CN103865829A - 高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法 - Google Patents
高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103865829A CN103865829A CN201210550667.XA CN201210550667A CN103865829A CN 103865829 A CN103865829 A CN 103865829A CN 201210550667 A CN201210550667 A CN 201210550667A CN 103865829 A CN103865829 A CN 103865829A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacillus licheniformis
- enrichment
- screening method
- medium
- described step
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法，经过菌株的处理与富集，菌株的初步筛选和菌株的复筛得到高产蛋白酶地衣芽孢杆菌。该方法对高产蛋白酶菌株选择性强；筛选过程采用混合筛选，效率高；方法科学、时间周期短。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种菌株筛选方法。
背景技术
蛋白酶是水解蛋白质肽链的总称，包括酸性(pH 2．5～3)、中性(pH 7左右)和碱性(pH 8左右)3种。规模化养殖畜禽水产动物，尤其是养殖幼年动物，因其消化器官分泌的酶系和酶量(内源酶)不足，对饲料蛋白质消化能力较差，极易引起消化不良、腹泻与消瘦等疾病。因此，在饲料中添加酸性和中性蛋白酶，以提高动物对蛋白质的水解效率，促进动物对饲料蛋白质的吸收效率。但目前，国产饲用酸性蛋白酶比较少，主要是由于菌种酶活力低，生产成本高，因而其饲料营养研究有待于进一步深入展开。
地衣芽孢杆菌细胞形态和排列呈杆状、单生，可添加进饲料，适合水产养殖，能有效防止水产动物肠炎，烂腮等疾病，具有较强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性，促进饲料中营养素的降解，使水产动物对饲料的吸收利用更加充分，能分解养殖池中的有害有毒物质，净化水质，还可以刺激水产动物免疫器官的发育，增强机体免疫力。
现有技术筛选蛋白酶地衣芽孢杆菌的方法普遍存在对菌株选择性低，筛选方法不科学，时间周期长，效率低的问题。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法，选择性强，效率高，所得菌株具备作为工业菌株的能力。
本发明提供的高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法，包括以下步骤：
（1） 菌株的处理与富集，取海水、污水适量接种至富集培养基中，富集培养基于35℃，170r/min振摇24h，制得富集菌液；
（2） 菌株的初步筛选，分别取适量所述富集菌液接种于脱脂奶粉平板培养基上，分别于35℃培养48h后观察；
（3） 菌株的复筛，取初筛后的菌株接种种子培养基，170r/min，35℃振荡培养24h，再将菌种液以体积分数1％接种于发酵培养基，170r/min，35℃振荡培养48h，12000r/min离心20min，收集上清液，采用改良Lowry法检测蛋白酶活力。
所述步骤（1）中的富集培养基由蛋白胨5g/L，酵母膏1g/L，磷酸高铁0.1g/L，琼脂20g/L，及海水配制而成，pH值为7.6；所述步骤（2）中脱脂奶粉平板培养基是在TS（50 mmol/L Tris-HCl、150 mmol/L NaCl，pH8.0）中加入1%琼脂糖和1%脱脂奶粉，0.06 MPa 高压灭菌10min，待温后倾注平板；所述步骤（3）中种子培养基由蛋白胨15g/L，酵母膏5g/L，酪素3g/L，氯化钠5g/L配制而成，pH为7.5；所述步骤（3）中发酵培养基由蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，氯化钠5g/L配制而成，pH为7.5。
本发明提供的高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法，其有益效果在于，对高产蛋白酶菌株选择性强；筛选过程采用混合筛选，效率高；方法科学、时间周期短。
具体实施方式
下面结合一个实施例，对本发明提供的高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法进行详细的说明。
实施例
本实施例的高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法，包括以下步骤：
（1） 菌株的处理与富集，取海水、污水适量接种至富集培养基中，富集培养基于35℃，170r/min振摇24h，制得富集菌液；
（2） 菌株的初步筛选，分别取适量所述富集菌液接种于脱脂奶粉平板培养基上，分别于35℃培养48h后观察；
（3） 菌株的复筛，取初筛后的菌株接种种子培养基，170r/min，35℃振荡培养24h，再将菌种液以体积分数1％接种于发酵培养基，170r/min，35℃振荡培养48h，12000r/min离心20min，收集上清液，采用改良Lowry法检测蛋白酶活力。
所述步骤（1）中的富集培养基由蛋白胨5g/L，酵母膏1g/L，磷酸高铁0.1g/L，琼脂20g/L，及海水配制而成，pH值为7.6；所述步骤（2）中脱脂奶粉平板培养基是在TS（50 mmol/L Tris-HCl、150 mmol/L NaCl，pH8.0）中加入1%琼脂糖和1%脱脂奶粉，0.06 MPa 高压灭菌10min，待温后倾注平板；所述步骤（3）中种子培养基由蛋白胨15g/L，酵母膏5g/L，酪素3g/L，氯化钠5g/L配制而成，pH为7.5；所述步骤（3）中发酵培养基由蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，氯化钠5g/L配制而成，pH为7.5。
Claims (5)
1.一种高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1） 菌株的处理与富集，取海水、污水适量接种至富集培养基中，富集培养基于35℃，170r/min振摇24h，制得富集菌液；
（2） 菌株的初步筛选，分别取适量所述富集菌液接种于脱脂奶粉平板培养基，分别于35℃培养48h后观察；
（3） 菌株的复筛，取初筛后的菌株接种种子培养基，170r/min，35℃振荡培养24h，再将菌种液以体积分数1％接种于发酵培养基，170r/min，35℃振荡培养48h，12000r/min离心20min，收集上清液，采用改良Lowry法检测蛋白酶活力。
