少约15mM、至少约20mM、至少约25mM、至少约30mM、至少约35mM、至少约40mM、至少约45mM或至少约50mM。
在另一方面，本发明提供鉴定模拟由KCl引起的苦味的化合物的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一小组的细胞系和第二小组的细胞系，其中每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60苦味受体，其中每种受体在至少一种细胞系中表达，并且其中所述第一和第二小组包括相同的细胞系；使第一小组中的每种细胞系与阴性对照接触；测量第一小组中的每种细胞系的苦味受体活性；使第一小组的每种细胞系与阴性对照接触；使第二小组中的每种细胞系与测试化合物接触；和测量第二小组中的每种细胞系的苦味受体活性。如果所述测试化合物诱导TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的苦味受体活性，则所述测试化合物模拟由KCl引起的苦味。在一些实施方案中，与第一小组相比，在第二小组中所述测试化合物不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50和TAS2R55苦味受体活性。在一些实施方案中，第一和第二小组是体外细胞系的匹配的小组。在一些实施方案中，将第一小组的细胞系在测量其苦味受体活性之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。换言之，第一和第二小组的细胞系是相同的，所述洗涤步骤在第一测量步骤和第二接触步骤之间。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使细胞系与所述测试化合物在洗涤之前或之后接触。在一些实施方案中，所述阴性对照是添加测试化合物之前的测定缓冲液。
在另一方面，本发明提供确定KCl是否存在于组合物中的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一小组的细胞系和第二小组的细胞系，其中每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60苦味受体，其中每种受体在至少一种细胞系中表达，并且其中所述第一和第二小组包括相同的细胞系；使第一小组中的每种细胞系与阴性对照接触；测量第一小组中的每种细胞系的苦味受体活性；使第二小组中的每种细胞系与所述组合物接触；和测量第二小组中的每种细胞系的苦味受体活性。如果与第一小组相比在第二小组中组合物诱导TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60苦味受体活性，并且与第一小组相比在第二小组中组合物不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50和TAS2R55苦味受体活性，则KCl存在于所述组合物中。在一些实施方案中，所述组合物是食品提取物。在一些实施方案中，所述组合物包含药物活性成分。在一些实施方案中，第一和第二小组是体外细胞系的匹配的小组。在一些实施方案中，将第一小组的细胞系在测量其苦味受体活性之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。换言之，第一和第二小组的细胞系是相同的，所述洗涤步骤在第一测量步骤和第二接触步骤之间。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使细胞系与所述测试化合物在洗涤之前或之后接触。在一些实施方案中，所述阴性对照是添加组合物之前的测定缓冲液。
在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的两种或更多种不同的苦味受体接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与各自表达选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的不同苦味受体的两种或更多种细胞接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的三种或更多种不同的味道受体接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与各自表达选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的不同苦味受体的三种或更多种细胞接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的四种或更多种不同的味道受体接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与各自表达选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的不同苦味受体的四种或更多种细胞接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的五种或更多种不同的味道受体接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与各自表达选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的不同苦味受体的五种或更多种细胞接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的六种或更多种不同的味道受体接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与各自表达选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的不同苦味受体的六种或更多种细胞接触。
在一些实施方案中，其中鉴定调节、抑制、增强或模拟由KCl引起的苦味的化合物的方法包括使TAS2R44或表达TAS2R44的细胞与促味剂或测试化合物接触，所述方法还包括使至少一种另外的苦味受体或表达至少一种另外的苦味受体的细胞与促味剂或测试化合物接触，其中所述至少一种另外的苦味受体选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14和TAS2R60。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括将调节、抑制、增强或模拟由KCl引起的苦味的测试化合物与食材、食材生产中使用的任何食材前体材料或任何添加物混合。在一些实施方案中，所述食材是供人消耗的。在一些实施方案中，所述食材是供动物消耗的，诸如供宠物或家畜消耗。在一些实施方案中，所述方法进一步包括将调节、抑制、增强或模拟由KCl引起的苦味的测试化合物与活性剂以药学上可接受的形式混合。
鉴定调节由乳酸钾引起的苦味的化合物的方法
根据另一方面，本发明提供鉴定调节由乳酸钾引起的苦味的化合物的方法。在一些实施方案中，所述方法鉴定调节、抑制或增强乳酸钾对苦味受体的活化的化合物。在一些实施方案中，所述方法鉴定调节、抑制或增强由乳酸钾及之后的下游信号传导引起的苦味受体活化的化合物。在一些实施方案中，所述方法鉴定调节、抑制或增强在乳酸钾刺激之后的信号传导路径的活化的化合物。在一些实施方案中，所述方法鉴定调节、抑制或增强由乳酸钾引起的苦味的感觉的化合物。如以下实施例3所示，乳酸钾活化苦味受体TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60。因此，调节TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60苦味受体的一者或多者的乳酸钾活化的化合物应为由乳酸钾引起的苦味的调节剂。在一些实施方案中，所述化合物抑制TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60苦味受体的一者或多者的乳酸钾活化。在此类实施方案中，所述化合物是由乳酸钾引起的苦味的抑制剂。在一些实施方案中，所述化合物增强TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60苦味受体的一者或多者的乳酸钾活化。在此类实施方案中，所述化合物是由乳酸钾引起的苦味的促进剂。在一些实施方案中，所述化合物活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60苦味受体的一者或多者。在此类实施方案中，所述化合物模拟由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，使用活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60苦味受体的一者或多者的促味剂，进行以上公开的鉴定调节苦味的化合物的任何方法。在一些实施方案中，所述促味剂选自KCl、乳酸钾、乙酰磺胺酸钾和普通苦味化合物。在一些实施方案中，所述普通苦味化合物是苯甲地那铵或糖精地那铵。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为5mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM或50mM。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为约5mM、约10mM、约15mM、约20mM、约25mM、约30mM、约35mM、约40mM、约45mM或约50mM。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为至少5mM、至少10mM、至少15mM、至少20mM、至少25mM、至少30mM、至少35mM、至少40mM、至少45mM或至少50mM。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为至少约5mM、至少约10mM、至少约15mM、至少约20mM、至少约25mM、至少约30mM、至少约35mM、至少约40mM、至少约45mM或至少约50mM。
在一些实施方案中，所述测试化合物调节、抑制或增强TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的两者或更多者的乳酸钾-诱导的活化。在一些实施方案中，所述测试化合物调节、抑制或增强TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的三者或更多者的乳酸钾-诱导的活化。在一些实施方案中，所述测试化合物调节、抑制或增强TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的四者或更多者的乳酸钾-诱导的活化。在一些实施方案中，所述测试化合物调节、抑制或增强TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的五者或更多者的乳酸钾-诱导的活化。在一些实施方案中，所述测试化合物调节、抑制或增强TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的六者或更多者的乳酸钾-诱导的活化。在一些实施方案中，所述测试化合物调节、抑制或增强TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的每一者的乳酸钾-诱导的活化。
如上所述，在该段中描述的鉴定调节由乳酸钾引起的苦味的化合物的任何方法中，所述方法使用的苦味受体可与G-蛋白复合。可使用上述的任何G-蛋白。在一些实施方案中，所述G-蛋白是Gq蛋白、α转导素或α味蛋白。在一些实施方案中，所述Gq蛋白是Gα15蛋白。
在该段中描述的鉴定调节由乳酸钾引起的苦味的化合物的任何方法中，上述任何测定可用于测量苦味受体活性。在一些实施方案中，所述苦味受体活性是通过测量胞内钙浓度来测定的。在一些实施方案中，胞内钙浓度是使用钙敏感性荧光染料测量的。在一些实施方案中，所述钙敏感性荧光染料选自Indo-1、Fura-2、Fluo-3、Fluo-4、Rhod-2、Rhod-5N、钙黄绿素、钙黄绿素蓝、cytoCalcein紫罗兰、Quin-2、QuestFluo-8HTM、Quest Fluo-8LTM、Quest Fluo8TM、Quest Rhod-4TM、腔肠素和钙-3。在具体的实施方案中，所述钙敏感性荧光染料是Fluo-4或钙-3。
在一些实施方案中，所述方法包括提供选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的一种或多种苦味受体；使一种或多种苦味受体与活化所述一种或多种苦味受体的促味剂接触；测量一种或多种苦味受体的活性；洗涤一种或多种苦味受体；使一种或多种苦味受体与促味剂和测试化合物接触；和测量一种或多种苦味受体的活性。如果由促味剂引起的一种或多种苦味受体的活性不同于由促味剂和测试化合物引起的一种或多种苦味受体的活性，则所述测试化合物调节由乳酸钾引起的苦味。如果由促味剂引起的一种或多种苦味受体的活性高于由促味剂和测试化合物引起的一种或多种苦味受体的活性，则所述测试化合物抑制由乳酸钾引起的苦味。如果由促味剂引起的一种或多种苦味受体的活性低于由促味剂和测试化合物引起的一种或多种苦味受体的活性，则所述测试化合物增强由乳酸钾引起的苦味。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使所述受体在洗涤之前或之后与所述测试化合物接触。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使一种或多种苦味受体与促味剂接触之前、同时或之后，使一种或多种苦味受体与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法包括提供第一一种或多种苦味受体和第二一种或多种苦味受体，所述苦味受体各自选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60；使第一一种或多种苦味受体与活化所述一种或多种苦味受体的促味剂接触；测量第一一种或多种苦味受体的活性；使第二一种或多种苦味受体与促味剂和测试化合物接触；和测量第二一种或多种苦味受体活性。如果第一一种或多种苦味受体的活性不同于第二一种或多种苦味受体的活性，则所述测试化合物调节由乳酸钾引起的苦味。如果第一一种或多种苦味受体的活性高于第二一种或多种苦味受体的活性，则所述测试化合物抑制由乳酸钾引起的苦味。如果第一一种或多种苦味受体的活性低于第二一种或多种苦味受体的活性，则所述测试化合物增强由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，将第一一种或多种苦味受体在测量活性之后洗涤，以提供第二一种或多种苦味受体。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使第二一种或多种苦味受体与促味剂接触之前、同时或之后，使第二一种或多种苦味受体与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法包括提供表达一种或多种苦味受体的细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60；使细胞与活化一种或多种苦味受体的促味剂接触；测量一种或多种苦味受体的活性；洗涤细胞；使细胞与促味剂和测试化合物接触；和测量一种或多种苦味受体的活性。如果由促味剂引起的一种或多种苦味受体的活性不同于由促味剂和测试化合物引起的一种或多种苦味受体的活性，则所述测试化合物调节由乳酸钾引起的苦味。如果由促味剂引起的一种或多种苦味受体的活性高于由促味剂和测试化合物引起的一种或多种苦味受体的活性，则所述测试化合物抑制由乳酸钾引起的苦味。如果由促味剂引起的一种或多种苦味受体的活性低于由促味剂和测试化合物引起的一种或多种苦味受体的活性，则所述测试化合物增强由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，所述细胞存在于体外细胞系中。在一些实施方案中，所述细胞存在于一组体外细胞系中。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使所述细胞在洗涤之前或之后与所述测试化合物接触。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使细胞与促味剂接触之前、同时或之后，使细胞与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法包括提供表达一种或多种苦味受体的第一细胞和表达一种或多种苦味受体的第二细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60；使第一细胞与活化一种或多种苦味受体的促味剂接触；测量第一细胞的苦味受体活性；使第二细胞与促味剂和测试化合物接触；和测量第二细胞的苦味受体活性。如果第一细胞的苦味受体活性不同于第二细胞的苦味受体活性，则所述测试化合物调节由乳酸钾引起的苦味。如果第一细胞的苦味受体活性高于第二细胞的苦味受体活性，则所述测试化合物抑制由乳酸钾引起的苦味。如果第一细胞的苦味受体活性低于第二细胞的苦味受体活性，则所述测试化合物增强由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，第一和第二细胞存在于体外细胞系中。在一些实施方案中，第一和第二细胞存在于体外细胞系的一个或多个小组中。在一些实施方案中，将第一细胞在测量苦味受体活性之后洗涤以提供第二细胞。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使第二细胞与促味剂接触之前、同时或之后使第二细胞与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括提供表达一种或多种苦味受体的第三细胞和表达一种或多种苦味受体的第四细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60；其中第三和第四细胞中的一种或多种苦味受体是相同的；并且其中第三和第四细胞中的苦味受体不同于第一和第二细胞中的苦味受体。在一些实施方案中，所述方法进一步包括提供表达一种或多种苦味受体的第五细胞和表达一种或多种苦味受体的第六细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60；其中第五和第六细胞中的一种或多种苦味受体是相同的；并且其中第五和第六细胞中的一种或多种苦味受体不同于第一、第二、第三和第四细胞中的苦味受体。在一些实施方案中，所述方法进一步包括提供表达一种或多种苦味受体的第七细胞和表达一种或多种苦味受体的第八细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60；其中第七和第八细胞中的一种或多种苦味受体是相同的；并且其中第七和第八细胞中的苦味受体不同于第一、第二、第三、第四、第五和第六细胞中的苦味受体。在一些实施方案中，所述方法进一步包括提供表达一种或多种苦味受体的第九细胞和表达一种或多种苦味受体的第十细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60；其中第九和第十细胞中的一种或多种苦味受体是相同的；并且其中第九和第十细胞中的一种或多种苦味受体不同于第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七和第八细胞中的苦味受体。在一些实施方案中，所述方法进一步包括提供表达一种或多种苦味受体的第十一细胞和表达一种或多种苦味受体的第十二细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60；其中第十一和第十二细胞中的一种或多种苦味受体是相同的；并且其中第十一和第十二细胞中的一种或多种苦味受体不同于第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九和第十细胞中的苦味受体。在一些实施方案中，所述方法进一步包括提供表达一种或多种苦味受体的第十三细胞和表达一种或多种苦味受体的第十四细胞，其中一种或多种苦味受体选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60；其中第十三和第十四细胞中的一种或多种苦味受体是相同的；其中第十三和第十四细胞中的一种或多种苦味受体是相同的；并且其中第十三和第十四细胞中的苦味受体不同于第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一和第十二细胞中的苦味受体。在此类实施方案中，所述方法包括使第三、第五、第七、第九、第十一和/或第十三细胞与活化一种或多种苦味受体的促味剂接触；测量第三、第五、第七、第九、第十一和/或第十三细胞的苦味受体活性；使第四、第六、第八、第十、第十二和/或第十四细胞与促味剂和测试化合物接触；并且测量第四、第六、第八、第十、第十二和/或第十四细胞的苦味受体活性。如果第三、第五、第七、第九、第十一和/或第十三细胞的苦味受体活性分别不同于第四、第六、第八、第十、第十二和/或第十四细胞的苦味受体活性，则所述测试化合物调节由乳酸钾引起的苦味。如果第四、第六、第八、第十、第十二和/或第十四细胞的苦味受体活性分别低于第三、第五、第七、第九、第十一和/或第十三细胞的苦味受体活性，则所述测试化合物抑制由乳酸钾引起的苦味。如果第四、第六、第八、第十、第十二和/或第十四细胞的苦味受体活性分别高于第三、第五、第七、第九、第十一和/或第十三细胞的苦味受体活性，则所述测试化合物增强由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三和/或第十四细胞存在于体外细胞系中。在一些实施方案中，第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三和/或第十四存在于体外细胞系的一个或多个小组中。在一些实施方案中，将第三、第五、第七、第九、第十一和/或第十三细胞在测量苦味受体活性之后洗涤，以分别提供第四、第六、第八、第十、第十二和/或第十四细胞。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使第四、第六、第八、第十、第十二和/或第十四细胞与促味剂接触之前、同时或之后，使第四、第六、第八、第十、第十二和/或第十四细胞与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法包括提供一组细胞系，其中每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60，其中每种受体在至少一种细胞系中表达；使每种细胞系与活化选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的四者或更多者的促味剂接触；测量每种细胞系的苦味受体活性；洗涤每种细胞系；使每种细胞系与促味剂和测试化合物接触；和测量每种细胞系的苦味受体活性。如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时，选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的四种或更多种细胞系的苦味受体活性不同，则所述测试化合物选择性调节由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的五种或更多种细胞系中不同。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的六种或更多种细胞系中不同。在一些实施方案中，苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60细胞系中不同。如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时，选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的四种或更多种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的五种或更多种细胞系中较高。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的六种或更多种细胞系中较高。在一些实施方案中，苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60细胞系中较高。如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时，选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的四种或更多种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的五种或更多种细胞系中较低。在一些实施方案中，苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60细胞系中较低。在一些实施方案中，如果化合物不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50和TAS2R55苦味受体活性，则所述测试化合物选择性调节、抑制或活化由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，所述小组是体外细胞系的匹配小组。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使细胞系与所述测试化合物在洗涤之前或之后接触。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使每种细胞系与促味剂接触之前、同时或之后，使每种细胞系与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法包括提供一组细胞系，其中所述小组包括表达选自：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的苦味受体的细胞系，其中每种受体在至少一种细胞系中表达；使每种细胞系与活化选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少两种的促味剂接触；测量每种细胞系的苦味受体活性；洗涤每种细胞系；使每种细胞系与促味剂和测试化合物接触；和测量每种细胞系的苦味受体活性。在一些实施方案中，在每个小组中的每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60，其中每种受体在至少一种细胞系中表达。