CN103908659A - Lhrh类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂及其制备方法。LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂包括缓释微球，缓释微球包括LHRH类似物、齐考诺肽和药学上可接受的高分子材料。该LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂能够发挥LHRH类似物和齐考诺肽的协同作用，经实验证明，该LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂具有缓释效果，且对治疗癌症具有较好的疗效，同时起到镇痛作用，通过常规的注射给药即可，解决了齐考诺肽临床给药不便的问题。

Description

LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及缓释微球制剂技术领域，特别是涉及一种LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂及其制备方法。

背景技术

肿瘤患者无论是肿瘤本身或者放化疗的治疗方法，都会一直伴随着剧烈的疼痛，这对患者的生活质量造成了严重的影响，本发明通过联合抗肿瘤药物与止痛药物，长时间的抑制患者的疼痛感，并可以提高肿瘤治疗药物的疗效。

促性腺激素释放激素，也称作促黄体激素释放激素(LHRH)，在下丘脑中合成。它是一种多肽荷尔蒙，其主要功能是使垂体释放卵泡刺激素(FSH)和黄体化激素(LH)，可用于治疗某些癌症。目前应用较多的用于治疗癌症的LHRH类似物主要有戈舍瑞林、西曲瑞克、亮丙瑞林等。然而，目前的戈舍瑞林、亮丙瑞林等虽然为缓释制剂，但单独使用时，对癌症的治疗效果仍不能令人满意，而且肿瘤的疼痛无法缓解。西曲瑞克为腹壁皮下注射剂，需每天变换注射部位来减轻局部刺激性。

齐考诺肽，为含有25个残基和3个连结的半胱氨酸桥的短肽，最初由Olivera的研究组从芋螺中分离得到，被称为MⅦA毒素，可有效抑制电压门控Ca2+通道，作为镇痛剂时能发挥显著的作用。目前齐考诺肽采用鞘内滴注的方式给药，鞘内给药系统需植入，给患者带来很大的不便，同时临床管理要求也比较严格。临床上抗肿瘤及镇痛方案是分开给药的，给患者带来给药的痛苦。目前，尚未发现两者联合应用的报道。

并且，目前，戈舍瑞林、西曲瑞克、亮丙瑞林等制剂一般通过皮下注射给药，而齐考诺肽一般通过鞘内注射给药。由于给药方式不同，当需要同时使用戈舍瑞林、西曲瑞克、亮丙瑞林等制剂和齐考诺肽时，需要分开给药，不利于患者接受。而且，齐考诺肽单独使用时，其持续给药时要求最低药物浓度达到5μg/mL，且每日给药总量不能超过2.4μg，以致总给药体积过小（0.02mL/h），常规的给药工具无法与之匹配，给临床治疗带来极大的不便。

发明内容

基于此，有必要提供一种具有缓释效果的LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂，以实现一次给药起到较好的治疗癌症和镇痛的作用，并解决齐考诺肽临床给药不便的问题。

进一步，提供一种LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂的制备方法。

一种LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂，包括缓释微球，所述缓释微球包括LHRH类似物、齐考诺肽和药学上可接受的高分子材料。

在其中一个实施例中，所述LHRH类似物选自戈舍瑞林或其盐、西曲瑞克或其盐及亮丙瑞林或其盐中的一种。

在其中一个实施例中，所述药学上可接受的高分子材料选自聚丙交酯、聚乙交酯、聚丙交酯—乙交酯、聚氰基丙烯酸烷酯、聚已内酯、聚羟丁酸、聚羟戊酸、聚癸酸、聚酸酐、聚羟基丁酸酯—羟基戊酸酯、聚乳酸—聚乙二醇及聚羟乙酸—聚乙二醇其中的至少一种。

在其中一个实施例中，所述药学上可接受的高分子材料的分子量为5000～20000。

在其中一个实施例中，所述LHRH类似物和齐考诺肽的质量比为1:1～1:20。

在其中一个实施例中，所述缓释微球的平均粒径为10微米～100微米。

在其中一个实施例中，所述LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂还包括乳化稳定剂、赋形剂、明胶和甘油。

