CN103983714B - 一种测定烟草制品中香豆素和黄樟素含量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种测定烟草制品中香豆素和黄樟素含量的方法，将烟草制品进行超声萃取、有机滤膜过滤和微萃取，得到烟草制品的待测溶液；将所述烟草制品的待测溶液进行气相色谱-质谱检测；再根据得到的烟草制品的色谱图和预定的香豆素和黄樟素的标准曲线，得到烟草制品中香豆素和黄樟素的含量，实现了烟草制品中的香豆素和黄樟素的同时测定。本发明提供的方法能够快速、准确地实现对烟草制品中香豆素和黄樟素含量的检测，通过微萃取技术降低了基质效应，提高了香豆素和黄樟素的分离度，且方法操作简便。

Description

一种测定烟草制品中香豆素和黄樟素含量的方法

技术领域

本发明涉及烟草制品理化检测技术领域，尤其涉及一种测定烟草制品中香豆素和黄樟素含量的方法。

背景技术

香豆素(coumarin)，又名为邻羟基桂酸内酯和1,2-苯并吡喃酮，是广泛在自然界中存在的内酯类化合物，在芸香科和伞形科植物中最多，也在其它科植物中存在。有研究报道，香豆素是毒素前体，会转化为双香豆素，而双香豆素有抗凝血作用，会导致动物毛细管出血，最终使动物内脏器官受损。黄樟素(safrole)也称为黄樟脑、黄樟油素，主要存在于沉水樟、坚叶樟等樟属植物的精油中，也是合成洋茉莉醛、香兰素及胡椒基丁醚等香料的一种重要原料，也是一种天然香精。但有研究显示，黄樟素在肝组织中形成黄樟素-脱氧核糖核酸加合物，对人体有毒副作用，易诱发基因突变和肝损伤，甚至是消化、血液系统的强致癌物，黄樟素是世界各国均禁止使用。

目前对香豆素和黄樟素的检测主要集中在化妆品、香精香料以及中药样品中，检测方法有同时蒸馏萃取、顶空萃取技术、超临界流体技术和固相微萃取技术等前处理方法与气相色谱方法(GC)、气相色谱-质谱方法(GC-MS)、气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)和高效液相色谱法(HPLC)等分析仪器联用分析。但是这些样品前处理方法存在耗时、耗力、耗溶剂等缺点。

由于香精、香料中有可能天然植物精油带入香豆素、黄樟素等成分，会通过烟丝中添加的香精、香料，或多或少存在于烟草制品中。因此，为了控制好烟草制品的安全性，建立快速同时检测香豆素和黄樟素的方法是十分必要的。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于一种测定烟草制品中香豆素和黄樟素含量的方法，本发明提供的方法能够快速、准确、降低基质效应，提高了香豆素和黄樟素的分离度，同时实现对香豆素和黄樟素的测定。

本发明提供了一种测定烟草制品中香豆素和黄樟素含量的方法，包括以下步骤：

将烟草制品待测样品进行超声萃取，得到超声萃取液；

将所述超声萃取液经有机滤膜过滤，得到滤液；

采用气流吹扫微注射器萃取技术，将所述滤液进行微萃取，得到烟草制品待测溶液；

将所述烟草制品待测溶液进行气相色谱-质谱检测，得到烟草制品的色谱图；

根据所述烟草制品的色谱图与预定的香豆素和黄樟素标准曲线，得到烟草制品中香豆素和黄樟素的含量。

优选的，所述超声萃取的萃取溶剂为二氯甲烷；

所述超声萃取的时间为15min～25min。

优选的，所述烟草制品待测样品的质量与超声萃取的萃取溶剂的体积比为0.5g:(10～20)mL。

优选的，所述有机滤膜的孔径为0.45μm。

优选的，所述微萃取的萃取溶剂为二氯甲烷。

优选的，所述微萃取的时间为3min～5min。

优选的，所述微萃取的温度为140℃～220℃。

优选的，所述气相色谱-质谱检测中气相色谱的条件为：

气相色谱进样口温度为270℃～290℃；

气相色谱载气流速为1.00mL/min；

气相色谱的升温程序为梯度升温。

优选的，所述梯度升温为：

在起始温度保持第一时间，以第一升温速率升温至第一温度，所述起始温度为90℃～110℃，所述第一时间为2min～4min，所述第一升温速率为4℃/min～8℃/min，所述第一温度为150℃～170℃；

