CN103827138B - 新的作为抗生素的肽衍生物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及抗生化合物、用于生产所述化合物的方法、含有所述化合物的药物组合物、以及包括施用所述化合物和/或含有所述化合物的组合物的治疗方法。
Description
技术领域
本发明涉及新的抗生化合物和包含其的组合物,本发明涉及能够生产所述抗生化合物的嗜线虫致病杆菌(Xenorhabdusnematophila)株,本发明还涉及这种化合物及其组合物在治疗微生物疾病中的用途。
背景技术
抗微生物抗性是一个主要的公共健康问题,其对发病率、死亡率和与医疗保健有关的费用方面具有重要影响。由于抗生药物发现和开发项目的限制,该问题变得严重了。当今,最相关的多重抗性细菌病原体是抗甲氧西林金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)(MRSA)、抗万古霉素肠球菌(enterococci)(VRE)、超广谱β-内酰胺酶形成菌(ESBL)、多重抗性假单胞菌(Pseudomonas)和不动杆菌(Acinetobacter)属。对于这些细菌,仅有一些存在的抗生素有效。紧急需要新的抗细菌化合物,以保证将来有效地治疗细菌感染。已证实活生物体是具有抗微生物活性的生物活性化学物质的可靠来源(BerdyJ.,J.Antibiot.58,1-26(2005))。环境中的微生物仍然是有希望的鉴定新分子的来源。
发明内容
一方面,本发明涉及式(I)的化合物:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-NH-(CH2)n-R(I)
其中,Xaa1、Xaa2、Xaa3、Xaa5、Xaa7、Xaa8和Xaa10独立地选自赖氨酸、3-羟基赖氨酸、4-羟基赖氨酸、5-羟基赖氨酸、3,4-二羟基赖氨酸、3,5-二羟基赖氨酸、4,5-二羟基赖氨酸、鸟氨酸、3-羟基鸟氨酸、4-羟基鸟氨酸、3,4-二羟基鸟氨酸、2,4-二氨基丁酸、3-羟基-2,4-二氨基丁酸、精氨酸、组氨酸、丝氨酸和苏氨酸;
Xaa4是甘氨酸、3-氨基丙酸或4-氨基丁酸;
Xaa6是脯氨酸、3-羟基脯氨酸、4-羟基脯氨酸、氮丙啶-2-羧酸、吖丁啶-2-羧酸、哌可酸、4-氧代脯氨酸、3-硫代脯氨酸、4-硫代脯氨酸、3,4-脱氢脯氨酸、4-氨基脯氨酸、4-氟脯氨酸、α-甲基脯氨酸或α-烯丙基脯氨酸;
Xaa9是精氨酸、2,3-脱氢精氨酸、瓜氨酸、2,3-脱氢瓜氨酸、刀豆氨酸或2,3-脱氢刀豆氨酸;
n是2、3、4、5、6、7、8、9或10;和
R是-OH、-NH2或–COOH。
在一个实施方案中,Xaa1是赖氨酸;Xaa2和Xaa3各是3-羟基-2,4-二氨基丁酸;Xaa4是甘氨酸;Xaa5是鸟氨酸;Xaa6是脯氨酸;Xaa7是组氨酸;和Xaa9是2,3-脱氢精氨酸。
在另一个实施方案中,Xaa1是赖氨酸;Xaa2和Xaa3各是3-羟基-2,4-二氨基丁酸;Xaa4是甘氨酸;Xaa5是鸟氨酸;Xaa6是脯氨酸;Xaa7是组氨酸;Xaa8是赖氨酸或5-羟基赖氨酸;Xaa9是2,3-脱氢精氨;和Xaa10是赖氨酸或5-羟基赖氨酸。
在另一个实施方案中,Xaa1是赖氨酸;Xaa2和Xaa3各是3-羟基-2,4-二氨基丁酸;Xaa4是甘氨酸;Xaa5是鸟氨酸;Xaa6是脯氨酸;Xaa7是组氨酸;Xaa8是赖氨酸或5-羟基赖氨酸;Xaa9是2,3-脱氢精氨酸;Xaa10是赖氨酸或5-羟基赖氨酸;n是4;和R是NH2。
在一个优选的实施方案中,本发明涉及式(Ia)的化合物:
在另一个优选的实施方案中,本发明涉及式(Ib)的化合物:
在另一个优选的实施方案中,本发明涉及式(Ic)的化合物:
在另一方面,本发明涉及一种化合物,其中所述化合物不是(Ia)、(Ib)或(Ic)。
优选地,本发明的化合物是分离的。优选地,化合物的纯度大于大约90%。更优选地,化合物的纯度大于大约95%。甚至更优选地,化合物的纯度大于大约98%。甚至更优选地,化合物的纯度大于大约99%。
本发明还涉及含有上述化合物和可药用载体的药物组合物。
优选地,药物组合物进一步包含第二抗生化合物。优选地,所述第二抗生化合物是氨基糖苷抗生素。优选地,所述第二抗生化合物是卡那霉素。优选地,所述第二抗生化合物是庆大霉素。
