CN103990114A - 一种艾塞那肽缓释微球组合物 - Google Patents

Abstract

本发明的目的是提供一种艾塞那肽缓释微球组合物，由艾塞那肽或其盐、聚合物共混物和蔗糖组成，其中艾塞那肽或其盐为10~20%，聚合物共混物为76~89%，蔗糖为1~4%。本发明药物组合物以微球形式存在，具有药物长期释放的性质，可在超过一个月的时间里释放艾塞那肽。本发明的特征在于通过在本发明的药物组合物中使用2种不同PLG的适宜组合，可以显著减少血浆中艾塞那肽浓度的波动，且无明显的延迟释放期。本发明的另一个特征是在载药量高的情况下，药物突释量很低。本发明所述艾塞那肽微球组合物中载药量不低于10.0%，其突释量不超过1.0%。

Description

一种艾塞那肽缓释微球组合物

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及艾塞那肽缓释微球组合物，可在制备降糖药或控制体重的减肥药中应用。 

背景技术

据国际糖尿病联盟统计，2013年，全球糖尿病在20-79岁成人患病率为8.3%，患者人数已达3.82亿，中国糖尿病的患者人数为9840万，居全球首位，其中90%以上为II型糖尿病患者。 2013年，全球糖尿病医疗花费高达5480亿美元，占全球医疗支出的11%。开发疗效显著，顺应性高的治疗糖尿病药物具有极大的社会效益和经济价值。

胰高血糖素样肽-1（glucagon-like peptide-1，GLP-1）是肠促胰岛素(incretin)的一族，由肠道L细胞分泌，是一种在餐后分泌的激素、有助于控制血糖，主要代谢反应是，随餐后血糖水平升高而释放并刺激胰岛素分泌、抑制胰高血糖素释放和减缓营养物被吸收进入血液的速率。GLP-1具有一系列优势，如：刺激胰岛素分泌、抑制高血糖素分泌，防止低血糖； 刺激胰岛β细胞增生、阻止胰岛β细胞凋亡； 延迟胃排空、产生饱胀感，因此可以减轻体重；保护中枢神经，增强学习和记忆功能；调脂、降压、改善内皮细胞功能作用，多重保护心血管系统等（Nature Reviews Endocrinology, 2012, 8:728-42）。

天然的GLP-1在体内迅速被二肽基肽酶（Dipeptidyl peptidase ，DPP IV）降解而失活，半衰期仅数分钟，因而无法应用。

艾塞那肽（Exenatide）是一种GLP-1的类似物，是由39个氨基酸组成的人工合成多肽。其氨基酸序列为：

H-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-

1              5                10                 15

Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-

16            20                25                 30

Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH₂

31            35           39

与GLP-1相比，艾塞那肽有近50%氨基酸序列发生改变，使得其可避免DPP IV酶的降解，体内半衰期达到约2.4h。目前已上市艾塞那肽注射液，商品名为Byetta，每天早晚餐前各注射一次。经艾塞那肽治疗，除血糖可得到有效控制外，患者体重平均可降低2~3kg。

艾塞那肽注射液每日需注射两次，长期的、每日两次地给药，患者使用并不方便。因此，一周给药一次的长效艾塞那肽制剂（艾塞那肽LAR）具有更大的优势。

艾塞那肽-LAR是一种包含可生物降解高分子材料乙交酯丙交酯共聚物的微球制剂，每周仅需给药一次。专利CN101065116公开了艾塞那肽一周给药一次微球的处方组成和制备工艺。经皮下注射一次后，微球中药物释放分三个阶段：首先是微球表面结合的艾塞那肽首先释放，形成一个突释期；随后微球经历一个3~4周的药物不释放的时滞期，在此期间，微球中乙交酯丙交酯共聚物逐渐降解，微球溶胀和溶蚀；最后在2~3周内微球中艾塞那肽迅速释放，达到稳态血药浓度。本制剂的主要缺点是给药后有一个较长的时滞期，在此期间，患者得不到起效剂量的药物治疗；本制剂的另一个缺点是每周给药一次，患者使用仍有不便。

