CN103869061A - 一种过滤检测技术装置及其用途 - Google Patents
一种过滤检测技术装置及其用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103869061A CN103869061A CN201210481964.3A CN201210481964A CN103869061A CN 103869061 A CN103869061 A CN 103869061A CN 201210481964 A CN201210481964 A CN 201210481964A CN 103869061 A CN103869061 A CN 103869061A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- detection
- checked
- thing
- detection technique
- filtrator
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
本发明公开了一种过滤检测技术装置及其用途,所述的过滤检测技术装置是由过滤器、待检样本、检测相和检测器组成,其中过滤器是由入口、过滤层和出口组成,过滤层内的过滤芯是由能够与待检物形成特异性结合的固相材料组成,可用于多种分析检测技术产品的开发,具有良好的适用价值和市场前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种检测技术装置及其用途。
背景技术
免疫学检测技术是应用免疫学原理设计的测定抗原、抗体、免疫细胞及化学成分等的实验手段,广泛用于来源于人体和动物体可进行疾病诊断和健康检测的样品以及用于环境、药物分析、食品和工业分析的样品。常用的有免疫浊度技术、固相酶免疫测定技术、化学发光检测技术、免疫荧光标记技术、流式细胞术、胶体金技术等。
免疫浊度技术,也称免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合,产生一定大小的复合物,形成光的折射或吸收,测定这种折射或吸收后的透射光或散射光作为计算单位,用于定量检测,但检测灵敏度低,不适合于微量检测。固相酶免疫测定技术基于抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体保持其免疫学活性,抗原或抗体的酶结合物既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应,具有灵敏度高、线性响应范围宽和易于实现自动化等显著优点。但检测反应时间长限制了其使用。免疫化学发光检测技术是一种高灵敏的微量及痕量分析技术,具有操作方便、灵敏度高、线性响应范围宽和易于实现自动化等显著优点,广泛地应用于环境、临床、药物分析、食品和工业分析中,也是基于抗原或抗体的固相分离手段及抗原或抗体的发光试剂标记技术。但检测反应时间长及对检测设备的要求高也影响其使用。免疫荧光标记技术、流式细胞术、胶体金技术也是常用的检测技术被广泛使用,但均有其相应的不足。
高灵敏度、快速、小型化、全定量、自动化是目前临床免疫检测技术产品的发展趋势,但现有的都无法同时实现上述功能。因此,开发一种能够实现既具有高灵敏度、全定量、自动化特点,同时又具有检测快速、设备可做到小型便携特点的新的检测技术,不仅使用方便、减少浪费,同时也可显著提高工作效率,在检测和分析、分离的诸多领域具有重要的实用意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有灵敏度高、全定量、检测速度快的免疫检测技术装置,特别是以过滤器作为反应载体的免疫检测技术装置。
为实现上述目的,本发明采用了如下技术方案。
