CN103976958A - 一种金纳米颗粒在制备抗凝血剂或抗血小板剂中的应用 - Google Patents
一种金纳米颗粒在制备抗凝血剂或抗血小板剂中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103976958A CN103976958A CN201410231394.1A CN201410231394A CN103976958A CN 103976958 A CN103976958 A CN 103976958A CN 201410231394 A CN201410231394 A CN 201410231394A CN 103976958 A CN103976958 A CN 103976958A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nano grain
- gold nano
- substituted pyrimidines
- gold
- anticoagulant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000010931 gold Substances 0.000 title claims abstract description 119
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 104
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 101
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 title claims abstract description 26
- 229940127218 antiplatelet drug Drugs 0.000 title claims abstract description 16
- 239000000106 platelet aggregation inhibitor Substances 0.000 title claims abstract description 16
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 title abstract description 13
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 title abstract description 11
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 claims abstract description 42
- QCAWOHUJKPKOMD-UHFFFAOYSA-N 4,6-diamino-1h-pyrimidine-2-thione Chemical compound NC1=CC(N)=NC(S)=N1 QCAWOHUJKPKOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229940127090 anticoagulant agent Drugs 0.000 claims description 13
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 10
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 10
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 7
- DCPSTSVLRXOYGS-UHFFFAOYSA-N 6-amino-1h-pyrimidine-2-thione Chemical compound NC1=CC=NC(S)=N1 DCPSTSVLRXOYGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 4
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 claims description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 abstract description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 8
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 abstract description 6
- 150000002343 gold Chemical class 0.000 abstract description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 2
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 abstract 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 24
