CN103946214A

CN103946214A - 作为parp-1抑制剂的3-苯基-异喹啉-1(2h)-酮衍生物

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Publication number: CN103946214A
Application number: CN201280057586.4A
Authority: CN
Inventors: G·M·E·帕裴奥; A·西尔拉; M·达内罗; A·斯科拉罗; F·祖科多
Original assignee: Nerviano Medical Sciences SRL
Current assignee: Nerviano Medical Sciences SRL
Priority date: 2011-11-25
Filing date: 2012-11-20
Publication date: 2014-07-23
Anticipated expiration: 2032-11-20
Also published as: EP2788328B1; ES2676068T3; AU2012342562B2; WO2013076090A1; CL2014001323A1; HK1200166A1; CA2856759A1; EA027800B1; JP6106182B2; AU2012342562A1; JP2014533709A; IN2014CN04671A; EA201491026A1; US9422243B2; CN103946214B; BR112014012031A2; US20140336192A1; KR20140097457A; MX2014006015A; EP2788328A1

Abstract

本发明提供取代的3-苯基-异喹啉-1(2H)-酮衍生物，其相对于聚(ADP-核糖)聚合酶PARP-2选择性抑制聚(ADP-核糖)聚合酶PARP-1的活性。因此，本发明的化合物用于治疗疾病，比如癌症、心血管疾病、中枢神经系统损伤和不同形式的炎症。本发明还提供制备这些化合物、包含这些化合物的药物组合物，和使用包含这些化合物的药物组合物治疗疾病的方法。

Description

作为PARP-1抑制剂的3-苯基-异喹啉-1(2H)-酮衍生物

技术领域

本发明涉及3-苯基-异喹啉-1(2H)-酮衍生物，其相对于聚(ADP-核糖)聚合酶PARP-2选择性抑制聚(ADP-核糖)聚合酶PARP-1的活性。因此，本发明化合物适用于治疗疾病比如癌症、心血管疾病、中枢神经系统损伤和不同形式的炎症。本发明还提供制备这些化合物的方法、包含这些化合物的药物组合物，和使用包含这些化合物的药物组合物治疗疾病的方法。

背景技术

聚(ADP-核糖)聚合酶属于催化将ADP-核糖单元加入至DNA或不同受体蛋白的18个成员家族，其影响如下多种细胞过程：复制、转录、分化、基因调节、蛋白质降解和纺锤体保持。PARP-1和PARP-2是PARP中唯一由DNA损伤激活的且涉及DNA修复的酶。

PARP-1是由3个结构域组成的核蛋白质：含有两个锌指的N-末端DNA-结合域、自动修饰结构域、和C-末端催化结构域。PARP-1通过锌-指结构域结合至DNA断裂单链(SSB)、裂解NAD⁺，并使多个ADP-核糖单元连接于靶蛋白比如组蛋白类和多种DNA修复酶。这导致高度带负电荷的靶，其又通过碱基切除修复途径导致受损DNA的解链和修复。在敲除(knock out)的小鼠模型中，PARP-1的缺失损害DNA修复，但是它不是胚胎致死的。而双敲除PARP-1和PARP-2小鼠死于胚胎发育早期，表明两种酶显示不完全重叠的功能。增强的PARP-1表达和/或活性已经显示在不同肿瘤细胞系中，包括恶性淋巴瘤、肝细胞癌、子宫颈癌、结肠直肠癌、白血病。这可以允许肿瘤细胞抵抗基因毒性应激和增加它们对DNA-损伤剂的耐药性。因此，已经显示，通过小分子抑制PARP-1使肿瘤细胞对细胞毒性治疗(例如替莫唑胺、铂，拓扑异构酶抑制剂和辐射)敏感。显著窗(significantwindow)似乎存在于PARP抑制剂增强治疗益处的能力和不期望的副作用之间。然而，PARP抑制剂与DNA损伤剂组合的治疗用途不是新的，使用这些试剂作为单一治疗，特别是在同源重组DNA修复中肿瘤遗传学背景缺乏的情况下，代表新的方法。BRCA-1或BRCA-2同源重组修复基因中杂合种系突变的个体显示出发展为乳腺癌和其它癌症的高生命风险。在突变载体中出现的肿瘤通常丧失野生型等位基因，且不表达功能性BRCA-1和BRCA-2蛋白。

因此，这些两种蛋白的丧失导致在由同源重组引起的双链断裂的修复中的肿瘤-特异性功能障碍。已知的是，当PARP-1被抑制时，碱基切除修复减少，在正常细胞周期持续期间产生的单链断裂持续。也已经确定，复制叉遭遇未修复断裂可以形成双链断裂，其通常由同源重组修复。因此，与野生型细胞相比，在同源重组修复(比如BRCA-1和BRCA-2突变体)中缺乏的肿瘤细胞对PARP抑制高度敏感。这与合成致命性的概念一致，其中两种途径单独的缺陷是无害的，但是其组合变为致死的：PARP抑制剂在具有特异性DNA修复缺陷的肿瘤患者中可以更有效，而所述抑制剂没有影响正常的杂合组织。除了表示大部分的遗传性的乳腺癌和卵巢癌的BRCA突变体之外，推定的患者群体还包括重要部分的偶发性癌，其在同源重组修复中具有缺陷，一种被称为“BRCA型”的现象。例如，BRCA-1或FANCF基因的启动子的甲基化和EMSY基因的扩增，所述基因编码BRCA-2相互作用蛋白质。通过延伸PARP与BRCA-1和BRCA-2的合成致死性的推理，很可能在双链断裂修复中不多余的任何基因缺乏应对PARP抑制敏感。例如，在患有T-细胞幼淋巴细胞白血病和B-细胞慢性淋巴细胞白血病和乳腺癌的患者中发现的ATM缺陷，以及在肉瘤、乳腺癌、卵巢癌和脑肿瘤中鉴定的CHK2种系突变，它们在与PARP缺陷以及其它已知的HR途径蛋白(包括RAD51、DSS1、RAD54、RPA1、NBS1、ATR、CHK1、CHK2、FANCD2、FANCA、FANCC和pTEN)中的缺乏相组合的情况下，也显示出是合成致死的。在胰腺癌中已显示出FANCC和FANCG突变。已经发现在卵巢癌、乳腺癌、子宫颈癌、肺癌中FANCF启动子甲基化。BRCA突变癌可以对PARP抑制剂单一治疗敏感的第一临床证据来自于口服小分子PARP抑制剂Olaparib的I期试验初步数据。在富集的BRCA突变载体I期群体中，在19名具有BRCA突变的乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌患者中观察到47％的目标响应速率。目前已知，在II期临床试验中，其它PARP抑制剂、比如Rucaparib和Veliparib组合或作为单一试剂使用。早期指征是这些治疗剂作为单一试剂显示低毒性。无论如何，在慢性治疗计划表方面或在组合应用中，预期对PARP-1具有高选择性的化合物会显示出更低毒性。

PARP-1也已经涉及血管生成。特别地，PARP-1抑制似乎导致减少转录缺氧-可诱导的因子1α(一种肿瘤细胞适应于缺氧的重要调节因子)的蓄积。

促炎症性刺激触发导致产生过硝酸根和羟基自由基的促炎症性介质的释放，其又产生DNA单链断裂以及随后的PARP-1的激活。PARP-1的过度激活消耗NAD+，且能量储存，最终导致细胞功能障碍和坏死。这种细胞自杀原理已经涉及如下病症的病理机理：中风、心肌局部缺血、糖尿病、糖尿病-相关的心血管功能障碍、休克、创伤性中枢神经系统损伤、关节炎、结肠炎、变应性脑脊髓炎和多种其它形式的炎症。特别感兴趣的是PARP-1增强核因子kB-介导的转录，其在炎症性细胞因子、趋化因子和炎症介质的表达中起重要作用。

在Journal of the Chemical Society,Perkin Transactions1,(1977),(9),959-65中的对氮杂环的研究中，描述了3-苯基-1(2H)-异喹啉酮。具有药理学活性的异喹啉-1(2H)-酮描述在Science of Synthesis(2005),15,839-906中。某些专利申请描述了异喹啉衍生物用于治疗青光眼，EP389995，和用于治疗动脉硬化和高脂蛋白血症，EP591937。申请人为KUDOS PHARM的WO2002090334描述了异喹啉酮衍生物用于抑制PARP活性。WO2008092292描述了使用2-被取代的(2H)-异喹啉酮治疗与褪黑激素受体相关的病理病症的方法。申请人为NervianoMedical Sciences的WO2010133647描述了作为PARP-1抑制剂的1(2H)-异喹啉酮。前述WO2010133647的某些具体化合物从本发明的通式中排除。

发明内容

本发明提供了新的3-苯基-异喹啉-1(2H)-酮衍生物，其相对于PARP-2来说对PARP-1具有选择性抑制活性，因此用于治疗癌症、心血管疾病、神经系统损伤和炎症。

因此，本发明的第一个目的是提供式(I)的化合物：

其中R和R₁独立地为氢或任选取代的选自下述的基团：直链或支链的C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基和杂环基，或者与它们连接的氮原子一起形成任选取代的杂环；R₂为氢或任选取代的选自下述的基团：直链或支链的C₁-C₆烷基和C₃-C₇环烷基；

R₃为氟、氯、溴、氰基或任选取代的选自下述的基团：直链或支链的C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、多氟代的C₁-C₆烷基、多氟代的C₁-C₆烷氧基、杂环基、芳氧基、芳氨基、C₁-C₆烷基磺酰基；或者R₃可以代表与苯基环稠合的间二氧杂环戊烯基(dioxoyl)、二噁烯基(dioxinyl)或二氧杂环庚烯基(dioxepinyl)环；

R₄为氢或氟，和

当R₄为氢时，n为1至5之间的数字；

当R₄为氟时，n为0至5之间的数字；

或其旋光异构体、互变异构体或可药用盐；

排除下述化合物∶

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(3-氯-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(4-苯氧基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮，

4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(3-甲氧基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮，和

4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(4-甲氧基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮。

本发明还提供通过包括标准合成转化的方法合成如上定义的式(I)的3-苯基-异喹啉-1(2H)-酮衍生物的方法。

如上所述，我们发现了如上文定义的式(I)化合物是有效的和相对于PARP-2来说的选择性PARP-1抑制剂，因此用于治疗癌症、心血管疾病、神经系统损伤和用于抗炎症治疗。因此，本发明还提供一种用于治疗PARP-1蛋白介导的疾病的方法，其包括向需要其的哺乳动物(优选人类)施用有效量的如上定义的式(I)的化合物。

本发明的一种优选方法是治疗由PARP-1蛋白质介导的疾病，选自癌症、心血管疾病、神经系统损伤和炎症。

本发明的另一种优选的的方法是治疗特定类型的癌症，所述癌症包括但不限于癌例如膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、包括小细胞肺癌的肺癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和包括鳞状细胞癌的皮肤癌；淋巴系的造血系统肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性淋巴母细胞白血病、B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤和伯基特氏淋巴瘤；髓系的造血系统肿瘤，包括急性和慢性髓性白血病、骨髓增生异常综合征和早幼粒细胞性白血病；包括纤维肉瘤、尤文氏肉瘤和横纹肌肉瘤的间充质来源的肿瘤；中枢和外周神经系统肿瘤，包括星形细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤和神经鞘瘤；其它肿瘤，包括黑色素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤(keratoxanthoma)、甲状腺滤泡状癌和卡波西肉瘤。

另外，本发明的方法还提供肿瘤血管生成和转移抑制。

本发明的另一个优选的方法是治疗特定类型的心血管疾病，包括但不限于心肌再灌注损伤、心肌病和糖尿病性心血管功能障碍。

本发明的另一个优选的方法是治疗特定类型的中枢神经系统损伤，包括但不限于中风、脑损伤和神经变性障碍。

本发明的另一个优选的方法是治疗特定类型的炎症疾病，包括但不限于结肠炎、关节炎和葡萄膜炎。

本发明进一步提供一种用于选择性抑制PARP-1蛋白活性的体外方法，其包括用有效量的如上定义的式(I)的化合物接触所述蛋白。

而且，本发明提供一种包括式(I)的化合物与放疗或化疗方案组合用于同时、单独或顺续用于抗癌治疗的治疗方法。

本发明还提供一种药物组合物，其包含治疗有效量的式(I)的化合物其可药用盐和至少一种可药用赋形剂、载体或稀释剂。

除了式(I)的化合物之外，本发明的药物组合物可以进一步包含一种或多种化疗剂-例如细胞抑制剂或细胞毒素剂、抗生素类药剂、烷化剂、抗代谢剂、激素剂、免疫剂、干扰素类药剂、环加氧酶抑制剂(例如COX-2抑制剂)、基质金属蛋白酶抑制剂、端粒末端转移酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、抗生长因子受体剂、抗-HER剂、抗-EGFR剂、抗血管发生剂(例如血管发生抑制剂)、法尼基转移酶抑制剂、ras-raf信号转导途径抑制剂、细胞周期抑制剂、其它cdks抑制剂、微管蛋白结合剂、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂等。优选地，化疗剂为烷化剂。甚至更优选地，烷化剂为替莫唑胺。

另外，本发明提供一种包含如上文所定义的式(I)的化合物或其可药用盐以及一种或多种化疗剂的产品，呈用于同时、单独或顺续用于抗癌治疗的联合制剂。优选地，化疗剂为烷化剂。甚至更优选地，烷化剂为替莫唑胺。

在仍然另一个方面，本发明提供如上定义的式(I)的化合物或其可药用盐，用作药物，优选具有抗癌活性的药物。

而且，本发明提供如上文所定义的式(I)的化合物或其可药用盐，用于治疗由PARP-1蛋白质介导的疾病的方法，所述疾病优选地为癌症、心血管疾病、神经系统损伤和炎症。

最终，本发明提供如上文定义的式(I)的化合物或其可药用盐在制备治疗由PARP-1蛋白介导的疾病的药物中的用途。

本发明还提供通过包括标准合成转化的方法制备取代的式(I)的衍生物的合成方法。

如果在本发明的化合物中存在手性中心或异构中心的另一种形式，则本文意欲涵盖这样的异构体的所有形式，包含对映异构体和非对映异构体。含有手性中心的化合物可以采用外消旋混合物，富含对映体的混合物或外消旋混合物可以通过熟知的技术分离，可以单独使用独立的对映体。在其中具有不饱和的碳-碳双键的化合物的实例中，顺式(Z)和反式(E)异构体均在本发明的范围之内。

术语式(I)化合物的“可药用盐”指那些保留母体化合物的生物学有效性和性质的盐。这样的盐包括与无机酸或有机酸形成的酸加成盐，所述无机酸比如盐酸、氢溴酸、硝酸、磷酸、硫酸、高氯酸等，所述有机酸比如乙酸、抗坏血酸、三氟乙酸、丙酸、羟乙酸、(D)或(L)乳酸、(D)或(L)苹果酸、草酸、富马酸、马来酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、苯甲酸、对甲苯磺酸、水杨酸、肉桂酸、扁桃酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸、羟乙磺酸和丙二酸。