如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少两种细胞系的苦味受体活性不同，则所述测试化合物选择性调节由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少三种细胞系中不同，则所述测试化合物选择性调节由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少四种细胞系中不同，则所述测试化合物选择性调节由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少五种细胞系中不同，则所述测试化合物选择性调节由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少六种细胞系中不同，则所述测试化合物选择性调节由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60细胞系的每一者中不同，则所述测试化合物选择性调节由乳酸钾引起的苦味。如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少两种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少三种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少四种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少五种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少六种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60细胞系的每一者中较高，则所述测试化合物选择性抑制由乳酸钾引起的苦味。如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少两种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时，选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少三种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少四种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少五种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少六种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60细胞系的每一者中较低，则所述测试化合物选择性增强由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果化合物不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50和TAS2R55苦味受体活性，则所述测试化合物选择性调节、抑制或活化由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，所述小组是体外细胞系的匹配小组。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使细胞系与所述测试化合物在洗涤之前或之后接触。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使每种细胞系与促味剂接触之前、同时或之后，使每种细胞系与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法包括提供第一小组的细胞系和第二小组的细胞系，其中每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60苦味受体，其中每种受体在至少一种细胞系中表达，并且其中所述第一和第二小组包括相同的细胞系；使第一小组中的每种细胞系与活化选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的四者或更多者的促味剂接触；测量第一小组的每种细胞系的苦味受体活性；使第二小组中的每种细胞系与促味剂和测试化合物接触；和测量第二小组中的每种细胞系的苦味受体活性。如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的四种或更多种细胞系的苦味受体活性不同，则所述测试化合物选择性调节由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的五种或更多种细胞系中不同。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的六种或更多种细胞系中不同。在一些实施方案中，苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60细胞系中不同。如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的四种或更多种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的五种或更多种细胞系中较高。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的六种或更多种细胞系中较高。在一些实施方案中，苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60细胞系中较高。如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的四种或更多种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的五种或更多种细胞系中较低。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的六种或更多种细胞系中较低。在一些实施方案中，苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60细胞系中较低。在一些实施方案中，如果与第一小组相比，在第二小组中测试化合物不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50和TAS2R55苦味受体活性，则所述测试化合物选择性调节、抑制或活化由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，第一和第二小组是体外细胞系的匹配的小组。在一些实施方案中，将第一小组的细胞系在测量其苦味受体活性之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。换言之，第一和第二小组的细胞系是相同的，所述洗涤步骤在第一测量步骤和第二接触步骤之间。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使细胞系与所述测试化合物在洗涤之前或之后接触。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使第二小组的每种细胞系与促味剂接触之前、同时或之后，使第二小组的每种细胞系与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法包括提供第一小组的细胞系和第二小组的细胞系，其中每个小组包括表达选自以下的苦味受体的细胞系：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60苦味受体，其中每种受体在至少一种细胞系中表达，并且其中所述第一和第二小组包括相同的细胞系；使第一小组中的每种细胞系与活化选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少两者的促味剂接触；测量第一小组的每种细胞系的苦味受体活性；使第二小组中的每种细胞系与促味剂和测试化合物接触；和测量第二小组中的每种细胞系的苦味受体活性。在一些实施方案中，第一和第二小组中的每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60，其中每种受体在每个小组的至少一种细胞系中表达。如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的细胞系的至少两种苦味受体活性不同，则所述测试化合物选择性调节由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少三种细胞系的苦味受体活性不同，则所述测试化合物选择性调节由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少四种细胞系中的苦味受体活性不同，则所述测试化合物选择性调节由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少五种细胞系中不同，则所述测试化合物选择性调节由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少六种细胞系中不同，则所述测试化合物选择性调节由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60细胞系的每一者中不同，则所述测试化合物选择性调节由乳酸钾引起的苦味。如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少两种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少三种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少四种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少五种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少六种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60细胞系的每一者中较高，则所述测试化合物选择性抑制由乳酸钾引起的苦味。如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少两种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少三种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少四种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少五种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的至少六种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中苦味受体活性在TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60细胞系的每一者中较低，则所述测试化合物选择性增强由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第一小组相比，在第二小组中测试化合物不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50和TAS2R55苦味受体活性，则所述测试化合物选择性调节、抑制或活化由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，第一和第二小组是体外细胞系的匹配小组。在一些实施方案中，将第一小组的细胞系在测量其苦味受体活性之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。换言之，第一和第二小组的细胞系是相同的，所述洗涤步骤在第一测量步骤和第二接触步骤之间。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使细胞系与所述测试化合物在洗涤之前或之后接触。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使第二小组的每种细胞系与促味剂接触之前、同时或之后，使第二小组的每种细胞系与测试化合物接触。
在一些实施方案中，鉴定由乳酸钾引起的苦味的调节剂的以上任何方法所用的促味剂选自KCl、乳酸钾、乙酰磺胺酸钾和普通苦味化合物。在一些实施方案中，所述普通苦味化合物是苯甲地那铵或糖精地那铵。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为5mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM或50mM。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为约5mM、约10mM、约15mM、约20mM、约25mM、约30mM、约35mM、约40mM、约45mM或约50mM。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为至少5mM、至少10mM、至少15mM、至少20mM、至少25mM、至少30mM、至少35mM、至少40mM、至少45mM或至少50mM。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为至少约5mM、至少约10mM、至少约15mM、至少约20mM、至少约25mM、至少约30mM、至少约35mM、至少约40mM、至少约45mM或至少约50mM。
在另一方面，本发明提供鉴定模拟由乳酸钾引起的苦味的化合物的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一小组的细胞系和第二小组的细胞系，其中每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60苦味受体，其中每种受体在至少一种细胞系中表达，并且其中所述第一和第二小组包括相同的细胞系；使第一小组中的每种细胞系与阴性对照接触；测量第一小组中的每种细胞系的苦味受体活性；使第一小组的每种细胞系与阴性对照接触；使第二小组中的每种细胞系与测试化合物接触；和测量第二小组中的每种细胞系的苦味受体活性。如果所述测试化合物诱导TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的苦味受体活性，则所述测试化合物模拟由乳酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，与第一小组相比，在第二小组中所述测试化合物不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50和TAS2R55苦味受体活性。在一些实施方案中，第一和第二小组是体外细胞系的匹配的小组。在一些实施方案中，将第一小组的细胞系在测量其苦味受体活性之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。换言之，第一和第二小组的细胞系是相同的，所述洗涤步骤在第一测量步骤和第二接触步骤之间。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使细胞系与所述测试化合物在洗涤之前或之后接触。在一些实施方案中，所述阴性对照是添加测试化合物之前的测定缓冲液。
在另一方面，本发明提供确定乳酸钾是否存在于组合物中的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一小组的细胞系和第二小组的细胞系，其中每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60苦味受体，其中每种受体在至少一种细胞系中表达，并且其中所述第一和第二小组包括相同的细胞系；使第一小组中的每种细胞系与阴性对照接触；测量第一小组的每种细胞系的苦味受体活性；使第二小组中的每种细胞系与所述组合物接触；和测量第二小组中的每种细胞系的苦味受体活性。如果与第一小组相比在第二小组中组合物诱导TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60苦味受体活性，并且与第一小组相比在第二小组中组合物不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50和TAS2R55苦味受体活性，则乳酸钾存在于所述组合物中。在一些实施方案中，所述组合物是食品提取物。在一些实施方案中，所述组合物包含药物活性成分。在一些实施方案中，第一和第二小组是体外细胞系的匹配的小组。在一些实施方案中，将第一小组的细胞系在测量其苦味受体活性之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。换言之，第一和第二小组的细胞系是相同的，所述洗涤步骤在第一测量步骤和第二接触步骤之间。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使细胞系与所述测试化合物在洗涤之前或之后接触。在一些实施方案中，所述阴性对照是添加组合物之前的测定缓冲液。
在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的两种或更多种不同的苦味受体接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与各自表达选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的不同苦味受体的两种或更多种细胞接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的三种或更多种不同味道受体接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与各自表达选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的不同苦味受体的三种或更多种细胞接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的四种或更多种不同的味道受体接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与各自表达选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的不同苦味受体的四种或更多种细胞接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的五种或更多种不同的味道受体接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与各自表达选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的不同苦味受体的五种或更多种细胞接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的六种或更多种不同的味道受体接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与各自表达选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的不同苦味受体的六种或更多种细胞接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的七种或更多种的不同味道受体接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与各自表达选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的不同苦味受体的七种或更多种细胞接触。
在一些实施方案中，其中鉴定调节、抑制、增强或模拟由乳酸钾引起的苦味的化合物的方法包括使TAS2R44或表达TAS2R44的细胞与促味剂或测试化合物接触，所述方法还包括使至少一种另外的苦味受体或表达至少一种另外的苦味受体的细胞与促味剂或测试化合物接触，其中所述至少一种另外的苦味受体选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R46和TAS2R60。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括将调节、抑制、增强或模拟由乳酸钾引起的苦味的测试化合物与食材、食材生产中使用的任何食材前体材料或任何添加物混合。在一些实施方案中，所述食材是供人消耗的。在一些实施方案中，所述食材是供动物消耗的，诸如供宠物或家畜消耗。在一些实施方案中，所述方法还包括将调节、抑制、增强或模拟由乳酸钾引起的苦味的测试化合物与活性剂以药学上可接受的形式混合。
鉴定调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的化合物的方法
根据另一方面，本发明提供鉴定调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的化合物的方法。在一些实施方案中，所述方法鉴定调节、抑制或增强乙酰磺胺酸钾对苦味受体活化的化合物。在一些实施方案中，所述方法鉴定调节、抑制或增强乙酰磺胺酸钾及随后的下游信号传导对苦味受体活化的化合物。在一些实施方案中，所述方法鉴定调节、抑制或增强由乙酰磺胺酸钾刺激之后信号传导路径活化的化合物。在一些实施方案中，所述方法鉴定调节、抑制或增强由乙酰磺胺酸钾引起的苦味感觉的化合物。如下实施例4所示，乙酰磺胺酸钾活化苦味受体TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44。因此，调节乙酰磺胺酸钾对TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44苦味受体的一者或多者活化的化合物应为由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的调节剂。在一些实施方案中，所述化合物抑制乙酰磺胺酸钾对TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44苦味受体的一者或多者的活化。在此类实施方案中，所述化合物是由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的抑制剂。在一些实施方案中，所述化合物增强乙酰磺胺酸钾对TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44苦味受体的一者或多者的活化。在此类实施方案中，所述化合物是由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的促进剂。在一些实施方案中，所述化合物活化TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44苦味受体的一者或多者。在此类实施方案中，所述化合物模拟由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，使用活化TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44苦味受体的一者或多者的促味剂，进行以上公开的鉴定调节苦味的化合物的任何方法。在一些实施方案中，所述促味剂选自KCl、乳酸钾、乙酰磺胺酸钾和普通苦味化合物。在一些实施方案中，所述普通苦味化合物是苯甲地那铵或糖精地那铵。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为5mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM或50mM。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为约5mM、约10mM、约15mM、约20mM、约25mM、约30mM、约35mM、约40mM、约45mM或约50mM。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为至少5mM、至少10mM、至少15mM、至少20mM、至少25mM、至少30mM、至少35mM、至少40mM、至少45mM或至少50mM。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为至少约5mM、至少约10mM、至少约15mM、至少约20mM、至少约25mM、至少约30mM、至少约35mM、至少约40mM、至少约45mM或至少约50mM。
在一些实施方案中，所述测试化合物调节、抑制或增强TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的两者或更多者的乙酰磺胺酸钾-诱导的活化。在一些实施方案中，所述测试化合物调节、抑制或增强TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的三者或更多者的乙酰磺胺酸钾-诱导的活化。在一些实施方案中，所述测试化合物调节、抑制或增强TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的四者或更多者的乙酰磺胺酸钾-诱导的活化。在一些实施方案中，所述测试化合物调节、抑制或增强TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的五者或更多者的乙酰磺胺酸钾-诱导的活化。在一些实施方案中，所述测试化合物调节、抑制或增强TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的六者或更多者的乙酰磺胺酸钾-诱导的活化。在一些实施方案中，所述测试化合物调节、抑制或增强TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的每一者的乙酰磺胺酸钾-诱导的活化。
如上所述，在该段中描述的鉴定调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的化合物的任何方法中，所述方法使用的苦味受体可与G-蛋白复合。可使用上述的任何G-蛋白。在一些实施方案中，所述G-蛋白是Gq蛋白、α转导素或α味蛋白。在一些实施方案中，所述Gq蛋白是Gα15蛋白。
