CN103923832B - 一种细胞拆分装置和细胞拆分方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种细胞拆分装置和细胞拆分方法。细胞拆分装置包括带内芯的离心管和细胞培养板；离心管内腔设有内芯，内芯设有带凸起的沿口部和封闭的尖形底部；培养板为与离心管内径相适配的圆形平板，圆形平板的正面边缘处设有撑脚，培养板正面朝下倒扣在内芯上方且撑脚抵在内芯的沿口部。细胞拆分方法包括细胞培养、细胞拆分、细胞核收集、细胞质收集。本发明通过设计适于拆分贴壁生长的细胞的细胞离心拆分装置，在常规离心速度11000～12000r/min的情况下，离心拆分细胞的效率达到90～95%。该细胞离心拆分装置的结构简单，离心拆分细胞方法方便高效且容易实现。
Description
技术领域
本发明涉及细胞工程，尤其涉及一种细胞拆分装置和细胞拆分方法。
背景技术
在生命科学迅速发展的当今社会，动物克隆、干细胞、乳腺生物反应器转基因动物、人造组织和器官等重大科学进展都离不开细胞工程所建立的平台。细胞工程是人类按照一定的设计方案，通过在细胞、亚细胞或组织水平上进行实验操作，获得重构的细胞、组织、器官，甚至个体，从而培育创造优秀品种或产品的综合性生物工程。当前细胞工程所涉及的主要技术领域有细胞培养、细胞融合、细胞拆合、染色体操作及基因转移等方面。细胞工程已经渗透到人类生活衣食住行等许多领域，如治疗疾病的药物、预防疾病的疫苗、美容的化妆品、吃的食物等。
在当今的生命科学技术中，细胞的拆分和重组日益成为细胞工程的重要组成部分。细胞是由细胞质和细胞核组成的，通过分离拆分细胞的细胞质和细胞核，然后根据生命科技发展的要求，重组成不同细胞组分来源组成的重组细胞，从而能够培育出新的品种和个体服务于人类。
目前拆分细胞质和细胞核的方法是采用高速离心的方法，即使用速度达到30000～40000r/min的超高速离心机。超高速离心机常用于病毒等超小颗粒方面的研究，而且超高速离心机的价格昂贵，维护成本高，对于常规的实验室而言难以具备，并且使用超高速离心机的细胞拆分效率只能达到40～50％。目前，实验室常规高速离心机为12000r/min的普通离心机，该离心机价格便宜，维护成本低，在不借助细胞拆分装置的情况下，细胞拆分效率只能达到6～10％。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种细胞拆分装置。
本发明要解决的另外一个技术问题是提供一种细胞拆分方法。
对于细胞拆分装置，本发明采用的技术方案是：一种细胞拆分装置，包括带内芯的离心管和细胞培养板；离心管内腔设有内芯，内芯设有带凸起的沿口部和封闭的尖形底部；细胞培养板为与离心管内径相适配的圆形平板，圆形平板的正面边缘处设有撑脚，细胞培养板正面朝下倒扣在内芯上方且撑脚抵在内芯的沿口部。
作为优选，内芯为外径与离心管内径相适配的小管。
作为优选，细胞培养板的正面用细胞粘附剂处理。
作为优选，细胞培养板的两端设有用于夹取的内凹的缺口。
作为优选，细胞培养板为塑料制成。
作为优选，塑料是聚苯乙烯或聚丙烯材料。
对于细胞拆分方法，本发明采用的技术方案是包括以下步骤：
(1)细胞培养
接种细胞于细胞培养板的正面，细胞培养板放置在含有细胞培养液的细胞培养皿中，并置于细胞培养箱中进行培养；当贴壁培养的细胞生长处于对数生长期时，更换成含有细胞松弛素的细胞培养液，培养箱中继续培养1小时，把粘附生长细胞的细胞培养板从细胞培养皿中取出；
(2)细胞拆分
把细胞离心拆分装置的离心管内芯中添加细胞培养液，在细胞培养板细胞粘附面向下倒扣至离心管内芯上，使内芯中的细胞培养液浸没倒扣的细胞培养板，盖上离心管盖子，放入离心机中离心；
(3)细胞核收集
离心完毕后，取出倒扣的细胞培养板，吸出离心管内芯中的细胞培养液，将离心管内芯底部沉淀的细胞核取出；
(4)细胞质收集
离心完毕后，将取出的细胞培养板放入胰酶消化液中，经过短暂消化处理，将从细胞培养板上消化脱落的细胞质收集。
作为优选，细胞培养液为DMEM液+10％FBS+100U/ml青霉素+100mg/ml链霉素。
作为另一个优选，离心机是转速为11000～12000r/min的常规高速离心机。
本发明的有益效果是：
通过设计一种适于拆分贴壁生长的细胞的离心拆分装置，在常规离心速度11000～12000r/min的情况下，离心拆分细胞的效率达到90～95％。该细胞离心拆分装置的结构简单，离心拆分细胞方法方便高效且容易实现。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图1是本发明细胞拆分装置实施例1的结构示意图。
图2是本发明细胞拆分装置实施例1的培养板主视图。
