CN103833871A - 一种透明质酸-己二酸二酰肼-百里醌接枝物、合成方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种透明质酸-己二酸二酰肼-百里醌接枝物、合成方法及其应用,属于药物制剂领域。首先合成透明质酸-己二酸二酰肼,然后将百里醌接上去,最后形成透明质酸-己二酸二酰肼-百里醌接枝物。与现有技术相比,本发明以己二酸二酰肼为连接桥,将百里醌连接在透明质酸上,所得接枝物具有pH敏感性释放特性,能够显著提高百里醌肿瘤靶向性。
Description
技术领域
本发明涉及一种透明质酸-己二酸二酰肼-百里醌接枝物及其合成方法,属于药物制剂领域。
背景技术
百里醌(thymoquinone,TQ)是近年来从黑种草籽油中分离出来的主要有效单体,研究发现其具有潜在的防癌和抑癌效应,可抑制结肠癌、乳腺癌、胰腺癌和肺癌等多种肿瘤细胞生长,并诱导细胞凋亡;百里醌还能抑制前列腺癌等多种恶性肿瘤转移。但是百里醌水溶性极差,制成一般的制剂,体内生物利用度太低,无法满足抗肿瘤的要求。因此,开发新的载体来提高其生物利用度值得深入研究。
细胞表面受体多样,选择合适的受体及其配体是实现药物主动勒向的关键,CD44是研究比较广泛的细胞表面受体,在肿瘤的发生、发展方面具有重要的作用。CD44是一种细胞表面广泛表达的跨膜糖蛋白,可以与细胞外基质或其配体结合,参与细胞粘附,信息传导等生理功能的调节。采用透明质酸(HA)可以作为靶向因子靶向高度表达CD44的肿瘤部位,达到药物肿瘤主动靶向的目的。目前HA作为肿瘤祀向因子的研究广泛,而且抗癌疗效显著,是理想的靶向因子选择。
透明质酸(HA)是一种由N-乙酰-D-葡萄糖胺和D-葡萄糖酸酸经P-1,4糖苷键连接而成的线性高分子氨基葡聚糖。透明质酸为水溶性材料,具有一定的粘度和保水性。且HA具有很多优势:水溶性好,生物可降解,生物相容性好,无毒,无免疫原性,容易进行化学修饰等。
发明内容
本发明的目的在于,提供一种透明质酸(HA)-己二酸二酰肼(ADH)-百里醌(TQ)接枝物及其合成方法,这种接枝物能够提高百里醌的溶解度和生物利用度,并且能够使百里醌实现肿瘤主动靶向性。
本发明是采用下述方案实现的:
本发明提供了一种透明质酸-己二酸二酰肼-百里醌接枝物,其结构如下:
n=10-30。
本发明还提供了上述透明质酸-己二酸二酰肼-百里醌接枝物的合成方法,包括如下步骤:
(1)透明质酸-己二酸二酰肼(HA-ADH)接枝物的合成:
①反应:以重量份计,取透明质酸100-300份,加入到浓度为(0.05-0.15)mol/L的己二酸二酰肼水溶液中,用盐酸调节pH至4.75,然后加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐,反应1-3h,期间每隔5-10min用盐酸调节pH使其维持在4.75;
②终止:上述反应时间结束时,用氢氧化钠调节其pH至7.0,终止反应,得反应液A;
③透析过滤:将上述反应液A放入透析袋中,依次用0.1mol/L的氯化钠溶液、乙醇-水体积比为25∶75的乙醇水溶液和双蒸水透析,完成后微孔滤膜过滤,冷冻干燥,得冻干粉,4℃保存备用;
(2)透明质酸-己二酸二酰肼-百里醌(HA-ADH-TQ)接枝物的合成:
①反应:取一定量上述冻干粉和过量百里醌,分别用双蒸水和乙醇溶解,所述水和乙醇的体积比为60∶40,然后混合,60℃避光反应3-8h,得反应液B;
②纯化:将上述反应液B放入透析袋中,用乙醇透析,完成后离心,取出下层沉淀用乙醇洗涤,干燥,即得。
作为优选,所述透明质酸的分子量为2000-8000。
作为另一种优选,所述透析袋的分子量为1000-3500,透析时间为1-2天。
作为另一种优选,所述步骤(2)中的离心条件为(1000-10000)r/min,离心时间为5-10min。
最后,本发明还提供了所述透明质酸-己二酸二酰肼-百里醌接枝物在制备抗肿瘤注射制剂或者口服制剂中的应用。
如说明书附图1所示,本发明以己二酸二酰肼为连接桥,将百里醌连接在透明质酸上,所得接枝物具有pH敏感性释放特性,能够显著提高百里醌肿瘤靶向性。
附图说明
图1为透明质酸-己二酸二酰肼-百里醌接枝物的合成流程图;
图2为TQ、HA、HA-ADH和HA-ADH-TQ的紫外吸收图谱;
