CN103906532B - 结合磷酰胆碱（pc）和/或pc结合物的抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及能够结合磷酰胆碱和/或磷酰胆碱结合物的抗体或抗体片段，其中抗体或抗体片段包括重链可变（VH）区域和/或轻链可变（VL）区域，并且其中（a）VH区域包括选自下列的互补决定区（CDR）：CDR1序列，其与SEQ ID NO：7的序列具有序列同一性；CDR2序列，其与SEQ ID NO：8的序列具有序列同一性；和CDR3序列，其与SEQ ID NO：9或10的序列具有序列同一性；和/或（b）VL区域包括选自下列的（CDR）：CDR4序列，其与SEQ ID NO：11的序列具有序列同一性；CDR5序列，其与SEQ ID NO：12的序列具有序列同一性；CDR6序列，其与SEQ ID NO：13的序列具有序列同一性。

Description

结合磷酰胆碱（PC）和/或PC结合物的抗体
本申请要求2011年8月9日提交的美国临时专利申请第61/521607号的优先权，其整体通过引用并入本文。
技术领域
本发明涉及结合磷酰胆碱（PC）和/或PC结合物且具有惊人体内有效性质的新抗体。
背景技术
本说明书中所列或讨论的明显先前公开的文件并不必然被承认是本领域现有技术的一部分或常见的一般知识。
尽管存在治疗心血管疾病的选择，急性冠状动脉综合征（ACS）仍为工业化世界死亡的头号原因。ACS的发生是冠状动脉管腔内血栓形成的结果，其与动脉壁内的慢性炎症相关。动脉炎症经由脂质核心的形成以及由导致斑块形成的炎症性细胞的浸润而起始。不稳定的斑块（plaque）含有实质性的坏死核心和凋亡细胞，其破坏内皮且可导致斑块破裂而暴露出底层胶原蛋白、冯威里氏因子（von Willebrand factor，vWF）、组织因子、脂质及平滑肌，而引发血小板黏附、活化和聚集（Libby等人1996）。用抗血小板疗法、降胆固醇药物治疗（如，他汀（statin）类）、抗凝血剂，以及通过经皮冠状动脉介入治疗（percutaneouscoronary intervention，PCI）以及支架（stents）植入的外科再通术（recanalization）的组合可治疗ACS。
已显示抗血小板疗法例如COX-1抑制剂（如，阿斯匹林）、ADP受体拮抗剂（如，抵克立得（Ticlopedine）及氯吡格雷（clopidogrel））及糖蛋白IIb/IIIa受体拮抗剂在许多不同的临床试验中降低主要不良冠状动脉事件（major adverse caronary events，MACE）的发生率（Dupont等人2009）。然而，一部分接受长期抗血小板疗法的患者持续具有心血管事件。另外，慢性预防疗法可能需要多达两年才显示最大有益效果，而且许多患者接下来仍具有疾病复发的高风险。心肌梗塞后有长达6-12个月的期间，在该期间患者易发生进一步的MACE，这经常归因于由于再狭窄而导致的再闭塞（Tabas.2010）。
因此，明显需要特异地针对防止进一步斑块进展并促进斑块消退的治疗，从而能够实质性降低在此期间的事件。
磷酰胆碱（在某些磷脂上的极性头基团）与心血管疾病有广泛关联。冠状动脉炎症期间产生的活性氧种类造成低密度脂蛋白（LDL）氧化而产生氧化的LDL（oxLDL）。事实上，心血管疾病（CVD），例如动脉粥样硬化、不稳定型心绞痛或急性冠状动脉综合征已显示与血浆的oxLDL水平上升有关联（Itabe和Ueda.2007）。LDL为循环脂蛋白颗粒，其包含带有PC极性头基团的脂类和apoB100蛋白。
在LDL氧化期间，产生了含有不存在于未经修饰的LDL上的新抗原表位的PC。巨噬细胞上的清道夫受体（例如CD36）识别oxLDL上新暴露的PC，并且所产生的巨噬细胞吞噬的oxLDL开始进行血管壁中促炎性泡沫细胞（proinflammatory foam cells）的形成。内皮细胞表面的受体也识别氧化的LDL，且已报道会刺激一系列的反应，包含内皮细胞功能失调、细胞凋亡及未折叠蛋白反应（Gora等人2010）。经磷脂酶A2或胺反应性疾病代谢物（例如由糖化蛋白氧化而产生的醛类）修饰后，PC新抗原表位也暴露于LDL上。这些另外修饰的LDL颗粒也是CVD中的促炎性因子。
已显示抗磷酰胆碱（PC）的抗体结合氧化的LDL或经其他修饰的LDL，并在体内模型中或体外研究中阻止oxLDL的促炎性活性（Shaw等人2000；Shaw等人2001）。
而且，临床数据的检查证实了低水平的天然IgM抗-PC抗体与ACS患者中MACE增高的风险有关（Frostegard,J.2010）。
因此，需要能有效用于治疗的抗-PC抗体分子，特别是适合人类治疗的全人抗-PC抗体。就申请人所知，至今本领域仍未提供治疗上有效的人类抗-PC抗体。鉴定此类抗体受阻于下列事实：用于具有抗-PC结合活性的人类抗体的体外筛选方法对预估体内治疗活性的效果欠佳。
鉴于此，本领域需要用于体内系统时提供有效且有利性质的人类抗-PC抗体分子，特别是用于人类治疗时。
附图说明
图1为经由Biacore的平衡结合分析评估结合亲合力。（●）X9-C01（批号：W21574）（Kd=352±59nM），（○）X9-C01（批号：W22596）（Kd=295±46nM）。图比较抗体的两种不同制剂。
图2为由ELISA测量的结合PC-BSA的纯化的IgG。（●）M4-G02（EC50=0.14nM），（○）M73-G03（EC50=0.91nM），（▼）X9-C01（EC50=0.18nM）。数据以整体Bmax拟合至4个参数逻辑方程式而得到EC50估值。
图3为CD45阳性白细胞流入股动脉套管小鼠中层（medial）的抑制。以含有1%胆固醇及0.05%胆酸盐的高胆固醇及高脂质饮食喂食转基因的雄性ApoE*3Leiden小鼠，以引发高胆固醇血症。经3星期高脂质饮食后，麻醉小鼠并自股动脉周围解剖股动脉且松松地套上非缩窄性聚乙烯套管（Portex，内径0.40mm，外径0.80mm及长度2.0mm）。于第0天时，经IP注射来用溶于PBS的10mg/kg重组抗-PC IgG抗体、溶于PBS的10mg/kg抗链霉亲和素A2IgG抗体或只有PBS来处理小鼠。手术后3天处死小鼠且取下套管的股动脉并以石蜡包埋。自套管的股动脉片段的全长获得连续横断面（5μm），用于组织化学法分析。*p<0.01，n=15。
图4A-B为股动脉套管小鼠的内膜增厚的抑制。以含有1%胆固醇及0.05%胆酸盐的高胆固醇及高脂质饮食喂食转基因的雄性ApoE*3Leiden小鼠，以引发高胆固醇血症。经3星期高脂质饮食后，麻醉小鼠并自股动脉周围解剖股动脉且松松地套上非缩窄性聚乙烯套管（Portex，内径0.40mm、外径0.80mm及长度2.0mm）。于手术后第0、3、7及10天时，经IP注射来用溶于PBS的10mg/kg重组抗-PC IgG抗体、溶于PBS的10mg/kg抗链霉亲和素A2IgG抗体或只有PBS的任一种来处理小鼠。手术后14天处死小鼠且取下套管的股动脉并以石蜡包埋。自套管的股动脉片段的全长获得连续横断面（5μm），用于组织化学法分析。图4A.4个图中内膜面积（箭头指示处）的比较显示，抗体X9-C01降低套管引发的血管损伤14天后观察到的内膜增厚。图4B.内膜增厚（μm）2，n=10，*p<0.05
图5为使用ELISA测量的X9-C01突变体的PC结合活性。（●）X9-C01（EC50=0.35nM），（○）X19-E01（EC50=0.38nM），（▼）X19-E03（EC50=0.79nM）。
发明内容
本申请公开了包括能够结合磷酰胆碱和/或磷酰胆碱结合物的新抗原结合区的新抗体及抗体片段的制备与测试。
在第一方面中，本发明提供了能够结合磷酰胆碱和/或磷酰胆碱结合物的抗体或抗体片段，其中抗体或抗体片段包括重链可变（VH）区域和/或轻链可变（VL）区域，并且其中：
（a）VH区域包括包含1、2或3个选自下列的互补决定区（CDR）的氨基酸序列：
CDR1序列，其包括与SEQ ID NO：7的序列具有至少20%、40%、60%、80%或100%序列同一性的氨基酸序列；
CDR2序列，其包括与SEQ ID NO：8的序列具有至少5%、11%、17%、23%、29%、35%、41%、47%、52%、58%、64%、70%、76%、82%、88%、94%或100%序列同一性的氨基酸序列；和
CDR3序列，其包括与SEQ ID NO：9或10的序列具有至少11%、22%、33%、44%、55%、66%、77%、88%或100%序列同一性的氨基酸序列；和/或
（b）VL区域包括包含1、2或3个选自下列的互补决定区（CDR）的氨基酸序列：
CDR4序列，其包括与SEQ ID NO：11的序列具有至少7.5%、15%、23%、30%、38%、46%、53%、61%、69%、76%、84%、92%或100%序列同一性的氨基酸序列；
CDR5序列，其包括与SEQ ID NO：12的序列具有至少14%、28%、42%、57%、71%、85%或100%序列同一性的氨基酸序列；
CDR6序列，其包括与SEQ ID NO：13的序列具有至少9%、18%、27%、36%、45%、54%、63%、72%、81%、90%或100%序列同一性的氨基酸序列。
在本发明第一方面的一个实施方式中，抗体或抗体片段包括VH区域，该VH区域包括包含如上所定义的CDR1序列、CDR2及CDR3序列的氨基酸序列，和/或VL区域，该VL区域包括包含如上所定义的CDR4序列、CDR5及CDR6序列的氨基酸序列。
在本发明第一方面的另一个实施方式中，抗体或抗体片段包括：
VH区域，其包括包含CDR1、CDR2及CDR3序列的所有三个的氨基酸序列，而CDR1、CDR2及CDR3序列存在于选自SEQ ID NO：1、3或5的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：1、3或5的任一个的氨基酸序列具有至少80%、85%、90%或95%序列同一性的氨基酸序列；和/或
VL区域，其包括包含CDR4、CDR5及CDR6序列的所有三个的氨基酸序列，而CDR4、CDR5及CDR6序列存在于选自SEQ ID NO：2、4或6的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：2、4或6的任一个的氨基酸序列具有至少80%、85%、90%或95%序列同一性的氨基酸序列。
在本发明第一方面的另一个实施方式中，抗体或抗体片段包括重链可变（VH）区域和/或轻链可变（VL）区域，并且其中：
VH区域包括选自SEQ ID NO：1、3或5的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：1、3或5的任一个的氨基酸序列具有至少50%、60%、70%、80%、85%、90%或95%序列同一性的氨基酸序列；和
VL区域包括选自SEQ ID NO：2、4或6的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：2、4或6的任一个的氨基酸序列具有至少50%、60%、70%、80%、85%、90%或95%序列同一性的氨基酸序列。
SEQ ID NO：1为如下实施例所示的X9-C01抗体重链可变（VH）区域，并具有序列：
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSYYRMWWVRQAPGKGLEWVSSIGSSG
GKTFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRFMSLGFDYWCQG
TLVTVSS
并包含互补决定区（CDR）：
VHCDR1：YYRMW(SEQ ID NO:7）；
VHCDR2：SIGSSGGKTFYADSVKG(SEQ ID NO：)；
VHCOR3：RFMSLGFDY(SEQ ID NO：9)；
SEQ ID NO：2为X9-C01抗体的轻链可变（VL）区域且具有序列：
QSELTQPHSASGTPGQRVTISCSGRRSNIGANYVYWYQQYPGTAPKLLIYRNNQRPS
GVPDRFSGSKSDTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKLTVL
并包含互补决定区（CDR）：
VLCOR4：SGRRSNIGANYVY(SEQ ID NO:11)；
VLCOR5:RNNQRPS(SEQ ID NO：12)；
VLCDR6:AAWDDSLSGWV(SEQ ID NO：13)；
SEQ ID NO：3为如下实施例所示的X19-E01抗体重链可变（VH）区域，并具有序列：