再以第二升温速率升温至第二温度，保持第二时间，所述第二升温速率为18℃/min～25℃/min，所述第二温度为270℃～290℃，所述第二时间为3min～7min。

优选的，所述气相色谱-质谱检测中质谱的条件为：

质谱传输线温度为275℃～285℃；

质谱离子源温度为225℃～235℃；

质谱四级杆温度为145℃～155℃；

质谱溶剂延迟时间为3min～5min；

质谱电离方式为EI源；

质谱电离能量为65eV～75eV；

质谱扫描方式为选择离子监测模式。

本发明提供了一种测定烟草制品中香豆素和黄樟素含量的方法，包括以下步骤：将烟草制品待测样品进行超声萃取，得到超声萃取液；将所述超声萃取液经有机滤膜过滤，得到滤液；采用气流吹扫微注射器萃取技术，将所述滤液进行微萃取，得到烟草制品待测溶液；将所述烟草制品待测溶液进行气相色谱-质谱检测，得到烟草样品的色谱图；根据所述烟草样品的色谱图与预定的香豆素标准曲线和黄樟素标准曲线，得到烟草制品中香豆素和黄樟素的含量。本发明提供的方法将烟草制品进行超声萃取、有机滤膜过滤和微萃取，得到烟草制品的待测溶液；将所述烟草制品的待测溶液进行气相色谱-质谱检测，实现了对烟草制品中的香豆素和黄樟素的同时测定。本发明提供的方法能够快速、准确地实现对烟草制品中香豆素和黄樟素含量的检测，通过微萃取技术降低了基质效应，提高了香豆素和黄樟素分离度，且方法操作简便。

实验结果表明，利用本发明能够准确的测定烟草制品中香豆素和黄樟素含量，方法回收率在85％～97％，平均相对标准偏差(RSD)小于6.5，说明本发明方法回收率高，重复性好；样品处理操作简便，样品在ME-101多功能微萃取仪上，可以一步完成样品的萃取、净化、浓缩，并且大大消除样品基质对目标物的色谱干扰，目标物的色谱分离度较好，有利于能准确定性定量；ME-101多功能微萃取仪萃取时间仅仅4min，分析时间短，实现样品前处理的自动化，可以处理大批量烟草制品样品，保障烟草制品的品质和安全性。

附图说明

图1为本发明实施例1得到的香豆素和黄樟素标准品的色谱分析图；

图2为本发明实施例2得到的萃取温度对香豆素和黄樟素萃取效率影响的柱状图；

图3为本发明实施例3得到的萃取时间对香豆素和黄樟素萃取效率影响的柱状图；

图4为本发明实施例9得到的烟草制品加标的色谱分析图；

图5为本发明实施例9得到的不同浓度级别的烟草制品基质加标回收率柱状图。

具体实施方式

本发明提供了一种测定烟草制品中香豆素和黄樟素含量的方法，包括以下步骤：

将烟草制品待测样品进行超声萃取，得到超声萃取液；

将所述超声萃取液经有机滤膜过滤，得到滤液；

采用气流吹扫微注射器萃取技术，将所述滤液进行微萃取，得到烟草制品待测溶液；

将所述烟草制品待测溶液进行气相色谱-质谱检测，得到烟草样品的色谱图；

根据所述烟草样品的色谱图与预定的香豆素标准曲线和黄樟素标准曲线，得到烟草制品中香豆素和黄樟素的含量。

本发明提供的方法将烟草制品超声萃取、有机滤膜过滤和微萃取，同时提取出烟草制品中的香豆素和黄樟素，得到烟草制品的待测溶液；再将所述烟草制品的待测溶液进行气相色谱-质谱检测，实现了对香豆素和黄樟素的同时测定。本发明建立了一种同时快速、准确检测烟草制品中香豆素和黄樟素的方法，通过微萃取技术降低了基质效应，提高了分离度，且方法操作简便。