在其中一个实施例中，所述乳化稳定剂为聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚甲基丙烯酸钠、聚丙烯酸钠，所述赋形剂选自山梨醇、甘露醇、乳糖、蔗糖及甘氨酸中的至少一种。

在其中一个实施例中，按质量百分比计，所述LHRH类似物和齐考诺肽的质量之和占0.1%～30%，所述药学上可接受的高分子材料占60%～90%，所述乳化稳定剂、赋形剂、明胶和甘油的质量之和占0.1%～10%。

一种LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂的制备方法，包括如下步骤：

将LHRH类似物和齐考诺肽溶于水中，得到水相；将药学上可接受的高分子材料溶于有机溶剂中，得到油相；

将所述水相和油相混合均匀，形成油包水型乳液，将所述油包水型乳液加入水中，混合均匀，得到水包油包水型复乳；

将所述水包油包水型复乳进行蒸发，除去有机溶剂，离心，收集沉淀，将所述沉淀进行洗涤、离心，取沉淀，加入赋形剂，冷冻干燥，得到所述LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂。

上述LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂能够发挥LHRH类似物和齐考诺肽的协同作用，经实验证明，该LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂具有缓释效果，且对治疗癌症具有较好的疗效，同时起到镇痛作用，通过常规的皮下注射给药即可，解决了齐考诺肽临床给药不便的问题。

附图说明

图1为一实施方式的LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂的制备方法的流程图。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。

一实施方式的LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂，包括缓释微球，缓释微球包括LHRH类似物、齐考诺肽和药学上可接受的高分子材料。

其中，LHRH类似物选自为戈舍瑞林或其盐、西曲瑞克或其盐及亮丙瑞林或其盐中的一种。例如，LHRH类似物可以醋酸戈舍瑞林或戈舍瑞林的醋酸盐，也可以为醋酸西曲瑞克或西曲瑞克的醋酸盐等。

LHRH类似物和齐考诺肽混合形成缓释微球的内核，药学上可接受的高分子材料包覆在内核的表面形成缓释微球的包衣。

药学上可接受的高分子材料作为包衣，使得该LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球具有较好的缓释性能，能够克服普通的LHRH类似物制剂给药次数多，不利于患者接受的缺点。

LHRH类似物能够治疗肝癌、乳腺癌、前列腺癌等癌症。齐考诺肽能够有效减轻疼痛。LHRH类似物和齐考诺肽联合使用，不仅能够同时具有治疗癌症和减轻疼痛的作用，有利于提高病人的顺应性。而且，经实验证明，其对癌症的抑制率远高于单独使用LHRH类似物治疗癌症时的对癌症的抑制率。

优选地，LHRH类似物和齐考诺肽的质量比为1:1～1:20，以充分发挥LHRH类似物和齐考诺肽的优点，起到较好的协调作用，以较好地治疗癌症。

优选地，药学上可接受的高分子材料选自聚丙交酯（PLA）、聚乙交酯（PGA）、聚丙交酯—乙交酯（PLGA）、聚氰基丙烯酸烷酯、聚已内酯（PCL）、聚羟丁酸（PHB）、聚羟戊酸（PVA）、聚癸酸（PDA）、聚酸酐、聚羟基丁酸酯—羟基戊酸酯、聚乳酸—聚乙二醇及聚羟乙酸—聚乙二醇其中的至少一种。

上述药学上可接受的高分子材料的生物相容性较好，且可生物降解，使得该LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂的安全性较好。

更优选地，药学上可接受的高分子材料为聚丙交酯（PLA）和聚丙交酯—乙交酯（PLGA）的混合物。PLA和PLGA的质量比为1:3～3:2。

进一步优选地，上述药学上可接受的高分子材料的分子量为5000～20000。

优选地，LHRH类似物和齐考诺肽的质量之和与药学上可接受的高分子材料的质量比为0.1～30:60～90。

优选地，上述缓释微球的平均粒径为10微米～100微米，使得该LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂有利于在实体肿瘤内的有效扩散，能够选择性地提高肿瘤局部的药物浓度，减少给药次数和药物耐受性，提高病人的顺应性，方便临床使用和患者用药。