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASCFTFSYYRMWWVRQAPGKGLEWVSSIGSSG
GKTFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRFLSLGFDYWGQG
TLVTVSS
并包含互补决定区（CDR）：
VH CDR1：如上所定义的SEQ ID NO：7；
VH CDR2：如上所定义的SEQ ID NO：8；
VH CDR3：RFLSLGFDY（SEQ ID NO：10），
SEQ ID NO：4为X19-E01抗体的轻链可变（VL）区域且具有序列：
QSELTQPHSASGTPGQRVTISCSGRRSNIGANYVYWYQQYFGTAFKLLIYRNNQRPS
GVPDRFSCSKSDTSASLAISCLRSEOEAOYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKLTVL
并包含下述序列作为互补决定区（CDR）：
SEQ ID NO：11为VL CDR4；SEQ ID NO：12为VL CDR5；和SEQ ID NO：13为VL CDR6，
SEQ ID NO：5为如下实施例所示的X19-E03抗体重链可变（VH）区域，并具有序列：
EVQLLESGGGLVQPGCSLRLSCAASGFTFSYYRMWWVRQAPGKGLEWVSSIGSSG
GKTFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRFLSLGFDYWGQG
TLVTVSS
并包含下述序列作为互补决定区（CDR）：
SEQ ID NO：7为VH CDR1；SEQ ID NO：8为VH CDR2；和SEQ ID NO：10为VH CDR3，
SEQ ID NO：6为X19-E03抗体的轻链可变（VL）区域且具有序列：
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSCRRSNIGANYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRFS
GVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSCWVFGGGTKLTVL
并包含下述序列作为互补决定区（CDR）：
SEQ ID NO：11为VH CDR4；SEQ ID NO：12为VH CDR5；和SEQ ID NO：13为VH CDR6。
以上定义的SEQ ID NO的总结显示如下：
X9-C01 X19-E01 X19-E03
VH序列 SEQ ID NO：1 SEQ ID NO：3 SEQ ID NO：5
VL序列 SEQ ID NO：2 SEQ ID NO：4 SEQ ID NO：6
VH CDR1 SEQ ID NO：7 SEQ ID NO：7 SEQ ID NO：7
VH CDR2 SEQ ID NO：8 SEQ ID NO：8 SEQ ID NO：8
VH CDR3 SEQ ID NO：9 SEQ ID NO：10 SEQ ID NO：10
VL CDR4 SEQ ID NO：11 SEQ ID NO：11 SEQ ID NO：11
VL CDR5 SEQ ID NO：12 SEQ ID NO：12 SEQ ID NO：12
VL CDR6 SEQ ID NO：13 SEQ ID NO：13 SEQ ID NO：13
在本发明第一方面的另一个实施方式中，抗体或抗体片段基于X9-C01抗体的VH和/或VL区域，并且因此：
VH区域（i）包括与SEQ ID NO：1的序列具有至少80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的氨基酸序列，和/或（ii）包括CDR1序列、CDR2序列及CDR3序列，该CDR1序列包括与SEQID NO：7的序列具有至少20%、40%、60%、80%或100%序列同一性的氨基酸序列，该CDR2序列包括与SEQ ID NO：8的序列具有至少5%、11%、17%、23%、29%、35%、41%、47%、52%、58%、64%、70%、76%、82%、88%、94%或100%序列同一性的氨基酸序列，以及该CDR3序列包括与SEQ ID NO：9的序列具有至少11%、22%、33%、44%、55%、66%、77%、88%或100%序列同一性的氨基酸序列；和/或
VL区域（iii）包括与SEQ ID NO：2的序列具有至少80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的氨基酸序列，和/或（iv）CDR4序列、CDR5序列及CDR6序列，该CDR4序列包括与SEQ IDNO：11的序列具有至少7.5%、15%、23%、30%、38%、46%、53%、61%、69%、76%、84%、92%或100%序列同一性的氨基酸序列，该CDR5序列包括与SEQ ID NO：12的序列具有至少14%、28%、42%、57%、71%、85%或100%序列同一性的氨基酸序列，及该CDR6序列包括与SEQ ID NO：13的序列具有至少9%、18%、27%、36%、45%、54%、63%、72%、81%、90%或100%序列同一性的氨基酸序列。优选地，VH区域包括SEQ ID NO：1的序列，以及VL区域包括SEQ ID NO：2的序列。
该实施方式的抗体或抗体片段可进一步包括重链恒定（CH）区域或其片段，该片段可包括，例如，至少CH区域的10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320个或更多氨基酸。CH区域或其片段可连结于VH区域。CH区域无特别限制，虽然在一个实施方式中其为人类CH区域。本领域含有许多人类CH区域的实例。用于本文的示例性人类CH区域包含：
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL
QSSGLYSLSSVVT VPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCFA
PELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK
TKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALAPIEKTISKAKGQPRE
PQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLV KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG
SFFLYSKLTVOKSRWQQGNVFSCSVNHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO：14).
SEQ ID NO：14为X9-C0l的CH区域且具有人类IgGl(UniProtKB／Swiss-Prot：P01857.1)的CH区域的序列。任选地，SEQ ID NO：14的CH区域中末端K(Lys)可以被移除，其降低或避免可能的肽酶降解。
该实施方式的抗体或抗体片段可以另外地，或替代地进一步包括轻链恒定(CL)区域或其片段，该片段可包括，例如，CL区域的至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个氨基酸。CL区域或其片段可连结于VL区域。CL区域无特别限制，虽然在一个实施方式中其为人类CL区域。本领域含有许多人类CL区域的实例。用于本文的示例性人类CL区域包含：
QPKAAPSVTUFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVIVAWKADSSPVKAGVETTTPS
KQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQ ID NO：15).
SEQ ID NO：15为X9-C0l的CL区域，并具有人类lambda(GenBank：J00253.1)的CL区域的序列。根据此实施方式，优选地，VH区域包括SEQ ID NO：l的序列，其连接于SEQ ID NO：14的CH区域，以及VL区域包括SEQ ID NO：2的序列，其连接于SEQ ID NO：15的CL区域。
本发明第一方面的另一个实施方式中，抗体或抗体片段基于X19-E0l抗体的VH和／或VL区域，并且因此：
VH区域(i)包括与SEQ ID NO：3的序列具有至少80％、85％、90％、95％或100％序列同一性的氨基酸序列，和／或(ii)包括CDRl序列、CDR2序列及CDR3序列，该CDRl序列包括与SEQ ID NO：7的序列具有至少20％、40％、60％、80％或100％序列同一性的氨基酸序列，该CDR2序列包括与SEQ ID NO：8的序列具有至少5％、11％、17％、23％、29％、35％、41％、47％、52％、58％、64％、70％、76％、82％、88％、94％或100％序列同一性的氨基酸序列，及该CDR3序列包括与SEQ ID NO：10的序列具有至少11％、22％、33％、44％、55％、66％、77％、88％或100％序列同一性的氨基酸序列；和／或
VL区域(iii)包括与SEQ ID NO：4的序列具有至少80％、85％、90％、95％或100％序列同一性的氨基酸序列，和／或(iv)CDR4序列、CDR5序列及CDR6序列，该CDR4序列包括与SEQ ID NO：11的序列具有至少7.5％、15％、23％、30％、38％、46％、53％、61%、69%、76%、84%、92%或100%序列同一性的氨基酸序列，该CDR5序列包括与SEQ ID NO：12的序列具有至少14%、28%、42%、57%、71%、85%或100%序列同一性的氨基酸序列，及该CDR6序列包括与SEQID NO：13的序列具有至少9%、18%、27%、36%、45%、54%、63%、72%、81%、90%或100%序列同一性的氨基酸序列。优选地，VH区域包括SEQ ID NO：3的序列，以及VL区域包括SEQ ID NO：4的序列。
该实施方式的抗体或抗体片段可进一步包括重链恒定（CH）区域或其片段，该片段可包括，例如，CH区域的至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320个或更多个氨基酸。该CH区域或其片段可连结于VH区域。CH区域无特别限制，虽然在一个实施方式中其为人类CH区域。本领域含有许多人类CH区域的实例。用于本文的示例性人类CH区域包含SEQ ID NO：14。
该实施方式的抗体或抗体片段可另外地，或替代地进一步包括轻链恒定（CL）区域或其片段，该片段可包括，例如，CL区域的至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个氨基酸。该CL区域或其片段可连结于VL区域。CL区域无特别限制，虽然在一个实施方式中其为人类CL区域。本领域含有许多人类CL区域的实例。用于本文的示例性人类CL区域包含SEQ ID NO：15。
根据此实施方式，优选地，VH区域包括SEQ ID NO：3的序列，其连接于SEQ ID NO：14的CH区域，以及VL区域包括SEQ ID NO：4的序列，其连接于SEQ ID NO：15的CL区域。
本发明第一方面的另一个实施方式中，抗体或抗体片段基于X19-E03抗体的VH和/或VL区域，并且因此：
VH区域（i）包括与SEQ ID NO：5的序列具有至少80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的氨基酸序列，和/或（ii）包括CDR1序列、CDR2序列及CDR3序列，该CDR1序列包括与SEQID NO：7的序列具有至少20%、40%、60%、80%或100%序列同一性的氨基酸序列，该CDR2序列包括与SEQ ID NO：8的序列具有至少5%、11%、17%、23%、29%、35%、41%、47%、52%、58%、64%、70%、76%、82%、88%、94%或100%序列同一性的氨基酸序列，及该CDR3序列包括与SEQ ID NO：10的序列具有至少11%、22%、33%、44%、55%、66%、77%、88%或100%序列同一性的氨基酸序列；和/或