本发明将烟草制品待测样品进行超声萃取，得到超声萃取液。本发明对所述烟草制品的种类没有特殊的限制，可以为本领域技术人员熟知的各种吸用烟丝或卷烟。在本发明中，所述烟草制品待测样品优选为固态的烟草制品，所述固态的烟草制品待测样品的粒度优选为-200目，在本发明中-200目是指200目筛的筛下物。本发明优选将烟草制品进行干燥、粉碎和过筛，得到烟草制品待测样品。本发明对所述干燥的方法没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的对烟草进行干燥的技术方案即可；在本发明中，所述干燥优选为冷冻干燥；在本发明中，所述干燥后的烟草制品的含水率优选≤6％，更优选为≤5％。本发明对所述粉碎的方法没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的粉碎的技术方案即可，如可以采用人工研磨的方式，也可以采用机械粉碎的方式。在本发明中，所述过筛优选采用200目筛。

得到烟草制品待测样品后，本发明将所述烟草制品待测样品进行超声萃取，得到超声萃取液。在本发明中，所述超声萃取的萃取溶剂优选为二氯甲烷；所述烟草制品待测样品的质量与二氯甲烷的体积比优选为0.5g:(10～20)mL，更优选为0.5g:15mL；所述超声萃取的时间优选为15min～25min，更优选为20min。

完成所述超声萃取，得到超声萃取液后，本发明将所述超声萃取液经有机滤膜过滤，得到滤液。本发明对所述有机滤膜的材质没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的有机滤膜即可；在本发明中，所述有机滤膜的孔径优选为0.45μm。本发明优选将超声萃取液经有机滤膜过滤，浓缩得到90μL～110μL的滤液，更优选浓缩得到100μL滤液。

得到滤液后，本发明采用气流吹扫微注射器萃取技术，将所述滤液进行微萃取，得到烟草制品待测溶液。本发明优选采用型号为ME-101的微萃取仪对所述滤液进行微萃取，优选将15μL～25μL滤液置于所述微萃取仪的样品池中，用隔垫将样品池口密封，更优选为20μL；然后将体积为100μL的微注射器经冷凝装置垂直穿过隔垫插入样品池中，在所述微注射器中加入萃取溶剂进行微萃取。在本发明中，所述微萃取采用的萃取溶剂优选为二氯甲烷；在本发明中，所述微萃取的时间优选为3min～5min，更优选为4min；所述微萃取的温度优选为140℃～220℃，更优选为150℃～200℃，最优选为160℃。

完成所述微萃取后，为了便于检测烟草样品中香豆素和黄樟素的含量，本发明优选将得到的微萃取液定容至100μL，得到烟草样品待测溶液。

得到烟草样品待测溶液后，本发明将所述烟草样品待测溶液进行气相色谱-质谱检测，得到烟草样品的色谱图。本发明对所述气相色谱-质谱检测采用的仪器没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的气相色谱-质谱仪即可。在本发明中，所述气相色谱-质谱检测中，气相色谱的条件优选为：

所述气相色谱的进样量优选为1μL～3μL，更优选为2μL；所述气相色谱的色谱柱为DB-5MS石英毛细管柱，所述色谱柱的尺寸优选为30m×0.25mm×0.25μm；所述气相色谱进样口的温度优选为270℃～290℃，更优选为275℃～285℃，最优选为280℃；所述气相色谱的载气优选为高纯氦气，所述高纯氦气的纯度优选为99.999％；所述载气的流动优选为恒流模式，所述载气的流速优选为1.00mL/min；所述气相色谱检测不分流；所述气相色谱的升温程序优选为梯度升温；所述梯度升温优选为：

在起始温度保持第一时间，以第一升温速率升温至第一温度，所述起始温度优选为90℃～110℃，更优选为95℃～105℃，最优选为100℃；所述第一时间优选为2min～4min，更优选为3min；所述第一升温速率优选为4℃/min～8℃/min，更优选为6℃/min；所述第一温度优选为150℃～170℃，更优选为155℃～165℃，最优选为160℃；

再以第二升温速率升温至第二温度，保持第二时间，所述第二升温速率优选为18℃/min～25℃/min，更优选为20℃/min；所述第二温度优选为270℃～290℃，更优选为275℃～285℃，最优选为280℃；所述第二时间优选为3min～7min，更优选为4min～6min，最优选为5min。