本发明还涉及用于治疗受试者细菌感染的方法,所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-NH-(CH2)n-R(I)
其中,
Xaa1、Xaa2、Xaa3、Xaa5、Xaa7、Xaa8和Xaa10独立地选自:赖氨酸、3-羟基赖氨酸、4-羟基赖氨酸、5-羟基赖氨酸、3,4-二羟基赖氨酸、3,5-二羟基赖氨酸、4,5-二羟基赖氨酸、鸟氨酸、3-羟基鸟氨酸、4-羟基鸟氨酸、3,4-二羟基鸟氨酸、2,4-二氨基丁酸、3-羟基-2,4-二氨基丁酸、精氨酸、组氨酸、丝氨酸和苏氨酸;
Xaa4是甘氨酸、3-氨基丙酸或4-氨基丁酸;
Xaa6是脯氨酸、3-羟基脯氨酸、4-羟基脯氨酸、氮丙啶-2-羧酸、吖丁啶-2-羧酸、
哌可酸、4-氧代脯氨酸、3-硫代脯氨酸、4-硫代脯氨酸、3,4-脱氢脯氨酸、4-氨基脯氨酸、4-氟脯氨酸、α-甲基脯氨酸或α-烯丙基脯氨酸;
Xaa9是精氨酸、2,3-脱氢精氨酸、瓜氨酸、2,3-脱氢瓜氨酸、刀豆氨酸或2,3-脱氢刀豆氨酸;
n是2、3、4、5、6、7、8、9或10;和
R是-OH、-NH2或–COOH,或施用治疗有效量的含有式(I)的化合物和可药用载体的组合物。
在本发明的方法中,优选Xaa1是赖氨酸;Xaa2和Xaa3各是3-羟基-2,4-二氨基丁酸;Xaa4是甘氨酸;Xaa5是鸟氨酸;Xaa6是脯氨酸;Xaa7是组氨酸;Xaa8是赖氨酸或5-羟基赖氨酸;Xaa9是2,3-脱氢精氨酸;Xaa10是赖氨酸或5-羟基赖氨酸;n是4;和R是NH2。
在本发明的方法中,优选式(I)的化合物是:
优选地,本发明的方法包括施用第二抗生化合物。优选地,第二抗生化合物是氨基糖苷抗生素。优选地,第二抗生化合物是卡那霉素。优选地,第二抗生化合物是庆大霉素。
在本发明的方法中,受试者优选是哺乳动物。优选地,受试者是禽、猪、牛或人。最优选地,受试者是人。
在本发明的方法中,化合物或组合物优选有效地对抗多重耐药性临床细菌。
在本发明的方法中,化合物或组合物优选静脉内、肠胃外、口服和/或局部施用。
本发明的另一个目的是用于生产式(I)的化合物的方法,所述方法包括以下步骤:
-在液体培养基中生长嗜线虫致病杆菌株CNCMI-4530;和
-纯化根据式(I)的化合物:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-NH-(CH2)n-R(I)
其中
Xaa1、Xaa2、Xaa3、Xaa5、Xaa7、Xaa8和Xaa10独立地选自:赖氨酸、3-羟基赖氨酸、4-羟基赖氨酸、5-羟基赖氨酸、3,4-二羟基赖氨酸、3,5-二羟基赖氨酸、4,5-二羟基赖氨酸、鸟氨酸、3-羟基鸟氨酸、4-羟基鸟氨酸、3,4-二羟基鸟氨酸、2,4-二氨基丁酸、3-羟基-2,4-二氨基丁酸、精氨酸、组氨酸、丝氨酸和苏氨酸;
Xaa4是甘氨酸、3-氨基丙酸或4-氨基丁酸;
Xaa6是脯氨酸、3-羟基脯氨酸、4-羟基脯氨酸、氮丙啶-2-羧酸、吖丁啶-2-羧酸、哌可酸、4-氧代脯氨酸、3-硫代脯氨酸、4-硫代脯氨酸、3,4-脱氢脯氨酸、4-氨基脯氨酸、4-氟脯氨酸、α-甲基脯氨酸或α-烯丙基脯氨酸;
Xaa9是精氨酸、2,3-脱氢精氨酸、瓜氨酸、2,3-脱氢瓜氨酸、刀豆氨酸或2,3-脱氢刀豆氨酸;
n是2、3、4、5、6、7、8、9或10;和
R是-OH、-NH2或–COOH。
在一个实施方案中,本发明涉及用于生产式(I)化合物的方法,其中Xaa1是赖氨酸;Xaa2和Xaa3各是3-羟基-2,4-二氨基丁酸;Xaa4是甘氨酸;Xaa5是鸟氨酸;Xaa6是脯氨酸;Xaa7是组氨酸;和Xaa9是2,3-脱氢精氨酸。
在另一个实施方案中,本发明涉及用于生产式(I)化合物的方法,其中Xaa1是赖氨酸;Xaa2和Xaa3各是3-羟基-2,4-二氨基丁酸;Xaa4是甘氨酸;Xaa5是鸟氨酸;Xaa6是脯氨酸;Xaa7是组氨酸;Xaa8是赖氨酸或5-羟基赖氨酸;Xaa9是2,3-脱氢精氨酸;以及Xaa10是赖氨酸或5-羟基赖氨酸。
在另一个实施方案中,本发明涉及用于生产式(I)化合物的方法,其中Xaa1是赖氨酸;Xaa2和Xaa3各是3-羟基-2,4-二氨基丁酸;Xaa4是甘氨酸;Xaa5是鸟氨酸;Xaa6是脯氨酸;Xaa7是组氨酸;Xaa8是赖氨酸或5-羟基赖氨酸;Xaa9是2,3-脱氢精氨酸;Xaa10是赖氨酸或5-羟基赖氨酸;n是4;以及R是NH2。