式(I)的化合物的可药用盐也包括与无机碱或有机碱形成的盐，所述碱例如碱金属或碱土金属，特别是钠、钾、钙、铵或镁的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐，非环状或环状胺类，优选甲胺、乙胺、二乙胺、三乙基胺、哌啶等。

除非另有说明，当涉及式(I)化合物本身以及其任何药物组合物或任何包括它们的治疗性时，本发明包括本发明化合物的所有异构体、互变异构体、水合物、溶剂合物、络合物、载体、N-氧化物和可药用盐。

在其中化合物可以以互变异构体的形式，比如酮-烯醇互变异构体存在的情形下，考虑将各互变异构体的形式包括在本发明之内，无论其是否存在于平衡状态或主要以一种形式存在。

对于术语“卤素”，我们指氟、氯、溴或碘原子。

对于术语“直链或支链C₁-C₆烷基”，我们指比如例如甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正-丁基、异丁基、叔-丁基、仲-丁基、正-戊基、正-己基等的任何基团。

对于术语“C₂-C₆烯基”，我们指含有至少一个碳-碳双键且可以是直链或支链的脂族的C₂-C₆烃链。代表性的实例包括，但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-或2-丁烯基等。

对于术语“C₂-C₆炔基”，我们指含有至少一个碳-碳三键且可以是直链或支链的脂族的C₂-C₆烃链。代表性的实例包括，但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-或2-丁炔基等。

对于术语“直链或支链C₁-C₆烷氧基”，我们指比如例如甲氧基、乙氧基、正-丙氧基、异丙氧基、正-丁氧基、异丁氧基、叔-丁氧基、仲-丁氧基、正-戊氧基、正-己氧基等。

对于术语“C₃-C₇环烷基”，除非另有说明，我们指3-至7-元全碳(all-carbon)单环，其可以含有一个或多个双键，但不含有完全共轭的π-电子系统。环烷基非限制性的实例是但不限于环丙烷、环丁烷、环戊烷、环戊烯、环己烷、环己烯和环己二烯。

对于术语“杂环基”，我们指3-至8-元饱和的或部分不饱和的碳环，其中一个或多个碳原子被选自氮、氧或硫的杂原子替代。杂环基的非限制性实例是例如吡喃、吡咯烷、吡咯啉、咪唑啉、咪唑烷、吡唑烷、吡唑啉、噻唑啉、噻唑烷、二氢呋喃、四氢呋喃、1,3-二噁烷、哌啶、哌嗪、吗啉等。

术语“芳基”指具有1至4个环系统的单-、二-或多-碳环烃，所述环系统任选地进一步相互稠合或通过单键连接，其中至少一个碳环是“芳族的”，其中术语“芳族的”意指完全共轭的π-电子键系统。这样的芳基的非限制性实例是苯基、α-或β-萘基或联苯基基团。

如本文使用的术语“杂芳基”指芳族的杂环，通常是具有1至3个选自N、O或S的杂原子的5-至8-元杂环；杂芳基环可以任选地进一步稠合或连接至芳族的和非芳族的碳环和杂环。这样的杂芳基的非限制性实例是，例如吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吲哚基、咪唑基、噻唑基、异噻唑基、吡咯基、苯基-吡咯基、呋喃基、苯基-呋喃基、噁唑基、异噁唑基、吡唑基、噻吩基、苯并噻吩基、异二氢吲哚基、苯并咪唑基、吲唑基、喹啉基、异喹啉基、1,2,3-三唑基、1-苯基-1,2,3-三唑基、2,3-二氢吲哚基、2,3-二氢苯并呋喃基、2,3-二氢苯并噻吩基；苯并吡喃基、2,3-二氢苯并噁嗪基、2,3-二氢喹喔啉基等。

对于术语“氰基”，我们指-CN残基。

对于术语“硝基”，我们指-NO₂基团。

对于术语“链烯基”或“炔基”，我们指载有一个双键或三键的任何前述的直链或支链的C₂-C₆烷基。本发明的链烯基或炔基的非限制性实例为例如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、1-己烯基、乙炔基、2-丙炔基、4-戊炔基等。

对于术语“多氟代烷基”或“多氟代烷氧基”，我们指任何上述直链或支链C₁-C₆烷基或烷氧基，其被多于一个氟原子取代，比如例如，三氟甲基、三氟乙基、1,1,1,3,3,3-六氟丙基、三氟甲氧基等。

对于术语“羟烷基”，我们指任何含有羟基的上述C₁-C₆烷基，比如例如羟甲基、2-羟乙基、3-羟丙基等。

通过所有如上描述，对于本领域技术人员显而易见的是，任何名称为复合名称的基团应当指由由衍生该基团的部分按惯例解释，例如，芳基氨基为进一步被芳基取代的氨基基团，其中芳基如上定义。

同样，任何术语，比如例如芳氧基、烷硫基、烷基氨基、二烷基氨基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、杂环基羰基、杂环基羰基氨基、环烷基氧基羰基等包括其中烷基、烷氧基、芳基、C₃-C₇环烷基和杂环基部分如上文定义的基团。

当R₃代表与苯基环稠合的间二氧杂环戊烯基、二噁烯基或二氧杂环庚三烯基环时，其指式(I)的化合物预期为如下描述的：

根据本发明且除非另有说明，否则任何R-R₄基团可以以其任何游离状态任选地被一个或多个基团取代，例如1至6个独立地选自下述的基团：卤素、硝基、氧代基(＝O)、氰基、C₁-C₆烷基、多氟代烷基、多氟代烷氧基、C₂-C₆链烯基、C₂-C₆炔基、羟烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环基、杂环烷基、C₃-C₇环烷基、羟基、烷氧基、芳氧基、杂环基氧基、亚甲基二氧基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、环烯氧基、杂环基羰氧基、亚烷基氨基氧基、羧基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、环烷氧基羰基、杂环基烷氧基羰基、氨基、脲基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、杂环基氨基、甲酰基氨基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、杂环基羰基氨基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、方剂氨基羰基、杂环基氨基羰基、烷氧基羰基氨基、羟氨基羰基烷氧基氨基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、杂环基磺酰基氨基、甲酰基、烷基羰基、芳基羰基、环烷基羰基、杂环基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基磺酰基、烷基氨基磺酰基、二烷基氨基磺酰基、芳基氨基磺酰基、杂环基氨基磺酰基、芳硫基、烷硫基、膦酸酯和烷基膦酸酯。反过来，当合适时，每个上述取代基可以进一步被1个或多个前述基团取代。

优选地，本发明提供如上定义的式(I)的化合物，特征在于

R和R₁独立地为氢或任选取代的选自下述基团：直链或支链的C₁-C₆烷基，或者与它们连接的氮原子一起形成任选取代的杂环；R₂为氢或任选取代的直链或支链的C₁-C₆烷基；

R₃为氟、氯、溴、氰基或任选取代的选自下述的基团：多氟代C₁-C₆烷基、杂环基、芳氧基、C₁-C₆烷基磺酰基，以及

当R₄为氢时，n为1至3之间的数字；

当R₄为氟时，n为0至3之间的数字；

更优选地，本发明提供如上定义的式(I)的化合物，特征在于

R和R₁独立地为氢或任选取代的直链或支链的C₁-C₆烷基；

R₃为氟、氯、溴、氰基或任选取代的选自下述的基团：多氟代C₁-C₆烷基、杂环基、C₁-C₆烷基磺酰基，以及

当R₄为氢时，n为1至2之间的数字；

当R₄为氟时，n为0至2之间的数字。

特别地，根据本发明的优选的化合物(cpd.)为下列的：

1.4-(2-氨基-乙氧基)-3-(4-溴-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

2.4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(3-三氟甲基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮，

3.4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(4-吗啉-4-基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮，

4.4-(2-氨基-乙氧基)-3-(3-溴-4-吗啉-4-基-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

5.4-(2-氨基-乙氧基)-3-(3-溴-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

6.4-[4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-3-基]-苄腈,

7.4-(2-氨基乙氧基)-7-氟-3-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮，

8.4-(2-氨基-乙氧基)-3-(4-氯-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

9.4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(4-甲烷磺酰基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮，

10.4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(4-氟-苯基)-2H-异喹啉-1-酮，

11.3-[4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-3-基]-苄腈,

12.4-(2-氨基-乙氧基)-3-(4-溴-苯基)-7,8-二氟-2H-异喹啉-1-酮，

13.4-(2-氨基-乙氧基)-3-(4-氯-3-甲基-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

14.4-(2-氨基-乙氧基)-3-(3,4-二氯-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

15.4-(2-氨基-乙氧基)-3-(3,4-二氟-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

16.5-[4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-3-基]-2-吗啉-4-基-苄腈,

17.5-[4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-3-基]-2-吡咯烷-1-基-苄腈,

18.4-(2-氨基-乙氧基)-3-(3-溴-4-吡咯烷-1-基-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

19.4-(2-氨基-乙氧基)-3-(2,3-二氢-苯并[1,4]二噁烯(dioxin)-6-基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

20.4-(2-氨基-乙氧基)-3-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯(dioxol)-5-基-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

21.4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮，

22.4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(4-三氟甲氧基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮，和

23.4-(2-氨基-乙氧基)-3-(3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]二氧杂环庚三烯基-7-基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮.

本发明还提供用于制备如上定义的式(I)的化合物的方法。可以根据此后在方法A和方法B中描述的一般合成过程制备式(I)的化合物。

方法A

因此，本发明的方法包括下述步骤∶

步骤1)用式PG-X(III)的化合物保护式(II)的化合物∶

其中R₃和R₄为如上定义的，其中PG为合适的保护基，X为合适的离去基团；

步骤2)重排得到的式(IV)的化合物∶

其中R₃、R₄和PG为如上定义的；

步骤3)用式(VI)的化合物

其中R₂为如上定义的；R’和R₁’分别具有与R和R₁相同的含义，但是也可以独立地为COOR₆，其中R₆为任选取代的直链或支链的C₁-C₆烷基，例如叔丁基，或任选取代的直链或支链的芳基-C₁-C₆-烷基，例如苄基；R₅代表合适的基团，比如卤素如溴、氯或碘、对-甲苯磺酸根、甲烷磺根、三氟甲烷磺酸根或羟基；

烷基化得到的式(V)的化合物∶

其中R₃、R₄和PG为如上定义的，

步骤4)使得到的式(VII)的化合物脱保护：

其中R’、R₁’、R₂、R₃、R₄和PG为如上定义的，以便获得如上定义的式(I)的化合物，任选地通过已知的化学反应将式(I)的化合物转化为式(I)的不同化合物；和/或将式(I)的化合物转化成其可药用盐，或将该盐转化成游离的式(I)的化合物。

下述方案1阐述了根据本发明的方法(方法A)的步骤顺序：

根据该方法的步骤1，在甲苯、苯、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、乙腈(ACN)、乙酸乙酯(EtOAc)、四氢呋喃(THF)、二噁烷等的合适的溶剂中，在0℃至回流的温度范围，如上定义的式(II)的化合物与式(III)的化合物反应，其中PG是保护基比如甲基、1-苯基乙基、对-甲氧基苄基、苄基等，以得到如上定义的式(IV)的化合物。

根据该方法的步骤2，在溶剂比如异丙醇、乙醇、甲醇等中，如上定义的式(IV)的化合物在常规条件或在微波照射下加热，以提供如上定义的式(V)的化合物。可以按照如在Schenker,K.Helv.Chim.Acta1968,51,413-21；or in Wang,S.et al.,J.Bioorg.Med.Chem.Lett.2002,12,2367-2370中描述的进行重排。

根据该方法的步骤3，在0℃至回流的温度范围下，在合适的溶剂比如DMF、DMA、ACN、丙酮、甲醇、乙醇、THF、二噁烷、二氯甲烷(DCM)等中，在合适的碱比如碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯、碳酸氢钠或碳酸氢钾、三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、氢化钠或氢化钾等的存在下，使如上定义的式(V)的化合物与如上定义的式(VI)的化合物反应，得到如上定义的式(VII)的化合物。当R₅为溴时，优选地在室温下(RT)下在作为溶剂的DMA中，使用碳酸铯作为碱进行反应。当R₅为羟基时，优选地在0℃至RT的温度范围下，在合适的溶剂比如THF、DMF、DCM、甲苯、苯等中，在合适的试剂比如例如二乙基偶氮基二羧酸酯(DEAD)、二异丙基偶氮基二羧酸酯(DIAD)、二叔丁基偶氮基二羧酸酯(DBAD)、1,1’-(偶氮基二羰基)二哌啶(ADDP)以及试剂比如例如三甲基膦、三叔丁基膦、三苯基膦等的存在下进行反应。

根据该方法的步骤4，可以根据PG、R’和R₁’基团的性质，以一个步骤或两个步骤，进行如上定义的式(VII)的化合物的最后脱保护，得到如上定义的式(I)的化合物。

例如，当PG为苄基、对-甲氧基苄基或甲基且式(VII)的化合物的R’和R₁’基团的至少一个为酸不稳定的氮保护基比如叔丁氧基羰基等时，内酰胺和氨基的脱保护同时进行，并且通过在酸性条件下，优选地在RT至回流的温度范围下，在合适的溶剂比如DCM、二氯乙烷、二噁烷、低级醇比如甲醇或乙醇中，在无机酸或有机酸比如TFA、盐酸或甲烷磺酸、三溴化硼或三氯化铝的存在下，可以除去这些保护基得到如上定义的式(I)的化合物。

可选地，当PG为苯甲基且式(VII)的化合物的R’和R₁’基团的至少一个为氮保护基比如苄氧基羰基等时，内酰胺和氨基的脱保护同时进行，并且通过在合适的溶剂比如乙醇、甲醇、EtOAc、或其混合物中，在还原条件下，比如例如在氢或质子源比如例如甲酸、甲酸铵、环己烯、1,4-环已二烯和1,3-环已二烯及氢化催化剂下，可以除去这些保护基得到如上定义的式(I)的化合物，其中所述催化剂通常为金属，最通常为钯衍生物比如例如钯碳、氢氧化钯或钯黑。

可选地，当PG为苯甲基且式(VII)的化合物的R’和R₁’基团的至少一个为氮保护基比如甲氧基羰基、乙氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基等时，通过首先在RT至回流的温度范围下，在合适的溶剂比如甲醇、乙醇、水、DMF、DMA等中，在碱性条件比如例如碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯、氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化钡、肼、哌啶、吗啉等下除去这些保护基团，然后在如上所述的酸性或还原条件下除去苯甲基(PG)或反之亦然，可以获得如上定义的式(I)的化合物。

方法B

因此，本发明的方法包括下述步骤∶

步骤3’)用式(VIa)的化合物：

其中R、R₁、R₂和R₅为如上定义的，

烷基化式(V’)的化合物，

其中R₃和R₄为如上定义的，从而得到如上定义的式(I)的化合物；

或

步骤3”)用式(VIb)的化合物烷基化如上定义的式(V’)的化合物，

其中R₂和R₅为如上定义的，R’和R₁’中的一个或两个为COOR₆，其中R₆为如上定义的；

步骤4’)使得到的式(VIII)的化合物脱保护：

其中R₂、R₃和R₄为如上定义的，R’和R₁’的一个或两个为COOR₆，其中R₆为如上定义的，从而得到如上定义的式(I)的化合物，任选地，通过已知化学反应将式(I)的化合物转化成不同的式(I)的化合物；和/或将式(I)的化合物转化成其可药用盐，或将盐转化成单体形式的式(I)的化合物。方案2阐述了根据本发明的方法(方法B)的步骤顺序。

