CN103923160A - 红毛走马胎苷及其医药用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及式Ⅰ所示的化合物红毛走马胎苷，其名称为：3β-O-{α-L-吡喃鼠李糖-(1-4)-[β-D-吡喃葡萄糖-(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖-(1-2)]-α-L吡喃阿拉伯糖-西克拉敏A。本发明还涉及红毛走马胎苷用于制备治疗癌症及其相关疾病的药物的用途。

Description

红毛走马胎苷及其医药用途

技术领域

本发明涉及植物红毛走马胎的提取物，具体涉及红毛走马胎苷以及红毛走马胎苷在制备治疗恶性肿瘤及其相关疾病的药物中的用途。

背景技术

红毛走马胎(Ardisia mamilata Hance),是紫金牛科紫金牛属植物,该属植物在全世界有300多种，我国有68种12个变种分布于长江流域以及华南地区(候宽昭；中国种植植物科属词典，科学出版社，1982年，P.181)。本属植物入药有21种，具有痛经活络，活血和瘀和消炎止痛等作用(中国科学院昆明植物所；新华本草纲要，上海科技出版社，1991年，P.891)。据《中药大辞典》中记载，该植物具有治疗痢疾，肝炎，胆囊炎，风湿，跌打损伤，咳血,疮疖肿痛等疾病。本发明的发明人用当今常规的植物化学方法，从红毛走马胎原植物中分离得到一种新化合物，并验证了该化合物的用途，由此完成了本发明。

发明内容

本发明提供了一种新化合物红毛走马胎苷，以及红毛走马胎苷用于制备预防或治疗恶性肿瘤的药物的用途。

本发明第一方面涉及式Ⅰ所示的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体。

该化合物的分子的链接方式为：3β-O-{α-L-吡喃鼠李糖-(1-4)-[β-D-吡喃葡萄糖-(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖-(1-2)]-α-L吡喃阿拉伯糖-西克拉敏A，分子式为C₅₃H₈₆O₂₂，分子量为1074(负离子快速原子轰击m/z1073)，定名为：红毛走马胎苷。

本发明第二方面涉及本发明第一方面任一项的化合物的制备方法，其包括以下步骤：

取紫金牛属植物红毛走马胎(Ardisia mamilata Hance)，用乙醇一次或多次提取，得到乙醇提取物；

将乙醇提取物在正丁醇-水中进行分配，得到正丁醇提取物；

将正丁醇提取物经硅胶柱层析分离，正丁醇/醋酸/水梯度洗脱，得到本发明第一方面任一项的化合物。

本发明第三方面涉及药物组合物，其含有本发明第一方面任一项的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体，以及药学上可接受的载体或赋形剂。

根据本发明第三方面任一项的药物组合物，其为液体制剂(注射剂，口服液,滴鼻液)、固体制剂(片剂,胶囊剂、颗粒剂和缓释剂等)、外用制剂(如：贴剂，喷雾剂等)、气溶胶剂或涂布剂。

根据本发明第三方面任一项的药物组合物，其中所述固体制剂的辅料包括崩解剂、稀释剂、黏合剂、润滑剂等；所述液体制剂的辅料包括溶媒、pH调节剂、渗透压调节剂、抗氧剂、金属络合剂、防腐剂、矫味剂等。

本发明第四方面涉及本发明第一方面任一项的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体用于制备预防或治疗恶性肿瘤的药物中的用途。

在本发明中，其中所述恶性肿瘤包括实体肿瘤如胆管、骨、膀胱、脑/中枢神经系统、乳房、结直肠、子宫内膜、胃、头和颈、肝、肺、神经元、食道、卵巢、胰腺、前列腺、肾脏、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫和外阴等的癌症，和非实体肿瘤如白血病、多发性骨髓瘤、肉瘤或淋巴瘤等。