VL区域（iii）包括与SEQ ID NO：6的序列具有至少80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的氨基酸序列，和/或（iv）CDR4序列、CDR5序列及CDR6序列，该CDR4序列包括与SEQ IDNO：11的序列具有至少7.5%、15%、23%、30%、38%、46%、53%、61%、69%、76%、84%、92%或100%序列同一性的氨基酸序列，该CDR5序列包括与SEQ ID NO：12的序列具有至少14%、28%、42%、57%、71%、85%或100%序列同一性的氨基酸序列，及该CDR6序列包括与SEQ ID NO：13的序列具有至少9%、18%、27%、36%、45%、54%、63%、72%、81%、90%或100%序列同一性的氨基酸序列。优选地，VH区域包括SEQ ID NO：5的序列，以及VL区域包括SEQ ID NO：6的序列。
该实施方式的抗体或抗体片段可进一步包括重链恒定（CH）区域或其片段，该片段可包括，例如，CH区域的至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320个或更多个氨基酸。该CH区域或其片段可连结于VH区域。CH区域无特别限制，虽然在一个实施方式中其为人类CH区域。本领域含有许多人类CH区域的实例。用于本文的示例性人类CH区域包含SEQ ID NO：14。
该实施方式的抗体或抗体片段可另外地，或替代地进一步包括轻链恒定（CL）区域或其片段，该片段可包括，例如，CL区域的至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个氨基酸。该CL区域或其片段可连结于VL区域。CL区域无特别限制，虽然在一个实施方式中其为人类CL区域。本领域含有许多人类CL区域的实例。用于本文的示例性人类CL区域包含SEQ ID NO：15。
根据此实施方式，优选地，VH区域包括SEQ ID NO：5的序列，其连接于SEQ ID NO：14的CH区域，以及VL区域包括SEQ ID NO：6的序列，其连接于SEQ ID NO：15的CL区域。
在上述各种实施方式中，CH区域及其片段的讨论也包含使用任一的变体的选项。该变体包括与所述CH区域或其片段具有少于100%序列同一性的序列，例如大于50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性。因此，与所述CH区域或其片段相比，CH区域或其片段的变体可具有一个或多个（例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160或更多个）序列变异。与所述CH区域及其片段相比，序列中的变异可能归因于一个或多个氨基酸的添加、一个或多个氨基酸的缺失和/或一个或多个氨基酸的取代。在多于一个变异的情况下，则该变异可在连续或非连续的位置。
同样地，在上述各种实施方式中，CL区域及其片段的讨论也包含使用任一的变体的选项。该变体包括与所述CL区域或其片段具有少于100%序列同一性的序列，例如大于50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性。因此，与所述CL区域或其片段相比，CL区域或其片段的变体可具有一个或多个（例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、60或更多个）序列变异。与所述CL区或其片段相比，序列中的变异可能归因于一个或多个氨基酸的添加、一个或多个氨基酸的缺失和/或一个或多个氨基酸的取代。在多于一个变异的情况下，则该变异可在连续或非连续的位置。
在根据上述实施方式的抗体或抗体片段中，优选地，VH区域、VL区域或优选地VH及VL两区域皆包括与所述SEQ ID NO，或在所述SEQ ID NO为对应于单个CDR序列的情况下，与一种或多种（例如，2种或3种）各个所述SEQ ID NO具有100%序列同一性的氨基酸序列。
因此，例如，根据前述实施方式的基于X9-C01抗体的优选抗体或抗体片段可以包括包含SEQ ID NO：1的序列的VH区域和/或包含SEQ ID NO：2的序列的VL区域；根据前述实施方式的基于X19-E01抗体的优选抗体或抗体片段可以包括包含SEQ ID NO：3的序列的VH区域和/或包含SEQ ID NO：4的序列的VL区域；根据前述实施方式的基于X19-E03抗体的优选抗体或抗体片段可以包括包含SEQ ID NO：5的序列的VH区域和/或包含SEQ ID NO：6的序列的VL区域。
或者，在另一个实施方式中，根据前述实施方式的抗体或抗体片段可以包括VH区域、VL区域或VH及VL两区域，其每一个均包括与所述SEQ ID NO，或在所述SEQ ID NO为对应于个别CDR序列的情况下，与一种或多种（例如，2种或3种）各个所述SEQ ID NO具有少于100%序列同一性的氨基酸序列。
根据本发明的第一方面，包括与所述SEQ ID NO具有少于100%序列同一性的氨基酸序列的序列可以是与所述SEQ ID NO相比具有一个或多个（例如2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个）序列变异的序列。与所述SEQ ID NO相比，序列中的变异可能归因于一个或多个（例如2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多）氨基酸的添加、一个或多个（例如2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多）氨基酸的缺失和/或一个或多个（例如2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多）氨基酸的取代。在多于一个变异的情况下，该变异可在连续或非连续的位置。
在与选自SEQ ID NO：1-6的所述SEQ ID NO具有少于100%，但至少80%、85%、90%、95%序列同一性的变体抗原结合区的序列中的一种或多种变异可存在于，或只存在于形成一种或多种框架区的氨基酸序列中。框架区包括不形成如本文定义的CDR的氨基酸区域。
另外地或替代地，在与选自SEQ ID NO：1-6的所述SEQ ID NO具有少于100%，但至少80%、85%、90%、95%序列同一性的抗原结合区的序列中的一种或多种变异可存在于，或只存在于形成一种或多种互补决定区（CDR）的氨基酸序列中。SEQ ID NO：1-6中的CDR是通过参考SEQ ID NO：7-13如上述所定义且同时显示于以下的表2和表3中。
在本发明第一方面的所有实施方式中，通常，在框架区比在CDR中能承受更高水平的序列修饰而没有实质性改变抗体或抗体片段的结合特性和/或体内功效。
因此，例如，在另一个实施方式中，本发明第一方面的抗体或抗体片段中的一个（a）、该（the）或各个（each）CDR与定义于SEQ ID NO：7至13之一的“亲代”CDR序列比较，可包括多达1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸取代、插入和/或缺失，且优选不多于5、4、3、2或1个氨基酸取代、插入和/或缺失；优选地，与相应定义的SEQ ID NO相比，CDR序列中的氨基酸取代、插入和/或缺失的数目不减少序列同一性至少于50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%。
另外地，和/或替代地，本发明第一方面的抗体或抗体片段中的一个、该或各个框架区，与存在于VH或VL定义的任一的SEQ ID NO：1至16的相应框架序列相比，可包括多达1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个氨基酸取代、插入和/或缺失，以及任选地不多于10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸取代、插入和/或缺失；优选地，与相应定义的SEQ ID NO相比，在任何框架区的氨基酸取代、插入和/或缺失的数目都不减少序列同一性至少于10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%。
取代无论是在一个或多个框架区还是互补决定区，均可为保守或非保守取代。“保守取代”是指例如Gly、Ala；Val、Ile、Leu；Asp、Glu；Asn、Gln；Ser、Thr；Lys、Arg；及Phe、Tyr的组合。
例如，可引进序列变异以使抗原结合区序列更接近种系（germline）序列，以改善包括变体抗原结合区的抗体或抗体片段的稳定性，降低包括变体抗原结合区的抗体或抗体片段的免疫原性，和/或避免或降低在制造过程中的不利性质。实施例中显示了适合的序列变异的非限制性实例，参考引进X9-C01的重链和/或轻链序列中的变异以产生X19-E01和/或X19-E03。
可使用下述的蛋白质工程及定点突变方法或本领域公知的替代方法制备此类变体。
在本发明第一方面的抗体或抗体片段的VH区域、VL区域或VH及VL两区域包括与所述SEQ ID NO、一种或多种各个所述SEQ ID NO具有少于100%序列同一性的一种或多种氨基酸序列的情况时，在一个实施方式中，抗体或抗体片段结合磷酰胆碱和/或磷酰胆碱结合物的能力可以例如实质上等于（即，至少80%、85%、90%或95%）或大于相应“亲代”抗体或抗体片段的能力，其中相应“亲代”抗体或抗体片段的VH区域和VL区域各包括包含与所述SEQ IDNO或各个所述SEQ ID NO具有100%序列同一性的氨基酸序列的抗原结合序列。
因此，例如，在抗体或抗体片段基于X9-C01抗体，及VH区域包括包含与SEQ ID NO：1具有少于100%但至少80%、85%、90%或95%序列同一性的氨基酸序列的抗原结合序列；和/或VL区域包括包含与SEQ ID NO：2具有少于100%但至少80%、85%、90%或95%序列同一性的氨基酸序列的抗原结合序列的情况时，该抗体或抗体片段结合磷酰胆碱和/或磷酰胆碱结合物的能力可以例如等于相应“亲代”抗体或抗体片段的结合能力，而该“亲代”抗体或抗体片段具有包括SEQ ID NO：1的序列的VH区域及包括SEQ ID NO：2的序列的VL区域。在本文中，“相应“亲代”抗体或抗体片段”是指正在做的“抗体或抗体片段”与“相应“亲代”抗体或抗体片段”间的唯一序列差异在于VH和/或VL区域的抗原结合序列之一或两者。在一个实施方式中，相应亲代抗体为具有X9-C01的VH、VL、CH及CL区域序列的抗体，即，SEQ ID NO：1的VH区域（其连接于SEQ ID NO：14的CH区域）及SEQ ID NO：2的VL区域（其连接于SEQ ID NO：15的CL区域）。
在做必要修正的情况下（muatatis mutandis），相同内容应用于列于上文的其它抗体或抗体片段，其中VH和/或VL区域包括与所述SEQ ID NO或一种或多种各个所述SEQ IDNO具有少于100%序列同一性的一种或多种氨基酸序列，而用于测定与磷酰胆碱和/或磷酰胆碱结合物的结合等效的相应“亲代”抗体或抗体片段”只在VH和/或VL区域之一或两者存在不同，并具有包括与该所述SEQ ID NO或各个所述SEQ ID NO具有100%序列同一性的氨基酸序列的该抗原结合序列或各个抗原结合序列。
就这一点而言，抗体或抗体片段结合磷酰胆碱和/或磷酰胆碱结合物的能力可利用任何适当的方法，例如表面等离子体共振（SPR）分析来测量抗体或抗体片段与固定（例如经由胺基苯基连接剂）于固体表面例如Biacore SPR生物传感器的磷酰胆碱的结合来测定。
如下述实施例所讨论的，X9-C01结合胺基苯基磷酰胆碱的表观Kd约300nM。在一个实施方式中，在提供以表观Kd约300nM使具有X9-C01（分别由SEQ ID NO：1及2所定义）的VH及VL区域的抗体或抗体片段结合固定的胺基苯基磷酰胆碱的条件下（例如在实施例中使用的SPR条件）测验时，本发明的抗体或抗体片段结合固定的胺基苯基磷酰胆碱的表观Kd不大于约600nM、约500nM、约400nM、约350nM、约325nM、约320nM、约315nM、约310nM、约305nM、约300nM或更少。在本文中，术语“约”用于指所述数值的±20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%或1%以内的数值。
