CN103833671B - 一类二氢噻唑酮类化合物及其药物组合物和用途 - Google Patents

一类二氢噻唑酮类化合物及其药物组合物和用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供了通式(I)所示的二氢噻唑酮类化合物及其药物组合物和用途。该类化合物可以结合具有bromodomain结构域的蛋白，从而调节下游的信号通路，发挥特定功能，可用于治疗与bromodomain结构域蛋白相关的多种疾病。该类化合物可干扰具有bromodomain结构域的Brd4与乙酰化组蛋白的结合，进而下调癌基因c‑myc和其相关靶基因的转录，因此可以成为肿瘤的有效治疗药物。

Description

一类二氢噻唑酮类化合物及其药物组合物和用途
技术领域
本发明涉及药物合成领域，具体而言，本发明涉及一类二氢噻唑酮类化合物及其药物组合物和用途。
背景技术
表观遗传变异是指在基因的DNA序列没有发生改变的情况下，基因功能发生了可遗传的变化，并最终导致了表型的变化。染色质由DNA、组蛋白和非组蛋白构成。核小体是染色质的基本重复组成单位，由组蛋白H3、H4、H2A、H2B构成的八聚体以及位于核小体外部的组蛋白H1和缠绕在其外的含146个碱基对的DNA构成。染色质的状态对于调控基因转录具有重要作用。表观遗传学涉及到DNA甲基化、组蛋白修饰、染色体重塑和非编码RNA调控等，其中组蛋白修饰包括组蛋白的乙酰化、磷酸化、甲基化、泛素化及ADP核糖基化等，这些多样化的修饰以及它们在时间和空间上的组合与生物学功能的关系又可作为一种重要的表观标志或语言，因而被称为“组蛋白密码”。
Bromodomain结构域是一进化上高度保守的110个氨基酸的蛋白质功能结构域，可特异性识别组蛋白末端乙酰化的赖氨酸位点，通过染色质的组装和乙酰化而参与信号依赖性的、非基础性的基因转录调控；Bromodomain亦可通过对转录因子等非组蛋白的乙酰化修饰而广泛参与细胞周期调控、细胞分化、信号转导等过程。如含Bromodomain结构域的BET家族包括四个蛋白（Brd2，Brd3，Brd4和BRDT），每个蛋白都包含两个独立的Bromodomain结构域用来识别组蛋白末端乙酰化的赖氨酸位点。
癌基因c-myc广泛参与多种肿瘤发生发展过程，并且与肿瘤药物治疗反应性紧密相关。研究表明，c-myc在人类多种肿瘤中异常表达，通过调控细胞周期进程、细胞的生长代谢、遗传不稳定性、促进血管生成、细胞恶性转化、分化及凋亡对肿瘤恶性演进发挥重要推动作用；抑制c-Myc的活性能够显著抑制肿瘤的增殖生长。这些发现提示c-Myc是一个潜在的抗肿瘤靶点。
然而，c-Myc作为一个转录因子，很难从其自身结构中找到合适的结构域进行小分子设计，破坏其与DNA的相互作用。最近研究表明，c-myc基因转录启动前，其启动子区域需要进行表观遗传学修饰。该区域组蛋白赖氨酸残基被乙酰化修饰，从而募集具有bromodomain结构域的蛋白Brd4，后者通过和转录延伸因子P-TEFb相互作用，调控c-myc转录复合物的形成。因此，如果设计小分子干扰Brd4与乙酰化组蛋白的结合，将有可能抑制c-myc的转录。研究证明，影响Brd4和乙酰化组蛋白结合的小分子抑制剂JQ1，可以显著下调c-myc和其相关靶基因的转录。采用3种肿瘤研究模型证实，JQ1均可以有效抑制肿瘤细胞的增殖，提示针对Brd4的靶向抑制剂很有希望成为c-myc高表达肿瘤的有效治疗药物。
发明内容
本发明的一个目的是提供一类二氢噻唑酮类化合物或其药学上可接受的盐。
本发明的又一目的是提供该类化合物在制备药物中的用途。该类化合物可以有效结合具有bromodomain结构域的蛋白，从而调节下游的信号通路，发挥特定功能，可用于治疗与bromodomain结构域蛋白相关的多种疾病。该类化合物可干扰具有bromodomain结构域的Brd4与乙酰化组蛋白的结合，进而下调癌基因c-myc和其相关靶基因的转录，因此可以成为肿瘤的有效治疗药物。
本发明的再一目的是提供包含该类化合物作为活性成分的药物组合物。
为了实现上述目的，本发明提供了如下通式(I)所示的二氢噻唑酮类化合物或其药学上可接受的盐：
其中：
R1为H、羟基、氨基、卤素或C1-C6烷基；
R2和R3相同或不同，且各自独立地为H、羟基、氨基、卤素或C1-C6烷基；
R4和R6相同或不同，且各自独立地为H、卤素、羟基、氨基、硝基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-NHS(O)2-L-R7、-NHC(O)-L-R7或-NH-L-R7；
R5为H、卤素、羟基、氨基、硝基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、-NHS(O)2-L-R7、-NHC(O)-L-R7或-NH-L-R7；