在本发明中，所述气相色谱-质谱检测中质谱的条件优选为：

所述质谱传输线温度为275℃～285℃，更优选为280℃；

所述质谱离子源温度为225℃～235℃，更优选为230℃；

所述质谱四级杆温度为145℃～155℃，更优选为150℃；

所述质谱溶剂延迟时间为3min～5min，更优选为4min；

所述质谱电离方式为EI源；

所述质谱电离能量为65eV～75eV，更优选为70eV；

所述质谱扫描方式为选择离子监测模式。

完成所述气相色谱-质谱检测后，本发明根据得到的烟草制品的色谱图与预定的香豆素和黄樟素标准曲线，得到烟草制品中香豆素和黄樟素的含量。

在本发明中，所述香豆素和黄樟素的标准曲线优选按照以下方法获得：

配制系列浓度的标准工作溶液，所述标准工作溶液包括香豆素和黄樟素；

将所述系列浓度的标准工作溶液进行气相色谱-质谱检测，得到标准工作液的色谱图；

分别以所述标准工作液的色谱图中香豆素、黄樟素的峰面积为纵坐标，香豆素和黄樟素对应的浓度为横坐标进行回归分析，得到香豆素和黄樟素的标准曲线。

本发明对配制标准工作液的方法没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的配制标准溶液的方法即可。具体的，本发明可以先配制标准储备液，再将标准储备液稀释至所需浓度。本发明优选配制两级标准储备液，分别为一级标准储备液，命名为标准储备液I，和二级标准储备液，命名为标准储备液II。在本发明中，所述标准储备液I中的溶剂优选为二氯甲烷；所述标准储备液I中香豆素的质量浓度优选为500.0mg·L^-1，所述标准储备液I中黄樟素的质量浓度优选为500.0mg·L^-1；所述标准储备液II中的溶剂优选为二氯甲烷；所述标准储备液II中香豆素的质量浓度优选为5mg·L^-1，所述标准储备液II中黄樟素的质量浓度优选为5mg·L^-1。

本发明将系列体积的标准储备液II与一定体积的标准储备液I分别置于容量瓶中，得到系列浓度级别的标准溶液；用二氯甲烷稀释至刻度，得到系列浓度的标准工作液。在本发明的实施例中，所述标准储备液II的体积可为0.1mL、0.2mL、1mL和2mL；所述标准储备液I的体积可以为0.1mL；本领域技术人员可根据需要，配制不同浓度的标准工作液，本发明对此没有特殊的限制。

得到系列浓度的标准工作液后，本发明优选采用上述技术方案所述的气相色谱-质谱检测的技术方案，对所述标准工作液进行气相色谱-质谱检测，得到标准工作液的色谱图。

得到标准工作液的色谱图后，本发明对其中的香豆素和黄樟素的色谱峰进行积分，得到香豆素、黄樟素的色谱峰的峰面积。本发明以香豆素和黄樟素的峰面积为纵坐标进行回归分析，得到香豆素和黄樟素的标准曲线。

本发明根据上述技术方案得到的烟草制品的色谱图，得到其中香豆素和黄樟素的峰面积；再根据所述香豆素和黄樟素的标准曲线，计算得到烟草制品待测溶液中香豆素和黄樟素的浓度；再根据烟草制品待测溶液的体积，计算得到烟草制品待测溶液中香豆素和黄樟素的质量；再根据烟草制品待测样品的质量，计算得到烟草制品中香豆素和黄樟素的含量。

本发明提供的方法还考察了该方法的检测限、回收率和精密度，所述检测限可具体按照下述方法得到：

根据香豆素和黄樟素标准曲线，获得香豆素和黄樟素的最低浓度；

将香豆素和黄樟素最低浓度的标准工作液进行十次平行实验，计算得到的3倍的标准偏差为检出限、10倍的标准偏差为定量检出限。结果显示，本发明提供的方法对香豆素的检出限为0.021μg/g，对黄樟素的检出限为0.015μg/g；香豆素的定量限为0.07μg/g，黄樟素的定量限为0.05μg/g。