在该段中描述的鉴定调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的化合物的任何方法中，上述任何测定可用于测量苦味受体活性。在一些实施方案中，所述苦味受体活性是通过测量胞内钙浓度来测定的。在一些实施方案中，胞内钙浓度是使用钙敏感性荧光染料测量的。在一些实施方案中，所述钙敏感性荧光染料选自Indo-1、Fura-2、Fluo-3、Fluo-4、Rhod-2、Rhod-5N、钙黄绿素、钙黄绿素蓝、cytoCalcein紫罗兰、Quin-2、Quest Fluo-8HTM、Quest Fluo-8LTM、Quest Fluo8TM、Quest Rhod-4TM、腔肠素和钙-3。在具体的实施方案中，所述钙敏感性荧光染料是Fluo-4或钙-3。
在一些实施方案中，所述方法包括提供选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的一种或多种苦味受体；使一种或多种苦味受体与活化所述一种或多种苦味受体的促味剂接触；测量一种或多种苦味受体的活性；洗涤一种或多种苦味受体；使一种或多种苦味受体与促味剂和测试化合物接触；和测量一种或多种苦味受体的活性。如果由促味剂引起的一种或多种苦味受体的活性不同于由促味剂和测试化合物引起的一种或多种苦味受体的活性，则所述测试化合物调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。如果由于促味剂引起的一种或多种的苦味受体活性高于由于促味剂和测试化合物引起的一种或多种苦味受体的活性，则所述测试化合物抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。如果由于苦味剂引起的一种或多种苦味受体的活性低于由于促味剂和测试化合物引起的一种或多种苦味受体的活性，则所述测试化合物增强由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使所述受体在洗涤之前或之后与所述测试化合物接触。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使一种或多种苦味受体与促味剂接触之前、同时或之后，使一种或多种苦味受体与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法包括提供第一一种或多种苦味受体和第二一种或多种苦味受体，所述苦味受体各自选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44；使第一一种或多种苦味受体与活化所述一种或多种苦味受体的促味剂接触；测量第一一种或多种苦味受体的活性；使第二一种或多种苦味受体与促味剂和测试化合物接触；和测量第二一种或多种苦味受体活性。如果第一一种或多种苦味受体的活性不同于第二一种或多种苦味受体的活性，则所述测试化合物调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。如果第一一种或多种苦味受体的活性高于第二一种或多种苦味受体的活性，则所述测试化合物抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。如果第一一种或多种苦味受体的活性低于第二一种或多种苦味受体的活性，则所述测试化合物增强由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，将第一一种或多种苦味受体在测量活性之后洗涤，以提供第二一种或多种苦味受体。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使第二一种或多种苦味受体与促味剂接触之前、同时或之后，使第二一种或多种苦味受体与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法包括提供表达一种或多种苦味受体的细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44；使细胞与活化一种或多种苦味受体的促味剂接触；测量一种或多种苦味受体的活性；洗涤细胞；使细胞与促味剂和测试化合物接触；和测量一种或多种苦味受体的活性。如果由促味剂引起的一种或多种苦味受体的活性不同于由促味剂和测试化合物引起的一种或多种苦味受体的活性，则所述测试化合物调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。如果由于促味剂引起的一种或多种的苦味受体活性高于由于促味剂和测试化合物引起的一种或多种苦味受体的活性，则所述测试化合物抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。如果由于苦味剂引起的一种或多种苦味受体的活性低于由于促味剂和测试化合物引起的一种或多种苦味受体的活性，则所述测试化合物增强由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，所述细胞存在于体外细胞系中。在一些实施方案中，所述细胞存在于一组体外细胞系中。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使所述细胞在洗涤之前或之后与所述测试化合物接触。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使细胞与促味剂接触之前、同时或之后，使细胞与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法包括提供表达一种或多种苦味受体的第一细胞和表达一种或多种苦味受体的第二细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44；使第一细胞与活化一种或多种苦味受体的促味剂接触；测量第一细胞的苦味受体活性；使第二细胞与促味剂和测试化合物接触；和测量第二细胞的苦味受体活性。如果第一细胞的苦味受体活性不同于第二细胞的苦味受体活性，则所述测试化合物调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。如果第一细胞的苦味受体活性高于第二细胞的苦味受体活性，则所述测试化合物抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。如果第一细胞的苦味受体活性低于第二细胞的苦味受体活性，则所述测试化合物增强由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，第一和第二细胞存在于体外细胞系中。在一些实施方案中，第一和第二细胞存在于体外细胞系的一个或多个小组中。在一些实施方案中，将第一细胞在测量苦味受体活性之后洗涤以提供第二细胞。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使第二细胞与促味剂接触之前、同时或之后使第二细胞与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括提供表达一种或多种苦味受体的第三细胞和表达一种或多种苦味受体的第四细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44；其中第三和第四细胞中的一种或多种苦味受体相同；并且其中第三和第四细胞中的苦味受体不同于第一和第二细胞中的苦味受体。在一些实施方案中，所述方法进一步包括提供表达一种或多种苦味受体的第五细胞和表达一种或多种苦味受体的第六细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44；其中第五和第六细胞中的一种或多种苦味受体是相同的；并且其中第五和第六细胞中的一种或多种苦味受体不同于第一、第二、第三和第四细胞中的苦味受体。在一些实施方案中，所述方法进一步包括提供表达一种或多种苦味受体的第七细胞和表达一种或多种苦味受体的第八细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44；其中第七和第八细胞中的一种或多种苦味受体是相同的；并且其中第七和第八细胞中的苦味受体不同于第一、第二、第三、第四、第五和第六细胞中的苦味受体。在一些实施方案中，所述方法进一步包括提供表达一种或多种苦味受体的第九细胞和表达一种或多种苦味受体的第十细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44；其中第九和第十细胞中的一种或多种苦味受体是相同的；并且其中第九和第十细胞中的一种或多种苦味受体不同于第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七和第八细胞中的苦味受体。在一些实施方案中，所述方法进一步包括提供表达一种或多种苦味受体的第十一细胞和表达一种或多种苦味受体的第十二细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44；其中第十一和第十二细胞中的一种或多种苦味受体是相同的；并且其中第十一和第十二细胞中的一种或多种苦味受体不同于第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九和第十细胞中的苦味受体。在一些实施方案中，所述方法进一步包括提供表达一种或多种苦味受体的第十三细胞和表达一种或多种苦味受体的第十四细胞，其中所述一种或多种苦味受体选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44；其中第十三和第十四细胞中的一种或多种苦味受体是相同的；并且其中第十三和第十四细胞中的苦味受体不同于第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一和第十二细胞中的苦味受体。在此类实施方案中，所述方法包括使第三、第五、第七、第九、第十一和/或第十三细胞与活化一种或多种苦味受体的促味剂接触；测量第三、第五、第七、第九、第十一和/或第十三细胞的苦味受体活性；使第四、第六、第八、第十、第十二和/或第十四细胞与促味剂和测试化合物接触；并且测量第四、第六、第八、第十、第十二和/或第十四细胞的苦味受体活性。如果第三、第五、第七、第九、第十一和/或第十三细胞的苦味受体活性分别不同于第四、第六、第八、第十、第十二和/或第十四细胞的苦味受体活性，则所述测试化合物调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。如果第四、第六、第八、第十、第十二和/或第十四细胞的苦味受体活性分别低于第三、第五、第七、第九、第十一和/或第十三细胞的苦味受体活性，则所述测试化合物抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。如果第四、第六、第八、第十、第十二和/或第十四细胞的苦味受体活性分别高于第三、第五、第七、第九、第十一和/或第十三细胞的苦味受体活性，则所述测试化合物增强由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三和/或第十四细胞存在于体外细胞系中。在一些实施方案中，第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三和/或第十四存在于体外细胞系的一个或多个小组中。在一些实施方案中，将第三、第五、第七、第九、第十一和/或第十三细胞在测量苦味受体活性之后洗涤，以分别提供第四、第六、第八、第十、第十二和/或第十四细胞。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使第四、第六、第八、第十、第十二和/或第十四细胞与促味剂接触之前、同时或之后，使第四、第六、第八、第十、第十二和/或第十四细胞与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法包括提供一组细胞系，其中每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60，其中每种受体在至少一种细胞系中表达；使每种细胞系与活化选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的四者或更多者的促味剂接触；测量每种细胞系的苦味受体活性；洗涤每种细胞系；使每种细胞系与促味剂和测试化合物接触；和测量每种细胞系的苦味受体活性。如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的四种或更多种细胞系的苦味受体活性不同，则所述测试化合物选择性调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的五种或更多种细胞系中不同。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的六种或更多种细胞系中不同。在一些实施方案中，苦味受体活性在TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44细胞系中不同。如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的四种或更多种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的五种或更多种细胞系中较高。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的六种或更多种细胞系中较高。在一些实施方案中，苦味受体活性在TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44细胞系中较高。如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的四种或更多种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的五种或更多种细胞系中较低。在一些实施方案中，苦味受体活性在TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44细胞系中较低。在一些实施方案中，如果化合物不诱导TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60苦味受体活性，则所述测试化合物选择性调节、抑制或活化由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，所述小组是体外细胞系的匹配小组。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使细胞系与所述测试化合物在洗涤之前或之后接触。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使每种细胞系与促味剂接触之前、同时或之后，使每种细胞系与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法包括提供一组细胞系，其中所述小组包括表达选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的苦味受体的细胞系，其中每种受体在至少一种细胞系中表达；使每种细胞系与活化选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的两者的促味剂接触；测量每种细胞系的苦味受体活性；洗涤每种细胞系；使每种细胞系与促味剂和测试化合物接触；和测量每种细胞系的苦味受体活性。在一些实施方案中，在每个小组中的每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60，其中每种受体在至少一种细胞系中表达。如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少两种细胞系的苦味受体活性不同，则所述测试化合物选择性调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少三种细胞系中不同，则所述测试化合物选择性调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少四种细胞系中不同，则所述测试化合物选择性调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少五种细胞系中不同，则所述测试化合物选择性调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少六种细胞系中不同，则所述测试化合物选择性调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44细胞系的每一者中不同，则所述测试化合物选择性调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少两种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少三种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时，选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少四种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少五种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少六种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时苦味受体活性在TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44细胞系的每一者中较高，则所述测试化合物选择性抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少两种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与当用促味剂和测试化合物接触时相比，当用促味剂接触时选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少三种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少四种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少五种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少六种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与当与促味剂和测试化合物接触时相比，当与促味剂接触时苦味受体活性在TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44细胞系的每一者中较低，则所述测试化合物选择性增强由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果化合物不诱导TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60苦味受体活性，则所述测试化合物选择性调节、抑制或活化由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，所述小组是体外细胞系的匹配小组。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使细胞系与所述测试化合物在洗涤之前或之后接触。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使每种细胞系与促味剂接触之前、同时或之后，使每种细胞系与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法包括提供第一小组的细胞系和第二小组的细胞系，其中每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60苦味受体，其中每种受体在至少一种细胞系中表达，并且其中所述第一和第二小组包括相同的细胞系；使第一小组中的每种细胞系与活化选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的四者或更多者的促味剂接触；测量第一小组的每种细胞系的苦味受体活性；使第二小组中的每种细胞系与促味剂和测试化合物接触；和测量第二小组中的每种细胞系的苦味受体活性。如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的四种或更多种细胞系的苦味受体活性不同，则所述测试化合物选择性调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的五种或更多种细胞系中不同。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的六种或更多种细胞系中不同。在一些实施方案中，苦味受体活性在TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44细胞系中不同。如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的四种或更多种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的五种或更多种细胞系中较高。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的六种或更多种细胞系中较高。在一些实施方案中，苦味受体活性在TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44细胞系中较高。如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的四种或更多种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的五种或更多种细胞系中较低。在一些实施方案中，苦味受体活性在选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的六种或更多种细胞系中较低。在一些实施方案中，苦味受体活性在TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44细胞系中较低。在一些实施方案中，如果与第一小组相比，在第二小组中所述测试化合物不诱导TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60苦味受体活性，则所述测试化合物选择性调节、抑制或活化由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，第一和第二小组是体外细胞系的匹配的小组。在一些实施方案中，将第一小组的细胞系在测量其苦味受体活性之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。换言之，第一和第二小组的细胞系是相同的，洗涤步骤在第一测量步骤和第二接触步骤之间。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使细胞系与所述测试化合物在洗涤之前或之后接触。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使第二小组中的每种细胞系与促味剂接触之前、同时或之后，使第二小组中的每种细胞系与测试化合物接触。
在一些实施方案中，所述方法包括提供第一小组的细胞系和第二小组的细胞系，其中每个小组包括表达选自以下的苦味受体的细胞系：TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44苦味受体，其中每种受体在至少一种细胞系中表达，并且其中所述第一和第二小组包括相同的细胞系；使第一小组中的每种细胞系与活化选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少两者的促味剂接触；测量第一小组的每种细胞系的苦味受体活性；使第二小组中的每种细胞系与促味剂和测试化合物接触；和测量第二小组中的每种细胞系的苦味受体活性。在一些实施方案中，第一和第二小组中的每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60，其中每种受体在每个小组的至少一种细胞系中表达。如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少两种细胞系的苦味受体活性不同，则所述测试化合物选择性调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少三种细胞系中不同，则所述测试化合物选择性调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少四种细胞系中不同，则所述测试化合物选择性调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少五种细胞系中不同，则所述测试化合物选择性调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少六种细胞系中不同，则所述测试化合物选择性调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果苦味受体活性在TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44细胞系的每一者中不同，则所述测试化合物选择性调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少两种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少三种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少四种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少五种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少六种细胞系的苦味受体活性较高，则所述测试化合物选择性抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中苦味受体活性在TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44细胞系的每一者中较高，则所述测试化合物选择性抑制由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少两种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少三种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少四种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少五种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的至少六种细胞系的苦味受体活性较低，则所述测试化合物选择性增强由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第二小组相比，在第一小组中苦味受体活性在TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44细胞系的每一者中较低，则所述测试化合物选择性增强由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，如果与第一小组相比，在第二小组中所述测试化合物不诱导TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60苦味受体活性，则所述测试化合物选择性调节、抑制或活化由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，第一和第二小组是体外细胞系的匹配小组。在一些实施方案中，将第一小组的细胞系在测量其苦味受体活性之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。换言之，第一和第二小组的细胞系是相同的，所述洗涤步骤在第一测量步骤和第二接触步骤之间。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使细胞系与所述测试化合物在洗涤之前或之后接触。可依次或同时添加促味剂和测试化合物，即可在使第二小组中的每种细胞系与促味剂接触之前、同时或之后，使第二小组中的每种细胞系与测试化合物接触。