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 22
- DWJXYEABWRJFSP-XOBRGWDASA-N DAPT Chemical compound N([C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)OC(C)(C)C)C=1C=CC=CC=1)C(=O)CC1=CC(F)=CC(F)=C1 DWJXYEABWRJFSP-XOBRGWDASA-N 0.000 description 19
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000011977 dual antiplatelet therapy Methods 0.000 description 18
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 16
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 15
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 14
- 230000002429 anti-coagulating effect Effects 0.000 description 13
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 10
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 8
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 8
- XRTJYEIMLZALBD-UHFFFAOYSA-N 4-(6-methyl-1,3-benzothiazol-2-yl)aniline Chemical compound S1C2=CC(C)=CC=C2N=C1C1=CC=C(N)C=C1 XRTJYEIMLZALBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 7
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 241000581650 Ivesia Species 0.000 description 5
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 4
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000005005 aminopyrimidines Chemical class 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 3
- 230000002153 concerted effect Effects 0.000 description 3
- FDWREHZXQUYJFJ-UHFFFAOYSA-M gold monochloride Chemical compound [Cl-].[Au+] FDWREHZXQUYJFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KLRVCIIRQBLVMJ-UHFFFAOYSA-K CO.[Au](Cl)(Cl)Cl Chemical compound CO.[Au](Cl)(Cl)Cl KLRVCIIRQBLVMJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 208000006193 Pulmonary infarction Diseases 0.000 description 2
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 2
- 208000001435 Thromboembolism Diseases 0.000 description 2
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- UJLXKYSGBFPPAD-UHFFFAOYSA-N gold;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound [Au].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O UJLXKYSGBFPPAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 230000007575 pulmonary infarction Effects 0.000 description 2
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 2
- UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N (R)-adrenaline Chemical compound CNC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229930182837 (R)-adrenaline Natural products 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 208000035992 Postmortem Changes Diseases 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 1
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001243 acetic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001800 adrenalinergic effect Effects 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940124350 antibacterial drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 1
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N chloral hydrate Chemical compound OC(O)C(Cl)(Cl)Cl RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002327 chloral hydrate Drugs 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229960005139 epinephrine Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000007096 poisonous effect Effects 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- LJXQPZWIHJMPQQ-UHFFFAOYSA-N pyrimidin-2-amine Chemical compound NC1=NC=CC=N1 LJXQPZWIHJMPQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M sodium-L-ascorbate Chemical compound [Na+].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M 0.000 description 1
- KYITYFHKDODNCQ-UHFFFAOYSA-M sodium;2-oxo-3-(3-oxo-1-phenylbutyl)chromen-4-olate Chemical compound [Na+].[O-]C=1C2=CC=CC=C2OC(=O)C=1C(CC(=O)C)C1=CC=CC=C1 KYITYFHKDODNCQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010025 steaming Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002647 warfarin sodium Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种由取代嘧啶分子修饰的金纳米颗粒在制备抗凝血剂或抗血小板剂中的用途。所述修饰金纳米颗粒的取代嘧啶分子为2-巯基-4,6-二氨基嘧啶、2-巯基-4-氨基嘧啶或2-巯基4,6-二羟基嘧啶之中的一种或至少两种的混合。本发明将没有抗凝活性的取代嘧啶部分和没有抗凝活性的金纳米颗粒通过S-Au键相连，并首次应用于抗凝领域，所得的取代嘧啶修饰的金纳米颗粒取得了出乎意料的抗凝效果，且制备方法简单，所述纳米颗粒粒径分布小，颗粒在水中分散性好，在正常剂量下不会引起出血副作用，可以用于制备抗凝血剂或抗血小板剂。
Description
技术领域
本发明属于生物医药领域，涉及一种金纳米颗粒的应用，更具体地，涉及一种取代嘧啶修饰的金纳米颗粒在制备抗凝血剂或抗血小板剂中的用途。
背景技术
静脉血栓是人类因心血管相关疾病死亡的第三大杀手，而抗凝血药物是目前最有效的预防和治疗药物(Mackman,N.,Nature2008,451(7181),914-918)。目前常用的抗凝血药物肝素和华法林钠等容易在使用过程中造成出血等副作用，且容易和其他事物和药物发生相互作用，影响药效的发挥，使用时需要对其进行药物监测(Goldhaber,S.Z.；Bounameaux,H.,Lancet2012,379(9828),1835-1846；Palareti,G.,et al.,Lancet1996,348(9025),423-428)。人们一直想通过研制新型抗凝血药物来解决传统药物中出现的问题，但是进展缓慢，并且很难替代现有药物(Apostolakis,S.,et al.,Cardiovasc.Ther.2011,29(6),e12-e22)。