优选地，上述LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂还包括乳化稳定剂、赋形剂、明胶和甘油。

乳化稳定剂优选为聚乙烯醇（PVA）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、聚甲基丙烯酸钠、聚丙烯酸钠。

赋形剂优选自山梨醇、甘露醇、乳糖、蔗糖及甘氨酸中的至少一种。

按质量百分比计，上述LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂中，LHRH类似物和齐考诺肽的质量之和占0.1%～30%，药学上可接受的高分子材料占60%～90%，乳化稳定剂、赋形剂、明胶和甘油的质量之和占0.1%～10%。

采用上述质量百分比，能够发挥活性组分LHRH类似物和齐考诺肽的联用的疗效，且使得该LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球具有较好地缓释效果，不仅能够显著减少给药次数，方便临床使用和患者接受，而且能够消除普通制剂多次给药产生的药物浓度峰谷现象，有利于获得平稳长时间的有效浓度，降低毒副作用。

优选地，乳化稳定剂、赋形剂、明胶和甘油的质量比为4:4～5:2～5:2～5。

该LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂能够治疗多种癌症，例如肝癌、乳腺癌等。由于使用了缓释微球，使得该LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂具有缓释效果，能够显著发挥LHRH类似物和齐考诺肽的协调效应，提高疗效。

LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂通过皮下注射给药，经实验表明，释放时间长达50天左右，累计释放度达90%以上。

通过一次皮下注射上述LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂进行给药，同时实现LHRH类似物和齐考诺肽的给药，解决了单独给药齐考诺肽时临床给药不便的问题。

上述LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂可以实现抗肿瘤和镇痛同时进行，且以缓释微球形式给药减少给药次数，患者用药方便，治疗效果更佳。

肿瘤患者普遍都伴随剧烈的疼痛，而给药抗肿瘤药物又难以起到镇痛的作用，上述LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂一次给药可以同时起到抗肿瘤和镇痛作用，缓解了患者的痛苦，提高患者的顺应性，有利于肿瘤的治疗。

并且，经过实验证明，上述LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂不仅能够起到抗肿瘤和镇痛作用，且其抗肿瘤的效果要优于单独使用LHRH类似物的效果，其镇痛作用优于单独使用齐考诺肽的效果，实现了的两者的协调作用，获得了1+1＞2的效果。

请参阅图1，一实施方式的LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球的制备方法，包括如下步骤S110～步骤S130。

步骤S110：将LHRH类似物和齐考诺肽溶于水中，得到水相；将药学上可接受的高分子材料溶于有机溶剂中，得到油相。

将LHRH类似物和齐考诺肽溶于水中，得到水相。水为无菌水。LHRH类似物和齐考诺肽的质量比优选为0.1～30:60～90。水相中，LHRH类似物和齐考诺肽的质量浓度为60mg/L。

在其他实施方式中，水相还包括明胶和甘油，这种情况下，先配制含有明胶和甘油的水溶液，再将LHRH类似物和齐考诺肽溶于含有明胶和甘油的水溶液中，即得到水相。

含有明胶和甘油的水溶液中，明胶和甘油的质量浓度均为5mg/L。

优选地，为了保证水相的稳定性，还包括向水相中加入乳化稳定剂的步骤。乳化稳定剂为上文所述的乳化稳定剂。

将药学上可接受的高分子材料溶于有机溶剂中，得到油相。有机溶剂为二氯甲烷、乙醚、丙酮、乙酸乙酯、乳酸乙酯或甲基乙基酮。

药学上可接受的高分子材料优选为选自聚丙交酯（PLA）、聚乙交酯（PGA）、聚丙交酯—乙交酯（PLGA）、聚氰基丙烯酸烷酯、聚已内酯（PCL）、聚羟丁酸（PHB）、聚羟戊酸（PVA）、聚癸酸（PDA）、聚酸酐、聚羟基丁酸酯—羟基戊酸酯、聚乳酸—聚乙二醇及聚羟乙酸—聚乙二醇其中的至少一种，更优选为聚丙交酯（PLA）和聚丙交酯—乙交酯（PLGA）的混合物。PLA和PLGA的质量比为1:3～3:2。

