CN103841836A - 用于宠物食品中的具有增强的适口性的动物消化物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于制备具有增强适口性的动物消化物的方法，所述方法包括：a）提供动物内脏；b）使所述动物内脏与适当量的至少一种碱性肽链内切酶接触；c）使所述碱性肽链内切酶水解所述动物内脏达合适的时间段；d）热处理由此获得的消化产物，以使所述碱性肽链内切酶失活；和e）获得具有适当的水解度并显示出增强适口性的所述动物消化物。本发明也涉及可通过这种方法获得的具有增强适口性的动物消化物，以及其用于制备具有增强适口性的宠物食品的用途。

Description

用于宠物食品中的具有增强的适口性的动物消化物

技术领域

本发明涉及宠物食品领域。更具体地，本发明涉及用于宠物食品中的适口性增强的动物消化物。

背景技术

蛋白水解物为宠物食品的标准组分，其通常将适口性赋予宠物食品。

蛋白水解通常可通过物理（加热或剪切）或化学（酸或酶）方式实现。然而，酶水解为在食品工业中用于水解蛋白质的最广泛的方法，特别是因为酶能够获得用于营养和/或感官目的的感兴趣的水解物（或消化物）。

蛋白水解酶为蛋白酶或肽酶，蛋白酶或肽酶可被辨别：

-基于在酶的活性位点机理中涉及的关键氨基酸：丝氨酸、羧基、氢硫基或金属，和/或

-通过它们处于活性的相对pH范围：酸性、中性或碱性；和／或

-基于它们的水解能力：内切蛋白酶或肽链内切酶在蛋白质或肽的内部的氨基酸之间切断，而外切蛋白酶或肽链端解酶在蛋白质或肽的端部分裂氨基酸。

作为常见内切蛋白酶的例子，可提及：作为高特异性内切蛋白酶的凝乳酶；具有相对较宽的特异性，但优选分裂涉及Phe、Met、Leu和Tryp残基的键的胃蛋白酶；中性蛋白酶，如作为分裂Arg或Lys残基与随后的氨基酸之间的键的高特异性内切蛋白酶的胰蛋白酶；作为非特异性的氢硫基肽链内切酶的木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶；碱性蛋白酶，如完全非特异性的枯草杆菌蛋白酶等。

在食品工业中，公知的是蛋白水解影响生物、物理和化学性质以及食品加工，且这可能是有利的或不利的。在一方面，由于低分子量分布，水解通常改进溶解度以及耐热性和耐pH性。在另一方面，水解通常增加摩尔渗透压浓度并降低化学稳定性。此外，取决于酶、蛋白质源和/或反应条件，可能由于例如产生苦的肽而降低适口性。因此有必要适当确定酶、蛋白质源和反应条件（例如酶浓度和反应时间），以获得所得消化物的特定技术效果。

宠物食品制造者通常使用家畜的肝脏或内脏和动物副产物作为宠物食品生产中的蛋白质源。在内脏中，一些（例如肠）有利地富含蛋白水解酶，使得它们需要极少（如果有的话）的另外的蛋白酶以用于水解蛋白质。当使用动物器官作为蛋白质源时，也有可能利用内生蛋白水解酶。然而，在这些酶中，外切蛋白酶通常过高表示（highly represented）而不能制得适当的消化物。因此，肉类来源通常被研磨，并用适当选择的酶进行处理以提供高产率的调味肽。另外，由于宠物种类之间的口味偏好不同，因此宠物食品制造者需要选择能够获得高产率的具有所需适口性性质的消化物的酶、蛋白质源和水解条件。除了优化适口性之外，所选的蛋白酶应该适于“友好的”加工条件，如分别有助于限制制造成本并防止细菌生长的适中的酶浓度以及温度范围。

在宠物食品工业中，适口性增强剂（PE）对于动物消耗而言是非常有用的（如果不是必要的话）。许多宠物，特别是猫，可能甚至拒绝食用未经PE处理的挤压的宠物食品。宠物食品通常含有调味组合物以增加其适口性，并使其吸引宠物。

PE为可单独使用或组合使用的液体或干燥组合物。一些PE施用至宠物食品的外表面（涂层），而其他PE掺入宠物食品材料中（内含物）。

调味蛋白水解物被广泛用作PE。例如，以No.WO2011/043828公布的国际专利申请公开了增强可用作PE的动物消化物的适口性的方法。这些方法包括将抗胶凝剂添加至动物消化物，同时将pH调节至用于水解内脏蛋白质的蛋白酶的最佳值。而且，以No.WO2009/095417公布的国际专利申请描述了通过使用PE而增强宠物食品的适口性的方法，所述PE通过使用蛋白酶和脂酶的水解的连续步骤制得。

然而，持续努力开发改进宠物食品的适口性并同时保持其营养价值的加工和配方。

发明内容

本发明涉及一种用于制备具有增强适口性的动物消化物的方法，所述方法包括：

a）提供动物内脏；

b）使所述动物内脏与适当量的至少一种碱性肽链内切酶接触；

c）使所述碱性肽链内切酶水解所述动物内脏达到合适的时间段；

d）热处理由此获得的消化产物以使所述碱性肽链内切酶失活；以及

e）获得具有适当的水解度并显示增强的适口性的所述动物消化物。

本发明也涉及可通过这种方法获得的具有增强适口性的动物消化物，以及其用于制备具有增强适口性的宠物食品的用途。

附图说明

参照如下附图说明本发明：

图1：表示根据本发明的方法的各个实施方案的流程图。必要步骤a）、b）、c）、d）和e）以实线表示；任选的步骤a1）、c1）、d1）、d2）、d3）、d4）、d5）和d6）以虚线表示。

图2：随碱性肽链内切酶的量（E）和水解反应的时间（T）而变化的水解度（DH）的图形表示。

·图2A：等式（1）：

DH=25.5072+0.2104xE+16.5265xT-2.3666xT²-15.6816xE²+9.1270xExT

·图2B：等式（2）：

DH=22.9718+43.58xE+7.6128xT-0.6199xT²-21.2226xE²+2.3467xExT。

具体实施方式

定义

除非另外具体指出，否则百分比在本文以在本发明的方法的热处理步骤d）之后获得的液体消化产物的重量表示。该液体消化产物得自所述步骤d）。或者，如果步骤d）之后为过滤步骤d1），则百分比以获自所述步骤d1）的液体消化产物的重量表示。又或者，如果步骤d）或d1）之后为冷却步骤d2），则百分比以获自所述步骤d2）的液体消化产物的重量表示（参见图1）。

在本公开中，范围以简写描述，以避免不得不冗长陈述和描述范围内的每一个值。当适当时，可选择范围内的任何适当的值作为范围的上限值、下限值或端值。例如，0.1-1.0的范围表示0.1和1.0的端值，以及0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9的中间值，和涵盖于0.1-1.0内的所有中间范围，如0.2-0.5、0.2-0.8、0.7-1.0等。

如在全文所用，词语的单数形式包括复数，反之亦然，除非上下文明确相反表示。因此，引述“一种”和“所述”通常包括各自术语的复数。例如，引述“一种方法”或“一种食品”包括多个这种“方法”或“食品”。类似地，应当包含地解释词语“包含（comprise、comprises和comprising）”。同样地，术语“包括（include、including）”和“或（or）”应当解释为包含的。然而，所有这些术语必须考虑为涵盖排他的实施方案，所述排他的实施方案也可使用诸如“由……组成”的词语提及。

本文示例的方法和组合物和其他实施方案不局限于本文描述的特定的方法学、方案和试剂，因为如本领域技术人员将了解，它们可变化。

除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语、技术术语和缩略词具有本发明的领域或术语所用的领域的技术人员所通常理解的含义。尽管类似于或等同于本文描述的那些的任何组合物、方法、制品或其他方式或材料可用于实施本发明，但是本文描述优选的组合物、方法、制品或其他方式或材料。

当提及可测量的值（如含量、时距等）时如本文所用的术语“约”意在涵盖指定值的±10%，更优选±5%，甚至更优选±3%的变化，因为这种变化适于重现所公开的方法和产品。

术语“适口性”意指相对于另一种食品组合物，动物对一种食品组合物的相对偏好。适口性指动物食用某种食品的总体意愿。有利地但并非必要地，适口性还指所食用的食品满足动物的能力。每当动物例如对两种或更多种食品中的一种显示出偏好时，偏爱的食品更“可口”，并具有“增强的适口性”。相比于一种或多种其他食品，一种食品的相对适口性可以例如通过食品的相对消耗或表示适口性的偏好的其他适当量度，例如在并排、自由选择比较中确定。其可有利地通过标准测试方案（如称为“双碗测试（two-bowl test）”或“对抗测试（versus test）”的测试（参见如下））确定，在所述标准测试方案中，动物具有接近两种组合物的相等机会。这种偏好可源自动物感觉中的任意者，但通常特别地与味道、香味、风味、质地、气味和/或口感相关。