根据该方法的步骤3’且类似于方法A的步骤3，在0℃至回流的温度范围下，在合适的溶剂[比如DMF、DMA、ACN、丙酮、甲醇、乙醇、THF、二噁烷、二氯甲烷(DCM)等]中，在合适的碱[比如碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯、碳酸氢钠或碳酸氢钾、三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、氢化钠或氢化钾等]的存在下，使如上定义的式(V’)的化合物与如上定义的式(VIa)的化合物反应，得到如上定义的式(I)的化合物。当R₅为溴时，优选地在室温下(RT)下，在作为溶剂的DMA中，使用碳酸铯作为碱进行反应。当R₅为羟基时，优选地在0℃至RT的温度范围下，在合适的溶剂[比如THF、DMF、DCM、甲苯、苯等]中，在合适的试剂[比如例如二乙基偶氮基二羧酸酯(DEAD)、二异丙基偶氮基二羧酸酯(DIAD)、二叔丁基偶氮基二羧酸酯(DBAD)、1,1'-(偶氮基二羰基)二哌啶(ADDP)]以及试剂[比如例如三甲基膦、三叔丁基膦、三苯基膦等]的存在下进行反应。

根据该方法的步骤3”且类似于步骤3’，在与上述相同的条件下，使如上定义的式(V’)的化合物与载有至少一个COOR₆氮保护基的式(VIb)的化合物反应。

根据该方法的步骤4’，可以根据R₆基团的性质，以进行如上定义的式(VIII)的化合物的最后脱保护，得到如上定义的式(I)的化合物。

例如，当COOR₆为酸不稳定的氮保护基(比如例如叔丁氧基羰基)时，可以优选地在RT至回流的温度范围下，在合适的溶剂(比如DCM、二氯乙烷、二噁烷、低级醇比如甲醇或乙醇)中，在无机酸或有机酸(比如TFA、盐酸或甲烷磺酸、三溴化硼或三氯化铝)的存在下将其除去。

可选地，当COOR₆为碱不稳定的氮保护基(比如例如9-芴基甲氧基羰基)时，可以优选地在RT至回流的温度范围下，在合适的溶剂(比如甲醇、乙醇、水、DMF、DMA等)中，在碱性条件(比如例如碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯、氢氧化钠、氢氧化钡钾或氢氧化钡、肼、哌啶、吗啉等)下将其除去。

可选地，当COOR₆为氮保护基比如例如苄氧基羰基基团时，可以在RT至回流的温度范围下，在合适的溶剂(比如乙醇、甲醇、EtOAc或其混合物等)中，在氢或质子源(比如例如甲酸、甲酸铵、环己烯、1,4-环已二烯和1,3-环已二烯)及氢化催化剂的存在下，将其除去，其中所述催化剂通常为金属，最通常为钯衍生物比如例如钯碳、氢氧化钯或钯黑。

如有必要或需要，所述方法包括通过已知化学反应将式(II)或式(IV)或式(V)或式(VII)或式(V’)或式(VIII)的化合物分别转化成式(II)或式(IV)或式(V)或式(VII)或式(V’)或式(VIII)的化合物。

用于将式(I)或式(II)或式(IV)或式(V)或式(VII)或式(V’)或式(VIII)的化合物分别转化成式(I)或式(II)或式(IV)或式(V)或式(VII)或式(V’)或式(VIII)的化合物的已知化学反应为例如∶

转化A)∶将其中R₃为卤素的如上定义的式(I)或式(II)或式(IV)或式(V)或式(VII)或式(V')或式(VIII)的化合物分别转化成其中R₃为氰基的式(I)或式(II)或式(IV)或式(V)或式(VII)或式(V')或式(VIII)的化合物。

转化B)∶将其中R₃为卤素的如上定义的式(I)或式(II)或式(IV)或式(V)或式(VII)或式(V')或式(VIII)的化合物分别转化成其中R₃为杂环基的式(I)或式(II)或式(IV)或式(V)或式(VII)或式(V')或式(VIII)的化合物。

转化C)∶将其中R和R₁的至少一个为氢的如上定义的式(I)或式(VII)的化合物分别转化为其中R和R₁为如上定义的但不同时为氢原子的式(I)或式(VII)的相应化合物。

转化D)∶将其中R₃为氢的如上定义的式(I)的化合物转化成其中R₃为卤素的式(I)的相应化合物。

所有上述方法是类似的方法，其可以根据众所周知的方法和在本领域已知的适宜条件下，例如根据在：Smith,Michael-March’sAdvanced Organic Chemistry：reactions mechanisms and structure-6^thEdition,Michael B.Smith和Jerry March,John Wiley&Sons Inc.,New York(NY),2007中的报道进行。

根据转化A，在RT(室温)至回流的温度范围下，在合适的溶剂比如例如DMF、DMA、ACN、二噁烷、N-甲基吡咯烷酮等中，任选地在钯催化剂比如例如双乙酸钯(II)、四(三苯基膦)钯(0)、三(双亚苄基丙酮)双钯(0)等的存在下；任选地在合适的配体比如例如2-二环己基膦基-2’,4’,6’-三异丙基二联苯基、三-叔丁基膦四氟化碳等的存在下；任选地在金属锌的存在下；任选地在合适的碱比如例如碳酸钠或碳酸铯等的存在下，通过用氰化物源比如例如氰化铜(I)、氰化锌、亚铁氰化钾等处理，可以将其中R₃为卤素的式(I)或式(II)或式(IV)或式(V)或式(VII)或式(V’)或式(VIII)的化合物分别转化为其中R₃为氰基的式(I)或式(II)或式(IV)或式(V)或式(VII)或式(V’)或式(VIII)的相应化合物。

根据转化B，在RT至回流的温度范围下，在合适的溶剂比如例如DMF、DMA、ACN、二噁烷、N-甲基吡咯烷酮、甲苯等中，在钯催化剂比如例如双乙酸钯(II)、四(三苯基膦)钯(0)、三(双亚苄基丙酮)双钯(0)等；合适的碱，比如例如叔丁氧化钠、碳酸钠或碳酸铯等，并且在合适的配体比如例如2-(二叔丁基膦基)-联苯基等的存在下，通过用杂环比如例如哌啶和吡咯烷处理，可以将其中R₃为卤素的式(I)或式(II)或式(IV)或式(V)或式(VII)或式(V’)或式(VIII)的化合物分别转化为其中R₃为杂环基的式(I)或式(II)或式(IV)或式(V)或式(VII)或式(V’)或式(VIII)的相应化合物。

根据转化C，在0℃至RT的温度范围下，在合适的溶剂比如甲醇、乙醇、DCM、乙酸、DMF等中，在还原剂比如三乙酰氧基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化四甲铵、氰基硼氢化钠、硼氢化钠、锌的存在下，任选地在质子酸比如TFA、盐酸、乙酸、甲酸等的存在下，或者在路易斯酸比如氯化锌、溴化锌、氯化锡(IV)、氯化钛(IV)、三氟化硼等的存在下，通过起始原料与合适的醛或酮反应，可以将其中R’和R₁’基团的一个或两个为氢的、如上定义的式(I)或式(VII)的化合物分别转化成其中R和R₁为如上定义的但不同时为氢原子的、式(I)或式(VII)的相应化合物。

根据转化D，在RT至回流的温度范围下，在合适的溶剂比如乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、二噁烷、四氢呋喃、二甲亚砜、乙酸、水中，通过用亲电卤素源如例如N-溴代琥珀酰亚胺、N-氯代琥珀酰亚胺、N-碘代琥珀酰亚胺、吡啶鎓氢溴酸盐过溴化物、溴、碘、氢溴酸/过氧化氢处理约1小时到约96小时的不同时间段，可以将其中R₃为氢的、如上定义的式(I)的化合物分别转化成其中其中R₃为卤素的式(I)的相应化合物。

通过所有如上所述，对本领域技术人员显然的是，任何式(I)的化合物预期包括在本发明的范围之内，所述式(I)的化合物载有官能团，所述官能团可通过根据本领域众所周知的方法操作，进一步成为另一个官能团，因而产生另一个式(I)的化合物。

根据制备式(I)化合物的方法的任何变体，起始原料和任何其它反应物是已知的或根据已知方法易于制备的。特别地，式(III)、(VI)、(VIa)和(VIb)的化合物是市售可获得的或可以根据已知的方法制备，式(II)和(V’)的化合物可以根据WO2010133647制备。

通过所有如上所述，对本领域技术人员显然的是，当根据任何前述方法的改变方式制备式(I)的化合物时，起始原料或其中间体的可以引起不期望副反应的任选的官能团需要根据常规方法适当地保护。同样地，这些后者向脱保护的化合物的转化可以根据已知方法进行，例如在：Greene,Theodora W.and Wuts,Peter G.M.–ProtectiveGroups in Organic Synthesis,Third Edition,John Wiley&Sons Inc.,New York(NY),1999中描述的方法。

如容易理解的，如果根据该上述方法制备的式(I)的化合物作为异构体的混合物获得，则使用常规技术将它们分离为式(I)的单个异构体，这在本发明的范围之内。

外消旋体拆分的常规技术包括，例如非对映异构的盐衍生物的分型级结晶或制备型手性HPLC等。用于分离含有一个或多个不对称中心的化合物的一般方法报道在例如∶Jacques,Jean；Collet,André；Wilen,Samuel H.,Enantiomers,Racemates,and Resolutions,JohnWiley&Sons Inc.,New York(NY),1981中。

此外，也可以根据本领域普遍已知的组合化学技术制备本发明的式(I)的化合物，例如通过以平行和/或系列方式和通过在固相合成(SPS)条件下操作完成前述中间体间的反应。

药理学

PARP-1是DNA损伤-诱导聚合酶，其催化NAD+裂解成烟酰胺和ADP-核糖，然后将后者用于合成支链的类核-酸聚合物[聚(ADP-核糖)]。体内最丰富的聚(ADP-核糖基化的)蛋白质是PARP-1本身，其次是组蛋白类。PARP-1负责90％的这种DNA损伤-诱导活性，而其余的10％由PARP-2负责。

生物化学测定

在置换测定中评价测试化合物的亲和力和它们相对于感兴趣的不同PARP同工型的选择性。

鉴定能够结合几种PARP蛋白的化合物是通过包括下述步骤的筛选方法进行的：

a)提供反应混合物，其含有：

研究中的PARP蛋白亚型，

式(IP)的化合物：

其中R₇为氢原子或甲基，B为(CH₂)_m-NH基团，其中m为2至6；p为0或1，并且X-为抗衡离子，和

连续稀释液测试化合物；

b)比较在不存在测试化合物下产生的偏振信号与在存在不同浓度的测试化合物下产生的偏振信号，和

c)评价测试化合物置换如上定义的式(IP)的化合物的能力，其由于荧光偏振水平降低指示。

优选地，对于上述述及的筛选方法，将PARP蛋白和式(IP)的5H-菲啶-6-酮衍生的探针预混合，或者将PARP蛋白与该测试化合物预混合。在一个进一步优选的筛选方法中，PARP蛋白为PARP-1和PARP-2。术语“PARP蛋白”涵盖全长天然蛋白质及其片段。更优选地，R₇为氢或甲基，p为0或1；当p为1、m为3或6时，X-为三氟醋酸根。根据其结合PARP蛋白的能力，选择5H-菲啶-6-酮-衍生的探针(IP)，两者都包括全长天然蛋白质及其片段。

可以通过例如平板读数器比如Saphire2(Tecan)测量偏振信号。使用该测定来试验本发明的化合物。式(I)的试验化合物的置换能力与化合物对酶的NAD口袋的亲和力相关。在该测定中使用的特定式(IP)的探针为∶

P1.9-二甲基氨基-11,11-二甲基-1-(3-{甲基-[(6-氧代-5,6-二氢-菲啶-2-基氨基甲酰基)-甲基]-氨基甲酰基}-丙基)-2,3,4,11-四氢-萘并[2,3-g]喹啉鎓三氟乙酸盐；

P2.9-二甲基氨基-11,11-二甲基-1-[3-(3-{[(6-氧代-5,6-二氢-菲啶-2-基氨基甲酰基)-甲基]-氨基}-丙基氨基甲酰基)-丙基]-2,3,4,11-四氢-萘并[2,3-g]喹啉鎓三氟乙酸盐；

P3.9-二甲基氨基-11,11-二甲基-1-[3-(3-{[(6-氧代-5,6-二氢-菲啶-2-基氨基甲酰基)-甲基]-氨基}-己基氨基甲酰基)-丙基]-2,3,4,11-四氢-萘并[2,3-g]喹啉鎓三氟乙酸盐。

如上定义的式(IP)的化合物可以如在WO2010133647中描述的制备。

该测定是基于使用式(IP)的探针，其结合NAD结合口袋且利用当探针结合至PARP-1和PARP-2时观察到偏振信号的显著变化。式(IP)的探针结合全长PARP-1和PARP-2的能力和试验确证之前已经报道在WO2010133647中。

可以如WO2010133647中所述测定试验化合物的亲和力结合常数(KD)和/或DC₅₀。

使用该测定(其使用探针P1或探针P3)评价式(I)的化合物的生物化学效力，如表1中报道的。

表1

*采用化合物P3作为探针进行测定。在所有其它情形中，使用化合物P1作为探针。

基于拟合误差的测定灵敏度极限＜50％。

从上述数据可见，对本领域技术人员显而易见的是本发明的式(I)的化合物作为PARP-1抑制剂是高度有效的，且相对于PARP-2而言具有极高选择性(比较上表1中PARP-1、PARP-2和PARP-3DC₅₀和Kd值)。

细胞学测定

PAR测定

通过测量对在HeLa细胞(ECACC)中过氧化氢诱导的PAR形成的抑制，评价PARP-1抑制剂的细胞活性。细胞的PAR水平采用免疫细胞化学进行测量并使用ArrayScan vTi仪器(Cellomics ThermoScientific)进行定量。

