CN103933550A - 建立食蟹猴实验性自身免疫脑脊髓膜炎模型的方法及应用 - Google Patents

建立食蟹猴实验性自身免疫脑脊髓膜炎模型的方法及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN103933550A
CN103933550A CN201410091015.3A CN201410091015A CN103933550A CN 103933550 A CN103933550 A CN 103933550A CN 201410091015 A CN201410091015 A CN 201410091015A CN 103933550 A CN103933550 A CN 103933550A
Authority
CN
China
Prior art keywords
application
model
emulsion
mri
experimental autoimmune
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201410091015.3A
Other languages
English (en)
Inventor
倪佳
王松
邓继林
刘俊娥
张红
宋之战
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
PRISYS BIOTECHNOLOGIES Co Ltd
Original Assignee
PRISYS BIOTECHNOLOGIES Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by PRISYS BIOTECHNOLOGIES Co Ltd filed Critical PRISYS BIOTECHNOLOGIES Co Ltd
Priority to CN201410091015.3A priority Critical patent/CN103933550A/zh
Publication of CN103933550A publication Critical patent/CN103933550A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明公开了一种食蟹猴实验性自身免疫脑脊髓膜炎模型的建立方法及应用。具体技术方案为：将MOG34-56（100μg/ml）配制成乳剂（MOG溶液:CFA=1:1）；将实验猴麻醉后，分10个注射点，皮内注射1ml配制的乳剂；第一次免疫注射（1免）后的第7天，按同样的方法和剂量再免疫注射一次乳剂（2免）；自第一次免疫后1天进行临床观察，并记录临床评分；在发病的各时间节点，用MRI影像学方法确定发病部位及发病程度等。本发明具有啮齿类动物模型无法实现的应用价值，且与恒河猴模型相比具有复发缓解型的发病，成本低，实验猴资源丰富等特点，在多发性硬化疾病的相关领域有广泛的用途。