在本发明中，其中所述药物的给药途径为口服、注射或局部用药。

在本发明中，给药剂型可以是例如片剂，胶囊、缓释和注射液等。

本发明还涉及预防或治疗恶性肿瘤的方法，所述方法包括给有需要的受试者预防或治疗有效量的本发明第一方面任一项的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体的步骤。

在本发明合成式I化合物的方法中，反应所用的各种原材料是本领域技术人员根据已有知识可以制备得到的，或者是可以通过文献公知的方法制得的，或者是可以通过商业购得的。以上反应方案中所用的中间体、原材料、试剂、反应条件等均可以根据本领域技术人员已有知识可以作适当改变的。

本发明的式I化合物可以与其它活性成分组合使用，只要它不产生其他不利作用，例如过敏反应。

本发明式I所示的活性化合物可作为唯一的抗癌药物使用，或者可以与一种或多种其他抗肿瘤药物联合使用。联合治疗通过将各个治疗组分同时、顺序或隔开给药来实现。

本文所用的术语“组合物”意指包括包含指定量的各指定成分的产品，以及直接或间接从指定量的各指定成分的组合产生的任何产品。

本发明的化合物可以以衍生自无机酸或有机酸的药学可接受的盐的形式使用。词语“药学可接受的盐”指在可靠的医学判断范围内，适合用于与人类和低等动物的组织接触而不出现过度的毒性、刺激、过敏反应等，且与合理的效果/风险比相称的盐。药学可接受的盐是本领域公知的。例如，S.M.Berge,et al.,J.Pharmaceutical Sciences,1977,66:1中对药学可接受的盐进行了详细描述。所述盐可通过使本发明化合物的游离碱官能度与合适的有机酸反应，在本发明化合物的最终分离和纯化过程中原位制备或者单独制备。代表性的酸加成盐包括但不限于乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐(异硫代硫酸盐，isothionate)、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。同样，碱性含氮基团可用以下物质季铵化：低级烷基卤化物如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯如硫酸二甲酯、二乙酯、二丁酯和二戊酯；长链卤化物如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基的氯化物、溴化物和碘化物；芳基烷基卤化物如苄基溴和苯乙基溴及其他。因此得到可溶于或分散于水或油的产品。可用来形成药学可接受的酸加成盐的酸实例包括无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，以及有机酸如草酸、马来酸、琥珀酸和柠檬酸。

碱加成盐可通过使本发明化合物的含羧酸部分与合适的碱反应，在本发明化合物的最终分离和纯化过程中原位制备，所述的碱例如药学可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐和碳酸氢盐，或者氨或有机伯胺、仲胺或叔胺。

药学可接受的盐包括但不限于基于碱金属或碱土金属的阳离子如锂、钠、钾、钙、镁和铝盐等，以及无毒的季铵和胺阳离子，包括铵、四甲基铵、四乙基铵、甲基铵、二甲基铵、三甲基铵、三乙基铵、二乙基铵和乙基铵等。可用于形成碱加成盐的其他代表性有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶、哌嗪等。

本发明式I化合物还包括其异构体、消旋体、对映体、非对映体、对映体富集物、溶剂合物、和酯，本发明式I化合物以及它的异构体、消旋体、对映体、非对映体、对映体富集物、溶剂合物、和酯还可以形成溶剂合物，例如水合物、醇合物等。上述化合物还可以是前药或可在体内代谢变化后释放出所述活性成分的形式。选择和制备适当的前药衍生物是本领域技术人员公知技术。一般来说，对于本发明的目的，与药学可接受的溶剂如水、乙醇等的溶剂合物形式与非溶剂合物形式相当。

可改变本发明药物组合物中各活性成分的实际剂量水平，以便所得的活性化合物量能有效针对具体患者、组合物和给药方式得到所需的治疗反应。剂量水平须根据具体化合物的活性、给药途径、所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。但是，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。

