CN103937021A - 磁场诱导功能化纳米粒分子印迹搅拌棒固相萃取体系的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种磁场诱导功能化纳米粒修饰的分子印迹搅拌棒固相萃取体系的制备方法。步骤如下：a.磁性搅拌棒的表面处理、硅烷化；b.模板分子、功能单体和磁性纳米粒在致孔剂中预聚，加入交联剂以及引发剂，放入硅烷化后的磁性搅拌棒，超声除氧，氮气条件下55℃～60℃条件下聚合6～12h；c.磁性搅拌棒老化至少1h；d.甲醇乙酸溶液洗脱模板分子。本发明制备的分子印迹搅拌棒固相萃取体系对食用香精香兰素具有特异的识别能力，应用于实际样品测定时可提高方法的准确度，高效快速，抗干扰能力强，且制备方法简便、价格低廉、稳定性和重现性良好。本发明将分子印迹搅拌棒固相萃取技术与色谱联用，可用于食品中香兰素的分离与富集。

Description

磁场诱导功能化纳米粒分子印迹搅拌棒固相萃取体系的制备方法

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种磁场诱导功能化纳米粒分子印迹搅拌棒固相萃取体系的制备方法。 

背景技术

香兰素(3-甲氧基-4-羟基苯甲醛)是一种白色至微黄色针状结晶粉末，有着香荚兰豆特有的香味。作为食品添加剂常用于作为糕点、糖果、饮料、奶制品等食品的增香剂。欧盟专家委员会称，经多年的研究发现，大量剂使用香兰素会导致头痛、恶心、呕吐、呼吸困难，甚至能够损伤肝、肾，对人体有较大的危害^[1]。因此有必要对食品添加剂中香兰素的含量进行测定。目前国内外测定这些增香剂的方法主要有分光光度法^[2]、气相色谱法^[3]、液相色谱法^[4]、溶出伏安法^[5]、毛细管电泳法^[6]等。因食品组分复杂，基质干扰严重，在仪器测定前常需复杂的样品前处理过程。因此建立简单有效的样品前处理技术是准确测定香兰素的关键。 

随着纳米技术、高分子化学和生物化学等学科的发展，分子印迹技术(Molecular imprinting technique，MIT)被广泛应用于分离领域^[7]。分子印迹技术是指制备对某一特定的目标分子(模板分子、印迹分子或烙印分子)具有特异选择性的聚合物的过程。首先将模板分子与功能单体在反应混合溶液中通过化学键或氢键结合形成配合物；然后加入交联剂进行共聚形成聚合物，使功能单体上的功能基在空间排列和空间定向上固定下来；最后通过物理或化学手段除去模板分子，得到具有一定大小和形状的孔穴及确定空间排列的功能基团的分子印记聚合物^[8]。在这种聚合物中形成了与模板分子在空间和结合位点上相匹配的具有多重作用位点的空穴，这些空穴对模板分子具有选择性。 

近年来，分子印迹技术与固相萃取技术(Solid phase extraction，SPE)的结合应用于样品前处理已成为热门研究领域，如分子印迹固相萃取^[9]、分子印迹固相微萃取^[10]和分子印迹搅拌棒固相微萃取^[11]。分子印迹搅拌棒固相萃取技术(Molecular imprinted polymers-stir bar solid phase extraction，MIPs-SBSE)属于表面分子印迹技术，即在制备好的大孔固相载体的 表面上，以一定作用力使功能单体与模板分子聚合在具有良好可接近性的基质表面，使印记位点处于MIPs表面，它能克服空间位阻的影响，使模板分子容易接近MIPs的识别位点，有效解决由本体聚合或沉淀聚合制得的MIPs结合位点不均一、可接近性差、渗漏等问题 ^[12]，进一步提高MIPs的吸附效率。 

磁性纳米粒子(Magnetic nanoparticles，MNPs)是20世纪90年代出现的一种新型材料。磁性是物质的基本属性之一，任何带电体的运动如分子与原子中内部电子运动和自旋，都必然在它的周围产生磁场，从而使物质产生磁性。而随着材料制备技术的不断发展，人们对纳米材料的性能提出了越来越高的要求，各种尺度上的新材料相继被研究出来，给磁学这一古老的学科注入了新的生机与活力。当纳米技术与磁学相结合时，纳米磁性材料应运而生。其中磁性纳米粒子更是成为了当今科技研究的焦点。磁性纳米粒子的磁单畴尺寸、顺磁磁性临界尺寸、交换作用长度等在l-100nm范围内，具有奇异的超顺磁性和较高的矫顽力。然而磁性纳米粒极易被氧化而失去磁性，由于其高的比表面能和粒之间磁偶极的相互作用，在溶液中有强烈的聚集倾向，并且Fe₃O₄NPs之间由于磁性吸引和范德华力作用易产生团聚现象，这使得磁性纳米粒在应用方面受到极大限制。 