在本发明中，所述回收率可按照下述方法得到：

在空白烟草制品中分别加入系列浓度的标准工作液，按照上述技术方案所述微萃取的方法进行微萃取，得到待测溶液；

将所述待测溶液进行气相色谱-质谱检测，得到其中香豆素和黄樟素的含量；

每组实验平行进行三次，取平均结果。

实验结果表明，本发明提供的方法，香豆素的加标回收率为80％～87％，和黄樟素的加标回收率83％～97％，RSD值小于10.57％。这说明，该方法回收率高，重复性好，适用于烟草制品中香豆素和黄樟素的同时检测。

本发明提供了一种测定烟草制品中香豆素和黄樟素含量的方法，包括以下步骤：将烟草制品待测样品进行超声萃取，得到超声萃取液；将所述超声萃取液经有机滤膜过滤，得到滤液；采用气流吹扫微注射器萃取技术，将所述滤液进行微萃取，得到烟草制品待测溶液；将所述烟草制品待测溶液进行气相色谱-质谱检测，得到烟草样品的色谱图；根据所述烟草样品的色谱图与预定的香豆素标准曲线和黄樟素标准曲线，得到烟草制品中香豆素和黄樟素的含量。本发明提供的方法将烟草制品进行超声萃取、有机滤膜过滤和微萃取，得到烟草制品的待测溶液；将所述烟草制品的待测溶液进行气相色谱-质谱检测，实现了对烟草制品中的香豆素和黄樟素的同时测定。本发明提供的方法能够快速、准确地实现对烟草制品中香豆素和黄樟素含量的检测，通过微萃取技术降低了基质效应，使得香豆素和黄樟素具有较好的分离度，且方法操作简便。

下面结合实施例对本发明提供的测定烟草制品中香豆素和黄樟素含量的方法进行详细的说明，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。

在下述实施例中，烟草制品样品选自卷烟企业；香豆素购自德国Dr.Ehrenstorfer；黄樟素标准品购自美国AccuStandard；有机滤膜购自于美国PALL；；二氯甲烷为色谱纯，购自加拿大克莱顿公司；ME-101多功能微萃取仪由延边大学提供；GC-MS2010购自日本岛津公司；电子分析天平购自瑞士梅特勒精密天平。

实施例1

分别称取0.0500g的香豆素和0.0500g黄樟素标准品于100mL容量瓶中，用二氯甲烷稀释定容至刻度并摇匀，得到500.0mg·L^-1混合标准溶液，为标准储备液I。然后用二氯甲烷再稀释至浓度为5mg·L^-1，摇匀，置于冷藏储存，备用，得到标准储备液II。

分别移取0.1mL、0.2mL、1mL、2mL的混合标准储备液II和0.1mL混合标准储备液I，分别置于5个体积为10mL容量瓶中，得到5个浓度级别的标准工作溶液，用二氯甲烷定容至刻度，摇匀。5个标准溶液的浓度依次为0.05mg·L^-1、0.1mg·L^-1、0.5mg·L^-1、1mg·L^-1、5mg·L^-1。

将得到标准溶液进行气相色谱-质谱测定，其中气相色谱测定的条件为：

色谱柱，DB-5MS石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)；进样口温度：280℃；载气：高纯氦气，纯度为99.999％；流速：1.00mL/min的恒流模式；分流比：不分流；升温程序：起始温度为100℃，保持3min，以6℃/min升高至160℃，再以20℃/min升高至280℃，保持5min；

质谱条件为：传输线温度：280℃；离子源温度：230℃；四级杆温度：150℃；溶剂延迟：4min；电离方式：EI源；电离能量：70eV；扫描方式：选择离子监测模式(SIM)。

检测得到标准溶液的气相色谱图，结果如图1所示，图1为本发明实施例1得到的香豆素和黄樟素标准品的色谱分析图；根据系列浓度的标准溶液的色谱分析图，对其中香豆素、黄樟素的峰面积为纵坐标，以香豆素和黄樟素的相应浓度进行回归分析，得到香豆和黄樟素的标准曲线。