本文表示为具有“增强适口性”的宠物食品为相对于对照组合物，宠物显示出偏好的一种宠物食品。有利地，具有增强适口性的宠物食品不仅对宠物，还对宠物所有者是有吸引力或合意的。

术语“适口性增强剂（PE）”、“增味剂（palatant）”、“调味剂”、“适口性试剂”、“开胃因素”、“调味组合物”、“适口性增强组合物”、“风味增强剂”和任何其他类似的术语意指增强食品组合物对于动物的适口性的任何材料。PE可为单个材料或材料的共混物，其可为天然的、加工的或未加工的、合成的，或部分天然和部分合成的材料。通常，用于动物食品的PE为提供对于目标动物有吸引力或合意的香味、味道、回味、气味、口感、质地和/或感官感觉的可食用组合物。

例如，PE可通过其气味而贡献初始食品吸引力，和/或不仅通过其气味，还通过其味道和/或其回味和/或其口感和/或其质地而贡献连续消耗。“初始吸引力”为诱导动物最初品尝或尝试食品的适口性的一方面，其可通过标准“第一选择”或“第一消耗食品”而估量。“持续消耗”为诱导动物持续消耗最初仅品尝或尝试的食品的适口性的一方面。

术语“动物”在一般意义上使用，并意指基于可食用组合物的适口性可以选择可食用组合物的人类或其他动物，包括鸟类、牛类、犬类、马类、猫类、狼类、鼠类、羊类和猪类动物，因此涵盖宠物。

本发明优选涉及宠物。

术语“宠物”和“同伴动物”为同义的，并意指包括但不限于猫、狗、兔、豚鼠、雪貂、仓鼠、老鼠、沙鼠、鸟、马、牛、山羊、绵羊、驴、猪等的任何家养动物。

在本发明的上下文中，优选诸如狗和猫的宠物。然而，尽管本公开集中于狗和猫，但本发明可适用于其他类别的同伴动物。如果需要，可测试本发明，以评价其用于可被认为是同伴动物的不同类别的动物的适合性。

如本文所用，术语“食品”意指旨在用于被动物摄取，并为动物提供至少一种营养物的产品或组合物。术语“食品”包括任何食品、饲料、点心、食品补充剂、零食（treat）、玩具（可咀嚼和/或可消耗玩具）、膳食替代品或膳食代用品。“食品”涵盖任何形式、固体、液体、凝胶或它们的混合物或组合的这种产品。因此，任意类型的饮料明确涵盖于术语“食品”内。

术语“宠物食品”意指旨在被宠物消耗的组合物。

取决于宠物食品的水分含量（其为低的、中等的或高的），存在三种主要类别或级别的宠物食品：

-干燥或含低水分的产品（具有小于约15%的水分）：当宠物咀嚼时，它们通常产生嘎扎嘎扎的声音；它们通常为高营养的，可被便宜地包装（例如在袋中或盒子中），并非常便于储存和使用；然而，它们通常适口性最差；

-罐装或湿润或含高水分的产品（具有超过约50%的水分）：通常为高肉含量产品，它们通常被认为是对宠物最具适口性；它们通常制造和包装（主要在罐中）昂贵；

-半湿或半干或柔软干燥或柔软潮湿或含中级或中等水分的产品（具有约15至约50%的水分）：通常包装于适当的袋或盒子中，它们通常比罐装食品适口性差，但比干燥食品适口性好。

营养均衡的宠物食品在本领域中广泛已知和使用。

“营养全面”、“营养均衡”或“全面营养均衡食品”为含有用于食品预期的接受者或消费者的具有例如基于同伴动物营养领域的认可或主管当局的推荐的适当量和比例的全部已知所需的营养物的食品。因此，这种食品能够用作膳食摄取的唯一来源以维持生命或促进生产，而无需添加补充营养源。

本文所用的术语“粗粒”指通过造粒或挤出方法形成的颗粒块或片。通常，制备粗粒以提供干燥和半湿宠物食品。取决于方法或设备，片的尺寸和形状可不同。例如，粗粒可具有球形、圆柱形、椭圆形或类似的形状。它们可具有例如小于约2cm的最大尺寸。

术语““X”中的块状产品（chunk-in-"X"product）”在本文意指在制剂（所述制剂为“X制剂”）中包含块状的所有可食用食品。其经典例子为在凝胶中的块状产品、在肉汁中的块状产品等。该类别的“在X中的块状”产品也涵盖除了可包含于X制剂（如凝胶、肉汁等）中的块状之外的可食用形式。例如，除了块状之外的其他形式可为切片产品、磨碎产品等。

本文所用的术语“肉糕（loaf）”指作为潮湿产品获得的可食用食品，并包括肉糜（terrine）、肉酱（）、奶油冻等。

术语“食品补充剂”或“膳食补充剂”或“补充剂”意指旨在除了正常动物膳食之外摄取的产品。膳食补充剂可为任何形式，例如固体、液体、凝胶、片剂、胶囊、粉剂等。优选地，它们以方便的剂量形式提供。在一些实施方案中，它们以散装销售包装（如散装粉剂、液体、凝胶或油）提供。在其他实施方案中，补充剂以批量提供以包含于其他食品（如小吃、零食、补充剂条、饮料等）中。适口性增强组合物可用于以与它们用于改进营养均衡食品的适口性相同的方式来改进膳食补充剂的适口性。

术语“零食”（或“饼干”）意指设计为由所有者优选在非用餐时间喂养宠物，以协助、促进或维持宠物与其所有者之间的联系过程的任何食品。用于狗的零食的例子为骨头。零食可为营养的或不为营养的。零食通常以与营养均衡食品可相比的方式含有适口性增强剂。

“玩具”包括例如可咀嚼玩具。用于狗的玩具的例子为人造骨头。玩具还包括可部分消耗的玩具（例如包含塑料组件）或可完全消耗的玩具（例如生皮）。

术语“动物消化物”在本文意指得自清洁的、未分解的动物组织的化学和/或酶水解的材料。在一些实施例中，如本文所用的动物消化物与美国饲料管制协会股份有限公司（Association Of American Feed Control Officials,Inc.）（AAFCO）所发布的定义完全一致。动物消化物优选衍生自动物组织以及鱼类组织，不包括毛发、角、牙齿、蹄和羽毛。本领域技术人员将了解，尽管这种组织不是优选的，但即使在良好的制造实践中，也可能不可避免地存在痕量。也不包括内脏内容物或外来物或排泄物，尽管有时存在痕量污染物。动物消化物可为干燥的或非干燥的。通常，动物消化物的例子为：

-家禽（或猪肉、牛肉、绵羊、羔羊、鱼类等）的消化物：得自清洁的和未分解的组织的化学和/或酶水解的来自家禽（猪肉、牛肉等）的材料；

-猪肉（或牛肉、绵羊、羔羊、鱼类等）副产物的消化物：得自清洁的和未分解的组织的化学和/或酶水解的来自猪肉（牛肉等）的材料，所述清洁的和未分解的组织来自家畜（猪、绵羊、羔羊等）的除了肉和骨头之外的未提炼的清洁部分，例如肺、脾脏、肾脏、大脑、肝脏、血液、任选部分脱脂的低温脂肪组织，以及清除了内容物的胃和肠。

-家禽副产物的消化物：得自清洁的和未分解的组织的化学和/或酶水解的材料，所述清洁的和未分解的组织来自家禽的除了肉和骨头之外的未提炼的清洁部分，如肝脏、心脏、头部、脚部和内脏。如本文所用，“家禽”涵盖鸟类的任何物种或类别，优选小鸡、火鸡、鸭子等；以及

-鱼类副产物的消化物：得自清洁的和未分解的组织的化学和/或酶水解的材料，所述清洁的和未分解的组织来自鱼类的除了肉和骨头之外的未提炼的清洁部分。如本文所用，“鱼类”涵盖鱼类或甲壳类或软体动物类的任何物种或类别，优选金枪鱼、鲑鱼、鳕鱼、狗鳕、沙丁鱼、虾、鱿鱼等。