研究如下实施：将6000细胞/孔接种在96孔板中(Perkin Elmer)的MEM/10％FCS中，在37℃、5％二氧化碳中培养24小时。然后以30'为期限加入所需浓度的试验化合物。然后，通过加入0.1mM浓度的过氧化氢诱发DNA损伤，进行15min。在MEM/10％FCS中采用在二甲亚砜(DMSO)中的化合物贮备液制备浓度曲线，最终DMSO浓度是0.002％(v/v)。采用20μM的典型最高化合物浓度并连续以1∶3稀释，在各浓度点制备双份孔。将板干燥，并在室温下加入冷甲醇/丙酮(70∶30)溶液固定15min；吸出固定溶液，风干各孔5min，然后在PBS中脱水。通过在含有5％(w/v)FBS0.05％Tween20的PBS中培养各孔30min，阻断非特异性结合位点。然后在室温下，在PBS中培养各孔1小时，所述PBS包含在阻断(blocking)溶液中以1∶200稀释的抗PAR小鼠单克隆抗体(Anti-PAR，Mouse mAb10H、TulipCat N°1020)。在PBS中洗涤3次之后，在PBS(w/v)5％FBS0.05％Tween20中培养各孔，所述PBS(w/v)5％FBS0.05％Tween20含有2μg/ml Cy2-共轭的山羊抗小鼠二级抗体(Amersham PharmaciaBiotech cat.N°PA42002)(最大吸收489nm，最大荧光506nm)和1μg/mlDAPI(最大吸收359nm，最大荧光461nm)(4',6-二脒基-2-苯基吲哚双乳酸盐)(Sigma cat.N°D9564)，一种用于核苷酸染色的高敏感性染料。在PBS中再洗涤3次之后，如下评价细胞的PAR免疫反应性：使用具有Zeiss10X0.5N.A.目镜的ArrayScan vTi仪器，并采用具有XF100过滤器的Cytotoxicity.V3algorithm(Cellomics/Thermo Fisher)。各孔读取至少10个视野，对应于至少900个细胞。IC₅₀值表示化合物浓度，在该浓度细胞的PAR信号与未处理的对照组相比减少50％。

使用下式：

IC₅₀＝底部+(顶部-底部)/(1+10^((LogEC₅₀-X)))；

X为浓度的对数。IC₅₀为响应值；IC₅₀由底部开始且以S形到达顶部。

在上述测定中，本发明的式(I)的化合物抑制PAR形成，其IC₅₀值低于1μM，如表2所述，其中将其与参考化合物A4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(4-苯氧基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮进行比较，该参比化合物描述在专利申请WO2010133647中且对应于本专利申请中放弃的第二个化合物。

表2

菌落形成测定

MDA-MB-436乳腺癌BRCA-1突变细胞在补充有10％胎牛血清的RPMI培养基中以600细胞/cm²的密度生长。二十四小时之后，以10μM浓度开始加入不同剂量的化合物，一式两份。十天之后，将细胞固定，并用结晶紫染色。使用红外扫描器(Odyssey Li-Cor)计数菌落。使用Prism计算抗增殖的IC₅₀。

药代动力学

在ad hoc药代动力学研究中采用小鼠(Balb，Nu/Nu，Harlan，Italy)，研究化合物的药代动力学性质和口服生物利用度。针对静脉内推注(bolus)给药，在10％吐温80/葡萄糖中配制化合物，而使用在0.5％甲基纤维素中配制的化合物进行口服给药。给予10mg/kg剂量的单次给药，针对各途径使用3只雄性动物。在静脉内给药之后5min、30min、1h、3h、6h、24h和在口服给药之后15min、30min、1h、3h、6h、24h，从后眼眶静脉(retro-orbital vein)取所有血样。通过将200μl的乙腈加入96孔板中20μl的血浆，进行血浆蛋白沉淀，制备血浆样品。在封盖和涡旋混合之后，将板以4000rpm离心15min。上清液被认为是最终提取物，并被注射入LC-MS-MS系统(UPLC系统：WatersAcquity，使用BEH C1850*2.1mm1.7μm分析柱；MS仪器：WatersTQD，装有电子喷雾源，以阳离子方式操作)。定量下限是5.0ng/ml，定量上限是5000ng/ml。使用无房室法(线性梯形法则和线性回归分析自然对数-转化的血浆浓度vs.时间数据)。根据平均的口服给药-标准化的血浆AUC(曲线下面积)值与IV(静脉内)给药-标准化的血浆AUC(曲线下面积)值的比率，计算绝对生物利用度(F)。

本文使用的缩写具有下述含义：

AUC(在血浆浓度vs.时间曲线下直至最后一次检测浓度的面积)

Cl(血浆清除率)

Cmax(最大血浆浓度)

T1/2(未端半衰期)

Vdss(稳态分布体积)

评价某些代表性的式(I)化合物的药物动力学参数，以平均值的形式在下表3中报告。

表3

根据上述，对本领域技术人员显然是，式(I)的化合物具有良好至优益的药代动力学性质和口服生物利用度。

体内功效研究

依照涉及保护用于试验或其它科学目的的动物的EuropeanCommunities Council Directive第86/609/EEC号，将CD1，athymicNu/Nu雄性小鼠，来自Charles River(Italy)，饲养在具有滤纸盖子、食物和灭菌垫层及酸化水的笼子中。皮下移植Capan-1人胰腺癌肿瘤的片段。选择携带可触及的肿瘤(100-200mm³)的小鼠，并将其随机分入对照组和治疗组。各组包括7只动物。在随机分组之后一天开始治疗。采用甲基纤维素(methocel)悬浮液的形式通过口服途径给药式(I)的化合物。在试验期间通过测径器定期测量肿瘤尺寸，并且如在Simeoni M.et al.，Cancer Res64，1094-1101(2004)中描述的计算肿瘤质量。根据如下方程计算肿瘤生长抑制(TGI，％)：％TGI＝100-(治疗组的平均肿瘤重量/对照组的平均肿瘤重量)*100。

评价式(I)的代表性化合物cpd.1与替莫唑胺组合对于Capan-1BRCA-2突变小鼠模型的抗肿瘤活性。通过口服途径以每日100mg/kg的剂量给药Cpd.1，连续给药十四天(第1天至第14天)。在第3、4、5、6、7和8天，通过口服途径以50mg/kg的剂量给药替莫唑胺。每3天测量肿瘤生长和体重。通过卡尺评价肿瘤生长。记录两个直径，并且根据下式计算肿瘤重量∶长度(mm)×宽度²/2。以肿瘤的指数生长发作延迟评价抗肿瘤治疗效果(参见文献Anticancer drugs7:437-60,1996)。这种延迟(T-C值)被定义为治疗组(T)和对照组(C)肿瘤达到预定尺寸(1g)所需要时间(以天计)的差异。基于体重减少和动物存活率评价毒性。结果报告在表4中。

表4

*在第1天至第14天，每天进行口服治疗。

**在第3、4、5、6、7和8天每天一次通过口服途径进行治疗。***在第1天至第14天进行cpd.1治疗，在第3、4、5、6、7、8天进行替莫唑胺治疗。

当cpd.1与替莫唑胺组合时，观察到的T-C优于通过单一治疗得到的T-C的简单加合所预期的，表明存在强协同作用。

根据上述，对本领域技术人员显然的是，式(I)的化合物与细胞毒试剂组合具有良好协同肿瘤生长抑制活性。

因此，本发明提供用于治疗的式(I)的化合物。

本发明的式(I)的化合物，适于给药至哺乳动物例如人类，可以通过常见途径和剂量水平给药，这取决于患者的年龄、体重、病症和给药途经。

例如，对于口服给药式(I)的化合物所采用的合适剂量范围可以为每次给药约1至约1000mg，每日给药1至5次。本发明的化合物可以以各种剂型给药，例如口服给药，以片剂、胶囊、糖或膜包衣片、液体溶液或悬浮液；直肠给药，以栓剂形式；肠胃外给药，例如以肌内注射、或静脉内和/或鞘内和/或脊柱内注射或输注的形式。

如上所述，本发明还包括药物组合物，其包含式(I)的化合物或其可药用盐与可药用赋形剂的组合，所述可药用赋形剂可以为载体或稀释剂。

含有本发明的化合物的药物组合物通常是按照常规方法制备的，并且以合适的药物形式给药。例如，固体口服形式可以包含与活性化合物一起的稀释剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、纤维素、玉米淀粉或马铃薯淀粉；润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁或硬脂酸钙、和/或聚乙二醇；粘合剂，例如淀粉、阿拉伯树胶、明胶甲基纤维素、羧甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮；崩解剂，例如淀粉、海藻酸、海藻酸盐或淀粉羟乙酸钠；泡腾混合物；染料；甜味剂；润湿剂，比如卵磷脂、聚山梨酯、月桂基硫酸盐；和药物制剂中通常使用的无毒药理学非活性物质。这些药物制剂可以以已知方式制备，例如利用混合、制粒、压片、包糖衣、或膜包衣工艺。

用于口服给药的液体分散液可以为例如糖浆、乳液和悬浮液。作为一个实例，糖浆可以含有作为载体的蔗糖或蔗糖，与甘油和/或甘露醇和山梨醇。

悬浮液和乳液可以含有作为载体的实例的天然胶、琼脂、海藻酸钠、果胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素或聚乙烯醇。用于肌肉注射的悬浮液或溶液可以含有与活性化合物一起的可药用载体，例如无菌水、橄榄油、油酸乙酯、二醇例如丙二醇，和如果期望合适量的盐酸利多卡因。

用于静脉内注射或输注的溶液可以含有作为载体的无菌水，或者优选地它们可以是无菌、水性、等渗、盐溶液的形式，或者它们可以含有作为载体的丙二醇。

栓剂可以含有与活性化合物一起的可药用载体，例如可可脂、聚乙二醇、聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯表面活性剂或卵磷脂。

具体实施方式

试验部分

当提及本发明的任何特定的式(I)的化合物时，所述化合物任选地以可药用盐的形式存在，参见试验部分和权利要求。参照随后的实施例，使用本文描述的方法或本领域熟知的其它方法，合成本发明的化合物。

本文使用的简写形式和缩略语具有如下含义：

μM(微摩尔)

μL(微升)

μm(微米)

mol(摩尔)

mM(毫摩尔)

mmol(毫摩尔)

nm(纳米)

g(克)

mg(毫克)

ng(纳克)

DC₅₀(最大置换浓度的一半)

IC₅₀(最大抑制浓度的一半)

PAR[聚(ADP-核糖)]

MEM(最小必需培养基)

FCS(胎小牛血清)

FBS(胎牛血清)

PBS(磷酸盐缓冲盐水)

LC-MS(液相色谱-质谱)

HPLC(高效液相色谱)

TLC(薄层色谱)

NMR(核磁共振)

MHz(兆赫兹)

Hz(赫兹)

J(耦合常数)

ppm(百万分之一)

δ(化学位移)

DMSO-d₆(氘代二甲亚砜)

CDCl₃(氘代氯仿)

ACN(乙腈)

EtOAc(乙酸乙酯)

DCM(二氯甲烷)

DMA(N,N-二甲基乙酰胺)

DMF(N,N-二甲基甲酰胺)

THF(四氢呋喃)

TFA(三氟乙酸)

ESI(电喷雾电离)

RT(室温)

R_t(保留时间)

min(分钟)

h(s)[小时]

为了更好地阐述本发明，而不对其形成任何限制，给出下述实施例。

在本文中，在所述方法、方案和实施例中使用的符号和约定与那些同时代的科学文献中使用的一致，所述文献例如the Journal of theAmerican Chemical Society or the Journal of Biological Chemistry。

除非另有说明，所有材料均是从商业供应商得到，为最优级，且没有进一步纯化而使用。比如DMF、THF、DCM和甲苯的无水溶剂是从Aldrich化学公司得到。所有涉及对空气或水分敏感的化合物的反应都是在氮气或氩气气氛下进行。

一般纯化和分析方法

在硅胶(Merck级9395,)上进行快速色谱。

当必需时，通过制备HPLC，在Phenomenex GeminiC18(21×250mm，10μm)柱上或在Waters X Terra RP18(19×100mm，5μm)柱上，使用装有2996PDA检测器和ZQ2000单四极质谱仪的Waters FractionLynx System，纯化化合物，所述ZQ2000单四级杆质谱仪具有电喷雾离子化(正和负模式)。流动相A是0.1％TFA/ACN95/5，流动相B是ACN。梯度为在15min内从10至90％的B，维持90％的B3min。流速20mL/min。可替代地，流动相A是0.05％氢氧化铵/ACN95/5，流动相B是ACN。梯度为在12min内从10至90％的B，维持90％的B2min。流速20mL/min。

在装有电雾化离子源的LCQ DecaXP(Thermo，San Jose,US)离子阱仪器上进行HPLC-MS/UV分析。将质谱仪连接至装有UV光电二极管阵列检测器(UV检测215-400nm)的Surveyor HPLC系统(Thermo,San Jose,US)。使用Phenomenex Gemini C18柱110A50x4.6mm,3μm粒径。流动相A为乙酸铵5mM缓冲液(乙酸，pH5.5)/ACN95/5，流动相B为乙酸铵5mM缓冲液(乙酸，pH5.5)/ACN5/95。梯度为在7分钟内从0至100％B，维持100％B2分钟。流速为1mL/min。注射体积为10μL。保留时间(HPLC R_t)以分钟给出。质量以m/z比例给出。

如之前报道的(M.Colombo,F.R.Sirtori,V.Rizzo,RapidCommun Mass Spectrom2004,18(4),511-517)，在直接连接Agilent1100micro-HPLC系统(Palo Alto,US)的Q-Tof Ultima(Waters,Manchester,UK)质谱仪上获得ESI(+)高分辨率质谱(HRMS)。

¹H-NMR光谱是在28℃的恒温下，在Varian INOVA400光谱仪上记录的，所述Varian INOVA400光谱仪是在400.5MHz下操作且装有5mm z-轴PFG Indirect Detection Probe(¹H{¹⁵N-³¹P})。

¹H化学位移参照残留溶剂信号(DMSO d6，在2.50ppm和在7.27ppm的CDCl₃)。数据报道如下：化学位移(δ)，峰裂数(s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，br.s.＝宽的单峰，td＝双重峰的三重峰，dd＝双二重峰，ddd＝双重峰的双重峰的双重峰，m＝多重峰)，耦合常数(J,Hz)，和质子数。

方法A的起始原料

如WO2010133647中描述的，使用合适的起始原料获得式(II)的下述新化合物：

3-(4-溴-苯基)-7-氟-4H-苯并[f][1,4]氧氮杂(oxazepin)-5-酮。

[(II)，R₃＝4-Br,R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t6.08min.

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm6.94(s,1H),7.20(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝4.6Hz,1H),7.41-7.45(m,3H),7.50(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝3.1Hz,1H),7.57-7.61(m,2H),9.97(br.s.,1H)。

C₁₅H₁₀BrFNO₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：333.9874，实测值：333.9877。

3-(3-溴-苯基)-7-氟-4H-苯并[f][1,4]氧氮杂-5-酮。

[(II)，R₃＝3-Br,R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t6.06min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm6.98(s,1H),7.20(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝4.6Hz,1H),7.34–7.36(m,1H),7.41-7.46(m,1H),7.48-7.52(m,2H),7.56–7.59(m,1H),7.67(t,J＝1.8Hz,1H),9.97(br.s.,1H)。

C₁₅H₁₀BrFNO₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：333.9874，实测值：333.9876。

4-(7-氟-5-氧代-4,5-二氢-苯并[f][1,4]氧氮杂-3-基)-苄腈.

[(II)，R₃＝4-CN,R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t5.16min.