2.根据权利要求1所述的高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法：其特征在于：所述步骤（1）中的富集培养基由蛋白胨5g/L，酵母膏1g/L，磷酸高铁0.1g/L，琼脂20g/L，及海水配制而成，pH值为7.6。
3.根据权利要求1所述的高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法：其特征在于：所述步骤（2）中脱脂奶粉平板培养基是在TS（50 mmol/L Tris-HCl、150 mmol/L NaCl，pH8.0）中加入1%琼脂糖和1%脱脂奶粉，0.06 MPa 高压灭菌10min，待温后倾注平板。
4.根据权利要求1所述的高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法：其特征在于：所述步骤（3）中种子培养基由蛋白胨15g/L，酵母膏5g/L，酪素3g/L，氯化钠5g/L配制而成，pH为7.5。
5.根据权利要求1所述的高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法：其特征在于：所述步骤（3）中发酵培养基由蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，氯化钠5g/L配制而成，pH为7.5。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210550667.XA CN103865829A (zh) | 2012-12-18 | 2012-12-18 | 高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210550667.XA CN103865829A (zh) | 2012-12-18 | 2012-12-18 | 高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103865829A true CN103865829A (zh) | 2014-06-18 |
Family
ID=50904841
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210550667.XA Pending CN103865829A (zh) | 2012-12-18 | 2012-12-18 | 高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103865829A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105543123A (zh) * | 2015-12-11 | 2016-05-04 | 烟台大学 | 一株生产抗氧化肽的苏云金芽孢杆菌及其筛选方法 |
| CN106676024A (zh) * | 2015-11-05 | 2017-05-17 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一株高产碱性蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌及其应用 |
-
2012
- 2012-12-18 CN CN201210550667.XA patent/CN103865829A/zh active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106676024A (zh) * | 2015-11-05 | 2017-05-17 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一株高产碱性蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌及其应用 |
| CN105543123A (zh) * | 2015-12-11 | 2016-05-04 | 烟台大学 | 一株生产抗氧化肽的苏云金芽孢杆菌及其筛选方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102948614B (zh) | 菌酶协同发酵豆粕制备活性饲用肽的方法 | |
| KR101918732B1 (ko) | 곡물 분말 내의 단백질을 농축하는 방법 | |
| CN101979627A (zh) | 利用谷氨酸发酵废菌体制备谷氨酸发酵有机氮添加物的方法 | |
| CN103549130A (zh) | 一种酶解与发酵协同作用生产生物海藻蛋白饲料的方法 | |
| CN102406056B (zh) | 一种菠萝汁发酵豆粕及其制备方法和应用 | |
| CN102652529A (zh) | 多菌种复合固态发酵普通菜籽粕获得活性多肽的方法 | |
| CN104250311A (zh) | 利用生物法与化学法相结合的从虾蟹壳提取甲壳素和蛋白质的方法 | |
| CN103859150A (zh) | 米曲霉发酵豆粕的生产工艺 | |
| CN104328078A (zh) | 一株产中性蛋白酶的波茨坦短芽孢杆菌 | |
| CN107227288B (zh) | 一种氨基酸生产废水的再生利用方法 | |
| CN103966302B (zh) | 废弃油脂厌氧消化产沼气的方法 | |
| CN103436586A (zh) | 一种利用微生物发酵生物质生产酒精工艺 | |
| CN102860409A (zh) | 一种富含生物素发酵豆粕的生产工艺 | |
| CN103859148A (zh) | 枯草芽孢杆菌发酵豆粕的生产工艺 | |
| CN103859149A (zh) | 乳酸菌发酵豆粕的生产工艺 | |
| CN103865829A (zh) | 高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法 | |
| CN103740675A (zh) | 一种纤维素酶的生产方法 | |
| CN103834592B (zh) | 一种处理城市污泥用微生物发酵剂及其制备方法 | |
| CN106290533A (zh) | 酱油渣蛋白质的定向降解方法 | |
| CN108065031A (zh) | 一种微生物转化菠萝渣为生物饲料的制备方法 | |
| CN103881940A (zh) | 高产蛋白酶枯草芽孢杆菌的筛选方法 | |
| CN103859151A (zh) | 纳豆芽孢杆菌发酵豆粕的生产工艺 | |
| CN103609870A (zh) | 以ddgs为主要蛋白质原料的大猪全发酵饲料制作方法 | |
| CN103160484A (zh) | 麸皮液体发酵制备米黑毛霉凝乳酶的方法 | |
| CN104938762A (zh) | 一种发酵用浮萍蛋白粉的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20140618 |