动物消化物也称为“动物产物”或“动物副产物”，所有这些术语作为同义词在本文使用。

然而，在本发明的上下文中，动物消化物优选通过酶水解动物内脏而获得。

如本文所用，术语“动物内脏”或“内脏”意指可用于制备如上定义的动物消化物（包括鱼类消化物）的除了肉、鱼肉和骨头之外的动物和鱼类组织。优选研磨如本文所用的动物内脏（包括鱼类内脏）。有利地，可将一种或多种宠物食品成分（如下所定义，例如防腐剂，如抗氧化剂）添加至所述（优选经研磨的）动物内脏中。

如本文所用，“宠物食品成分”为适用于宠物消耗的任何化合物、组合物或材料。宠物食品成分的非限制性的例子为PE、动物消化物、氮化合物（例如蛋白质、肽和氨基酸）、谷物、碳水化合物、脂肪或脂类、营养物、防腐剂（包括抗氧化剂）、表面活性剂、质地化（texturing）或组织化或稳定化试剂、着色剂、无机磷酸盐化合物、益生元、益生菌等。

如本文所用，“适口性增强组合物成分”为适用于宠物消耗的任何化合物、组合物或材料。适口性增强组合物成分的非限制性的例子为动物消化物、氮化合物（例如蛋白质、肽和氨基酸）、碳水化合物、脂肪或脂类、营养物、防腐剂（包括抗氧化剂）、表面活性剂、质地化或组织化或稳定化试剂、无机磷酸盐化合物、益生元、益生菌等。成分可原样包含于适口性增强组合物中，或者它们可在组合物中接触并原位反应，以产生也由术语“适口性增强组合物成分”涵盖的经转化的材料。在组合物中在一起反应的成分的例子为（不限于）氮化合物和碳水化合物，以获得经转化的材料，如美拉德反应所得产物等。

术语“肽链内切酶”或“内切蛋白酶”意指催化肽或蛋白质中的内部键的分裂的任何蛋白水解酶。

术语“碱性肽链内切酶”或“碱性内切蛋白酶”意指在等于或大于约7.0的pH下具有最佳水解活性的任何肽链内切酶或内切蛋白酶。这种酶优选在约7.0至约10.0的pH下为活性。

“蛋白质”或“多肽”包括可与动物消耗相容的所有常规蛋白质源，尤其是植物或蔬菜蛋白，动物蛋白和微生物蛋白（例如酵母）。

动物蛋白的例子为酪蛋白、白蛋白、动物消化物、禽肉粉、肉粉、骨粉、鱼粉等。

蔬菜蛋白的例子为玉米麸质、大豆蛋白、大豆粉、水解蔬菜蛋白（HVP）等。

术语“酵母”在本文指任何酵母（优选为非活性的），以及可与用于动物消耗的组合物相容的酵母副产物。酵母在本领域公知为富含蛋白质的。酵母包括但不限于啤酒酵母、面包酵母、圆酵母、糖蜜酵母等。酵母副产物包括但不限于酵母提取物、酵母水解产物、酵母自溶产物、酵母乳等。

术语“氨基酸”意指含有氨基和羧基的分子。在一些实施方案中，氨基酸为α-、β-、γ-或δ-氨基酸，包括它们的立体异构体和外消旋体。

如本文所用，术语“氮化合物”涵盖二十种已知的天然氨基酸，以及氨基酸序列，即肽、寡肽和蛋白质或多肽。也包括来自对于在宠物食品中使用是可接受的任何来源的所有含氮化合物。适当的氮化合物可选自对于在宠物食品中使用是可接受的含硫的任何氮化合物，如含硫氨基酸（例如蛋氨酸、胱氨酸、半胱氨酸）、谷胱甘肽；其他氨基酸，如甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸等；以及其他化合物，如HVP、酵母自溶产物、酵母提取物、酵母水解产物；以及它们的组合。

谷物的例子为玉米、蜀黍、苜蓿、小麦、大麦、稻米、大豆等。

碳水化合物的例子包括右旋糖、左旋糖、蔗糖、多糖、纤维、淀粉等。优选地，碳水化合物为还原糖或含有还原糖。

优选地，“还原糖”选自己糖、戊糖、葡萄糖、左旋糖、木糖、核糖、树胶醛糖、淀粉水解产物等，以及它们的组合。

脂肪的例子包括牛脂、来自任何来源（如动物、植物（包括蔬菜））的油，或海洋油。可大量得到的植物油通常为菜籽油、豆油、玉米油、橄榄油、葵花油、亚麻籽油、棕榈油、红花油等，以及它们的副产物。

典型的动物脂肪为牛脂、猪油、家禽脂肪等，以及它们的副产物。海洋油通常为金枪鱼油、沙丁鱼油、鲑鱼油、鳀鱼油、鱼油等，以及它们的副产物。本文也涵盖衍生自动物、植物、海洋来源的脂肪，或者由动物和植物制得的脂肪。

营养物的例子包括但不限于维生素、矿物质和电解质，如维生素A、C、E、B12、D3、叶酸、D-生物素、氰钴维生素、烟酰胺、硫胺素、核黄素、吡哆醇、甲萘醌、β-胡萝卜素、泛酸钙、胆碱、纤维醇、钙、钾、钠、锌、铁、锰、铜、碘等。

“防腐剂”特别地用于确保食品产品或食品组合物的长的保质期。防腐剂包括天然或合成抗氧化剂（如BHA、BHT、没食子酸丙酯、没食子酸辛酯、生育酚、迷迭香提取物等）；以及山梨酸或山梨酸盐（例如山梨酸钾），和其他酸，如磷酸等。“表面活性剂”为表面活性的分子。它们通常具有亲水部分（例如一个或多个头部基团）和疏水（或亲脂）部分（例如一个或多个尾部）。它们以多种方式分类，例如根据它们的亲水-亲脂平衡（HLB）分类。它们也可或可选择地基于在头部基团中的形式带电（formally-charged）的存在与否而分类为非离子型、离子型或两性离子型化合物。表面活性剂是本领域公知的。可引用例如

表面活性剂。表面活性剂包括但不限于乳化剂和润湿剂。在一些情况中，术语“表面活性剂”和“乳化剂”可互换使用。

如本文所用，术语“无机磷酸盐化合物”意指包含至少一个磷原子的化合物。该化合物可为天然的或合成的、电离的或非电离的。

“无机焦磷酸盐”或“焦磷酸盐”包括涵盖单碱金属焦磷酸盐和多碱金属焦磷酸盐的碱金属焦磷酸盐。

式M_xH_yP_n0_3n+1（当n=2时）为碱金属焦磷酸盐的通式。当M为单价金属时，则x+y=n+2。当M为二价金属时，则x+y=n。单价金属焦磷酸盐和二价金属焦磷酸盐可在本文使用。

单碱金属焦磷酸盐的例子包括焦磷酸三氢钠、焦磷酸三氢钾、焦磷酸氢钙、焦磷酸氢钡、焦磷酸氢镁。

多碱金属焦磷酸盐涵盖二碱金属焦磷酸盐、三碱金属焦磷酸盐、四碱金属焦磷酸盐等。

二碱金属焦磷酸盐的例子为焦磷酸二氢二钠、焦磷酸二氢二钾、焦磷酸二钙、焦磷酸二钡、焦磷酸二镁、焦磷酸二锰、焦磷酸二锌。

三碱金属焦磷酸盐为例如焦磷酸氢三钠、焦磷酸氢三钾。

焦磷酸盐可为无水的或水合的。

“多磷酸盐”具有式M_xH_yP_nO_3n+1，其中n为3、4、5……。

多磷酸盐的例子为三多磷酸盐、五多磷酸盐和六多磷酸盐。

三多磷酸盐包括三多磷酸钠、三多磷酸钾、三多磷酸钙和三多磷酸镁。

六多磷酸盐包括六多磷酸钠、六多磷酸钾、六多磷酸钙和六多磷酸镁。

单磷酸盐的例子包括单磷酸一钠、单磷酸二钠、单磷酸三钠、单磷酸一钾、单磷酸二钾、单磷酸三钾、单磷酸腺苷（AMP）、单磷酸鸟苷（GMP）、单磷酸肌苷（IMP）、单磷酸尿苷（UMP）、单磷酸胞啶（CMP）。

“质地化试剂”或“组织化试剂”或“稳定化试剂”为影响可食用产品的质地或口感的成分，例如增加可食用产品的粘度的组分。

“着色剂”在本文意指适合（优选认证）用于宠物食品中的任何天然物质或任何合成颜色。着色剂特别地可用于在加工过程中弥补颜色改变，或将开胃的颜色提供给可食用产品。

“益生菌”为活微生物，当摄取时，其通过改进宿主动物的肠道微生物平衡而对宿主动物具有有益作用。因此，益生菌通过保持宿主动物的健康和/或安全和/或康乐；和/或通过预防和/或治疗特定的医疗状况而有利地影响宿主动物。提供益生菌以促进如下过程：内生厌氧菌群限制消化道中潜在有害（大多数为需氧的）的细菌的浓度。用于宠物食品中的适当的益生菌的例子为（但不限于）乳酸菌，如乳杆菌属（Lactobacillus spp.）、乳球菌属（Lactococcus spp.）、链球菌属（Streptococcus spp.）；以及其他类型的细菌。