在另外的实施方式中，本发明第一方面的抗体或抗体片段与“比较者（comparator）”抗体或抗体片段竞争结合如本文定义的PC或PC结合物（如用ELISA或SPR试验确定的）。在本文中，比较者抗体或抗体片段可包括以下抗体的VH及VL区域且视需要也包含CH及CL区域：X9-C01（分别由SEQ ID NO：1、2、14及15所定义）、X19-E01（分别由SEQ IDNO：3、4、14及15所定义）或X19-E03（分别由SEQ ID NO：5、6、14及15所定义），并优选与经测试的抗体或抗体片段只在VH和/或VL区域中的序列变异不同。“竞争”是指，在试验中包含等摩尔量的本发明第一方面的抗体或抗体片段及“比较者”抗体可降低“比较者”抗体结合至PC或PC结合物的可检测水平为10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或更多，例如实质上100%，其是与比较抗体在没有本发明第一方面的抗体或抗体片段存在下在相同试验中结合PC或PC结合物的可检测水平相比较。
也如下述实施例所讨论的，X9-C01可响应IC50在nM范围的oxLDL的刺激而阻止MCP-1从单核细胞释出。在另一个实施方式中，当在提供具有X9-C01（分别由SEQ ID NO：1及2所定义）的VH及VL区域的抗体或抗体片段的IC50在约0.6至3.4nM的范围的条件下（如下列实施例所示）试验时，本发明的抗体或抗体片段以IC50少于约10nM、约7nM、约6nM、约5nM、约4nM、约3nM、约2nM、约1nM、约0.9nM、约0.8nM、约0.7nM、约0.6nM或更少来响应oxLDL的刺激而阻止MCP-1从内皮细胞释出。在本文中，术语“约”用于指所述数值的±20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%或1%以内的数值。
本发明的抗体或抗体片段结合磷酰胆碱结合物的能力可通过用磷酰胆碱结合物置换磷酰胆碱，用与上述的方法等价的方法测定。适合的磷酰胆碱结合物包含以上所讨论的，包括连接于载体的磷酰胆碱部分，任选地经由间隔物，例如PC-BSA及PC-KLH结合物。优选地，在测定抗体或抗体片段结合磷酰胆碱结合物的能力的情况时，其是参照抗体或抗体片段特异性结合磷酰胆碱结合物中的磷酰胆碱部分的能力而测定的。这可由本领域已知的技术而测定，如通过比较抗体或抗体片段结合磷酰胆碱结合物及不含磷酰胆碱部分的对应分子的能力。
在一个实施方式中，本发明的抗体或抗体片段可包括线性多肽序列中的VH区域及VL区域。
在另一个实施方式中，本发明的抗体或抗体片段可包括每个均在独立的多肽序列中的VH区域及VL区域。在此实施方式中，优选地，独立的多肽序列直接或间接结合在一起（例如由独立的多肽序列间的一个或多个二硫键）。
在另一个实施方式中，VH区域可连结至CH区域或其片段，该片段可包括，例如，CH区域或如上文所述的CH区域变体或其片段的至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320个或更多个氨基酸。连结可为经肽键的直接融合，以使VH区域及CH区域以单一多肽存在，或者连结可经由连接子例如肽或其它连接子，或经由肽键以外的直接化学键。CH区域无特别限制，虽然在一个实施方式中其为人类CH区域。所属领域含有许多人类CH区域的实例。用于本文的示例性人类CH区域包含SEQ ID NO：14。
在另一个实施方式中，VL区域可连结至CL区域或其片段，该片段可包括，例如，CL区域或如上文所述的CL区域变体或其片段的至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100个或更多个氨基酸。连结可为经肽键的直接融合，以使VL区域及CL区域以单一多肽存在，或者连结可经由连接子例如肽或其它连接子，或经由肽键以外的直接化学键。CL区域无特别限制，虽然在一个实施方式中其为人类CL区域。所属领域含有许多人类CL区域的实例。使用于本文的示例性人类CL区域包含SEQ ID NO：15。
在另一个实施方式中，本发明的抗体或抗体片段可包括连结于一个多肽序列中的CH区域的VH区域，及连结于另一个独立多肽序列中的CL区域的VL区域。在此实施方式中，优选地，独立的多肽序列直接或间接结合在一起（例如通过独立的多肽序列间的一个或多个二硫键）。
在另一个实施方式中，本发明的抗体或抗体片段可包括：
第一重链，其包括连结至第一CH区域的第一VH区域，
第一轻链，其包括连结至第一CL区域的第一VL区域；
第二重链，其包括连结至第二CH区域的第二VH区域，
第二轻链，其包括连结至第二CL区域的第二VL区域；并且
其中任选地，第一轻链及第一重链直接或间接结合在一起（例如通过独立的多肽序列间的一个或多个二硫键）且第二轻链及第二重链直接或间接结合在一起（例如通过独立的多肽序列间的一个或多个二硫键），及进一步任选地，其中第一及第二重链直接或间接结合在一起（例如通过独立的多肽序列间的一个或多个二硫键）。
在另一个实施方式中，本发明的抗体或抗体片段可为单克隆抗体，更优选为人类单克隆抗体。
本发明的抗体或抗体片段可为人源化抗体或嵌合抗体。
在一个优选的实施方式中，本发明的抗体或抗体片段为分离的抗体或抗体片段。
在另一个实施方式中，本发明的抗体或抗体片段可包括包含通过使用标准蛋白质工程技术嫁接至免疫球蛋白的蛋白支架上的如上所述的VH、VL、CDR1、CDR2、CDR3、CDR4、CDR5和/或CDR6序列的一个或多个氨基酸序列。技术人员理解，各种蛋白支架可用且是本领域所公知的。最后结果为新框架中保存的抗原结合活性。
例如，免疫球蛋白支架可衍生自IgA、IgE、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgM。支架可衍生自来自任何哺乳动物的免疫球蛋白，例如小鼠、大鼠、兔、山羊、骆驼、骆马、灵长类。优选地，免疫球蛋白支架衍生自人类免疫球蛋白。
可利用标准分子生物学技术或通过使用产生此类片段的酶（如，胃蛋白酶或木瓜蛋白酶）裂解经纯化的抗体而产生本发明第一方面的抗体片段。本发明的此类抗体片段的实例为，但不限于，单链抗体、Fv、scFv、Fab、F（ab’）2、Fab’、Fd、dAb、CDR或scFv-Fc片段或纳米抗体及双特异抗体（diabodies），或任何已经经如聚乙二醇化而稳定的片段。
本发明的第二方面提供了药物组合物，其包括本发明第一方面的抗体或抗体片段及药学上可接受的载体或赋形剂。任选地，组合物中仅有的抗体或抗体片段为本发明第一方面所述的抗体或抗体片段。更优选地，例如，组合物中存在单一类型的抗体或抗体片段，例如其中类型是参照氨基酸序列、分子量和/或结合磷酰胆碱的特异性而测定的。关于这一点，技术人员理解，例如归因于N-端变异和/或部分降解而在任何群体中的抗体或抗体片段序列中可能存在多少低水平的变异；因此，在本文中，组合物可称为含有单一类型的抗体或抗体片段，如果例如该组合物中以重量计至少约80%、约90%、约95%、约96%、约97%、约98%、约99%或实质上100%的可检测水平的抗体或抗体片段为单一类型，所述检测参照氨基酸序列、分子量和/或结合磷酰胆碱的特异性而决定。
本发明的第三方面提供本发明第一方面的抗体或抗体片段或本发明第二方面的药物组合物，其用于医药中，例如用于在人体或动物体或其离体样品上进行的治疗、外科手术或诊断的方法中。
例如，本发明第三方面提供本发明第一方面的抗体或抗体片段或本发明第二方面的药物组合物，其用于防止、预防和/或治疗哺乳动物（包括人类）的动脉粥样硬化、动脉粥样硬化相关疾病或心血管疾病。
换言之，本发明第三方面提供了本发明第一方面的抗体或抗体片段或本发明第二方面的药物组合物在制备用于防止、预防和/或治疗哺乳动物（包括人类）的动脉粥样硬化、动脉粥样硬化相关疾病或心血管疾病的药物中的用途。
也提供的是防止、预防和/或治疗哺乳动物（包括人类）的动脉粥样硬化、动脉粥样硬化相关疾病或心血管疾病的方法，该方法包括将本发明第一方面的抗体或抗体片段或本发明第二方面的药物组合物施与哺乳动物的步骤。
本发明第三方面也提供了本发明第一方面的抗体或抗体片段或本发明第二方面的药物组合物，其用于预防、防止和/或治疗阿尔茨海默病（Alzheimer）。
换言之，本发明第三方面提供了本发明第一方面的抗体或抗体片段或本发明第二方面的药物组合物在制备用于预防、防止和/或治疗阿尔茨海默病的药物中的用途。
也提供的是免疫及预防、防止和/或治疗受试者以抗阿尔茨海默病的方法，该方法包括将本发明第一方面的抗体或抗体片段或本发明第二方面的药物组合物施与个体的步骤。
本发明第三方面也提供了本发明第一方面的抗体或抗体片段或本发明第二方面的药物组合物，其用于免疫或预防，或防止或治疗哺乳动物（包括人类）的代谢疾病。
换言之，本发明第三方面提供本发明第一方面的抗体或抗体片段或本发明第二方面的药物组合物在制备用于预防、防止或治疗哺乳动物（包括人类）的代谢疾病的药物中的用途。
也提供的是免疫或预防，或治疗哺乳动物（例如人类）的代谢疾病的方法，该方法包括将本发明第一方面的抗体或抗体片段或本发明第二方面的药物组合物施与哺乳动物的步骤。
依据本发明第三方面有待解决和/或治疗的代谢疾病可例如为选自下列的症状：代谢综合征、胰岛素抗药性、葡糖耐受不良、高血糖症、I型糖尿病、II型糖尿病、高脂血症、高甘油三脂血症、高胆固醇血症、血脂异常及多囊性卵巢综合征（PCOS）。
本发明第四方面提供核酸分子，其包括编码本发明第一方面的抗体或抗体片段，或抗体或抗体片段的多肽链形成部分的序列。核酸分子可例如为DNA或RNA。核酸分子可包括位于编码本发明第一方面的抗体或抗体片段或其部分的序列的5’和/或3’的其他序列。此种5’和/或3’序列可包含转录和/或翻译调节序列，例如本领域公知的启动子和/或终止子序列，且可例如被加以选择以在所选择的宿主细胞内具有功能性。因此，核酸分子可包括表达盒，该表达盒在转化至所选择的宿主细胞后可利用宿主细胞的转录和/或翻译系统而表达，以产生本发明第一方面所编码的抗体或抗体片段，或抗体或抗体片段的多肽链形成部分。
本发明第五方面提供了包括本发明第四方面的一个或多个核酸分子序列的载体或质粒。在抗体或抗体片段包括多于一条多肽链时，载体或质粒可例如包括编码各个多肽链的核酸编码序列，以使经载体或质粒转化的宿主细胞可表达所有存在于抗体或抗体片段内的多肽链。
因此，第五方面也提供载体或质粒在转化宿主细胞中的用途。用载体或质粒转化宿主细胞的方法是本领域公知的。为了帮助筛选转化的宿主细胞，载体或质粒可包括筛选标记。
本发明第六方面提供包括本发明第五方面的一种或多种载体或质粒的宿主细胞。第六方面也提供包括一种或多种本发明第五方面的载体或质粒的细胞培养物，例如单一培养物，其中全部或实质上全部的细胞包括相同的一种或多种本发明第五方面的载体或质粒。可通过例如以下方式得到此种单一培养物：筛选细胞中一种或多种载体或质粒上一种或多种选择标记的存在，并且任选地，在培养筛选的细胞的生长期间维持筛选压力。
在本发明第一方面的抗体或抗体片段包括多于一条多肽链时，可用单一载体或质粒转化宿主细胞，而该载体或质粒包括编码各条多肽链的核酸编码序列，以使用载体或质粒转化的宿主细胞可表达所有存在于抗体或抗体片段内的多肽链。
或者，在本发明第一方面的抗体或抗体片段包括多于一条多肽链时，可用多于一种载体或质粒转化宿主细胞，各个载体或质粒包括编码至少一条多肽链的核酸编码序列，以使用多于一种载体或质粒转化的宿主细胞可表达所有存在于抗体或抗体片段内的多肽链。
进一步替代地，在本发明第一方面的抗体或抗体片段包括多于一条多肽链时，可用载体或质粒转化多个宿主细胞的每一个，而各个载体或质粒包括不同核酸编码序列，这些核酸编码序列各自编码形成抗体或抗体片段的不同多肽链的一个或多个成员，并且分开培养的各个不同宿主细胞表达各个多肽链。然后，可组合回收的不同多肽链而制备抗体或抗体片段。
任何适当的宿主细胞均可使用在本发明第五方面和/或第六方面。例如，宿主细胞可为原核细胞，例如大肠杆菌（Escherichia coli）细胞。宿主细胞可为真核细胞，例如动物细胞、植物细胞及真菌细胞。适当的动物细胞可包含哺乳动物细胞、禽类细胞及昆虫细胞。适当的哺乳动物细胞可包含CHO细胞及COS细胞。适当的真菌细胞可包含酵母细胞，例如啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）细胞。哺乳动物细胞可包含或不包含人类细胞，并可包含或不包含胚胎细胞。
本发明第七方面提供了制备本发明第一方面的抗体或抗体片段、抗原结合序列的方法，其包括培养如上所述的一种或多种转化的宿主细胞，并由此回收本发明第一方面的抗体或抗体片段。
本发明第八方面提供了制备本发明第一方面的抗体或抗体片段的变体的方法，该变体保留结合磷酰胆碱和/或磷酸胆碱结合物的能力，该方法包括：