油相中，药学上可接受的高分子材料的质量浓度为120mg/L～3000mg/L。或者，药学上可接受的高分子材料的质量百分数为2%～30%，优选25%。

步骤S120：将水相和油相混合均匀，形成油包水型乳液，将油包水乳液加入水中，混合均匀，得到水包油包水型复乳。

将水相和油相置于搅拌器内，高速乳匀，形成油包水型乳液（O/W乳液）。将油包水型乳液加入水中，混合均匀，得到水包油包水型复乳（W/O/W复乳）。

在加入乳化剂的实施方式中，将水相和乳化剂的混合物与油相混合。

油包水型乳液与水的体积比为1:100。

步骤S130：将水包油包水型复乳进行蒸发，去除有机溶剂，离心，收集沉淀，将沉淀进行洗涤、离心，取沉淀，冷冻干燥，得到LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂。

优选地，进行第二次离心后，将所得的沉淀进行冷冻干燥之前，还包括加入赋形剂的步骤，然后将赋形剂和沉淀的混合物进行冷冻干燥，得到LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂。其中，赋形剂为上文所述的赋形剂。

乳化稳定剂、赋形剂、明胶和甘油的质量比为4:4～5:2～5:2～5。

上述LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球的制备方法的工艺简单，适合大规模制备。

以下通过具体实施例进一步阐述。

实施例1

1、将等质量的明胶和甘油溶于无菌水中，配制含有明胶和甘油的水溶液，其中，明胶和甘油的质量浓度均为5mg/L，将醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽溶于含有明胶和甘油的水溶液中，得到醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的总质量浓度为60mg/L的水相；向水相中加入PVP，得到混合物；将分子量为5000的聚丙交酯—乙交酯溶于二氯甲烷中，得到质量浓度为2400mg/L的油相；其中，醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的质量比为1:1，聚丙交酯和聚丙交酯—乙交酯的质量比为1:3；

2、将上述混合物和油相置于搅拌器内，以12000r/min的速度进行乳匀，形成油包水型乳液，将油包水型乳液加入水中，混合均匀，得到水包油包水型复乳，其中，油包水型乳液与水的体积比为1:100；

3、将水包油包水型复乳进行蒸发，去除有机溶剂，离心，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀3次，再次进行离心，取沉淀，向沉淀中加入山梨醇，然后将沉淀和山梨醇的混合物冷冻干燥，得到醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂。

该醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂包括为缓释微球、PVP、山梨醇、明胶和甘油，缓释微球的平均粒径为15微米，其中，醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的质量之和占30%，聚丙交酯—乙交酯的质量之和占60%，PVP、山梨醇、明胶和甘油的质量之和占10%，PVP、山梨醇、明胶和甘油的质量比为4:4:2:2。

实施例2

1、将等质量的明胶和甘油溶于无菌水中，配制含有明胶和甘油的水溶液，其中，明胶和甘油的质量浓度均为5mg/L，将醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽溶于含有明胶和甘油的水溶液中，得到醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的总质量浓度为60mg/L的水相；向水相中加入PVA，得到混合物；将分子量为20000的聚丙交酯和分子量为20000的聚丙交酯—乙交酯溶于乙醚中，得到质量浓度为540mg/L的油相；其中，醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的质量比为1:10，聚丙交酯和聚丙交酯—乙交酯的质量比为3:2；

2、将上述混合物和油相置于搅拌器内，以12000r/min的速度进行乳匀，形成油包水型乳液，将油包水型乳液加入水，混合均匀，得到水包油包水型复乳，其中，油包水型乳液与水的体积比为1:100；

3、将水包油包水型复乳进行蒸发，去除有机溶剂，离心，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀3次，再次进行离心，取沉淀，向沉淀中加入甘露醇，然后将沉淀和甘露醇的混合物冷冻干燥，得到醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂。

该醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂包括为缓释微球、PVA、甘露醇、明胶和甘油，缓释微球的平均粒径为20微米，醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的质量之和占15%，聚丙交酯和聚丙交酯—乙交酯的质量之和占80%，PVA、甘露醇、明胶和甘油的之和占5%，PVA、甘露醇、明胶和甘油的质量比为4:4:5:5。

实施例3

1、将等质量的明胶和甘油溶于无菌水中，配制含有明胶和甘油的水溶液，其中，明胶和甘油的质量浓度均为5mg/L，将醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽溶于含有明胶和甘油的水溶液中，得到醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的总质量浓度为60mg/L的水相；向水相中加入聚甲基丙烯酸钠，得到混合物；将分子量为10000的聚丙交酯和分子量为10000的聚丙交酯—乙交酯溶于丙酮中，得到质量浓度为280mg/L的油相；其中，醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的质量比为1:5，聚丙交酯和聚丙交酯—乙交酯的质量比为1:1；

2、将上述混合物和油相置于搅拌器内，以12000r/min的速度进行乳匀，形成油包水型乳液，将油包水型乳液加入水中，混合均匀，得到水包油包水型复乳，其中，油包水型乳液与水的体积比为1:100；

3、将水包油包水型复乳进行蒸发，去除有机溶剂，离心，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀3次，再次进行离心，取沉淀，向沉淀中加入乳糖，然后将沉淀和乳糖的混合物冷冻干燥，得到醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂。

该醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂包括为缓释微球、聚甲基丙烯酸钠、乳糖、明胶和甘油，缓释微球的平均粒径为50微米，醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的质量之和占8%，聚丙交酯和聚丙交酯—乙交酯的质量之和占90%，聚甲基丙烯酸钠、乳糖、明胶和甘油的质量之和占2%，聚甲基丙烯酸钠、乳糖、明胶和甘油的质量比为4:5:3:3。

实施例4

1、将等质量的明胶和甘油溶于无菌水中，配制含有明胶和甘油的水溶液，其中，明胶和甘油的质量浓度均为5mg/L，将醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽溶于含有明胶和甘油的水溶液中，得到醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的总质量浓度为60mg/L的水相；向水相中加入聚乙烯醇，得到混合物；将分子量为8000的聚丙交酯和分子量为8000的聚丙交酯—乙交酯溶于二氯甲烷中，得到质量浓度为190mg/L的油相；其中，醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的质量比为1:15，聚丙交酯和聚丙交酯—乙交酯的质量比为1:1.2；

2、将上述混合物和油相置于搅拌器内，以12000r/min的速度进行乳匀，形成油包水型乳液，将油包水型乳液加入水中，混合均匀，得到水包油包水型复乳，其中，油包水型乳液与水的体积比为1:100；

3、将水包油包水型复乳进行蒸发，去除有机溶剂，离心，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀3次，再次进行离心，取沉淀，向沉淀中加入甘氨酸，然后将沉淀和甘氨酸的混合物冷冻干燥，得到醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂。

该醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂包括为缓释微球、聚乙烯醇、甘氨酸、明胶和甘油，缓释微球的平均粒径为65微米，醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的质量之和占1%，聚丙交酯和聚丙交酯—乙交酯的质量之和占90%，聚乙烯醇、甘氨酸、明胶和甘油的质量之和占9%，聚乙烯醇、甘氨酸、明胶和甘油的质量比为4:4.5:4:4。

实施例5

1、将等质量的明胶和甘油溶于无菌水中，配制含有明胶和甘油的水溶液，其中，明胶和甘油的质量浓度均为5mg/L，将醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽溶于含有明胶和甘油的水溶液中，得到醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的总质量浓度为60mg/L的水相；向水相中加入聚丙烯酸钠，得到混合物；将分子量为15000的聚乙交酯溶于乙酸乙酯中，得到质量浓度为150mg/L的油相；其中，醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的质量比为1:8；