“益生元”为通过如下方式有利影响宿主动物的非消化性食品成分：选择性刺激微生物在消化道中的生长和/或活性，由此有利于宿主动物的健康和/或安全/或康乐的保持和/或改进。益生元的例子包括低聚果糖（FOS）、低聚木糖（XOS）、低聚半乳糖（GOS）和低聚甘露糖。

根据本发明，“热反应”为通过在高温下组合至少一种碳氢化合物（优选还原糖）和至少一种氮化合物而获得的反应。这种反应实际上可包括多种伴随和/或连续反应，包括例如美拉德反应。

如在本发明的方法的步骤d）中所指的术语“热处理”涵盖可有利地与如上定义的热反应伴随进行的热处理以使酶失活。

因此，术语“美拉德成分”在本文意指一种或多种碳水化合物，优选为还原糖；和/或一种或多种氮化合物。实际上，美拉德成分为用于实现如上定义的一种或多种热反应的成分。

如本文所用，术语“载体”意指“用于浓缩的载体”或“用于干燥的载体”，并涵盖本领域公知的常规化合物。其例子为微生物蛋白质（例如酵母）、动物蛋白、蔬菜蛋白、碳水化合物（例如麦芽糖糊精、环糊精），以及矿物质或无机化合物（包括如上定义的无机磷酸盐化合物）。

由于难以或甚至不可能确定蛋白质水解产物的确切组成，因此制造者通常宁愿使用非直接参数，如蛋白质的肽键的水解度（DH）。DH表示为：（i）所得水解产物中氨基氮与全部氮的比例（AN/AT比）；（ii）水解产物中胺的存在；和（iii）水解产物的摩尔渗透压浓度。可使用许多常规方法来确定DH。在食品工业中，更具体地在宠物食品工业中使用以定量DH的方法通常基于如下原理中的一者：（1）在沉淀剂（如三氯乙酸（TCA））的存在下确定可溶性氮；或（2）通过比色法（例如使用三硝基苯磺酸TNBS滴定）或释放质子的pH滴定来确定游离α氨基。TCA可溶性氮可通过克耶达（Kjeldhal）分析（A.O.A.C.1995）或双缩脲反应（Hung等人，1984）而确定。这种方法详细描述于Silvestre（1997）中。或者，DH可有利地通过如下所述的OPA（o-酞二醛）-基方法（Nielsen，2001）确定。

如本文所用，“涂布”指例如通过喷射、撒粉等将适口性增强组合物局部沉积至基础食品组合物的表面上。

如本文所用，“包括（inclusion）”指在用于获得最终宠物食品的进一步的加工步骤（包括热处理和/或挤出和/或甑馏（retorting）等）之前，通过将适口性增强组合物与其他宠物食品成分混合，而将适口性增强组合物内部添加至宠物食品制剂中。

术语“单个包装”意指试剂盒的组件在一个或多个容器中物理缔合或与一个或多个容器物理缔合，并被认为是用于制造、分送、销售或使用的一个单元。容器包括但不限于袋、盒子、纸箱、瓶、小袋、任何类型或设计或材料的包装、透明带、收缩胶膜、装订的或另外粘贴的组件，或它们的组合。单个包装可为物理缔合的单独组件的容器，使得它们可被认为是用于制造、分送、销售或使用的一个单元。

如本文所用，“用于传递信息或指示的装置”为适用于提供信息、指示、推荐和/或保证等的任意形式的试剂盒组件。这种装置可包括含有信息的文件、数字储存媒体、光储存媒体、音频展示、视觉显示。传递方式可为显示的网址、手册、产品标签、包装说明书、广告、视觉显示等。

本发明的描述

本文显示，当适当选择用于通过酶水解动物内脏而制备动物消化物的条件时，可有利地增强宠物食品适口性。这些条件包括如下参数中的至少一者：酶的量、水解持续时间、目标DH值。优选地，适当选择所有这3个参数以获得宠物食品适口性的有利水平。

在图1所示的第一方面中，本发明涉及一种用于制备具有增强适口性的动物消化物的方法，所述方法包括：

a）提供动物内脏；

b）使所述动物内脏与至少一种碱性肽链内切酶接触；

c）使所述碱性肽链内切酶水解所述动物内脏；

d）热处理由此获得的消化产物以使所述碱性肽链内切酶失活；以及

e）获得具有增强适口性的所述动物消化物，

其中：

（i）（参见图2A）如果所述碱性肽链内切酶以在步骤d）之后获得的消化产物的重量计约0.017至0.682%的量（E）使用：

-则步骤c）中的所述水解在约1.5至约5.0小时的时间段（T）过程中进行；且

-在步骤d）之后获得的消化产物具有约45至约70%的水解程度（DH），所述DH由等式（1）限定：

DH=25.5072+0.2104xE+16.5265xT-2.3666xT²-15.6816xE²+9.1270xExT

（ii）（参见图2B）如果所述碱性肽链内切酶以在步骤d）之后获得的消化产物的重量计0.717至约1.137%的量（E）使用：

-则步骤c）中的所述水解在约0.25至约4.0小时的时间段（T）过程中进行；且

-在步骤d）之后获得的消化产物具有约45至约70%的水解程度（DH），所述DH由等式（2）限定：

DH=22.9718+43.58xE+7.6128xT-0.6199xT²-21.2226xE²+2.3467xExT

（iii）如果所述碱性肽链内切酶以在步骤d）之后获得的消化产物的重量计0.682至0.717%之间的量（E）使用：

-则步骤c）中的所述水解在约1.5至约4.0小时的时间段（T）过程中进行；且

-在步骤d）之后获得的消化产物具有优选约50至约70%的水解程度（DH）。

根据本发明的方法优选还包括在所述步骤a）之后的调节所述动物内脏的pH的步骤a1）（图1）。所述经调节的pH值取决于在本发明的方法中所用的碱性肽链内切酶。选择所述经调节的pH值以有利于或甚至优化酶的水解活性。优选地，进行所述步骤a1）以将pH调节至作为根据酶制造者的推荐的最佳pH值或pH范围的pH值。这对于本领域技术人员是容易显而易见的。pH可由对于用于宠物食品中是可接受的任何适当的化合物进行调节，如磷酸、苛性钠、其他常规和适当的酸性或碱性调节剂，以及它们的组合。

水解的所述步骤c）优选在作为根据酶制造者的推荐的最佳温度值或温度范围的温度下进行。这属于本领域常规手段。通常，步骤c）中的温度为约50至约80℃，优选约55至约75℃，还优选约60至约70℃。

为了使碱性肽链内切酶失活，步骤d）的所述热处理优选在约5至约60分钟的时间段过程中在约80至约110℃的温度下进行。还优选地，所述温度为约90至约100℃，和/或所述时间段为约15至约45分钟。

或者，酶的热失活的所述步骤d）可有利地适于促进消化产物中的一个或多个热反应。在这些情况下，本发明的方法的一个实施例还进行将一种或多种美拉德成分添加至所述步骤c）的消化产物中的步骤c1）。例如，以约0.01至30%，优选0.1至20%，更优选0.1至15%的碳水化合物的浓度，且以约0.01至30%，优选0.01至20%，更优选0.01至15%的氮化合物的浓度添加碳水化合物和/或氮化合物。

当所述步骤d）使酶失活并使热反应发生时，适当的温度选择为在约70至约130℃，优选约75至约125℃，还优选约80至约120℃的范围内。该热处理在足以进一步开发消化产物的风味的时间过程中进行，例如在约15分钟至约20小时，优选约20分钟至约10小时，还优选30分钟至约6小时的时间段过程中。

优选地，根据本发明的方法还包括在所述步骤d）之后的过滤所得消化产物的步骤d1）（图1）。可使用常规过滤装置（如市售旋转过滤器）进行过滤。有利地，所述过滤可在适当条件下进行，以从消化产物中去除直径等于或大于约500μm，优选大于约400μm的粒子。

优选地，如果不进行步骤d1）或如果步骤d1）和d2）伴随进行，则根据本发明的方法还包括冷却得自步骤d）的消化产物的步骤d2）（图1）。或者，如果步骤d1）在步骤d）之后作为单独的步骤进行，则步骤d2）由冷却得自所述步骤d1）的消化产物组成。根据一个实施方案，进行冷却以达到干燥消化产物的小于或等于约100℃（优选约80至约99℃）的温度。根据另一实施方案，进行冷却以达到液体消化产物的小于或等于约45℃（优选25至40℃）的温度。