（i）提供本发明第四方面的核酸，其编码亲代抗体或抗体片段、或抗体或抗体片段的多肽链形成部分；
（ii）引入一个或多个核苷酸突变（任选地，达50、40、30、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1个核苷酸突变）至核酸序列的氨基酸编码区（任选地在编码VH和/或VL区域的区域内），以使该突变的核酸编码与亲代抗体或抗体片段相比具有不同氨基酸序列的变体抗体或抗体片段；
（iii）表达由突变的核酸所编码的变体抗体或抗体片段、或变体抗体或抗体片段的多肽链形成部分；和
（iv）比较变体抗体或抗体片段与亲代抗体或抗体片段结合磷酰胆碱和/或磷酰胆碱结合物的能力。
根据本发明第八方面，核苷酸突变可随机地或以定点方式引入核酸序列的氨基酸编码区。与突变前的核酸所编码的氨基酸序列比较，此类突变可导致编码区编码下述氨基酸序列：其含有一个或多个氨基酸的添加、一个或多个氨基酸的缺失和/或一个或多个氨基酸的取代。
此类核苷酸突变可导致或不导致编码下述氨基酸序列的编码区：其含有一个或多个抗原结合区序列中的变异。此类核苷酸突变可例如导致氨基酸序列变异（即，一个或多个氨基酸的添加、一个或多个氨基酸的缺失和/或一个或多个氨基酸的取代）存在于，或只存在于形成一个或多个框架区的氨基酸序列中。另外地或替代地，此类核苷酸突变可例如导致氨基酸序列变异（即，一个或多个氨基酸的添加、一个或多个氨基酸的缺失和/或一个或多个氨基酸的取代）存在于，或只存在于形成一个或多个互补决定区的氨基酸序列中。框架区、CDR和/或VH或VL区域耐受的氨基酸变异/修饰的水平如上述本发明第一方面中所讨论，且可经必要的修正后应用于可根据本发明第八方面的方法引入的变异/修饰的水平。
另外地或替代地，此类核苷酸突变可导致或不导致编码区编码下述氨基酸序列：其在抗原结合区以外的抗体或抗体片段的一个或多个部分的序列中含有一个或多个变异，例如在CH1、CH2、CH3、CL区域或其它区域的一个或多个中。
在一种或多种核苷酸突变导致编码产物中的一个或多个氨基酸取代时，则该一个或多个取代可分别独立的为保守或非保守取代。“保守取代”是指如Gly、Ala；Val、Ile、Leu；Asp、Glu；Asn、Gln；Ser、Thr；Lys、Arg；及Phe、Tyr的组合。
例如，可引进核苷酸突变以使所编码抗体或抗体片段的序列靠近种系序列（germline sequences），以改善包括变体抗原结合区的抗体或抗体片段的稳定性，降低包括变体抗原结合区的抗体或抗体片段的免疫原性，和/或避免或降低于制造过程中可能不利的性质。
可使用本领域公知的方法制备此类核苷酸突变。
根据本发明第八方面，评估变体抗体或抗体片段结合磷酰胆碱和/或磷酰胆碱结合物的能力的步骤可进一步包括选择那些与亲代相比，具有实质上相等或增强的结合磷酰胆碱和/或磷酰胆碱结合物的能力的变体。
可用例如上述本发明第一方面中所讨论的方法评估变体和亲代结合磷酰胆碱和/或磷酰胆碱结合物的能力。
本发明第八方面的方法可任选地进一步包括回收核酸分子，该核酸分子包括编码变体抗体或抗体片段的突变核酸序列，以及任选地用包括该回收的核酸分子的组合物转化宿主细胞，以及进一步任选地使宿主细胞表达变体抗体或抗体片段，还进一步任选地从宿主细胞回收所表达的变体抗体或抗体片段，还进一步任选地将回收的变体抗体或抗体片段配制成药学上可接受的组合物。
本发明第八方面也提供通过本发明第八方面的方法得到或可得到的变体抗体或抗体片段，或通过本发明第八方面的方法得到或可得到的药学上可接受的组合物，其用于医药中。
本发明第八方面也提供通过本发明第八方面的方法得到或可得到的变体抗体或抗体片段，或通过本发明第八方面的方法得到或可得到的药学上可接受的组合物，其用于：
（i）防止、预防和/或治疗哺乳动物（包括人类）的动脉粥样硬化、动脉粥样硬化相关疾病或心血管疾病；
（ii）预防、防止和/或治疗阿尔茨海默病；和/或
（iii）免疫或预防，或防止或治疗哺乳动物（包括人类）的代谢疾病。
换言之，本发明第八方面也提供利用本发明第八方面的方法得到或可得到的变体抗体或抗体片段，或利用本发明第八方面的方法得到或可得到的药学上可接受的组合物在制备药物中的用途，该药物用于：
（i）防止、预防和/或治疗哺乳动物（包括人类）的动脉粥样硬化、动脉粥样硬化相关疾病或心血管疾病；
（ii）预防、防止和/或治疗阿尔茨海默病；和/或
（iii）免疫或预防针对，或防止或治疗哺乳动物（包括人类）的代谢疾病。
因此，本发明第八方面也提供的是方法，其用于：
（i）防止、预防和/或治疗哺乳动物（包括人类）的动脉粥样硬化、动脉粥样硬化相关疾病或心血管疾病；
（ii）免疫及预防、防止和/或治疗阿尔茨海默病；和/或
（iii）免疫或预防针对，或治疗哺乳动物（例如人类）的代谢疾病，
该方法包括将利用本发明第八方面的方法得到或可得到的变体抗体或抗体片段或利用本发明第八方面的方法得到或可得到的药学上可接受的组合物施与哺乳动物或受试者的步骤。
根据本发明第八方面有待解决和/或有待治疗的代谢疾病可例如为选自下列的症状：代谢综合征、胰岛素抗药性、葡糖耐受不良、高血糖症、I型糖尿病、II型糖尿病、高脂血症、高甘油三脂血症、高胆固醇血症、血脂异常及多囊性卵巢综合征（PCOS）。
磷酰胆碱
磷酰胆碱（PC）是指根据下述结构式的磷酰胆碱。
磷酰胆碱结合物是指连接于载体的磷酰胆碱部分，优选经由间隔物连接。磷酰胆碱部分可共价地或非共价地连接于载体。优选地，磷酰胆碱部分经由磷酸基连接于载体。
载体可例如为蛋白质、碳水化合物、聚合物、乳胶颗粒或胶体金属。
磷酰胆碱结合物可为例如蛋白质-PC结合物，例如人类血清白蛋白（HSA）-PC结合物、运铁蛋白–PC结合物、钥孔血蓝蛋白（keyhole limpet hemocyanin，KLH）-PC结合物或牛血清白蛋白（BSA）-PC结合物。
在PC结合物包括经由间隔物连接至载体的PC时，可使用任何合适的间隔物。间隔物的非限制性实例包含耦合剂（典型地，双功能性化合物），例如二羧酸类，如丁二酸及戊二酸，对应的二醛、二胺，例如1,6-二胺己烷，双取代酚类，例如对胺基酚、对重氮酚、对苯二胺、对苯醌等。
心血管疾病
术语心血管疾病包含但不限于动脉粥样硬化、急性冠状动脉综合征、急性心肌梗塞、心肌梗塞（心力衰竭）、稳定及不稳定型心绞痛、微动脉瘤（aneurysms）、冠状动脉疾病（CAD）、缺血性心脏疾病、缺血性心肌（ischemic myocardium）、心因性或突发心因性死亡、心肌病、充血性心力衰竭（coggestive heart failure）、心力衰竭、狭窄、周边动脉疾病（PAD）、间歇性跛行（intermittent claudication）、危急性肢体缺血症状及中风。
使用与磷酰胆碱及磷酰胆碱结合物有反应性的抗体治疗或防止心血管疾病已讨论于，例如，WO2005/100405及US2007-0286868，两者的内容均通过引用并入本文。
阿尔茨海默病
依据本发明，可使用第一方面的抗体或抗体片段来治疗或防止有此需要或处于其风险中的个体的阿尔茨海默病。
WO2010/003602及美国专利申请案第61/078677号公开了使用与磷酰胆碱及磷酰胆碱结合物有反应性的抗体治疗或防止阿尔茨海默病，两者的内容均通过引用并入本文，作为可使用第一方面的抗体或抗体片段治疗或防止阿尔茨海默病的方式的进一步公开内容。
代谢疾病
术语代谢疾病包含但不限于代谢综合征X、胰岛素抗药性（IRS）、葡糖耐受不良、高血糖症、I型糖尿病、II型糖尿病、高脂血症、高甘油三脂血症、高胆固醇血症、血脂异常、多囊性卵巢症（PCOS）及相关疾病。
WO2012/010291中进一步讨论了可用与磷酰胆碱及磷酰胆碱结合物有反应性的抗体治疗的代谢疾病，其内容通过引用并入本文，作为可使用第一方面的抗体或抗体片段治疗或防止代谢疾病的方式的进一步公开内容。
氨基酸序列同一性
两条氨基酸序列间的百分比同一性的测定如下。首先，使用BLAST2Sequences（Bl2seq）程序将一条氨基酸序列与例如SEQ ID NO：1比较，BLAST2Sequences（Bl2seq）程序来自含有BLASTN2.0.14版本及BLASTP2.0.14版本的BLASTZ单机版本。此BLASTZ单机版本可从美国政府的国家生物技术信息中心（National Centre for BiotechnologyInformation）网站ncbi.nlm.nih.gov获得。可在BLASTZ所附的说明文档中找到如何使用Bl2seq程序的说明。Bl2seq使用BLASTP算法执行两条氨基酸序列间的比较。为了比较两条氨基酸序列，Bl2seq的选项设定如下：-i设定到含有待比较的第一个氨基酸序列（如，C：\seq1.txt）的文件；-j设定到含有待比较的第二个氨基酸序列（如，C：\seq2.txt）的文件；-p设定到blastp；-o设定到任何所需的文件名（如，C:\output.txt）；以及所有其它选项均保留其默认值。例如，可使用以下指令产生含有两条氨基酸序列间比较的输出文件：C:\Bl2seq-i c:\seq1.txt-j c:\seq2.txt-p blastp-o c:\output.txt。如果两条比较的序列分享同源性，则该指定的输出文件呈现那些同源性区域为比对（aligned）序列的。如果两条比较的序列不分享同源性，则该指定的输出文件不会呈现比对序列。一旦比对，则通过计算两条序列中均存在的相同核苷酸或氨基酸残基的位置数目来测定匹配的数目。
同一性百分比通过将相配的数目除以鉴定的序列中所列出的序列长度，随后将所得值乘以100而测得。例如，如果一条序列与SEQ ID NO：A列出的序列（SEQ ID NO：A列出的序列长度为10）比较且匹配的数目为9，则该序列与SEQ ID NO：A列出的序列具有90%（即，9÷10*100=90）的百分比同一性。
抗体
本发明说明书中所称的术语“抗体或抗体片段”包含完整的抗体及任何称为“抗原结合区”的抗原结合片段或其单链。
“抗体”可指包括经二硫键互连的至少两个重（H）链及两个轻（L）链或其抗原结合部分的蛋白。每条重链由重链可变区域（本文简称为VH）及重链恒定区域所组成。重链恒定区域由3个区域CH1、CH2及CH3组成。每条轻链由轻链可变区域（本文简称为VL）及轻链恒定区域所组成。轻链恒定区域由1个区域CL所组成。
VH及VL区域可再细分为称为互补决定区（CDR）的高变异区，在其间散布着更保守的区域（称为框架区（FR））。每个VH典型地包括3个CDR及4个FR，其自氨末端至羧末端以下列次序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。同样地，每个VL一般包括3个CDR及4个FR，其自氨末端至羧末端以下列次序排列：FR5、CDR4、FR6、CDR5、FR7、CDR6、FR8。重链及轻链的可变区域含有与抗原互相作用的结合区域。抗体的恒定区域可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，其包含多种免疫系统细胞（如，效应细胞）及经典补体系统的第一组分（C1q）。
本文中使用的术语“抗原结合区”是指抗体的一个或多个保留特异结合抗原的能力的片段。已显示全长抗体的片段可执行抗体的抗原结合功能。术语抗体的“抗原结合区”所涵盖的结合片段的实例包含：
（i）Fab片段，其是由VL、VH、CL及CH1区域构成的单价片段；
（ii）F（ab’）2片段，其是包括由二硫键于铰链区（hingeregion）连接的两个Fab片段的二价片段；
（iii）Fab’片段，其实质上为带有部分铰链区的Fab；
（iv）由VH及CH1区域构成的Fd片段；
（v）由抗体单臂的VL及VH区域构成的Fv片段；
（vi）由VH区域构成的dAb片段；
（vii）分离的互补决定区（CDR）；及
（viii）纳米抗体（nanobody），其是含有单一可变区域及2个恒定区域的重链可变区。
进一步地，虽然Fv片段的两个区域VL及VH是由独立的基因编码，但是它们可使用重组方法并利用合成连接子进行连结，所述连接子可将两者制备为单条蛋白质链，其中VL及VH区域配对而形成单价分子（称为单链Fv（scFv））。此类单链抗体也为术语抗体的“抗原结合部分”所涵盖。
双特异抗体由两个多肽组成，每条多肽包括以肽连接子连接重链可变（VH）区域与同一多肽链（VH-VL）上的轻链可变（VL）区域。这些抗体片段通过使用本领域技术人员所知的常见技术而得到，且筛选以与完整抗体相同方式起作用的片段。
本文中使用的“分离抗体”指实质上无其它具有不同抗原特异性的抗体的抗体（如，特异性结合磷酰胆碱的分离抗体实质上无特异性结合磷酰胆碱以外的抗原的抗体）。此外，分离抗体可实质上无其它细胞物质和/或化学物质。