目前，尚无操作简便、价格低廉、响应灵敏、抗干扰能力强、稳定性和重现性良好，可实现配方奶粉中香兰素的高效、灵敏和快速检测的磁场诱导功能化纳米粒分子印迹搅拌棒固相萃取体系的制备方法。 

发明内容

本发明的目的是提供一种操作简便、价格低廉、响应灵敏、抗干扰能力强、稳定性和重现性良好，可实现婴儿配方奶粉中香兰素的高效、灵敏和快速检测的磁场诱导功能化纳米粒分子印迹搅拌棒固相萃取体系的制备方法。该方法巧妙地结合了纳米技术、磁场诱导自组装技术、分子印迹技术和搅拌棒固相萃取技术。通过本发明制备方法制备得到的分子印迹搅拌棒对配方奶粉中香兰素的监测有重要意义。 

本发明的目的是通过下方式实现的： 

一种磁场诱导功能化纳米粒分子印迹搅拌棒固相萃取体系的制备方法，该方法包括以下步骤： 

a）搅拌棒预处理：将磁性搅拌棒依次经过丙酮、碱、酸浸泡后，再通过去离子水洗涤至中性后活化，再置于硅烷偶联剂中进行硅烷化反应，经甲醇清洗，氮气吹干； 

b）Fe₃O₄PANI复合纳米粒子与印迹氢键复合物共同预组装：将模板分子、 Fe₃O₄PANI复合纳米粒和功能单体甲基丙烯酸置于致孔剂中预聚6～12h； 

c）磁场诱导自组装修饰搅拌棒以及聚合形成印迹聚合物：加入交联剂及引发剂，超声，放入硅烷化后的磁性搅拌棒吸附5-20min，氮气保护，55℃～60℃条件下聚合6～12h； 

d）洗脱模板分子：取出磁性搅拌棒老化至少1h，洗脱模板分子，得到分子印迹固相萃取搅拌棒。 

所述碱为0.5～2mol/L的NaOH溶液，优选浓度为1mol/L；酸为0.1～1.0mol/L的HCL溶液，浓度优选为0.1mol/L；丙酮、碱和酸浸泡时间各为1～2h；所述的活化方式为真空50～70℃下干燥1～2h，所述的硅烷偶联剂为质量百分比浓度为10-30%的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三乙氧基硅烷丙酮溶液或者质量百分比浓度为10-30%的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷丙酮溶液，硅烷化时间优选为1～2h。所述的模板分子是香兰素，与甲基丙烯酸和交联剂的用量摩尔比为1:1～7:5～35，优选摩尔比为1:5:10。所述的Fe₃O₄PANI复合纳米粒在致孔剂中的浓度为0.5～1.5mg/mL。 

老化条件优选为真空50～70℃下干燥1～6h。本发明所使用的磁性搅拌棒的直径为4mm、长度为19mm。 

本发明所用的模板分子是香兰素，其结构式为： 

本发明使用的交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)、三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯(TRIM)中的一种；引发剂为偶氮二异丁腈，致孔剂为甲苯或者甲醇。引发剂的摩尔量为模板分子摩尔量的10%～20%，优选为15%。模板分子在致孔剂中的浓度为0.1～0.2mol/L。步骤d中用体积比9:1的甲醇乙酸溶液洗脱模板分子。 

聚苯胺包磁性纳米粒结构兼具低维材料和有机导体两者的优点，将聚苯胺与磁性纳米粒复合，获得多功能复合材料。它不但同时具有导电性和磁性，而且还集纳米粒和聚合物的优点于一身。同时可以防止纳米粒子由于具有极高的表面活性而团聚，得到团聚减少、分散性强、形状趋向于规则的球形、包覆效果较好的聚苯胺包四氧化三铁（Fe₃O₄PANI）复合纳米粒子。本发明通过大量的实验将其与分子印迹技术结合，增大了搅拌棒比表面积， 大大增强了搅拌棒的印迹位点，灵敏度显著增强。 