在一些实施方案中，鉴定由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的调节剂的以上任何方法所用的促味剂选自KCl、乳酸钾、乙酰磺胺酸钾和普通苦味化合物。在一些实施方案中，所述普通苦味化合物是苯甲地那铵或糖精地那铵。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为5mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM或50mM。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为约5mM、约10mM、约15mM、约20mM、约25mM、约30mM、约35mM、约40mM、约45mM或约50mM。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为至少5mM、至少10mM、至少15mM、至少20mM、至少25mM、至少30mM、至少35mM、至少40mM、至少45mM或至少50mM。在一些实施方案中，所述促味剂的浓度为至少约5mM、至少约10mM、至少约15mM、至少约20mM、至少约25mM、至少约30mM、至少约35mM、至少约40mM、至少约45mM或至少约50mM。
在另一方面，本发明提供鉴定模拟由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的化合物的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一小组的细胞系和第二小组的细胞系，其中每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60苦味受体，其中每种受体在至少一种细胞系中表达，并且其中所述第一和第二小组包括相同的细胞系；使第一小组中的每种细胞系与阴性对照接触；测量第一小组中的每种细胞系的苦味受体活性；使第一小组的每种细胞系与阴性对照接触；使第二小组中的每种细胞系与测试化合物接触；和测量第二小组中的每种细胞系的苦味受体活性。如果测试化合物诱导TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的苦味受体活性，则所述测试化合物模拟由乙酰磺胺酸钾引起的苦味。在一些实施方案中，与第一小组相比，在第二小组中所述测试化合物不诱导TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60苦味受体活性。在一些实施方案中，第一和第二小组是体外细胞系的匹配的小组。在一些实施方案中，将第一小组的细胞系在测量其苦味受体活性之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。换言之，第一和第二小组的细胞系是相同的，所述洗涤步骤在第一测量步骤和第二接触步骤之间。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使细胞系与所述测试化合物在洗涤之前或之后接触。在一些实施方案中，所述阴性对照是添加测试化合物之前的测定缓冲液。
在另一方面，本发明提供确定乙酰磺胺酸钾是否存在于组合物中的方法。在一些实施方案中，所述方法包括提供第一小组的细胞系和第二小组的细胞系，其中每种细胞系表达选自以下的苦味受体：TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60苦味受体，其中每种受体在至少一种细胞系中表达，并且其中所述第一和第二小组包括相同的细胞系；使第一小组中的每种细胞系与阴性对照接触；测量第一小组的每种细胞系的苦味受体活性；使第二小组中的每种细胞系与所述组合物接触；和测量第二小组中的每种细胞系的苦味受体活性。如果与第一小组相比在第二小组中组合物诱导TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44苦味受体活性，并且与第一小组相比在第二小组中组合物不诱导TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60苦味受体活性，则乙酰磺胺酸钾存在于所述组合物中。在一些实施方案中，所述组合物是食品提取物。在一些实施方案中，所述组合物包含药物活性成分。在一些实施方案中，第一和第二小组是体外细胞系的匹配的小组。在一些实施方案中，将第一小组的细胞系在测量其苦味受体活性之后洗涤，以提供第二小组的细胞系。换言之，第一和第二小组的细胞系是相同的，所述洗涤步骤在第一测量步骤和第二接触步骤之间。技术人员将认识到在此类实施方案中测试顺序不重要。可使细胞系与所述测试化合物在洗涤之前或之后接触。在一些实施方案中，所述阴性对照是添加组合物之前的测定缓冲液。
在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的两种或更多种不同的苦味受体接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与各自表达选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的不同苦味受体的两种或更多种细胞接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的三种或更多种不同的味道受体接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与各自表达选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的不同苦味受体的三种或更多种细胞接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的四种或更多种不同的味道受体接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与各自表达选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的不同苦味受体的四种或更多种细胞接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的五种或更多种不同的味道受体接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与各自表达选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的不同苦味受体的五种或更多种细胞接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的六种或更多种不同的味道受体接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与各自表达选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的不同苦味受体的六种或更多种细胞接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的七种或更多种不同味道受体接触。在一些实施方案中，所述方法包括使促味剂和促味剂+测试化合物与各自表达选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的不同苦味受体的七种或更多种细胞接触。
在一些实施方案中，其中鉴定调节、抑制、增强或模拟由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的化合物的方法包括使TAS2R44或表达TAS2R44的细胞与促味剂或测试化合物接触，所述方法还包括使至少一种另外的苦味受体或表达至少一种另外的苦味受体的细胞与促味剂或测试化合物接触，其中所述至少一种另外的苦味受体选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14和TAS2R16。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括将调节、抑制、增强或模拟由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的测试化合物与食材、食材生产中使用的任何食材前体材料或任何添加物混合。在一些实施方案中，所述食材是供人消耗的。在一些实施方案中，所述食材是供动物消耗的，诸如供宠物或家畜消耗。在一些实施方案中，所述方法进一步包括将调节、抑制、增强或模拟由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的测试化合物与活性剂以药学上可接受的形式混合。
鉴定调节苦味的化合物的细胞系小组
根据另一方面，本发明提供鉴定调节苦味的化合物的细胞系小组。
在一些实施方案中，所述细胞系小组用于鉴定调节由KCl引起的苦味的化合物。在一些实施方案中，所述小组包括表达选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的苦味受体的细胞系。在一些实施方案中，TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的每一者在小组中的至少一种细胞系中表达。在一些实施方案中，所述小组基本上由表达选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的苦味受体的细胞系组成。在一些实施方案中，细胞系小组进一步包括阴性对照细胞系。在一些实施方案中，所述阴性对照是鉴定调节由KCl引起的苦味的化合物的方法的阴性对照。
在一些实施方案中，所述细胞系小组用于鉴定调节由乳酸钾引起的苦味的化合物。在一些实施方案中，所述小组包括表达选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的苦味受体的细胞系。在一些实施方案中，TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的每一者在小组中的至少一种细胞系中表达。在一些实施方案中，所述小组基本上由表达选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60的苦味受体的细胞系组成。在一些实施方案中，细胞系小组进一步包括阴性对照细胞系。在一些实施方案中，所述阴性对照是鉴定调节由乳酸钾引起的苦味的化合物的方法的阴性对照。
在一些实施方案中，所述细胞系小组用于鉴定调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的化合物。在一些实施方案中，所述小组包括表达选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的苦味受体的细胞系。在一些实施方案中，TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的每一者在小组中的至少一种细胞系中表达。在一些实施方案中，所述小组基本上由表达选自TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44的苦味受体的细胞系组成。在一些实施方案中，细胞系小组进一步包括阴性对照细胞系。在一些实施方案中，所述阴性对照是鉴定调节由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的化合物的方法的阴性对照。
实施例
为了更充分地理解本发明，列出了以下实施例。这些实施例仅用于说明的目的，而并不被理解为以任何形式限制本发明的范围。
按照国际专利申请公开WO2010/088633所述产生一组表达二十五种苦味受体的每一者的细胞系(参见，如实施例26)。因此，所述小组的每种细胞系表达人苦味受体和小鼠Gα15信号传导蛋白。
以下每个实施例使用下列功能测定：
第1天：将稳定细胞系接种至黑壁/透明底96孔板(如，Corning，3904)上。每孔添加大约40K细胞，并将其在37℃、5％CO2下在细胞生长培养基(补充有10％胎牛血清(Sigma，5178)、2mM谷氨酰胺(Sigma,G7513)的DMEM(Sigma，D5796))中孵育过夜。
第2天：弃去生长培养基，并将细胞在37℃、5％CO2下在100ul负载溶液中孵育60分钟，所述负载溶液含有在缓冲溶液中的1X Ca-3染料(Molecular Devices，R8090)、1％DMSO，所述缓冲溶液含有130mM NaCl、2mM CaCl2、5mM KCl、1.2mM MgCl2、10mM HEPES和10mM葡萄糖(pH7.0)。丙磺舒未被包括在负载溶液中。
功能测定：在染料加载后，将细胞板置于荧光分析仪(如，FDSS6000(Hamamatsu，Japan))中，并且通过添加50ul3X浓缩的配体/激动剂储备液测量受体刺激。在添加激动剂之前持续监测荧光10s，并在用激动剂刺激之后监测荧光100-250s。
受体活化如下所定义：
％活化＝[((最大信号荧光–最小信号荧光)–(最大对照荧光–最小对照荧光))/(最大缓冲荧光–最小缓冲荧光)]*100
功能响应＝[(最大信号荧光–最小信号荧光)–(最大对照荧光–最小对照荧光)]
信号荧光：是指对添加配体所见的荧光变化
对照荧光：是指对添加缓冲液(阴性对照)所见的荧光变化
将来自配体和对照的钙信号在刺激之前针对细胞的基础荧光归一化。
进行浓度分析，并通过非线性回归计算EC50值，使用下式：Y＝底部+(顶部-底部)/(1+10^((LogEC50-X)*希耳斜率))。X＝log剂量或浓度，Y＝响应(随着X增加而增加)，顶部＝最大信号，底部＝最小信号。EC50(半数最大有效浓度)是指激动剂的摩尔浓度，其产生50％的来自此激动剂的最大可能有效响应。
实施例1苦味受体小组中的功能信号传导的验证
为了确认25种苦味受体细胞系的每一者功能性并稳定地表达G蛋白(Gα15)，如上所述地用递增浓度的异丙肾上腺素(一种在HEK293T宿主细胞系中内源性表达的β2-肾上腺素能受体的激动剂)测试整个小组。已知异丙肾上腺素经由Gα15信号传导级联传导信号以增加胞内钙水平。
如图1所示，在功能测定中，存在于小组中的所有二十五种苦味受体细胞系一致地响应于异丙肾上腺素。对于二十五种细胞系的每一者，EC50值大约为4.9±0.41nM，该值与文献公开的值接近一致。所述EC50值显示在二十五种克隆细胞系之间有显著的重现性，并确认苦味细胞系小组可用于功能测定。
实施例2响应于KCl的苦味受体的鉴定
为了鉴定对KCl敏感并可能介导由KCl引起的苦味的受体集合，二十五种苦味受体表达细胞系的整个小组独立并且同时暴露于20mM KCl。使用上述的荧光报告系统，通过胞内钙的变化测量苦味受体活化。如图2所示，在二十五种苦味受体表达细胞系中只有六种强烈且特异性响应于KCl刺激。KCl在其它十九种细胞系中引发弱或背景响应。KCl诱导TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60苦味受体活性(图2和6)。KCl不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50或TAS2R55苦味受体活性(图2和6)。迄今为止，没有配体已被鉴定为针对TAS2R60，所述TAS2R60现在已经脱孤。
为了通过TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60进一步表征KCl-诱导的信号传导，功能特征(functionalprofile)通过如上所述测量KCl对每一种受体的活化(经由用递增浓度的KCl刺激)并计算EC50值来确立。如图3所示，每种细胞系的EC50值大约为5-15mM。由于受体和配体性质的差异，TAS2R活性测定中的剂量-响应曲线不直接与图1中的剂量-响应曲线相当。
实施例3响应于乳酸钾的苦味受体的鉴定
为了鉴定对乳酸钾敏感且可能介导由乳酸钾引起的苦味的受体组，二十五种苦味受体表达细胞系的整个小组独立且同时暴露于20mM乳酸钾。使用上述的荧光报告系统，通过胞内钙的变化测量苦味受体活化。如图4所示，在二十五种苦味受体表达细胞系中仅有七种强烈并且特异性响应于乳酸钾刺激。乳酸钾在其它十八种细胞系中引发弱或背景响应。乳酸钾诱导TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44、TAS2R46和TAS2R60苦味受体活性(图4和6)。乳酸钾不诱导TAS2R1、TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50和TAS2R55苦味受体活性(图4和6)。迄今为止，没有配体已被鉴定为针对TAS2R60，所述TAS2R60现在已经脱孤。
实施例4响应于乙酰磺胺酸钾的苦味受体的鉴定
为了鉴定对乙酰磺胺酸钾敏感且可能介导由乙酰磺胺酸钾引起的苦味的受体组，二十五种苦味受体表达细胞系的整个小组独立且同时暴露于20mM乙酰磺胺酸钾。使用上述的荧光报告系统，通过胞内钙的变化测量苦味受体活化。如图5所示，在二十五种苦味受体表达细胞系中只有七种强烈且特异性响应于乙酰磺胺酸钾刺激。乙酰磺胺酸钾在其它十八种细胞系中引发弱或背景响应。乙酰磺胺酸钾诱导TAS2R1、TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16和TAS2R44苦味受体活性(图5和6)。乙酰磺胺酸钾不诱导TAS2R3、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R10、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55或TAS2R60苦味受体活性(图5和6)。
序列表
人GNA15
MARSLTWRCCPWCLTEDEKAAARVDQEINRILLEQKKQDRGELKLLLLGPGESGKSTFIKQMRIIHGAGYSEEERKGFRPLVYQNIFVSMRAMIEAMERLQIPFSRPESKHHASLVMSQDPYKVTTFEKRYAAAMQWLWRDAGIRACYERRREFHLLDSAVYYLSHLERITEEGYVPTAQDVLRSRMPTTGINEYCFSVQKTNLRIVDVGGQKSERKKWIHCFENVIALIYLASLSEYDQCLEENNQENRMKESLALFGTILELPWFKSTSVILFLNKTDILEEKIPTSHLATYFPSFQGPKQDAEAAKRFILDMYTRMYTGCVDGPEGSKKGARSRRLFSHYTCATDTQNIRKVFKDVRDSVLARYLDEINLL(SEQ ID NO:1)
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TAS2R3 CDS
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TAS2R5 CDS
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TAS2R8 CDS
ATGTTCAGTCCTGCAGATAACATCTTTATAATCCTAATAACTGGAGAATTCATACTAGGAATATTGGGGAATGGATACATTGCACTAGTCAACTGGATTGACTGGATTAAGAAGAAAAAGATTTCCACAGTTGACTACATCCTTACCAATTTAGTTATCGCCAGAATTTGTTTGATCAGTGTAATGGTTGTAAATGGCATTGTAATAGTACTGAACCCAGATGTTTATACAAAAAATAAACAACAGATAGTCATTTTTACCTTCTGGACATTTGCCAACTACTTAAATATGTGGATTACCACCTGCCTTAATGTCTTCTATTTTCTGAAGATAGCCAGTTCCTCTCATCCACTTTTTCTCTGGCTGAAGTGGAAAATTGATATGGTGGTGCACTGGATCCTGCTGGGATGCTTTGCCATTTCCTTGTTGGTCAGCCTTATAGCAGCAATAGTACTGAGTTGTGATTATAGGTTTCATGCAATTGCCAAACATAAAAGAAACATTACTGAAATGTTCCATGTGAGTAAAATACCATACTTTGAACCCTTGACTCTCTTTAACCTGTTTGCAATTGTCCCATTTATTGTGTCACTGATATCATTTTTCCTTTTAGTAAGATCTTTATGGAGACATACCAAGCAAATAAAACTCTATGCTACCGGCAGTAGAGACCCCAGCACAGAAGTTCATGTGAGAGCCATTAAAACTATGACTTCATTTATCTTCTTTTTTTTCCTATACTATATTTCTTCTATTTTGATGACCTTTAGCTATCTTATGACAAAATACAAGTTAGCTGTGGAGTTTGGAGAGATTGCAGCAATTCTCTACCCCTTGGGTCACTCACTTATTTTAATTGTTTTAAATAATAAACTGAGGCAGACATTTGTCAGAATGCTGACATGTAGAAAAATTGCCTGCATGATATGA(SEQ ID NO:7)
TAS2R9 CDS
ATGCCAAGTGCAATAGAGGCAATATATATTATTTTAATTGCTGGTGAATTGACCATAGGGATTTGGGGAAATGGATTCATTGTACTAGTTAACTGCATTGACTGGCTCAAAAGAAGAGATATTTCCTTGATTGACATCATCCTGATCAGCTTGGCCATCTCCAGAATCTGTCTGCTGTGTGTAATATCATTAGATGGCTTCTTTATGCTGCTCTTTCCAGGTACATATGGCAATAGCGTGCTAGTAAGCATTGTGAATGTTGTCTGGACATTTGCCAATAATTCAAGTCTCTGGTTTACTTCTTGCCTCAGTATCTTCTATTTACTCAAGATAGCCAATATATCGCACCCATTTTTCTTCTGGCTGAAGCTAAAGATCAACAAGGTCATGCTTGCGATTCTTCTGGGGTCCTTTCTTATCTCTTTAATTATTAGTGTTCCAAAGAATGATGATATGTGGTATCACCTTTTCAAAGTCAGTCATGAAGAAAACATTACTTGGAAATTCAAAGTGAGTAAAATTCCAGGTACTTTCAAACAGTTAACCCTGAACCTGGGGGTGATGGTTCCCTTTATCCTTTGCCTGATCTCATTTTTCTTGTTACTTTTCTCCCTAGTTAGACACACCAAGCAGATTCGACTGCATGCTACAGGGTTCAGAGACCCCAGTACAGAGGCCCACATGAGGGCCATAAAGGCAGTGATCATCTTTCTGCTCCTCCTCATCGTGTACTACCCAGTCTTTCTTGTTATGACCTCTAGCGCTCTGATTCCTCAGGGAAAATTAGTGTTGATGATTGGTGACATAGTAACTGTCATTTTCCCATCAAGCCATTCATTCATTCTAATTATGGGAAATAGCAAGTTGAGGGAAGCTTTTCTGAAGATGTTAAGATTTGTGAAGTGTTTCCTTAGAAGAAGAAAGCCTTTTGTTCCATAG(SEQ ID NO:8)
TAS2R10 CDS
ATGCTACGTGTAGTGGAAGGCATCTTCATTTTTGTTGTAGTTAGTGAGTCAGTGTTTGGGGTTTTGGGGAATGGATTTATTGGACTTGTAAACTGCATTGACTGTGCCAAGAATAAGTTATCTACGATTGGCTTTATTCTCACCGGCTTAGCTATTTCAAGAATTTTTCTGATATGGATAATAATTACAGATGGATTTATACAGATATTCTCTCCAAATATATATGCCTCCGGTAACCTAATTGAATATATTAGTTACTTTTGGGTAATTGGTAATCAATCAAGTATGTGGTTTGCCACCAGCCTCAGCATCTTCTATTTCCTGAAGATAGCAAATTTTTCCAACTACATATTTCTCTGGTTGAAGAGCAGAACAAATATGGTTCTTCCCTTCATGATAGTATTCTTACTTATTTCATCGTTACTTAATTTTGCATACATTGCGAAGATTCTTAATGATTATAAAATGAAGAATGACACAGTCTGGGATCTCAACATGTATAAAAGTGAATACTTTATTAAACAGATTTTGCTAAATCTGGGAGTCATTTTCTTCTTTACACTATCCCTAATTACATGTATTTTTTTAATCATTTCCCTTTGGAGACACAACAGGCAGATGCAATCAAATGTGACAGGATTGAGAGACTCCAACACAGAAGCTCATGTGAAGGCAATGAAAGTTTTGATATCTTTCATCATCCTCTTTATCTTGTATTTTATAGGCATGGCCATAGAAATATCATGTTTTACTGTGCGAGAAAACAAACTGCTGCTTATGTTTGGAATGACAACCACAGCCATCTATCCCTGGGGTCACTCATTTATCTTAATTCTAGGAAACAGCAAGCTAAAGCAAGCCTCTTTGAGGGTACTGCAGCAATTGAAGTGCTGTGAGAAAAGGAAAAATCTCAGAGTCACATAG(SEQ ID NO:9)