金纳米颗粒具有很多优点，例如尺寸可控，表面容易修饰，生物相容性好，目前被广泛用于生物医药研究领域(Boisselier,E.；Astruc,D.,Chem.Soc.Rev.2009,38(6),1759-1782)。在金纳米颗粒众多优势中，其多价效应尤其引人注意，已经被应用与很多药物的研发和创新中。比如将一些抗癌药物分子(肿瘤坏死因子或者紫杉醇)修饰在金纳米颗粒表面，可以达到比原药更强的抗肿瘤效果，并且可以逆转某些肿瘤对这些药物的耐药性(Paciotti,G.F.,et al.,DrugDeliv.2004,11(3),169-183；Paciotti,G.F.,et al.,Drug Dev.Res.2006,67(1),47-54)，这主要是因为金纳米颗粒比表面积大，且容易修饰，所以可以连接很多药物分子，提高药物局部浓度，增强药效。且金纳米颗粒生物相容性好，尺寸较小，可靶向肿瘤组织，减少药物毒副作用，且由于尺寸效应不易被细胞排出，可逆转肿瘤耐药性。类似的现象也在抗生素药物的研究中被发现，将万古霉素连接在金颗粒表面可以逆转细菌的耐药性，降低最小抑菌浓度(MIC)(Gu,H.,et al.,Nano Lett.2003,3(9),1261-1263)。不仅如此，某些无活性的小分子，比如一些抗菌药物前体小分子，修饰在金颗粒表面也会发挥强大的抗菌作用，不仅可以对抗超级细菌，还不容易诱导细菌产生耐药性(Zhao,Y.,et al.,J.Am.Chem.Soc.2010,132(35),12349-12356)。专利CN102188383公开了一种氨基嘧啶修饰的金纳米颗粒，其可广泛地用于抗菌药物的制备。此外，某些抗病毒药物的前体修饰在金颗粒表面可以抑制HIV-1病毒所造成的细胞融合(Bowman,M.C.,et al.,J.Am.Chem.Soc.2008,130(22),6896-6897)。
目前将金纳米颗粒的多价效应应用在开发新型抗凝血药物的研究还很少。人们将凝血酶、核酸配适体或者肝素连接在金纳米颗粒表面，确实可用于提高抗凝参数，但是这种方法很难控制表面配体的数量，对其是否会造成出血也没有进行评价(Liao,Y.J.,et al.,Langmuir2012,28(24),8944-8951；Hsu,C.L.,etal.,Chem.Eur.J.2011,17(39),10994-11000；Shiang,Y.C.,et al.,Adv.Funct.Mater.2010,20(18),3175-3182)。
嘧啶这种小分子是很多治疗性药物的前药，可以利用其合成抗菌药以及抗凝药物等(Lagorio,S.H.,et al.,Eur.J.Med.Chem.2006,41(11),1333-1338；Gangjee,A.,et al.,J.Med.Chem.2007,50(13),3046-3053；Bruno,O.,et al.,Bioorg.Med.Chem.2006,14(1),121-130)。取代嘧啶可以被可控地连接于金纳米颗粒表面，所得颗粒物理化学稳定，并且可以发挥强大的抗菌作用(Zhao,Y.,et al.,J.Am.Chem.Soc.2010,132(35),12349-12356)。同时嘧啶也是目前在研究的一些抗凝药物的合成前体，这些抗凝药物在前期研究中显示出了比现有药物更为有效的抗凝活性，且不容易造成出血副反应，但是合成过程过于复杂(Abdelhafez,O.M.,et al.,Bioorg.Med.Chem.2010,18(10),3371-3378)。因此，本领域急需寻找一种具有优异抗凝效果、不造成出血副反应且合成方便的新型抗凝药物。
发明内容
本发明首次将取代嘧啶修饰的金纳米颗粒应用于抗凝血剂或抗血小板剂的制备，取得了出乎意料的抗凝效果。
本发明的目的在于提供一种由取代嘧啶分子修饰的金纳米颗粒在制备抗凝血剂或抗血小板剂中的用途。所述取代嘧啶分子修饰的金纳米颗粒为取代嘧啶部分和金纳米颗粒通过S-Au键相连所形成的纳米颗粒。所述修饰金纳米颗粒的取代嘧啶分子为2-巯基-4,6-二氨基嘧啶、2-巯基-4-氨基嘧啶或2-巯基-4,6-二羟基嘧啶之中的一种或多种的混合。即所述纳米颗粒中的金元素可结合一种取代嘧啶分子，也可通过其多价效应结合两种或更多上述取代嘧啶分子。单一氨基嘧啶分子修饰的金纳米颗粒包含2-巯基-4,6-二氨基嘧啶修饰的金纳米颗粒(简称Au_DAPT)，2-巯基-4-氨基嘧啶修饰的金纳米颗粒(简称Au_APT)和2-巯基-4,6-二羟基嘧啶修饰的金纳米颗粒(简称Au_DHPT)；混合氨基嘧啶分子修饰的金纳米颗粒包含2-巯基-4,6-二氨基嘧啶和2-巯基-4-氨基嘧啶共同修饰的金纳米颗粒(简称Au_DAPT/APT)，2-巯基-4,6-二氨基嘧啶和2-巯基-4,6-二羟基嘧啶嘧啶共同修饰的金纳米颗粒(简称Au_DAPT/DHPT)，2-巯基-4-氨基嘧啶和2-巯基-4,6-二羟基嘧啶共同修饰的金纳米颗粒(简称Au_APT/DHPT)和上述三种氨基嘧啶分子共同修饰的金纳米颗粒(简称Au_DAPT/APT/DHAPT)。优选地，所述修饰金纳米颗粒的取代嘧啶分子为2-巯基-4,6-二氨基嘧啶(简称Au_DAPT)。