根据如上提供的术语“百分比”的定义，如果不进行步骤d1）和d2），则酶的量E相对于获自步骤d）的消化产物的重量表示，且DH在该消化产物上测量。或者，如果步骤d1）和d2）均进行，则E值相对于在步骤d2）（其可与步骤d1）伴随）结束时获得的消化产物的重量表示，且DH在该消化产物上测量。还或者，如果仅进行一个步骤d1）或d2），则E的量相对于在所述进行的步骤d1）或d2）结束时获得的消化产物的重量表示，且DH在该消化产物上测量。

优选地，根据本发明的方法还包括步骤d3），所述步骤d3）由将如上定义的一种或多种宠物食品成分添加至消化产物组成，所述消化产物得自：

-如果在步骤d）之后不进行步骤d1）和d2），则得自步骤d）；或

-如果在步骤d）之后仅进行该步骤d1），则得自步骤d1）；或

-在其他情况中（步骤d2）有可能与步骤d1）伴随进行），则得自步骤d2）（图1）。

在一个实施方案中，本发明的方法还包括浓缩消化产物的步骤d4），所述消化产物得自：

-如果在步骤d）之后不进行步骤d1）、d2）和d3），则得自步骤d）；或

-如果在步骤d）之后仅进行该步骤d1），则得自步骤d1）；或

-如果在步骤d）之后仅进行该步骤d2），或如果在步骤d）之后仅进行步骤d1）和d2）（步骤d2）有可能与步骤d1）伴随），则得自步骤d2）；或

-在其他情况中，得自步骤d3）（图1）。

浓缩步骤d4）可使用常规装置进行。例如，可使用市售装置（例如浓缩器）。或者，可将适当比例的如上定义的一种或多种载体添加至消化产物中。有利地进行浓缩以获得以经浓缩的消化产物重量计约5至约80%，优选约10至约70%，还优选约20至约60%的干物质含量。

当步骤d）或d1）或d2）或d3）或d4）之后为步骤e）时，则所述方法有利地在步骤e）之前包括步骤d5），所述步骤d5）由冷冻得自步骤d）、d1）、d2）、d3）和d4）中的在后步骤的消化产物组成（图1）。冷冻通常尽可能迅速地进行以达到约-20℃的中心温度。可使用常规冷冻装置，如板式深冻机。

在一个实施方案中，本发明的方法还包括干燥消化产物的步骤d6），所述消化产物得自：

-如果在步骤d）之后不进行步骤d1）、d2）、d3）和d4），则得自步骤d）；或

-如果在步骤d）之后仅进行该步骤d1），则得自步骤d1）；或

-如果在步骤d）之后仅进行该步骤d2），或如果在步骤d）之后仅进行步骤d1）和d2）（步骤d2）有可能与步骤d1）伴随），则得自步骤d2）；或

-如果步骤d3）为在步骤d）之后或在步骤d1）之后或在步骤d2）之后（步骤d2）有可能与步骤d1）伴随）进行的仅有步骤，则得自步骤d3）；或

-在其他情况中，得自步骤d4）（图1）。

进行干燥步骤d6）以去除任何过量的水。特别地，所得水含量以由此获得的干燥消化产物的重量计小于或等于约10%，优选为约1至约8%。例如，通过以适当的比例组合得自步骤d）或d1）或d2）或d3）或d4）的消化产物与如上定义的载体，并通过共混所述组分，而获得干燥消化产物。然后通过蒸发干燥混合物，并获得干燥消化产物。

特别地，当根据本发明的方法至少包括步骤a）、b）、c）、d）和e）和任选的选自a1）、c1）、d1）、d2）、d3）和d4）中的至少一个步骤，且不包括步骤d5）和d6）时，由此获得的具有增强适口性的动物消化物为液体（图1）。明显的是，为了获得具有增强适口性的液体动物消化物，所述方法可包括除了冷冻步骤d5）和干燥步骤d6）之外的任何步骤。优选地，为了获得具有增强适口性的液体动物消化物，所述方法不包括步骤d4）、d5）和d6）。还优选地，为了获得具有增强适口性的液体动物消化物，所述方法包括步骤a）、a1）、b）、c）、c1）、d）、d1）、d2）、d3）和e），且不包括步骤d4）、d5）和d6）。甚至更优选地，为了获得具有增强适口性的液体动物消化物，所述方法由步骤a）、a1）、b）、c）、、c1）、d）、d1）、d2）、d3）和e）组成。

还特别地，当根据本发明的方法至少包括所述步骤a）、b）、c）、d）、d5）和e）和任选的选自a1）、c1）、d1）、d2）、d3）和d4）中的至少一个步骤，且不包括步骤d6）时，由此获得的具有增强适口性的动物消化物为冷冻的（图1）。明显的是，为了获得具有增强适口性的冷冻动物消化物，所述方法包括冷冻步骤d5），且不包括步骤d6）。优选地，为了获得具有增强适口性的冷冻动物消化物，所述方法包括步骤a）、a1）、b）、c）、c1）、d）、d1）、d2）、d3）、d4）、d5）和e），且不包括步骤d6）。还优选地，为了获得具有增强适口性的冷冻动物消化物，所述方法由步骤a）、a1）、b）、c）、c1）、d）、d1）、d2）、d3）、d4）、d5）和e）组成。

还特别地，当根据本发明的方法至少包括所述步骤a）、b）、c）、d）、d6）和e）和任选的选自a1）、c1）、d1）、d2）、d3）和d4）中的至少一个步骤，且不包括步骤d5）时，由此获得的具有增强适口性的动物消化物为干燥的（图1）。明显的是，为了获得具有增强适口性的干燥动物消化物，所述方法包括干燥步骤d6），且不包括步骤d5）。优选地，为了获得具有增强适口性的干燥动物消化物，所述方法包括步骤a）、a1）、b）、c）、c1）、d）、d1）、d2）、d3）、d4）、d6）和e），且不包括步骤d5）。还优选地，为了获得具有增强适口性的干燥动物消化物，所述方法由步骤a）、a1）、b）、c）、c1）、d）、d1）、d2）、d3）、d4）、d6）和e）组成。

根据本发明的具有增强适口性的动物消化物（如在所述步骤e）中获得）满足PE的如上定义。该动物消化物可通常以以最终宠物食品重量计约0.01至约80%，优选约0.01至约60%，更优选约0.01至约40%，甚至更优选约0.01至约20%的比例直接原样使用。或者，其可与一种或多种其他适口性增强组合物成分，特别是其他PE组合，且所有成分或所有PE可伴随或连续应用。

在本发明的方法中，使用肽链内切酶，优选碱性肽链内切酶。用于本文的更特别适当的肽链内切酶为alcalase（无对应中译文）型蛋白酶。可在本文使用的市售可得的酶的非限制性的例子为：Alcalase（诺维信，Bagsvaerd，DK）、

（Danisco Genencor，Hanka，Fl）、

碱（Danisco Genencor）、复合蛋白酶（Protemax）（Prozyn，Sao paulo，BR）和Proleather（无对应中译文）（Amano，Nishiki，JP）。

本发明的方法的有利的实施方案如下：

·在i）中：

-所述量E为以在步骤d）之后获得的消化产物的重量计约0.02至0.682%，优选约0.03至0.682%，还优选约0.05至0.682%；和/或

-所述时间段T为约1.5至约4小时，优选约1.5至约3.5小时，还优选约1.5至约3小时；和/或

-所述DH为约50至约70%，优选约55至约65%；

·在ii）中：

-所述量E为以在步骤d）之后获得的消化产物的重量计0.717至约1.12%，优选0.717至约1.1%，还优选0.717至约1.05%；和/或

-所述时间段T为约0.5至约3.5小时，优选约1至约3小时，还优选约1至约2.5小时；和/或

-所述DH为约50至约70%，优选约55至约65%；

·在iii）中：

-所述时间段T为约1.5至约3.5小时，优选约1.5至约3小时，还优选约2至约3小时；和/或

-所述DH为约55至约70%，优选约55至约65%。

在本发明的方法中，使用OPA（o-酞二醛）-基方法（如在以下实施例中所述）确定DH值。

优选地，在本发明的方法中所用的内脏选自家禽、猪（pork）、牛（beef）、羔羊、绵羊、鱼类和它们的组合的内脏。鱼类内脏更优选地选自金枪鱼、鲑鱼、鳕鱼、狗鳕、沙丁鱼、虾、鱿鱼和它们的组合的内脏。