专利CN103338752公开一种通过两种乙交酯丙交酯共聚物(Poly(lactide-co- glycolide), PLG)制备利培酮微球的工艺。但众所周知，在微球制剂中，疏水性小分子与本发明中亲水性多肽药物显著不同。专利CN103251929公开了一种通过包含奥曲肽和两种或更多种乙交酯丙交酯共聚物的缓释制剂，所述奥曲肽缓释制剂可释放长达3个月以上，通过使用两种或更多种不同PLG的适宜组合可以显著减少血浆水平的波动。通过两种或更多种不同PLG组合，制备艾塞那肽微球的方式未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种艾塞那肽缓释微球组合物，由艾塞那肽或其可药用的盐（活性组分）、聚合物共混物和蔗糖组成，所述药物组合物以微球的形式存在，所述聚合物共混物由第一乙交酯丙交酯共聚物和第二乙交酯丙交酯共聚物组成；其中活性组分在所述组合物中的重量含量为10~20%，优选为10~15%，更优选为10~13%；聚合物共混物在组合物中的重量含量为76~89%，优选为83~88%，更优选为85~88%；蔗糖在组合物中的重量含量为1~4%，优选为2~3%，更优选为2%。

本发明所述的药物组合物，其活性成分可以是艾塞那肽或艾塞那肽的可药用的盐，例如与无机酸、或有机酸形成的盐，所述无机酸如盐酸，所述有机酸如醋酸、乳酸、三氟乙酸、枸橼酸、富马酸、丙二酸、马来酸、酒石酸、门冬氨酸、苯甲酸、琥珀酸或扑酸(双羟萘酸)。优选艾塞那肽醋酸盐。

乙交酯丙交酯共聚物（Poly(lactide-co-glycolide)，PLG），也称聚乙交酯丙交酯或聚乳酸羟基乙酸，由乙交酯、丙交酯的环状二聚物在亲核引发剂催化作用下开环聚合而成，其末端基团是否经过酯化而分为羧基末端、酯基末端。本发明所述乙交酯丙交酯共聚物在本发明中简称为PLG。本发明选择的PLG末端均为羧基基团。

本发明所述第一乙交酯丙交酯共聚物为一种高特性粘度的PLG，所述第二乙交酯丙交酯共聚物为一种低特性粘度的PLG。高特性粘度PLG的特性粘度为0.35~0.80dl/g，优选0.35~0.60dl/g，更优选0.40~0.50dl/g；低特性粘度PLG的特性粘度为0.05~0.25dl/g，优选为0.05~0.20dl/g，更优选0.05~0.15dl/g。

本发明中高特性粘度PLG与低特性粘度PLG的重量比为(50~95): (5~50)，优选为(70~80): (20~30)，更优选75:25。高特性粘度的PLG中的丙交酯与乙交酯的摩尔比在50:50~90:10的范围内，优选为50:50~75:25，更优选为50:50~65:35，最优选为50:50；低特性粘度的PLG中的丙交酯与乙交酯的摩尔比在50:50~75:25的范围内。

高分子的特性粘度（Inherent Viscosity，IV）与其分子量的大小直接相关，特性粘度越高，其分子量越大，由于分子量检测结果受实验条件影响较大，可重复性相对较低，而特性粘度结果更准确，在本发明中以特性粘度的不同来区分高分子材料的不同。本发明的PLG的特性粘度测定是将PLG高分子以0.5%(w/v)的浓度溶于氯仿中，于30°C下，按英国药典2013年版Appendix V H. 粘度测定方法II所述方法(毛细管法)测定。

为方便描述，在下文中，不同型号的PLG，以PLG中丙交酯与乙交酯的摩尔比以及PLG的特性粘度表示。例如 “PLG 7525 1A”表示丙交酯与乙交酯的摩尔比为75:25、特性粘度为约0.1dL/g且末端基为羧基（Acid, A）的乙交酯丙交酯共聚物。

本发明一个优选药物组合物中，活性成分艾塞那肽的优选重量含量为12%，蔗糖为2%，两种PLG共混物的总重量含量为86%，两种PLG分别是高特性粘度PLG 5050 4A和低特性粘度 PLG 5050 1A，PLG 5050 4A与PLG 5050 1A的特性粘度分别为0.35~0.45dL/g和0.05~0.15dL/g，两种PLG的重量比为75:25，两种PLG中丙交酯相对于乙交酯的摩尔比分别为50:50和50:50。