一种免疫过滤检测技术装置,所述的检测技术装置是以过滤器作为检测反应的载体,由过滤器、待检样本、检测相和检测器组成,其中过滤器内的过滤芯是由能够与待检物形成特异性结合的固相材料组成。具有如下特征:1)用待检物特异性结合物如抗原或抗体,偶联标记捕获载体过滤芯,制成标记过滤芯,该步反应所述的待检物特异性结合物如抗原或抗体也称为能与待检物特异性结合的第一物质;2)标记过滤芯装载于过滤器内使用;3)检测相为能够与待检物特异性结合并能够直接或间接产生颜色或光量变化的检测物质的溶液,是由直接或间接产生颜色或光量变化的指示剂标记待检物特异性结合物如抗原或抗体而制成,该步反应所述的待检物特异性结合物也称为能与待检物特异性结合的第二物质,与第一物质具有相互配对待检物特异性反应的特性;4)用检测器检测过滤芯上特异性结合的被捕获的指示剂的颜色或光量变化进而计算待检物的含量和/或用检测器检测未被捕获而流出的指示剂的颜色或光量变化进而计算待检物的含量。待检物特异性结合物常用的有酶和抑制剂、抗原和抗体、配体和受体等。常用的过滤芯载体有凝胶颗粒、乳胶颗粒和磁微粒等,凝胶颗粒有葡聚糖凝胶系列的凝胶过滤填料和琼脂糖凝胶系列的凝胶过滤填料。
所述的过滤器内装有过滤芯的过滤结构为长大于宽的形状,其中长宽比值为2-100,优选2-50,更优选2-30,可以是圆柱状、圆锥状、方形、长方形及其组合形状等。
所述的过滤器内装有过滤芯的过滤结构为宽大于长的形状,其中宽长比值为1.1-10,优选1.1-5,更优选1.1-3,可以是圆柱状、圆锥状、方形、长方形及其组合形状等。
所述的过滤器内装有的过滤芯为抗体或抗原偶联的固相颗粒状或筛孔状物质,其体积为2立方毫米至1立方厘米,优选3立方毫米至0.3立方厘米,更优选5立方毫米至0.1立方厘米或者表述为2微升至1毫升,优选3微升至0.3毫升,更优选5微升至0.1毫升。所述的抗原或抗体为能够与待检物发生特异性结合反应的抗原或抗体。所述的固相颗粒状或筛孔状物质为多种能够与抗原或抗体偶联结合并且对其抗原或抗体的免疫学结合特性不产生明显改变的固态物质,如常用的凝胶颗粒、乳胶颗粒、磁微粒等,凝胶颗粒有葡聚糖凝胶系列的凝胶过滤填料和琼脂糖凝胶系列的凝胶过滤填料,常用的有溴化氰活化琼脂糖凝胶介质、NHS活化琼脂糖凝胶介质等。
所述的待检样本包括来源于人体和动物体可进行疾病诊断和健康检测的样品以及用于环境、药物分析、食品和工业分析的样品。来源于人体的样本检测为临床检测的主要内容,用于各种疾病的诊断、辅助诊断、预测、病情监测等。来源于动物体的样本检测也为临床检测的主要内容,用于动物相关各种疾病的诊断、辅助诊断、预测、病情监测以及食品安全检测等。
所述的检测相为能够与待检物特异性结合并能够直接或间接产生颜色或光量变化的检测物质的溶液。所述的检测物质为待检物特异性的抗原或抗体与能够直接或间接产生颜色或光量变化的指示剂形成的结合物。检测相是含有检测物质的溶液。检测物质是能够与待检物直接或间接形成特异性结合并能够对待检物进行量化分析的物质。一般检测物质为抗原或抗体与酶类物质、可直接或间接发出光的物质、可产生荧光的物质、自身带有颜色的物质的结合物。酶类物质常用的有辣根过氧化酶(HRP)、碱性磷酸酶(ALP)、葡萄糖氧化酶,β-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹果酸脱氢酶等。可直接或间接发光的物质常用的有鲁米诺及其衍生物、光泽精、洛粉碱、过氧化草酸酯类、吖啶酯类等。可产生荧光的物质有异硫氰酸荧光素(FITC)或罗达明(RB200)等、自身带有颜色的物质如胶体金类等。
所述的检测器为能够定量检测并记录由所述的检测物产生的颜色或光量变化的机械结构。常用的有酶联免疫检测器、化学发光检测器、荧光检测器、分光光度计等。
所述的检测技术包括以下步骤:
1)用能够与待检物形成特异性结合的抗原或抗体标记过滤芯;
2)用标记过滤芯制备过滤器的过滤结构;
3)待检样本经过滤器过滤,则待检物被标记过滤芯特异性捕获;
4)用清洗液清洗去除未被捕获而残留在过滤芯中的样品残留物;
5)检测相经过滤器过滤,则检测物质与被捕获的待检物特异性结合,形成过滤芯-待检物-检测物质复合物;
6)用清洗液清洗去除未被捕获而残留在过滤芯中的检测相残留物;
7)用检测器采用下列方法之一进行检测:
(1)直接采用过滤芯检测所述的指示剂的量,进而计算待检物的含量;
(2)用洗脱液洗脱并收集含有检测物质的洗脱液,用检测器检测所述的指示剂的量,进而计算待检物的含量;