图3为HA、ADH、TQ、HA-ADH和HA-ADH-TQ的质谱图;
图4为TQ的红外图谱;
图5为HA-ADH的红外图谱;
图6为HA-ADH-TQ的红外图谱;
具体实施方式
实施例1
(1)透明质酸-己二酸二酰肼接枝物的合成:
①反应:取透明质酸100mg,分子量为2000,加入到浓度为0.05mol/L的己二酸二酰肼水溶液中,用盐酸调节pH至4.75,然后加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐,反应1h,期间每隔5min用盐酸调节pH使其维持在4.75;
②终止:上述反应时间结束时,用氢氧化钠调节其pH至7.0,终止反应,得反应液A;
③透析过滤:将上述反应液A放入分子量为1000的透析袋中,依次用0.1mol/L的氯化钠溶液、乙醇-水体积比为25∶75的乙醇水溶液和双蒸水透析,透析时间为1天,完成后微孔滤膜过滤,冷冻干燥,得冻干粉,4℃保存备用;
(2)透明质酸-己二酸二酰肼-百里醌接枝物的合成:
①反应:取一定量上述冻干粉和过量百里醌,分别用双蒸水和乙醇溶解,所述水和乙醇的体积比为60∶40,然后混合,60℃避光反应3h,得反应液B;
②纯化:将上述反应液B放入透析袋中,用乙醇透析,完成后1000r/min离心10min,取出下层沉淀用乙醇洗涤,干燥,即得。
实施例2
(1)透明质酸-己二酸二酰肼接枝物的合成:
①反应:取透明质酸300mg,分子量为5000,加入到浓度为0.15mol/L的己二酸二酰肼水溶液中,用盐酸调节pH至4.75,然后加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐,反应3h,期间每隔10min用盐酸调节pH使其维持在4.75;
②终止:上述反应时间结束时,用氢氧化钠调节其pH至7.0,终止反应,得反应液A;
③透析过滤:将上述反应液A放入分子量为3500的透析袋中,依次用0.1mol/L的氯化钠溶液、乙醇-水体积比为25∶75的乙醇水溶液和双蒸水透析,透析时间为2天,完成后微孔滤膜过滤,冷冻干燥,得冻干粉,4℃保存备用;
(2)透明质酸-己二酸二酰肼-百里醌接枝物的合成:
①反应:取一定量上述冻干粉和过量百里醌,分别用双蒸水和乙醇溶解,所述水和乙醇的体积比为60∶40,然后混合,60℃避光反应8h,得反应液B;
②纯化:将上述反应液B放入透析袋中,用乙醇透析,完成后10000r/min离心5min,取出下层沉淀用乙醇洗涤,干燥,即得。
实施例3
(1)透明质酸-己二酸二酰肼接枝物的合成:
①反应:取透明质酸200mg,分子量为3000,加入到浓度为0.1mol/L的己二酸二酰肼水溶液中,用盐酸调节pH至4.75,然后加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐,反应2h,期间每隔5min用盐酸调节pH使其维持在4.75;
②终止:上述反应时间结束时,用氢氧化钠调节其pH至7.0,终止反应,得反应液A;
③透析过滤:将上述反应液A放入分子量为3500的透析袋中,依次用0.1mol/L的氯化钠溶液、乙醇-水体积比为25∶75的乙醇水溶液和双蒸水透析,透析时间为2天,完成后微孔滤膜过滤,冷冻干燥,得冻干粉,4℃保存备用;
(2)透明质酸-己二酸二酰肼-百里醌接枝物的合成:
①反应:取一定量上述冻干粉和过量百里醌,分别用双蒸水和乙醇溶解,所述水和乙醇的体积比为60∶40,然后混合,60℃避光反应5h,得反应液B;
②纯化:将上述反应液B放入透析袋中,用乙醇透析,完成后50000r/min离心5min,取出下层沉淀用乙醇洗涤,干燥,即得。
实施例4透明质酸-己二酸二酰肼-百里醌接枝物的表征
将实施例3所制得的接枝物进行紫外分光光度法分析、质谱和红外光谱验证。
紫外分光光度法分析所得结果,如说明书附图2所示,HA和HA-ADH在200-500nm均没有最大吸收,TQ在260nm左右有最大吸收,而合成形成的HA-ADH-TQ最大吸收峰位置改变,在350nm左右有最大吸收。