TAS2R13 CDS
ATGGAAAGTGCCCTGCCGAGTATCTTCACTCTTGTAATAATTGCAGAATTCATAATTGGGAATTTGAGCAATGGATTTATAGTACTGATCAACTGCATTGACTGGGTCAGTAAAAGAGAGCTGTCCTCAGTCGATAAACTCCTCATTATCTTGGCAATCTCCAGAATTGGGCTGATCTGGGAAATATTAGTAAGTTGGTTTTTAGCTCTGCATTATCTAGCCATATTTGTGTCTGGAACAGGATTAAGAATTATGATTTTTAGCTGGATAGTTTCTAATCACTTCAATCTCTGGCTTGCTACAATCTTCAGCATCTTTTATTTGCTCAAAATAGCGAGTTTCTCTAGCCCTGCTTTTCTCTATTTGAAGTGGAGAGTAAACAAAGTGATTCTGATGATACTGCTAGGAACCTTGGTCTTCTTATTTTTAAATCTGATACAAATAAACATGCATATAAAAGACTGGCTGGACCGATATGAAAGAAACACAACTTGGAATTTCAGTATGAGTGACTTTGAAACATTTTCAGTGTCGGTCAAATTCACTATGACTATGTTCAGTCTAACACCATTTACTGTGGCCTTCATCTCTTTTCTCCTGTTAATTTTCTCCCTGCAGAAACATCTCCAGAAAATGCAACTCAATTACAAAGGACACAGAGACCCCAGGACCAAGGTCCATACAAATGCCTTGAAAATTGTGATCTCATTCCTTTTATTCTATGCTAGTTTCTTTCTATGTGTTCTCATATCATGGATTTCTGAGCTGTATCAGAACACAGTGATCTACATGCTTTGTGAGACGATTGGAGTCTTCTCTCCTTCAAGCCACTCCTTTCTTCTGATTCTAGGAAACGCTAAGTTAAGACAGGCCTTTCTTTTGGTGGCAGCTAAGGTATGGGCTAAACGATGA(SEQID NO:10)
TAS2R14 CDS
ATGGGTGGTGTCATAAAGAGCATATTTACATTCGTTTTAATTGTGGAATTTATAATTGGAAATTTAGGAAATAGTTTCATAGCACTGGTGAACTGTATTGACTGGGTCAAGGGAAGAAAGATCTCTTCGGTTGATCGGATCCTCACTGCTTTGGCAATCTCTCGAATTAGCCTGGTTTGGTTAATATTCGGAAGCTGGTGTGTGTCTGTGTTTTTCCCAGCTTTATTTGCCACTGAAAAAATGTTCAGAATGCTTACTAATATCTGGACAGTGATCAATCATTTTAGTGTCTGGTTAGCTACAGGCCTCGGTACTTTTTATTTTCTCAAGATAGCCAATTTTTCTAACTCTATTTTTCTCTACCTAAAGTGGAGGGTTAAAAAGGTGGTTTTGGTGCTGCTTCTTGTGACTTCGGTCTTCTTGTTTTTAAATATTGCACTGATAAACATCCATATAAATGCCAGTATCAATGGATACAGAAGAAACAAGACTTGCAGTTCTGATTCAAGTAACTTTACACGATTTTCCAGTCTTATTGTATTAACCAGCACTGTGTTCATTTTCATACCCTTTACTTTGTCCCTGGCAATGTTTCTTCTCCTCATCTTCTCCATGTGGAAACATCGCAAGAAGATGCAGCACACTGTCAAAATATCCGGAGACGCCAGCACCAAAGCCCACAGAGGAGTTAAAAGTGTGATCACTTTCTTCCTACTCTATGCCATTTTCTCTCTGTCTTTTTTCATATCAGTTTGGACCTCTGAAAGGTTGGAGGAAAATCTAATTATTCTTTCCCAGGTGATGGGAATGGCTTATCCTTCATGTCACTCATGTGTTCTGATTCTTGGAAACAAGAAGCTGAGACAGGCCTCTCTGTCAGTGCTACTGTGGCTGAGGTACATGTTCAAAGATGGGGAGCCCTCAGGTCACAAAGAATTTAGAGAATCATCTTGA(SEQ IDNO:11)
TAS2R16 CDS
ATGATACCCATCCAACTCACTGTCTTCTTCATGATCATCTATGTGCTTGAGTCCTTGACAATTATTGTGCAGAGCAGCCTAATTGTTGCAGTGCTGGGCAGAGAATGGCTGCAAGTCAGAAGGCTGATGCCTGTGGACATGATTCTCATCAGCCTGGGCATCTCTCGCTTCTGTCTACAGTGGGCATCAATGCTGAACAATTTTTGCTCCTATTTTAATTTGAATTATGTACTTTGCAACTTAACAATCACCTGGGAATTTTTTAATATCCTTACATTCTGGTTAAACAGCTTGCTTACCGTGTTCTACTGCATCAAGGTCTCTTCTTTCACCCATCACATCTTTCTCTGGCTGAGGTGGAGAATTTTGAGGTTGTTTCCCTGGATATTACTGGGTTCTCTGATGATTACTTGTGTAACAATCATCCCTTCAGCTATTGGGAATTACATTCAAATTCAGTTACTCACCATGGAGCATCTACCAAGAAACAGCACTGTAACTGACAAACTTGAAAATTTTCATCAGTATCAGTTCCAGGCTCATACAGTTGCATTGGTTATTCCTTTCATCCTGTTCCTGGCCTCCACCATCTTTCTCATGGCATCACTGACCAAGCAGATACAACATCATAGCACTGGTCACTGCAATCCAAGCATGAAAGCGCGCTTCACTGCCCTGAGGTCCCTTGCCGTCTTATTTATTGTGTTTACCTCTTACTTTCTAACCATACTCATCACCATTATAGGTACTCTATTTGATAAGAGATGTTGGTTATGGGTCTGGGAAGCTTTTGTCTATGCTTTCATCTTAATGCATTCCACTTCACTGATGCTGAGCAGCCCTACGTTGAAAAGGATTCTAAAGGGAAAGTGCTAG(SEQ ID NO:12)
TAS2R38 CDS
ATGTTGACTCTAACTCGCATCCGCACTGTGTCCTATGAAGTCAGGAGTACATTTCTGTTCATTTCAGTCCTGGAGTTTGCAGTGGGGTTTCTGACCAATGCCTTCGTTTTCTTGGTGAATTTTTGGGATGTAGTGAAGAGGCAGGCACTGAGCAACAGTGATTGTGTGCTGCTGTGTCTCAGCATCAGCCGGCTTTTCCTGCATGGACTGCTGTTCCTGAGTGCTATCCAGCTTACCCACTTCCAGAAGTTGAGTGAACCACTGAACCACAGCTACCAAGCCATCATCATGCTATGGATGATTGCAAACCAAGCCAACCTCTGGCTTGCTGCCTGCCTCAGCCTGCTTTACTGCTCCAAGCTCATCCGTTTCTCTCACACCTTCCTGATCTGCTTGGCAAGCTGGGTCTCCAGGAAGATCTCCCAGATGCTCCTGGGTATTATTCTTTGCTCCTGCATCTGCACTGTCCTCTGTGTTTGGTGCTTTTTTAGCAGACCTCACTTCACAGTCACAACTGTGCTATTCATGAATAACAATACAAGGCTCAACTGGCAGATTAAAGATCTCAATTTATTTTATTCCTTTCTCTTCTGCTATCTGTGGTCTGTGCCTCCTTTCCTATTGTTTCTGGTTTCTTCTGGGATGCTGACTGTCTCCCTGGGAAGGCACATGAGGACAATGAAGGTCTATACCAGAAACTCTCGTGACCCCAGCCTGGAGGCCCACATTAAAGCCCTCAAGTCTCTTGTCTCCTTTTTCTGCTTCTTTGTGATATCATCCTGTGCTGCCTTCATCTCTGTGCCCCTACTGATTCTGTGGCGCGACAAAATAGGGGTGATGGTTTGTGTTGGGATAATGGCAGCTTGTCCCTCTGGGCATGCAGCCATCCTGATCTCAGGCAATGCCAAGTTGAGGAGAGCTGTGATGACCATTCTGCTCTGGGCTCAGAGCAGCCTGAAGGTAAGAGCCGACCACAAGGCAGATTCCCGGACACTGTGCTGA(SEQ ID NO:13)
TAS2R39 CDS
ATGCTAGGGAGATGTTTTCCTCCAGACACCAAAGAGAAGCAACAGCTCAGAATGACTAAACTCTGCGATCCTGCAGAAAGTGAATTGTCGCCATTTCTCATCACCTTAATTTTAGCAGTTTTACTTGCTGAATACCTCATTGGTATCATTGCAAATGGTTTCATCATGGCTATACATGCAGCTGAATGGGTTCAAAATAAGGCAGTTTCCACAAGTGGCAGGATCCTGGTTTTCCTGAGTGTATCCAGAATAGCTCTCCAAAGCCTCATGATGTTAGAAATTACCATCAGCTCAACCTCCCTAAGTTTTTATTCTGAAGACGCTGTATATTATGCATTCAAAATAAGTTTTATATTCTTAAATTTTTGTAGCCTGTGGTTTGCTGCCTGGCTCAGTTTCTTCTACTTTGTGAAGATTGCCAATTTCTCCTACCCCCTTTTCCTCAAACTGAGGTGGAGAATTACTGGATTGATACCCTGGCTTCTGTGGCTGTCCGTGTTTATTTCCTTCAGTCACAGCATGTTCTGCATCAACATCTGCACTGTGTATTGTAACAATTCTTTCCCTATCCACTCCTCCAACTCCACTAAGAAAACATACTTGTCTGAGATCAATGTGGTCGGTCTGGCTTTTTTCTTTAACCTGGGGATTGTGACTCCTCTGATCATGTTCATCCTGACAGCCACCCTGCTGATCCTCTCTCTCAAGAGACACACCCTACACATGGGAAGCAATGCCACAGGGTCCAACGACCCCAGCATGGAGGCTCACATGGGGGCCATCAAAGCTATCAGCTACTTTCTCATTCTCTACATTTTCAATGCAGTTGCTCTGTTTATCTACCTGTCCAACATGTTTGACATCAACAGTCTGTGGAATAATTTGTGCCAGATCATCATGGCTGCCTACCCTGCCAGCCACTCAATTCTACTGATTCAAGATAACCCTGGGCTGAGAAGAGCCTGGAGCGGCTTCAGCTTCGACTTCATCTTTACCCAAAAGAGTGGACTCTGA(SEQ ID NO:14)
TAS2R40 CDS
ATGGCAACGGTGAACACAGATGCCACAGATAAAGACATATCCAAGTTCAAGGTCACCTTCACTTTGGTGGTCTCCGGAATAGAGTGCATCACTGGCATCCTTGGGAGTGGCTTCATCACGGCCATCTATGGGGCTGAGTGGGCCAGGGGCAAAACACTCCCCACTGGTGACCGCATTATGTTGATGCTGAGCTTTTCCAGGCTCTTGCTACAGATTTGGATGATGCTGGAGAACATTTTCAGTCTGCTATTCCGAATTGTTTATAACCAAAACTCAGTGTATATCCTCTTCAAAGTCATCACTGTCTTTCTGAACCATTCCAATCTCTGGTTTGCTGCCTGGCTCAAAGTCTTCTATTGTCTTAGAATTGCAAACTTCAATCATCCTTTGTTCTTCCTGATGAAGAGGAAAATCATAGTGCTGATGCCTTGGCTTCTCAGGCTGTCAGTGTTGGTTTCCTTAAGCTTCAGCTTTCCTCTCTCGAGAGATGTCTTCAATGTGTATGTGAATAGCTCCATTCCTATCCCCTCCTCCAACTCCACGGAGAAGAAGTACTTCTCTGAGACCAATATGGTCAACCTGGTATTTTTCTATAACATGGGGATCTTCGTTCCTCTGATCATGTTCATCCTGGCAGCCACCCTGCTGATCCTCTCTCTCAAGAGACACACCCTACACATGGGAAGCAATGCCACAGGGTCCAGGGACCCCAGCATGAAGGCTCACATAGGGGCCATCAAAGCCACCAGCTACTTTCTCATCCTCTACATTTTCAATGCAATTGCTCTATTTCTTTCCACGTCCAACATCTTTGACACTTACAGTTCCTGGAATATTTTGTGCAAGATCATCATGGCTGCCTACCCTGCCGGCCACTCAGTACAACTGATCTTGGGCAACCCTGGGCTGAGAAGAGCCTGGAAGCGGTTTCAGCACCAAGTTCCTCTTTACCTAAAAGGGCAGACTCTGTGA(SEQ ID NO:15)
tAS2R41 CDS
ATGCAAGCAGCACTGACGGCCTTCTTCGTGTTGCTCTTTAGCCTGCTGAGTCTTCTGGGGATTGCAGCGAATGGCTTCATTGTGCTGGTGCTGGGCAGGGAGTGGCTGCGATATGGCAGGTTGCTGCCCTTGGATATGATCCTCATTAGCTTGGGTGCCTCCCGCTTCTGCCTGCAGTTGGTTGGGACGGTGCACAACTTCTACTACTCTGCCCAGAAGGTCGAGTACTCTGGGGGTCTCGGCCGACAGTTCTTCCATCTACACTGGCACTTCCTGAACTCAGCCACCTTCTGGTTTTGCAGCTGGCTCAGTGTCCTGTTCTGTGTGAAGATTGCTAACATCACACACTCCACCTTCCTGTGGCTGAAGTGGAGGTTCCCAGGGTGGGTGCCCTGGCTCCTGTTGGGCTCTGTCCTGATCTCCTTCATCATAACCCTGCTGTTTTTTTGGGTGAACTACCCTGTATATCAAGAATTTTTAATTAGAAAATTTTCTGGGAACATGACCTACAAGTGGAATACAAGGATAGAAACATACTATTTCCCATCCCTGAAACTGGTCATCTGGTCAATTCCTTTTTCTGTTTTTCTGGTCTCAATTATGCTGCTGATTAATTCTCTGAGGAGGCATACTCAGAGAATGCAGCACAACGGGCACAGCCTGCAGGACCCCAGCACCCAGGCTCACACCAGAGCTCTGAAGTCCCTCATCTCCTTCCTCATTCTTTATGCTCTGTCCTTTCTGTCCCTGATCATTGATGCCGCAAAATTTATCTCCATGCAGAACGACTTTTACTGGCCATGGCAAATTGCAGTCTACCTGTGCATATCTGTCCATCCCTTCATCCTCATCTTCAGCAACCTCAAGCTTCGAAGCGTGTTCTCACAGCTCCTGTTGTTGGCAAGGGGCTTCTGGGTGGCCTGA(SEQ ID NO:16)
TAS2R43 CDS
ATGATAACTTTTCTGCCCATCATTTTTTCCAGTCTGGTAGTGGTTACATTTGTTATTGGAAATTTTGCTAATGGCTTCATAGCACTGGTAAATTCCATTGAGTGGTTCAAGAGACAAAAGATCTCCTTTGCTGACCAAATTCTCACTGCTCTGGCGGTCTCCAGAGTTGGTTTGCTCTGGGTATTATTATTAAACTGGTATTCAACTGTGTTGAATCCAGCTTTTAATAGTGTAGAAGTAAGAACTACTGCTTATAATATCTGGGCAGTGATCAACCATTTCAGCAACTGGCTTGCTACTACCCTCAGCATATTTTATTTGCTCAAGATTGCCAATTTCTCCAACTTTATTTTTCTTCACTTAAAGAGGAGAGTTAAGAGTGTCATTCTGGTGATGTTGTTGGGGCCTTTGCTATTTTTGGCTTGTCATCTTTTTGTGATAAACATGAATGAGATTGTGCGGACAAAAGAATTTGAAGGAAACATGACTTGGAAGATCAAATTGAAGAGTGCAATGTACTTTTCAAATATGACTGTAACCATGGTAGCAAACTTAGTACCCTTCACTCTGACCCTACTATCTTTTATGCTGTTAATCTGTTCTTTGTGTAAACATCTCAAGAAGATGCAGCTCCATGGTAAAGGATCTCAAGATCCCAGCACCAAGGTCCACATAAAAGCTTTGCAAACTGTGATCTCCTTCCTCTTGTTATGTGCCATTTACTTTCTGTCCATAATGATATCAGTTTGGAGTTTTGGAAGTCTGGAAAACAAACCTGTCTTCATGTTCTGCAAAGCTATTAGATTCAGCTATCCTTCAATCCACCCATTCATCCTGATTTGGGGAAACAAGAAGCTAAAGCAGACTTTTCTTTCAGTTTTTTGGCAAATGAGGTACTGGGTGAAAGGAGAGAAGACTTCATCTCCATGA(SEQ ID NO:17)
tAS2R44 CDS
ATGACAACTTTTATACCCATCATTTTTTCCAGTGTGGTAGTGGTTCTATTTGTTATTGGAAATTTTGCTAATGGCTTCATAGCATTGGTAAATTCCATTGAGCGGGTCAAGAGACAAAAGATCTCTTTTGCTGACCAGATTCTCACTGCTCTGGCGGTCTCCAGAGTTGGTTTGCTCTGGGTATTATTATTAAATTGGTATTCAACTGTGTTTAATCCAGCTTTTTATAGTGTAGAAGTAAGAACTACTGCTTATAATGTCTGGGCAGTAACCGGCCATTTCAGCAACTGGCTTGCTACTAGCCTCAGCATATTTTATTTGCTCAAGATTGCCAATTTCTCCAACCTTATTTTTCTTCACTTAAAGAGGAGAGTTAAGAGTGTCATTCTGGTGATGCTGTTGGGGCCTTTACTATTTTTGGCTTGTCAACTTTTTGTGATAAACATGAAAGAGATTGTACGGACAAAAGAATATGAAGGAAACTTGACTTGGAAGATCAAATTGAGGAGTGCAGTGTACCTTTCAGATGCGACTGTAACCACGCTAGGAAACTTAGTGCCCTTCACTCTGACCCTGCTATGTTTTTTGCTGTTAATCTGTTCTCTGTGTAAACATCTCAAGAAGATGCAGCTCCATGGTAAAGGATCTCAAGATCCCAGCACCAAGGTCCACATAAAAGCTTTGCAAACTGTGATCTTTTTCCTCTTGTTATGTGCCGTTTACTTTCTGTCCATAATGATATCAGTTTGGAGTTTTGGGAGTCTGGAAAACAAACCTGTCTTCATGTTCTGCAAAGCTATTAGATTCAGCTATCCTTCAATCCACCCATTCATCCTGATTTGGGGAAACAAGAAGCTAAAGCAGACTTTTCTTTCAGTTTTGCGGCAAGTGAGGTACTGGGTGAAAGGAGAGAAGCCTTCATCTCCATGA(SEQ ID NO:18)
tAS2R45 CDS
ATGATAACTTTTCTGCCCATCATATTTTCCATTCTAGTAGTGGTTACATTTGTTATTGGAAATTTTGCTAATGGCTTCATAGCGTTGGTAAATTCCACCGAGTGGGTGAAGAGACAAAAGATCTCCTTTGCTGACCAAATTGTCACTGCTCTGGCGGTCTCCAGAGTTGGTTTGCTCTGGGTGTTATTATTAAATTGGTATTCAACTGTGTTGAATCCAGCTTTTTGTAGTGTAGAATTAAGAACTACTGCTTATAATATCTGGGCAGTAACCGGCCATTTCAGCAACTGGCCTGCTACTAGCCTCAGCATATTTTATTTGCTCAAGATTGCCAATTTCTCCAACCTTATTTTTCTTCGCTTAAAGAGGAGAGTTAAGAGTGTCATTCTGGTGATGCTGTTGGGGCCTTTGCTATTTTTGGCTTGTCATCTTTTTGTGGTAAACATGAATCAGATTGTATGGACAAAAGAATATGAAGGAAACATGACTTGGAAGATCAAATTGAGGCGTGCAATGTACCTTTCAGATACGACTGTAACCATGCTAGCAAACTTAGTACCCTTTACTGTAACCCTGATATCTTTTCTGCTGTTAGTCTGTTCTCTGTGTAAACATCTCAAGAAGATGCACCTCCATGGCAAAGGATCTCAAGATCCCAGTACCAAGGTCCACATAAAAGTTTTGCAAACTGTGATCTCCTTCCTCTTGTTATGTGCCATTTACTTTGTGTCTGTAATAATATCAGTTTGGAGTTTTAAGAATCTGGAAAACAAACCTGTCTTCATGTTCTGCCAAGCTATTGGATTCAGCTGTTCTTCAGCCCACCCGTTCATCCTGATTTGGGGAAACAAGAAGCTAAAGCAGACTTATCTTTCAGTTTTGTGGCAAATGAGGTACTGA(SEQ ID NO:19)
TAS2R46 CDS
ATGATAACTTTTCTGCCCATCATTTTTTCCATTCTAATAGTGGTTACATTTGTGATTGGAAATTTTGCTAATGGCTTCATAGCATTGGTAAATTCCATTGAGTGGTTTAAGAGACAAAAGATCTCTTTTGCTGACCAAATTCTCACTGCTCTGGCAGTCTCCAGAGTTGGTTTACTCTGGGTATTAGTATTAAATTGGTATGCAACTGAGTTGAATCCAGCTTTTAACAGTATAGAAGTAAGAATTACTGCTTACAATGTCTGGGCAGTAATCAACCATTTCAGCAACTGGCTTGCTACTAGCCTCAGCATATTTTATTTGCTCAAGATTGCCAATTTCTCCAACCTTATTTTTCTTCACTTAAAGAGGAGAGTTAAGAGTGTTGTTCTGGTGATACTATTGGGGCCTTTGCTATTTTTGGTTTGTCATCTTTTTGTGATAAACATGAATCAGATTATATGGACAAAAGAATATGAAGGAAACATGACTTGGAAGATCAAACTGAGGAGTGCAATGTACCTTTCAAATACAACGGTAACCATCCTAGCAAACTTAGTTCCCTTCACTCTGACCCTGATATCTTTTCTGCTGTTAATCTGTTCTCTGTGTAAACATCTCAAAAAGATGCAGCTCCATGGCAAAGGATCTCAAGATCCCAGCATGAAGGTCCACATAAAAGCTTTGCAAACTGTGACCTCCTTCCTCTTGTTATGTGCCATTTACTTTCTGTCCATAATCATGTCAGTTTGGAGTTTTGAGAGTCTGGAAAACAAACCTGTCTTCATGTTCTGCGAAGCTATTGCATTCAGCTATCCTTCAACCCACCCATTCATCCTGATTTGGGGAAACAAGAAGCTAAAGCAGACTTTTCTTTCAGTTTTGTGGCAAATGAGGTACTGA(SEQ ID NO:20)
TAS2R47 CDS
ATGATAACTTTTCTGCCCATCATTTTTTCCATTCTAATAGTGGTTATATTTGTTATTGGAAATTTTGCTAATGGCTTCATAGCATTGGTAAATTCCATTGAGTGGGTCAAGAGACAAAAGATCTCCTTTGTTGACCAAATTCTCACTGCTCTGGCGGTCTCCAGAGTTGGTTTGCTCTGGGTGTTATTACTACATTGGTATGCAACTCAGTTGAATCCAGCTTTTTATAGTGTAGAAGTAAGAATTACTGCTTATAATGTCTGGGCAGTAACCAACCATTTCAGCAGCTGGCTTGCTACTAGCCTCAGCATGTTTTATTTGCTCAGGATTGCCAATTTCTCCAACCTTATTTTTCTTCGCATAAAGAGGAGAGTTAAGAGTGTTGTTCTGGTGATACTGTTGGGGCCTTTGCTATTTTTGGTTTGTCATCTTTTTGTGATAAACATGGATGAGACTGTATGGACAAAAGAATATGAAGGAAACGTGACTTGGAAGATCAAATTGAGGAGTGCAATGTACCATTCAAATATGACTCTAACCATGCTAGCAAACTTTGTACCCCTCACTCTGACCCTGATATCTTTTCTGCTGTTAATCTGTTCTCTGTGTAAACATCTCAAGAAGATGCAGCTCCATGGCAAAGGATCTCAAGATCCCAGCACCAAGGTCCACATAAAAGCTTTGCAAACTGTGACCTCCTTTCTTCTGTTATGTGCCATTTACTTTCTGTCCATGATCATATCAGTTTGTAATTTTGGGAGGCTGGAAAAGCAACCTGTCTTCATGTTCTGCCAAGCTATTATATTCAGCTATCCTTCAACCCACCCATTCATCCTGATTTTGGGAAACAAGAAGCTAAAGCAGATTTTTCTTTCAGTTTTGCGGCATGTGAGGTACTGGGTGAAAGACAGAAGCCTTCGTCTCCATAGATTCACAAGAGGGGCATTGTGTGTCTTCTGA(SEQ ID NO:21)