Description

建立食蟹猴实验性自身免疫脑脊髓膜炎模型的方法及应用
技术领域
本发明涉及疾病模型的建立，具体涉及一种食蟹猴实验性自身免疫脑脊髓膜炎模型的建立方法及应用。 
背景技术
实验性自身免疫脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)是由同种型、同种异型、异种异型致脑炎抗原诱导的、实验敏感动物产生的、由细胞免疫反应介导的、以中枢神经系统(central nervous system，CNS)白质脱髓鞘为特征的迟发型变态反应性自身免疫疾病，其免疫发病机制和病损与人类多发性硬化(multiple sclerosis,MS)极为相似，被公认为是研究多发性硬化疾病的理想模型。 
目前实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)模型通常是建立在啮齿类动物上的。由于啮齿类在进化关系上与人类相距甚远，实践表明，啮齿类动物实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)模型产生的实验结果在临床实验中很难得到验证；以此模型进行药物开发的成功率较低；以其为研究对象所获得的实验数据对现实指导意义不大。非人灵长类的解剖特点、免疫等各系统生理功能、及对疾病和治疗药物的反应性等与人类极为相近，是进行免疫学相关疾病研究和治疗、以及进行药物临床前有效性和安全性评价的敏感动物。 
随着新药研发技术的发展，尤其是大分子药物(如抗体，核酸，蛋白类药物)技术的成熟，药物特异性作用靶点以及与试验模型交叉反应性是药物研发成功的重要影响因素。非人灵长类动物和人体的亲缘相近，靶点的结构和生物系统相似，有很好的交叉反应性。因此建立非人灵长类实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)模型将满足多发性硬化治疗药物临床前评价的迫切需要，模型数据对多发性硬化的研究以及对治疗方案等临床应用具有重要的指导意义。 
MOG是一种表达在中枢少突胶质细胞和髓鞘莫表面的跨膜糖蛋白，在体内含量很少却具有很高的免疫原性。研究表明，MOG是唯一能引起脱髓鞘抗体反应，又能引起T细胞反应的中枢神经系统髓鞘蛋白成分。因此，用MOG作为免疫原来诱导产生实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)能更好的帮助阐明多发性硬化(MS)的发病机制。 
Herbert P.M.Brok等曾报道了使用MOG诱导恒河猴(Macaca mulatta)的EAE模型，其方法为：用恒河猴作为实验动物，将1ml浓度为100μg/ml的MOG乳剂(PBS:CFA＝1:1)分10个点注射于皮内；4周后再次皮内注射1ml浓度为100μg/ml的乳剂(NS.:IFA＝1:1)，结果实验猴都出现了EAE的症状。但该方法的缺点是：1.诱导周期太长；2.采用较为主观的疾 病症状评分标准；3.恒河猴个体较大。这些缺点阻碍了该模型在科研、药物研发、以及产业化实践中的应用。 
本发明结合中国食蟹猴(Macaca fascicularis)实验动物大量存栏的现状，在反复研究经验的基础上，创新使用MOG(MOG34-56的肽段)二次免疫方法，在食蟹猴实验动物上诱导产生非人灵长类EAE模型。二次注射MOG34-56免疫诱导后，动物表现为起病急以及缓解-复发的发病特点。同时，引入临床磁共振(MRI)影像学结合临床观察评分的方法，最大程度减少了疾病临床评价的人为因素。本发明建立的模型具有发病特点和病理学表现与人类多发性硬化有高度的相似性、MRI影像学方法准确评估发病部位及发病程度等特点。 
发明内容
本发明建立了一种食蟹猴实验性自身免疫脑脊髓膜炎模型的方法。 
本发明是通过以下技术方案实现的： 
a、乳剂配制：将MOG34-56(100μg/ml)配制成乳剂(MOG溶液:CFA＝1:1)； 
b、将实验猴麻醉后，分10个注射点，皮内注射1ml配制的乳剂； 
c、第一次免疫注射后的第7天，按同样的方法和剂量再免疫注射一次乳剂； 
d、自第一次免疫后1天进行临床观察，并记录临床评分； 
e、在发病的各时间节点，用MRI影像学方法确定发病部位及发病程度等。 
本发明所提供的一种食蟹猴实验性自身免疫脑脊髓膜炎模型的建立方法，优选的是：创新的使用MOG34-56肽段进行两次免疫。 
本发明所提供的一种食蟹猴实验性自身免疫脑脊髓膜炎模型的建立方法，优选的是：创新使用食蟹猴(Macaca fascicularis)作为实验动物。 
本发明所提供的一种食蟹猴实验性自身免疫脑脊髓膜炎模型的建立方法，优选的是：MRI影像学结合临床观察评分的方法。 
本发明的优点是： 
本发明动物模型具有啮齿类动物模型无法实现的应用价值： 
a、解剖特点、免疫等各系统生理功能、及对疾病和治疗药物的反应性与人类极为相近； 
b、和人亲缘相近，靶点的结构和生物系统相似，为药物特异性(如抗体，核酸，蛋白类药物等)作用靶点提供很好的交叉反应性。 
本发明动物模型与恒河猴模型相比更具有实际应用价值： 
a、发病特点与人类多发性硬化有高度的相似性；尤其是具备了复发缓解型的发病特征； 
b、与恒河猴相比动物个体小，使用较少受试药物，降低成本； 
c、采用猴场大量繁育的食蟹猴，遗传背景清楚，质量控制严格，实验猴资源丰富。 
本发明动物模型采用MOG34-56肽段间隔7天两次免疫的方法，缩短了模型的诱导期。 
本发明动物模型使用MRI影像学结合临床观察评分的方法，最大程度减少了疾病临床评价的人为因素。 
本发明动物模型在多发性硬化疾病的相关领域有广泛的用途，例如： 
a、利用模型进行多发性硬化疾病的发生、发病机制、诊断、生物识别、和转化医学研究； 
b、利用模型的发病率、发病程度、和发病特征，进行多发性硬化疾病的预防、治疗、护理、以及对各类治疗技术和新药进行评价和药效研究等； 
c、利用模型的试验建立新的多发性硬化疾病的指标、评分标准等； 
d、利用模型的动物材料建立多发性硬化疾病研究相关的数据库、基因库、材料库等。 
附图说明
图1是MOG34-56诱导食蟹猴EAE不同时间的临床评分图，显示发病-恢复-复发的病程特征 
以下通过具体实施方式对本发明作进一步的详细描述，但并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变和变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。 
具体实施方式
为了可以使本专业技术人员更全面地理解本发明,下面结合实施例进一步阐述本发明，但不以任何方式限制本发明。 
实验动物：4只食蟹猴(Macaca fascicularis，雄性，4岁，体重3-5千克)，购自海南金港实验动物科技有限公司。 
主要试剂：完全弗氏佐剂(Complete Freund adjuvant，CFA)，购自Sigma公司；MOG34-56购自吉尔生化(上海)有限公司。 
主要溶液的配制：将MOG34-56溶解于生理盐水中，在4℃条件下用等体积CFA乳化5分钟。 
主要仪器：磁共振仪(GE)，1.5T。 
实验方法： 
将配制好的MOG-CFA乳剂，分十点注射于皮内，每猴1ml。 
自注射(免疫)后1天起，进行临床观察，并进行症状临床评分。 
并于首次注射(免疫)后的第7天按相同剂量和方法进行第二次免疫注射。 
根据发病后临床评分需要时，进行MRI扫描。 
MRI扫描步骤： 
用盐酸氯胺酮麻醉实验猴，并以戊巴比妥钠深度麻醉后，实验猴于MRI机上固定体位，设定特定部位和坐标进行MRI扫描。 
实验结果： 
3只食蟹猴在首次免免疫注射后4周内均出现明显MS临床症状，1只食蟹猴于第8周出现明显MS临床症状。 
模型成功率： 
本模型的成功率为100％。 
注意事项： 
在本模型的整个操作过程中时刻注意人和实验动物的安全。 
附图说明： 
图2是皮内注射MOG34-56乳剂的注射部位及免疫效果图 
图3是多发性硬化(MS)病人(左图)和MOG34-56诱导的食蟹猴EAE(右图)脑部磁共振(MRI)成像对比图，显示食蟹猴与人具有相似的脑部构造，显示MOG34-56诱导的食蟹猴EAE和MS病人具有相似的脑内多发病变灶。 
图4是磁共振(MRI)不同轴向扫描显示MOG34-56诱导EAE的食蟹猴脑病变灶图，其与临床评分的对比，显示病变程度与评分高低的关系。 
图5是MOG34-56诱导EAE食蟹猴的脑部MRI显示病灶与脑组织切片对比图，显示在MRI病灶区域同一位置的脑组织病理切片有清晰可见出血性损伤。 
图6是MOG34-56诱导EAE食蟹猴的脑组织病理切片(H&E染色)图，显示病灶内的出血点(左上角)和炎性细胞浸润(右下角)。 