本发明另一个优选药物组合物中，活性成分艾塞那肽的优选重量含量为12%，蔗糖为2%，两种PLG共混物的总重量含量为86%，两种PLG分别是高特性粘度PLG 5050 4A和低特性粘度 PLG 7525 1A，PLG 5050 4A与PLG 7525 1A的特性粘度分别为0.35~0.45dL/g和0.05~0.15dL/g，两种PLG的重量比为75:25，两种PLG中丙交酯相对于乙交酯的摩尔比分别为50:50和75:25。

本发明所述药物组合物以微球的形式存在。所述微球是指将活性成分和蔗糖均匀地溶解和(或)分散于聚合物共混物中所构成的小球形或类球形颗粒。本发明的微球体积平均粒径可以为几纳米至几毫米，例如约10纳米至约2毫米，例如约0.1微米至约500微米。对于药物微粒而言，直径最多为约200微米，例如10至200微米，优选10至150微米，更优选10至90微米。

本发明所述“载药量”是指艾塞那肽微球组合物中艾塞那肽的量，按照以下公式计算：载药量=[微球中艾塞那肽的质量/ (微球的质量)]×100%。

本发明所述“突释”是指微球在1小时内释放的活性成分的量相对于微球中活性成分的总量所占的比例。

本发明所述的微球，可以通过本领域已知的方法来制备，例如复凝聚法（或称相分离法）、喷雾干燥法、油包水（W/O）或水包油包水（W/O/W）或水包油包固体（S/O/W）乳化/混悬法且然后进行溶剂萃取或溶剂蒸发。复凝聚法是优选的方法，该方法包括以下步骤：

（1）将活性成分艾塞那肽或艾塞那肽可药用盐和蔗糖，溶于一定量的水中，形成水相；

（2）将高特性粘度PLG与低特性粘度PLG的按重量比为(50~95): (5~50)形成的PLG聚合物共混物，溶于一定量的有机溶剂如二氯甲烷中，形成油相；

（3）将水相与油相混合形成混合物，并通过一定的处理方式形成油包水乳剂，所述处理方式选自超声乳化法、高剪切乳化法或高压均质法等；

（4）将一定量的凝聚剂加入到该油包水乳剂形成初期微粒，所述凝聚剂选自硅油、植物油或矿物油； 

（5）将该初期微粒转移到淬灭溶剂中以使该微粒硬化，所述淬灭溶剂选自正庚烷、或正庚烷与乙醇的混合物； 

（6）收集硬化的微粒；

（7）干燥硬化的微粒即为艾塞那肽缓释微球。

本发明所述的以微球形式存在的药物组合物，可以采用溶媒混悬后给药，所述的溶媒是含有粘度增强剂、润湿剂、渗透压调节剂的水性溶媒，所述粘度增强剂优选羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，所述润湿剂选自非离子表面活性剂如泊洛沙姆、聚山梨酯（吐温，Tween）或失水山梨醇脂肪酸酯（司盘，Span），渗透压调节剂选自山梨醇、氯化钠、甘露醇等。所述溶媒可以与微球混合后包装，或溶媒与微球分开独立包装而在给药前将溶媒与微球混合。

本发明所述以微球形式存在的药物组合物，通常制备成注射用的混悬剂，或以无菌粉末的形式存在。

本发明所公开的以微球形式存在的药物组合物，给药一次后，可在约一个月内在体内逐渐释放药物，每月给药一次，将显著降低患者注射频率，改善患者顺应性。但艾塞那肽微球制剂临床使用的给药方式为皮下注射，给药量过大会造成患者注射部位肿块，因此，提高微球中药物载药量，可使在给予相同剂量时，注射的微球总量更少，进一步可减轻患者的痛苦。专利CN101065116 公开了一种制备艾塞那肽微球的方法，制备微球的载药量不高于5.0%，文献在此引入作为参考。文献（Diabetes Technology & Therapeutics, 2011, 13:1145-54）显示，当艾塞那肽和稳定剂总量超过8%时，微球中药物突释量大于2.0%，且随艾塞那肽和稳定剂总量的增加而显著变大。