所述取代嘧啶分子修饰的金纳米颗粒中，取代嘧啶部分没有抗凝活性，未取代的金纳米颗粒也没有抗凝活性，然而当取代嘧啶部分中的巯基与金元素通过S-Au键相连时，所得的取代嘧啶修饰的金纳米颗粒取得了出乎意料的抗凝效果。
所述金纳米颗粒中金元素与取代嘧啶分子的摩尔含量比为1:0.5～1:2。例如1：0.5，1：0.75，1：1，1：1.5或1：2。对其中摩尔含量比不同的金纳米颗粒进行电镜图片扫描，经分析可知当Au和取代嘧啶的摩尔含量比过大时，所得的金纳米颗粒粒径较大，较易发生团聚现象。当Au和取代嘧啶的摩尔含量比为1:0.5到1:2时，金纳米颗粒分散性较好，同时当Au和取代嘧啶的摩尔含量比为1:1时，其表面分子密度最高，具有更好的抗凝效果。优选地，所述金纳米颗粒中金元素与取代嘧啶分子的摩尔含量比为1:1，粒径为3nm左右。
所述金纳米颗粒平均粒径的范围为1～10nm。当所述金纳米颗粒中金元素与取代嘧啶分子的摩尔含量比为1:1时，所述金纳米颗粒平均粒径的范围为2.8～3.8nm。
本发明所述的取代嘧啶修饰的金纳米颗粒，其制备方法包括以下步骤：将氯金酸与取代嘧啶溶解混合形成混合溶液；还原剂例如硼氢化钠或抗坏血酸钠还原上述混合溶液中的氯金酸形成取代嘧啶修饰的金纳米颗粒；纯化氨基嘧啶修饰的金纳米颗粒。
本发明所述的金纳米颗粒可采用静脉注射、腹腔注射的给药方式。在本发明的一个实施方案中，所述金纳米颗粒在小鼠中采用尾静脉注射的给药方式。所述金纳米颗粒用于治疗和/或预防血栓，在本发明的一个实施方案中，所述金纳米颗粒用于预防小鼠尾部血栓，在本发明的另一个实施方案中，所述金纳米颗粒用于预防小鼠肺栓。所述金纳米颗粒单独使用或与其它抗凝血剂或抗血小板剂联合用药，所述抗凝血剂或抗血小板剂为预防性抗凝血剂或抗血小板剂。
与现有技术相比，本发明至少具备以下优点：
(1)本发明将没有抗凝活性的取代嘧啶部分，没有抗凝活性的未取代的金纳米颗粒通过S-Au键相连，并首次应用于抗凝领域，所得的取代嘧啶修饰的金纳米颗粒取得了出乎意料的抗凝效果。
(2)较已知文献报道的金纳米颗粒，本发明所述的取代嘧啶修饰的金纳米颗粒，制备方法简单，纳米颗粒粒径分布小，颗粒在水中分散性好，能在4℃或-20℃保存至少一年，冻干颗粒仍可溶于水。
(3)在正常剂量下，本发明所述的金纳米颗粒不会引起出血副作用，克服了传统抗凝药物的一大缺点，是一种新型高效副作用小的抗凝血剂或抗血小板剂。
附图说明
图1为本发明所述的Au_DAPT的结构。
图2为本发明所述的Au_DAPT的透射电镜图片。
图3为具有不同Au与DAPT摩尔含量比的金纳米颗粒的电镜图片。
图4为具有不同Au与DAPT摩尔质量比的金纳米颗粒连同对照DAPT、肝素、柠檬酸金的凝血时间测试图。
图5为金纳米颗粒延长动物凝血时间图。
图6为金纳米颗粒对小鼠APTT和PT的影响。
图7为金纳米颗粒对小鼠尾部血栓的影响。
图8为金纳米颗粒对小鼠肺栓塞的影响，其中(a)为不同组别的小鼠存活率，(b)为对照组和金纳米颗粒组的肺部组织图。
图9为金纳米颗粒是否导致动物出血图。
具体实施方式
下面结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。
实施例1取代嘧啶修饰的金纳米颗粒Au_DAPT的制备
(1)配置反应溶液
配置5mM氯金酸甲醇溶液：将41mg氯金酸溶于20mL无水甲醇；
配置10mM的2-巯基-4,6-二氨基嘧啶溶液：将14mg的2-巯基-4,6-二氨基嘧啶(DAPT)加入10mL无水甲醇中，并加入200μL无水乙酸和50μL吐温80，超声溶解；
配置60mM硼氢化钠甲醇溶液：将12mg硼氢化钠溶于3mL甲醇，即配即用；
(2)还原反应制得纳米金颗粒
在冰浴下，将20mL氯金酸甲醇溶液和10mL的2-巯基-4,6-二氨基嘧啶溶液混合放入50mL圆底烧瓶中，使用磁子搅拌10min；
加快搅拌速度，滴加硼氢化钠甲醇溶液，在2min之内滴完，之后降低搅拌速度继续在冰浴下搅拌1h，得到深红色溶液；
(3)纯化Au_DAPT
将得到的深红色溶液通过旋蒸法除去甲醇，加入5mL纯水，用截留分子量为14KDa的透析袋在纯水中透析48h(每3-4h换一次水)；透析后的金纳米溶液经0.22m微孔滤器过滤除菌，得到的Au_DAPT水溶液可在4℃保存或冻干后-20℃保存。Au_DAPT的结构和TEM图见图1和图2。
实施例2取代嘧啶修饰的金纳米颗粒Au_APT和Au_DHPT的制备
Au_APT(APT为2-巯基-4-氨基嘧啶)和Au_DHPT(DHPT为2巯基-4,6-二羟基嘧啶)的合成方法与Au_DAPT相似，将DAPT换成等摩尔的APT和DHPT即可。
实施例3对具有不同金元素与取代嘧啶分子摩尔含量比的金纳米颗粒的考察
分别制备Au和DAPT的摩尔含量比分别为1:0.125、1:0.25、1:0.5、1:1、1:2，分别对其进行透射电镜表征，如图3所示。，当Au和DAPT的配比为1：0.125到1:0.25的时候，部分金纳米颗粒粒径较大，较易发生团聚现象。当Au和DAPT配比为1:0.5到1:2的时候，金纳米颗粒分散性较好，粒径为3nm左右。
表1不同金纳米颗粒的表面分子密度
根据XPS结果计算金纳米颗粒表面分子密度，当Au和DAPT配比为1:1时表面分子密度最高。
将上述不同配比的金纳米颗粒连同对照DAPT、肝素heparin、柠檬酸金一同进行凝血时间测试。其中当Au和DAPT的摩尔含量比为1:1的凝血时间延长的最长。结果见图4.