质谱分析结果,如说明书附图3所示,HA的特征峰在2.01ppm和3.28-4.75ppm,而己二酸二酰肼和TQ的特征峰分别位于(1.63-1.79,2.19-2.45ppm)和(1.1,2.0,3.0和6.5ppm)。由HA-ADH和HA-ADH-TQ质谱图对比可得,HA-ADH-TQ质谱图在1.1,3.0和6.5ppm处多出三个特征峰,即为TQ的特征峰,证明TQ被成功的接入到HA-ADH上。
红外光谱分析结果,如说明书附图4、5和6所示,NH和OH键的伸缩振动峰在3500-3100cm-1范围内,相对应着HA-ADH中的腙键和羟基。在1700-1500cm-1范围内有三个特征峰,对应着C=O键(1645cm-1)、C=C键(1617cm-1)、和C=N键(1552cm-1),C=N键证明了腙键的形成。此外,与TQ质谱图相比较,接枝物中C=O键密度降低,也证明了腙键的形成。
实施例5透明质酸-己二酸二酰肼-百里醌接枝物中百里醌的体外释放
释放介质分别为pH=5和6的乙酸缓冲液、pH=7.4的磷酸盐缓冲液。分别精确称量2mg HA-ADH-TQ(其中TQ232ug)接枝物溶解在于释放介质相对应的媒介中,并转移到透析袋(MWCO2000DA),放入玻璃容器中完全浸没在释放介质中,密封,避光,在37℃的水浴下震荡。以固定的时间间隔,将样品取出并用相同体积的新鲜释放介质替换。药物释放测量用HPLC。所有实验平行做三份。
百里醌是通过对酸敏感的腙键偶联到HA,所以药物是pH依赖性释放,使用三种不同pH的释放介质(5,6,7.4),如说明书附图7所示,在最初的24小时内百里醌的释放量分别大约是56%,36%和17%,4天后的释放量大约是74%(pH5)和60%(pH6)但是pH7.4的只有35%。当酸敏感键断裂后,百里醌先要从接枝物所形成的聚集体中释放,然后再扩散出去。百里醌在生理pH7.4下相对较少的释放,将有助于减少药物在体循环中的损失,从而确保所载药物在pH较低的肿瘤附近释放。
实施例6活体成像实验
小鼠淋巴瘤细胞(EL4)在含有10%胎牛血清的RPMI1640培养48小时(80%铺满),要求在37℃含5%CO2的潮湿环境中。取上述小鼠淋巴瘤细胞约(1-1.5*10^6)个,皮下接种于C57/BL6小鼠的腋下区域(8周龄,20-25g重)。使用FITC作为荧光探针偶联到HA-ADH-TQ接枝物形成HA-ADH-TQ-FITC接枝物。接种肿瘤后10天,将HA-ADH-TQ-FITC接枝物溶解在pH7.4的PBS中,以20mg/kg的剂量注射到荷瘤小鼠的尾静脉中,研究它们在动物体内的生物分布和肿瘤靶向功效。离体成像实验是用注射2-8小时后的动物,处死取器官,用体内成像系统(Carestream Health inc美国)拍照,用(Carestreame分子成像软件)进行图像分析。
结果如说明书附图8所示,显示出接枝物在注射2小时后非常快速和有选择的在肿瘤组织聚集,8小时后进一步聚集,这主要归因于淋巴瘤细胞中的CD44受体的过度表达而主动摄取。需要注意到,在肺和肾脏有微弱的荧光信号,也是因为HA受体在这些组织中有存在。然而相比于肿瘤中是极少的。对于心脏,肝脏和脾脏没有检测到显著的荧光信号,这也进一步说明了,接枝物能够避免被肝脏摄取,从而能够更长时间的循环。
Claims (6)
2.权利要求1所述透明质酸-己二酸二酰肼-百里醌接枝物的合成方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)透明质酸-己二酸二酰肼接枝物的合成:
①反应:以重量份计,取透明质酸100-300份,加入到浓度为(0.05-0.15)mol/L的己二酸二酰肼水溶液中,用盐酸调节pH至4.75,然后加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐,反应1-3h,期间每隔5-10min用盐酸调节pH使其维持在4.75;
②终止:上述反应时间结束时,用氢氧化钠调节其pH至7.0,终止反应,得反应液A;
③透析过滤:将上述反应液A放入透析袋中,依次用0.1mol/L的氯化钠溶液、乙醇-水体积比为25∶75的乙醇水溶液和双蒸水透析,完成后微孔滤膜过滤,冷冻干燥,得冻干粉,4℃保存备用;
(2)透明质酸-己二酸二酰肼-百里醌接枝物的合成:
①反应:取一定量上述冻干粉和过量百里醌,分别用双蒸水和乙醇溶解,所述水和乙醇的体积比为60∶40,然后混合,60℃避光反应3-8h,得反应液B;
②纯化:将上述反应液B放入透析袋中,用乙醇透析,完成后离心,取出下层沉淀用乙醇洗涤,干燥,即得。
3.根据权利要求2所述透明质酸-己二酸二酰肼-百里醌接枝物的合成方法,其特征在于,所述透明质酸的分子量为2000-8000。
4.根据权利要求2所述透明质酸-己二酸二酰肼-百里醌接枝物的合成方法,其特征在于,所述透析袋的分子量为1000-3500,透析时间为1-2天。
5.根据权利要求2所述透明质酸-己二酸二酰肼-百里醌接枝物的合成方法,其特征在于,所述步骤(2)中的离心条件为(1000-10000)r/min,离心时间为5-10min。
6.权利要求1所述透明质酸-己二酸二酰肼-百里醌接枝物在制备抗肿瘤制剂中的应用,其特征在于,所述透明质酸-己二酸二酰肼-百里醌接枝物在制备抗肿瘤注射制剂或者口服制剂中的应用。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110041222A (zh) * | 2019-05-10 | 2019-07-23 | 江苏耐雀生物工程技术有限公司 | 百里醌衍生物、中间体、制备方法及其应用 |
CN113730577A (zh) * | 2021-09-07 | 2021-12-03 | 浙江大学 | 一种侧链接枝有苯硼酸的具有消除活性氧功能的席夫碱水凝胶材料及其制备方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20090170195A1 (en) * | 2007-12-28 | 2009-07-02 | Kent State University | Curcumin-hyaluronan compounds |
CN102762647A (zh) * | 2010-02-12 | 2012-10-31 | 财团法人国家卫生研究院 | 交联氧化透明质酸作为眼球玻璃体之替代物 |
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20090170195A1 (en) * | 2007-12-28 | 2009-07-02 | Kent State University | Curcumin-hyaluronan compounds |
CN102762647A (zh) * | 2010-02-12 | 2012-10-31 | 财团法人国家卫生研究院 | 交联氧化透明质酸作为眼球玻璃体之替代物 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
REGINE SCHNEIDER-STOCK,ET AL.: "Thymoquinone:fifty years of success in the battle against cancer models", 《DRUG DISCOVERY TODAY》 * |
SANJAR ALAM,ET AL.: "Development and evaluation of thymoquinone-encapsulated chitosan nanoparticles for nose-to-brain targeting: a pharmacoscintigraphic study", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF NANOMEDICINE》 * |
许载阳,等: "透明质酸-己二酸二酰肼中间体的活性氨基的测定", 《华西药学杂志》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110041222A (zh) * | 2019-05-10 | 2019-07-23 | 江苏耐雀生物工程技术有限公司 | 百里醌衍生物、中间体、制备方法及其应用 |
CN113730577A (zh) * | 2021-09-07 | 2021-12-03 | 浙江大学 | 一种侧链接枝有苯硼酸的具有消除活性氧功能的席夫碱水凝胶材料及其制备方法 |
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