与现有技术比较本发明的有益效果： 

（1）本发明通过化学键的作用将分子印迹聚合物涂渍到搅拌棒的表面，使得涂层热稳定性好，反复使用后无断裂、脱落、腐蚀现象。分别使用10次、20次、25次、30次后，吸附量Q的RSD均在5%范围内。 

（2）采用磁场诱导自组装技术，可通过一次聚合形成形态均一、性质稳定印迹涂层，排除了传统分子印迹搅拌棒多次聚合的弊端。自组装时间缩短，且制备方便、操作简单、价格低廉，同时也为分子印迹涂层有序结构的形成创造了有利条件。 

（3）采用特定的方式结合Fe₃O₄PANI复合纳米粒子，增大了搅拌棒比表面积，其修饰后大大增强了搅拌棒的印迹位点，灵敏度大大增强。 

（4）本发明对影响MIP涂层吸附性能的模板分子、功能单体、交联剂、引发剂、溶剂等的用量及试验条件进行了优化，制备出的涂层致密、均匀，涂层的厚度在2.5μm左右（如图1所示）。与商品化涂层相比，涂层厚度薄，有效利用率显著提高，同时兼具选择性好、吸附量高、吸附快和解吸所需时间短等特点。 

（5）本发明制备的搅拌棒与色谱联用，可用于食品香兰素的快速分离与富集。 

为了验证本发明香兰素分子印迹固相萃取搅拌棒（按照实施例1方法制备得到）的吸附性能，发明人进行了如下试验： 

静态吸附试验：在50mL的小玻璃瓶中分别加入10mL不同浓度的香兰素的甲苯溶液，放入分子印迹搅拌棒，密封，室温搅拌（300转/分钟），达吸附平衡后，取出搅拌棒，甲醇:乙酸（9:1，v:v）超声解吸，解吸液利用HPLC-UV测定浓度，分别计算印迹搅拌棒和非印迹搅拌棒在不同浓度下的吸附容量Q，结果见图2。非分子印迹固相萃取搅拌棒的制备步骤同本发明分子印迹固相萃取搅拌棒，仅不加模板分子香兰素。从图中可以看出，当香兰素浓度为10μg/mL时，分子印迹和非分子印迹搅拌棒均达吸附平衡，且分子印迹搅拌棒的最大吸附量约为非分子印迹的5.3倍，可见所制备的分子印迹搅拌棒的吸附性能良好。 

选择性吸附试验：在50mL的小玻璃瓶中分别加入10mL2μg/mL甲基香兰素、乙基麦芽酚的甲苯溶液，放入分子印迹搅拌棒，密封，室温搅拌（300转/分钟），达吸附平衡后，取出搅拌棒，甲醇:乙酸（9:1，v:v）超声解吸，解吸液利用HPLC-UV测定浓度，分别计算印迹搅拌棒（按照本发明实施例1方法制备得到）和非印迹搅拌棒在2μg/mL浓度下对不同物质的吸附容量Q（ng），结果见图3。非分子印迹固相萃取搅拌棒的制备步骤同本发明分子印迹固相萃取搅拌棒，仅不加模板分子香兰素。分子印迹搅拌棒对模板分子香兰素 的吸附量约为甲基香兰素的3.2倍，为乙基麦芽酚的2.3倍，且是非分子印迹对香兰素吸附量的5.28倍，可见所制备的分子印迹搅拌棒对模板分子香兰素的选择性良好。 

吸附动力学试验：在50mL的小玻璃瓶中分别加入10mL2μg/mL香兰素的甲苯溶液，放入磁子，放入分子印迹搅拌棒，放入瓶中，密封，室温搅拌（500转/分钟）不同时间，根据吸附前后吸附液的浓度变化，分别计算搅拌棒在不同时间对香兰素的吸附量Q，结果见图4，吸附平衡时间为30min。 

解吸动力学试验：50mL的小玻璃瓶中分别加入10mL2μg/mL香兰素的甲苯溶液，放入分子印迹搅拌棒，密封，室温搅拌（300转/分钟）至吸附平衡,取出搅拌棒，甲醇:乙酸（9:1，v:v）超声解吸不同的时间，解吸液利用HPLC-UV测定浓度，得出达解吸平衡所需的时间，结果见图5，解析平衡时间为20min。 