实施例4血液凝固时间测定
不同剂量的Au_DPAT连同对照、DPAT和肝素heparin通过尾静脉注射到小鼠体内，一小时后从小鼠眼底静脉丛中取两滴血，分别滴在清洗干净的载玻片的两端，一滴血用来记录时间，另一滴血作为重复实验。立即启动秒表，每隔30s用一根干净的9号针尖从血滴边缘往血滴中间移动并轻轻挑起，见到血丝形成即可记录时间，为血液凝固时间。结果见图5。注射过Au_DAPT的小鼠，其血液凝固时间明显延长，150μg/kg组的血液凝固时间为141.3±10.9s，而最高剂量组600μg/kg组中的小鼠，其血液凝固时间被延长到了196.3±14.2s。
实施例5体内凝血参数测定
给大鼠按照150，300，600μg/kg的剂量尾静脉注射Au_DAPT，肝素heparin组为阳性对照，PBS组为阴性对照，DAPT为其他对照组。1h后将小鼠血液取到装有柠檬酸钠的抗凝管中，血液与柠檬酸钠的体积比例为9:1。贫血小板血浆(PPP)通过将全血3000rpm离心20min制备。凝血参数活化部分凝血酶时间(APTT)以及凝血酶原时间(PT)由国家北京药物安全评价研究中心进行测量。结果见图6。正常对照组小鼠APTT和PT的值分别为27.29±0.68s和13.05±0.16s。预先注射过金纳米颗粒的小鼠，其APTT值出现了明显延长，当注射剂量为150μg/kg时，小鼠的APTT延长到了31.06±1.056s(p＝0.0094)，当剂量增加到600μg/kg是，APTT增加到了40.33±4.627s(p＝0.001)。
实施例6小鼠尾部血栓形成实验
连续三天给小鼠尾静脉注射600μg/kgAu_DAPT，在最后一天给药1h后，给小鼠背部皮下注射1％角叉菜胶(50mg/kg)来诱导尾部血栓形成。在24小时后记录黑尾的长度。血栓生成率可以通过如下公式进行计算：
结果见图7，对照组小鼠黑尾长度为2.43±0.33cm，而Au_DAPT组小鼠黑尾长度为1.08±0.27cm
实施例7小鼠肺栓塞实验
先给小鼠静脉注射600μg/kg的Au_DAPT，一个小时后，将1.25mg/kg的胶原以及50μg/kg肾上腺素的混合溶液通过尾静脉以20μL/s的速度注射进入小鼠体内进行肺栓塞模型的造模。造模后记录15分钟内的死亡小鼠数目并计算存活率。每组小鼠8只，以500μg/kg肝素heparin作为阳性对照，PBS组作为阴性对照，DAPT为其他对照组。之后，取出每只小鼠肺部组织，浸泡在多聚甲醛溶液中，放置于4℃冰箱中过夜进行固定、脱水、包埋及HE染色。结果见图8.未经过药物处理的对照组在接受胶原和肾上腺素混合物诱导的肺栓塞5分钟之内存活率只有26.67％，而提前一小时给予600μg/kg金颗粒后可以提高小鼠存活率到60％左右。之后，小鼠的肺部组织被取出，固定，脱水，并进行HE染色观察，结果如图8b所示，对照组小鼠肺部组织可见大量血凝块，而预先给予过金纳米颗粒的小鼠肺部组织中血凝块数量明显减少。
实施例8出血实验
首先把小鼠分为六组，每组8只，分别通过尾静脉给小鼠注射1mg/kg，1.5mg/kg，2mg/kg的Au_DAPT，以及500μg/kg肝素heparin。DAPT和PBS组作为对照。1小时后，给小鼠腹腔注射200μL的3％水合氯醛进行麻醉，小鼠进入麻醉状态后，将尾部从尖端算起1cm剪掉，同时开始计时，每隔20s用滤纸沾一下小鼠尾部伤口看是否出血，记录下来小鼠不再出血的时间，即为出血时间。结果见图9。对照组小鼠的出血时间为126.3±8.4s。注射了1mg/kg的Au_DAPT小鼠的出血时间为131.6±8.6s，虽然稍有延长，但是与对照组相比没有明显差别(p>0.5)。1mg/kg剂量大于动物实验的有效剂量600μg/kg，这说明金纳米颗粒在有效剂量下不会引起出血的危险。当金纳米颗粒的剂量升高到1.5mg/kg和2mg/kg时，可以看到明显的出血(**:p<0.01,***:p<0.001)。目前常用的肝素在正常剂量500μg/kg时也容易造成动物出血(*:p<0.05)，证明金纳米颗粒的在出血方面的危险性要小于肝素。
本发明将没有抗凝活性的取代嘧啶部分，没有抗凝活性的未取代的金纳米颗粒通过S-Au键相连，并首次应用于抗凝领域，所得的取代嘧啶修饰的金纳米颗粒取得了出乎意料的抗凝效果；较已知文献报道的金纳米颗粒，本发明所述的取代嘧啶修饰的金纳米颗粒，制备方法简单，纳米颗粒粒径分布小，颗粒在水中分散性好，能在4℃或-20℃保存至少一年，冻干颗粒仍可溶于水；在正常剂量下，本发明所述的金纳米颗粒不会引起出血副作用，克服了传统抗凝药物的一大缺点，是一种新型高效副作用小的抗凝血剂或抗血小板剂。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (10)
1.一种由取代嘧啶分子修饰的金纳米颗粒在制备抗凝血剂或抗血小板剂中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述修饰金纳米颗粒的取代嘧啶分子为2-巯基-4,6-二氨基嘧啶、2-巯基-4-氨基嘧啶或2-巯基4,6-二羟基嘧啶之中的一种或至少两种的混合。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述修饰金纳米颗粒的取代嘧啶分子为2-巯基-4,6-二氨基嘧啶。