(3)直接检测未被结合而流出的指示剂的量,进而计算待检物的含量。
常用的检测步骤可以是采用含有过滤芯的过滤器,用含有待检物的样品过滤,清洗,然后用待检物特异性抗原或抗体的检测物质直接过滤检测的两步法,也可以是采用含有过滤芯的过滤器,用含有待检物的样品过滤,清洗,再用含有非标记的待检物特异性抗原或抗体过滤,与待检物结合,然后用待检物特异性抗原或抗体的检测物质过滤检测的三步法或更多。
所述的检测技术在多种检测技术产品开发中的应用,包括来源于人体的样本检测为临床检测的主要内容,用于各种疾病的诊断、辅助诊断、预测、病情监测等。来源于动物体的样本检测也为临床检测的主要内容,用于动物相关的各种疾病的诊断、辅助诊断、预测、病情监测以及食品安全检测等以及用于环境、药物分析、食品和工业分析的样品。
有益效果]
1)本发明创造性地设计了一种以过滤器为反应载体的检测技术装置,提高了检测个性化的可控程度,提高了检测效率。
2)本发明过滤的反应时间较现行的检测结合反应时间明显缩短,提高了检测速度。
3)本发明在室温下就可以完成全部反应,免除了现行检测设备中需要设置的温控反应结构,简化了仪器设计,可实现小型化、便携的目的。
因此,本发明技术对改善现有免疫检测技术具有重要的意义和良好的应用前景。
附图说明
图1是本申请为长柱状过滤器的过滤检测技术装置的基本结构示意图。
图2是本申请为扁柱状过滤器的过滤检测技术装置的基本结构示意图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明进行详细的描述。
如图1、图2所示,本发明包括待检样本2、检测相3和检测器4、长柱状过滤器1或扁柱状过滤器10。
长柱状过滤器1或扁柱状过滤器10为检测反应的反应器,检测反应的主要反应过程在过滤器1或过滤器10上进行,由入口5、过滤层6和出口7组成,其中过滤层内的过滤芯是由能够与待检物形成特异性结合的用抗原或抗体偶联的标记固相材料组成。固相材料可以是堆积的固相颗粒状物质,形成了颗粒与颗粒之间的腔隙性过滤孔径,也可以是筛孔状的固相物质。
待检样本2为一装有样本的容器结构,装载包括来源于人体和动物体可进行疾病诊断和健康检测的样品以及用于环境、药物分析、食品和工业分析的样品。通过管道8与过滤器相连接。
检测相3也为一装有检测溶液的容器结构,装在有能够与待检物特异性结合并能够直接或间接产生颜色或光量变化的检测物质的溶液。通过管道9与过滤器相连接。
检测器4为一颜色或光量检测分析装置。
实施例1、本发明过滤器的制备:
实验材料:市售微型过滤器、NHS活化琼脂糖凝胶颗粒、抗人纤维蛋白原多克隆抗体、碳酸氢钠、盐酸、乙醇胺。
实验方法:取市售微型过滤器,取出滤芯。取5mg抗人纤维蛋白原多克隆抗体加0.2M碳酸氢钠溶液,pH8.3,2ml溶解。取1ml NHS活化琼脂糖凝胶颗粒,用1mM盐酸20ml,分三次抽滤清洗。将抗人纤维蛋白原多克隆抗体溶液与处理后的NHS活化琼脂糖凝胶颗粒混合,4℃,震荡反应4小时。清洗反应后的NHS活化琼脂糖凝胶颗粒,然后加入10mM乙醇胺,0.2M碳酸钠溶液,pH8.0,室温震荡4小时封闭未偶联的基团,洗干净,用制备后的NHS活化琼脂糖凝胶颗粒制作过滤芯,装入市售微型过滤器内,封闭,备用。
实施例2、本发明与现行化学发光检测技术的检测性能的比较:
实验材料:抗人纤维蛋白原多克隆抗体过滤器、辣根过氧化物酶标记抗人纤维蛋白原单克隆抗体、磁微粒、鲁米诺、对碘苯酚、过氧化脲、化学发光检测仪、人纤维蛋白原溶液。
实验方法:取已知浓度的人纤维蛋白原溶液,用PBS溶液稀释配置1ug/ml人纤维蛋白原溶液。实验将采用本发明与现行化学发光检测技术观测不同结合反应时间对发光量的影响。观察结合反应时间点1、2、4、10、20、30、45、60分钟。
现行化学发光检测技术组,每管加入抗人纤维蛋白原多克隆抗体标记的磁微粒100ul,再分别加入人纤维蛋白原溶液各100ul, 结合反应在37℃震摇温育,用磁块吸附分离磁微粒,弃上清,加入PBS 200ul清洗三次, 用磁块吸附分离磁微粒,弃上清,加入辣根过氧化物酶标记抗人纤维蛋白原单克隆抗体200ul,结合反应在37℃震摇以对应的反应时间进行温育,用磁块吸附分离磁微粒,弃上清,加入PBS 200ul清洗三次,用磁块吸附分离磁微粒,弃上清,转移磁微粒至发光杯,置化学发光检测仪,加入100ul鲁米诺、对碘苯酚和过氧化脲等配置的发光底物工作液,反应进行2分钟时,记录发光量6秒钟。