为克服以上缺点，本发明提供了一种一月给药一次的艾塞那肽微球制剂，通过本制剂给药后，微球可持续在超过一个月的时间里释放药物。本发明所述微球制剂，在给药后，无明显的延迟释放期。本发明所述微球制剂，药物载药量不低于10.0%，且1小时药物突释量不超过1.0%。

本发明公开以微球形式存在的药物组合物，具有药物长期释放的性质，可在超过一个月的时间里释放艾塞那肽。本发明的特征在于通过在本发明的药物组合物中使用2种不同PLG的适宜组合，可以显著减少血浆中艾塞那肽浓度的波动，且无明显的延迟释放期。本发明的另一个特征是在载药量高的情况下，药物突释量很低。进一步是指，本发明所述艾塞那肽微球组合物中载药量不低于10.0%，其突释量不超过1.0%。

说明书附图

图1是实施例3所制备微球制剂扫描电镜下的微观形态。

图2是实施例3所制备微球制剂粒径分布曲线。

图3是实施例1和实施例2所制备微球制剂在大鼠体内的药-时间曲线。

图4是实施例3-5所制备微球制剂在大鼠体内的药-时间曲线。

图5是实施例6-7所制备微球制剂在大鼠体内的药-时间曲线。

具体实施方式

本发明现在将通过下列实施例进一步具体阐述。以下实施例是说明性的，而非用于限制本文所述的本发明的范围。这些实施例仅意欲提示实施本发明的方法。

实施例1  单一PLG5%载药量艾塞那肽微球制备

按照折干折纯后0.2g艾塞那肽称取醋酸艾塞那肽放入5mlEP管中，另称取0.08g蔗糖，放入EP管中，加入注射用水2.4g，涡旋溶解后冰浴保存备用。称取3.72g PLG 5050 4A（Evonik Industries AG，特性粘度0.41dL/g，LA:GA 50:50，重均分子量约55000 Da），放入50ml玻璃小瓶中，另称取二氯甲烷58.3g，加入玻璃小瓶溶解，冰浴保存备用。采用功率为1600W的超声波细胞破碎仪，40%振幅超声下，用注射器将水相加入二氯甲烷溶液中，超声1min，然后停止1min，再超声2min，形成初乳。

将一个250ml烧杯置于3℃恒温水浴中，将初乳转移至烧杯中，用机械搅拌以800rpm转速搅拌。在4min内，匀速加入87.42g 控温3℃的硅油，硅油全加入后，继续搅拌1min，形成复凝聚液。

称取840g正庚烷到2L烧杯中，然后再向正庚烷中加入93g无水乙醇，混合液置入循环水浴中控温至3℃。1min内将凝聚相加入到庚烷和乙醇混合溶液中，搅拌60min后，停止搅拌，并沉淀5min。倾倒出上层液体。另称取约500g正庚烷，加入到剩余沉淀物中，搅拌60min，洗涤微球，然后将混悬液经筛网过滤。将微球收集，氮气吹干。

实施例2  单一PLG10%载药量艾塞那肽微球制备

按照折干折纯后0.4g艾塞那肽称取醋酸艾塞那肽放入5mlEP管中，另称取0.16g蔗糖，放入EP管中，加入注射用水2.4g，涡旋溶解后冰浴保存备用。称取3.44g PLG 5050 4A（Evonik Industries AG，特性粘度0.41dL/g，LA:GA 50:50，重均分子量约55000 Da），放入50ml玻璃小瓶中，另称取二氯甲烷58.3g，加入玻璃小瓶溶解，冰浴保存备用。采用功率为1600W的超声波细胞破碎仪，40%振幅超声下，用注射器将水相加入二氯甲烷溶液中，超声1min，然后停止1min，再超声2min，形成初乳。

将一个250ml烧杯置于3℃恒温水浴中，将初乳转移至烧杯中，用机械搅拌以800rpm转速搅拌。在4min内，匀速加入87.42g 控温3℃的硅油，硅油全加入后，继续搅拌1min，形成复凝聚液。