4.根据权利要求1-3任一项所述的用途，其特征在于，所述金纳米颗粒中金元素与取代嘧啶分子的摩尔含量比为1:0.5～1:2。
5.根据权利要求1-4任一项所述的用途，其特征在于，所述金纳米颗粒中金元素与取代嘧啶分子的摩尔含量比为1:1。
6.根据权利要求1-5任一项所述的用途，其特征在于，所述金纳米颗粒平均粒径的范围为1～10nm。
7.根据权利要求1-6任一项所述的用途，其特征在于，所述金纳米颗粒平均粒径的范围为2.8～3.8nm。
8.根据权利要求1-7任一项所述的用途，其特征在于，所述金纳米颗粒可采用静脉注射或腹腔注射的给药方式。
9.根据权利要求1-8任一项所述的用途，其特征在于，所述金纳米颗粒单独使用或与其它抗凝血剂或抗血小板剂联合用药。
10.根据权利要求1-9任一项所述的用途，其特征在于，所述抗凝血剂或抗血小板剂为预防性抗凝血剂或抗血小板剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410231394.1A CN103976958B (zh) | 2014-05-28 | 2014-05-28 | 一种金纳米颗粒在制备抗凝血剂或抗血小板剂中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410231394.1A CN103976958B (zh) | 2014-05-28 | 2014-05-28 | 一种金纳米颗粒在制备抗凝血剂或抗血小板剂中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103976958A true CN103976958A (zh) | 2014-08-13 |
| CN103976958B CN103976958B (zh) | 2017-03-22 |
Family
ID=51269289
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410231394.1A Expired - Fee Related CN103976958B (zh) | 2014-05-28 | 2014-05-28 | 一种金纳米颗粒在制备抗凝血剂或抗血小板剂中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103976958B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106166292A (zh) * | 2016-06-28 | 2016-11-30 | 西南大学 | 替考拉宁功能化纳米金的制备方法及其产品和应用 |
| CN106568760A (zh) * | 2016-10-18 | 2017-04-19 | 河南大学 | 一种利用在位还原法制备afm‑ters针尖的方法 |
| CN107362370A (zh) * | 2016-05-13 | 2017-11-21 | 国家纳米科学中心 | 一种基于金纳米簇联合NGF siRNA治疗胰腺癌的方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101386069A (zh) * | 2008-09-02 | 2009-03-18 | 浙江大学 | 用于制备水溶性和高生物相容性金属纳米粒子的表面改性剂及制备和使用方法 |
| CN102188383A (zh) * | 2010-03-05 | 2011-09-21 | 国家纳米科学中心 | 氨基嘧啶修饰的金纳米颗粒及其制备方法和用途 |
-
2014
- 2014-05-28 CN CN201410231394.1A patent/CN103976958B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101386069A (zh) * | 2008-09-02 | 2009-03-18 | 浙江大学 | 用于制备水溶性和高生物相容性金属纳米粒子的表面改性剂及制备和使用方法 |
| CN102188383A (zh) * | 2010-03-05 | 2011-09-21 | 国家纳米科学中心 | 氨基嘧啶修饰的金纳米颗粒及其制备方法和用途 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| MELISSA M.KEMP ETAL: "Synthesis of Gold and Silver Nanoparticles Stabilized with Glycosaminoglycans having Distinctive Biological Activities", 《BIOMACROMOLECULES》 * |