本发明组,取实施例1制作的抗人纤维蛋白原多克隆抗体过滤器,用碱性PBS稀释100ul人纤维蛋白原溶液至1ml,过滤,用碱性PBS缓冲液1ml过滤洗三次,再用碱性PBS稀释100ul辣根过氧化物酶标记抗人纤维蛋白原单克隆抗体至1ml,过滤,用碱性PBS缓冲液1ml过滤洗三次,再用pH4.5 Tris-盐酸缓冲液1ml过滤,收集滤出液,取100ul至发光杯,置化学发光检测仪,加入100ul鲁米诺、对碘苯酚和过氧化脲等配置的发光底物工作液,反应进行2分钟时,记录发光量6秒钟,乘以10作为与上述现行化学发光检测技术组可比较的总计数结果。
实验结果:现行化学发光检测技术在1、2、4、10、20、30、45、60分钟时的发光量(mV)分别为3222、5672、7968、9810、14281、20339、19827、20513,结合反应30分钟基本达到平衡,结合反应为30分钟时的全过程操作时间为89分钟。本发明的检测结果为21320,全过程操作时间仅为13分钟。
实施例3、本发明与现行化学发光检测技术检测结果的比较:
实验材料:抗人纤维蛋白原多克隆抗体过滤器、辣根过氧化物酶标记抗人纤维蛋白原单克隆抗体、磁微粒、鲁米诺、对碘苯酚、过氧化脲、化学发光检测仪、人纤维蛋白原溶液、健康人血浆。
实验方法:取已知浓度的人纤维蛋白原标准溶液,用PBS溶液稀释配置10、30、70、100、300、700ng/ml人纤维蛋白原溶液。另取健康人血浆,用PBS进行10000倍稀释。实验采用本发明与现行化学发光检测技术检测人纤维蛋白原溶液并绘制标准曲线,然后测定健康人纤维蛋白原,并用标准曲线计算纤维蛋白原浓度。取42个试管,分为本发明组和现行化学发光检测技术组。每个样品做3个平行管。
现行化学发光检测技术组,每管加入抗人纤维蛋白原多克隆抗体标记的磁微粒100ul,再分别加入人纤维蛋白原溶液或健康人血浆各100ul, 结合反应在37℃震摇温育30分钟,用磁块吸附分离磁微粒,弃上清,加入PBS 200ul清洗三次, 用磁块吸附分离磁微粒,弃上清,加入辣根过氧化物酶标记抗人纤维蛋白原单克隆抗体200ul,结合反应在37℃震摇温育30分钟,用磁块吸附分离磁微粒,弃上清,加入PBS 200ul清洗三次,用磁块吸附分离磁微粒,弃上清,转移磁微粒至发光杯,置化学发光检测仪,加入100ul鲁米诺、对碘苯酚和过氧化脲等配置的发光底物工作液,反应进行2分钟时,记录发光量6秒钟。绘制标准曲线,计算血浆纤维蛋白原含量。
本发明组,取实施例1制作的抗人纤维蛋白原多克隆抗体过滤器,用碱性PBS稀释100ul人纤维蛋白原溶液或健康人血浆各至1ml,过滤,用碱性PBS缓冲液1ml过滤洗三次,再用碱性PBS稀释100ul辣根过氧化物酶标记抗人纤维蛋白原单克隆抗体至1ml,过滤,用碱性PBS缓冲液1ml过滤洗三次,再用pH4.5 Tris-盐酸缓冲液1ml过滤,收集滤出液,取100ul至发光杯,置化学发光检测仪,加入100ul鲁米诺、对碘苯酚和过氧化脲等配置的发光底物工作液,反应进行2分钟时,记录发光量6秒钟。绘制标准曲线,计算血浆纤维蛋白原含量。
实验结果:现行化学发光检测技术测定结果2.51g/L,本发明测定结果2.58g/L,两种实验方法所得结果基本一致,但本发明的完成实验时间明显短于现行技术。
实施例4、本发明过滤芯体积对检测结果的影响:
实验材料:市售微型过滤器、NHS活化琼脂糖凝胶颗粒、抗人纤维蛋白原多克隆抗体、碳酸氢钠、盐酸、乙醇胺、人纤维蛋白原。
实验方法:采用实施例1方法制备体积为1、2、3、5、10、50、100、300、500、700、1000立方毫米的抗人纤维蛋白原多克隆抗体过滤器。用PBS溶液稀释配置1ug/ml人纤维蛋白原溶液。用碱性PBS稀释100ul人纤维蛋白原溶液至1ml,过滤,用碱性PBS缓冲液1ml过滤洗三次,再用碱性PBS稀释100ul辣根过氧化物酶标记抗人纤维蛋白原单克隆抗体至1ml,过滤,用碱性PBS缓冲液1ml过滤洗三次,再用pH4.5 Tris-盐酸缓冲液1ml过滤,收集滤出液,取100ul至发光杯,置化学发光检测仪,加入100ul鲁米诺、对碘苯酚和过氧化脲等配置的发光底物工作液,反应进行2分钟时,记录发光量6秒钟。