称取840g正庚烷到2L烧杯中，然后再向正庚烷中加入93g无水乙醇，混合液置入循环水浴中控温至3℃。1min内将凝聚相加入到庚烷和乙醇混合溶液中，搅拌60min后，停止搅拌，并沉淀5min。倾倒出上层液体。另称取约500g正庚烷，加入到剩余沉淀物中，搅拌60min，洗涤微球，然后将混悬液经筛网过滤。将微球收集，氮气吹干。

实施例3  两种PLG10%载药量艾塞那肽微球制备

按照折干折纯后0.42g艾塞那肽称取醋酸艾塞那肽放入5mlEP管中，另称取0.16g蔗糖，放入EP管中，加入注射用水2.4g，涡旋溶解后冰浴保存备用。称取0.855g PLG 5050 1A（Evonik Industries AG，特性粘度0.11dL/g，LA:GA 50:50，重均分子量约5500 Da），2.565g PLG 5050 4A（Evonik Industries AG，特性粘度0.41dL/g，LA:GA 50:50，重均分子量约55000 Da），放入50ml玻璃小瓶中，另称取二氯甲烷58.3g，加入玻璃小瓶溶解，冰浴保存备用。采用功率为1600W的超声波细胞破碎仪，40%振幅超声下，用注射器将水相加入二氯甲烷溶液中，超声1min，然后停止1min，再超声2min，形成初乳。

将一个250ml烧杯置于3℃恒温水浴中，将初乳转移至烧杯中，用机械搅拌以800rpm转速搅拌。在4min内，匀速加入87.42g 控温3℃的硅油，硅油全加入后，继续搅拌1min，形成复凝聚液。

称取840g正庚烷到2L烧杯中，然后再向正庚烷中加入93g无水乙醇，混合液置入循环水浴中控温至3℃。1min内将凝聚相加入到庚烷和乙醇混合溶液中，搅拌60min后，停止搅拌，并沉淀5min。倾倒出上层液体。另称取约500g正庚烷，加入到剩余沉淀物中，搅拌60min，洗涤微球，然后将混悬液经筛网过滤。将微球收集，氮气吹干。

实施例4  两种PLG12%载药量艾塞那肽微球制备

按照折干折纯后0.48g艾塞那肽称取醋酸艾塞那肽放入5mlEP管中，另称取0.2g蔗糖，放入EP管中，加入注射用水2.4g，涡旋溶解后冰浴保存备用。称取0.83g PLG 5050 1A（Evonik Industries AG，特性粘度0.11dL/g，LA:GA 50:50，重均分子量约5500 Da），2.49g PLG 5050 4A（Evonik Industries AG，特性粘度0.41dL/g，LA:GA 50:50，重均分子量约55000 Da），放入50ml玻璃小瓶中，另称取二氯甲烷58.3g，加入玻璃小瓶溶解，冰浴保存备用。采用功率为1600W的超声波细胞破碎仪，40%振幅超声下，用注射器将水相加入二氯甲烷溶液中，超声1min，然后停止1min，再超声2min，形成初乳。

将一个250ml烧杯置于3℃恒温水浴中，将初乳转移至烧杯中，用机械搅拌以800rpm转速搅拌。在4min内，匀速加入87.42g 控温3℃的硅油，硅油全加入后，继续搅拌1min，形成复凝聚液。

称取840g正庚烷到2L烧杯中，然后再向正庚烷中加入93g无水乙醇，混合液置入循环水浴中控温至3℃。1min内将凝聚相加入到庚烷和乙醇混合溶液中，搅拌60min后，停止搅拌，并沉淀5min。倾倒出上层液体。另称取约500g正庚烷，加入到剩余沉淀物中，搅拌60min，洗涤微球，然后将混悬液经筛网过滤。将微球收集，氮气吹干。