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm7.10(s,1H),7.23(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝4.6Hz,1H),7.42-7.47(m,1H),7.50(dd,J_HF＝8.8,J_HF＝3.3Hz,1H),7.68(d,J＝8.6Hz,2H),7.86(d,J＝8.6Hz,2H),10.05(br.s.,1H)。

C₁₆H₁₀FN₂O₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：281.0721，实测值：281.0725。

3-(4-氯-苯基)-7-氟-4H-苯并[f][1,4]氧氮杂-5-酮。

[(II)，R₃＝4-Cl,R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t6.52min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm6.93(s,1H),7.20(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝4.6Hz,1H),7.41-7.44(m,1H),7.44–7.52(m,5H),9.97(br.s.,1H)。

C₁₅H₁₀ClFNO₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：290.0379，实测值：290.0376。

7-氟-3-(4-甲烷磺酸基-苯基)-4H-苯并[f][1,4]氧氮杂(oxazepin)-5-酮。

[(II)，R₃＝4-SO₂Me,R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t4.60min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm3.23(s,3H),7.08(s,1H),7.23(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝4.6Hz,1H),7.41-7.46(m,1H),7.51(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝3.3Hz,1H),7.75(d,J＝8.4Hz,2H),7.93(d,J＝8.4Hz,2H),10.06(s,1H)。

C₁₆H₁₃FNO₄S[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：334.0544，实测值：334.0546。

7-氟-3-(4-氟-苯基)-4H-苯并[f][1,4]氧氮杂(oxazepin)-5-酮。

[(II)，R₃＝4-F,R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t6.13min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm6.87(s,1H),7.20(dd,J_HF＝8.9,J_HH＝4.5Hz,1H),7.18-7.26(m,2H),7.40-7.45(m,1H),7.48-7.56(m,3H),9.94(br.s.,1H)。

C₁₅H₁₀F₂NO₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：274.0674，实测值：274.0681。

7-氟-3-(3-三氟甲基-苯基)-4H-苯并[f][1,4]氧氮杂-5-酮。

[(II)，R₃＝3-CF₃,R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t6.88min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm7.05(s,1H),7.20(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝4.4Hz,1H),7.41-7.46(m,1H),7.51(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝3.3Hz,1H),7.63(dd,J＝7.7,6.8Hz,1H),7.73(d,J＝7.7Hz,1H),7.80(d,J＝6.8Hz,1H),10.05(br.s.,1H)。

C₁₆H₁₀F₄NO₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：324.0642，实测值：324.0628。

7-氟-3-(4-吗啉-4-基-苯基-4H-苯并[f][1,4]氧氮杂-5-酮。

[(II)，R₃＝4-(吗啉-4-基)，R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t5.32min.

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm3.11–3.15(m,4H),3.70–3.75(m,4H),6.77(s,1H),6.94(d,J＝9.0Hz,2H),7.18(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝4.6Hz,1H),7.32(d,J＝9.0Hz,2H),7.39-7.44(m,1H),7.49(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝3.3Hz,1H),9.82(br.s.,1H)。

C₁₉H₁₈FN₂O₃[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：341.1296，实测值：341.1294。

3-(3-溴-4-吗啉-4-基-苯基)-7-氟-4H-苯并[f][1,4]氧氮杂-5-酮。

[(II)，R₃＝3-Br-4-(吗啉-4-基)，R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t6.03min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm2.95–3.00(m,4H),3.70–3.77(m,4H),6.90(s,1H),7.16(d,J＝8.4Hz,1H),7.20(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝4.6Hz,1H),7.39-7.44(m,1H),7.47(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),7.49(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝3.3Hz,1H),7.68(d,J＝2.2Hz,1H),9.91(br.s.,1H)。

C₁₉H₁₇BrFN₂O₃[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：419.0401，实测值：419.0401。

3-(4-溴-苯基)-6,7-二氟-4H-苯并[f][1,4]氧氮杂-5-酮。

[(II)，R₃＝4-Br,R₄＝F]

HPLC(254nm)：R_t6.55min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm7.05-7.12(m,1H),7.07(s,1H),7.43-7.50(m,2H),7.57-7.62(m,2H),7.60–7.67(m,1H),10.12(br.s.,1H)。

C₁₅H₉BrF₂NO₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：351.9779，实测值：351.9778。

3-(3,4-二氯-苯基)-7-氟-4H-苯并[f][1,4]氧氮杂-5-酮。

[(II)，R₃＝3,4-二氯，R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t6.91min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm¹H NMR(DMSO-d₆)ppm7.03(s,1H),7.20(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝4.6Hz,1H),7.41-7.46(m,1H),7.46–7.52(m,2H),7.66(d,J＝8.4Hz,1H),7.75(d,J＝2.2Hz,1H),9.99(br.s.,1H)。

C₁₅H₉Cl₂FNO₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：323.9989，实测值：323.9992。

3-(4-氯-3-甲基-苯基)-7-氟-4H-苯并[f][1,4]氧氮杂-5-酮。

[(II)，R₃＝4-氯-3-甲基，R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t.6.92min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm2.33(s,3H),6.91(s,1H),7.20(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝4.6Hz,1H),7.32(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.40-7.45(m,2H),7.46–7.52(m,2H),9.93(br.s.,1H)。

C₁₆H₁₂ClFNO₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：304.0535，实测值：304.0540。

3-(3,4-二氟-苯基)-7-氟-4H-苯并[f][1,4]氧氮杂-5-酮。

[(II)，R₃＝3,4-二氟，R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t.5.47min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm6.95(s,1H),7.20(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝4.6Hz,1H),7.32–7.36(m,1H),7.40-7.45(m,1H),7.45-7.51(m,2H),7.57–7.62(m,1H),9.97(br.s.,1H)。

C₁₅H₉ClF₃NO₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：292.0580，实测值：292.0586。

3-(3-溴-4-吡咯烷-1-基-苯基)-7-氟-4H-苯并[f][1,4]氧氮杂-5-酮。

[(II)，R₃＝3-溴-4-吡咯烷-1-基，R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t.7.53min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm1.84–1.90(m,4H),3.30–3.40(m，与水信号重叠，4H),6.82(s,1H),6.93(d,J＝8.8Hz,1H),7.19(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝4.6Hz,1H),7.31(dd,J＝8.8,2.2Hz,1H),7.39-7.44(m,1H),7.49(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝3.3Hz,1H),7.55(d,J＝2.2Hz,1H),9.87(br.s.,1H)。

C₁₉H₁₇BrFN₂O₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：403.0452，实测值：403.0451。

3-(2,3-二氢-苯并[1,4]二噁烯-6-基)-7-氟-4H-苯并[f][1,4]氧氮杂-5-酮。

[(II)，R₃＝2,3-二氢-[1,4]二噁烯基(dioxinyl),R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t.5.95min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm4.24(s,4H),6.79(s,1H),6.86(d,J＝8.4Hz,1H),6.93(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),6.95(d,J＝2.2Hz,1H),7.19(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝4.6Hz,1H),7.39-7.44(m,1H),7.46-7.49(m,1H),9.83(br.s.,1H)。

C₁₇H₁₃FNO₄[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：314.0823，实测值：314.0825。

3-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基-7-氟-4H-苯并[f][1,4]氧氮杂-5-酮。

[(II)，R₃＝[1,3]间二氧杂环戊烯基(dioxolyl)，R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t.5.13min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm6.04(s,4H),6.81(s,1H),6.92–6.96(m,2H),7.04(d,J＝1.6Hz,1H),7.19(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝4.6Hz,1H),7.40-7.44(m,1H),7.49(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝3.3Hz,1H,1H),9.86(br.s.,1H)。

C₁₆H₁₁FNO₄[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：300.0667，实测值：300.0660。

7-氟-3-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-4H-苯并[f][1,4]氧氮杂-5-酮。

[(II)，R₃＝3-氟-4-甲氧基，R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t.6.08min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm3.85(s,3H),6.88(s,1H),7.16–7.22(m,2H),7.25(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),7.35(dd,J_HF＝12.6,J_HH＝2.2Hz,1H),7.40–7.44(m,1H),7.49(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝3.3Hz,1H),9.91(br.s.,1H)。

C₁₆H₁₂F₂NO₃[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：304.0780，实测值：304.0781。

实施例1

方法A

步骤1

5-苄氧基-3-(4-溴-苯基)-7-氟-苯并[f][1,4]氧氮杂(oxazepine)。

[(IV)，R₃＝4-Br,R₄＝H,PG＝苄基]

将3-(4-溴-苯基)-7-氟-4H-苯并[f][1,4]氧氮杂　-5-酮(7.0g,0.021mol)溶于甲苯(100mL)中。加入苄基溴(4.3g,0.025mol)和Ag₂CO₃(8.6g,0.031mol)，并在80℃下加热该反应混合物直到起始原料消失。将该溶液过滤通过硅藻土垫料，并浓缩至干。通过在硅胶上的快速色谱(正己烷/EtOAc＝7：1)纯化粗物质，得到呈粘稠黄色油状物的标题化合物(5.3g，产率60％)。

HPLC(254nm)：R_t9.10min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm5.47(s,2H),7.05(s,1H),7.20(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝4.6Hz,1H),7.34-7.39(m,1H),7.40-7.46(m,3H),7.50–7.53(m,2H),7.46–7.53(m,3H),7.54-7.57(m,2H)。

C₂₂H₁₆BrFNO₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：424.0343，实测值：424.0331。

根据这一相同方法，但采用合适的起始原料，制备下述化合物∶

5-苄氧基-3-(3-溴-苯基)-7-氟-苯并[f][1,4]氧氮杂。

[(IV)，R₃＝3-Br,R₄＝H,PG＝苄基]

HPLC(254nm)：R_t9.11min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm5.47(s,2H),7.08(s,1H),7.21(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝4.6Hz,1H),7.24–7.28(m,1H),7.35–7.38(m,1H),7.41-7.51(m,5H),7.55-7.59(m,3H),7.74(t,J＝1.8Hz,1H)。

5-苄氧基-3-(3,4-二氯-苯基)-7-氟-苯并[f][1,4]氧氮杂.

[(IV)，R₃＝3,4-二氯，R₄＝H,PG＝苄基]

HPLC(254nm)：R_t9.14min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm5.48(s,2H),7.14(s,1H),7.21(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝4.6Hz,1H),7.34–7.38(m,1H),7.40-7.51(m,4H),7.53-7.58(m,3H),7.77(t,J＝1.8Hz,1H)。

C₂₂H₁₅Cl₂FNO₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：414.0459，实测值：414.0457。

步骤2

1-苄氧基-3-(4-溴-苯基)-7-氟-异喹啉-4-醇。

[(V)，R₃＝4-Br,R₄＝H,PG＝苄基]

将5-苄氧基-3-(4-溴-苯基)-7-氟-苯并[f][1,4]氧氮杂(830mg,1.96mmol)溶于异丙醇中，在减压下脱气并用氩气吹扫。在微波照射下，在140℃下加热反应混合物1h。然后，蒸干溶剂，得到呈固体的标题化合物，使用其而无需任何进一步纯化(750mg，产率90％)。

HPLC(254nm)：R_t8.75min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm5.59(s,2H),7.31-7.35(m,1H),7.39-7.43(m,2H),7.54-7.59(m,2H),7.65(d,J＝8.6Hz,2H),7.72-7.78(m,1H),7.83(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.6Hz,1H),8.13(d,J＝8.6Hz,2H),8.32(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝5.3Hz,1H),9.51(br.s.,1H)。

C₂₂H₁₆BrFNO₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：424.0343实测值：424.0335。

根据这一相同的方法，但采用合适的起始原料，制备下述化合物∶

1-苄氧基-3-(3-溴-苯基)-7-氟-异喹啉-4-醇。

[(V)，R₃＝3-Br,R₄＝H,PG＝苄基]

HPLC(254nm)：R_t8.40min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm5.59(s,2H),7.30-7.46(m,4H),7.52(d,J＝8.0Hz,1H),7.55–7.59(m,2H),7.73-7.76(m,1H),7.85(dd,J_HF＝9.5,J_HF＝2.4Hz,1H),8.17(d,J＝7.5Hz,1H),8.31(s,1H),8.32(dd,J_HF＝9.2,J_HF＝5.3Hz,1H),9.59(br.s.,1H)。

C₂₂H₁₆BrFNO₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：424.0343，实测值：424.0337。

1-苄氧基-3-(3,4-二氯-苯基)-7-氟-异喹啉-4-醇。

[(V)，R₃＝3,4-二氯，R₄＝H,PG＝苄基]

HPLC(254nm)：R_t9.14min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm5.60(s,2H),7.32-7.35(m,1H),7.39–7.43(m,2H),7.54–7.58(m,2H),7.72(d,J＝8.4Hz,1H),7.75-7.80(m,1H),7.86(dd,J_HF＝9.3,J_HF＝2.6Hz,1H),8.19(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),8.33(dd,J_HF＝9.2,J_HF＝5.3Hz,1H),8.37(d,J＝2.2Hz,1H),9.75(br.s.,1H)。

C₂₂H₁₅Cl₂FNO₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：414.0459，实测值：414.0447。

步骤3

{2-[1-苄氧基-3-(4-溴-苯基)-7-氟-异喹啉-4-基氧基-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯。

[(VII)，R’＝R₂＝R₄＝H,R₁’＝叔丁氧基羰基，R₃＝4-Br,PG＝苄基]

向1-苄氧基-3-(4-溴-苯基)-7-氟-异喹啉-4-醇(2.34g,5.5mmol)和市售可获得的(2-溴-乙基)-氨基甲酸叔丁基酯[(VI)，R’＝R₂＝H,R₁’＝叔丁氧基羰基)(1.48g,6.6mmol)在DMA(20mL)中的溶液中加入Cs₂CO₃(2.34g,0.7mmol)，并将该反应混合物在RT下静置过夜。然后，用水稀释该溶液，并用EtOAc萃取水相。将有机萃取物合并，经Na₂SO₄干燥，浓缩并通过快速色谱(正己烷/EtOAc＝9：1)纯化残余物，如此得到标题化合物(1,87g，产率60％)。

HPLC(254nm)：R_t9.24min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm1.39(s,9H),3.27–3.33(m，与水信号重叠，2H),3.66(t,J＝5.3Hz,2H),5.63(s,2H),7.12(t,J＝7.0,1H),7.32-7.37(m,1H),7.40-7.45(m,2H),7.56–7.60(m,2H),7.69(d,J＝8.4Hz,2H),7.73-7.79(m,1H),7.88(dd,J_HF＝9.2,J_HH＝2.6Hz,1H),8.14(d,J＝8.4Hz,2H),8.22(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝5.3Hz,1H)。

C₂₉H₂₉BrFN₂O₄[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：567.1289，实测值：567.1298。

{2-[1-苄氧基-3-(3-溴-苯基)-7-氟-异喹啉-4-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯。

[(VII)，R’＝R₂＝R₄＝H,R₁’＝叔丁氧基羰基，R₃＝3-Br,PG＝苄基]

HPLC(254nm)：R_t9.71min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm1.38(s,9H),3.23-3.28(m,2H),3.67(t,J＝5.5Hz,2H),5.63(s,2H),7.04(t,J＝5.1Hz,1H),7.33–7.37(m,1H),7.40-7.44(m,2H),7.46(dd,J＝7.8Hz,1H),7.56–7.60(m,2H),7.60(dd,J＝7.8,1.1Hz,1H),7.74–7.79(m,1H),7.90(dd,J_HF＝9.2,J_HH＝2.4Hz,1H),8.16(d,J＝7.8Hz,1H),8.22(m,1H),8.24(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝5.3Hz,1H)。

C₂₉H₂₉BrFN₂O₄[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：567.1289，实测值：567.1302。

{2-[1-苄氧基3-(3-氰基-苯基)-7-氟-异喹啉-4-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯。

[(VII)，R’＝R₂＝R₄＝H,R₁’＝叔丁氧基羰基，R₃＝3-CN,PG＝苄基]

HPLC(254nm)：R_t7.69min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm1.36(s,9H),3.22-3.26(m,2H),3.67(t,J＝5.5Hz,2H),5.65(s,2H),7.06(t,J＝5.9Hz,1H),7.35–7.38(m,1H),7.40-7.45(m,2H),7.57–7.62(m,2H),7.69-7.73(m,1H),7.76-7.81(m,1H),7.87-7.94(m,2H),8.24(dd,J_HF＝9.2,J_HH＝5.3Hz,1H),8.42(t,J＝1.5Hz,1H),8.46(ddd,J＝7.9,1.6,1.1Hz,1H)。

C₃₀H₂₉FN₃O₄[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：514.2137，实测值：514.2142.