附图说明

图1：磁性纳米粒和本发明模板分子印迹固相微萃取搅拌棒的扫描电子显微镜图（A:磁性纳米粒；B:分子印迹固相萃取搅拌棒横截面；C:分子印迹固相萃取搅拌棒表面） 

图2：静态吸附曲线 

图3：选择性试验 

图4：吸附动力学曲线 

图5：解吸动力学曲线 

具体实施方式

为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。 

Fe₃O₄PANI复合纳米粒子的制备： 

在250mL三颈瓶中，加入80mL去离子水和4.72g FeCl₃·6H₂O，超声使其溶解后保持搅拌速度800rpm min^-1，在氮气保护下加入1.72g FeCl₂·4H₂O，搅拌溶解，当温度升至80℃时逐滴加入氨水10mL，反应1h，磁性分离，去离子水洗至中性，分散于100mL乙醇中制得Fe₃O₄纳米粒。 

将上述制备好的Fe₃O₄纳米粒放入250mL烧杯中，加入1mol/L HCl100mL，搅拌15min后，加入4mL苯胺，继续搅拌0.5h后，滴加0.1mol/L过硫酸铵8mL(每半分钟50uL)，随后在冰浴下反应3h。磁性分离，用1mol/L HCl，乙醇洗涤4次，最后用少量水超声分散， 干燥24h，得Fe₃O₄PANI复合纳米粒子。 

搅拌棒制备：将磁芯放入19mm×4mm的玻璃管，玻璃管两端热封即制得搅拌棒。 

实施例1： 

搅拌棒（直径为4mm，长度为19mm）先用丙酮浸泡1h以去除保护层，然后在0.5mol/L氢氧化钠溶液中浸泡1h、0.1mol/L盐酸溶液中浸泡1h，去离子水清洗除去表面残留的酸至中性，于70℃真空干燥活化2h，干燥后放于质量百分比浓度为20%的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷丙酮溶液中硅烷化2h，甲醇洗净表面残留的反应液后，氮气吹干备用。 

1mmol香兰素、425μL甲基丙烯酸和15mg Fe₃O₄PANI复合纳米粒子在10mL甲苯中混匀后，预聚6h，加入3mL乙二醇二甲基丙烯酸酯及30mg偶氮二异丁腈（使得模板分子、功能单体、交联剂三者的摩尔比为1:5:10，引发剂的用量为模板分子摩尔量的15%），超声5min。放入硅烷化磁性搅拌棒，通氮气除氧，塞紧密封，氮气环境下55℃聚合6h。取出搅拌棒，真空70℃老化1h，甲醇乙酸溶液（9:1，v:v）洗脱模板分子，直至高效液相色谱紫外检测器检测不到模板分子为止。 

实施例2： 

搅拌棒（直径为4mm，长度为19mm）先用丙酮浸泡1h以去除保护层，然后在0.5mol/L氢氧化钠中浸泡1h、0.1mol/L盐酸中浸泡1h，去离子水清洗除去表面残留的酸至中性，于70℃真空干燥活化2h，干燥后放于质量百分比浓度为20%的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷丙酮溶液中硅烷化2h，甲醇洗净表面残留的反应液后，氮气吹干备用。 

1mmol香兰素、425μL甲基丙烯酸和10mg Fe₃O₄PANI复合纳米粒子在10mL甲苯中混匀后，预聚6h，加入3mL乙二醇二甲基丙烯酸酯及30mg偶氮二异丁腈（使得模板分子、功能单体、交联剂三者的摩尔比为1:5:10，引发剂的用量为模板分子摩尔量的15%），超声5min。放入硅烷化磁性搅拌棒，通氮气除氧，塞紧密封，氮气环境下60℃聚合6h。取出搅拌棒，真空70℃老化1h，甲醇乙酸溶液（9:1，v:v）洗脱模板分子，直至高效液相色谱紫外检测器检测不到模板分子为止。 

实施例3： 

搅拌棒（直径为4mm，长度为19mm）先用丙酮浸泡1h以去除保护层，然后在0.5mol/L氢氧化钠中浸泡1h、0.1mol/L盐酸中浸泡1h，去离子水清洗除去表面残留的酸至中性，于70℃真空干燥活化2h，干燥后放于质量百分比浓度为10%的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷丙酮溶液中硅烷化2h，甲醇洗净表面残留的反应液后，氮气吹干备用。 