2、将上述混合物和油相置于搅拌器内，以12000r/min的速度进行乳匀，形成油包水型乳液，将油包水型乳液加入水中，混合均匀，得到水包油包水型复乳，其中，油包水型乳液与水的体积比为1:100；

3、将水包油包水型复乳进行蒸发，去除有机溶剂，离心，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀3次，再次进行离心，取沉淀，向沉淀中加入蔗糖，然后将沉淀和蔗糖的混合物冷冻干燥，得到醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂。

该醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂包括为缓释微球、聚丙烯酸钠、蔗糖、明胶和甘油，缓释微球的平均粒径为80微米，醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的质量之和占20%，聚乙交酯的质量占70%，聚丙烯酸钠、蔗糖、明胶和甘油的质量之和占10%，聚丙烯酸钠、蔗糖、明胶和甘油的质量比为4:5:5:5。

实施例6

1、将等质量的明胶和甘油溶于无菌水中，配制含有明胶和甘油的水溶液，其中，明胶和甘油的质量浓度均为5mg/L，将醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽溶于含有明胶和甘油的水溶液中，得到醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的总质量浓度为60mg/L的水相；向水相中加入PVP，得到混合物；将分子量为12000的聚氰基丙烯酸烷酯溶于乳酸乙酯中，得到质量浓度为440mg/L的油相；其中，醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的质量比为1:7；

2、将上述混合物和油相置于搅拌器内，以12000r/min的速度进行乳匀，形成油包水型乳液，将油包水型乳液加入水中，混合均匀，得到水包油包水型复乳，其中，油包水型乳液与水的体积比为1:100；

3、将水包油包水型复乳进行蒸发，去除有机溶剂，离心，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀3次，再次进行离心，取沉淀，向沉淀中加入乳糖，然后将沉淀和乳糖的混合物冷冻干燥，得到醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂。

该醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂包括为缓释微球、PVP、乳糖、明胶和甘油，醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球的平均粒径为40微米，其中，醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的质量之和占0.1%，聚氰基丙烯酸烷酯的质量占90%，PVP、乳糖、明胶和甘油的质量之和占9.9%，PVP、乳糖、明胶和甘油的质量比为4:4:5:5。

实施例7

1、将等质量的明胶和甘油溶于无菌水中，配制含有明胶和甘油的水溶液，其中，明胶和甘油的质量浓度均为5mg/L，将醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽溶于含有明胶和甘油的水溶液中，得到醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的总质量浓度为60mg/L的水相；向水相中加入PVA，得到混合物；将分子量为18000的聚羟丁酸溶于甲基乙基酮中，得到质量浓度为160mg/L的油相；其中，醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的质量比为1:15；

2、将上述混合物和油相置于搅拌器内，以12000r/min的速度进行乳匀，形成油包水型乳液，将油包水型乳液加入水，混合均匀，得到水包油包水型复乳，其中，油包水型乳液与水的体积比为1:100；

3、将水包油包水型复乳进行蒸发，去除有机溶剂，离心，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀3次，再次进行离心，取沉淀，向沉淀中加入甘氨酸，然后将沉淀和甘氨酸的混合物冷冻干燥，得到醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂。

该醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂包括为缓释微球、PVA、甘氨酸、明胶和甘油，缓释微球的平均粒径为25微米，醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的质量之和占25%，聚羟丁酸的质量占74.9%，PVA、甘氨酸、明胶和甘油的质量之和占0.1%，PVA、甘氨酸、明胶和甘油的质量比为4:4:2:2。

实施例8

1、将等质量的明胶和甘油溶于无菌水中，配制含有明胶和甘油的水溶液，其中，明胶和甘油的质量浓度均为5mg/L，将醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽溶于含有明胶和甘油的水溶液中，得到醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的总质量浓度为60mg/L的水相；向水相中加入聚乙烯醇，得到混合物；将分子量为18000的聚乳酸—聚乙二醇溶于二氯甲烷中，得到质量浓度为200mg/L的油相；其中，醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的质量比为1:20；

2、将上述混合物和油相置于搅拌器内，以12000r/min的速度进行乳匀，形成油包水型乳液，将油包水型乳液加入水中，混合均匀，得到水包油包水型复乳，其中，油包水型乳液与水的体积比为1:100；