在另一方面，本发明涉及一种可通过如本文所述的方法获得的具有增强适口性的动物消化物。特别地，该动物消化物为干燥的或液体或冷冻的。

本发明的又一方面还涉及一种用于宠物食品的适口性增强组合物，其包含至少一种如上公开的具有增强适口性的动物消化物，和如上定义的一种或多种其他适口性增强组合物成分，如特别是如上所述的美拉德反应所得产物和/或无机磷酸盐化合物和/或微生物蛋白质和/或动物蛋白和/或蔬菜蛋白和/或碳水化合物。

在所述适口性增强组合物中的美拉德反应所得产物的含量优选为以组合物重量计约0.01至99%，还优选约0.05至95%，更优选约0.1至90%，还更优选约0.2至85%，甚至更优选约0.5至80%。

在本文提供的适口性增强组合物中，所述无机磷酸盐化合物优选以组合物重量计约0.01至75%，还优选约0.05至70%，更优选约0.1至65%，还更优选约0.25至60%的量存在。

所述无机磷酸盐化合物优选选自磷酸、焦磷酸盐、单磷酸盐、多磷酸盐和它们的组合。

根据本发明的优选的无机磷酸盐化合物为选自如下的焦磷酸盐化合物：焦磷酸二钠、焦磷酸三钠、焦磷酸四钠、焦磷酸二钾、焦磷酸三钾、焦磷酸四钾、焦磷酸四铁和它们的组合。一个更特别优选的焦磷酸盐化合物为焦磷酸三钠。

用于本发明的一个优选的焦磷酸盐化合物为三多磷酸钠。

根据本发明的适口性增强组合物可为干燥的或液体或冷冻的。

本发明的又一方面还涉及一种用于增强宠物食品的适口性，或换言之用于制备具有增强适口性的宠物食品的方法，其中所述方法包括：

a）将如上定义的具有增强适口性的动物消化物和/或适口性增强组合物添加至宠物食品制剂或混合物中；以及

b）获得具有增强适口性的宠物食品。

诸如粗粒的干燥宠物食品通常可通过不同的方法制得。广泛使用的这些方法中的一种为热炼-挤出机（cooker-extruder）法。在热炼-挤出机法中，首先将成分共混在一起以形成混合物。将该混合物转移至回潮机（steam conditioner）中，所述混合物在回潮机中充分变潮湿而变得可挤出。然后该混合物进入热炼-挤出机，在热炼-挤出机中在高温和高压下热炼所述混合物，然后迫使其通过模头离开装置。该模头使挤出产物成型为具体形状。通过周期性切掉产物的挤出流的端部而产生单独的食品片。然后在热风干燥器中干燥单独的片。通常干燥产物直至其含有少于15%的水分，优选约4至10%的水分。然后通过散装材料传送机将经干燥的粒子或片转移至涂布机，并用脂肪喷射。可将其他液体（例如磷酸）可选择地施用至片，或者在脂肪之外施用。所得丸粒或粗粒构成基础宠物食品制剂，使用本发明的具有增强适口性的动物消化物和/或适口性增强组合物来增强所述基础宠物食品制剂的适口性。

肉汁基或凝胶基的潮湿宠物食品可通过如下方式制得：研磨肉类、肉类模仿物、肉类副产物、碳水化合物和/或谷物、质地化试剂，并经由低压挤出形成研磨混合物，然后通过蒸汽通道热炼。在通道出口处，将混合物切削成片。将肉汁型或凝胶型基质添加至所得片，然后在罐或小袋中密封并甑馏，以获得在肉汁中的块状或在凝胶中的块状食品。

并非肉汁基或凝胶基的潮湿宠物食品可通过如下方式制得：研磨肉类、肉类模仿物、肉类副产物、碳水化合物和/或谷物，并与水和质地化试剂混合。然后，将全部混合物密封于罐中并甑馏，以获得肉糕。

因此可取决于宠物食品、具有增强适口性的动物消化物和/或适口性增强组合物，或者通过将所述具有增强适口性的动物消化物和/或所述适口性增强组合物掺入或包含至宠物食品制剂或混合物中，或者通过使用所述具有增强适口性的动物消化物和/或所述适口性增强组合物涂布所述宠物食品制剂或混合物，从而进行上述添加步骤a）。

例如，可引用用于涂布干燥宠物食品（如粗粒）的方法。可将未经涂布的、挤出的基础宠物食品的粗粒置于容器（如桶或涂布机）中以用于混合。加热脂肪（如猪脂或家禽脂肪），然后以获得粗粒的涂层的方式将其喷射至宠物食品上。涂层无需为连续层，但优选为均匀的。在脂肪之后，适口性增强组合物可施用作为液体或干粉，且同时混合产物。通常喷射具有增强适口性的液体动物消化物和/或液体适口性增强组合物，而通常撒粉具有增强适口性的干燥动物消化物和/或干燥适口性增强组合物。或者，具有增强适口性的动物消化物和/或适口性增强组合物可与脂肪混合，并同时施用。还或者，在沉积脂肪之前涂布具有增强适口性的动物消化物和/或适口性增强组合物。

或者，可根据如下方法将具有增强适口性的动物消化物和/或适口性增强组合物掺入或包含至宠物食品制剂中。在热炼之前，使具有增强适口性的动物消化物和/或适口性增强组合物与宠物食品制剂的粗成分接触。在此情况中，具有增强适口性的动物消化物和/或适口性增强组合物组合至基础食品制剂的蛋白质、纤维、碳水化合物和/或淀粉等，并在热炼-挤出机中与那些材料一起热炼。

可如下实现包含至潮湿宠物食品中。除了其他宠物食品成分之外，具有增强适口性的液体或干燥或冷冻动物消化物和/或液体或干燥或冷冻适口性增强组合物可在共混过程中施用至肉汁型或凝胶型基质。具有增强适口性的液体或干燥或冷冻动物消化物和/或液体或干燥或冷冻适口性增强组合物也可施用至用于块状或肉糕制剂的肉类（meat-by）混合物中。在此情况中，其可在研磨过程之前或之后添加至原料中。在块状制造的情况中，所述肉类混合物可在蒸汽或烧烤烘箱中热炼，或者在肉糕制造的情况中，所述肉类混合物可直接密封于罐中。

本发明的PE可用于宠物食品（如含有适当的宠物食品成分（包括蛋白质、纤维、碳水化合物和/或淀粉等）的营养均衡混合物）中。这种混合物对于本领域技术人员而言是公知的，且它们的组成取决于许多因素，例如具体类型的宠物所需的食物平衡。另外的宠物食品成分可包括维生素、矿物质、调味品、防腐剂和表面活性剂。根据兽医领域中的已知膳食标准，例如通过国家研究委员会（NRC）的如下推荐或美国饲料管制协会（AAFCO）的指导方针，来确定食物均衡，包括维生素、矿物质、脂类、蛋白质和碳水化合物的相对比例。

根据另一方面，本发明涉及一种具有增强适口性的宠物食品，其包含宠物食品混合物和如上所述的至少一种具有增强适口性的动物消化物和/或至少一种适口性增强组合物。

优选地，所述宠物食品可通过前述制备方法获得。

优选地，所述宠物食品选自湿润的营养均衡宠物食品、干燥营养均衡宠物食品、半潮湿营养均衡宠物食品、补充剂、零食和玩具。

湿润营养均衡宠物食品优选选自：在凝胶中的块状食品、在肉汁中的块状食品、肉糕和汤。

干燥营养均衡宠物食品优选为粗粒。

优选地，所述宠物食品为猫食或狗食。

本发明的另一方面涉及一种用于喂养宠物的方法，其至少包括：

a）提供如上公开的宠物食品；以及

b）将所述宠物食品喂养至宠物。

优选地，所述宠物选自猫和狗。

本发明的又一方面还涉及一种用于增强宠物食品的适口性的试剂盒，其在单个包装中的一个或多个容器中包括：

-如上所述的至少一种具有增强适口性的动物消化物和/或至少一种适口性增强组合物；

-任选的至少一种宠物食品成分；

-任选的用于传递有关使用所述具有增强适口性的动物消化物和/或所述适口性增强组合物和任选的所述宠物食品成分的信息或指示的装置。

上述的具有增强适口性的动物消化物和适口性增强组合物提供了相比于现有技术显著的优点。本发明的效果可通过通常称为“双碗测试”或“对抗测试”的测试进行测量。当然，本领域技术人员可自由使用除了下文所述的双碗测试之外的任何其他适当的测试来测定偏好。这种可供选择的测试是本领域已知的。