其中，L为(CH2)m；
m为0至6的整数；
R7为甲基；C1-C6烷氧基；由一个或者两个C1-C4烷基取代的氨基；C3-C8环烷基；C6-C10芳基；含有1-3个选自N、O和S中的杂原子的5-8元杂芳基；含有1-3个选自N、O和S中的杂原子的4-8元杂环基；其中，所述C3-C8环烷基、C6-C10芳基、5-8元杂芳基或4-8元杂环基非必须地被选自卤素、羟基、氨基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基中的取代基所取代；
所述卤素为氟、氯、溴或碘，优选为氟、氯或溴。
优选地，在通式I化合物中，
R1为H、羟基、氨基、卤素或C1-C4烷基；
R2和R3相同或不同，且各自独立地为H、羟基、氨基、卤素或C1-C4烷基；
R4和R6相同或不同，且各自独立地为H、卤素、羟基、氨基、硝基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、-NHS(O)2-L-R7、-NHC(O)-L-R7或-NH-L-R7；
R5为H、卤素、羟基、氨基、硝基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、-NHS(O)2-L-R7、-NHC(O)-L-R7或-NH-L-R7；
其中，L为(CH2)m；
m为0至4的整数；
R7为甲基；C1-C4烷氧基；由一个或者两个C1-C2烷基取代的氨基；C3-C6环烷基；C6-C10芳基；含有1-3个选自N、O和S中的杂原子的5-7元杂芳基；含有1-3个选自N、O和S中的杂原子的4-7元杂环基；其中，所述C3-C6环烷基、C6-C10芳基、5-7元杂芳基或4-7元杂环基非必须地被选自卤素、羟基、氨基、C1-C2烷基、C1-C2烷氧基中的取代基所取代。
更优选地，在通式I化合物中，
R1为H或甲基；
R2和R3相同或不同，且各自独立地为H、羟基或甲基；
R4和R6相同或不同，且各自独立地为H、卤素、羟基、氨基、甲氧基、-NHS(O)2-L-R7、-NHC(O)-L-R7或-NH-L-R7；
R5为H、卤素、羟基、氨基、甲氧基、-NHS(O)2-L-R7、-NHC(O)-L-R7或-NH-L-R7；
其中，L为(CH2)m；
m为0至2的整数；
R7为甲基；甲氧基；二甲氨基；环戊基；环己基；未取代或由卤素、氨基或甲氧基取代的苯基；萘基；噻吩基；吡啶基；或喹啉基。
本发明的化合物优选为：
通式(I)所示的化合物可以含有不对称或手性中心，因此可以以不同立体异构形式存在。本发明化合物的所有立体异构形式，包括但不限于非对映异构体、对映异构体和阻转异构体以及它们的混合物(如外消旋混合物)，均包括在本发明的范围内。
通式(I)所示的化合物还可以以不同互变异构形式存在，所有这些形式均包括在本发明范围内。术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指经由低能垒相互转化的不同能量的结构异构体。
通式(I)所示的化合物可以以非溶剂化形式和含有药学上可接受的溶剂(如水、乙醇等)的溶剂化形式存在，本发明包括溶剂化和非溶剂化形式。
通式(I)所示的化合物具有碱性基团，因此可与无机酸或有机酸形成“药学上可接受的盐”，包括可药用酸加成盐，通过用无机酸或有机酸处理通式(I)所示的化合物的游离碱，可以得到药学上可接受的盐，所述的无机酸如盐酸、氢溴酸、磷酸和硫酸，所述的有机酸如抗坏血酸、烟酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、马来酸、丙二酸、富马酸、草酸、苹果酸、乙醇酸、琥珀酸、丙酸、乙酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等。
本发明通式(I)所示的化合物可以通过包括化学领域众所周知的那些方法来合成，尤其根据本发明的说明来合成。原料一般可以从商业来源如西格玛奥德里奇公司获得，或者使用本领域技术人员熟知的方法容易地制备。
本发明提供的通式(I)表示的化合物可以通过下述反应方程式所示的合成路线进行制备。
步骤a:化合物A与溴化铜反应得到化合物B；
步骤b:化合物B与硫氰酸钾反应得到化合物C；
步骤c:化合物C在50%硫酸中回流得到化合物D；
步骤d:用还原剂还原化合物D得到化合物E；
步骤e:化合物E与相应的磺酰氯反应得到通式(I)表示的化合物；
或者，化合物E与相应的酰氯反应得到通式(I)表示的化合物；
或者，化合物E与相应的溴代化合物反应得到通式(I)表示的化合物；
其中，在步骤a中，化合物A与溴化铜回流过夜得到化合物B，可以使用的溶剂为乙酸乙酯、三氯甲烷等；