{2-[1-苄氧基-3-(3,4-二氯-苯基)-7-氟-异喹啉-4-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯。

[(VII)，R’＝R₂＝R₄＝H,R₁’＝叔丁氧基羰基，R₃＝3,4-二氯，PG＝苄基]

HPLC(254nm)：R_t9.72min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm1.38(s,9H),3.26-3.32(m,2H),3.69(t,J＝5.3Hz,2H),5.63(s,2H),7.09(t,J＝5.3Hz,1H),7.33–7.36(m,1H),7.40-7.44(m,2H),7.57–7.60(m,2H),7.72(d,J＝8.4Hz,1H),7.75-7.80(m,1H),7.90(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.4Hz,1H),8.18(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),8.24(dd,J_HF＝9.2,J_HH＝5.3Hz,1H),8.27(d,J＝2.0Hz,1H)。

C₂₉H₂₈Cl₂FN₂O₄[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：557.1405，实测值：557.1420。

步骤4

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(4-溴-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮盐酸盐。

[(I),cpd.1,R＝R₁＝R₂＝R₄＝H,R₃＝4-Br]

用三氟乙酸/DCM＝1：2(7.5mL)处理{2-[1-苄氧基-3-(4-溴-苯基)-7-氟-异喹啉-4-基氧基-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯(1.51g,2.6mmol)，并在RT下搅拌2小时。将该反应混合物在减压下浓缩。将得到的粗产物用乙醚收集，过滤，溶于甲醇中，并加入在二噁烷中的4M HCl(6mL)。将该溶液在RT下静置搅拌1h，浓缩并用乙醚收集，过滤，用乙醚洗涤并干燥，得到标题化合物。

HPLC(254nm)：R_t3.99min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm2.97–3.04(m,2H),3.68(t,J＝5.3Hz,2H),7.64–7.69(m,2H),7.69-7.72(m,2H),7.72–7.76(m,1H),7.92(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝2.7Hz,1H),7.98(br.,s,3H),8.04(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝5.1Hz,1H),11.51(br.,s.,1H)。

C₁₇H₁₅BrFN₂O₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：377.0296，实测值：377.0296。

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(3-溴-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮；盐酸盐。

[(I),cpd.5,R＝R₁＝R₂＝R₄＝H,R₃＝3-Br]

HPLC(254nm)：R_t3.99。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm2.96-3.01(m,2H),3.70(t,J＝5.1Hz,2H),7.46–7.50(m,1H),7.68-7.71(m,1H),7.72–7.77(m,2H),7.87(s,1H),7.92(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.6Hz,1H),8.01(br.,s.,3H),8.04(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝5.3Hz,1H),11.52(br.s.,1H)。

C₁₇H₁₅BrFN₂O₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：377.0296，实测值：377.0298。

3-[4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-3-基]-苄腈；盐酸盐。

[(I),cpd.11,R＝R₁＝R₂＝R₄＝H,R₃＝3-CN]

HPLC(254nm)：R_t3.55min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm2.94-3.03(m,2H),3.68(t,J＝5.2Hz,2H),7.69-7.74(m,1H),7.73–7.79(m,1H),7.91–7.98(m,2H),7.99(br.s.,3H),8.01–8.06(m,1H),8.06(dd,J_HF＝8.9,J_HH＝5.1,1H),8.13(s,1H)。

C₁₈H₁₅FN₃O₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：324.1143，实测值：324.1152。

4-(2-氨基乙氧基)-7-氟-3-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮；盐酸盐。

[(I),cpd.7,R＝R₁＝R₂＝R₄＝H,R₃＝4-吡咯烷-1-基]

HPLC(254nm)：R_t4.48min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm1.95-2.02(m,4H),2.97-3.03(m,2H),3.28-3.32(m,4H),3.65(t,J＝5.2Hz,2H),6.62(d,J＝8.8Hz,2H),7.57(d,J＝8.8Hz,2H),7.66-7.70(m,1H),7.87(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.6Hz,1H),7.99(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝5.1,1H),8.00(br.s.,3H),11.23(br.s.,1H)。

C₂₁H₂₃FN₃O₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：368.1769，实测值：368.1769。

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(3,4-二氯-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮三氟乙酸盐。

[(I),cpd.14,R＝R₁＝R₂＝R₄＝H,R₃＝3,4-二氯]

用三氟乙酸/DCM＝1：10(4.5mL)处理{2-[1-苄氧基-3-(3,4-二氯-苯基)-7-氟-异喹啉-4-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯(85mg，0.15mmol)，并在RT下搅拌8小时。然后，在减压下浓缩该反应混合物。将得到的粗物质用乙醚收集并过滤，如此得到55mg呈白色固体的标题化合物(产率76％)。

HPLC(254nm)：R_t3.50min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm3.04(t,J＝5.5Hz,2H),3.69(t,J＝5.5Hz,2H),7.70–7.77(m,4H),7.90(br.s.,3H),7.93(dd,J_HF＝8.4,J_HH＝2.7Hz,1H),8.04(dd,J_HF＝8.4,J_HH＝5.1Hz,1H),11.55(br.s.,1H)。

C₁₇H₁₄Cl₂FN₂O₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：367.0411，实测值：367.0421。

方法B的起始原料

如WO2010133647中描述的，使用合适的起始原料获得下述式(V’)的新化合物：

4-(7-氟-4-羟基-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-3-基)-苄腈。

[(V’)，R₃＝4-CN,R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t4.88min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm7.70-7.75(m,1H),7.85-7.88(m,3H),7.91–7.94(m,2H),8.05(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝5.3Hz,1H),8.77(br.s.,1H),11.29(br.s.,1H)。

C₁₆H₁₀FN₂O₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：281.0721，实测值：281.0729。

3-(4-氯-苯基)-7-氟-4-羟基-2H-异喹啉-1-酮。

[(V’)，R₃＝4-Cl,R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t4.38min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm7.50-7.54(m,2H),7.66-7.72(m,3H),7.87(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.7Hz,1H),8.02(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝5.3Hz,1H),8.51(br.s.,1H),11.20(br.s.,1H)。

m/z(ESI)290[M+H]⁺

C₁₅H₁₀ClFNO₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：290.0379，实测值：290.0381。

7-氟-4-羟基-3-(4-甲烷磺酸基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮。

[(V’)，R₃＝4-SO₂Me,R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t3.70min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm3.27(s,3H),7.70-7.75(m,1H),7.90(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.7Hz,1H),7.92–7.95(m,2H),7.99-8.02(m,2H),8.06(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝5.1Hz,1H),8.75(br.s.,1H),11.30(br.s.,1H)。

C₁₆H₁₃FNO₄S[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：334.0544，实测值：334.0535。

7-氟-3-(4-氟-苯基)-4-羟基-2H-异喹啉-1-酮。

[(V’)，R₃＝4-F,R₄＝H]

m/z(ESI)274[M+H]⁺

C₁₅H₁₀F₂NO₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：274.0674，实测值：274.0680。

7-氟-4-羟基-3-(3-三氟甲基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮。

[(V’)，R₃＝3-CF₃,R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t5.73min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm7.66-7.78(m,3H),7.89(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.7Hz,1H),7.95–7.99(m,1H),8.02(s,1H),8.04(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝5.1Hz,1H),8.67(br.s.,1H),11.33(br.s.,1H)。

C₁₆H₁₀F₄NO₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：324.0642，实测值：324.0642。

7-氟-4-羟基-3-(4-吗啉-4-基-苯基)-2H-异喹啉-酮。

[(V’)，R₃＝4-(吗啉-4-基)，R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t4.10min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm3.17–3.20(m,4H),3.74–3.78(m,4H),7.01(d,J＝9.0Hz,2H),7.57(d,J＝9.0Hz,2H),7.63–7.68(m,1H),7.83(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.7Hz,1H),7.97(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝5.3Hz,1H),8.22(br.s.,1H),10.99(br.s.,1H)。

C₁₉H₁₈FN₂O₃[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：341.1296，实测值：341.1287。

3-(3-溴-4-吗啉-4-基-苯基)-7-氟-4-羟基-2H-异喹啉-1-酮。

[(V’)，R₃＝3-Br-4-(吗啉-4-基)，R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t4.77min.

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm3.01–3.05(m,4H),3.76–3.80(m,4H),7.24(d,J＝8.4Hz,1H),7.63-7.71(m,2H),7.86(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.7Hz,1H),7.92(s,1H),8.01(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝5.3Hz,1H),8.49(br.s.,1H),11.14(br.s.,1H)。

C₁₉H₁₇BrFN₂O₃[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：419.0401，实测值：419.0385。

3-(4-溴-苯基)-7,8-二氟-4-羟基-2H-异喹啉-酮。

[(V’)，R₃＝4-Br,R₄＝F]

HPLC(254nm)：R_t5.44min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm7.57-7.63(m,2H),7.63–7.68(m,2H),7.74-7.80(m,1H),7.83–7.91(m,1H),8.52(br.s.,1H),11.15(br.s.,1H)。

3-(3,4-二氯-苯基)-7-氟-4-羟基-2H-异喹啉-酮。

[(V’)，R₃＝3,4-二氯，R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t2.32min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm7.64-7.67(m,1H),7.69-7.63(m,1H),7.71–7.74(m,1H),7.88(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.7Hz,1H),7.91(s,1H),8.04(J_HF＝9.0,J_HH＝5.3Hz,1H),8.69(br.s.,1H),11.25(br.s.,1H)。

C₁₅H₉Cl₂FNO₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：323.9989，实测值：323.9988。

3-(4-氯-3-甲基-苯基)-7-氟-4-羟基-2H-异喹啉-1-酮。

[(V’)，R₃＝4-氯-3-甲基，R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t5.72min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm2.38(s,3H),7.47-7.55(m,2H),7.65(s,1H),7.67-7.61(m,1H),7.86(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.7Hz,1H),8.01(J_HF＝9.0,J_HH＝5.3Hz,1H),8.49(br.s.,1H),11.13(br.s.,1H)。

C₁₆H₁₂ClFNO₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：304.0535，实测值：304.0536。

3-(3,4-二氟-苯基)-7-氟-4-羟基-2H-异喹啉-1-酮.

[(V’)，R₃＝3,4-二氟，R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t4.23min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm7.30–7.34(m,1H),7.50-7.55(m,2H),7.68–7.73(m,1H),7.87(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.7Hz,1H),8.01(J_HF＝9.0,J_HH＝5.3Hz,1H),8.60(br.s.,1H),11.21(br.s.,1H)。

C₁₅H₉F₃NO₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：292.0580，实测值：292.0581。

3-(2,3-二氢-苯并[1,4]二噁烯-6-基)-7-氟-4-羟基-2H-异喹啉-1-酮。

[(V’)，R₃＝2,3-二氢-[1,4]二噁烯基(dioxinyl)，R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t4.82min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm4.28(s,4H),6.92(d,J＝8.4Hz,1H),7.13(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.19(d,J＝2.0Hz,1H),7.64–7.69(m,1H),7.84(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.7Hz,1H),7.98(J_HF＝9.0,J_HH＝5.3Hz,1H),8.30(br.s.,1H),11.01(br.s.,1H)。

3-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基-7-氟-4-羟基-2H-异喹啉-1-酮。

[(V’)，R₃＝[1,3](间二氧杂环戊烯基)dioxolyl,R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t4.78min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm6.07(s,2H),7.00(d,J＝8.2Hz,1H),7.15(dd,J＝8.2,1.5Hz,1H),7.21(d,J＝1.5Hz,1H),7.64–7.70(m,1H),7.85(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.7Hz,1H),7.99(J_HF＝9.0,J_HH＝5.3Hz,1H),8.33(br.s.,1H),11.04(br.s.,1H)。

C₁₆H₁₁FNO₄[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：300.0667，实测值：300.0659。

7-氟-3-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-4-羟基-2H-异喹啉-1-酮。

[(V’)，R₃＝3-氟-4-甲氧基，R₄＝H]

HPLC(254nm)：R_t4.99min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm3.89(s,3H),7.25(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝8.4,1H),7.48(d,J＝8.4Hz,1H),7.54(dd,J_HF＝12.8,J_HH＝2.0Hz,1H),7.65–7.71(m,1H),7.86(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.7Hz,1H),8.01(J_HF＝9.0,J_HH＝5.1Hz,1H),8.45(br.s.,1H),11.11(br.s.,1H)。

C₁₆H₁₂F₂NO₃[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：304.0780，实测值：304.0777。

实施例2

方法B

步骤3”

{2-[3-(4-氯-苯基)-7-氟-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-4-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯。

[(VIII)，R’＝R₂＝R₄＝H,R₁’＝叔丁氧基羰基，R₃＝4-Cl]

向3-(4-氯-苯基)-7-氟-4-羟基-2H-异喹啉-1-酮(100mg,0.346mmol)和市售可获得的(2-溴-乙基)-氨基甲酸叔丁基酯[(VIb)，R’＝R₂＝H,R₁’＝叔丁氧基羰基)(78mg,0.346mmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入Cs₂CO₃(135mg,0.41mmol)。将反应混合物在RT下搅拌4小时，直到起始原料耗尽。

将溶剂蒸干，用水稀释残余物，并用DCM萃取水相。将有机萃取物经Na₂SO₄干燥，并在减压下除去溶剂。通过快速色谱(正己烷/EtOAc＝7：3)纯化粗物质，得到呈浅黄色固体的标题化合物(100mg，产率67％)。

m/z(ESI)433[M+H]⁺

C₂₂H₂₃ClFN₂O₄[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：433.1325，实测值：433.1327。

{2-[7-氟-3-(4-甲烷磺酰基-苯基)-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-4-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯。

[(VIII)，R’＝R₂＝R₄＝H,R₁’＝叔丁氧基羰基，R₃＝4-SO₂CH₃]

m/z(ESI)494[M+NH₄ ⁺]