在另一个实施方案中,本发明涉及用于生产式(I)化合物的方法,其中式(I)化合物为:
在一个优选的实施方案中,纯化步骤包括阳离子交换色谱法和/或反相色谱法。
本发明的另一个目的是2011年9月21日保藏在CNCM的登陆号为CNCMI-4530的嗜线虫致病杆菌株。
本发明的另一个目的是来自具有抗生活性的嗜线虫致病杆菌株CNCMI-4530的培养物上清。
附图说明
图1表示OdilomycinA(无对应中译文)的NMRTOCSY谱。
图2表示OdilomycinA的NMRHSQC谱。
图3表示OdilomycinA对生长的金黄色葡萄球菌(S.aureus)ATCC13709的杀菌作用。
图4表示OdilomycinA对生长的绿脓杆菌(P.aeruginosa)ATCC27853的杀菌作用。
具体实施方式
定义和缩写
术语“抗生的”、“抗生活性”、“抗细菌的”、“抗细菌活性”、“抗微生物的”或“抗微生物活性”用于文中,通常指实现了降低、抑制或停止微生物生长的作用。可根据任何已知的方法检测抗生活性,比如例如,微量稀释的方法。
术语“ODILOMYCIN”、“Odilomycin”或“odilomycin”(无对应中译文)用于文中,是指式(I)的化合物。在某些实施方案中,式(I)化合物是式(Ia)、式(Ib)和/或式(Ic)的化合物。该术语预期包括所有的立体异构体形式,如,例如,互变异构体、非对映异构体(包括顺式/反式异构体)和对映异构体。
“药物组合物”指一种或多种文中所述化合物、或其可药用盐,与其它化学组分的混合物,其中所述其它化学组分如生理上可接受的载体和赋形剂。药物组合物的目的是有助于向生物体或受试者施用化合物。
如文中使用的术语“大约”用于文中,指大概、粗略、左右或在一个范围内。术语“大约”与数值范围联用时,其通过将界限扩展到设定数值之上和之下改变范围。一般地,术语“大约”用于文中,通过上或下10%的差异将数值变成所述值之上或之下(更高或更低)。
“有效量”、“足够量”或“治疗有效量”用于文中,指当根据所需的治疗方案施用时,足以产生具有合理的益处/风险比值的有益或所需治疗效果(包括临床结果)的化合物的量。像这样,例如,有效量可以是足以降低或减轻细菌感染的严重性和/或持续时间、降低或减轻其相关的痛苦、或降低或减轻其一种或多种症状;防止与细菌感染有关的痛苦的病况或症状的进展(包括预防性防止)、防止与其有关的痛苦、防止其一种或多种症状;或增强或改善其它疗法的预防或治疗效果。有效量还包括避免或基本上减轻不想要的副作用的化合物量。
术语“载体(carrier)”指与化合物一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或运载体(vehicle)。可药用载体包括任何以及所有生理相容的溶剂、分散介质、包衣等。该药物载体非限制的例子包括液体,如水和油,包括那些石油、动物、植物或合成的来源,如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。药物载体也可以是盐水、阿拉伯树胶、明胶、淀粉糊、滑石、角蛋白、胶体二氧化硅、尿素等。此外,也可使用辅助剂、稳定剂、增稠剂、润滑剂和着色剂。合适的药物载体的其它实例在Remington’sPharmaceuticalSciences(AlfonsoGennaro编,KriegerPublishingCompany(1997);Remington’s:TheScienceandPracticeofPharmacy,第21版.(Lippincot,Williams&Wilkins(2005);以及ModernPharmaceutics,121卷(GilbertBanker和ChristopherRhodes,CRCPress(2002)中描述了。
缩写:ATCC(美国典型培养物保藏中心),CNCM(国立微生物培养和保藏中心),INRA(法国国家农艺研究所),MRSA(甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌),VRE(万古霉素抗性肠球菌),ESBL(超广谱β内酰胺酶形成菌),NMR(核磁共振),MS-MS(质谱-质谱),LC-MS(液相色谱-质谱),ESI(电喷雾电离),HPLC(高压液相色谱),LB(Luria-Bertani介质),NBTA(营养琼脂(Difco)31g/L,溴麝香草酚蓝25mg/L和2,3,5-三苯基四唑鎓氯化物1%40mg/L),TFA(三氟乙酸),UV(紫外线),MIC(最小抑菌浓度),MHB(Mueller-Hinton肉汤),MBC(最小杀菌浓度)。