1mmol香兰素、425μL甲基丙烯酸和5mg Fe₃O₄PANI复合纳米粒子在10mL甲苯 中混匀后，预聚6h，加入3mL乙二醇二甲基丙烯酸酯及30mg偶氮二异丁腈（使得模板分子、功能单体、交联剂三者的摩尔比为1:5:10，引发剂的用量为模板分子摩尔量的15%），超声5min。放入硅烷化磁性搅拌棒，通氮气除氧，塞紧密封，氮气环境下55℃聚合6h。取出搅拌棒，真空70℃老化1h，甲醇乙酸溶液（9:1，v:v）洗脱模板分子，直至高效液相色谱紫外检测器检测不到模板分子为止。 

实施例4： 

搅拌棒（直径为4mm，长度为19mm）先用丙酮浸泡1h以去除保护层，然后在1mol/L氢氧化钠中浸泡1h、0.5mol/L盐酸中浸泡1h，去离子水清洗除去表面残留的酸至中性，于70℃真空干燥活化2h，干燥后放于质量百分比浓度为20%的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷丙酮溶液中硅烷化2h，甲醇洗净表面残留的反应液后，氮气吹干备用。 

1mmol香兰素、425μL甲基丙烯酸和5mg Fe₃O₄PANI复合纳米粒子在10mL甲苯中混匀后，预聚6h，加入3mL乙二醇二甲基丙烯酸酯及30mg偶氮二异丁腈（使得模板分子、功能单体、交联剂三者的摩尔比为1:5:10，引发剂的用量为模板分子摩尔量的15%），超声5min。放入硅烷化磁性搅拌棒，通氮气除氧，塞紧密封，氮气环境下55℃聚合6h。取出搅拌棒，真空70℃老化1h，甲醇乙酸溶液（9:1，v:v）洗脱模板分子，直至高效液相色谱紫外检测器检测不到模板分子为止。 

实施例5： 

搅拌棒（直径为4mm，长度为19mm）先用丙酮浸泡1h以去除保护层，然后在1mol/L氢氧化钠中浸泡1h、0.1mol/L盐酸中浸泡1h，去离子水清洗除去表面残留的酸至中性，于70℃真空干燥活化2h，干燥后放于质量百分比浓度为30%的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷丙酮溶液中硅烷化2h，甲醇洗净表面残留的反应液后，氮气吹干备用。 

1mmol香兰素、425μL甲基丙烯酸和5mg Fe₃O₄PANI复合纳米粒子在10mL甲苯中混匀后，预聚6h，加入3mL乙二醇二甲基丙烯酸酯及30mg偶氮二异丁腈（使得模板分子、功能单体、交联剂三者的摩尔比为1:5:10，引发剂的用量为模板分子摩尔量的15%），超声5min。放入硅烷化磁性搅拌棒，通氮气除氧，塞紧密封，氮气环境下55℃聚合6h。取出搅拌棒，真空70℃老化1h，甲醇乙酸溶液（9:1，v:v）洗脱模板分子，直至高效液相色谱紫外检测器检测不到模板分子为止。 

实施例6： 

搅拌棒（直径为4mm，长度为19mm）先用丙酮浸泡1h以去除保护层，然后在1mol/L氢氧化钠中浸泡1h、0.1mol/L盐酸中浸泡1h，去离子水清洗除去表面残留的酸至中性，于 70℃真空干燥活化2h，干燥后放于质量百分比浓度为25%的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷丙酮溶液中硅烷化2h，甲醇洗净表面残留的反应液后，氮气吹干备用。 

1mmol香兰素、425μL甲基丙烯酸和5mg Fe₃O₄PANI复合纳米粒子在10mL甲苯中混匀后，预聚6h，加入3mL乙二醇二甲基丙烯酸酯及30mg偶氮二异丁腈（使得模板分子、功能单体、交联剂三者的摩尔比为1:5:10，引发剂的用量为模板分子摩尔量的15%），超声5min。放入硅烷化磁性搅拌棒，通氮气除氧，塞紧密封，氮气环境下55℃聚合6h。取出搅拌棒，真空70℃老化1h，甲醇乙酸溶液（9:1，v:v）洗脱模板分子，直至高效液相色谱紫外检测器检测不到模板分子为止。 