实验结果:所记录的体积为1、2、3、5、10、50、100、300、500、700、1000立方毫米过滤器的发光量(mV)分别为843、1597、1871、1925、1967、1983、2042、1956、1995、2035、2068,体积为3立方毫米时基本达到平衡。
实施例5、本发明与现行酶联免疫检测技术检测结果的比较:
实验材料:抗人纤维蛋白原多克隆抗体、抗人纤维蛋白原多克隆抗体过滤器、辣根过氧化物酶标记抗人纤维蛋白原单克隆抗体、邻苯二胺、酶联免疫检测仪、人纤维蛋白原溶液、健康人血浆。
实验方法:取已知浓度的人纤维蛋白原标准溶液,用PBS溶液稀释配置30、70、100、300、700、1000 ng/ml人纤维蛋白原溶液。另取健康人血浆,用PBS进行10000倍稀释。实验将采用本发明与现行酶联免疫检测技术检测人纤维蛋白原溶液并绘制标准曲线,然后测定健康人纤维蛋白原,并用标准曲线计算纤维蛋白原浓度。取42个试管,分为本发明组和现行酶联免疫检测技术组。每个样品做3个平行管。
现行酶联免疫检测技术组,采用96孔酶联板,每管加入抗人纤维蛋白原多克隆抗体100ul,4℃过夜包被,清洗三次,再分别加入人纤维蛋白原溶液或健康人血浆各100ul, 结合反应在37℃温育120分钟,清洗三次,加入辣根过氧化物酶标记抗人纤维蛋白原单克隆抗体100ul,结合反应在37℃温育60分钟,清洗三次,弃上清,加入100ul显色液(0.1M柠檬酸2.43ml,0.2M磷酸氢二钠2.57ml,邻苯二胺5mg,过氧化氢5ul),避光5分钟,加入2M硫酸终止反应。置酶联免疫检测仪上读取吸光值,绘制标准曲线,计算血浆纤维蛋白原含量。
本发明组,取实施例1制作的抗人纤维蛋白原多克隆抗体过滤器,用碱性PBS稀释100ul人纤维蛋白原溶液或健康人血浆各至1ml,过滤,用碱性PBS缓冲液1ml过滤洗三次,再用碱性PBS稀释100ul辣根过氧化物酶标记抗人纤维蛋白原单克隆抗体至1ml,过滤,用碱性PBS缓冲液1ml过滤洗三次,再用pH4.5 Tris-盐酸缓冲液1ml过滤,收集滤出液,各取100ul至96孔酶联板,加入100ul显色液,避光5分钟,加入2M硫酸终止反应。置酶联免疫检测仪上读取吸光值,绘制标准曲线,计算血浆纤维蛋白原含量。
实验结果:现行技术测定结果2.56g/L,本发明技术测定结果2.50g/L,两种实验方法所得结果基本一致,但本发明的完成实验时间明显短于现行技术。
实施例6、本发明技术以胶体金为指示剂的检测技术检测结果的比较:
实验材料:抗人纤维蛋白原多克隆抗体过滤器、胶体金标记抗人纤维蛋白原单克隆抗体、分光光度计、人纤维蛋白原溶液。
实验方法:取已知浓度的人纤维蛋白原标准溶液,用PBS溶液稀释配置100、300、700、1000、3000ng/ml人纤维蛋白原溶液。另取健康人血浆,用PBS进行5000倍稀释。实验将采用本发明技术检测100ng、300ng、700ng、1000ng、3000ng人纤维蛋白原溶液并绘制标准曲线,然后测定健康人纤维蛋白原,并用标准曲线计算纤维蛋白原浓度。取18个试管,每个样品做3个平行管。
取实施例1制作的抗人纤维蛋白原多克隆抗体过滤器,用碱性PBS稀释100ul人纤维蛋白原溶液或健康人血浆各至1ml,过滤,用碱性PBS缓冲液1ml过滤洗三次,再用碱性PBS稀释100ul胶体金标记抗人纤维蛋白原单克隆抗体至1ml,过滤,用碱性PBS缓冲液1ml过滤洗三次,再用pH4.5 Tris-盐酸缓冲液1ml过滤,收集滤出液,混匀,取800ul置分光光度计读取520nm波长的吸光值,绘制标准曲线,计算血浆纤维蛋白原含量。
实验结果:本发明技术测定结果2.81g/L,与其它方法检测的结果基本一致。
实施例7、本发明过滤器形状对检测结果的影响:
实验材料:NHS活化琼脂糖凝胶颗粒、抗人纤维蛋白原多克隆抗体、碳酸氢钠、盐酸、乙醇胺、人纤维蛋白原。