| Synthesis of Gold and Silver Nanoparticles Stabilized with Glycosaminoglycans having Distinctive Biological Activities;Melissa M.Kemp etal;《Biomacromolecules》;20090331;第10卷(第3期);第1-19页 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107362370A (zh) * | 2016-05-13 | 2017-11-21 | 国家纳米科学中心 | 一种基于金纳米簇联合NGF siRNA治疗胰腺癌的方法 |
| CN107362370B (zh) * | 2016-05-13 | 2022-07-26 | 国家纳米科学中心 | 一种基于金纳米簇联合NGF siRNA治疗胰腺癌的方法 |
| CN106166292A (zh) * | 2016-06-28 | 2016-11-30 | 西南大学 | 替考拉宁功能化纳米金的制备方法及其产品和应用 |
| CN106166292B (zh) * | 2016-06-28 | 2019-08-06 | 西南大学 | 替考拉宁功能化纳米金的制备方法及其产品和应用 |
| CN106568760A (zh) * | 2016-10-18 | 2017-04-19 | 河南大学 | 一种利用在位还原法制备afm‑ters针尖的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103976958B (zh) | 2017-03-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sun et al. | Comprehensive assessment of Nile tilapia skin collagen sponges as hemostatic dressings | |
| CN103289107B (zh) | 一种可注射丝素蛋白原位凝胶的制备方法及其应用 | |
| CN103976958A (zh) | 一种金纳米颗粒在制备抗凝血剂或抗血小板剂中的应用 | |
| CN104147640A (zh) | 右旋聚乳酸微纳米颗粒用作美容整形填充物及其制备方法 | |
| CN104994841B (zh) | 包含阴离子性高分子的抗癌药吸附能力得到提高的生物降解性微珠及其的制备方法 | |
| CN103721247B (zh) | 胶原基复合止血粉剂的制备方法 | |
| CN103006573A (zh) | 一种明胶微球栓塞剂的制备方法 | |
| CN105963766A (zh) | 一种可吸收抗菌止血微球、制备方法及其应用 | |
| Raya et al. | Carboxymethyl chitosan nano-fibers for controlled releasing 5-fluorouracil anticancer drug | |
| CN113499324B (zh) | 一种以细菌纤维素-磁性氧化石墨烯为基材的大麻二酚纳米镇痛贴及其制备方法 | |
| KR20160084378A (ko) | 이중으로 유도체화된 키토산 나노입자 및 생체내에서 유전자 전달을 위해 이들을 만들고 이용하는 방법 | |
| Yu et al. | Hydrogel-mediated drug delivery for treating stroke | |
| CN106714817A (zh) | 多药物递送系统及其用途 | |
| CN104940959A (zh) | 透明质酸修饰单壁碳纳米管制备诊断治疗的还原敏感性药物纳米剂的方法及应用 | |
| CN105343870B (zh) | 一种角蛋白纳米粒及其制备方法 | |
| CN103992483A (zh) | 一种具有糖、温度和pH三重敏感性的药物输送材料及其制备方法 | |
| CN102382204B (zh) | 低分子量藻酸双酯钠及其制备方法和应用 | |
| Xiong et al. | Application of nanomedicine and mesenchymal stem cells in burn injuries for the elderly patients | |
| CN104524591A (zh) | 一种介导肝素细胞内传递的交联纳米载体的制备方法 | |
| CN104510685A (zh) | 一种中药防脱洗发液 | |
| CN105709260A (zh) | 一种基于人表皮生长因子的静电纺丝溶液及其制备方法 | |
| Chen et al. | Application and development of magnetic iron oxide nanoparticles in tumor targeted therapy | |
| CN102585276B (zh) | 一种壳聚糖多孔支架的制备方法 | |
| CN103830205A (zh) | 一种可溶解凝血酶纳米颗粒及其制备方法和应用 | |
| CN114939163A (zh) | 一种用于多方式协同肿瘤治疗的复合凝胶体系的制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20170322 |