在步骤b中，化合物B与硫氰酸钾在室温下搅拌10分钟得到化合物C，可以使用的溶剂为丙酮、二甲基甲酰胺等；
在步骤c中，将化合物C溶于冰醋酸和50%硫酸中，加热回流1小时得化合物D；
在步骤d中，所述还原剂为铁粉和氯化铵的水溶液、锌粉等；反应溶剂为乙醇、冰乙酸、盐酸等，回流数小时得化合物E；
在步骤e中，可以将化合物E溶于二氯甲烷和吡啶的混合溶剂中，氩气保护下加入等当量相应的磺酰氯室温反应半小时得到通式(I)表示的化合物，其中R4为-NHS(O)2-L-R7；
或者，可以将化合物E溶于无水DMF中，氩气保护下加入相应的酰氯、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸和二异丙基乙胺，室温反应过夜得到通式(I)表示的化合物，其中R4为-NHC(O)-L-R7；
或者，可以将化合物E溶于无水DMF中，氩气保护下加入相应的溴代化合物、2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯、三(二亚苄-BASE丙酮)二钯(0)和碳酸铯120℃微波反应1小时得到通式(I)表示的化合物，其中R4为-NH-L-R7；
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和L的定义如上所述。
本发明的另一目的是提供通式(I)所示的二氢噻唑酮类化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗与bromodomain结构域蛋白相关疾病的药物中的用途。
通式(I)所示的二氢噻唑酮类化合物或其药学上可接受的盐可以有效结合具有bromodomain结构域的蛋白，从而调节下游的信号通路，发挥特定功能，可用于治疗与bromodomain结构域蛋白相关的多种疾病。如该类化合物可干扰具有bromodomain结构域的Brd4与乙酰化组蛋白的结合，进而下调癌基因c-myc和其相关靶基因的转录，因此可以成为肿瘤的有效治疗药物。
因此，本发明的另一目的是提供通式(I)所示的二氢噻唑酮类化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗肿瘤的药物中的用途。所述肿瘤为可为但不限于多发性骨髓瘤、胃癌、肺癌、乳腺癌、食管癌、结肠癌、髓母细胞瘤、急性粒细胞白血病、前列腺癌、肝细胞癌、肾细胞癌、宫颈癌、皮肤癌、卵巢癌、胰腺癌。
本发明的另一目的在于提供一种药物组合物，其包含治疗有效量的一种或多种通式(I)所示的二氢噻唑酮类化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅料。
本发明的又一目的是提供一种预防或治疗与bromodomain结构域蛋白相关疾病的方法，所述方法包括施用治疗有效量的通式(I)所示的二氢噻唑酮类化合物或其药学上可接受的盐或本发明的上述药物组合物给患者。
具体实施方式
不需进一步详细说明，认为本领域熟练技术人员借助前面的描述，可以最大程度地利用本发明。因此，下面提供的实施例仅仅是进一步阐明本发明而己，并不意味着以任何方式限制本发明范围。
原料可以从商业途径获得，或者通过本领域已知的方法制备，或根据本文所述方法制备。
化合物的结构通过核磁共振(1H-NMR)和/或质谱(MS)来确定。NMR测定是用VarianAMX-400型核磁共振仪，测定溶剂为氘代氯仿(CDCl3)或氘代二甲亚砜(DMSO-D6)，TMS为内标。MS的测定用Thermo Finnigan LCQ-Deca XP型(ESI)液相色谱-质谱联用仪。柱层析分离纯化产物使用的是ISCORf 75快速制备色谱仪，载体采用青岛海洋化工厂的200-300目硅胶。微波加热使用的是Biotage Initiator微波合成仪。
制备实施例：
实施例1：
合成路线为：
试剂与条件：a)溴化铜，乙酸乙酯，80℃；b)硫氰酸钾，丙酮，室温；50%硫酸，冰乙酸，100℃
a)3-氯苯乙酮（0.2g,1.294mmol）和溴化铜（0.347g,1.552mmol）依次溶于乙酸乙酯（30mL）中，加热至80℃搅拌过夜，反应液冷却至室温，再加入30mL乙酸乙酯，依次用100mL水，100mL饱和氯化钠溶液萃取，分出乙酸乙酯层，用无水硫酸钠干燥，减压蒸去有机溶剂，残留物通过快速硅胶柱色谱纯化，使用石油醚/乙酸乙酯(V/V=10：1)洗脱，得到2-溴-1-(3-氯苯基)乙酮220mg，为白色固体，收率72.8%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.94(td,J=5.8,3.0Hz,1H),7.88–7.83(m,1H),7.61–7.54(m,1H),7.48–7.40(m,1H),4.46–4.41(m,2H).
