CN103908513B - 文冠果果壳总皂苷的提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，提供了一种文冠果果壳总皂苷的提取方法。该方法是将酶前处理药材，酶灭活，碱调pH，加乙醇提取得文冠果壳粗皂苷，有机溶剂萃取，紫外-可见光谱方法测定含量。具体方法为：文冠果果壳粉碎，过40-120目筛，加入酶进行酶解，酶灭活后，碱调pH，加乙醇，使醇达到50%-90%，提取，回收乙醇得醇浸膏，醇浸膏经水分散，用有机溶剂萃取后得到总皂苷提取物。本方法所制备的文冠果壳总皂苷可以单独或与其他药物原料组合应用于多种相关疾病治疗。与未加酶处理相比，本发明制备出文冠果总皂苷提取物的收率为5%以上，总皂苷含量大于65%，且方法简便、实用，经济，适合于工厂化生产。

Description

文冠果果壳总皂苷的提取方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及文冠果总皂苷的提取方法，具体涉及纤维素酶在文冠果果壳总皂苷的提取工艺中的具体应用。

背景技术

文冠果果壳（XanthocerassorbifoliaBunge）为无患子科(Sapindaceae)文冠果属植物文冠果的果壳。经研究，文冠果果壳总皂苷为文冠果果壳中主要成分，文冠果果壳总皂苷不仅具有良好的抗肿瘤活性，而且能显著改善多种记忆障碍模型小鼠的学习能力，提高大脑的缺氧耐受能力，预防并治疗多发性栓塞引起的记忆保持障碍，降低谷氨酸造成的PC12细胞死亡数量，增强对神经细胞的保护作用（1.李占林，李铣，李宁，李文，沙沂.文冠果果壳的化学成分.沈阳药科大学学报2005，22（4）：271-272；2.刘新霞，纪雪飞，陆玲玲，杨柏珍，王力华，邹莉波，文冠果果壳乙醇提取物对大鼠学习记忆障碍的改善作用.中草药2007，38（12）：1859-1863.）。鉴于传统的醇提方法提取文冠果果壳总皂苷效率较低的原因，影响了药材中总皂苷的应用，因此有必要开发一种更好的提取方法，从而提高总皂苷的提取率，进而扩大文冠果药材中总皂苷的利用。

发明内容

本发明的目的是针对传统的醇提方法提取文冠果果壳总皂苷效率较低的缺陷，开发一种提取效率更高的提取方法。

本发明利用酶破坏细胞壁提高溶出的作用，对药材先进行酶前处理，在结合醇提方法来提高文冠果果壳总皂苷的溶出。

本发明的目的是这样实现的：

将文冠果果壳粉碎，过40-120目筛，加入酶进行酶解，酶灭活后，碱调pH，加乙醇，使醇达到50%-90%，优选60%-80%，更优选70%，提取，回收乙醇得醇浸膏，醇浸膏经水分散，用有机溶剂萃取后得到总皂苷提取物。

将文冠果果壳总皂苷提取物用甲醇定容得供试品溶液。取供试品溶液，进行显色后测定紫外光谱，得总皂苷含量大于65%。

所述的文冠果果壳来源于无患子科(Sapindaceae)文冠果属植物文冠果植物的果壳，包括果柄。

所述的酶选自纤维素酶、果胶酶、蛋白酶、磷脂酶或其他能水解细胞壁的酶（包括天然和合成的酶），质量百分比（酶与药材的质量百分比）为0.5%-8%，优选1%-5%，更优选1%,优选纤维素酶。

所述的酶解过程为文冠果果壳与酶在缓冲溶液中恒温加热酶解。

所述的缓冲溶液为柠檬酸-柠檬酸钠、磷酸氢二钠-枸橼酸、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠或其他缓冲溶液，所用体积为4-8ml,pH=3-8。

所用的碱选自NaOH、柠檬酸钠，pH值为6.5-7.5。

所述的醇提的提取方式包括回流、超声、浸取、渗漉、温提中的一种或几种，优选回流提取。

所述的萃取中的有机溶剂选自乙酸乙酯，正丁醇，丙酮，甲醇，乙醇，或丙酮、乙醇、甲醇的水溶液中的一种或几种，萃取溶解次数为1次或多次。

酶解过程中温度范围：40-50℃，酶解2-5h。

本发明能够提高文冠果果壳中总皂苷的含量，应用本方法获得文冠果果壳总皂苷提取物的收率为5%以上，总皂苷含量大于65%，含量测定方法采用香草醛-浓硫酸法，以人参皂苷Re为参照。

具体实施方式

下面的实施例可进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1：

文冠果果壳总皂苷提取原工艺：

（1）文冠果果壳的粉碎：将文冠果果壳粉碎，过60目筛，备用。

（2）醇提：精密称取文冠果果壳粉末2g，加入40ml的50%、70%或90%乙醇，混合均匀；90℃回流提取2h；过滤，回收乙醇得浸膏，浸膏用8倍量水溶解，离心，取上清液。

（3）萃取：用乙酸乙酯（1：1，V/V）萃取3次除去部分杂质，水层继续用水饱和正丁醇（1：1，V/V）溶解萃取3次，合并正丁醇层，减压回收溶剂，浸膏经减压干燥称重0.09g（收率为4.5%），用甲醇定容到100ml，得总皂苷供试品溶液。