Claims (11)

1.建立食蟹猴实验性自身免疫脑脊髓膜炎模型的方法，所述模型建立方法为：
a、乳剂配制：将MOG34-56（100μg/ml）配制成乳剂（MOG溶液:CFA=1:1）；
b、将实验猴麻醉后，分10个注射点，皮内注射1ml配制的乳剂；
c、第一次免疫注射后的第7天，按同样的方法和剂量再免疫注射一次乳剂；
d、自第一次免疫后1天进行临床观察，并记录临床评分；
e、在发病的各时间节点，用磁共振（MRI）影像学方法确定发病部位及发病程度等。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：使用MOG34-56肽段间隔7天两次免疫的方法。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：使用食蟹猴（Macaca fascicularis）作为实验动物。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：使用MRI影像学结合临床观察评分的方法。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：使用MRI影像学方法准确评估发病部位及发病程度。
6.如权利要求1所述的方法在实验性自身免疫脑脊髓膜炎动物模型中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述动物是除了恒河猴（Macaca mulatta）和狨猴（Marmoset）以外的非人灵长类动物。
8.如权利要求6所述的应用，其特征在于：使用MRI影像学方法评估疾病程度以及发病、恢复、和复发等各期的标准。
9.如权利要求6所述的应用，其特征在于：评估疾病程度的电子存储媒介中的应用。
10.如权利要求6所述的应用，其特征在于：评价任何一种技术、方法、装置在诊断或干预人类多发性硬化症中的应用。
11.如权利要求10所述的应用，其特征在于：所述的技术、方法、装置是诊断指标、生物标示物、治疗或预防药物。
CN201410091015.3A 2014-03-13 2014-03-13 建立食蟹猴实验性自身免疫脑脊髓膜炎模型的方法及应用 Pending CN103933550A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410091015.3A CN103933550A (zh) 2014-03-13 2014-03-13 建立食蟹猴实验性自身免疫脑脊髓膜炎模型的方法及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410091015.3A CN103933550A (zh) 2014-03-13 2014-03-13 建立食蟹猴实验性自身免疫脑脊髓膜炎模型的方法及应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN103933550A true CN103933550A (zh) 2014-07-23