b)2-溴-1-(3-氯苯基)乙酮(0.1g,0.428mmol)溶于20mL无水丙酮中，加入硫氰酸钾（166mg,1.731mmol），室温搅拌10分钟，减压蒸去溶剂，残留物不需纯化，直接加入5mL冰乙酸和1mL 50%硫酸，加热至100℃搅拌30分钟，反应液倒入冰水中，过滤析出淡黄色固体，干燥。粗品通过快速硅胶柱色谱纯化，使用二氯甲烷/甲醇(V/V=20：1)洗脱，得到标题化合物62mg，为白色固体，收率68.4%。MS(ES):m/z 212.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.85(s,1H),7.78(t,J=1.8Hz,1H),7.64(dt,J=7.5,1.5Hz,1H),7.46(t,J=7.7Hz,1H),7.44-7.40(m,1H),7.00(d,J=1.6Hz,1H).
按照与制备实施例1相同的方法制备下列化合物：
实施例5：
合成路线为：
按照与制备实施例1相同的方法实施步骤a和b。步骤c的具体步骤为：4-(3-硝基苯基)噻唑-2(3H)-酮（1.05g,4.73mmol）溶于20mL乙醇中，氯化铵（1.264g,23.66mmol）溶于5mL水中加入反应液中，再加入还原铁粉（1.319g,23.66mmol），反应液加热至80℃搅拌30分钟，反应液以乙酸乙酯稀释，通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，残留物通过快速硅胶柱色谱纯化，使用二氯甲烷/甲醇(V/V=20：1)洗脱，得到标题化合物700mg，为淡黄色固体，收率77%。MS(ES):m/z 193.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.62(s,1H),7.05(t,J=7.7Hz,1H),6.78–6.73(m,2H),6.57(ddd,J=8.0,2.2,1.0Hz,1H),6.53(d,J=1.6Hz,1H),5.21(s,2H).
按照与制备实施例5相同的方法制备下列化合物：
实施例9：
合成路线为：
a步具体步骤为：2-羟基苯乙酮（11.3g,83mmol）溶于100mL冰乙酸中，冰浴下30分钟内滴加发烟硝酸（5.57mL,125mmol），滴加完毕继续冰浴下搅拌1小时，升至室温搅拌16小时。反应液倒入冰水中，过滤析出的固体，水洗，干燥，固体通过快速硅胶柱色谱纯化，使用石油醚/乙酸乙酯(V/V=5：1)洗脱，得到1-（2-羟基-5-硝基苯基）乙酮5.3g，为淡黄色固体，收率35.2%。1H NMR(400MHz,DMSO)δ6.65(t,J=5.3Hz,2H),6.51(s,1H),6.47(dd,J=8.5,2.7Hz,1H),4.56(s,2H).
按照与制备实施例5的步骤a、b和c相同的方法实施步骤b、c和d，得实施例9的标题化合物，1H NMR(400MHz,DMSO)δ6.65(t,J=5.3Hz,2H),6.51(s,1H),6.47(dd,J=8.5,2.7Hz,1H),4.56(s,2H)。
通过与制备实施例9相同的方法制备下列化合物：
实施例12：
合成路线为：
按照与制备实施例5相同的方法实施步骤a、b和c。d步的具体步骤为：4-(3-氨基苯基)噻唑-2(3H)-酮（100mg,0.520mmol）与4-甲氧基苯磺酰氯（129mg,0.624mmol）溶于3mL二氯甲烷和3mL吡啶中，氩气保护下室温搅拌2小时。反应液用二氯甲烷稀释，依次用1N盐酸20mL，水50mL，饱和氯化钠50mL萃取，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，残留物通过快速硅胶柱色谱纯化，使用二氯甲烷/甲醇(V/V=20：1)洗脱，得到标题化合物120mg，为淡黄色固体，收率63.7%。MS(ES):m/z 363.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.81(s,1H),10.32(s,1H),7.74(d,J=8.9Hz,2H),7.37(s,1H),7.27(d,J=5.4Hz,2H),7.05(dd,J=9.0,6.3Hz,3H),6.62(s,1H),3.79(s,3H).
按照与制备实施例12相同的方法制备下列化合物：
实施例23：
合成路线为：
按照与制备实施例9相同的方法实施步骤a、b、c和d。e步具体步骤为：4-(5-氨基-2-羟基苯基)噻唑-2(3H)-酮（100mg,0.480mmol）与2-噻吩基磺酰氯（105mg,0.576mmol）溶于3mL二氯甲烷和3mL吡啶中，氩气保护下室温搅拌2小时。反应液用二氯甲烷稀释，依次用1N盐酸20mL，水50mL，饱和氯化钠50mL萃取，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，残留物通过快速硅胶柱色谱纯化，使用二氯甲烷/甲醇(V/V=20：1)洗脱，得到标题化合物98mg，为淡黄色固体，收率57.6%。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.31(s,1H),10.20(s,1H),10.00(s,1H),7.89(dd,J=5.0,1.4Hz,1H),7.45(dd,J=3.7,1.4Hz,1H),7.17(d,J=2.4Hz,1H),7.12(dd,J=5.0,3.7Hz,1H),6.83(dt,J=19.5,5.6Hz,2H),6.51(d,J=1.3Hz,1H).