实施例2：

文冠果果壳总皂苷的酶-醇提取工艺：

酶种类、酶加入量对文冠果果壳总皂苷含量的影响，结果如下：

故优选纤维素酶，酶加入量为每克药材加入纤维素酶1%-5%，更优选1%（质量百分比）。

（1）文冠果果壳的粉碎：将文冠果果壳粉碎，过60目筛，备用。

（2）酶解过程：精密称取文冠果果壳2g，加入1%的纤维素酶（酶的加入量以加入纤维素酶制剂占文冠果果壳粉末的质量百分数表示），和12ml柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液（pH=5），恒温加热磁力搅拌器45℃，酶解4h。

（3）酶灭活：酶解完后，90℃中酶灭活10min；用NaOH调pH=7。

（4）醇提：分别加入28ml的50%、70%或90%乙醇，混合均匀；90℃回流提取2h；过滤，回收乙醇得浸膏，浸膏用8倍量水溶解，离心，取上清液。

（5）萃取：用乙酸乙酯（1：1，V/V）萃取3次，除去部分杂质，水层继续用水饱和正丁醇（1：1，V/V）溶解萃取3次，合并正丁醇层，减压回收溶剂，浸膏减压干燥称重0.12g（收率为6%），浸膏用甲醇定容到100ml，得酶解工艺总皂苷供试品溶液。

实施例3：

文冠果果壳总皂苷的酶-超声提取工艺：

（1）文冠果果壳的粉碎：将文冠果果壳粉碎过60目筛，备用。

（2）酶解过程：精密称取文冠果果壳2g，加入1%的纤维素酶（酶的加入量以加入纤维素酶制剂占文冠果壳粉末的质量百分数表示），和12ml柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液（pH=5），恒温加热磁力搅拌器45℃，酶解4h。

（3）酶灭活：酶解完后，90℃中酶灭活10min；用NaOH调pH=7。

（4）超声：分别加入28ml的50%、70%或90%乙醇，混合均匀；30℃下100Hz超声提取1h，过滤，回收乙醇得浸膏，浸膏用8倍量水溶解，离心，取上清液。

（5）萃取：用乙酸乙酯（1：1，V/V）萃取3次，除去部分杂质，水层继续用水饱和正丁醇（1：1，V/V）萃取3次，合并正丁醇层，减压回收溶剂，经减压干燥称重浸膏为0.1.g（收率为5.0%），浸膏用甲醇定容到100ml，得总皂苷供试品溶液。

实施例4：

（1）对照品溶液的制备：

精密称取干燥恒重的人参皂苷Re12.5mg，置于25ml容量瓶中，用甲醇定容到刻度，摇匀，得0.5mg／ml的人参皂苷Re对照品溶液。

（2）测定波长的确定：

取上述对照品溶液、供试品溶液各0.2ml，分别置于10ml具塞试管中，挥干溶剂，加新鲜配制的浓度5%的香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，闭塞，80℃水浴中恒温加热30min，取出，流水冷却，加冰醋酸5.0ml，摇匀，立即用分光光度计于400-800nm处测定吸光度，以随行试剂为空白对照。结果表明，文冠果果壳总皂苷标准品溶液和供试品溶液均在535nm处有最大吸收，故选取535nm为测定波长。

（3）标准曲线：精密吸取“2”项下的对照品溶液0.10、0.20、0.30、0.40、0.50ml，分别置于10ml具塞试管中，挥干溶剂，按“3”项下的方法显色并测定吸光度，以文冠果果壳总皂苷的量（mg）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标绘制成标准曲线。得回归方程为：

y=3.342x+0.0993（R²=0.9993）

式中，y为提取液的吸光度A，x为提取液中人参皂苷Re的量（mg），结果表明，当取样量在0.05-0.25mg范围内时，人参皂苷Re的含量与吸光度呈现良好的线性关系。

实施例5：

（1）样品测定：各精密吸取原工艺、酶-醇提取工艺、酶-超声提取工艺的供试品溶液0.2ml于10ml具塞试管中，按照“3”中方法进行测定，计算所得供试品溶液中文冠果果壳总皂苷的含量于表3

（2）通过表3得之，酶-醇提取工艺组所得总皂苷含量最高，故平行精密称取2g文冠果果壳3份，按酶-醇提工艺进行提取，并进行测定。其所得总皂苷含量如表4

结果表明：进行酶处理与未经酶处理相比文冠果果壳总皂苷的含量提高明显。

Claims (9)

1.文冠果果壳总皂苷的提取方法，其特征在于：将文冠果果壳粉碎，过筛，加入酶进行酶解，酶灭活后，碱调pH，加乙醇提取，提取方式为回流、超声、浸取、渗漉、温提中的一种或几种；回收乙醇得醇浸膏，醇浸膏经水分散，用有机溶剂萃取或溶解后得到浸膏；所述的酶选自纤维素酶、果胶酶、蛋白酶、磷脂酶；所用的碱选自NaOH或柠檬酸钠，调节pH值为6.5-7.5；所述的有机溶剂选自乙酸乙酯，正丁醇，丙酮，甲醇，乙醇，含水的丙酮、乙醇、甲醇中的一种或几种。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述的文冠果果壳来源于无患子科(Sapindaceae)文冠果属植物文冠果的果壳，包括果柄。

3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述的酶选自纤维素酶、果胶酶、蛋白酶、磷脂酶，加入的质量百分比为1-5%。

4.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于：所述的酶为纤维素酶。

5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：酶解过程为文冠果果壳与酶在缓冲溶液中恒温加热酶解。

6.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于：所述的缓冲溶液选自柠檬酸-柠檬酸钠、磷酸氢二钠-枸橼酸或邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠，其体积为4-8ml，pH=3-8。

7.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于：恒温温度为：40-50℃，酶解2-5h。

8.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述的乙醇为50%-90%乙醇。

9.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述的乙醇为70%乙醇。