实验方法:采用实施例1方法制备体积为100立方毫米的抗人纤维蛋白原多克隆抗体微型柱状过滤器和微型扁平过滤器。用PBS溶液稀释配置1ug/ml人纤维蛋白原溶液。用碱性PBS稀释100ul人纤维蛋白原溶液至1ml,过滤,用碱性PBS缓冲液1ml过滤洗三次,再用碱性PBS稀释100ul辣根过氧化物酶标记抗人纤维蛋白原单克隆抗体至1ml,过滤,用碱性PBS缓冲液1ml过滤洗三次,再用pH4.5 Tris-盐酸缓冲液1ml过滤,收集滤出液,各取100ul至96孔酶联板,加入100ul酶联反应显色液,避光3分钟,加入2M硫酸终止反应。置酶联免疫检测仪上读取吸光值。
实验结果:柱状过滤器测定结果为1.78,扁平过滤器测定结果为1.62,两种过滤器所得结果基本一致。
Claims (10)
1.一种过滤检测技术装置,其特征在于:所述的检测技术装置是以过滤器作为检测反应的载体,由过滤器、待检样本、检测相和检测器组成,其中过滤器是由入口、过滤层和出口组成,过滤层内的过滤芯是由能够与待检物形成特异性结合的固相材料组成。
2.根据权利要求 1 所述的检测技术装置,其特征在于:所述的过滤器内装有过滤芯的过滤结构为长大于宽的形状,其中长宽比值为2-100,优选2-50,更优选2-30。
3.根据权利要求 1 所述的检测技术装置,其特征在于:所述的过滤器内装有过滤芯的过滤结构为宽大于长的形状,其中宽长比值为1.1-10,优选1.1-5,更优选1.1-3。
4.根据权利要求 1 所述的检测技术装置,其特征在于:所述的过滤器内装有的过滤芯为用抗体或抗原偶联的固相颗粒状或筛孔状物质,其体积为2立方毫米至1立方厘米,优选3立方毫米至0.3立方厘米,更优选5立方毫米至0.1立方厘米。
5.根据权利要求1所述的检测技术装置,其特征在于:所述的待检样本包括来源于人体和动物体可进行疾病诊断和健康检测的样品以及用于环境、药物分析、食品和工业分析的样品。
6.根据权利要求1所述的检测技术装置,其特征在于:所述的检测相为能够与待检物特异性结合并能够直接或间接产生颜色或光量变化的检测物质的溶液。
7.根据权利要求6所述的检测技术装置,其特征在于:所述的检测物质为待检物特异性的抗原或抗体与能够直接或间接产生颜色或光量变化的指示剂形成的结合物。
8.根据权利要求1所述的检测技术装置,其特征在于:所述的检测器为能够定量检测并记录由所述的检测物产生的颜色或光量变化的机械结构。
9.根据权利要求1-8任一所述的检测技术装置,其特征在于:所述的检测技术包括以下步骤:
1)用能够与待检物形成特异性结合的抗原或抗体标记过滤芯;
2)用标记过滤芯制备过滤器的过滤结构;
3)待检样本经过滤器过滤,则待检物被标记过滤芯特异性捕获;
4)用清洗液清洗去除未被捕获而残留在过滤芯中的样品残留物;
5)检测相经过滤器过滤,则检测物质与被捕获的待检物特异性结合,形成过滤芯-待检物-检测物质复合物;
6)用清洗液清洗去除未被捕获而残留在过滤芯中的检测相残留物;
7)用检测器采用下列方法之一进行检测:
(1)直接采用过滤芯检测所述的指示剂的量,进而计算待检物的含量;
(2)用洗脱液洗脱并收集含有检测物质的洗脱液,用检测器检测所述的指示剂的量,进而计算待检物的含量;
(3)直接检测未被结合而流出的指示剂的量,进而计算待检物的含量。
10.权利要求 1 -9任一所述的检测技术装置在多种检测技术产品开发中的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201210481964.3A CN103869061A (zh) | 2012-11-25 | 2012-11-25 | 一种过滤检测技术装置及其用途 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201210481964.3A CN103869061A (zh) | 2012-11-25 | 2012-11-25 | 一种过滤检测技术装置及其用途 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN103869061A true CN103869061A (zh) | 2014-06-18 |