当用于上述治疗和/或预防或其他治疗和/或预防时，治疗和/或预防有效量的一种本发明化合物可以以纯形式应用，或者以药学可接受的酯或前药形式(在存在这些形式的情况下)应用。或者，所述化合物可以以含有该目的化合物与一种或多种药物可接受赋形剂的药物组合物给药。词语“治疗和/或预防有效量”的本发明化合物指以适用于任何医学治疗和/或预防的合理效果/风险比治疗障碍的足够量的化合物。但应认识到，本发明化合物和组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。一般说来，本发明式I化合物用于哺乳动物特别是人的剂量可以介于0.001～1000mg/kg体重/天，例如介于0.01～100mg/kg体重/天，例如介于0.01～10mg/kg体重/天。

运用本领域技术人员熟悉的药物载体可以制备成含有效剂量的本发明化合物的药物组合物。因此本发明还提供包含与一种或多种无毒药物可接受载体配制在一起的本发明化合物的药物组合物。所述药物组合物可特别专门配制成以固体或液体形式供口服给药、供胃肠外注射或供直肠给药。

所述的药物组合物可配制成许多剂型，便于给药，例如，口服制剂(如片剂、胶囊剂、溶液或混悬液)；可注射的制剂(如可注射的溶液或混悬液，或者是可注射的干燥粉末，在注射前加入注射水可立即使用)。所述的药物组合物中载体包括：口服制剂使用的粘合剂(如淀粉，通常是玉米、小麦或米淀粉、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮)，稀释剂(如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素，和/或甘油)，润滑剂(如二氧化硅、滑石、硬脂酸或其盐，通常是硬脂酸镁或硬脂酸钙，和/或聚乙二醇)，以及如果需要，还含有崩解剂，如淀粉、琼脂、海藻酸或其盐，通常是藻酸钠，和/或泡腾混合物，助溶剂、稳定剂、悬浮剂、无色素、矫味剂等，可注射的制剂使用的防腐剂、加溶剂、稳定剂等；局部制剂用的基质、稀释剂、润滑剂、防腐剂等。药物制剂可以经口服或胃肠外方式(例如静脉内、皮下、腹膜内或局部)给药，如果某些药物在胃部条件下是不稳定的，可以将其配制成肠衣片剂。

更具体地说，本发明的药物组合物可通过口服、直肠、胃肠外、池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过散剂、软膏剂或滴剂)、口颊给予人类和其他哺乳动物，或者作为口腔喷雾剂或鼻腔喷雾剂给予。本文所用术语“胃肠外”指包括静脉内、肌肉内、腹膜内、胸骨内、皮下和关节内注射和输液的给药方式。

适合于胃肠外注射的组合物可包括生理上可接受的无菌含水或非水溶液剂、分散剂、混悬剂或乳剂，及供重构成无菌可注射溶液剂或分散剂的无菌散剂。合适的含水或非水载体、稀释剂、溶剂或媒介物的实例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)、植物油(如橄榄油)、可注射有机酯如油酸乙酯及它们的合适混合物。

这些组合物也可含有辅料，如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如尼泊金酯类、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等，可确保防止微生物的作用。还期望包括等渗剂，例如糖类、氯化钠等。通过使用能延迟吸收的物质，例如单硬脂酸铝和明胶，可达到可注射药物形式的延长吸收。

混悬剂中除活性化合物外还可含有悬浮剂，例如乙氧基化异十八醇、聚氧乙烯山梨醇和聚氧乙烯失水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶或者这些物质的混合物等。

在一些情况下，为延长药物的作用，期望减慢皮下或肌内注射药物的吸收。这可通过使用水溶性差的晶体或无定形物质的液体混悬剂来实现。这样，药物的吸收速度取决于其溶解速度，而溶解速度又可取决于晶体大小和晶型。或者，胃肠外给药的药物形式的延迟吸收通过将该药物溶解于或悬浮于油媒介物中来实现。