实施例7： 

搅拌棒（直径为4mm，长度为19mm）先用丙酮浸泡1h以去除保护层，然后在1mol/L氢氧化钠中浸泡1h、0.1mol/L盐酸中浸泡1h，去离子水清洗除去表面残留的酸至中性，于50℃真空干燥活化1h，干燥后放于质量百分比浓度为25%的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三乙氧基硅烷丙酮溶液中硅烷化2h，甲醇洗净表面残留的反应液后，氮气吹干备用。 

1mmol香兰素、425μL甲基丙烯酸和5mg Fe₃O₄PANI复合纳米粒子在10mL甲苯中混匀后，预聚6h，加入3mL乙二醇二甲基丙烯酸酯及30mg偶氮二异丁腈（使得模板分子、功能单体、交联剂三者的摩尔比为1:5:10，引发剂的用量为模板分子摩尔量的15%），超声5min。放入硅烷化磁性搅拌棒，通氮气除氧，塞紧密封，氮气环境下55℃聚合4h。取出搅拌棒，真空70℃老化1h，甲醇乙酸溶液（9:1，v:v）洗脱模板分子，直至高效液相色谱紫外检测器检测不到模板分子为止。 

本发明制备的分子印迹搅拌棒固相萃取体系对食用香精香兰素具有特异的识别能力，应用于实际样品测定时可提高方法的准确度，高效快速，抗干扰能力强，且制备方法简便、价格低廉、稳定性和重现性良好。本发明各实施例的应用效果均与实施例1相同或相似。 

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Claims (10)

1.一种磁场诱导功能化纳米粒修饰的分子印迹搅拌棒固相萃取体系的制备方法，该方法包括以下步骤：

a）搅拌棒预处理：将磁性搅拌棒依次经过丙酮、碱、酸浸泡后，再通过去离子水洗涤至中性后活化，再置于硅烷偶联剂中进行硅烷化反应，经甲醇清洗，氮气吹干；

b）Fe₃O₄PANI复合纳米粒子与印迹氢键复合物共同预组装：将模板分子、Fe₃O₄PANI复合纳米粒和功能单体甲基丙烯酸置于致孔剂中预聚6～12h；

c）磁场诱导自组装修饰搅拌棒以及聚合形成印迹聚合物：加入交联剂及引发剂，超声，放入硅烷化后的磁性搅拌棒吸附5-20min，氮气保护，55℃～60℃条件下聚合6～12h；

d）洗脱模板分子：取出磁性搅拌棒老化至少1h，洗脱模板分子，得到分子印迹固相萃取搅拌棒。

2.根据权利要求1中所述的分子印迹固相萃取搅拌棒的制备方法，其特征在于：所述的碱为0.5～2mol/L的NaOH溶液；酸为0.1～1.0mol/L的HCL溶液；丙酮、碱和酸浸泡时间各为1～2h。

3.根据权利要求1中所述的分子印迹固相萃取搅拌棒的制备方法，其特征在于：所述的活化方式为真空50～70℃下干燥1～2h。

4.根据权利要求1中所述的分子印迹固相萃取搅拌棒的制备方法，其特征在于：所述的硅烷偶联剂为质量百分比浓度为10～30%的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三乙氧基硅烷丙酮溶液或者质量百分比浓度为10～30%的γ-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷丙酮溶液。

5.根据权利要求1中所述的分子印迹固相萃取搅拌棒的制备方法，其特征在于所述的硅烷化时间为1～2h。

6.根据权利要求1中所述的分子印迹固相萃取搅拌棒的制备方法，其特征在于：所述的模板分子是香兰素，与甲基丙烯酸和交联剂的用量摩尔比为1:1～7:5～35。

7.根据权利要求1所述的分子印迹固相萃取搅拌棒的制备方法，其特征在于：所述的Fe₃O₄PANI复合纳米粒在致孔剂中的浓度为0.5～1.5mg/mL。

8.根据权利要求1所述的分子印迹固相萃取搅拌棒的制备方法，其特征在于：交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯、三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯中的一种；引发剂为偶氮二异丁腈；致孔剂为甲苯或者甲醇，模板分子在致孔剂中的浓度为0.1～0.2mol/L。

9.根据权利要求1中所述的分子印迹固相萃取搅拌棒的制备方法，其特征在于：引发剂的摩尔量为模板分子摩尔量的10%～20%。

10.根据权利要求1中所述的分子印迹固相萃取搅拌棒的制备方法，其特征在于：老化条件为真空50～70℃下干燥1～6h。