Family
ID=50907822
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201210481964.3A Pending CN103869061A (zh) | 2012-11-25 | 2012-11-25 | 一种过滤检测技术装置及其用途 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN103869061A (zh) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105372418A (zh) * | 2014-08-25 | 2016-03-02 | 常州博闻迪医药科技有限公司 | 一种信号放大免疫检测方法 |
CN108291909A (zh) * | 2015-04-28 | 2018-07-17 | 奥菲迪亚有限公司 | 分析物检测及其方法 |
CN112485427A (zh) * | 2020-10-26 | 2021-03-12 | 绍兴梅奥心磁医疗科技有限公司 | 一种肿瘤标志物的免疫定量检测装置、检测方法及用途 |
CN112485432A (zh) * | 2020-10-26 | 2021-03-12 | 绍兴梅奥心磁医疗科技有限公司 | 一种心血管疾病标志物的免疫定量检测装置、检测方法及用途 |
CN112505319A (zh) * | 2020-10-26 | 2021-03-16 | 绍兴梅奥心磁医疗科技有限公司 | 一种待检标志物免疫定量检测装置、检测方法及用途 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102680588A (zh) * | 2011-03-09 | 2012-09-19 | 北京康华源医药信息咨询有限公司 | 一种柱层析分离检测技术及其用途 |
CN102680619A (zh) * | 2011-03-09 | 2012-09-19 | 北京康华源医药信息咨询有限公司 | 一种胶体金属定量检测技术及其用途 |
CN102680621A (zh) * | 2011-03-09 | 2012-09-19 | 北京康华源医药信息咨询有限公司 | 一种化学发光检测技术及其用途 |
CN203083994U (zh) * | 2012-11-25 | 2013-07-24 | 北京康华源科技发展有限公司 | 一种过滤检测技术装置 |
-
2012
- 2012-11-25 CN CN201210481964.3A patent/CN103869061A/zh active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102680588A (zh) * | 2011-03-09 | 2012-09-19 | 北京康华源医药信息咨询有限公司 | 一种柱层析分离检测技术及其用途 |
CN102680619A (zh) * | 2011-03-09 | 2012-09-19 | 北京康华源医药信息咨询有限公司 | 一种胶体金属定量检测技术及其用途 |
CN102680621A (zh) * | 2011-03-09 | 2012-09-19 | 北京康华源医药信息咨询有限公司 | 一种化学发光检测技术及其用途 |
CN203083994U (zh) * | 2012-11-25 | 2013-07-24 | 北京康华源科技发展有限公司 | 一种过滤检测技术装置 |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105372418A (zh) * | 2014-08-25 | 2016-03-02 | 常州博闻迪医药科技有限公司 | 一种信号放大免疫检测方法 |
CN108291909A (zh) * | 2015-04-28 | 2018-07-17 | 奥菲迪亚有限公司 | 分析物检测及其方法 |