实施例5  两种PLG10%载药量艾塞那肽微球制备

按照折干折纯后0.4g艾塞那肽称取醋酸艾塞那肽放入5mlEP管中，另称取0.16g蔗糖，放入EP管中，加入注射用水2.4g，涡旋溶解后冰浴保存备用。称取1.72g PLG 5050 1A（Evonik Industries AG，特性粘度0.11dL/g，LA:GA 50:50，重均分子量约5500 Da），1.72g PLG 5050 4A（Evonik Industries AG，特性粘度0.41dL/g，LA:GA 50:50，重均分子量约55000 Da），放入50ml玻璃小瓶中，另称取二氯甲烷58.3g，加入玻璃小瓶溶解，冰浴保存备用。采用功率为1600W的超声波细胞破碎仪，40%振幅超声下，用注射器将水相加入二氯甲烷溶液中，超声1min，然后停止1min，再超声2min，形成初乳。

将一个250ml烧杯置于3℃恒温水浴中，将初乳转移至烧杯中，用机械搅拌以800rpm转速搅拌。在4min内，匀速加入87.42g 控温3℃的硅油，硅油全加入后，继续搅拌1min，形成复凝聚液。

称取840g正庚烷到2L烧杯中，然后再向正庚烷中加入93g无水乙醇，混合液置入循环水浴中控温至3℃。1min内将凝聚相加入到庚烷和乙醇混合溶液中，搅拌60min后，停止搅拌，并沉淀5min。倾倒出上层液体。另称取约500g正庚烷，加入到剩余沉淀物中，搅拌60min，洗涤微球，然后将混悬液经筛网过滤。将微球收集，氮气吹干。

实施例6  两种PLG10%载药量艾塞那肽微球制备

按照折干折纯后0.4g艾塞那肽称取醋酸艾塞那肽放入5mlEP管中，另称取0.16g蔗糖，放入EP管中，加入注射用水2.4g，涡旋溶解后冰浴保存备用。称取0.855g PLG 7525 1A（Evonik Industries AG，特性粘度0.10dL/g，LA:GA 75:25，重均分子量约5800 Da），2.565g PLG 5050 4A（Evonik Industries AG，特性粘度0.41dL/g，LA:GA 50:50，重均分子量约55000 Da），放入50ml玻璃小瓶中，另称取二氯甲烷58.3g，加入玻璃小瓶溶解，冰浴保存备用。采用功率为1600W的超声波细胞破碎仪，40%振幅超声下，用注射器将水相加入二氯甲烷溶液中，超声1min，然后停止1min，再超声2min，形成初乳。

将一个250ml烧杯置于3℃恒温水浴中，将初乳转移至烧杯中，用机械搅拌以800rpm转速搅拌。在4min内，匀速加入87.42g 控温3℃的硅油，硅油全加入后，继续搅拌1min，形成复凝聚液。

称取840g正庚烷到2L烧杯中，然后再向正庚烷中加入93g无水乙醇，混合液置入循环水浴中控温至3℃。1min内将凝聚相加入到庚烷和乙醇混合溶液中，搅拌60min后，停止搅拌，并沉淀5min。倾倒出上层液体。另称取约500g正庚烷，加入到剩余沉淀物中，搅拌60min，洗涤微球，然后将混悬液经筛网过滤。将微球收集，氮气吹干。

实施例7  两种PLG12%载药量艾塞那肽微球制备

按照折干折纯后0.48g艾塞那肽称取醋酸艾塞那肽放入5mlEP管中，另称取0.2g蔗糖，放入EP管中，加入注射用水2.4g，涡旋溶解后冰浴保存备用。称取0.83g PLG7525 1A（Evonik Industries AG，特性粘度0.10dL/g，LA:GA 50:50，重均分子量约5800 Da），2.49g PLG 5050 4A（Evonik Industries AG，特性粘度0.41dL/g，LA:GA 50:50，重均分子量约55000 Da），放入50ml玻璃小瓶中，另称取二氯甲烷58.3g，加入玻璃小瓶溶解，冰浴保存备用。采用功率为1600W的超声波细胞破碎仪，40%振幅超声下，用注射器将水相加入二氯甲烷溶液中，超声1min，然后停止1min，再超声2min，形成初乳。

将一个250ml烧杯置于3℃恒温水浴中，将初乳转移至烧杯中，用机械搅拌以800rpm转速搅拌。在4min内，匀速加入87.42g 控温3℃的硅油，硅油全加入后，继续搅拌1min，形成复凝聚液。