参照如下实施例进一步描述本发明，所述实施例仅以说明的目的呈现，而不旨在限制本发明的范围。

实施例

A-DH测量方法（描述于Nielsen等人，2001）：

在蛋白水解产物中，监测反应的关键参数为水解度（DH）。DH定义为分裂的肽键的百分比：

DH=h/h_totx100%

其中h_tot为每蛋白质当量的肽键总数，且h为水解的键的数目，h根据下式以丝氨酸-NH₂的当量表示，因为丝氨酸显示接近所有氨基酸的平均的响应：

h=(丝氨酸NH2-β)/αmeq/g蛋白质

食品蛋白质的大多数具有提供h_tot=8的125g/mol的氨基酸分子量的平均值，可适于肉类的7.6的值和鱼类的8.6的值，α和β值对于肉类和鱼类分别设定为1.00和0.40。

A-1–原理：

每个水解肽链产生游离的氨基。那些氨基与OPA反应而形成黄色络合物，所述黄色络合物随后在340nm下在分光光度法中进行测量。光密度随络合物数目而变化。

方法则由如下组成：测量h值，然后测量水解产物的丝氨酸当量值，且比较在记录的水解产物中形成的有色络合物与在丝氨酸标样（具有空白校正）中形成的络合物的水平。

A-2–装置：

锥形烧瓶，4小数位分析天平。移液管：适于体积。磁力搅拌器、涡流、分光光度计在340nm。

A-3–试剂：

OPA试剂在200ml烧瓶中如下制得：将7.620g四硼酸二钠十水合物和200mg十二烷基硫酸钠（SDS）溶解于150mL去离子水中。在继续之前，试剂必须完全溶解。将160mg OPA97%溶解于4mL乙醇中。然后通过用去离子水冲洗，将OPA溶液定量转移至上述溶液中。通过用去离子水冲洗，将176mg二硫苏糖醇99%（DTT）添加至溶液中。使用去离子水使溶液达到200mL。

通过将50mg丝氨酸溶解于500mL去离子水（0.9516meqv/L）中而制得丝氨酸标样。

通过将200mg溶解于100mL去离子水中而制得样品溶液。

A-4–测量：

将3ml OPA置于6个微分光管。然后添加400μL水（空白）、丝氨酸标样或样品，在相同的+2分钟反应时间完成测量。对于每个样品，进行空白、然后两个标样测量、然后3个样品测量。

在20℃下实现分析。

标样和水空白的典型吸光度读数分别为0.8和0.07。

A-5-h和DH的测定

丝氨酸-NH₂=(OD_样品-OD_空白/OD_标样–OD_空白)x0.9516meqv/Lx0.1x100/XxP

其中丝氨酸-NH₂=meqv丝氨酸NH2/g蛋白质；X=g样品；P=样品中的蛋白质%；0.1为以升（L）计的样品体积。

h则为：h=(丝氨酸-NH₂-β)/αmeqv/g蛋白质，其中α和β如上给出。

DH的计算：DH=h/h_totx100%。

B-使用“双碗”测试的适口性评价：

B-1-双碗测试的原理：

测试基于如下假设：食品消耗得越多，则其越具适口性。

基于两种食品之间的比较，进行单独相对于（双碗）癖好测试。取决于测试目的，对36条狗的组和40只猫的组进行测试。

B-2-测试的操作方法：

-称量相同量的食品A和食品B，并置于相同的碗中。每个配给中存在的量能够满足每日需求。

-碗的分布：

狗测试：将碗置于狗可到达的单独的喂食器中。

猫测试：将碗同时呈现给单独的放饲厩中的每只猫，在每一餐时交换碗的位置以避免由偏手性导致的选择。

-测试持续时间：

*干燥食品的猫测试：约15分钟至约20小时（如果在测试结束之前两个碗中的一者被完全吃完，则移出两个碗，停止测试）；

*湿润食品的猫测试：约15分钟至约30分钟（如果在测试结束之前两个碗中的一者被完全吃完，则移出两个碗，停止测试）；

*狗测试：约15分钟至约30分钟（如果在测试结束之前两个碗中的一者被完全吃完，则移出两个碗，停止测试）。研究参数。

-测得的参数：首先消耗的食品（“初始吸引力”）和在测试结束时所消耗的每个食品的量；

-计算的参数：以%计的单独消耗比例（CR）

CR_A=A的消耗（g）×100/（A+B的消耗）（g）

CR_B=B的消耗（g）×100/（A+B的消耗）（g）；

平均消耗比例（ACR）=所有单独的比例的平均（赋予每个动物相等的重要性，而无论其尺寸或其相应的消耗如何）。

如果相比于预定值（其随例如动物重量和/或新陈代谢而变化），动物具有更高或更低的消耗，则不将它们考虑进统计处理。

B-3-统计分析：

使用统计分析来确定是否2个比例之间存在显著差异。进行具有3个误差阈值（即5%、1%和0.1%）的Student t测试。

使用卡方检验（Chi-square test）来确定以食品A作为首先食用的食品的宠物数量与以食品B作为首先食用的宠物数量之间是否存在显著差异。

显著水平如下所述：

NS    不显著      （p>0.05）

*     显著        （p<0.05）

**    非常显著    （p<0.01）

***   极非常显著  （p<0.001）

C-本发明的实施方案的实施例：

用以说明本发明的本文公开的实施例涉及两种适口性配置。

在实施例1中，如下3个参数（碱性肽链内切酶的量（E）、水解时间（T）和DH值）的变化允许获得不同的动物消化物，比较所述不同的动物消化物的适口性。

在实施例2至4中，选择碱性肽链内切酶的量E和动物内脏的水解时间T的一个特定组合，并在适口性测试中与使用中性肽链内切酶所获得的类似的动物消化物进行比较。

实施例1：

在该实施例中，根据不同的水解条件制得不同的干燥动物消化物。根据图1制得所有干燥动物消化物。液体消化产物A的配方描述于下表1中：

表1

液体消化产物A的配方	液体消化产物A的重量%
		家禽肝脏	92.0
苛性钠	4.09
		抗氧化剂	0.15

柠檬酸	0.03
		抗坏血酸	0.02
美拉德成分	3.4
		酶：碱性肽链内切酶	0.31

液体消化产物A（“Liq dig pd A”）如下制得。以最大速度在立式切割器中研磨新鲜原料（家禽肝脏）达2min。将经研磨的原料转移至反应器，并与其他成分混合。使用苛性钠调节pH至8.5，然后掺入酶。水解步骤在60℃下进行3小时。在水解步骤结束时，掺入美拉德成分。温度逐渐增加至100℃并保持30min，以使酶失活，允许美拉德反应并开发调味化合物。在开始粗滤之前设定略微冷却，以获得粒子尺寸小于500μm的液体消化产物A。

然后在180至220℃的适当温度下喷雾干燥所述液体达数分钟，以去除过量的水。由此获得干燥动物消化物A。

除了（参见下表2）碱性肽链内切酶的量E（%）和水解持续时间（小时）之外，液体消化产物B、C、D、E、F、G和H的配方类似于液体消化产物A的配方。

酶的量的变化由或多或少的经研磨的家禽肝脏弥补。

表2

	碱性肽链内切酶（%）	水解时间（h）	DH（%）
				Liq Dig Pd A	0.31	3	60.8
Liq Dig Pd B	1.085	2	60.8
				Liq Dig Pd C	0.93	0.5	49.1
Liq Dig Pd D	0.15	1	37.2
				Liq Dig Pd E	1.137	1	50.3
Liq Dig Pd F	1.137	2	64.6
				Liq Dig Pd G	1.137	3	68.7
Liq Dig Pd H	1.225	2	62

如本文公开的所有实施例那样（即在如上所述的用于使酶失活的热处理之后（参见图1））测定DH值。液体消化产物A、B、C、D、E、F、G和H在图2A和2B中绘制点。

与干燥动物消化物A相关如上所述，分别由液体消化产物B、C、D、E、F、G和H获得干燥动物消化物B、C、D、E、F、G和H。

适口性评价：组合物A、B、C、D、E、F、G和H在分别共混干燥动物消化物A、B、C、D、E、F、G和H之后获得，每一个组合物具有60:40的各自比例的焦磷酸三钠，并经1.5重量%的干燥猫粗粒撒粉（所述干燥猫粗粒之前由6%的家禽脂肪涂布），从而提供完整的和营养均衡的适口的干燥猫食A、B、C、D、E、F、G和H。