实施例2

取烟草制品样品，冷冻干燥后，使水分保持5％左右。将样品粉碎、过筛200目筛，将过筛后的筛下样品粉末放入棕色样品瓶并冷藏、待检测；

取0.5g烟草制品样品的粉末，用15mL二氯甲烷超声萃取20min，之后萃取液经过0.45μm有机滤膜，浓缩至100μL。取20μL的萃取液，填装入ME-101微萃取仪的样品池中，用隔垫密封样品池口，将100μL微注射器经冷凝装置垂直插入样品池中，至隔垫下适当位置，在微注射器中加入10μL萃取溶剂开始萃取，萃取时间为4min。ME-101多功能微萃取仪参数为：

气流吹扫微注射器萃取技术萃取条件为如下：氮气流速为2mL/min，萃取温度分别为140℃、160℃、180℃、220℃、260℃、300℃，萃取时间为4min，冷凝温度为-4℃。

结果如图2所示，图2为本发明实施例2得到的萃取温度对香豆素和黄樟素萃取效率影响的柱状图，结果显示，140℃萃取温度下，香豆素和黄樟素的回收率分别为70％，72％；萃取温度在160℃～300℃条件下香豆素和黄樟素的回收率分别为82％～99％和84％～98％，RSD值小于11.5％，满足回收率的要求。

实施例3

采用实施例2的方法，测试萃取时间对香豆素和黄樟素萃取效率的影响，不同的是，本实施例中萃取温度为160℃，萃取时间分别为3min、4min、5min，每个实验平行做三次。

结果如图3所示，图3为本发明实施例3得到的萃取时间对香豆素和黄樟素萃取效率影响的柱状图，结果显示，萃取时间为3min时，香豆素和黄樟素平均回收率为69％和75％，RSD值小于15％；而萃取时间为4～5min时，目标物的平均回收率为92％～114％，相对标准偏差小于9.91％，回收率和精密度都满足分析要求。

实施例4

取烟草制品样品，冷冻干燥后，将样品粉碎、过筛200目筛，将过筛后的样品粉末放入棕色样品瓶并冷藏、待检测；

取0.5g烟草制品样品的粉末，用15mL二氯甲烷超声萃取20min，之后萃取液经过0.45μm有机滤膜，浓缩至100μL。取20μL的萃取液，填装入ME-101微萃取仪的样品池中，用隔垫密封样品池口，将100μL微注射器经冷凝装置垂直插入样品池中，至隔垫下适当位置，在微注射器中加入10μL萃取溶剂开始萃取，萃取时间为4min。ME-101多功能微萃取仪参数为：

气流吹扫微注射器萃取技术萃取条件为如下：氮气流速为2mL/min，萃取温度为160℃，萃取时间为4min，冷凝温度为-4℃。

萃取结束后，最终定容为100μL，取2μL进入气相色谱质谱仪分析，气相色谱-质谱条件为：

色谱柱，DB-5MS石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)；进样口温度：280℃；载气：高纯氦气，纯度为99.999％；流速：1.00mL/min的恒流模式；分流比：不分流；升温程序：起始温度为100℃，保持3min，以6℃/min升高至160℃，再以20℃/min升高至280℃，保持5min；

质谱条件为：传输线温度：280℃；离子源温度：230℃四级杆温度：150℃；溶剂延迟：4min；电离方式：EI源；电离能量：70eV；扫描方式：选择离子监测模式(SIM)。

检测得到质谱检测的离子：香豆素的定性、定量离子分别为m/z146和m/z118，黄樟素的定性、定量离子分别为m/z131和m/z162；

根据得到的色谱分析图中香豆素和黄樟素色谱峰的峰面积，以及实施例1得到的香豆素和黄樟素的标准曲线，计算得到烟草制品中香豆素和黄樟素的含量，结果如表1所示，表1为本发明实施例4～8得到的测试结果。

实施例5～8

采用实施例4所述的技术方案，对其他5种来自不同卷烟企业的烟草制品的样品进行检测，得到其中香豆素和黄樟素的含量，结果如表1所示，表1为本发明实施例4～8得到的测试结果。

表1本发明实施例4～8得到的测试结果

实施例	黄樟素(μg·g-1)	香豆素(μg·g-1)
			4	ND	0.07
5	ND	ND
			6	ND	0.15
7	ND	ND
			8	ND	0.10