称取840g正庚烷到2L烧杯中，然后再向正庚烷中加入93g无水乙醇，混合液置入循环水浴中控温至3℃。1min内将凝聚相加入到庚烷和乙醇混合溶液中，搅拌60min后，停止搅拌，并沉淀5min。倾倒出上层液体。另称取约500g正庚烷，加入到剩余沉淀物中，搅拌60min，洗涤微球，然后将混悬液经筛网过滤。将微球收集，氮气吹干。

实施例8   两种PLG10%载药量艾塞那肽微球制备（复乳法）

按照折干折纯后0.4g艾塞那肽称取醋酸艾塞那肽放入5mlEP管中，另称取0.16g蔗糖，放入EP管中，加入注射用水1.2g，涡旋溶解后，作为内水相，冰浴保存备用。：称取0.855g PLG 5050 1A（Evonik Industries AG，特性粘度0.11dL/g，LA:GA 50:50，重均分子量约5500 Da），2.565g PLG 5050 4A（Evonik Industries AG，特性粘度0.41dL/g，LA:GA 50:50，重均分子量约55000 Da），放入50ml玻璃小瓶中，另称取二氯甲烷34.4g，加入玻璃小瓶溶解，作为油相，冰浴保存备用。取17.5g PVA（聚乙烯醇，醇解度88%，分子量80000Da , Sigma Aldrich）于5000ml烧杯，加纯化水3500g，60℃加热搅拌溶解，作为外水相，放入4℃冰箱内待用。

采用功率为1600W的超声波细胞破碎仪，40%振幅超声下，用注射器将水相加入二氯甲烷溶液中，超声1min，然后停止1min，再超声2min，形成初乳，初乳放入4℃冰箱内预冷。

将低速均质搅拌器置于外水相溶液，开启均质搅拌器转速为1300rpm。采用蠕动泵（materflex L/S）和硅胶管（L/S15号，内径4.8mm）以60ml/min流速将初乳乳液输送入外水相PVA水溶液，硅胶管在内水相中的开口应临近均质搅拌器，保证初乳乳液进入外水相后可以立即被吸入均质搅拌器。初乳完全进入后持续搅拌5min。关闭低速均质搅拌器，取出。更换悬臂式搅拌器（IKA Euro-Star pcvs25）和四叶搅拌桨，转速500rpm，再搅拌1小时。

将外水相及含有的微球转移至500ml离心杯，确认平衡后采用离心机离心，离心机转速3000rpm，时间为10min。离心后弃去上清液，将微球沉淀收集，用300ml水冲洗微球，并重复离心步骤，去除水，重复上述水冲洗并离心回收微球步骤3次，去除微球表面参与的PVA。冷冻干燥取出微球水分获得干燥的微球。

试验例1  粒径检测和形态观察

采用扫描电镜观察微球表面形态。将适量微球粉末粘于导电胶，真空镀金，扫描电镜中观察。

将适量微球混悬于0.5% CMC-N a水溶液(含0.01% Tween 80)中，采用Malvern 2000型激光粒度分析仪，小量样品池，搅拌转速1800rpm，测定微球的粒径分布。微球粒径以中值粒径D( 0.5) 表示。

试验例2  载药量检测

取微球适量，用2.5ml水/乙腈30/70溶液溶解，将内容物全部转移至10ml量瓶中，再加入30mMpH 4.5醋酸-醋酸钠缓冲液，混匀，离心，取上清液，用下列条件通过HPLC 进行分析柱：TSK-GEL，7.8mm×30cm，5μm；柱温：环境温度；自动进样器温度：6℃；流速：0.8ml/min；检测波长：280nm；进样体积：10μl；流动相：35％乙腈/65％水，含0.1％TFA (v/v)；运行时间：20min。将于30mM pH 4.5醋酸-醋酸钠缓冲液中制备的0.2mg/ml艾塞那肽溶液为标准品。