图3是本发明细胞拆分装置实施例1的培养板俯视图。
图4是本发明细胞拆分装置实施例1的培养板仰视图。
图5是本发明细胞拆分装置实施例2的结构示意图。
图中，1-离心管，2-内芯，3-培养板，4-缺口，5-撑脚。
具体实施方式
实施例1
一种细胞拆分装置，由带内芯2的离心管1和细胞培养板3组成。
在图1中，内芯为外径与离心管内径相适配的小管且设置在离心管内腔的中部，内芯设有封闭的尖底和凸起的上沿口。
图2中，培养板3是用聚苯乙烯或聚丙烯材料制成的圆形平板，培养板3的直径可以放置在离心管内腔中且与离心管1内径相适配。
为了使得细胞更好地在培养板上粘附生长，将培养板的正面经过细胞粘附剂处理，培养板两端设有用于夹取的内凹的缺口4(图3)，在正面的边缘处设有3个撑脚(图4)。
以下是将该细胞拆分装置用于细胞拆分的使用方法：
(1)细胞培养
先将细胞培养板的正面经过细胞粘附剂处理后，接种细胞于细胞培养板的正面，细胞培养板放置在含有细胞培养液的细胞培养皿中，并置于细胞培养箱中进行培养；当贴壁培养的细胞生长处于对数生长期时，更换成含有细胞松弛素的细胞培养液，培养箱中继续培养1小时，把粘附生长细胞的细胞培养板从细胞培养皿中取出；其中细胞培养液为DMEM液+10％FBS+100U/ml青霉素+100mg/ml链霉素。
(2)细胞拆分
把细胞离心拆分装置的离心管内芯中添加细胞培养液，将从细胞培养皿中取出的粘附生长细胞的细胞培养板3的正面朝下倒扣置于离心管1内的内芯2上方，并且使撑脚抵在内芯的上沿口，使内芯中的细胞培养液浸没倒扣的细胞培养板，盖上离心管盖子，放入离心机中离心；其中细胞培养液为DMEM液+10％FBS+100U/ml青霉素+100mg/ml链霉素。
(3)细胞核收集
离心完毕后，取出倒扣的细胞培养板，吸出离心管内芯中的细胞培养液，将沉淀在离心管内芯尖形底部的细胞核取出。
(4)细胞质收集
离心完毕后，将取出的细胞培养板放入胰酶消化液中，经过短暂消化处理，将从细胞培养板上消化脱落的细胞质收集。
实施例2
如图5所示，细胞拆分装置同样由带内芯2的离心管1和细胞培养板3组成，但内芯2与离心管1是用聚苯乙烯或聚丙烯塑料一体制作而成。本实施例的其他结构与使用方法与实施例1相同。
以上所述的本发明实施方式，并不构成对本发明保护范围的限定。任何在本发明的精神和原则之内所作的修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的权利要求保护范围之内。
Claims (8)
1.一种细胞拆分装置，其特征在于：包括带内芯的离心管和细胞培养板；所述离心管内腔设有内芯，所述内芯设有带凸起的沿口部和封闭的尖形底部；所述细胞培养板为与离心管内径相适配的圆形平板，所述圆形平板的正面边缘处设有撑脚，所述培养板正面朝下倒扣在内芯上方且撑脚抵在内芯的沿口部；所述内芯为外径与离心管内径相适配的小管。
2.根据权利要求1所述的细胞拆分装置，其特征在于：所述细胞培养板的正面用细胞粘附剂处理。
3.根据权利要求1所述的细胞拆分装置，其特征在于：所述细胞培养板的两端设有用于夹取的内凹的缺口。
4.根据权利要求1所述的细胞拆分装置，其特征在于：所述细胞培养板为塑料制成。
5.根据权利要求4所述的细胞拆分装置，其特征在于：所述塑料是聚苯乙烯或聚丙烯材料。
6.一种用于权利要求1所述细胞拆分装置的细胞拆分方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)细胞培养
接种细胞于细胞培养板的正面，细胞培养板放置在含有细胞培养液的细胞培养皿中，并置于细胞培养箱中进行培养；当贴壁培养的细胞生长处于对数生长期时，更换成含有细胞松弛素的细胞培养液，培养箱中继续培养1小时，把粘附生长细胞的细胞培养板从细胞培养皿中取出；
(2)细胞拆分
把细胞离心拆分装置的离心管内芯中添加细胞培养液，在细胞培养板细胞粘附面向下倒扣至离心管内芯上，使内芯中的细胞培养液浸没倒扣的细胞培养板，盖上离心管盖子，放入离心机中离心；
(3)细胞核收集
离心完毕后，取出倒扣的细胞培养板，吸出离心管内芯中的细胞培养液，将离心管内芯底部沉淀的细胞核取出；
(4)细胞质收集
离心完毕后，将取出的细胞培养板放入胰酶消化液中，经过短暂消化处理，将从细胞培养板上消化脱落的细胞质收集。
7.根据权利要求6所述的细胞拆分方法，其特征在于：所述细胞培养液为DMEM液+10％FBS+100U/ml青霉素+100mg/ml链霉素。
8.根据权利要求6所述的细胞拆分方法，其特征在于：所述离心机是转速为11000～12000r/min的常规高速离心机。
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