可注射贮库制剂形式可通过在生物可降解聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯(polylactide-polyglycolide)中形成药物的微胶囊基质来制备。可根据药物与聚合物之比和所采用的具体聚合物的性质，对药物释放速度加以控制。其他生物可降解聚合物的实例包括聚原酸酯类(poly(orthoesters))和聚酐类(poly(anhydrides))。可注射贮库制剂也可通过将药物包埋于能与身体组织相容的脂质体或微乳中来制备。

可注射制剂可例如通过用滤菌器过滤或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，所述固体组合物可在临用前溶解或分散于无菌水或其他无菌可注射介质。

本发明化合物或其组合物可用口服方法或非胃肠道给药方式。口服给药可以是片剂、胶囊剂、包衣剂，肠道外用药制剂有注射剂和栓剂等。这些制剂是按照本领域的技术人员所熟悉的方法制备的。为了制造片剂、胶囊剂、包衣剂所用的辅料是常规用的辅料，例如淀粉、明胶、阿拉伯胶，硅石，聚乙二醇，液体剂型所用的溶剂如水、乙醇、丙二醇、植物油(如玉米油、花生油、橄榄油等)。含有本发明化合物的制剂中还有其它辅料，例如表面活性剂，润滑剂，崩解剂，防腐剂，矫味剂和色素等。在片剂、胶囊剂、包衣剂、注射剂和栓剂中含有本发明式I化合物的剂量是以单元剂型中存在的化合物量计算的。在单元剂型中本发明式I化合物一般含量为1-5000mg，优选的单元剂型含有10-500mg，更优选的单元剂型含有20-300mg。具体地说，本发明可以提供的供口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在此类固体剂型中，活性化合物可与至少一种惰性的药物可接受赋形剂或载体如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或以下物质混合：a)填充剂或增量剂如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；b)粘合剂如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶；c)保湿剂如甘油；d)崩解剂如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂如石蜡；f)吸收加速剂如季铵化合物；g)湿润剂如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；h)吸附剂如高岭土和膨润土以及i)润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠和它们的混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，所述剂型中也可包含缓冲剂。

相似类型的固体组合物使用赋形剂例如乳糖及高分子量聚乙二醇等，也可用作软胶囊和硬胶囊中的填充物。

片剂、糖衣丸剂(dragees)、胶囊剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型可与包衣和壳料如肠溶衣材和医药制剂领域公知的其他衣材一起制备。这些固体剂型可任选含有遮光剂，且其组成还可使其只是或优先地在肠道的某个部位任选以延迟方式释放活性成分。可以使用的包埋组合物的实例包括高分子物质和蜡类。如果适合，活性化合物也可与一种或多种上述赋形剂配成微囊形式。

供口服给药的液体剂型包括药学可接受的乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。液体剂型除含有活性化合物外还可含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂，增溶剂和乳化剂例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇(tetrahydrofurfuryl alcohol)、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯及它们的混合物。口服组合物除包含惰性稀释剂外还可包含辅料，例如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香味剂。

供直肠或阴道给药的组合物优选是栓剂。栓剂可通过将本发明化合物与合适的非刺激性赋形剂或载体例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备，它们在室温下为固体，但在体温下则为液体，因此可在直肠腔或阴道腔内熔化而释放出活性化合物。

本发明的化合物及其组合物还考虑用于局部给药。供局部给予本发明化合物的剂量形式包括散剂、喷雾剂、软膏剂和吸入剂。在无菌条件下将活性化合物与药学可接受的载体和任何所需的防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。眼用制剂、眼软膏剂、散剂和溶液剂也被考虑在本发明范围内。

本发明化合物也可以脂质体形式给药。如本领域所公知，脂质体通常用磷脂或其他脂类物质制得。脂质体由分散于含水介质中的单层或多层水化液晶所形成。任何能够形成脂质体的无毒、生理上可接受和可代谢的脂质均可使用。脂质体形式的本发明组合物除含有本发明化合物外，还可含有稳定剂、防腐剂、赋形剂等。优选的脂类是天然和合成的磷脂和磷脂酰胆碱(卵磷脂)，它们可单独或者一起使用。形成脂质体的方法是本领域公知的。(参见例如Prescott,Ed.,Methods in Cell Biology,VolumeXIV,Academic Press,New York,N.Y.(1976),p.33)。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1红毛走马胎苷的制备