按照与制备实施例23相同的方法制备下列化合物：
实施例27：
合成路线为：
按照与制备实施例5相同的方法实施步骤a、b和c。d步具体步骤为：氩气保护下，3mL无水DMF中加入4-(3-氨基苯基)噻唑-2(3H)-酮(100mg,0.520mmol)，4-甲氧基苯甲酸(79mg,0.520mmol)，二异丙基乙胺(0.454ml,2.60mmol)和O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯(334mg,1.040mmol)。反应液于室温下搅拌6小时。反应液用乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠溶液洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，残留物通过快速硅胶柱色谱纯化，使用二氯甲烷/甲醇(V/V=20：1)洗脱，得到标题化合物110mg，为白色固体，收率64.7%。MS(ES):m/z 327.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.79(s,1H),10.20(s,1H),8.06(s,1H),7.98(d,J=8.8Hz,2H),7.70(d,J=7.7Hz,1H),7.40(t,J=8.0Hz,1H),7.34(d,J=7.9Hz,1H),7.08(d,J=8.7Hz,2H),6.67(d,J=1.7Hz,1H),3.85(s,3H).
按照与制备实施例27相同的方法制备下列化合物：
实施例31：
合成路线如下：
按照与制备实施例5相同的方法实施步骤a、b和c。d步具体步骤为：将微波管用氩气保护，3mL无水DMF中加入4-(3-氨基苯基)噻唑-2(3H)-酮(120mg,0.624mmol),溴甲基苯(0.074ml,0.624mmol),2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(11.90mg,0.025mmol),三(二亚苄-BASE丙酮)二钯(0)(11.43mg,0.012mmol),碳酸铯(407mg,1.248mmol)，120℃微波反应1小时，反应液冷却至室温，用乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠溶液洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，残留物通过快速硅胶柱色谱纯化，使用二氯甲烷/甲醇(V/V=20：1)洗脱，得到标题化合物90mg，为白色固体，收率51%。MS(ES):m/z 283.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.24–7.19(m,3H),7.10(t,J=7.8Hz,1H),7.04–6.95(m,2H),6.68(ddd,J=8.1,2.4,0.9Hz,1H),6.54(ddd,J=7.6,1.6,1.0Hz,1H),6.41-6.36(m,1H),5.97(s,1H),4.88(s,2H),3.71(s,2H).
按照与制备实施例31相同的方法制备下列化合物：
实施例33：
合成路线如下：
试剂与条件：a)乙酸酐，室温；b）溴化铜，乙酸乙酯，80℃；c)发烟硝酸，冰乙酸，0℃；d)硫氰酸钾，丙酮，室温；50%硫酸，冰乙酸，100℃；e)2-苯基乙酰氯，吡啶，四氢呋喃，室温；f)铁粉，氯化铵，乙醇，水，80℃；g)吡啶，二氯甲烷，室温。
a）3-氨基苯乙酮（50g,370mmol）溶于乙酸酐（35mL，370mmol）中，室温搅拌2小时，减压蒸去乙酸酐，得白色晶体，不需纯化直接投下一步。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.02(s,1H),7.94(d,J=8.0Hz,1H),7.68(d,J=7.6Hz,1H),7.42(t,J=7.9Hz,1H),2.60(s,3H),2.22(s,3H).
b)3-乙酰氨基苯乙酮（25g,141mmol）和溴化铜（38g,169mmol）依次溶于乙酸乙酯（300mL）中，加热至80℃搅拌过夜，反应液冷却至室温，依次用500mL水，500mL饱和氯化钠溶液萃取，分出乙酸乙酯层，用无水硫酸钠干燥，减压蒸去有机溶剂，残留物通过快速硅胶柱色谱纯化，使用石油醚/乙酸乙酯(V/V=10：1)洗脱，得到标题化合物22g，为白色固体，收率62.9%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.82(s,1H),8.12(s,1H),7.92(d,J=8.0Hz,1H),7.66(d,J=7.8Hz,1H),7.40(t,J=7.9Hz,1H),4.50-4.39(m,2H),2.22(s,3H).