TAS2R48 CDS
ATGATGTGTTTTCTGCTCATCATTTCATCAATTCTGGTAGTGTTTGCATTTGTTCTTGGAAATGTTGCCAATGGCTTCATAGCCCTAGTAAATGTCATTGACTGGGTTAACACACGAAAGATCTCCTCAGCTGAGCAAATTCTCACTGCTCTGGTGGTCTCCAGAATTGGTTTACTCTGGGTCATGTTATTCCTTTGGTATGCAACTGTGTTTAATTCTGCTTTATATGGTTTAGAAGTAAGAATTGTTGCTTCTAATGCCTGGGCTGTAACGAACCATTTCAGCATGTGGCTTGCTGCTAGCCTCAGCATATTTTGTTTGCTCAAGATTGCCAATTTCTCCAACCTTATTTCTCTCCACCTAAAGAAGAGAATTAAGAGTGTTGTTCTGGTGATACTGTTGGGGCCCTTGGTATTTCTGATTTGTAATCTTGCTGTGATAACCATGGATGAGAGAGTGTGGACAAAAGAATATGAAGGAAATGTGACTTGGAAGATCAAATTGAGGAATGCAATACACCTTTCAAGCTTGACTGTAACTACTCTAGCAAACCTCATACCCTTTACTCTGAGCCTAATATGTTTTCTGCTGTTAATCTGTTCTCTTTGTAAACATCTCAAGAAGATGCGGCTCCATAGCAAAGGATCTCAAGATCCCAGCACCAAGGTCCATATAAAAGCTTTGCAAACTGTGACCTCCTTCCTCATGTTATTTGCCATTTACTTTCTGTGTATAATCACATCAACTTGGAATCTTAGGACACAGCAGAGCAAACTTGTACTCCTGCTTTGCCAAACTGTTGCAATCATGTATCCTTCATTCCACTCATTCATCCTGATTATGGGAAGTAGGAAGCTAAAACAGACCTTTCTTTCAGTTTTGTGGCAGATGACACGCTGA(SEQ ID NO:22)
TAS2R49 CDS
ATGATGAGTTTTCTACACATTGTTTTTTCCATTCTAGTAGTGGTTGCATTTATTCTTGGAAATTTTGCCAATGGCTTTATAGCACTGATAAATTTCATTGCCTGGGTCAAGAGACAAAAGATCTCCTCAGCTGATCAAATTATTGCTGCTCTGGCAGTCTCCAGAGTTGGTTTGCTCTGGGTAATATTATTACATTGGTATTCAACTGTGTTGAATCCAACTTCATCTAATTTAAAAGTAATAATTTTTATTTCTAATGCCTGGGCAGTAACCAATCATTTCAGCATCTGGCTTGCTACTAGCCTCAGCATATTTTATTTGCTCAAGATCGTCAATTTCTCCAGACTTATTTTTCATCACTTAAAAAGGAAGGCTAAGAGTGTAGTTCTGGTGATAGTGTTGGGGTCTTTGTTCTTTTTGGTTTGTCACCTTGTGATGAAACACACGTATATAAATGTGTGGACAGAAGAATGTGAAGGAAACGTAACTTGGAAGATCAAACTGAGGAATGCAATGCACCTTTCCAACTTGACTGTAGCCATGCTAGCAAACTTGATACCATTCACTCTGACCCTGATATCTTTTCTGCTGTTAATCTACTCTCTGTGTAAACATCTGAAGAAGATGCAGCTCCATGGCAAAGGATCTCAAGATCCCAGCACCAAGATCCACATAAAAGCTCTGCAAACTGTGACCTCCTTCCTCATATTACTTGCCATTTACTTTCTGTGTCTAATCATATCGTTTTGGAATTTTAAGATGCGACCAAAAGAAATTGTCTTAATGCTTTGCCAAGCTTTTGGAATCATATATCCATCATTCCACTCATTCATTCTGATTTGGGGGAACAAGACGCTAAAGCAGACCTTTCTTTCAGTTTTGTGGCAGGTGACTTGCTGGGCAAAAGGACAGAACCAGTCAACTCCATAG(SEQ ID NO:23)
TAS2R50 CDS
ATGATAACTTTTCTATACATTTTTTTTTCAATTCTAATAATGGTTTTATTTGTTCTCGGAAACTTTGCCAATGGCTTCATAGCACTGGTAAATTTCATTGACTGGGTGAAGAGAAAAAAGATCTCCTCAGCTGACCAAATTCTCACTGCTCTGGCGGTCTCCAGAATTGGTTTGCTCTGGGCATTATTATTAAATTGGTATTTAACTGTGTTGAATCCAGCTTTTTATAGTGTAGAATTAAGAATTACTTCTTATAATGCCTGGGTTGTAACCAACCATTTCAGCATGTGGCTTGCTGCTAACCTCAGCATATTTTATTTGCTCAAGATTGCCAATTTCTCCAACCTTCTTTTTCTTCATTTAAAGAGGAGAGTTAGGAGTGTCATTCTGGTGATACTGTTGGGGACTTTGATATTTTTGGTTTGTCATCTTCTTGTGGCAAACATGGATGAGAGTATGTGGGCAGAAGAATATGAAGGAAACATGACTGGGAAGATGAAATTGAGGAATACAGTACATCTTTCATATTTGACTGTAACTACCCTATGGAGCTTCATACCCTTTACTCTGTCCCTGATATCTTTTCTGATGCTAATCTGTTCTCTGTGTAAACATCTCAAGAAGATGCAGCTCCATGGAGAAGGATCGCAAGATCTCAGCACCAAGGTCCACATAAAAGCTTTGCAAACTCTGATCTCCTTCCTCTTGTTATGTGCCATTTTCTTTCTATTCCTAATCGTTTCGGTTTGGAGTCCTAGGAGGCTGCGGAATGACCCGGTTGTCATGGTTAGCAAGGCTGTTGGAAACATATATCTTGCATTCGACTCATTCATCCTAATTTGGAGAACCAAGAAGCTAAAACACACCTTTCTTTTGATTTTGTGTCAGATTAGGTGCTGA(SEQ ID NO:24)
TAS2R55 CDS
ATGGCCACCGAATTGGACAAAATCTTTCTGATTCTGGCAATAGCAGAATTCATCATCAGCATGCTGGGGAATGTGTTCATTGGACTGGTAAACTGCTCTGAAGGGATCAAGAACCAAAAGGTCTTCTCAGCTGACTTCATCCTCACCTGCTTGGCTATCTCCACAATTGGACAACTGTTGGTGATACTGTTTGATTCATTTCTAGTGGGACTTGCTTCACATTTATATACCACATATAGACTAGGAAAAACTGTTATTATGCTTTGGCACATGACTAATCACTTGACAACCTGGCTTGCCACCTGCCTAAGCATTTTCTATTTCTTTAAGATAGCCCACTTCCCCCACTCCCTTTTCCTCTGGCTGAGGTGGAGGATGAACGGAATGATTGTTATGCTTCTTATATTGTCTTTGTTCTTACTGATTTTTGACAGTTTAGTGCTAGAAATATTTATTGATATCTCACTCAATATAATAGATAAAAGTAATCTGACTTTATATTTAGATGAAAGTAAAACTCTCTTTGATAAACTCTCTATTTTAAAAACTCTTCTCAGCTTGACCAGTTTTATCCCCTTTTCTCTGTCCCTGACCTCCTTGCTTTTTTTATTTCTGTCCTTGGTGAGACATACTAGAAATTTGAAGCTCAGTTCCTTGGGCTCTAGAGACTCCAGCACAGAGGCCCATAGGAGGGCCATGAAAATGGTGATGTCTTTCCTTTTCCTCTTCATAGTTCATTTTTTTTCCTTACAAGTGGCCAATTGGATATTTTTTATGTTGTGGAACAACAAGTACATAAAGTTTGTCATGTTAGCCTTAAATGCCTTTCCCTCGTGCCACTCATTTATTCTCATTCTGGGAAACAGCAAGCTGCGACAGACAGCTGTGAGGCTACTGTGGCATCTTAGGAACTATACAAAAACACCAAATGCTTTACCTTTGTGA(SEQ ID NO:25)
TAS2R60 CDS
ATGAATGGAGACCACATGGTTCTAGGATCTTCGGTGACTGACAAGAAGGCCATCATCTTGGTTACCATTTTACTCCTTTTACGCCTGGTAGCAATAGCAGGCAATGGCTTCATCACTGCTGCTCTGGGCGTGGAGTGGGTGCTACGGAGAATGTTGTTGCCTTGTGATAAGTTATTGGTTAGCCTAGGGGCCTCTCGCTTCTGTCTGCAGTCAGTGGTAATGGGTAAGACCATTTATGTTTTCTTGCATCCGATGGCCTTCCCATACAACCCTGTACTGCAGTTTCTAGCTTTCCAGTGGGACTTCCTGAATGCTGCCACCTTATGGTCCTCTACCTGGCTCAGTGTCTTCTATTGTGTGAAAATTGCTACCTTCACCCACCCTGTCTTCTTCTGGCTAAAGCACAAGTTGTCTGGGTGGCTACCATGGATGCTCTTCAGCTCTGTAGGGCTCTCCAGCTTCACCACCATTCTATTTTTCATAGGCAACCACAGAATGTATCAGAACTATTTAAGGAACCATCTACAACCTTGGAATGTCACTGGCGATAGCATACGGAGCTACTGTGAGAAATTCTATCTCTTCCCTCTAAAAATGATTACTTGGACAATGCCCACTGCTGTCTTTTTCATTTGCATGATTTTGCTCATCACATCTCTGGGAAGACACAGGAAGAAGGCTCTCCTTACAACCTCAGGATTCCGAGAGCCCAGTGTGCAGGCACACATAAAGGCTCTGCTGGCTCTCCTCTCTTTTGCCATGCTCTTCATCTCATATTTCCTGTCACTGGTGTTCAGTGCTGCAGGTATTTTTCCACCTCTGGACTTTAAATTCTGGGTGTGGGAGTCAGTGATTTATCTGTGTGCAGCAGTTCACCCCATCATTCTGCTCTTCAGCAACTGCAGGCTGAGAGCTGTGCTGAAGAGTCGTCGTTCCTCAAGGTGTGGGACACCTTGA(SEQ ID NO:26)
人GNA15 CDS
ATGGCCCGGTCCCTGACTTGGGGCTGCTGTCCCTGGTGCCTGACAGAGGAGGAGAAGACTGCCGCCAGAATCGACCAGGAGATCAACAGGATTTTGTTGGAACAGAAAAAACAAGAGCGCGAGGAATTGAAACTCCTGCTGTTGGGGCCTGGTGAGAGCGGGAAGAGTACGTTCATCAAGCAGATGCGCATCATTCACGGTGTGGGCTACTCGGAGGAGGACCGCAGAGCCTTCCGGCTGCTCATCTACCAGAACATCTTCGTCTCCATGCAGGCCATGATAGATGCGATGGACCGGCTGCAGATCCCCTTCAGCAGGCCTGACAGCAAGCAGCACGCCAGCCTAGTGATGACCCAGGACCCCTATAAAGTGAGCACATTCGAGAAGCCATATGCAGTGGCCATGCAGTACCTGTGGCGGGACGCGGGCATCCGTGCATGCTACGAGCGAAGGCGTGAATTCCACCTTCTGGACTCCGCGGTGTATTACCTGTCACACCTGGAGCGCATATCAGAGGACAGCTACATCCCCACTGCGCAAGACGTGCTGCGCAGTCGCATGCCCACCACAGGCATCAATGAGTACTGCTTCTCCGTGAAGAAAACCAAACTGCGCATCGTGGATGTTGGTGGCCAGAGGTCAGAGCGTAGGAAATGGATTCACTGTTTCGAGAACGTGATTGCCCTCATCTACCTGGCCTCCCTGAGCGAGTATGACCAGTGCCTAGAGGAGAACGATCAGGAGAACCGCATGGAGGAGAGTCTCGCTCTGTTCAGCACGATCCTAGAGCTGCCCTGGTTCAAGAGCACCTCGGTCATCCTCTTCCTCAACAAGACGGACATCCTGGAAGATAAGATTCACACCTCCCACCTGGCCACATACTTCCCCAGCTTCCAGGGACCCCGGCGAGACGCAGAGGCCGCCAAGAGCTTCATCTTGGACATGTATGCGCGCGTGTACGCGAGCTGCGCAGAGCCCCAGGACGGTGGCAGGAAAGGCTCCCGCGCGCGCCGCTTCTTCGCACACTTCACCTGTGCCACGGACACGCAAAGCGTCCGCAGCGTGTTCAAGGACGTGCGGGACTCGGTGCTGGCCCGGTACCTGGACGAGATCAACCTGCTGTGA(SEQ ID NO:27)
TAS2R1
MLESHLIIYFLLAVIQFLLGIFTNGIIVVVNGIDLIKHRKMAPLDLLLSCLAVSRIFLQLFIFYVNVIVIFFIEFIMCSANCAILLFINELELWLATWLGVFYCAKVASVRHPLFIWLKMRISKLVPWMILGSLLYVSMICVFHSKYAGFMVPYFLRKFFSQNATIQKEDTLAIQIFSFVAEFSVPLLIFLFAVLLLIFSLGRHTRQMRNTVAGSRVPGRGAPISALLSILSFLILYFSHCMIKVFLSSLKFHIRRFIFLFFILVIGIYPSGHSLILILGNPKLKQNAKKFLLHSKCCQ(SEQ IDNO:28)
TAS2R3
MMGLTEGVFLILSGTQFTLGILVNCFIELVNGSSWFKTKRMSLSDFIITTLALLRIILLCIILTDSFLIEFSPNTHDSGIIMQIIDVSWTFTNHLSIWLATCLGVLYCLKIASFSHPTFLWLKWRVSRVMVWMLLGALLLSCGSTASLINEFKLYSVFRGIEATRNVTEHFRKKRSEYYLIHVLGTLWYLPPLIVSLASYSLLIFSLGRHTRQMLQNGTSSRDPTTEAHKRAIRIILSFFFLFLLYFLAFLIASFGNFLPKTKMAKMIGEVMTMFYPAGHSFILILGNSKLKQTFVVMLRCESGHLKPGSKGPIFS(SEQ ID NO:29)
TAS2R4
MLRLFYFSAIIASVILNFVGIIMNLFITVVNCKTWVKSHRISSSDRILFSLGITRFLMLGLFLVNTIYFVSSNTERSVYLSAFFVLCFMFLDSSSVWFVTLLNILYCVKITNFQHSVFLLLKRNISPKIPRLLLACVLISAFTTCLYITLSQASPFPELVTTRNNTSFNISEGILSLVVSLVLSSSLQFIINVTSASLLIHSLRRHIQKMQKNATGFWNPQTEAHVGAMKLMVYFLILYIPYSVATLVQYLPFYAGMDMGTKSICLIFATLYSPGHSVLIIITHPKLKTTAKKILCFKK(SEQ IDNO:30)
TAS2R5
MLSAGLGLLMLVAVVEFLIGLIGNGSLVVWSFREWIRKFNWSSYNLIILGLAGCRFLLQWLIILDLSLFPLFQSSRWLRYLSIFWVLVSQASLWFATFLSVFYCKKITTFDRPAYLWLKQRAYNLSLWCLLGYFIINLLLTVQIGLTFYHPPQGNSSIRYPFESWQYLYAFQLNSGSYLPLVVFLVSSGMLIVSLYTHHKKMKVHSAGRRDVRAKAHITALKSLGCFLLLHLVYIMASPFSITSKTYPPDLTSVFIWETLMAAYPSLHSLILIMGIPRVKQTCQKILWKTVCARRCWGP(SEQ ID NO:31)
TAS2R7
MADKVQTTLLFLAVGEFSVGILGNAFIGLVNCMDWVKKRKIASIDLILTSLAISRICLLCVILLDCFILVLYPDVYATGKEMRIIDFFWTLTNHLSIWFATCLSIYYFFKIGNFFHPLFLWMKWRIDRVISWILLGCVVLSVFISLPATENLNADFRFCVKAKRKTNLTWSCRVNKTQHASTKLFLNLATLLPFCVCLMSFFLLILSLRRHIRRMQLSATGCRDPSTEAHVRALKAVISFLLLFIAYYLSFLIATSSYFMPETELAVIFGESIALIYPSSHSFILILGNNKLRHASLKVIWKVMSILKGRKFQQHKQI(SEQ ID NO:32)
TAS2R8
MFSPADNIFIILITGEFILGILGNGYIALVNWIDWIKKKKISTVDYILTNLVIARICLISVMVVNGIVIVLNPDVYTKNKQQIVIFTFWTFANYLNMWITTCLNVFYFLKIASSSHPLFLWLKWKIDMVVHWILLGCFAISLLVSLIAAIVLSCDYRFHAIAKHKRNITEMFHVSKIPYFEPLTLFNLFAIVPFIVSLISFFLLVRSLWRHTKQIKLYATGSRDPSTEVHVRAIKTMTSFIFFFFLYYISSILMTFSYLMTKYKLAVEFGEIAAILYPLGHSLILIVLNNKLRQTFVRMLTCRKIACMI(SEQ ID NO:33)
TAS2R9
MPSAIEAIYIILIAGELTIGIWGNGFIVLVNCIDWLKRRDISLIDIILISLAISRICLLCVISLDGFFMLLFPGTYGNSVLVSIVNVVWTFANNSSLWFTSCLSIFYLLKIANISHPFFFWLKLKINKVMLAILLGSFLISLIISVPKNDDMWYHLFKVSHEENITWKFKVSKIPGTFKQLTLNLGVMVPFILCLISFFLLLFSLVRHTKQIRLHATGFRDPSTEAHMRAIKAVIIFLLLLIVYYPVFLVMTSSALIPQGKLVLMIGDIVTVIFPSSHSFILIMGNSKLREAFLKMLRFVKCFLRRRKPFVP(SEQ ID NO:34)
TAS2R10
MLRVVEGIFIFVVVSESVFGVLGNGFIGLVNCIDCAKNKLSTIGFILTGLAISRIFLIWIIITDGFIQIFSPNIYASGNLIEYISYFWVIGNQSSMWFATSLSIFYFLKIANFSNYIFLWLKSRTNMVLPFMIVFLLISSLLNFAYIAKILNDYKMKNDTVWDLNMYKSEYFIKQILLNLGVIFFFTLSLITCIFLIISLWRHNRQMQSNVTGLRDSNTEAHVKAMKVLISFIILFILYFIGMAIEISCFTVRENKLLLMFGMTTTAIYPWGHSFILILGNSKLKQASLRVLQQLKCCEK(SEQ IDNO:35)
TAS2R13
MESALPSIFTLVIIAEFIIGNLSNGFIVLINCIDWVSKRELSSVDKLLIILAISRIGLIWEILVSWFLALHYLAIFVSGTGLRIMIFSWIVSNHFNLWLATIFSIFYLLKIASFSSPAFLYLKWRVNKVILMILLGTLVFLFLNLIQINMHIKDWLDRYERNTTWNFSMSDFETFSVSVKFTMTMFSLTPFTVAFISFLLLIFSLQKHLQKMQLNYKGHRDPRTKVHTNALKIVISFLLFYASFFLCVLISWISELYQNTVIYMLCETIGVFSPSSHSFLLILGNAKLRQAFLLVAAKVW(SEQ IDNO:36)
TAS2R14
MGGVIKSIFTFVLIVEFIIGNLGNSFIALVNCIDWVKGRKISSVDRILTALAISRISLVWLIFGSWCVSVFFPALFATEKMFRMLTNIWTVINHFSVWLATGLGTFYFLKIANFSNSIFLYLKWRVKKVVLVLLLVTSVFLFLNIALINIHINASINGYRRNKTCSSDSSNFTRFSSLIVLTSTVFIFIPFTLSLAMFLLLIFSMWKHRKKMQHTVKISGDASTKAHRGVKSVITFFLLYAIFSLSFFISVWTSERLEENLIILSQVMGMAYPSCHSCVLILGNKKLRQASLSVLLWLRYMFKDGEPSGHKEFRESS(SEQ ID NO:37)
TAS2R16
MIPIQLTVFFMIIYVLESLTIIVQSSLIVAVLGREWLQVRRLMPVDMILISLGISRFCLQWASMLNNFCSYFNLNYVLCNLTITWEFFNILTFWLNSLLTVFYCIKVSSFTHHIFLWLRWRILRLFPWILLGSLMITCVTIIPSAIGNYIQIQLLTMEHLPRNSTVTDKLENFHQYQFQAHTVALVIPFILFLASTIFLMASLTKQIQHHSTGHCNPSMKARFTALRSLAVLFIVFTSYFLTILITIIGTLFDKRCWLWVWEAFVYAFILMHSTSLMLSSPTLKRILKGKC(SEQ ID NO:38)
TAS2R38
MLTLTRIRTVSYEVRSTFLFISVLEFAVGFLTNAFVFLVNFWDVVKRQALSNSDCVLLCLSISRLFLHGLLFLSAIQLTHFQKLSEPLNHSYQAIIMLWMIANQANLWLAACLSLLYCSKLIRFSHTFLICLASWVSRKISQMLLGIILCSCICTVLCVWCFFSRPHFTVTTVLFMNNNTRLNWQIKDLNLFYSFLFCYLWSVPPFLLFLVSSGMLTVSLGRHMRTMKVYTRNSRDPSLEAHIKALKSLVSFFCFFVISSCAAFISVPLLILWRDKIGVMVCVGIMAACPSGHAAILISGNAKLRRAVMTILLWAQSSLKVRADHKADSRTLC(SEQ ID NO:39)
TAS2R39
MLGRCFPPDTKEKQQLRMTKLCDPAESELSPFLITLILAVLLAEYLIGIIANGFIMAIHAAEWVQNKAVSTSGRILVFLSVSRIALQSLMMLEITISSTSLSFYSEDAVYYAFKISFIFLNFCSLWFAAWLSFFYFVKIANFSYPLFLKLRWRITGLIPWLLWLSVFISFSHSMFCINICTVYCNNSFPIHSSNSTKKTYLSEINVVGLAFFFNLGIVTPLIMFILTATLLILSLKRHTLHMGSNATGSNDPSMEAHMGAIKAISYFLILYIFNAVALFIYLSNMFDINSLWNNLCQIIMAAYPASHSILLIQDNPGLRRAWKRLQLRLHLYPKEWTL(SEQ ID NO:40)
TAS2R40
MATVNTDATDKDISKFKVTFTLVVSGIECITGILGSGFITAIYGAEWARGKTLPTGDRIMLMLSFSRLLLQIWMMLENIFSLLFRIVYNQNSVYILFKVITVFLNHSNLWFAAWLKVFYCLRIANFNHPLFFLMKRKIIVLMPWLLRLSVLVSLSFSFPLSRDVFNVYVNSSIPIPSSNSTEKKYFSETNMVNLVFFYNMGIFVPLIMFILAATLLILSLKRHTLHMGSNATGSRDPSMKAHIGAIKATSYFLILYIFNAIALFLSTSNIFDTYSSWNILCKIIMAAYPAGHSVQLILGNPGLRRAWKRFQHQVPLYLKGQTL(SEQ ID NO:41)
TAS2R41
MQAALTAFFVLLFSLLSLLGIAANGFIVLVLGREWLRYGRLLPLDMILISLGASRFCLQLVGTVHNFYYSAQKVEYSGGLGRQFFHLHWHFLNSATFWFCSWLSVLFCVKIANITHSTFLWLKWRFLGWVPWLLLGSVLISFIITLLFFWVNYPVYQEFLIRKFSGNMTYKWNTRIETYYFPSLKLVIWSIPFSVFLVSIMLLINSLRRHTQRMQHNGHSLQDPSTQAHTRALKSLISFLILYALSFLSLIIDAAKFISMQNDFYWPWQIAVYLCISVHPFILIFSNLKLRSVFSQLLLLARGFWVA(SEQ ID NO:42)
TAS2R43
MITFLPIIFSSLVVVTFVIGNFANGFIALVNSIESFKRQKISFADQILTALAVSRVGLLWVLLLNWYSTVLNPAFNSVEVRTTAYNIWAVINHFSNWLATTLSIFYLLKIANFSNFIFLHLKRRVKSVILVMLLGPLLFLACHLFVINMNEIVRTKEFEGNMTWKIKLKSAMYFSNMTVTMVANLVPFTLTLLSFMLLICSLCKHLKKMQLRGKGSQDPSTKVHIKALQTVISFLLLCAIYFLSIMISVWSFGSLENKPVFMFCKAIRFSYPSIHPFILIWGNKKLKQTFLSVFWQMRYWVKGEKTSSP(SEQ ID NO:43)
TAS2R44
MTTFIPIIFSSVVVVLFVIGNFANGFIALVNSIERVKRQKISFADQILTALAVSRVGLLWVLLLNWYSTVFNPAFYSVEVRTTAYNVWAVTGHFSNWLATSLSIFYLLKIANFSNLIFLHLKRRVKSVILVMLLGPLLFLACQLFVINMKEIVRTKEYEGNMTWKIKLRSAVYLSDATVTTLGNLVPFTLTLLCFLLLICSLCKHLKKMQLHGKGSQDPSTKVHIKALQTVIFFLLLCAVYFLSIMISVWSFGSLENKPVFMFCKAIRFSYPSIHPFILIWGNKKLKQTFLSVLRQVRYW(SEQ ID NO:44)