将干品红毛走马胎1kg常规粉碎，用50％乙醇提取，每次用乙醇1升，提取5次，合并。减压蒸发至恒重。得到乙醇提取物50g。将乙醇提取物用热水溶解，并在正丁醇/水(体积比：1/1)中进行分配。得到正丁醇提取物15g。将正丁醇取物经硅胶G(100-200目,青岛海洋大学化工厂出品)柱层析层分离，用正丁醇∶醋酸∶水＝8∶(1～2)∶(1～3)梯度洗脱。得到红毛走马胎苷5.3克(得率0.53％)。

实施例2红毛走马胎苷的结构鉴定

红毛走马胎苷为白色(稍黄)粉末。10％的硫酸乙醇溶液在加热的情况下呈现呈红黑色。FAB-MS(m/z[M+H]⁺)确定其分子量是1074，正离子原子轰击质谱给出甙元失羟基峰为m/z455，同时给出阿拉伯糖脱羟基峰(m/z133)，李糖脱羟基峰(m/z147)和葡糖糖脱羟基峰(m/z163)，由此推定该化合物为配糖体。¹³C-NMR和¹³C-DEPT显示为53个碳的信号峰，其中23个为糖残基的吸收峰，30个位三萜苷元的吸收峰。综合分析，¹H和¹³C光谱数据发现与文献(Aquino R,De Simone F Pizza C,SteinM L,J Nat Prod,1989,52:679-685)报道的齐敦果酸型五环三萜西克拉敏苷元A相一致，因此可以推定该化合物为西克拉敏甙元A。

该化合物每个糖残基碳的构型和碳环的大小，是通过考察端基C和H的化学位移和偶合常数并与文献(Scbastiao F Fonseca,Lauro E SBara,Edmundo A Ruveda.Can J Chem,1979,57:441-443；KazukoKawaanishi,Yukiko Uhara,Yohei Hashimoto.Phytochem,1982,21:929-931)报道的数据相比较而确定的。两个葡萄糖的端基氢的化学位移在高场，耦合常数为5.5赫兹，据此可推定为β构型，鼠李糖的端基氢为5.07ppm且偶合常数较小，且在NOESY波谱上没有找到它与H-1，H-3和H-5的相关点，据此可以推定端基氢为α构型。阿拉伯糖的H-1的偶合常数难以指定，但在NOESY光谱上出现了H-1，H-3和H-5关联点，据此可推定其端基碳为α构型。

该化合物在HMBC谱上观察到了鼠李糖的H-1与阿拉伯糖C-4，末端葡萄糖H-1与中间葡萄糖C-2，中间葡萄糖H-1和阿拉伯糖C-2的相关点，同时在NOESY谱图上也观察到了相关点。比较该化合物与西克拉敏甙元A的C-3化学位移，可以确定甙元在C-3上甙化，同时在HMBC谱上观察到了阿拉伯糖残基H-1与甙元C-3之间的相关点，且NOESY图谱也证实了这些相关点。进而确证了红毛走马胎苷分子的链接方式为：3β-O-{α-L-吡喃鼠李糖-(1-4)-[β-D-吡喃葡萄糖-(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖-(1-2)]-α-L吡喃阿拉伯糖-西克拉敏A。其数据见表1和表2。

表1红毛走马胎苷¹³C-NMR数据(δppm,DMCO-d₆,500MHz)

表2.红毛走马胎苷的¹H NMR数据(　ppm DMSO-d₆,500MHz)