本文中使用的术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指单一分子组成的抗体分子制备物。单克隆抗体组成显示针对特定表位的单一结合特异性及亲合性。
术语“人源化抗体”指其中衍生自另一哺乳动物物种（例如小鼠）的种系的CDR序列嫁接至人类框架区序列的抗体。可在人类框架区序列中制备另外的框架区修饰。
术语“嵌合抗体”指其中可变区域序列衍生自一个物种而恒定区域序列衍生自另一物种的抗体，例如其中可变区域序列衍生自小鼠抗体而恒定区域序列衍生自人类抗体的抗体。
药物组合物
本发明的药物组合物可包括本发明的结合蛋白及药学上可接受的载体和/或赋形剂，所述药学上可接受的载体和/或赋形剂通常通过考虑预定的给药途径和标准制药实践而加以选择。该组合物可为即释-、延迟释放-或控释应用的形式。优选地，该配方为含有活性成分的每日剂量或单位、每日亚剂量或其适当部分的单位剂量。
本发明的药物组合物被或不被配制为适用于胃肠外、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、脑室内或皮下给药的形式，或它们可以经输注技术而施用。其最佳施用形式可以为无菌水溶液形式，无菌水溶液可含有其它物质，例如，足够的盐或葡萄糖以使溶液与血液或脑脊液（CSF）等渗。如有必要，该水溶液可适当地缓冲（优选为pH3至9）。无菌条件下的适当制药配方的制备可以以本领域技术人员公知的标准制药技术容易地完成。
此类配方可包含水性及非水性无菌注射溶液，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂及可使配方与预定接受者的血液或CSF等渗的溶质；及水性及非水性无菌悬浮液，其可包含悬浮剂及增稠剂。可以以单位剂量或多剂量容器提供该配方，例如密封的安瓿和小瓶，且可储存于冷冻干燥（冻干（lyophilised））条件下，而只需在使用前添加无菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶液及悬浮液可从先前公开的种类的无菌粉末、颗粒及片剂进行制备。
施用于患者（例如人类患者）的本发明的抗体或抗体片段的治疗有效量基于每日剂量水平可为每个成人0.01至1000mg的抗体或抗体片段（例如，每公斤患者体重约0.001至20mg，例如0.01至10mg/kg，例如大于0.1mg/kg及少于20、10、5、4、3或2mg/kg，例如约1mg/kg），以单次或分次剂量给药。
任意事件中的医生均会确定最适合任何个体患者的实际剂量而该剂量会因特定患者的年龄、体重及反应而变化。上述剂量为平均情况的范例。当然，存在较高或较低剂量更为有利的个别实例，这样的实例也包括在本发明范围内。
实施例
本发明包含下列实施例以进一步说明本发明的各个方面。本领域技术人员了解，实施例中所公开的技术遵从了发明人发现的代表性技术和/或组合物，其在本发明的实施中运作良好，因此可认为构成实施的优选实施方式。然而，考虑到本公开内容，本领域技术人员了解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以在公开的具体实施例中作出许多改变而仍能获得相似或类似的结果。
噬菌体展示抗体库的筛选
进行噬菌体展示选择及筛选活动以鉴定心血管疾病中逐渐暴露于oxLDL上或凋亡的内皮细胞的PC并中和PC的促炎症活性的人类抗体。
通过使用与牛血清白蛋白（BSA）结合的PC以及在不同轮次间改为与铁蛋白结合的PC来指导抗-PC抗体的选择。
利用ELISA筛选噬菌体展示选择输出结果来寻找结合PC-BSA的个体噬菌体，且击中（hits）进行DNA测序以鉴定特定抗体的确切数目；该特定抗体的全部重组转换成IgG。在进行两个不同噬菌体展示库的选择后，总计鉴定并产生41个全人IgG。这些抗体是在利用ELISA筛选总共10,660个不同的噬菌体克隆后鉴定的，其中有1,511个ELISA阳性击中。
ELISA击中定义为在固定的目标上（即，PC-BSA）具有至少比背景信号（链霉亲和素涂布的板）大3倍的信号。
在测序1,511个ELISA阳性物并将所述抗体自噬菌体上展示的Fab片段转换为完全人类IgG后，回收56个结合PC的不同抗体序列，其中26个来自第一个噬菌粒（phagemid）文库且30个来自第二个噬菌体文库。
IgG重构（reformatting）、表达及纯化
此处公开了从噬菌体上展示的Fab重构为全长IgG后回收56个抗体中的40个的结果。
制备用于每个IgG的DNA并转染至人类肾脏293T细胞，以在10天培养基收获后瞬时产生IgG。使用蛋白质A Sepharose（MabSelect）纯化用于体外研究的IgG并将缓冲剂替换成PBS。
以蛋白质A Sepharose纯化预定用于体内试验的IgG，随后进行经梯度洗脱（gradient elution）的阳离子交换（Poros HS）。预定用于体内试验的IgG抗体的缓冲剂替换为抗体配方缓冲液（0.1M柠檬酸盐-磷酸盐、50mM NaCl、0.01%Tween-80、2%海藻糖，pH6.0）。以纯化样品在280nm的吸光度（1mg/mL=1.4O.D.）测定抗体浓度。
体外试验
40个IgG在一连串的体外试验中进行测试以鉴定具有所需性质的抗体。表1总结了筛选全人IgG抗-磷酰胆碱抗体的结合性质。
表1的第二列（A列）显示通过只使用添加至固定在96孔板表面的PC-BSA的15.6ng/mLIgG而得到的ELISA信号。ELISA信号>1的抗体预期为具有较高亲合力的抗体。
表1第三列（B列）显示当将抗体注射于共价固定于生物传感芯片上的胺基苯基磷酰胆碱并使用Biacore3000仪器经表面等离子体共振检测结合时得到的信号。Biacore信号越高，观察到的结合越多。
表1第四列（C列）显示通过测验结合共价固定的氨基酚而测定抗体对磷酰胆碱的特异性的测验结果，氨基酚为用于共价偶联磷酰胆碱至BSA或生物传感芯片的连接子。一些抗体结合连接子分子与结合氨基苯基磷酰胆碱一样好或更好。这些抗体未必为具有有效治疗性的抗-磷酰胆碱抗体。
表1第五列（D列）总结了抗体抑制巨噬细胞摄取oxLDL的能力的试验结果，巨噬细胞摄取oxLDL为心血管炎症的早期病变且导致泡沫细胞的形成。通过使用荧光修饰的oxLDL、在80μg/mL受测抗体存在或不存在下经流式细胞术监测巨噬细胞的摄取。在每个实验中，使用100μg/mL亲合纯化的IgM抗-PC多克隆抗体作为阳性对照。将受测单克隆抗体存在下摄取的oxLDL的荧光监测量除以多克隆抗体存在下观察到的荧光量，然后乘以100。因此，低于100的数值表明80μg/mL浓度的单克隆抗体在抑制oxLDL摄取上比提取自人类血清的浓度为100μg/mL的多克隆抗-PC更为有效。相似地，高于100的值表明抗体不如多克隆抗-PC有效。
观察到数个抗体在抑制摄取上与多克隆抗-PC对照相似或更好。此外，观察到数个抗体刺激巨噬细胞的oxLDL摄取，这是从先导选择（lead selection）排除这些抗体的性质。
表1最后一列（E列）显示通过将IgG添加至含有oxLDL或天然LDL之一的96孔板的孔中所得到的ELISA数据。观察到的每个受测抗体结合oxLDL的ELISA信号除以用LDL观察到的信号的比率列于表1。明显地，与LDL相比，某些抗体是oxLDL的更好的结合物。
表1、全人IgG抗-PC抗体结合性质的总结
所有列的标题：
A）利用ELISA检测的15.6ng/ml Ab与结合于BSA的PC的结合（OD）
B）利用Biacore检测的与氨基苯基PC的结合（RU）
C)利用Biacore检测的与氨基苯基连接子的结合(RU)
D)在80μg／mlAb存在下巨噬细胞的百分比oxLDL摄取(a)
E)利用ELISA检测的与oxLDL对与LDL的结合(oxLDL信号／LDL信号)(b)
样品ID A B C D E
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样品ID A B C D E
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M0102-E11 0.02 1.6 -1.3 83 nd
M0108-H03 nd 532.7 4.5 nd 1.1
M0126-A04 0.03 34.2 -8 nd 2.8
M0126-F10 nd 32.9 -8.3 nd nd
M0126-H08 0.03 114.3 566.1 98 nd
M0127-A09 0.03 18.2 -8.7 160 1.6
M0127-B07 0.05 16.3 .7 67 nd
M0127-E06 nd 21.9 .4.2 nd nd
M0127-E07 nd 15.4 .6.2 nd 1.8
M0127-F01 0.02 9.6 3.6 77 nd
X0009-A01 0.23 198.1 2 95 1.5
X0009-C01 1.25 1456A 404.2 49.5 1
a)巨噬细胞的OxLDL摄取。研究了衍生白人类THP-l单核细胞(ATCC，美国)的巨噬细胞中Dil-标记(1，1’-双十八烷基-3,3,3’，3’-四甲基吲哚羰花青高氯酸盐)且Cu-氧化的LDL的摄取(oxLDL，IntracelCorp，美国)。通过用RPMI及10％FCS中的100nM PMA(Sigma-Aldrich)孵育24h而引发分化，之后置换培养基并让细胞再留置48小时。然后将细胞与所述抗体于37℃培养50至60分钟。之后，添加20μg/ml oxLDL并继续孵育5小时。孵育期终末时，用冰冷的PBS／0.2％BSA洗涤细胞两次并用PBS洗涤一次。在含2％PFA的PBS中收获细胞。使用具备Cell Quest软件的FACS Calibur取得数据并分析。每个样品最少分析10,000个细胞。
b)OxLDL ELISA。将hLDL(Kalen Biomedical#770200-4)、oxLDL(KalenBiomedical#770252-7)(未显示此数据)以10μg／ml的浓度及100μl／孔的体积于4℃过夜涂布于ELISA板上(Immulon 2HB)。室温下以l％BSA溶液(300μl／孔)封闭板两个小时。洗涤后，将板与所述抗体(100μl／孔；25至lOOnM)于室温孵育l小时。将偶联AP的山羊抗人二抗(ThermoScientific#31316)以l：5000稀释后、以100μl／孔添加至洗涤后的孔板中并于室温孵育l小时。加入检测剂(ThermoScientific#37621)(100μl／孔)并立即于温度30℃及405nm以动态模式(kinetic mode)读板。以ODoxLDL／ODLDL显示结果。
利用SPR分析抗-PC IgG与PC的亲合力
通过使用Biacore表面等离子体共振(SPR)生物传感器筛选结合PC的IgG。氨基苯基磷酰胆碱(Biosearch Technologies)通过游离氨基偶联至CM5芯片的一个流动池(flowcell)，使密度为120RU。将氨基酚连接子偶联至相同CM5芯片的另一个流动池，使密度为约120RU。也将PC-KLH及PC-BSA偶联至CM5芯片的不同流动池。
在不同情况下使用具有固定的PC的这些表面，以100nM及50μL/min注射抗体而得到结合传感图（sensorgrams）。通过以50μL/min使不同浓度的抗体流过表面而探讨了X9-C01的亲合力。抗体对该固定的抗原表现出快速连接速率（fast on rate）及快速解离速率（fast off rate），其妨碍我们从动态传感图获得可信赖的kon及koff估值。
接近注射结束时所观察到的每个抗体浓度的信号对抗体浓度绘图并将该数据拟合至标准双曲线平衡结合方程式（图1）。图1，X9-C01的两个受测的制备物以约300nM的表观Kd值相似地结合表面。于此表面观察到的抗体的表观Kd值可以或不可以代表在更生理性底物上观察到的亲合力。
纯化的抗-PC IgG的ELISA筛选
也通过使用PC-BSA的ELISA筛选了结合PC的纯化的IgG。拟合此数据以提供估算的EC50值（图2）。
抑制oxLDL引发的MCP-1自单核细胞的释放
测试数种抗体阻断响应oxLDL刺激而自单核细胞释放趋化因子MCP-1的能力。如表2所示，X9-C01对阻断oxLDL引发的MCP-1释放非常有效。此抗体以nM范围内的IC50强力抑制MCP-1的释放。
MCP-1是强力的促炎性趋化因子，其促进动脉粥样硬化病变部位的白细胞流入（Reape和Groot.1999）。作为阴性对照的对照IgG抗链霉亲和素A2未显示抑制oxLDL引发的MCP-1自单核细胞的释放（未显示数据）。
表2抗-PC抑制oxLDL引发的MCP-1自人类单核细胞的分泌
X9-C01的IC50
供体1 2.6±0.83nM
供体2 1.6±1.0nM
自人类血液分离单核细胞并在存在或缺少10pM至40nM抗-PC IgG的情况下以2μg/mL铜氧化的oxLDL刺激单核细胞。通过使用市售MCP-1特异性ELISA试剂盒定量细胞培养基中的MCP-1水平。
体内试验
此处，我们报道了对抗体M4-G2、M73-G03及X9-C01的体内冠状动脉炎症的进一步测验，其基于有利的体外结合特性及体外试验的功能性的组合而选择用于进一步测验。
此小鼠模式测量进入内皮下组织（即，中膜（media））的炎症细胞流入，该炎症细胞流入是对通过置放限制性套管于暴露的股动脉周围而引发的血管损伤的反应（图3）。从图3明显看出X9-C01减少白血球流入内皮下层。相反地，尽管其在体外结合特性及体外试验的功能性中是有利的，M4-G2或M73-G03均未显示比对照抗体（称为“HuIgG1a-A2”的抗链霉亲和素A2IgG）有任何显著的降低。
发明人并未预期到且感到惊讶的是在此分析中与M4-G2及M73-G03比较，X9-C01的非常独特的效用。这证明体外阳性数据并不能预期抗-PC抗体的体内效用。
因此，以小鼠血管再狭窄模式测验X9-C01，其中通过在股动脉周围放置套管而再次引发伤害，但使试验进行14天而不是3天。然后利用组织化学分析狭窄量，该狭窄量为观察到的受影响动脉的血管中层的增厚（图4）。从图4明显看出X9-C01显著抑制套管引发的血管损伤后的血管壁增厚。这进一步证明X9-C01在体内是高效的。
种系及稳定性突变体的构建
X9-C01的氨基酸序列分析鉴定了氨基酸取代，以降低可能的免疫原性并避免于抗体表达及纯化期间可能发生的敏感的氨基酸修饰。
下列表格显示了通过使用Kabat数据库比对的X9-C01抗体的氨基酸序列和其最紧密相关的中抗体序列。表中也强调的是抗体中所制备的使其更接近种系的氨基酸取代，除了移除可能的脱酰胺作用位置和甲硫氨酸的突变体外，所有这些均可能引起可制造性的关注（所谓”稳定性突变株”）。
X9-C01的突变体
X19-E01突变体的序列与野生型X9-C01相同，只是在HV-CDR3中具有M到L的稳定性突变。
除了在HV-CDR3中的M到L的稳定性突变，X19-E03的序列相对于VH3-23、JH4重链及VL1-1g、JL2轻链种系序列进行了种系化。
表3X9-C01重链序列的优化
可降低可能的制造问题的残基突变于其下方划线。CDR区则
表4X9-C01轻链序列的优化
种系化的序列突变以粗体字显示。CDR区则
为避免疑问，在本申请中提出的序列间如有任何未注意的不一致的情况时，表3及4中提供的VH及VL区域的序列及各种CDR序列是最终的序列。
X9-C01突变体的PC结合
利用ELISA评估了构建的X9-C01突变体的PC结合（图5）。在X9-C01中用Hv-CDR3甲硫氨酸替换亮氨酸并未显著影响PC结合（图5中比较X9-C01与X19-E01）。包括所有的轻链种系取代都减少了亲合力（图5中比较X9-C01和X19-E03）。
参考文献
下列参考文献，以其提供补充本文所列内容的示例性方法或其它细节的程度，特意地通过引用并入本文：
美国临时申请61/078,677
WO2010/003602
WO2012/010291
Dupont et al.,Thromb Res，124:6-13，2009。
Frostegard,J.，Clin Immunol，134，47-54，2010。
GenBank:J00253.1。
Gora et al.,FASEB J，24（9）:3284-97，2010
Itabe and Ueda，J Atheroscler Thromb，14:1-11，2007。
Libby et al.,Curr Opin Lipidol，7:330-335，1996。
Reape and Groot，Atherosclerosis，147:213-225，1999。
Shaw et al.,Arterioscler Thromb Vasc Biol，21:1333-1339；2001。
Shaw et al.,J Clin Invest，105，1731-1740，2000。
Tabas，Nat Rev Immunol，10:36-46，2010。

Claims (26)

1.一种能够结合磷酰胆碱和/或磷酰胆碱结合物的抗体或抗体片段，其中抗体或抗体片段包括重链可变(VH)区域和轻链可变(VL)区域，且其中：
(a)VH区域由氨基酸序列组成，该氨基酸序列包含3个选自下列的互补决定区(CDR)：
CDR1序列，其由SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列组成；
CDR2序列，其由SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列组成；和
CDR3序列，其由与SEQ ID NO：9或10的序列具有至少88％序列同一性的氨基酸序列组成；和
(b)VL区域由氨基酸序列组成，该氨基酸序列包含3个选自下列的CDR：
CDR4序列，其由SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列组成；
CDR5序列，其由SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列组成；
CDR6序列，其由SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列组成。
2.如权利要求1所述的抗体或抗体片段，其中VH区域和VL区域以线性多肽序列存在。
3.如权利要求1所述的抗体或抗体片段，其中VH区域和VL区域每一个均以独立的多肽序列存在。
4.如权利要求3所述的抗体或抗体片段，其中独立的多肽序列直接或间接结合在一起。
5.如权利要求3所述的抗体或抗体片段，其中独立的多肽序列通过介于独立的多肽序列间的一个或多个二硫键直接或间接结合在一起。
6.如权利要求1所述的抗体或抗体片段，其中抗体为单克隆抗体。
7.如权利要求1所述的抗体或抗体片段，其中抗体片段为Fv、scFv、Fab、F(ab’)2、Fab’、Fd、dAb或scFv-Fc片段、纳米抗体及双特异抗体，或任何稳定的此类片段。
8.如权利要求7所述的抗体或抗体片段，其中稳定的此类片段为利用聚乙二醇化稳定的此类片段。
9.如权利要求1所述的抗体或抗体片段，其为人类单克隆抗体或抗体片段，或人源化单克隆抗体或抗体片段。
10.如权利要求1所述的抗体或抗体片段，其能够结合磷酰胆碱结合物。
11.如权利要求10所述的抗体或抗体片段，其中磷酰胆碱结合物为任选地经由间隔子连接至载体的磷酰胆碱部分。
12.如权利要求11所述的抗体或抗体片段，其中抗体或抗体片段特异性地结合磷酰胆碱结合物中的磷酰胆碱部分。
13.一种药物组合物，其包括上述权利要求1-12任一项所述的抗体或抗体片段以及药学上可接受的载体或赋形剂或基本上由上述权利要求1-12任一项所述的抗体或抗体片段以及药学上可接受的载体或赋形剂组成，任选地，其中存在于组合物中的仅有的抗体或抗体片段为上述权利要求1-12任一项所述的抗体或抗体片段。
14.如权利要求1至12任一项所述的抗体或抗体片段或如权利要求13所述的药物组合物在制备用于医药中的药物中的用途。
15.如权利要求1至12任一项所述的抗体或抗体片段或如权利要求13所述的药物组合物在制备用于防止、预防和/或治疗哺乳动物包括人的动脉粥样硬化、动脉粥样硬化相关疾病或缺血性心血管疾病的药物中的用途。
16.如权利要求1至12任一项所述的抗体或抗体片段或如权利要求13所述的药物组合物在制备用于预防、防止和/或治疗阿尔茨海默病的药物中的用途。
17.如权利要求1至12任一项所述的抗体或抗体片段或如权利要求13所述的药物组合物在制备用于免疫或预防，或防止或治疗哺乳动物包括人的代谢疾病的药物中的用途。
18.如权利要求17所述的用途，其中代谢疾病选自下列的症状：代谢综合征、胰岛素抗药性、葡糖耐受不良、高血糖症、I型糖尿病、II型糖尿病、血脂异常及多囊性卵巢综合征(PCOS)。
19.如权利要求18所述的用途，其中血脂异常选自高脂血症、高甘油三脂血症或高胆固醇血症。
20.一种编码权利要求1至12任一项所述的抗体或抗体片段的核酸序列。
21.一种包括权利要求20所述的核酸序列的载体或质粒。
22.一种包括权利要求20所述的核酸序列和/或权利要求21所述的载体或质粒的宿主细胞。
23.如权利要求22所述的宿主细胞，其中细胞为原核细胞，或真核细胞。
24.如权利要求23所述的宿主细胞，其中原核细胞为大肠杆菌(Escherichia coli)细胞，真核细胞为动物、植物或真菌细胞。
25.如权利要求22-24任一项所述的宿主细胞，其表达如权利要求20所述的核酸序列，并借此生产如权利要求1至12任一项所述的抗体或抗体片段。
26.一种生产如权利要求1至12任一项所述的抗体或抗体片段的方法，其包括培养如权利要求25所述的宿主细胞，并从宿主细胞回收如权利要求1至12任一项所述的抗体或抗体片段。
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2843960C (en) * 2011-08-09 2020-09-15 Athera Biotechnologies Ab Antibodies binding to phosphorylcholine (pc) and/or pc conjugates
LT2742068T (lt) 2011-08-09 2019-07-10 Athera Biotechnologies Ab Nauji antikūnai prieš fosforilcholiną
WO2014131034A2 (en) * 2013-02-25 2014-08-28 The Regents Of The University Of California Antibodies to oxidized phospholipids
MX2017009254A (es) 2015-01-16 2017-10-12 Juno Therapeutics Inc Anticuerpos y receptores de antigeno quimerico especificos para ror1.
US10968275B2 (en) 2016-02-02 2021-04-06 Fred Hutchinson Cancer Research Center Anti-ROR1 antibodies and uses thereof

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1968965A (zh) * 2004-04-15 2007-05-23 阿瑟拉生物技术公司 磷酸胆碱偶联物和相应抗体
CN102124342A (zh) * 2008-07-07 2011-07-13 阿瑟拉生物技术公司 阿尔茨海默病新的治疗和诊断方法

Family Cites Families (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2402664A1 (fr) 1977-09-07 1979-04-06 Agronomique Inst Nat Rech Produits de couplage phosphorylcholine, composes amines procede d'obtention et applications
US5955584A (en) 1986-03-31 1999-09-21 Charter Ventures Atherosclerotic plaque specific antigens, antibodies thereto, and uses thereof
ATE120233T1 (de) 1986-08-06 1995-04-15 Scripps Clinic Res Monoklonale antikörper, b-spezifisch für apolipoprotein, die von zwei hybridomen erzeugt werden.
JPH02188532A (ja) 1989-01-17 1990-07-24 Otsuka Pharmaceut Co Ltd リポソームワクチン