注：ND为未检出。

由表1可以看出，烟草制品的样品中均未检出黄樟素，少量样品中检测到了香豆素，浓度范围为ND～0.15μg·g^-1，RSD为3.5％～7.6％。

实施例9

在空白烟草制品样品中分别加入0.1μg·g^-1、0.5μg·g^-1、5.0μg·g^-1和50.0μg·g^-1的不同添加量水平的香豆素和黄樟素，采用实施例4所述的微萃取和气相色谱-质谱检测方法进行检测，每组实验平行进行三次。

结果如图4和图5所示，图4为本发明实施例9得到的烟草制品加标的色谱分析图，图5为本发明实施例9得到的不同浓度级别的烟草制品基质加标回收率柱状图，结果显示，香豆素的加标回收率为80％～87％，黄樟素的加标回收率为83％～97％，RSD值小于10.57％，这说明，本发明提供的方法回收率高，重复性好，适用于烟草制品中香豆素和黄樟素的同时检测。

由以上实施例可知，本发明提供了一种测定烟草制品中香豆素和黄樟素含量的方法，包括以下步骤：将烟草制品待测样品进行超声萃取，得到超声萃取液；将所述超声萃取液经有机滤膜过滤，得到滤液；采用气流吹扫微注射器萃取技术，将所述滤液进行微萃取，得到烟草制品待测溶液；将所述烟草制品待测溶液进行气相色谱-质谱检测，得到烟草样品的色谱图；根据所述烟草样品的色谱图与预定的香豆素标准曲线和黄樟素标准曲线，得到烟草制品中香豆素和黄樟素的含量。本发明提供的方法将烟草制品进行超声萃取、有机滤膜过滤和微萃取，得到烟草制品的待测溶液；将所述烟草制品的待测溶液进行气相色谱-质谱检测，实现了对烟草制品中的香豆素和黄樟素的同时测定。本发明提供的方法能够快速、准确地实现对烟草制品中香豆素和黄樟素含量的检测，通过微萃取技术降低了基质效应，具有分离度好，且方法操作简便。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种测定烟草制品中香豆素和黄樟素含量的方法，包括以下步骤：

将烟草制品待测样品进行超声萃取，得到超声萃取液；

将所述超声萃取液经有机滤膜过滤，得到滤液；

采用气流吹扫微注射器萃取技术，将所述滤液进行微萃取，得到烟草制品待测溶液；

将所述烟草制品待测溶液进行气相色谱-质谱检测，得到烟草制品的色谱图；

根据所述烟草制品的色谱图与预定的香豆素和黄樟素标准曲线，得到烟草制品中香豆素和黄樟素的含量；

所述微萃取的萃取溶剂为二氯甲烷；

所述微萃取的时间为3min～5min；

所述微萃取的温度为140℃～220℃。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超声萃取的萃取溶剂为二氯甲烷；

所述超声萃取的时间为15min～25min。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述烟草制品待测样品的质量与超声萃取的萃取溶剂的体积比为0.5g:(10～20)mL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有机滤膜的孔径为0.45μm。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述气相色谱-质谱检测中气相色谱的条件为：

气相色谱进样口温度为270℃～290℃；

气相色谱载气流速为1.00mL/min；

气相色谱的升温程序为梯度升温。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述梯度升温为：

在起始温度保持第一时间，以第一升温速率升温至第一温度，所述起始温度为90℃～110℃，所述第一时间为2min～4min，所述第一升温速率为4℃/min～8℃/min，所述第一温度为150℃～170℃；

再以第二升温速率升温至第二温度，保持第二时间，所述第二升温速率为18℃/min～25℃/min，所述第二温度为270℃～290℃，所述第二时间为3min～7min。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述气相色谱-质谱检测中质谱的条件为：

质谱传输线温度为275℃～285℃；

质谱离子源温度为225℃～235℃；

质谱四级杆温度为145℃～155℃；

质谱溶剂延迟时间为3min～5min；

质谱电离方式为EI源；

质谱电离能量为65eV～75eV；

质谱扫描方式为选择离子监测模式。