TAS2R45
MITFLPIIFSILVVVTFVIGNFANGFIALVNSTEWVKRQKISFADQIVTALAVSRVGLLWVLLLNWYSTVLNPAFCSVELRTTAYNIWAVTGHFSNWPATSLSIFYLLKIANFSNLIFLRLKRRVKSVILVVLLGPLLFLACHLFVVNMNQIVWTKEYEGNMTWKIKLRRAMYLSDTTVTMLANLVPFTVTLISFLLLVCSLCKHLKKMQLHGKGSQDPSTKVHIKVLQTVISFFLLRAIYFVSVIISVWSFKNLENKPVFMFCQAIGFSCSSAHPFILIWGNKKLKQTYLSVLWQMRY(SEQ ID NO:45)
TAS2R46
MITFLPIIFSILIVVTFVIGNFANGFIALVNSIEWFKRQKISFADQILTALAVSRVGLLWVLVLNWYATELNPAFNSIEVRITAYNVWAVINHFSNWLATSLSIFYLLKIANFSNLIFLHLKRRVKSVVLVILLGPLLFLVCHLFVINMNQIIWTKEYEGNMTWKIKLRSAMYLSNTTVTILANLVPFTLTLISFLLLICSLCKHLKKMQLHGKGSQDPSMKVHIKALQTVTSFLLLCAIYFLSIIMSVWSFESLENKPVFMFCEAIAFSYPSTHPFILIWGNKKLKQTFLSVLWHVRYWVKGEKPSSS(SEQ ID NO:46)
TAS2R47
MITFLPIIFSILIVVIFVIGNFANGFIALVNSIEWVKRQKISFVDQILTALAVSRVGLLWVLLLHWYATQLNPAFYSVEVRITAYNVWAVTNHFSSWLATSLSMFYLLRIANFSNLIFLRIKRRVKSVVLVILLGPLLFLVCHLFVINMDETVWTKEYEGNVTWKIKLRSAMYHSNMTLTMLANFVPLTLTLISFLLLICSLCKHLKKMQLHGKGSQDPSTKVHIKALQTVTSFLLLCAIYFLSMIISVCNLGRLEKQPVFMFCQAIIFSYPSTHPFILILGNKKLKQIFLSVLRHVRYWVKDRSLRLHRFTRAALCKG(SEQ ID NO:47)
TAS2R48
MMCFLLIISSILVVFAFVLGNVANGFIALVNVIDWVNTRKISSAEQILTALVVSRIGLLWVMLFLWYATVFNSALYGLEVRIVASNAWAVTNHFSMWLAASLSIFCLLKIANFSNLISLHLKKRIKSVVLVILLGPLVFLICNLAVITMDERVWTKEYEGNVTWKIKLRNAIHLSSLTVTTLANLIPFTLSLICFLLLICSLCKHLKKMRLHSKGSQDPSTKVHIKALQTVTSFLMLFAIYFLCIITSTWNLRTQQSKLVLLLCQTVAIMYPSFHSFILIMGSRKLKQTFLSVLWQMTR(SEQ ID NO:48)
TAS2R49
MMSFLHIVFSILVVVAFILGNFANGFIALINFIAWVKRQKISSADQIIAALAVSRVGLLWVILLHWYSTVLNPTSSNLKVIIFISNAWAVTNHFSIWLATSLSIFYLLKIVNFSRLIFHHLKRKAKSVVLVIVLGSLFFLVCHLVMKHTYINVWTEECEGNVTWKIKLRNAMHLSNLTVAMLANLIPFTLTLISFLLLIYSLCKHLKKMQLHGKGSQDPSTKIHIKALQTVTSFLILLAIYFLCLIISFWNFKMRPKEIVLMLCQAFGIIYPSFHSFILIWGNKTLKQTFLSVLWQVTCWAKGQNQSTP(SEQ ID NO:49)
TAS2R50
MITFLYIFFSILIMVLFVLGNFANGFIALVNFIDWVKRKKISSADQILTALAVSRIGLLWALLLNWYLTVLNPAFYSVELRITSYNAWVVTNHFSMWLAANLSIFYLLKIANFSNLLFLHLKRRVRSVILVILLGTLIFLVCHLLVANMDESMWAEEYEGNMTGKMKLRNTVHLSYLTVTTLWSFIPFTLSLISFLMLICSLYKHLKKMQLHGEGSQDLSTKVHIKALQTLISFLLLCAIFFLFLIVSVWSPRRLRNDPVVMVSKAVGNIYLAFDSFILIWRTKKLKHTFLLILCQIRC(SEQ ID NO:50)
TAS2R55
MATELDKIFLILAIAEFIISMLGNVFIGLVNCSEGIKNQKVFSADFILTCLAISTIGQLLVILFDSFLVGLASHLYTTYRLGKTVIMLWHMTNHLTTWLATCLSIFYFFKIAHFPHSLFLWLRWRMNGMIVMLLILSLFLLIFDSLVLEIFIDISLNIIDKSNLTLYLDESKTLYDKLSILKTLLSLTSFIPFSLFLTSLLFLFLSLVRHTRNLKLSSLGSRDSSTEAHRRAMKMVMSFLFLFIVHFFSLQVANGIFFMLWNNKYIKFVMLALNAFPSCHSFILILGNSKLRQTAVRLLWHLRNYTKTPNALPL(SEQ ID NO:51)
TAS2R60
MNGDHMVLGSSVTDKKAIILVTILLLLRLVAIAGNGFITAALGVEWVLRRMLLPCDKLLVSLGASRFCLQSVVMGKTIYVFLHPMAFPYNPVLQFLAFQWDFLNAATLWSSTWLSVFYCVKIATFTHPVFFWLKHKLSGWLPWMLFSSVGLSSFTTILFFIGNHRMYQNYLRNHLQPWNVTGDSIRSYCEKFYLFPLKMITWTMPTAVFFICMILLITSLGRHRKKALLTTSGFREPSVQAHIKALLALLSFAMLFISYFLSLVFSAAGIFPPLDFKFWVWESVIYLCAAVHPIILLFSNCRLRAVLKSRRSSRCGTP(SEQ ID NO:52)
小鼠Gna15(Gα15)
MARSTWGCCWCTKTAARDNRKKRKGGSGKSTKMRHGVGYSDRRARYNVSMAMDAMDRSRDSKHASVMTDYKVSTKYAVAMYWRDAGRACYRRRHDSAVYYSHRSDSYTADVRSRMTTGNYCSVKKTKRVDVGGRSRRKWHCNVAYASSYDCNDNRMSASTWKSTSVNKTDDKHTSHATYSGRRDAAAKSDMYARVYASCADGGRKGSRARRAHTCATDTSVRSVKDVRDSVARYDN(SEQ ID NO:53)
TAS2R38(PAV单倍型)
MLTLTRIRTVSYEVRSTFLFISVLEFAVGFLTNAFVFLVNFWDVVKRQPLSNSDCVLLCLSISRLFLHGLLFLSAIQLTHFQKLSEPLNHSYQAIIMLWMIANQANLWLAACLSLLYCSKLIRFSHTFLICLASWVSRKISQMLLGIILCSCICTVLCVWCFFSRPHFTVTTVLFMNNNTRLNWQIKDLNLFYSFLFCYLWSVPPFLLFLVSSGMLTVSLGRHMRTMKVYTRNSRDPSLEAHIKALKSLVSFFCFFVISSCAAFISVPLLILWRDKIGVMVCVGIMAACPSGHAAVLISGNAKLRRAVMTILLWAQSSLKVRADHKADSRTLC
(SEQ ID NO:54)
附录表1与人苦味受体基因相关的多态性
基因 参考序号 参照序列中的位置 SNP
TAS2R1 rs10543720 pos＝401 等位基因＝"-/CTATCTAT"
rs2234228 pos＝101 等位基因＝"A/G"
rs2234229 pos＝101 等位基因＝"C/T"
rs2234230 pos＝101 等位基因＝"A/C"
rs2234231 pos＝101 等位基因＝"C/T"
rs2234232 pos＝101 等位基因＝"A/G"
rs2234233 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs2234234 pos＝101 等位基因＝"C/T"
rs2234235 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs34440745 pos＝301 等位基因＝"A/T"
rs35186690 pos＝301 等位基因＝"-/G"
rs35524938 pos＝401 等位基因＝"-/ATCT"
rs36214451 pos＝401 等位基因＝"-/TATCTATC"
rs41464 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs41465 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs41466 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs41467 pos＝301 等位基因＝"G/T"
rs41468 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs41469 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs41470 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs56300050 pos＝253 等位基因＝"-/ATCT"
rs57183738 pos＝101 等位基因＝"G/T"
rs58046500 pos＝101 等位基因＝"C/T"
rs58171988 pos＝201 等位基因＝"A/G"
TAS2R3 rs11514837 pos＝458 等位基因＝"A/G"
rs11763979 pos＝501 等位基因＝"G/T"
rs11771020 pos＝501 等位基因＝"C/T"
rs11771072 pos＝201 等位基因＝"A/C"
rs12667706 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs12703406 pos＝277 等位基因＝"A/G"
rs13311828 pos＝367 等位基因＝"A/G"
rs13311829 pos＝367 等位基因＝"C/G"
rs13311831 pos＝342 等位基因＝"A/G"
rs17162469 pos＝101 等位基因＝"A/G"
rs17162471 pos＝101 等位基因＝"A/C"
rs17162473 pos＝101 等位基因＝"A/G"
rs17162483 pos＝101 等位基因＝"A/G"
rs2270009 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs28480612 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs4726475 pos＝609 等位基因＝"C/T"
rs56917574 pos＝101 等位基因＝"G/T"
rs58640454 pos＝101 等位基因＝"A/G"
rs60922375 pos＝101 等位基因＝"A/C"
rs6962760 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs6965618 pos＝259 等位基因＝"C/T"
rs765007 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs765008 pos＝301 等位基因＝"G/T"
rs7793232 pos＝714 等位基因＝"A/G"
基因 参考序号 参照序列中的位置 SNP
TAS2R4 rs10485837 pos＝101 等位基因＝"A/G"
rs2233990 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs2233991 pos＝101 等位基因＝"C/T"
rs2233992 pos＝101 等位基因＝"A/G"
rs2233993 pos＝101 等位基因＝"A/G"
rs2233994 pos＝101 等位基因＝"A/G"
rs2233995 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs2233996 pos＝101 等位基因＝"C/G"
rs2233997 pos＝101 等位基因＝"A/C"
rs2233998 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs2233999 pos＝101 等位基因＝"A/T"
rs2234000 pos＝101 等位基因＝"C/T"
rs2234001 pos＝301 等位基因＝"C/G"
rs2234002 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs2234003 pos＝101 等位基因＝"A/G"
rs33920115 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs34855644 pos＝301 等位基因＝"-/T"
rs3840580 pos＝61 等位基因＝"-/AA"
rs57597591 pos＝201 等位基因＝"-/T"
rs59513189 pos＝201 等位基因＝"G/T"
rs61582517 pos＝201 等位基因＝"-/TGTAGATA"
TAS2R5 rs10952507 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs11761380 pos＝301 等位基因＝"A/C"
rs11769235 pos＝201 等位基因＝"A/C"
rs2227264 pos＝301 等位基因＝"G/T"
rs2234004 pos＝101 等位基因＝"C/T"
rs2234005 pos＝101 等位基因＝"A/G"
rs2234006 pos＝682 等位基因＝"C/T"
rs2234007 pos＝494 等位基因＝"A/G"
rs2234008 pos＝101 等位基因＝"A/G"
rs2234009 pos＝101 等位基因＝"C/T"
rs2234010 pos＝101 等位基因＝"A/G"
rs2234011 pos＝101 等位基因＝"C/T"
rs2234012 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs2234013 pos＝101 等位基因＝"A/G"
rs2234014 pos＝101 等位基因＝"C/T"
rs2234015 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs2234016 pos＝101 等位基因＝"G/T"
rs2234017 pos＝201 等位基因＝"C/G"
rs2234018 pos＝101 等位基因＝"A/T"
rs2234019 pos＝101 等位基因＝"A/G"
rs2234020 pos＝101 等位基因＝"C/T"
rs34529840 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs3801001 pos＝61 等位基因＝"A/C"
rs4726476 pos＝201 等位基因＝"C/G"
rs60900504 pos＝101 等位基因＝"C/T"
rs62477710 pos＝251 等位基因＝"C/T"
rs62477711 pos＝251 等位基因＝"G/T"
TAS2R7 rs10161483 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs10772362 pos＝501 等位基因＝"C/T"
基因 参考序号 参照序列中的位置 SNP
rs11054041 pos＝201 等位基因＝"A/C"
rs11838055 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs2418107 pos＝501 等位基因＝"C/G"
rs2588350 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs34212148 pos＝301 等位基因＝"-/G"
rs36067388 pos＝301 等位基因＝"-/G"
rs3759251 pos＝101 等位基因＝"A/T"
rs3759252 pos＝61 等位基因＝"A/C"
rs619381 pos＝519 等位基因＝"C/T"
rs7303054 pos＝201 等位基因＝"C/T"
TAS2R8 rs12314840 pos＝224 等位基因＝"C/T"
rs1548803 pos＝780 等位基因＝"C/T"
rs1838344 pos＝277 等位基因＝"C/T"
rs1838345 pos＝322 等位基因＝"A/G"
rs2537817 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs40313 pos＝176 等位基因＝"C/T"
rs41324347 pos＝65 等位基因＝"G/T"
rs60652912 pos＝201 等位基因＝"A/C"
rs620878 pos＝283 等位基因＝"G/T"
rs7972779 pos＝424 等位基因＝"C/T"
TAS2R9 rs11054042 pos＝201 等位基因＝"C/G"
rs11054043 pos＝201 等位基因＝"G/T"
rs11054044 pos＝201 等位基因＝"C/G"
rs11402198 pos＝401 等位基因＝"-/G"
rs17207899 pos＝101 等位基因＝"G/T"
rs17742870 pos＝101 等位基因＝"A/T"
rs1838346 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs2159903 pos＝84 等位基因＝"A/G"
rs36044129 pos＝301 等位基因＝"-/T"
rs3741845 pos＝179 等位基因＝"C/T"
rs3944035 pos＝100 等位基因＝"A/G"
rs40313 pos＝176 等位基因＝"C/T"
rs60652912 pos＝201 等位基因＝"A/C"
rs61320953 pos＝201 等位基因＝"-/T"
rs655046 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs667123 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs667128 pos＝201 等位基因＝"C/T"
TAS2R10 rs10845219 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs12307411 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs35370388 pos＝301 等位基因＝"-/TGTG"
rs58719830 pos＝225 等位基因＝"-/TGTG"
rs597468 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs60832178 pos＝101 等位基因＝"C/T"
rs61912242 pos＝251 等位基因＝"G/T"
rs689118 pos＝301 等位基因＝"C/T"
TAS2R13 rs1015442 pos＝519 等位基因＝"C/T"
rs1015443 pos＝946 等位基因＝"C/T"
rs10566346 pos＝401 等位基因＝"-/TG"
rs10591343 pos＝501 等位基因＝"-/GT"
rs10845238 pos＝258 等位基因＝"G/T"
基因 参考序号 参照序列中的位置 SNP
rs10845239 pos＝346 等位基因＝"A/T"
rs10845240 pos＝449 等位基因＝"C/G"
rs11054070 pos＝2000 等位基因＝"C/G"
rs11054071 pos＝201 等位基因＝"C/G"
rs11830286 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs34885344 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs35172210 pos＝301 等位基因＝"-/T"
rs56987993 pos＝101 等位基因＝"C/G"
rs7308212 pos＝256 等位基因＝"C/T"
rs7968736 pos＝201 等位基因＝"A/T"
rs7978678 pos＝201 等位基因＝"A/G"
TAS2R14 rs10492104 pos＝101 等位基因＝"C/G"
rs11610105 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs16925868 pos＝101 等位基因＝"C/T"
rs3033010 pos＝501 等位基因＝"-/C/CT/G"
rs34789740 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs35386049 pos＝301 等位基因＝"-/C"
rs35405135 pos＝301 等位基因＝"-/T"
rs35804287 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs35926739 pos＝301 等位基因＝"-/T"
rs3741843 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs3851583 pos＝501 等位基因＝"A/G"
rs3851584 pos＝500 等位基因＝"G/T"
rs3851585 pos＝501 等位基因＝"C/G"
rs3863321 pos＝21 等位基因＝"C/T"
rs3936285 pos＝537 等位基因＝"A/T"
rs4140968 pos＝101 等位基因＝"C/T"
rs56393802 pos＝241 等位基因＝"-/TG"
rs60186756 pos＝201 等位基因＝"-/T"
rs60288130 pos＝201 等位基因＝"-/TT"
rs61659284 pos＝226 等位基因＝"-/CTCT"
rs7138535 pos＝301 等位基因＝"A/T"
rs7487884 pos＝239 等位基因＝"C/T"
TAS2R16 rs10487745 pos＝101 等位基因＝"A/C"
rs1204014 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs1357949 pos＝497 等位基因＝"A/G"
rs1525489 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs2233988 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs2233989 pos＝201 等位基因＝"C/T"
rs2692396 pos＝301 等位基因＝"C/G"
rs28371571 pos＝94 等位基因＝"A/G"
rs28371572 pos＝114 等位基因＝"C/G"
rs28371573 pos＝126 等位基因＝"C/T"
rs28371574 pos＝133 等位基因＝"A/G"
rs28371575 pos＝140 等位基因＝"C/T"
rs28371576 pos＝136 等位基因＝"C/T"
rs28371577 pos＝140 等位基因＝"A/C"
rs28371578 pos＝138 等位基因＝"A/G"
rs28371579 pos＝139 等位基因＝"C/T"
rs28371580 pos＝139 等位基因＝"A/G"
基因 参考序号 参照序列中的位置 SNP
rs28371581 pos＝139 等位基因＝"G/T"
rs34032423 pos＝301 等位基因＝"-/CT"
rs34215184 pos＝301 等位基因＝"A/C"
rs34638781 pos＝301 等位基因＝"-/C"
rs35947098 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs58410964 pos＝101 等位基因＝"A/G"
rs59108896 pos＝101 等位基因＝"G/T"
rs59743922 pos＝101 等位基因＝"A/G"
rs60714340 pos＝101 等位基因＝"C/T"
rs6466849 pos＝201 等位基因＝"C/T"
rs702423 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs846664 pos＝301 等位基因＝"G/T"
rs846665 pos＝284 等位基因＝"C/G"
rs846666 pos＝392 等位基因＝"G/T"
rs860170 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs978739 pos＝535 等位基因＝"A/G"
TAS2R38 rs10246939 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs1726866 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs35251805 pos＝301 等位基因＝"-/G"
rs4613903 pos＝301 等位基因＝"G/T"
rs61464348 pos＝201 等位基因＝"A/C"
rs713598 pos＝301 等位基因＝"C/G"
TAS2R39 rs10608369 pos＝401 等位基因＝"-/GT"
rs34169190 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs35474877 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs4103817 pos＝451 等位基因＝"A/G"
rs4726600 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs56782833 pos＝283 等位基因＝"-/A"