C₂₃H₂₆FN₂O₆S[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：477.1490，实测值：477.1482。

{2-[7-氟-3-(4-氟-苯基)-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-4-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯。

[(VIII)，R’＝R₂＝R₄＝H,R₁’＝叔丁氧基羰基，R₃＝4-F]

HPLC(254nm)：R_t6.32min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm1.36(s,9H),3.04-3.11(m,2H),3.45(t,J＝5.5Hz,2H),6.82(t,J＝5.2Hz,1H),7.27-7.34(m,2H),7.64-7.70(m,1H),7.71-7.78(m,2H),7.89(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.7Hz,1H),7.94(dd,J_HF＝9.1,J_HH＝5.6Hz,1H),11.41(br.s.,1H)。

C₂₂H₂₃F₂N₂O₄[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：439.1440，实测值：439.1423。

{2-[3-(4-溴-苯基)-7,8-二氟-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-4-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯。

[(VIII)，R’＝R₂＝H,R₁’＝叔丁氧基羰基，R₃＝4-Br,R₄＝F]

HPLC(254nm)：R_t6.66min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm1.37(s,9H),3.03-3.14(m,2H),3.44(t,J＝5.4Hz,2H),6.87(t,J＝5.2Hz,1H),7.61-7.72(m,5H),7.82-7.92(m,1H),11.37(br.s.,1H)。

C₂₂H₂₂BrF₂N₂O₄[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：495.0726，实测值：495.0720。

2-[3-(3,4-二氯-苯基)-7-氟-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-4-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯。

[(VIII)，R’＝R₂＝R₄＝H,R₁’＝叔丁氧基羰基，R₃＝3,4-二氯]

HPLC(254nm)：R_t3.53min。

C₂₂H₂₂Cl₂FN₂O₄[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：467.0935，实测值：467.0934。

{2-[3-(4-氯-3-甲基-苯基)-7-氟-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-4-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯。

[(VIII)，R’＝R₂＝R₄＝H,R₁’＝叔丁氧基羰基，R₃＝4-氯-3-甲基]

HPLC(254nm)：R_t6.94min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm1.37(s,9H),2.41(s,3H),3.08-3.14(m,2H),3.48(t,J＝5.5Hz,2H),6.84(t,J＝5.7Hz,1H),7.50(d,J＝7.5Hz,1H),7.58(d,J＝7.5Hz,1H),7.65-7.70(m,1H),7.70(br.s.,1H),7.89(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.7Hz,1H),7.94(J_HF＝8.2,J_HH＝5.3Hz,1H),11.34(br.s.,1H)。

C₂₃H₂₅ClFN₂O₄[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：447.1482，实测值：447.1476。

{2-[3-(3,4-二氟-苯基)-7-氟-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-4-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯。

[(VIII)，R’＝R₂＝R₄＝H,R₁’＝叔丁氧基羰基，R₃＝3,4-二氟]

C₂₂H₂₂F₃N₂O₄[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：435.1526，实测值：435.1521。

{2-[3-(2,3-二氢-苯并[1,4]二噁烯-6-基)-7-氟-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-4-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯。

[(VIII)，R’＝R₂＝R₄＝H,R₁’＝叔丁氧基羰基，R₃＝2,3-二氢-[1,4]二噁烯基]

C₂₄H₂₆FN₂O₆[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：457.1769，实测值：457.1772。

[2-(3-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基-7-氟-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-4--基氧基)-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯。

[(VIII)，R’＝R₂＝R₄＝H,R₁’＝叔丁氧基羰基，R₃＝[1,3]间二氧杂环戊烯基]

C₂₃H₂₄FN₂O₆[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：443.1613，实测值：443.1616。

{2-[7-氟-3-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-4-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯。

[(VIII)，R’＝R₂＝R₄＝H,R₁’＝叔丁氧基羰基，R₃＝3-氟-4-甲氧基]

HPLC(254nm)：R_t6.29min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm1.36(s,9H),3.05-3.12(m,2H),3.48(t,J＝5.5Hz,2H),3.91(s,3H),6.85(t,J＝5.9Hz,1H),7.27(dd,J_HF＝8.9Hz,J_HH＝8.4,1H),7.50(d,J＝8.4Hz,1H),7.56(d,J_HF＝11.9Hz,1H),7.65-7.70(m,1H),7.89(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.7Hz,1H),7.93(J_HF＝8.6,J_HH＝5.1Hz,1H),11.33(br.s.,1H)。

C₂₃H₂₅F₂N₂O₅[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：447.1726，实测值：447.1713。

步骤3”

{2-[3-(4-氰基-苯基)-7-氟-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-4-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯。

[(VIII)，R’＝R₂＝R₄＝H,R₁’＝叔丁氧基羰基，R₃＝4-CN]

将Ph₃P(422mg,1.6mmol)和(2-羟基-乙基)-氨基甲酸叔丁基酯(174mg,1.08mmol)溶于无水THF(3mL)中，并将得到的溶液冷却至0℃。用DEAD(235mg,1.35mmol)处理该反应混合物，并搅拌10min。然后，加入4-(7-氟-4-羟基-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-3-基)-苄腈(150mg,0.54mmol)，并将反应混合物在RT下静置搅拌3小时，直到起始原料消失。在真空下除去溶剂，并通过快速色谱(DCM/甲醇＝95∶5)纯化该粗物质，得到呈白色固体的标题化合物。

HPLC(254nm)：R_t5.66min。

m/z(ESI)424[M+H]⁺

C₂₃H₂₃FN₃O₄[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：424.1667，实测值：424.1672。

{2-[7-氟-1-氧代-3-(3-三氟甲基-苯基)-1,2-二氢-异喹啉-4-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯。

[(VIII)，R’＝R₂＝R₄＝H,R₁’＝叔丁氧基羰基，R₃＝3-CF₃]

HPLC(254nm)：R_t6.54min。

m/z(ESI)467[M+H]⁺

C₂₃H₂₃F₄N₂O₄[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：467.1589，实测值：467.1592。

{2-[7-氟-3-(4-吗啉-4-基-苯基)-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-4-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯。

[(VIII)，R’＝R₂＝R₄＝H,R₁’＝叔丁氧基羰基，R₃＝4-(吗啉-4-基)]

HPLC(254nm)：R_t5.74min。

m/z(ESI)484[M+H]⁺

C₂₆H₃₁FN₃O₅[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：484.2242，实测值：484.2237。

{2-[3-(3-溴-4-吗啉-4-基-苯基)-7-氟-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-4-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯。

[(VIII)，R’＝R₂＝R₄＝H,R₁’＝叔丁氧基羰基，R₃＝3-Br-4-(吗啉-4-基)]

HPLC(254nm)：R_t6.42min。

m/z(ESI)562[M+H]⁺

C₂₆H₃₀BrFN₃O₅[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：562.1347，实测值：562.1341。

步骤4’

4-[4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-3-基]-苄腈盐酸盐。

[(I),cpd.6,R＝R₁＝R₂＝R₄＝H,R₃＝4-CN]

将{2-[3-(4-氰基-苯基)-7-氟-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-4-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯(40mg，0.09mmol)溶于甲醇中，并用在二噁烷中的4M HCl(0.6mL,2.4mmol)处理5小时。蒸发溶剂，并用甲醇和乙醚洗涤得到的残余物，直到形成沉淀物。将固体过滤，并用乙醚洗涤，得到呈白色固体的标题化合物(26mg，产率80％)。

HPLC(254nm)：R_t3.52min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm2.97-3.04(m,2H),3.65(t,J＝5.3Hz,2H),7.74-7.78(m,1H),7.88-7.92(m,2H),7.94(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.6Hz,1H),7.96(br.s.,3H),7.96–8.00(m,2H),8.07(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝5.3Hz,1H),11.65(br.s.,1H)。

C₁₈H₁₅FN₃O₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：324.1143，实测值：324.1150。

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(4-氯-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮盐酸盐。

[(I),cpd.8,R＝R₁＝R₂＝R₄＝H,R₃＝4-CN]

HPLC(254nm)：R_t3.93。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm3.00(t,J＝5.2Hz,2H),3.67(t,J＝5.2Hz,2H),7.55-7.59(m,2H),7.70-7.77(m,3H),7.92(dd,J_HF＝9.4,J_HH＝2.7Hz,1H),7.96(br.s.,3H),8.03(dd,J_HF＝9.1,J_HH＝5.2Hz,1H),11.51(br.s.,1H)。

C₁₇H₁₅ClFN₂O₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：333.0801，实测值：333.0797。

4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(4-甲烷磺酰基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮盐酸盐。

[(I),cpd.9,R＝R₁＝R₂＝R₄＝H,R₃＝4-SO₂Me]

HPLC(254nm)：R_t3.37min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm3.02(m,2H),3.31(s,3H),3.70(t,J＝5.3Hz,2H),7.74-7.79(m,1H),7.94(dd,J_HF＝9.2,J_HH＝2.5Hz,1H),7.97-8.02(m,5H),8.03-8.06(m,2H),8.07(dd,J_HF＝8.8,J_HH＝5.1Hz,1H),11.61(br.s.,1H)。

C₁₈H₁₈FN₂O₄S[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：377.0966，实测值：377.0963。

4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(4-氟-苯基)-2H-异喹啉-1-酮盐酸盐。

[(I),cpd.10,R＝R₁＝R₂＝R₄＝H,R₃＝4-F]

HPLC(254nm)：R_t3.64min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm2.94–3.03(m,2H),3.66(t,J＝5.2Hz,2H),7.31-7.38(m,2H),7.70-7.78(m,3H),7.92(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.8Hz,1H),7.97(br.s.,3H),8.03(dd,J_HF＝8.8,J_HH＝5.4Hz,1H),11.49(br.s.,1H)。

C₁₇H₁₅F₂N₂O₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：317.1096，实测值：317.1101。

4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(3-三氟甲基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮盐酸盐。

[(I),cpd.2,R＝R₁＝R₂＝R₄＝H,R₃＝3-CF₃]

HPLC(254nm)：R_t4.25min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm2.90-2.96(m,2H),3.66(d,J＝5.1Hz,2H),7.70-7.76(m,2H),7.83(d,J＝7.7Hz,1H),7.91(dd,J_HF＝9.2,J_HH＝2.7Hz,1H),7.98(br.s.,3H),7.98–8.02(m,2H),8.04(dd,J_HF＝8.8,J_HH＝5.5Hz,1H),11.61(br.s.,1H)。

C₁₈H₁₅F₄N₂O₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：367.1064，实测值：367.1067。

4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(4-吗啉-4-基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮盐酸盐。

[(I),cpd.3,R＝R₁＝R₂＝R₄＝H,R₃＝4-(吗啉-4-基)]

HPLC(254nm)：R_t3.70min.

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm2.97-3.03(m,2H),3.21–3.25(m,4H),3.67(t,J＝5.3Hz,2H),3.74–3.79(m,4H),7.04(d,J＝9.0Hz,2H),7.68-7.72(m,1H),7.62(d,J＝9.0Hz,2H),7.88(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.7Hz,1H),8.02(dd,J_HF＝8.8,J_HH＝5.3Hz,1H),8.04(br.s.,3H),11.29(br.s.,1H)。

C₂₁H₂₃FN₃O₃[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：384.1718，实测值：384.1722。

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(3-溴-4-吗啉-4-基-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮盐酸盐。

[(I),cpd.4,R＝R₁＝R₂＝R₄＝H,R₃＝3-Br-4-(吗啉-4-基)]

HPLC(254nm)：R_t4.17min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm2.97-3.04(m,2H),3.04–3.09(m,4H),3.70(t,J＝5.3Hz,2H),3.77–3.81(m,4H),7.25(d,J＝8.4Hz,1H),7.71-7.76(m,2H),7.90(dd,J_HF＝9.2,J_HH＝2.7Hz,1H),7.93(d,J＝1.8Hz,1H),8.03(br.s.,3H),8.04(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝4.8Hz,1H),11.43(br.s.,1H)。

C₂₁H₂₂BrFN₃O₃[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：462.0823，实测值：462.0833。

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(4-溴-苯基)-7,8-二氟-2H-异喹啉-1-酮盐酸盐。

[(I),cpd.12,R＝R₁＝R₂＝H,R₃＝4-Br,R₄＝F]

HPLC(254nm)：R_t3.96min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm2.94-3.04(m,2H),3.64(t,J＝5.4Hz,2H),7.63–7.68(m,2H),7.69-7.73(m,2H),7.76-7.81(m,1H),7.86–7.95(m,1H),7.97(br.s.,3H),11.45(br.s.,1H)。

C₁₇H₁₄BrF₂N₂O₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：395.0201，实测值：395.0199。

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(3,4-二氯-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮.

[(I),cpd.14,R＝R₁＝R₂＝R₄＝H,R₃＝3,4-二氯]

通过采用Phenomenex Gemini C18(21×250mm,10μm)柱的制备HPLC纯化如上所述制备的粗盐酸盐，使用装有2996PDA检测器和ZQ2000单四极质谱仪的Waters FractionLynx System，其具有电喷雾电离(正和负模式)。流动相A为0.05％的NH₃/ACN95/5，流动相B为ACN。梯度为在15min内从30到100％的B，维持100％B3min。流速20mL/min。

HPLC(254nm)：R_t3.50min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm2.67(t,J＝5.9Hz,2H),3.49(t,J＝5.9Hz,2H),7.68-7.71(m,1H),7.71–7.76(m,2H),7.89(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.7Hz,1H),7.97(d,J＝1.8Hz,1H),8.02(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝5.1Hz,1H)。

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(4-氯-3-甲基-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮盐酸盐。

[(I),cpd.13,R＝R₁＝R₂＝R₄＝H,R₃＝4-氯-3-甲基]

HPLC(254nm)：R_t4.20min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm2.41(s,3H),3.01(t,J＝5.5Hz,2H),3.67(t,J＝5.5Hz,2H),7.52–7.55(m,1H),7.56–7.60(m,1H),7.70(d,J＝1.5Hz,1H),7.71–7.76(m,1H),7.90(dd,J_HF＝9.2,J_HH＝2.7Hz,1H),7.98(br.s.,3H),8.04(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝5.1Hz,1H),11.45(br.s.,1H)。

C₁₈H₁₇ClFN₂O₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：347.0957，实测值：347.0964。

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(3,4-二氟-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮盐酸盐。

[(I),cpd.15,R＝R₁＝R₂＝R₄＝H,R₃＝3,4-二氟]

HPLC(254nm)：R_t2.85min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm3.02(t,J＝5.3Hz,2H),3.68(t,J＝5.3Hz,2H),7.55–7.60(m,2H),7.72–7.76(m,1H),7.76–7.80(m,1H),7.92(dd,J_HF＝9.2,J_HH＝2.7Hz,1H),7.98(br.s.,3H),8.05(dd,J_HH＝9.0,J_HF＝5.1Hz,1H),11.52(br.s.,1H)。

C₁₇H₁₄F₃N₂O₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：335.1002，实测值：335.1006.