CN108291909B (zh) * | 2015-04-28 | 2022-07-12 | 森佐健康有限公司 | 分析物检测及其方法 |
CN112485427A (zh) * | 2020-10-26 | 2021-03-12 | 绍兴梅奥心磁医疗科技有限公司 | 一种肿瘤标志物的免疫定量检测装置、检测方法及用途 |
CN112485432A (zh) * | 2020-10-26 | 2021-03-12 | 绍兴梅奥心磁医疗科技有限公司 | 一种心血管疾病标志物的免疫定量检测装置、检测方法及用途 |
CN112505319A (zh) * | 2020-10-26 | 2021-03-16 | 绍兴梅奥心磁医疗科技有限公司 | 一种待检标志物免疫定量检测装置、检测方法及用途 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Mahler et al. | Development and performance evaluation of novel chemiluminescence assays for detection of anti-PR3 and anti-MPO antibodies | |
CN102798725B (zh) | 血清总IgE测定诊断试剂盒及制备和使用方法 | |
CN102628867B (zh) | 双抗体胶乳增强视黄醇结合蛋白检测试剂盒 | |
CN103869061A (zh) | 一种过滤检测技术装置及其用途 | |
CN104105965A (zh) | 侧向流和相关免疫测定中的信号放大 | |
CN103698535B (zh) | 脂蛋白相关磷脂酶a2定量检测试剂盒及制备、操作方法 | |
AU2015241521B2 (en) | Immunoassay utilizing trapping conjugate | |
CN105372418A (zh) | 一种信号放大免疫检测方法 | |
CN101165491A (zh) | 以金磁微粒为载体检测抗双链dna抗体的方法 | |
CN109211868A (zh) | 一种快速定量检测myo的微流控荧光免疫芯片 | |
CN109211867A (zh) | 一种快速定量检测bnp的微流控荧光免疫芯片 | |
CN102650642A (zh) | 一种用于检测人视黄醇结合蛋白4的抗体复合物及免疫层析检测卡和试剂盒 | |
CN102841210A (zh) | 一种视黄醇检测试剂盒及其制备方法 | |
CN103048465A (zh) | 一种il-6微孔板式化学发光检测试剂盒及其制备方法 | |
CN109211869A (zh) | 一种快速定量检测d-二聚体的微流控荧光免疫芯片 | |
CN203083994U (zh) | 一种过滤检测技术装置 | |
CN102680621B (zh) | 一种化学发光检测技术及其用途 | |
US20150276731A1 (en) | Filtration Detection Device and Use Thereof | |
CN109342718A (zh) | 一种磁微粒化学发光检测方法 | |
CN102128934A (zh) | 流式微球检测人心肌钙蛋白t的方法 | |
CN107843733A (zh) | 一种妊娠相关血浆蛋白a的磁微粒化学发光检测试剂盒及制备方法 | |
CN205301329U (zh) | D-二聚体和纤维蛋白原elisa试剂盒 | |
CN204188618U (zh) | 一种d-二聚体免疫层析半定量检测试纸 | |
CN1908663B (zh) | 底物区带分辨化学发光多组分免疫分析方法及检测系统 | |
CN201607444U (zh) | 便潜血快速诊断的层析试纸 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20140618 |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |