CN103880900A - 一种黄酮苷化合物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了属于天然化合物提取和利用技术领域的一种黄酮苷化合物及其制备方法和用途。该化合物为棉花皮素-5-O-β-D-(6”-E-咖啡酰基)-葡萄糖苷。采用70％乙醇热回流提取，抽滤，半制备高效液相色谱纯化制成。本发明的化合物，具有强抗氧化活性及抑制前脂肪细胞3T3-L1增殖作用，有延缓衰老、提高机体免疫力、预防癌症等功效，还可用于棉、麻、丝等织物的染色。

Description

一种黄酮苷化合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于天然化合物提取和利用技术领域，具体涉及一种黄酮苷化合物及其制备方法和用途。

背景技术

紫茎泽兰(Eupatorium adenophorum Spreng)，系菊科泽兰属植物，其茎及叶柄呈紫色，故名紫茎泽兰，别名腺泽兰，又名解放草、黑草、臭草、飞机草、霸王草、烂蹄草、败马草等。紫茎泽兰为我国入侵恶性杂草，在国家环保总局公布的首批入侵我国的16种外来物种名单中，紫茎泽兰排名第一。紫茎泽兰具有惊人的繁殖能力，排斥其它植物的生长。据报道，紫茎泽兰入侵果园、桑园、甘蔗园、香蕉林等经济作物生长地后，导致土壤肥力严重下降，土地严重退化，而天然草地被紫茎泽兰入侵三年后牧草基本消失，失去放牧的价值。

鉴于紫茎泽兰已成为我国目前危害最为严重的外来入侵物种之一，全国各地在加强控制紫茎泽兰蔓延措施的同时，也在加强对其综合利用研究，希望能将其变害为宝，将防治利用结合起来从而达到综合控制的目的。其中对紫茎泽兰的化学成分研究，对其进一步开发利用十分重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从菊科植物紫茎泽兰得到的新化合物棉花皮素-5-O-β-D-(6”-E-咖啡酰基)-葡萄糖苷及其药学上可接受的盐。

本发明的目的还在于提供上述化合物的提取方法。

本发明的目的还在于提供上述化合物作为抗氧化剂及在制备用于延缓衰老、提高机体免疫力、预防癌症的药物或保健品中的应用。

本发明的目的还在于提供上述化合物在制备用于预防和治疗肥胖症以及由肥胖引起的高血脂、高血压、糖尿病、脂肪肝、冠心病、睡眠呼吸暂停综合症的药物中的应用。

本发明的目的还在于提供上述化合物作为染料方面的用途。

一种黄酮苷化合物，其为棉花皮素-5-O-β-D-(6”-E-咖啡酰基)-葡萄糖苷，其结构式如化合物I所示：

上述黄酮苷化合物与下列离子形成的加成盐：NH⁴⁺、Na⁺、K⁺、Mg²⁺、Li⁺、Ca²⁺、Sr²⁺、Ca²⁺或Zn²⁺。

上述黄酮苷化合物的制备方法，其特征在于，按照如下步骤进行：

(1)取干燥粉碎的紫茎泽兰全草，采用70％乙醇热回流提取，紫茎泽兰全草与70％乙醇的用量比为1kg／(15-25)L，提取两次，合并提取液，按1∶10-1∶20的比例浓缩放置过夜；

(2)将步骤(1)中浓缩液抽滤，其滤液经葡聚糖凝胶LH-20柱层析，洗脱溶剂采用30-50％甲醇水溶液，经TLC检测，收集黄色洗脱液部分，得化合物I粗品；

(3)将步骤(2)所得化合物I粗品经半制备高效液相色谱纯化，得到化合物1纯品，为鲜黄色粉末。

所述LH-20柱层析的柱长L＝40-100cm，柱径Φ=4-5cm。

所述半制备高效液相色谱条件为：Shimadzu LC-6A HPLC仪，大连伊利特RP-C18色谱柱(250×20mm，5μm)，流动相为25％乙腈水溶液，流速为18mL／min，检测波长为323nm，室温(25℃)，收集出峰时间tR7.5-10min的流份，将该流份真空旋转浓缩至干。

上述黄酮苷化合物及其加成盐在制备用于预防和治疗肥胖症以及由肥胖引起的高血脂、高血压、糖尿病、脂肪肝、冠心病、睡眠呼吸暂停综合症的药物中的应用。

上述黄酮苷化合物及其加成盐作为抗氧化剂及在制备用于延缓衰老、提高机体免疫力、预防癌症的药物或保健品中的应用。

上述的黄酮苷化合物及其加成盐作为染料的用途。

本发明的有益效果：本发明从紫茎泽兰提纯的黄酮苷化合物，具有强抗氧化活性及抑制前脂肪细胞3T3-L1增殖作用，提供了延缓衰老、提高机体免疫力、预防癌症等的医药或保健用途及可用于天然抗氧化剂的用途，还提供了肥胖症以及肥胖引起的的高血脂、高血压、糖尿病、脂肪肝、冠心病、睡眠呼吸暂停综合症等疾病的药物以及与上述疾病有关的医药和保健品用用途，还提供了可用于棉、麻、丝等织物染色的染料用途。

附图说明

图1为化合物I对3T3-L1前脂肪细胞的增殖抑制率曲线。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步说明。

实施例I化合物I提取及鉴定

取干燥粉碎的紫茎泽兰全草(含叶、茎、根等部位，100g)，采用70％乙醇热回流提取(用量为2L)，提取两次，合并提取液，按1∶15的比例浓缩放置2h，将浓缩液抽滤，其滤液经葡聚糖凝胶LH-20柱层析(柱长L=45cm，柱径Φ=4cm)，洗脱溶剂采用35％甲醇水溶液，收集黄色洗脱液部分，得化合物I粗品。将化合物I粗品经半制备高效液相色谱纯化，半制备高效液相色谱条件为：Shimadzu LC-6AHPLC仪，大连伊利特RP-C18色谱柱(250×20mm，5μm)，流动相为25％乙腈水溶液，流速为18mL／min，检测波长为323nm，室温(25℃)，收集出峰时间t_R7.5-10min的流份，将该流份真空旋转浓缩至干，得到化合物I纯品(29.6mg)。

化合物I为鲜黄色粉末，易溶于甲醇、乙醇、水、丙酮水溶液等溶剂，¹H和¹³C NMR数据参见表1，其数据归属根据1D NMR、2D NMR等。HR-ESI-MSm／z641.1217[M-H]^-(Calc.641.1143for C₃₀H₂₅O₁₆ ^-)，可以用分子式C₃₀H₂₆O₁₆表示，命名为棉花皮素-5-O-β-D-(6”-E-咖啡酰基)-葡萄糖苷。

表1 化合物1的¹H-NMR(400MHz)及¹³C-NMR(100MHz)(溶剂：甲醇-d₄)

实施例2化合物I清除DPPH自由基试验

将化合物I精确称量，依次配置成浓度为10.0、20.0、30.0、40.0、50.0、60.0μM的50％乙醇溶液，分别取1mL各浓度的化合物I的50％乙醇溶液，加入2mL0.1mM DPPH50％乙醇溶液，充分混匀，室温下避光反应30min，测其在525nm处吸光值。以1mL50％乙醇代替样品做空白。以维生素C(Vc)作为阳性对照药。用下式计算化合物对DPPH自由基清除能力：(％)=(A0-A1)／A0×100，其中A0为空白吸光值，A1为样品吸光值。计算得Vc对DPPH自由基半数清除率IC50为0.056μM，化合物I对DPPH自由基半数清除率IC50为0.012μM。DPPH自由基清除试验结果表示，与阳性对照相比，化合物I具有更强的清除自由基的作用。可用于抗衰老、提高机体免疫力以及预防癌症、食品天然抗氧化剂等的医药、保健、食品工业等用途。

实施例3化合物I对3T3-L1前脂肪细胞增殖抑制活性试验

Swiss小鼠前脂肪细胞3T3-L1按5×10⁴个／mL的密度接种到96孔培养板，在含有10％小牛血清的高糖DMEM培养基37℃、5％CO₂孵箱中培养。24h后弃去培养液，其中6孔加入含有不同浓度的化合物I的培养液(终浓度为20～100μM)，以不含有样品的高糖DMEM为空白对照，以辛伐他汀(终浓度为20～100μM)作为阳性对照，温箱孵育48h。除去培养液后，加入含有0.5mg／mL MTT的DMEM培养基孵育4h，再加入100μL的0.1g／mL SDS(含0.1mol／L HCl)溶液过夜，以完全溶解出MTT紫色结晶产物。用酶标仪在570nm处(以630nm为参考波长)测定光密度值。从图1可知，化合物I对3T3-L1前脂肪细胞有明显生长抑制作用。随着化合物I浓度的升高(20～100μM)，其抑制细胞生长的能力增强，剂量效应关系显著，细胞存活率从约100％降至10％。当化合物浓度介于60～100μM时，细胞增殖抑制率基本不变。试验结果(见图1)表明化合物I对Swiss小鼠前脂肪细胞3T3-L1有明显的增殖抑制作用，呈现显著剂量效应。

实施例4化合物I的染色试验

取化合物I30mg，用去离子水配制成0.5mg／mL的溶液，转移入染缸中，加热至50℃，加入薄棉布(按浴比1∶30)，染色时间为1小时，期间加入硫酸铝钾(终浓度为1g／L)作为媒染剂，取出被染色的棉布，进一步进行皂洗、水洗、干燥。分光光度仪测定染色前染液吸光度(A₀)和染色后残液吸光度(A₁)，通过计算得出上染率，计算公式如下：上染率(％)=(A₀-A₁)×100／A₀，计算得上染率为15％。在CIE1976标准要求的条件下，以未经染色的空白布样作为参比试样，通过全自动色差计测定染色布样的亮度差值ΔL=71.50，彩度差值Δa=+1.54，彩度差值Δb=+34.01及ΔE=11.39，染色布样目视颜色为硫磺黄。

Claims (8)

1.一种黄酮苷化合物，其特征在于，其为棉花皮素-5-O-β-D-(6”-E-咖啡酰基)-葡萄糖苷，其结构式如化合物I所示：

2.权利要求1所述黄酮苷化合物与下列离子形成的加成盐：NH⁴⁺、Na⁺、K⁺、Mg²⁺、Li⁺、Ca²⁺、Sr²⁺、Ca²⁺+或Zn²⁺。

3.权利要求1所述黄酮苷化合物的制备方法，其特征在于，按照如下步骤进行：

(1)取干燥粉碎的紫茎泽兰全草，采用70％乙醇热回流提取，紫茎泽兰全草与70％乙醇的用量比为1kg/(15-25)L，提取两次，合并提取液，按1∶10-1∶20的比例浓缩放置过夜；

(2)将步骤(1)中浓缩液抽滤，其滤液经葡聚糖凝胶LH-20柱层析，洗脱溶剂采用30-50％甲醇水溶液，经TLC检测，收集黄色洗脱液部分，得化合物I粗品；

(3)将步骤(2)所得化合物I粗品经半制备高效液相色谱纯化，得到化合物1纯品，为鲜黄色粉末。

4.根据权利要求3所述黄酮苷化合物的制备方法，其特征在于，所述LH-20柱层析的柱长L=40-100cm，柱径Φ=4-5cm。

5.根据权利要求3所述黄酮苷化合物的制备方法，其特征在于，所述半制备高效液相色谱条件为：Shimadzu LC-6A HPLC仪，大连伊利特RP-C18色谱柱，流动相为25％乙腈水溶液，流速为18mL／min，检测波长为323nm，室温条件下，收集出峰时间tR7.5-10min的流份，将该流份真空旋转浓缩至干。

6.权利要求1或2所述黄酮苷化合物及其加成盐在制备用于预防和治疗肥胖症以及由肥胖引起的高血脂、高血压、糖尿病、脂肪肝、冠心病、睡眠呼吸暂停综合症的药物中的应用。

7.权利要求1或2所述黄酮苷化合物及其加成盐作为抗氧化剂及在制备用于延缓衰老、提高机体免疫力、预防癌症的药物或保健品中的应用。

8.权利要求1或2所述的黄酮苷化合物及其加成盐作为染料的用途。