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(2,3-二氢-苯并[1,4]二噁烯-6-基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮。

[(I),cpd.19,R＝R₁＝R₂＝R₄＝H,R₃＝2,3-二氢-[1,4]二噁烯基]

通过在Phenomenex Gemini C18(21×250mm,10μm)柱的制备HPLC纯化如上所述制备的粗盐酸盐，使用装有2996PDA检测器和ZQ2000单四极质谱仪的Waters FractionLynx System，其具有电喷雾电离(正和负模式)。流动相A为0.05％的NH₃/ACN95/5，流动相B为ACN。梯度为在25min内从5到95％的B，维持95％B3min。流速20mL/min。

HPLC(254nm)：R_t3.67min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm2.65(t,J＝5.7Hz,2H),3.47(t,J＝5.7Hz,2H),4.27–4.32(m,4H),6.95(d,J＝8.6Hz,1H),7.18(dd,J＝8.6,2.0Hz,1H),7.19(d,J＝2.0Hz,1H),7.66–7.70(m,1H),7.88(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.7Hz,1H),7.99(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝5.3Hz,1H)。

C₁₉H₁₈FN₂O₄[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：357.1245，实测值：357.1241。

4-(2-氨基-乙氧基)-3-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基-7-氟-2H-异喹啉-1-酮盐酸盐。

[(I),cpd.20,R＝R₁＝R₂＝R₄＝H,R₃＝[1,3]间二氧杂环戊烯基]

HPLC(254nm)：R_t2.74min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm2.97–3.04(m,2H),3.68(t,J＝5.3Hz,2H),6.11(s,2H),7.04(d,J＝8.1Hz,1H),7.21(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),7.24(d,J＝1.5Hz,1H),7.69–7.74(m,1H),7.89(dd,J_HF＝9.2,J_HH＝2.7Hz,1H),8.00(br.s.,3H),8.02(dd,J_HF＝8.8,J_HH＝5.1Hz,1H)。

C₁₈H₁₆FN₂O₄[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：343.1089，实测值：343.1082.

4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮盐酸盐。

[(I),cpd.21,R＝R₁＝R₂＝R₄＝H,R₃＝3-氟-4-甲氧基]

HPLC(254nm)：R_t3.75min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm2.98–3.04(m,2H),3.67(t,J＝5.1Hz,2H),3.92(s,3H),7.28(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝8.4Hz,1H),7.52(d,J＝8.4Hz,1H),7.58(dd,J_HF＝12.6,J_HH＝2.0Hz,1H),7.70–7.75(m,1H),7.91(dd,J_HF＝9.3,J_HH＝2.7Hz,1H),8.00(br.s.,3H),8.03(dd,J_HF＝9.2,J_HF＝4.8Hz,1H),11.42(br.s.,1H)。

C₁₈H₁₇F₂N₂O₃[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：347.1202，实测值：347.1196。

转化A

3-(1-苄氧基-7-氟-4-羟基-异喹啉-3-基)-苄腈。

[(V)，R₃＝3-CN,R₄＝H,PG＝苄基]

将1-苄氧基-3-(3-溴-苯基)-7-氟-异喹啉-4-醇(400mg,0.94mmol)、Zn(33mg,0.5mmol)、Zn(CN)₂(241mg,2mmol)、Pd₂(dba)₃·CHCl₃(59mg,0.056mmol)和三叔丁基膦四氟化碳(44mg，0.15mmol)的混合物溶于脱气的N-甲基吡咯烷酮(20mL)中。

在减压下使该混合物脱气之后，将其暴露于氮气中，并加热至90℃2小时。然后，将该反应混合物冷却，过滤，用水稀释并用EtOAc萃取。将合并的有机层用水洗涤，经Na₂SO₄干燥并蒸干。通过快速色谱法(正己烷/EtOAc＝8：2)纯化粗物质，得到呈黄色固体的标题化合物(210mg，产率60％)。

¹H NMR(CDCl₃)δppm5.10(s,2H),7.20-7.46(m,9H),7.51–7.58(m,2H),8.13–8.21(m,1H)。

C₂₃H₁₆FN₂O₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：371.1191，实测值：371.1193。

转化B

{2-[7-氟-1-氧代-3-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-1,2-二氢-异喹啉-4-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯。

[(VII)，R’＝R₂＝H,R₁’＝叔丁氧基羰基，R₃＝4-吡咯烷-1-基，R₄＝H,PG＝苄基]

将2-[1-苄氧基-3-(4-溴-苯基)-7-氟-异喹啉-4-基氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁基酯(100mg,0.176mmol)、叔丁氧化钠(26mg,0.264mmol)、Pd(OAc)₂(2mg,0.007mmol)、2-(二叔丁基膦)-二苯基(5mg，0.016mmol)和吡咯烷(18mg，0.25mmol)的混合物溶于甲苯(3mL)中。使该反应混合物脱气，用氩气吹扫，并在90℃下加热2小时。将该溶液过滤穿过硅藻土垫料，并在减压下蒸发溶剂。用EtOAc稀释残余物，并用盐水洗涤有机相。将有机萃取物经Na2SO4干燥，并蒸干。通过在硅胶上的快速色谱(正己烷/EtOAc＝85：15)纯化粗物质，得到呈白色固体的标题化合物。

m/z(ESI)558[M+H]+

C₃₃H₃₇FN₃O₄[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：558.2763，实测值：558.2768。

转化D

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(3-溴-4-吡咯烷-1-基-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮。

[(I),cpd.18,R＝R₁＝R₂＝R₄＝H,R₃＝3-溴-4-吡咯烷-1-基]

向保持在室温下的4-(2-氨基乙氧基)-7-氟-3-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮盐酸盐[(I),cpd.7,R＝R₁＝R₂＝H,R₃＝4-吡咯烷-1-基，R₄＝H](15mg,0.037mmol)在无水THF(0.3mL)中的搅拌悬浮液中加入吡啶鎓氢溴酸盐过溴化物(13mg，0.04mmol)。将该反应混合物搅拌1小时，然后在真空中蒸发挥发物，并通过在Phenomenex Gemini C18(21×250mm,10μm)柱上的制备HPLC纯化得到的粗物质，使用装有2996PDA检测器和ZQ2000单四极质谱仪的Waters FractionLynx System，其具有电喷雾电离(正和负模式)。流动相A为0.05％的NH₃/ACN95/5，流动相B为ACN。梯度为在25min内从5到95％的B，维持95％B3min。流速20mL/min。

HPLC(254nm)：R_t4.76min。

¹H NMR(DMSO-d₆)δppm1.88–1.93(m,4H),2.69(t,J＝5.7Hz,2H),3.40–3.44(m,4H),3.48(t,J＝5.7Hz,2H),7.00(d,J＝8.6Hz,1H),7.58(dd,J＝8.6,2.0Hz,1H),7.66–7.70(m,1H),7.85–7.88(m,2H),7.99(dd,J_HF＝9.0,J_HH＝5.1Hz,1H)。

C₂₁H₂₂BrFN₃O₂[M+H]⁺的HRMS(ESI)理论值：446.0874，实测值：446.0880。

Claims

1.式(I)的化合物∶

其中R和R₁独立地为氢或任选取代的选自下述的基团：直链或支链的C₁-C₆烷基、C₃-C₇环烷基和杂环基，或者与它们连接的氮原子一起形成任选取代的杂环；

R₂为氢或任选取代的选自下述的基团：直链或支链的C₁-C₆烷基和C₃-C₇环烷基；

R₃为氟、氯、溴、氰基或任选取代的选自下述的基团：直链或支链的C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、多氟代C₁-C₆烷基、多氟代C₁-C₆烷氧基、杂环基、芳氧基、芳氨基、C₁-C₆烷基磺酰基；或者R₃可以代表与苯基环稠合的间二氧杂环戊烯基、二噁烯基或二氧杂环庚烯基环；

R₄为氢或氟，和

当R₄为氢时，n为在1和5之间的数字；

当R₄为氟时，n为在0和5之间的数字；

或其旋光异构体、互变异构体或可药用盐；

排除下述化合物∶

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(3-氯-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(4-苯氧基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮，

4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(3-甲氧基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮，和

4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(4-甲氧基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮。

2.根据权利要求1的式(I)的化合物，特征在于R和R₁独立地为氢或任选取代的直链或支链的C₁-C₆烷基，或者与它们连接的氮原子一起形成任选取代的杂环；

R₂为氢或任选取代的直链或支链的C₁-C₆烷基；

R₃为氟、氯、溴、氰基或任选取代的选自下述的基团：多氟代C₁-C₆烷基、杂环基、芳氧基和C₁-C₆烷基磺酰基；和

当R₄为氢时，n为在1和3之间的数字；

当R₄为氟时，n为在0和3之间的数字。

3.根据权利要求2的式(I)的化合物，特征在于R和R₁独立地为氢或任选取代的直链或支链的C₁-C₆烷基；

R₃为氟、氯、溴、氰基或任选取代的选自下述的基团：多氟代C₁-C₆烷基、杂环基和C₁-C₆烷基磺酰基；和

当R₄为氢时，n为在1和2之间的数字；

当R₄为氟时，n为在0和2之间的数字。

4.式(I)的化合物，选自∶

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(4-溴-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(3-三氟甲基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮，

4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(4-吗啉-4-基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮，

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(3-溴-4-吗啉-4-基-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(3-溴-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

4-[4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-3-基]-苄腈,

4-(2-氨基乙氧基)-7-氟-3-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮，

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(4-氯-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(4-甲烷磺酰基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮，

4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(4-氟-苯基)-2H-异喹啉-1-酮，

3-[4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-3-基]-苄腈,

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(4-溴-苯基)-7,8-二氟-2H-异喹啉-1-酮，

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(4-氯-3-甲基-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(3,4-二氯-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(3,4-二氟-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

5-[4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-3-基]-2-吗啉-4-基-苄腈,

5-[4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-1-氧代-1,2-二氢-异喹啉-3-基]-2-吡咯烷-1-基-苄腈,

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(3-溴-4-吡咯烷-1-基-苯基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(2,3-二氢-苯并[1,4]二噁烯-6-基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

4-(2-氨基-乙氧基)-3-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基-7-氟-2H-异喹啉-1-酮，

4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮，

4-(2-氨基-乙氧基)-7-氟-3-(4-三氟甲氧基-苯基)-2H-异喹啉-1-酮，和

4-(2-氨基-乙氧基)-3-(3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]二氧杂环庚三烯-7-基)-7-氟-2H-异喹啉-1-酮。

5.用于制备如权利要求1中定义的式(I)的化合物的方法，其包括：

步骤1)用式PG-X(III)的化合物保护式(II)的化合物∶

其中R₃和R₄为权利要求1中定义的，其中PG为合适的保护基，X为合适的离去基团；

步骤2)重排得到的式(IV)的化合物∶

其中R₃、R₄和PG为如上定义的；

步骤3)，用式(VI)的化合物

其中R₂为如权利要求1中定义的；R’和R₁’分别具有与R和R₁相同的含义，如权利要求1中定义的，但是也可以独立地为COOR₆，其中R₆为任选取代的直链或支链的C₁-C₆烷基或任选取代的直链或支链的芳基-C₁-C₆-烷基；R₅代表合适的基团，比如卤素、对-甲苯磺酸根、甲烷磺酸根、三氟甲烷磺酸根或羟基；

烷基化得到的式(V)的化合物∶

其中R₃、R₄和PG为如上定义的；

步骤4)使得到的式(VII)的化合物脱保护：

其中R’、R₁’、R₂、R₃、R₄和PG为如上定义的，从而得到如权利要求1中定义的式(I)的化合物；

或

步骤3’)用式(VIa)的化合物

其中R、R₁、R₂和R₅为如上定义的，

烷基化式(V’)的化合物，

或者

其中R₂和R₅为如上定义的，R’和R₁’中一个或两个为COOR₆，其中R₆为如上定义的；

步骤4’)使得到的式(VIII)的化合物脱保护：

其中R₂、R₃和R₄为如上定义的，R’和/或R₁’为COOR₆，其中R₆为如上定义的，从而得到如上定义的式(I)的化合物；

任选地，通过已知化学反应将式(I)的化合物转化为不同的式(I)的化合物；和/或将式(I)的化合物转化成其可药用盐，或将盐转化成游离的式(I)的化合物；

而且，任选地，通过已知化学反应，将式(II)或式(IV)或式(V)或式(VII)或式(V’)或式(VIII)的化合物分别转化成式(II)或式(IV)或式(V)或式(VII)或式(V’)或式(VIII)的化合物。

6.一种用于治疗PARP-1蛋白介导的疾病的方法，其包括向需要其的哺乳动物给药有效量的如权利要求1中定义的式(I)的化合物或其可药用盐。

7.权利要求6的方法，其中所述需要其的哺乳动物为人类。

8.根据权利要求7的用于治疗疾病的方法，特征在于PARP-1蛋白介导的疾病选自癌症、心血管疾病、神经系统损伤和炎症。

9.根据权利要求8的用于治疗疾病的方法，特征在于所述癌症为癌比如膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肝癌、包括小细胞肺癌在内的肺癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌和包括鳞状细胞癌的皮肤癌；淋巴系的造血系统肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性淋巴母细胞白血病、B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤和伯基特氏淋巴瘤；髓系的造血系统肿瘤，包括急性和慢性髓性白血病、骨髓增生异常综合征和早幼粒细胞性白血病；包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤在内的间充质来源的肿瘤；中枢和外周神经系统肿瘤，包括星形细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤、胶质母细胞瘤和神经鞘瘤；其它肿瘤，包括黑色素瘤、精原细胞瘤、畸胎癌、骨肉瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、甲状腺滤泡癌和卡波西肉瘤。

10.选择性地抑制PARP-1蛋白活性的体外方法，其包括用有效量的如权利要求1中定义的式(I)的化合物或其可药用盐接触所述蛋白。

11.根据权利要求9的用于治疗疾病的方法，包括如权利要求1中定义的式(I)的化合物或其可药用盐与放疗或化疗方案组合用于同时、单独或连续用于抗癌治疗。

12.药物组合物，包含治疗有效量的如权利要求1中定义的式(I)的化合物或其可药用盐，和至少一种可药用赋形剂、载体或稀释剂。

13.根据权利要求12的药物组合物，进一步包含一种或多种化疗剂。

14.根据权利要求13的药物组合物，其中所述化疗剂为烷化剂。

15.根据权利要求14的药物组合物，其中所述烷化剂为替莫唑胺。

16.产品，包含如权利要求1中定义的式(I)的化合物或其可药用盐和一种或多种化疗剂，呈用于同时、单独或顺续用于抗癌治疗的组合制剂。

17.根据权利要求16的产品，其中所述化疗剂为烷化剂。

18.根据权利要求17的产品，其中所述烷化剂为替莫唑胺。

19.如权利要求1中定义的式(I)的化合物或其可药用盐，用作药物。

20.如权利要求1中定义的式(I)的化合物或其可药用盐，用于治疗PARP-1蛋白介导的疾病的方法。

21.如权利要求1中定义的式(I)的化合物或其可药用盐在制备用于治疗PARP-1蛋白介导的疾病的药物中的用途。