c)N-(3-(2-溴乙基)苯基)乙酰胺(20g,78mmol)溶于50mL乙酸酐中，冰浴下30分钟内滴加发烟硝酸（4.2mL，94mmol），0℃搅拌2小时。反应液倒入冰水中，加入乙酸乙酯（200mL×2）萃取，有机层用水（300mL×3）洗至近中性，再用饱和氯化钠溶液（200mL）洗涤，无水硫酸钠干燥。减压蒸去有机溶剂，残留物通过快速硅胶柱色谱纯化，使用石油醚/乙酸乙酯(V/V=5：1)洗脱，得到标题化合物9.2g，为淡黄色固体，收率39.1%。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.27(s,1H),9.41(d,J=1.9Hz,1H),8.30(d,J=8.8Hz,1H),7.76(dd,J=8.8,1.9Hz,1H),4.50(s,2H),2.34(s,3H).
d)N-(5-(2-溴乙基)-2-硝基苯基)乙酰胺(10g,33.2mmol)溶于100mL无水丙酮中，加入硫氰酸钾（19.35g,199mmol），室温搅拌10分钟，减压蒸去溶剂，残留物不需纯化，直接加入50mL冰乙酸和5mL 50%硫酸，加热至100℃搅拌30分钟，反应液倒入冰水中，过滤析出的淡黄色固体，干燥。粗品通过快速硅胶柱色谱纯化，使用二氯甲烷/甲醇(V/V=20：1)洗脱，得到标题化合物5.2g，为白色固体，收率66%。MS(ES):m/z 238.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.94(s,1H),8.00(d,J=9.0Hz,1H),7.47(s,2H),7.17(d,J=1.9Hz,1H),6.93(s,1H),6.88(dd,J=9.0,1.9Hz,1H).
e）氩气保护下，2-苯基乙酰氯（0.652g,4.22mmol）和4-(3-氨基-4-硝基苯基)噻唑-2(3H)-酮（0.5g,2.108mmol）溶于10mL无水四氢呋喃中，滴加1mL吡啶，反应液室温搅拌2小时，反应液用乙酸乙酯稀释，分别用1N盐酸（20mL），水（20mL），饱和氯化钠溶液（20mL）洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸去有机溶剂，残留物通过快速硅胶柱色谱纯化，使用二氯甲烷/甲醇(V/V=30：1)洗脱，得到标题化合物0.45g，为淡黄色固体，收率60.1%。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.03(s,1H),10.51(s,1H),8.03(d,J=8.7Hz,1H),7.98(d,J=1.9Hz,1H),7.61(dd,J=8.6,1.9Hz,1H),7.37-7.26(m,5H),7.08(s,1H),3.73(s,2H).
f)N-(2-硝基-5-(2-氧-2,3-二氢噻唑-4-基)苯基)-2-苯基乙酰胺(0.45g,1.266mmol)溶于20mL乙醇中，氯化铵（0.339g,6.33mmol）溶于5mL水中加入反应液中，再加入还原铁粉（0.354,6.33mmol），反应液加热至80℃搅拌30分钟，反应液以乙酸乙酯稀释，通过硅藻土过滤，滤液减压浓缩，残留物通过快速硅胶柱色谱纯化，使用二氯甲烷/甲醇(V/V=20：1)洗脱，得到标题化合物220mg，为淡黄色固体，收率53%.MS(ES):m/z 326.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.51(s,1H),9.41(s,1H),7.46(s,1H),7.39-7.25(m,5H),7.21(d,J=8.3Hz,1H),6.72(d,J=8.2Hz,1H),6.35(s,1H),5.19(s,2H),3.67(s,2H).
g)N-(2-氨基-5-(2-氧-2,3-二氢噻唑-4-基)苯基)-2-苯基乙酰胺（80mg,0.246mmol）与2-噻吩基磺酰氯（54mg,0.295mmol）溶于3mL二氯甲烷和3mL吡啶中，氩气保护下室温搅拌2小时。反应液用二氯甲烷稀释，依次用1N盐酸20mL，水50mL，饱和氯化钠50mL萃取，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，残留物通过快速硅胶柱色谱纯化，使用二氯甲烷/甲醇(V/V=20：1)洗脱，得到标题化合物75mg，为淡黄色固体，收率64.7%。MS(ES):m/z 472.0[M+H]+；1HNMR(400MHz,DMSO)δ11.51(s,1H),9.17(s,1H),7.44(d,J=1.9Hz,1H),7.33-7.25(m,5H),7.20(dd,J=8.3,2.1Hz,2H),6.70(d,J=8.4Hz,1H),6.34(d,J=1.4Hz,1H),5.10(s,2H),2.96-2.88(m,2H),2.67-2.59(m,2H).