Family

ID=51181605

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410091015.3A Pending CN103933550A (zh) 2014-03-13 2014-03-13 建立食蟹猴实验性自身免疫脑脊髓膜炎模型的方法及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103933550A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105193391A (zh) * 2015-10-26 2015-12-30 成都华西海圻医药科技有限公司 一种检测猴体神经毒力试验的方法
CN106986930A (zh) * 2017-04-14 2017-07-28 广东省生物资源应用研究所 一种诱导食蟹猴实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型的蛋白和应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1939332A (zh) * 2005-09-30 2007-04-04 中国科学院上海药物研究所 S－腺苷同型半胱氨酸的医学用途
WO2007094003A2 (en) * 2006-02-15 2007-08-23 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Viral display vehicles for treating multiple sclerosis
CN101564320A (zh) * 2008-04-25 2009-10-28 首都医科大学宣武医院 一种建立多发性硬化动物模型的方法
WO2010030887A1 (en) * 2008-09-11 2010-03-18 Catholic Healthcare West Nicotinic attenuation of cns inflammation and autoimmunity

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1939332A (zh) * 2005-09-30 2007-04-04 中国科学院上海药物研究所 S－腺苷同型半胱氨酸的医学用途
WO2007094003A2 (en) * 2006-02-15 2007-08-23 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Viral display vehicles for treating multiple sclerosis
CN101564320A (zh) * 2008-04-25 2009-10-28 首都医科大学宣武医院 一种建立多发性硬化动物模型的方法
WO2010030887A1 (en) * 2008-09-11 2010-03-18 Catholic Healthcare West Nicotinic attenuation of cns inflammation and autoimmunity

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105193391A (zh) * 2015-10-26 2015-12-30 成都华西海圻医药科技有限公司 一种检测猴体神经毒力试验的方法
CN106986930A (zh) * 2017-04-14 2017-07-28 广东省生物资源应用研究所 一种诱导食蟹猴实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型的蛋白和应用
CN106986930B (zh) * 2017-04-14 2021-06-11 广东省生物资源应用研究所 一种诱导食蟹猴实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型的蛋白和应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Mooney et al. Focused ultrasound-induced neurogenesis requires an increase in blood-brain barrier permeability
Lumsden Experimental “allergic” encephalomyelitis
Velloso et al. Spermine improves recognition memory deficit in a rodent model of Huntington’s disease
JP2018516906A (ja) レベチラセタムの持続放出性医薬組成物
Boulos et al. Tamoxifen as an effective neuroprotectant in an endovascular canine model of stroke
CN103933550A (zh) 建立食蟹猴实验性自身免疫脑脊髓膜炎模型的方法及应用
CN106659763A (zh) 使用nmda调节剂治疗抑郁症的方法
CN102895278B (zh) 牛蒡苷及苷元在制备抗帕金森病药物中的用途
RU2674653C2 (ru) Способ предотвращения и/или лечения хронической травматической энцефалопатии - ii
Zhang et al. Targeting pyroptosis with nanoparticles to alleviate neuroinflammatory for preventing secondary damage following traumatic brain injury
Gayen et al. Survival Model of Thoracic Contusion Spinal Cord Injury in the Domestic Pig
Wu et al. Electroacupuncture promotes the proliferation of endogenous neural stem cells and oligodendrocytes in the injured spinal cord of adult rats☆
Wang et al. A mouse model of peripheral nerve injury induced by Japanese encephalitis virus
De Risio 10 Clinical and Diagnostic Investigation of the Seizure Patient
WO2002026785A2 (de) Cd4+ t-lymphozyten spezifische hepatitis c virus-epitope
CN107998400B (zh) 一种药物组合物及其在制备治疗黄病毒属病毒感染的药物中的应用
Pullela et al. A case of ovarian leiomyoma with cystic degeneration
Memon et al. Frequency of depression in chronic Hepatitis C naïve patients
CN105832724A (zh) 吲哚醇在制备抗抑郁症药物中的用途
Radbill et al. Effects of G207, a conditionally replication-competent oncolytic herpes simplex virus, on the developing mammalian brain
TWI827528B (zh) 用於治療慢性中風的醫藥組合物之製備方法
CN111617234B (zh) 外源性重组蛋白Reelin在制备治疗脑出血药物中的应用
Susarla et al. Flaviviruses 4: Japanese encephalitis
Sim et al. A hypoxic young lady in an acute confusional state
Quidé et al. Posttraumatic stress-related white matter microstructure alterations and chronic pain

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20140723