3、将水包油包水型复乳进行蒸发，去除有机溶剂，离心，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀3次，再次进行离心，取沉淀，向沉淀中加入山梨醇，然后将沉淀和山梨醇的混合物冷冻干燥，得到醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂。

该醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂包括为缓释微球、聚乙烯醇、山梨醇、明胶和甘油，缓释微球的平均粒径为18微米，醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽的质量之和占2%，聚乳酸—聚乙二醇的质量占89%，聚乙烯醇、山梨醇、明胶和甘油的质量之和占9%，聚乙烯醇、山梨醇、明胶和甘油的质量比为4:4:3:3。

对比例1

以目前已上市的醋酸戈舍瑞林缓释植入剂（诺雷德）和齐考诺肽注射液（批号:49191PRN2，以色列Elan公司生产）作为对比例。

考察实施例1～实施例8的释药情况，方法如下：

分别取实施例1～实施例8的醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂和对比例1的醋酸戈舍瑞林制剂，每份5mg，分别置于35个10mL的西林瓶中，每份加入含有0.1M的Na2HPO4和0.1M的NaH2PO4的pH7.4的磷酸缓冲溶液，置于37℃恒温水浴中，分别在第0、1、4、8、12、16、20、24、28、35、40、50天取出，离心，重新分散在二氯甲烷醋酸缓冲液（1:1v/v），色谱柱为C1850×2mm，流动相为1：1的含有0.1%三氟醋酸和含有1%三氟醋酸的50%乙腈混合溶液，流速1.0ml/min，在240nm处检测，测定微球内残余药量，按照外标法计算累计释放度。实施例1～实施例8的醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂和对比例1的醋酸戈舍瑞林制剂的累计释放度如下表1所示。

表1实施例1～实施例8的醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂和对比例1的醋酸戈舍瑞林制剂的累计释放度

由表1可看出，实施例1～实施例8的醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂具有较好的缓释效果，优于对比例1。

以体外培养的人肝癌细胞系hHCC和大鼠肝癌细胞系FSK-7902为研究对象，用MTT试验检测上述实施例1～实施例8的醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂和对比例1的醋酸戈舍瑞林制剂对这两种肝癌细胞生长的抑制作用，实验结果如下：

实施例1：加入醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂后19h时即表现出对癌细胞的抑制作用；其最大抑制效应出现在10～15天，对人肝癌细胞系hHCC最大抑制率为72.4%，对大鼠肝癌细胞系FSK-7902最大抑制率为78.9%。

实施例2：加入醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂后15h时即表现出对癌细胞的抑制作用；其最大抑制效应出现在8～12天，对人肝癌细胞系hHCC最大抑制率为70.1%，对大鼠肝癌细胞系FSK-7902最大抑制率为72.4%。

实施例3：加入醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂后16h时即表现出对癌细胞的抑制作用；其最大抑制效应出现在11～14天，对人肝癌细胞系hHCC最大抑制率为69.3%，对大鼠肝癌细胞系FSK-7902最大抑制率为72.1%。

实施例4：加入醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂后20h时即表现出对癌细胞的抑制作用；其最大抑制效应出现在12～19天，对人肝癌细胞系hHCC最大抑制率为79.3%，对大鼠肝癌细胞系FSK-7902最大抑制率为84.3%。

实施例5：加入醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂后22h时即表现出对癌细胞的抑制作用；其最大抑制效应出现在12～16天，对人肝癌细胞系hHCC最大抑制率为79.1%，对大鼠肝癌细胞系FSK-7902最大抑制率为76.2%。

实施例6：加入醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂后11h时即表现出对癌细胞的抑制作用；其最大抑制效应出现在7～11天，对人肝癌细胞系hHCC最大抑制率为71.5%，对大鼠肝癌细胞系FSK-7902最大抑制率为72.7%。

实施例7：加入醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂后18h时即表现出对癌细胞的抑制作用；其最大抑制效应出现在11～14天，对人肝癌细胞系hHCC最大抑制率为66.3%，对大鼠肝癌细胞系FSK-7902最大抑制率为70.6%。