如上所述评价适口性以将猫食产品C、D、E、F、G和H与猫食产品A进行比较。另外，将猫食产品H的适口性与猫食产品B的适口性进行比较。

第1天和第2天的平均消耗比例（以%计）的适口性结果显示于下表3A和3B中：

表3A

表3B

那些结果显示，相比于食品A，食品C、E、F和G具有等同的适口性，而（i）食品D比食品A具有更差的适口性，且（ii）食品H比食品A和B具有更差的适口性，表明特定的水解条件能够增加猫食适口性。

实施例2：

用于猫的两个干燥动物消化物如下制得：

组合物1：

配方以液体消化产物的重量计：

表4

液体消化产物1的配方	液体消化产物1的重量%
		猪肝	92.32
苛性钠	3.7
		抗氧化剂	0.15

柠檬酸	0.03
		抗坏血酸	0.02
美拉德成分	3.4
		酶：中性肽链内切酶	0.384

以最大速度在立式切割器中研磨新鲜原料（猪肝）达2min。将经研磨的原料转移至反应器，并与其他成分混合。使用苛性钠调节pH至6.5，然后掺入酶。水解步骤在55℃下进行3小时。在水解步骤结束时，掺入美拉德成分。温度逐渐增加至100℃并保持30min，以使酶失活，允许美拉德反应并因此开发调味化合物。在开始粗滤之前设定略微冷却，以获得粒子尺寸小于500μm的液体消化产物1。

然后在180至220℃的适当温度下喷雾干燥所述液体达数分钟，以去除过量的水。获得干燥动物消化物1。然后通过共混60%的干燥动物消化物1与40%的焦磷酸三钠而获得猫粉末组合物1。

组合物2：

液体消化物2的配方与液体消化物1的配方相同，不同的是所用的酶为碱性肽链内切酶。制造条件相同，不同的是根据酶供应商的推荐将pH和温度分别调节为8.5和60℃。由此获得猫粉末组合物2。

表5

液体消化产物2的配方	液体消化产物2的重量%
		猪肝	92.32
苛性钠	3.70
		抗氧化剂	0.15
柠檬酸	0.03
		抗坏血酸	0.02
美拉德成分	3.4
		酶：碱性肽链内切酶	0.384

如上所述测量DH值。结果在下表6中报道。

表6

	液体消化产物1	液体消化产物2
			DH%	36.2	60.3

猫粉末组合物1或2经1.5重量%干燥猫粗粒撒粉（所述干燥猫粗粒之前由6%的家禽脂肪涂布）。将两种宠物食品，猫食1和猫食2，呈现给猫以用于如上所述的适口性评价。

表7：猫适口性结果

如表7所示，猫食1与猫食2之间的食品消耗显著不同，表明相比于使用中性肽链内切酶而获得的消化物，通过使用碱性肽链内切酶而获得的消化物对于猫具有更高的适口性。

实施例3：

在该实施例中，

组合物3为通过使用中性肽链内切酶水解家禽内脏（液体消化产物3）以及之后的干燥步骤而获得的市售范围SPF 

的优质干燥猫PE。

组合物4以与如上实施例1中的组合物A相同的方式制得。

如上所述确定DH值。结果示于表8中：

表8

	液体消化产物3	液体消化产物4
			DH%	34.8	62.2

组合物3或4经1.5重量%干燥猫粗粒撒粉（所述干燥猫粗粒之前由6%的家禽脂肪涂布）。将两种猫食3和4呈现给猫们以用于适口性评价。

表9

如表9所示，猫食3与猫食4之间的食品消耗显著不同，表明相比于使用中性肽链内切酶而获得的消化物，通过使用碱性肽链内切酶而获得的消化物对于猫具有更高的适口性。

实施例4：

在该实施例中，

液体消化产物5为通过使用中性肽链内切酶水解猪内脏而获得的市售范围SPF D'TECH的优质液体狗PE。

液体消化产物6：施用过程类似于实施例2中所用的过程——液体消化产物6的配方详细示于表10中：

表10

液体消化产物6的配方	液体消化产物6的重量%
		猪肝&肺	92.80
苛性钠	3.22
		抗氧化剂	0.15
柠檬酸	0.03
		抗坏血酸	0.02
美拉德成分	3.4
		酶：碱性肽链内切酶	0.384

液体消化产物6在该实施例中不干燥，但冷却，并通过添加山梨酸钾、抗氧化剂和磷酸而稳定化，以获得pH为2.9的最终液体狗消化物。

如上所述测量DH。结果示于表11中。

表11

	液体消化产物5	液体消化产物6
			DH%	40.7	55.2

液体狗消化物5或6经3重量%狗粗粒喷射（所述狗粗粒之前由6%的猪脂涂布）。将所得干燥狗食5和6呈现给狗，以用于如上所述的适口性评价。

表12：适口性结果：

如表12所示，狗食4与狗食5之间的食品消耗显著不同，表明相比于使用中性肽链内切酶而获得的消化物，通过使用碱性肽链内切酶而获得的消化物的更高的适口性。

引文

A.O.A.C.1995.Official methods of analysis.第16版，Ch.12Horowitz，Washington,DC，第7-9页

Hung等人.1984.J.Food Sci.49:1535-1542

Silvestre.1997.Food Chem.60:263-273

Nielsen等人.2001.J.Food Sci.66:642-646

Claims (16)

1.一种用于制备具有增强适口性的动物消化物的方法，所述方法包括：

a）提供动物内脏；

b）使所述动物内脏与至少一种碱性肽链内切酶接触；

c）使所述碱性肽链内切酶水解所述动物内脏；

d）热处理由此获得的消化产物以使所述碱性肽链内切酶失活；以及

e）获得具有增强适口性的所述动物消化物，

其中：

（i）如果所述碱性肽链内切酶以在步骤d）之后获得的消化产物的重量计约0.017至0.682%的量（E）使用：

-则步骤c）中的所述水解在约1.5至约5.0小时的时间段（T）过程中进行；且

-在步骤d）之后获得的消化产物具有约45至约70%的水解度（DH），所述DH由等式（1）限定：

DH=25.5072+0.2104xE+16.5265xT-2.3666xT²-15.6816xE²+9.1270xExT

（ii）如果所述碱性肽链内切酶以在步骤d）之后获得的消化产物的重量计0.717至约1.137%的量（E）使用：

-则步骤c）中的所述水解在约0.25至约4.0小时的时间段（T）过程中进行；且

-在步骤d）之后获得的消化产物具有约45至约70%的水解度（DH），所述DH由等式（2）限定：

DH=22.9718+43.58xE+7.6128xT-0.6199xT²-21.2226xE²+2.3467xExT

（iii）如果所述碱性肽链内切酶以在步骤d）之后获得的消化产物的重量计0.682至0.717%之间的量（E）使用：

-则步骤c）中的所述水解在约1.5至约4.0小时的时间段（T）过程中进行；且

-在步骤d）之后获得的消化产物具有优选约50至约70%的水解度（DH）。

2.根据权利要求1所述的方法，其还包括在所述步骤a）之后的调节所述动物内脏的pH的步骤a1）。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其还包括将一种或多种美拉德成分添加至所述步骤c）的消化产物中的步骤c1）。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述步骤d）适于促进得自所述步骤c或c1）的消化产物中的一个或多个热反应。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其还包括过滤得自步骤d）的消化产物的步骤d1）。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其还包括冷却得自所述步骤d）和d1）中的在后步骤的消化产物的步骤d2）。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述步骤d2）与所述步骤d1）伴随，所述步骤d1）和d2）在得自步骤d）的消化产物上进行。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述量E以获自所述步骤d）或d1）或d2）的消化产物的重量计，且其中所述DH为获自所述步骤d）或d1）或d2）的所述消化产物所具有。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其还包括将一种或多种宠物食品成分添加至得自所述步骤d）、d1）和d2）中的在后步骤的消化产物中的步骤d3）。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其还包括浓缩得自所述步骤d）、d1）、d2）和d3）中的在后步骤的消化产物的步骤d4）。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其还包括冷冻得自所述步骤d）、d1）、d2）、d3）和d4）中的在后步骤的消化产物的步骤d5）。

12.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其还包括干燥得自所述步骤d）、d1）、d2）、d3）和d4）中的在后步骤的消化产物的步骤d6）。

13.一种通过根据权利要求1至12中任一项所述的方法获得的具有增强适口性的动物消化物。

14.一种包含宠物食品混合物和根据权利要求13所述的至少一种动物消化物的具有增强适口性的宠物食品。

15.一种用于制备根据权利要求14所述的具有增强适口性的宠物食品的方法，其中将所述动物消化物掺入所述宠物食品混合物中。

16.一种用于制备根据权利要求14所述的具有增强适口性的宠物食品的方法，其中使用所述动物消化物涂布所述宠物食品混合物。

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