按照与制备实施例33相同的方法制备下列化合物：
实施例41：
合成路线为：
按照与制备实施例12相同的方法实施步骤a、b、c和d。e步具体步骤为：N-(3-氨基-5-(2-氧-2,3-二氢噻唑-4-基)苯基)噻吩-2-磺酰胺（95mg,0.269mmol）与噻吩-2-磺酰氯（47mg,0.323mmol）溶于3mL二氯甲烷和吡啶(0.109mL,1.344mmol)中，氩气保护下室温搅拌2小时。反应液用二氯甲烷稀释，依次用1N盐酸20mL，水50mL，饱和氯化钠50mL萃取，有机层用无水硫酸钠干燥，减压蒸去溶剂，残留物通过快速硅胶柱色谱纯化，使用二氯甲烷/甲醇(V/V=20：1)洗脱，得到标题化合物78mg，为白色固体，收率62.6%。MS(ES):m/z 462.1[M-H]+；1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.84(s,1H),10.81-10.48(m,1H),10.40(s,1H),8.04(d,J=3.3Hz,1H),7.94-7.84(m,2H),7.73(s,1H),7.66(d,J=2.9Hz,1H),7.62(s,1H),7.26–7.21(m,1H),7.21–7.07(m,3H),6.55(s,1H).
按照与制备实施例41相同的方法制备下列化合物：
药理活性实施例1：二氢噻唑酮类化合物的酶水平活性测定
化合物与Brd4蛋白bromodomain1结构域（以下称作BRD4(1)）的结合活性测试采用的是荧光各异向性测试方法（Fluorescence Anisotropy）。基于的原理是通过检测荧光素标记的小分子与其它分子相互作用前后分子量的变化，计算水平方向及垂直方向的荧光偏振值作相关分析。如果被荧光标记小分子与大分子之间的结合平衡建立后，它受激发时运动慢，测得的荧光偏振光值会增高。如果荧光标记小分子与大分子之间的结合被其它配基取代，它在游离状态下的旋转或翻转速度会变快，发射光相对于激发光平面将去偏振化，测得的偏振光值降低，从而计算出样品的荧光各异向性。
荧光底物为连接荧光分子的JQ1，工作浓度为5nM。BRD4(1)蛋白工作浓度为40nM，总反应体系为40μl，缓冲液为50mM HEPES PH7.4，150mM Nacl，0.5mM CHAPS。化合物初筛浓度为50μM，该条件下抑制率大于60%的化合物测定其IC50。考虑到化合物的溶解性及DMSO对测定的影响，选定DMSO终浓度为5%。所有测定均在该条件下进行。所有成分混合后室温下避光反应4h或4度过夜反应后测定Anisotropy值。测试采用corning的全黑，低结合处理的384孔板（货号为CLS3575），测试仪器为BioTek synergy2检测仪，Excitation为485nm，emission为530nm。以只加缓冲液的孔为系统读数空白值。
数值处理：抑制率=（C-F）/（C-B）×100%
其中：C：荧光底物与蛋白完全结合的Anisotropy值
B：荧光底物Anisotropy本底值
F：化合物相应浓度下的Anisotropy值
以化合物浓度和相应的抑制率作S曲线。得到相应化合物的IC50。
下表1为本发明制备实施例中的部分化合物在药理实验实施例1中得到的生物活性结果。
表1
化合物 抑制率（%） IC50（μM）
JQ1 94.9 0.14
实施例1 66.5 78.1
实施例5 51.1 163.1
实施例12 77.3 30.6
实施例13 80.0 16.5
实施例15 80.0 12.4
实施例20 76.1 10.9
实施例24 87.1 5.8
实施例33 92.1 4.4
实施例34 71.7 2.8
实施例36 90.2 1.7
实施例37 94.0 2.4
实施例39 72.6 13.4
实施例40 84.6 2.9
实施例41 83.7 6.6
实施例42 87.5 3.9
实施例43 89.4 0.2
实施例44 72.7 0.3
实施例45 78.9 0.4
实施例46 96.1 0.8
表1所列的部分化合物初筛浓度为50μM下表现出与阳性对照JQ1相当的抑制率，部分化合物IC50略弱于JQ1，但也显示出较强的活性，表明本发明的化合物在酶水平可以有效结合具有bromodomain结构域的蛋白，因此本发明的化合物可以成为肿瘤的有效治疗药物。
药理活性实施例2：二氢噻唑酮类化合物细胞水平活性测定
化合物细胞水平的活性检测采用磺酰罗丹明B（sulforhodamine B,SRB）蛋白染色法。将处于对数生长期的人结肠癌HT-29细胞接种至96孔培养板，培养过夜后，加入待试化合物处理72h，每个浓度设三复孔，采用JQ1作为阳性对照。处理结束后，加入10%三氯乙酸固定，经洗涤、干燥后，每孔加入SRB溶液染色后，用1%冰乙酸洗去未结合的SRB，室温干燥后，加入10mM Tris溶液100μL，用SPECTRAMax 190酶标仪测定560nm波长下的光密度（OD值）。化合物对细胞的生长增殖抑制率按以下公式计算：