试验例3  突释检测

通过测量在释放缓冲液(10mM HEPES，100mM NaCl，pH 7.4)中1小时后艾塞那肽浓度，来测定艾塞那肽的1小时突释。室温下将150±5mg微球置于5.0ml释放缓冲液中，涡流振荡约30秒以悬浮该溶液，然后置于37℃气浴培养箱中1小时。1小时后，取出样品，上下颠倒数次进行混合，然后以3500rpm离心10min。取出上清液，立即用下列条件通过HPLC 进行分析柱：TSK-GEL，7.8mm×30cm，5μm；柱温：环境温度；自动进样器温度：6℃；流速：0.8ml/min；检测波长：280nm；进样体积：10μl；流动相：35％乙腈/65％ 水，含0.1％TFA (v/v)；运行时间：20min。将于30mM pH 4.5醋酸-醋酸钠缓冲液中制备的0.2mg/ml艾塞那肽溶液为标准品。结果参见表1。

                                                

试验例4   SD大鼠体内药代试验

将上述实施例中微球，采用溶媒混悬后给药，该溶媒为含1.0%（w/v）羧甲基纤维素钠、0.1%（w/v）吐温20、0.9%（w/v）氯化钠的注射用水溶液。

每组选择成年Sprague-Dawley (SD)大鼠6只，在给药前一天记录体重。根据实施例中载药量不同而调整注射的微球量，使大鼠中艾塞那肽注射总量达到2.4mg/kg。

分别于给药后1小时、3小时、1、2、3、4、7、10、14、17、21、24、28、31、35天采血，血清样品采用经验证过的ELISA法检测，定量限20.0pg/mL。

本发明所述制剂体内药物释放曲线均匀，无较大的血药浓度波动。可根据临床用药需要，调整给药剂量，达到治疗所需的血药浓度，并达到每月给药一次的用药频率。

尽管已通过其优选实施方案对本发明进行了具体展示和阐述，但本领域技术人员会理解，在不偏离所附权利要求书所包括的本发明范围的情况下，可对形式和细节作出各种改变。

<110>浙江圣兆医药科技有限公司

<120>一种艾塞那肽缓释微球组合物

<160>1

 

<210> 1

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 

<440>

1H-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-

Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-

Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH2

Claims (7)

1.一种艾塞那肽缓释微球组合物，其特征在于，由艾塞那肽或其可药用的盐、聚合物共混物和蔗糖组成，其中艾塞那肽或其盐的重量含量为10-20%，聚合物共混物的重量含量为76-89%，蔗糖的重量含量为1-4%。

2.根据权利要求1所述的一种艾塞那肽缓释微球组合物，其特征在于，所述艾塞那肽的可药用的盐，其成盐的酸选用无机酸、或有机酸，无机酸为盐酸，有机酸选用醋酸、乳酸、三氟乙酸、枸橼酸、富马酸、丙二酸、马来酸、酒石酸、门冬氨酸、苯甲酸、琥珀酸或扑酸。

3.根据权利要求1所述的一种艾塞那肽缓释微球组合物，其特征在于，所述聚合物共混物由第一乙交酯丙交酯共聚物和第二乙交酯丙交酯共聚物组成，末端均为羧基基团，第一乙交酯丙交酯共聚物为高特性粘度的乙交酯丙交酯共聚物，其特性粘度为0.35-0.80dl/g，第二乙交酯丙交酯共聚物为低特性粘度的乙交酯丙交酯共聚物， 其特性粘度为0.05-0.25dl/g。

4.根据权利要求3所述的一种艾塞那肽缓释微球组合物，其特征在于，第一乙交酯丙交酯共聚物和第二乙交酯丙交酯共聚物的重量比为50~95: 5~50。

5.根据权利要求3或4所述的一种艾塞那肽缓释微球组合物，其特征在于，第一乙交酯丙交酯共聚物中的丙交酯与乙交酯的摩尔比为50:50~90:10，第二乙交酯丙交酯共聚物中的丙交酯与乙交酯的摩尔比为50:50~75:25。

6.根据权利要求1所述的一种艾塞那肽缓释微球组合物在制备治疗糖尿病或降低体重的药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的一种艾塞那肽缓释微球组合物的应用，其特征在于，所述药物组合物以微球的形式存在，药物制剂形式为混悬剂，或粉末制剂。