实施例8：加入醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂后30h时即表现出对癌细胞的抑制作用；其最大抑制效应出现在12～16天，对人肝癌细胞系hHCC最大抑制率为77.3%，对大鼠肝癌细胞系FSK-7902最大抑制率为78.6%。

对比例1：加入对比例1醋酸戈舍瑞林缓释植入剂的后24h时即表现出对癌细胞的抑制作用；其最大抑制效应出现在48h，对人肝癌细胞系hHCC最大抑制率为55.6%，对大鼠肝癌细胞系FSK-7902最大抑制率为66.8%。

上述实验中，醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂的浓度为100nmol/L。实验结果表明，实施例1～实施例8的醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂对癌症的抑制作用明显优于对比例1的已上市的醋酸戈舍瑞林缓释植入剂。

考查实施例1～8制备的醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂对大鼠腰五脊神经结扎加切断引起的神经性病理学疼痛的阵痛效果。实验采用雄性SD大鼠72只，用经典的L5SNL模型，术后将造模成功的大鼠随机分成9组（n=8），分别注射实施例1～8制备的醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂和已上市齐考诺肽（给药剂量为2.4mg），采用Up-Down方法测定50%机械刺激撤足阈值（PWT）。与已上市齐考诺肽注射液相比，实施例1～8制备的醋酸戈舍瑞林和齐考诺肽组合物缓释微球制剂，大鼠50%PWT（P<0.02）提高更为显著，并且，并未观察到任何不良反应。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂，其特征在于，包括缓释微球，所述缓释微球包括LHRH类似物、齐考诺肽和药学上可接受的高分子材料。

2.根据权利要求1所述的LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂，其特征在于，所述LHRH类似物选自戈舍瑞林或其盐、西曲瑞克或其盐及亮丙瑞林或其盐中的一种。

3.根据权利要求1所述的LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂，其特征在于，所述药学上可接受的高分子材料选自聚丙交酯、聚乙交酯、聚丙交酯—乙交酯、聚氰基丙烯酸烷酯、聚已内酯、聚羟丁酸、聚羟戊酸、聚癸酸、聚酸酐、聚羟基丁酸酯—羟基戊酸酯、聚乳酸—聚乙二醇及聚羟乙酸—聚乙二醇其中的至少一种。

4.根据权利要求1或3所述的LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂，其特征在于，所述药学上可接受的高分子材料的分子量为5000～20000。

5.根据权利要求1所述的LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂，其特征在于，所述LHRH类似物和齐考诺肽的质量比为1:1～1:20。

6.根据权利要求1所述的LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂，其特征在于，所述缓释微球的平均粒径为10微米～100微米。

7.根据权利要求1所述的LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂，其特征在于，所述LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂还包括乳化稳定剂、赋形剂、明胶和甘油。

8.根据权利要求7所述的LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂，其特征在于，所述乳化稳定剂为聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚甲基丙烯酸钠、聚丙烯酸钠，所述赋形剂选自山梨醇、甘露醇、乳糖、蔗糖及甘氨酸中的至少一种。

9.根据权利要求7所述的LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂，其特征在于，按质量百分比计，所述LHRH类似物和齐考诺肽的质量之和占0.1%～30%，所述药学上可接受的高分子材料占60%～90%，所述乳化稳定剂、赋形剂、明胶和甘油的质量之和占0.1%～10%。

10.一种LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

将LHRH类似物和齐考诺肽溶于水中，得到水相；将药学上可接受的高分子材料溶于有机溶剂中，得到油相；

将所述水相和油相混合均匀，形成油包水型乳液，将所述油包水型乳液加入水中，混合均匀，得到水包油包水型复乳；

将所述水包油包水型复乳进行蒸发，除去有机溶剂，离心，收集沉淀，将所述沉淀进行洗涤、离心，取沉淀，加入赋形剂，冷冻干燥，得到所述LHRH类似物和齐考诺肽组合物缓释微球制剂。