抑制率（%）=（OD对照-OD给药）/OD对照×100%
下表2为本发明制备实施例中的部分化合物在药理实验实施例2中得到的生物活性结果。化合物初筛浓度为100μM。
表2
化合物 抑制率（%） 化合物 抑制率（%）
JQ1 89.4 实施例23 75.9
实施例1 52.7 实施例24 74.6
实施例4 56.4 实施例27 56.4
实施例5 54.8 实施例28 59.7
实施例12 81.3 实施例31 68.3
实施例13 60.6 实施例32 68.5
实施例15 62.3 实施例33 74.8
实施例18 89.5 实施例34 73.3
实施例19 70.7 实施例37 80.5
实施例20 80.6 实施例40 76.3
表2所列的部分化合物初筛浓度为100μM下表现出一定的抑制率，表明本发明的化合物在细胞水平可以有效结合具有bromodomain结构域的蛋白，因此本发明的化合物可能成为肿瘤的有效治疗药物。

Claims (7)

1.一类如下通式(I)所示的二氢噻唑酮类化合物或其药学上可接受的盐，
其中：
R1为H、羟基、氨基、卤素或C1-C6烷基；
R2为H、氨基、或卤素；
R3为H、羟基、氨基或卤素；
R4为H、羟基、-NHS(O)2-L-R7、-NHC(O)-L-R7或-NH-L-R7；
R6为羟基、-NHS(O)2-L-R7、-NHC(O)-L-R7或-NH-L-R7；
R5为H、-NHS(O)2-L-R7或-NHC(O)-L-R7；
其中，L为(CH2)m；
m为0至6的整数；
R7为甲基；C1-C6烷氧基；由一个或者两个C1-C4烷基取代的氨基；C3-C8环烷基；C6-C10芳基；含有1-3个选自N、O和S中的杂原子的5-8元杂芳基；含有1-3个选自N、O和S中的杂原子的4-8元杂环基；其中，所述C3-C8环烷基、C6-C10芳基、5-8元杂芳基或4-8元杂环基非必须地被选自卤素、羟基、氨基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基中的取代基所取代；
所述卤素为氟、氯、溴或碘。
2.根据权利要求1所述的二氢噻唑酮类化合物或其药学上可接受的盐，其中，
R1为H、羟基、氨基、卤素或C1-C4烷基；
R2为H、氨基或卤素；
R3为H、羟基、氨基或卤素；
R4为H、羟基、-NHS(O)2-L-R7、-NHC(O)-L-R7或-NH-L-R7；
R6为羟基、-NHS(O)2-L-R7、-NHC(O)-L-R7或-NH-L-R7；
R5为H、-NHS(O)2-L-R7或-NHC(O)-L-R7；
其中，L为(CH2)m；
m为0至4的整数；
R7为甲基；C1-C4烷氧基；由一个或者两个C1-C2烷基取代的氨基；C3-C6环烷基；C6-C10芳基；含有1-3个选自N、O和S中的杂原子的5-7元杂芳基；含有1-3个选自N、O和S中的杂原子的4-7元杂环基；其中，所述C3-C6环烷基、C6-C10芳基、5-7元杂芳基和4-7元杂环基非必须地被选自卤素、羟基、氨基、C1-C2烷基、C1-C2烷氧基中的取代基所取代。
3.根据权利要求2所述的二氢噻唑酮类化合物或其药学上可接受的盐，其中，
R1为H或甲基；
R2为H；
R3为H或羟基；
R4为H、羟基、-NHS(O)2-L-R7、-NHC(O)-L-R7或-NH-L-R7；
R6为羟基、-NHS(O)2-L-R7、-NHC(O)-L-R7或-NH-L-R7；
R5为H、-NHS(O)2-L-R7或-NHC(O)-L-R7；
其中，L为(CH2)m；
m为0至2的整数；
R7为甲基；甲氧基；二甲氨基；环戊基；环己基；未取代或由卤素、氨基或甲氧基取代的苯基；萘基；噻吩基；吡啶基；或喹啉基。
4.一类二氢噻唑酮类化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述二氢噻唑酮类化合物为下列化合物之一：
5.权利要求1-4中任一项所述的通式(I)所示的二氢噻唑酮类化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗肿瘤的药物中的用途。
6.根据权利要求5所述的用途，其中，所述肿瘤为多发性骨髓瘤、胃癌、肺癌、乳腺癌、食管癌、结肠癌、髓母细胞瘤、急性粒细胞白血病、前列腺癌、肝细胞癌、肾细胞癌、宫颈癌、皮肤癌、卵巢癌或胰腺癌。
7.一种药物组合物，其包含治疗有效量的一种或多种根据权利要求1-4中任一项所述的通式(I)所示的二氢噻唑酮类化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅料。
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