rs59031091 pos＝201 等位基因＝"C/G"
rs6964922 pos＝227 等位基因＝"C/T"
TAS2R40 rs10225801 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs10260248 pos＝301 等位基因＝"A/C"
rs17164164 pos＝301 等位基因＝"C/G"
TAS2R41 rs10278721 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs13243940 pos＝501 等位基因＝"A/T"
rs13362832 pos＝201 等位基因＝"C/T"
rs13362858 pos＝301 等位基因＝"C/G"
rs1404634 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs1404635 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs1473653 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs33922222 pos＝401 等位基因＝"-/C"
rs34170633 pos＝301 等位基因＝"-/A"
rs34281448 pos＝301 等位基因＝"-/A"
rs34863914 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs5888105 pos＝401 等位基因＝"-/G"
rs5888106 pos＝401 等位基因＝"-/C"
rs59826238 pos＝101 等位基因＝"C/T"
rs60096100 pos＝201 等位基因＝"A/C"
rs6947971 pos＝5600 等位基因＝"G/T"
rs6949267 pos＝526 等位基因＝"C/G"
基因 参考序号 参照序列中的位置 SNP
TAS2R43 rs10556970 pos＝401 等位基因＝"-/AT"
rs1965231 pos＝265 等位基因＝"C/T"
rs34115566 pos＝301 等位基因＝"-/GT"
rs35720106 pos＝301 等位基因＝"C/G"
TAS2R44 rs10591850 pos＝401 等位基因＝"-/AAAT"
rs10743938 pos＝201 等位基因＝"A/T"
rs10772422 pos＝501 等位基因＝"C/T"
rs10772423 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs10845293 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs10845294 pos＝301 等位基因＝"C/G"
rs10845295 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs10845296 pos＝371 等位基因＝"A/G"
rs11522329 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs11537117 pos＝201 等位基因＝"A/T"
rs11537118 pos＝218 等位基因＝"A/G"
rs11560815 pos＝231 等位基因＝"C/T"
rs11612527 pos＝301 等位基因＝"A/T"
rs12315036 pos＝201 等位基因＝"G/T"
rs12318612 pos＝301 等位基因＝"C/G"
rs12370363 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs12819202 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs1965230 pos＝663 等位基因＝"A/G"
rs2418291 pos＝501 等位基因＝"C/T"
rs2418292 pos＝500 等位基因＝"A/G"
rs2418293 pos＝500 等位基因＝"C/T"
rs2418294 pos＝500 等位基因＝"C/T"
rs2418295 pos＝500 等位基因＝"C/G"
rs2418296 pos＝500 等位基因＝"A/G"
rs2418297 pos＝500 等位基因＝"C/T"
rs2418298 pos＝500 等位基因＝"A/C"
rs2418299 pos＝500 等位基因＝"A/T"
rs2418300 pos＝500 等位基因＝"A/C"
rs2418301 pos＝500 等位基因＝"C/T"
rs28409955 pos＝201 等位基因＝"C/T"
rs28679275 pos＝201 等位基因＝"C/T"
rs2900583 pos＝501 等位基因＝"C/T"
rs2900584 pos＝501 等位基因＝"C/T"
rs2900585 pos＝501 等位基因＝"C/T"
rs2952703 pos＝201 等位基因＝"G/T"
rs33998340 pos＝401 等位基因＝"-/AGT"
rs34066385 pos＝401 等位基因＝"-/ACAC"
rs34763234 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs35241999 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs3759246 pos＝61 等位基因＝"C/G"
rs3759247 pos＝61 等位基因＝"A/G"
rs3983336 pos＝500 等位基因＝"A/G"
rs3983337 pos＝500 等位基因＝"A/C"
rs3983338 pos＝500 等位基因＝"A/C"
rs3983339 pos＝500 等位基因＝"C/T"
rs3983340 pos＝500 等位基因＝"C/T"
基因 参考序号 参照序列中的位置 SNP
rs3983341 pos＝500 等位基因＝"A/G"
rs3983342 pos＝500 等位基因＝"G/T"
rs3983343 pos＝500 等位基因＝"C/T"
rs5024225 pos＝401 等位基因＝"A/T"
rs56079155 pos＝201 等位基因＝"-/CA"
rs56873588 pos＝201 等位基因＝"-/AATA"
rs5796420 pos＝401 等位基因＝"-/ACAC"
rs7952952 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs7953498 pos＝301 等位基因＝"C/G"
TAS2R46 rs11560816 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs2244875 pos＝500 等位基因＝"C/T"
rs2598002 pos＝301 等位基因＝"A/C"
rs2599402 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs2708378 pos＝201 等位基因＝"C/T"
rs2708379 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs2708380 pos＝301 等位基因＝"A/T"
rs2708381 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs2708382 pos＝495 等位基因＝"A/G"
rs34033169 pos＝301 等位基因＝"-/G"
rs34164014 pos＝301 等位基因＝"-/C"
rs35602687 pos＝301 等位基因＝"-/C"
rs35801645 pos＝301 等位基因＝"-/T"
rs61912070 pos＝251 等位基因＝"G/T"
rs62760561 pos＝401 等位基因＝"-/TCT"
rs63450660 pos＝401 等位基因＝"-/T"
rs7970996 pos＝201 等位基因＝"C/T"
TAS2R47 rs10645657 pos＝401 等位基因＝"-/AC"
rs1669404 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs1669405 pos＝201 等位基因＝"G/T"
rs1960613 pos＝502 等位基因＝"G/T"
rs2218819 pos＝37 等位基因＝"C/T"
rs2597924 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs2597925 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs2597926 pos＝201 等位基因＝"G/T"
rs2597927 pos＝201 等位基因＝"G/T"
rs2599396 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs2599397 pos＝301 等位基因＝"C/G"
rs2599404 pos＝301 等位基因＝"A/C"
rs2600355 pos＝301 等位基因＝"G/T"
rs2600356 pos＝301 等位基因＝"A/C"
rs2600357 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs2600358 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs2708351 pos＝201 等位基因＝"G/T"
rs2708371 pos＝201 等位基因＝"C/G"
rs2708372 pos＝201 等位基因＝"C/T"
rs2923236 pos＝201 等位基因＝"C/T"
rs2952701 pos＝201 等位基因＝"C/T"
rs2952702 pos＝201 等位基因＝"C/T"
rs34383190 pos＝401 等位基因＝"-/TC"
rs34570579 pos＝301 等位基因＝"-/C"
基因 参考序号 参照序列中的位置 SNP
rs34656404 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs34960146 pos＝301 等位基因＝"-/C"
rs35267335 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs35413568 pos＝301 等位基因＝"-/C"
rs35632581 pos＝301 等位基因＝"-/C"
rs35884825 pos＝401 等位基因＝"-/AG"
rs36109559 pos＝301 等位基因＝"-/A"
rs36123978 pos＝301 等位基因＝"-/AG"
rs3759244 pos＝201 等位基因＝"C/T"
rs3759245 pos＝201 等位基因＝"C/T"
rs3863323 pos＝501 等位基因＝"G/T"
rs4092162 pos＝91 等位基因＝"A/G"
rs4763238 pos＝201 等位基因＝"A/C"
rs5796422 pos＝401 等位基因＝"-/AG"
rs61928449 pos＝251 等位基因＝"A/C"
rs7296647 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs7313796 pos＝201 等位基因＝"A/C"
rs7980677 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs977473 pos＝209 等位基因＝"A/T"
rs977474 pos＝512 等位基因＝"A/G"
TAS2R48 rs10743937 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs10772419 pos＝301 等位基因＝"A/C"
rs10772420 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs11054169 pos＝335 等位基因＝"A/G"
rs11054170 pos＝337 等位基因＝"G/T"
rs11054171 pos＝356 等位基因＝"A/G"
rs12313469 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs12424373 pos＝301 等位基因＝"G/T"
rs12578654 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs1868768 pos＝301 等位基因＝"A/C"
rs1868769 pos＝312 等位基因＝"A/G"
rs34254748 pos＝301 等位基因＝"-/G"
rs35032794 pos＝301 等位基因＝"-/C"
rs36057973 pos＝301 等位基因＝"-/G"
rs3863330 pos＝499 等位基因＝"A/T"
rs3863333 pos＝301 等位基因＝"G/T"
rs4763235 pos＝201 等位基因＝"C/G"
rs56985810 pos＝201 等位基因＝"C/T"
rs60770813 pos＝101 等位基因＝"C/G"
rs61624520 pos＝201 等位基因＝"-/T"
rs7131800 pos＝267 等位基因＝"A/G"
rs7961372 pos＝201 等位基因＝"A/C"
rs9330646 pos＝301 等位基因＝"A/T"
rs9777804 pos＝301 等位基因＝"C/G"
rs9777906 pos＝301 等位基因＝"A/T"
TAS2R49 rs10772407 pos＝201 等位基因＝"A/C"
rs10845278 pos＝356 等位基因＝"C/T"
rs10845279 pos＝301 等位基因＝"A/C"
rs10845280 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs10845281 pos＝301 等位基因＝"C/T"
基因 参考序号 参照序列中的位置 SNP
rs11054139 pos＝501 等位基因＝"C/T"
rs11054140 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs11054141 pos＝261 等位基因＝"C/T"
rs11054142 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs11054143 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs12226919 pos＝301 等位基因＝"G/T"
rs12226920 pos＝301 等位基因＝"G/T"
rs12311429 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs12311490 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs12312963 pos＝201 等位基因＝"C/T"
rs1450839 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs1463237 pos＝348 等位基因＝"C/T"
rs34365504 pos＝301 等位基因＝"-/T"
rs34579433 pos＝301 等位基因＝"-/A"
rs34813278 pos＝301 等位基因＝"-/A"
rs34965724 pos＝301 等位基因＝"-/A"
rs35021650 pos＝301 等位基因＝"-/C"
rs35875890 pos＝301 等位基因＝"-/ATG"
rs4388985 pos＝401 等位基因＝"A/G"
rs4418898 pos＝401 等位基因＝"C/T"
rs4506739 pos＝401 等位基因＝"A/G"
rs4763604 pos＝201 等位基因＝"G/T"
rs4763605 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs58133495 pos＝501 等位基因＝"-/GAT"
rs59686635 pos＝101 等位基因＝"A/C"
rs61912291 pos＝251 等位基因＝"G/T"
rs7135018 pos＝251 等位基因＝"C/T"
rs7135941 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs7301234 pos＝301 等位基因＝"A/G"
TAS2R50 rs10772396 pos＝362 等位基因＝"C/T"
rs10772397 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs10772398 pos＝201 等位基因＝"C/T"
rs10772399 pos＝201 等位基因＝"C/T"
rs11054131 pos＝201 等位基因＝"C/G"
rs11054132 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs11054133 pos＝201 等位基因＝"C/T"
rs11421487 pos＝401 等位基因＝"-/T"
rs12426805 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs1376251 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs2167263 pos＝245 等位基因＝"C/G"
rs35533340 pos＝301 等位基因＝"-/C/G"
rs35633248 pos＝301 等位基因＝"-/T"
rs35638884 pos＝301 等位基因＝"-/A"
rs35852119 pos＝301 等位基因＝"-/T"
rs35970171 pos＝301 等位基因＝"-/T"
rs55748583 pos＝201 等位基因＝"C/T"
rs58805611 pos＝101 等位基因＝"C/T"
TAS2R60 rs10241042 pos＝316 等位基因＝"C/G"
rs10241523 pos＝316 等位基因＝"A/C"
rs11978402 pos＝337 等位基因＝"A/G"
基因 参考序号 参照序列中的位置 SNP
rs12534427 pos＝301 等位基因＝"C/G"
rs12671578 pos＝201 等位基因＝"A/G"
rs34328217 pos＝301 等位基因＝"-/C"
rs34465195 pos＝301 等位基因＝"A/G"
rs34910453 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs35195910 pos＝301 等位基因＝"-/TCT"
rs36004042 pos＝301 等位基因＝"-/G"
rs4541818 pos＝401 等位基因＝"C/G"
rs4595035 pos＝301 等位基因＝"C/T"
rs58270521 pos＝251 等位基因＝"C/T"
附录表2人苦味受体编码序列的等位变异
附录表3哺乳动物G蛋白，其家族和描述

Claims (22)

1.一种鉴定抑制由KCl引起的苦味的化合物的方法，其包括：
a)提供第一和第二细胞，
其中每种细胞表达独立选自以下的一种或多种苦味受体：
TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60，其中每种细胞表达相同的一种或多种苦味受体；
b)使所述第一细胞与促味剂接触，
其中所述促味剂活化所述一种或多种苦味受体；
c)使所述第二细胞与测试化合物和所述促味剂接触；
d)测定所述第一和第二细胞的苦味受体活化；和
e)比较所述第一细胞的苦味受体活化与所述第二细胞的苦味受体活化，
其中如果所述第二细胞的苦味受体活性低于所述第一细胞的苦味受体活性，则所述测试化合物是由KCl引起的苦味的抑制剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述苦味受体与G蛋白复合。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述G蛋白是Gq蛋白、α转导素或α味蛋白。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述Gq蛋白是Gα15蛋白。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中苦味受体活性是通过测量胞内钙浓度来测定的。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述胞内钙浓度是使用钙敏感性荧光染料来测定的。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述钙敏感性荧光染料选自Indo-1、Fura-2、Fluo-3、Fluo-4、Rhod-2、Rhod-5N、钙黄绿素、钙黄绿素蓝、cytoCalcein紫罗兰、Quin-2、Quest Fluo-8HTM、Quest Fluo8LTM、Quest Fluo8TM、Quest Rhod-4TM、腔肠素和钙-3。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述第一和第二细胞存在于体外细胞系中。
9.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述第一和第二细胞存在于体外细胞系的小组中。
10.一种鉴定选择性作用于受体以抑制由KCl引起的苦味的化合物的方法，所述方法包括：
a)提供第一和第二小组的细胞系，
其中每个小组包括表达选自：TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的苦味受体的细胞系；
其中每种受体在至少一种细胞系中表达，并且
其中所述第一和第二小组包括相同的细胞系；
b)使所述第一小组中的每种细胞系与促味剂接触，
其中所述促味剂活化选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少两者；
c)使所述第二小组中的每种细胞系与测试化合物和所述促味剂接触；
d)测定每种细胞系的苦味受体活化；
其中，如果与所述第一小组相比，在所述第二小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少两者的苦味受体活性较低，则所述测试化合物是由KCl引起的苦味的选择性抑制剂。
11.根据权利要求10所述的方法，其中与所述第一小组相比，在所述第二小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少三者的苦味受体活性较低。
12.根据权利要求10所述的方法，其中与所述第一小组相比，在所述第二小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少四者的苦味受体活性较低。
13.根据权利要求10所述的方法，其中与所述第一小组相比，在所述第二小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的至少五者的苦味受体活性较低。
14.根据权利要求10所述的方法，其中与所述第一小组相比，在所述第二小组中选自TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60的每个成员的苦味受体活性较低。
15.根据权利要求10-14中任一项所述的方法，其中所述第一和第二小组包括TAS2R1、TAS2R3、TAS2R4、TAS2R5、TAS2R7、TAS2R8、TAS2R9、TAS2R10、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R16、TAS2R38、TAS2R39、TAS2R40、TAS2R41、TAS2R43、TAS2R44、TAS2R45、TAS2R46、TAS2R47、TAS2R48、TAS2R49、TAS2R50、TAS2R55和TAS2R60苦味受体。
16.根据权利要求10-15中任一项所述的方法，其中所述苦味受体与G蛋白复合。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述G蛋白是Gq蛋白、α转导素或α味蛋白。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述Gq蛋白是Gα15蛋白。
19.根据权利要求10-18中任一项所述的方法，其中苦味受体活性是通过测量胞内钙浓度来测定的。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述胞内钙的浓度是使用钙敏感性荧光染料来测定的。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述钙敏感性荧光染料选自Indo-1、Fura-2、Fluo-3、Fluo-4、Rhod-2、Rhod-5N、钙黄绿素、钙黄绿素蓝、cytoCalcein紫罗兰、Quin-2、Quest Fluo-8HTM、Quest Fluo8LTM、Quest Fluo8TM、Quest Rhod-4TM、腔肠素和钙-3。
22.一种鉴定增强由KCl引起的苦味的化合物的方法，所述方法包括：
a)提供第一和第二细胞，
其中每种细胞表达独立选自以下的一种或多种苦味受体：
TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60，其中每种细胞表达相同的一种或多种苦味受体；
b)使所述第一细胞与促味剂接触，
其中所述促味剂活化TAS2R4、TAS2R9、TAS2R13、TAS2R14、TAS2R44和TAS2R60苦味受体的一者或多者；
c)使所述第二细胞与测试化合物和所述促味剂接触；
d)测定所述第一和第二细胞的苦味受体活化；和
e)比较所述第一细胞的苦味受体活化与所述第二细胞的苦味受体活化，
其中如果所述第二细胞的苦味受体活性高于所述第一细胞的苦味受体活性，则所述测试化合物是由KCl引起的苦味的促进剂。
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