AU5522390A (en) 1989-04-19 1990-11-16 United States of America, as represented by the Secretary, U.S. Department of Commerce, The Process for removing c-reactive protein and anti-phosphorylcholine antibodies from biological fluids
JP3283041B2 (ja) 1990-07-13 2002-05-20 学校法人藤田学園 人工抗体
JP3183665B2 (ja) 1990-12-10 2001-07-09 エントルメド インコーポレーテッド コレステロール過剰血症およびアテローム性動脈硬化を防止するためのコレステロールに体するワクチン
JPH07504817A (ja) 1992-03-03 1995-06-01 ザ ロックフェラー ユニヴァーシティ Ｂ２９（Ｉｇ‐βまたはＩｇ−γ）を含むレセプタ複合体およびその利用
WO1994014454A1 (en) 1992-12-29 1994-07-07 Entremed, Inc. Vaccines against sterols
WO1994018955A1 (en) 1993-02-22 1994-09-01 Alza Corporation Compositions for oral delivery of active agents
US5455032A (en) 1993-07-29 1995-10-03 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Use of phosphocholine hapten conjugates in vaccines
WO1998021581A1 (en) 1996-11-08 1998-05-22 The Regents Of The University Of California Methods and reagents for non-invasive imaging of atherosclerotic plaque
US6375925B1 (en) 1996-11-08 2002-04-23 The Regents Of The University Of California Methods and reagents for non-invasive imaging of atherosclerotic plaque
US6225070B1 (en) 1997-08-07 2001-05-01 The Regents Of The University Of California Antibodies to oxidation-specific epitopes on lipoprotein and methods for their use in detecting, monitoring and inhibiting the growth of atheroma
US20040185039A1 (en) 2002-08-30 2004-09-23 Heinz Kohler Therapeutic applications of noncovalent dimerizing antibodies
US6300308B1 (en) 1997-12-31 2001-10-09 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for inducing autoimmunity in the treatment of cancers
SE9802402D0 (sv) 1998-07-03 1998-07-03 Karolinska Innovations Ab Method of diagnosing cardiovascular disease and early atherosclerosis
DK1095271T3 (da) 1998-07-03 2003-12-15 Athera Biotechnologies Ab Fremgangsmåde til diagnose af hjertekar-sygdomme og tidlig aterosklerose
AU773370B2 (en) 1999-10-26 2004-05-20 Regents Of The University Of California, The Reagents and methods for diagnosing, imaging and treating atherosclerotic disease
SE0000855D0 (sv) 2000-03-15 2000-03-15 Karolinska Innovations Ab Antigenic composition useful as a vaccine against atherosclerosis
AU2001259730A1 (en) 2000-05-12 2001-11-26 The Regents Of The University Of California Standardized oxidized ldl assay
NZ522700A (en) * 2000-06-16 2006-02-24 Human Genome Sciences Inc Antibodies that immunospecifically bind to blys
DE10041515A1 (de) 2000-08-24 2002-03-14 Gerold Schuler Verfahren zur Herstellung gebrauchsfertiger, Antigen-beladener oder -unbeladener, kryokonservierter reifer dendritischer Zellen
US6838452B2 (en) 2000-11-24 2005-01-04 Vascular Biogenics Ltd. Methods employing and compositions containing defined oxidized phospholipids for prevention and treatment of atherosclerosis
SE0103754L (sv) 2001-04-05 2002-10-06 Forskarpatent I Syd Ab Peptider från apolipoprotein B, användning därav immunisering, diagnosmetod eller terapeutisk behandling av ischemiska kardiovaskulära sjukdomar, samt farmaceutisk komposition och vaccin innehållande sådan peptid
US20070122419A1 (en) 2003-04-11 2007-05-31 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for treating atherosclerosis
CA2575791A1 (en) * 2004-08-03 2006-02-16 Dyax Corp. Hk1-binding proteins
ATE462802T1 (de) 2004-09-08 2010-04-15 Eisai R&D Man Co Ltd Verfahren zur bildung eines signalsondenpolymers
EP1868651A4 (en) 2005-04-12 2010-10-06 Univ Duke METHOD FOR INDUCING ANTIBODIES THAT NEUTRALIZE THE HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS
WO2007076200A2 (en) 2005-11-28 2007-07-05 Medimmune, Inc. Antagonists of hmgb1 and/or rage and methods of use thereof
US20090258005A1 (en) 2007-05-29 2009-10-15 Trubion Pharmaceuticals Inc. Therapeutic compositions and methods
JP5122908B2 (ja) 2007-10-17 2013-01-16 日泉化学株式会社 自動車の内装用部材の取り付け構造
WO2012010291A1 (en) 2010-07-21 2012-01-26 Athera Biotechnologies Ab Diagnostic and therapeutic methods and compositions for metabolic disease
KR102107695B1 (ko) 2011-01-06 2020-05-07 다이액스 코포레이션 혈장 칼리크레인 결합 단백질
LT2742068T (lt) 2011-08-09 2019-07-10 Athera Biotechnologies Ab Nauji antikūnai prieš fosforilcholiną
CA2843960C (en) * 2011-08-09 2020-09-15 Athera Biotechnologies Ab Antibodies binding to phosphorylcholine (pc) and/or pc conjugates

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1968965A (zh) * 2004-04-15 2007-05-23 阿瑟拉生物技术公司 磷酸胆碱偶联物和相应抗体
CN102124342A (zh) * 2008-07-07 2011-07-13 阿瑟拉生物技术公司 阿尔茨海默病新的治疗和诊断方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Comparison of the F, Fragments of Different Phosphorylcholine Binding Antibodies Expressed in Escherichiu coli;ANDREAS PLUCKTHUN et al;《ANNALS NEW YORK ACADEMY OF SCIENCES》;19911231;第115-124页 *
Natural antibodies against phosphorylcholine in cardiovascular disease;Ulf de Faire et al.;《Ann N Y Acad Sci》;20090901;第1173卷;292-300 *

Also Published As

Publication number Publication date
US20180086847A1 (en) 2018-03-29
US9796786B2 (en) 2017-10-24
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HK1199409A1 (zh) 2015-07-03
EP2741770A4 (en) 2014-12-31
AU2012294431A1 (en) 2014-02-20
AU2012294431B2 (en) 2017-03-30
US20140193413A1 (en) 2014-07-10
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CA2843960C (en) 2020-09-15
JP6277126B2 (ja) 2018-02-07
WO2013022968A1 (en) 2013-02-14
US20210230310A1 (en) 2021-07-29
CA2843960A1 (en) 2013-02-14
JP2014529398A (ja) 2014-11-13

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