实施例3红毛走马胎苷对小鼠体内S180肿瘤作用

红毛走马胎苷(药物)用蒸馏水溶解，不同剂量组对Balb/c小鼠和昆明种小鼠体内S180抑制作用。

1接种：取传代保种5～7天，生长旺盛的荷S180腹水瘤小鼠，脱颈处死，抽出腹腔瘤液，用无菌生理盐水稀释至1000,000细胞/ml的细胞悬液，再用无菌生理盐水稀释3倍，制成细胞悬液。每只小鼠右前肢皮下注射0.2ml。

2给药：不同品种的小鼠，分成若干组别(每组10只)，腹腔注射药物一次，一周以后处死小鼠，测定肿瘤的重量，抑制率＝(对照小鼠肿瘤重-给药小鼠肿瘤重)/对照小鼠肿瘤重×100％。结果表明，在50mg.kg^-1组抑制率可达50％左右，随剂量的增加，抑制率有所上升，见表3。

表3红毛走马胎苷对小鼠体内S180的作用(n＝10，ip)

其中溶剂对照为水，括号内的数值为瘤重。

实施例4红毛走马胎苷体外抗肿瘤的作用

体外MTT法：取肿瘤细胞悬浮液，接种于96孔培养板，肿瘤细胞的浓度为2Х10⁴个ml,每组加入红毛走马胎苷药物设定3个复孔，并设一组不加药物的肿瘤细胞悬浮液作为对照组，另有3孔只加培养液作为凋零组孔。37℃,5％CO₂饱和湿度培养48小时后，各孔加入MTT20μl,再培养48小时，加甲醇溶解，置于酶标仪测定各孔在570nm处的吸光值，计算抑制率。抑制率＝(对照组OD值-用药组OD值)/对照组OD值Х100％。并进一步计算IC₅₀值。经上述MTT法测试，红毛走马胎苷(药物)的水溶液，对人肺癌细胞瘤株(A549)和小鼠淋巴白血病(L1210)细胞株有较好的抗癌活性(见表4)。

表4红毛走马胎苷的体外抗癌活性(n＝10)

注：1.括号里的数字为OD值占溶剂(水)对照组的百分率

2.###为阳性对照药顺铂(DDP)与溶剂对照组比较P＜0.001

3.***药物组与溶剂对照组比较P＜0.001

尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。

Claims (8)

1.式Ⅰ所示的化合物(红毛走马胎苷)，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体。

2.权利要求1的化合物的制备方法，其包括以下步骤：

取紫金牛科紫金牛属植物红毛走马胎(Ardisia mamilata Hance)，用乙醇一次或多次提取，得到乙醇提取物；

将乙醇提取物在正丁醇-水中进行分配，得到正丁醇提取物；

将正丁醇提取物经硅胶柱层析分离，正丁醇/醋酸/水梯度洗脱，得到权利要求1的化合物。

3.药物组合物，其含有权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体，以及药学上可接受的载体或赋形剂。

4.权利要求3的药物组合物，其为液体制剂(注射剂，口服液,滴鼻液)、固体制剂(片剂,胶囊剂、颗粒剂和缓释剂等)、外用制剂(如：贴剂，喷雾剂等)、气溶胶剂或涂布剂。

5.权利要求4的药物组合物，其中所述固体制剂的辅料包括崩解剂、稀释剂、黏合剂、润滑剂等；所述液体制剂的辅料包括溶媒、pH调节剂、渗透压调节剂、抗氧剂、金属络合剂、防腐剂、矫味剂等。

6.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体用于制备预防或治疗恶性肿瘤的药物中的用途。

7.权利要求6的用途，其中所述恶性肿瘤包括实体肿瘤如胆管、骨、膀胱、脑/中枢神经系统、乳房、结直肠、子宫内膜、胃、头和颈、肝、肺、神经元、食道、卵巢、胰腺、前列腺、肾脏、皮肤、睾丸、甲状腺、子宫和外阴等的癌症，和非实体肿瘤如白血病、多发性骨髓瘤、肉瘤或淋巴瘤等。

8.权利要求6或7的用途，其中所述药物的给药途径为口服、注射或局部用药。