说明
在一方面,本发明涉及在2011年9月21日、以INRA(法国国家农艺研究所)名义保藏在CNCM(国立微生物培养和保藏中心)、登陆号CNCMI-4530的嗜线虫致病杆菌株108。
发现嗜线虫致病杆菌株CNCMI-4530产生具有抗生或抗微生物活性的化合物。当嗜线虫致病杆菌株CNCMI-4530在液体培养基中生长时,抗生化合物分泌至培养物上清中。
在另一个方面,本发明涉及表现出抗生或抗微生物活性的嗜线虫致病杆菌株CNCMI-4530的培养物上清。为了制备具有抗生活性的培养物上清,嗜线虫致病杆菌株CNCMI-4530在标准条件下生长在液体培养基中,除去细菌细胞,并回收上清。例如,可以通过离心或过滤除去细菌细胞。
在另一个方面,本发明涉及显示抗生活性的嗜线虫致病杆菌株CNCMI-4530的提取物。可根据本领域技术人员公知的任何合适的方法制备嗜线虫致病杆菌的细胞提取物。
在某些实施方案中,本发明还包括用作药物的嗜线虫致病杆菌株CNCMI-4530的培养物上清和提取物。
在某些实施方案中,本发明包括治疗、抑制和/或预防细菌感染的方法,其包括施用嗜线虫致病杆菌株CNCMI-4530的提取物。
在某些实施方案中,本发明还涵盖用作抗生剂的嗜线虫致病杆菌株CNCMI-4530的培养物上清和提取物。
嗜线虫致病杆菌株CNCMI-4530、来自该株的培养物上清和源自该株的细胞提取物呈现对抗不同微生物的抗生活性,包括,例如,人细菌病原体。
更特别地,嗜线虫致病杆菌株CNCMI-4530、来自该株的培养物上清和源自该株的细胞提取物呈现对以下的抗生活性:鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii),枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis),洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderiacepacia),阴沟肠杆菌(Enterobacterclocae),粪肠球菌(Enterococcusfaecalis),大肠杆菌(Escherichiacoli.),肺炎克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae),金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus),表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis),嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia),粘质沙雷氏菌(Serratiamarescens)和绿脓杆菌(Pseudomonasaeruginosa)。优选地,嗜线虫致病杆菌株CNCMI-4530、来自该株的培养物上清和源自该株的细胞提取物呈现对以下的抗生活性:金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、肺炎克雷伯氏菌、产酸克雷伯菌(Klebsiellaoxytoca)、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌、大肠杆菌、卡他莫拉菌(Moraxellacatarrhalis)、绿脓杆菌和嗜麦芽寡养单胞菌。
如文中所述的具有抗生活性的示例性化合物从嗜线虫致病杆菌株CNCMI-4530的培养物上清纯化。
在另一个方面,本发明涉及式(I)的化合物:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-NH-(CH2)n-R(I)
其中,
Xaa1、Xaa2、Xaa3、Xaa5、Xaa7、Xaa8和Xaa10独立地选自:赖氨酸、3-羟基赖氨酸、4-羟基赖氨酸、5-羟基赖氨酸、3,4-二羟基赖氨酸、3,5-二羟基赖氨酸、4,5-二羟基赖氨酸、鸟氨酸、3-羟基鸟氨酸、4-羟基鸟氨酸、3,4-二羟基鸟氨酸、2,4-二氨基丁酸、3-羟基-2,4-二氨基丁酸、精氨酸、组氨酸、丝氨酸和苏氨酸;
Xaa4是甘氨酸、3-氨基丙酸或4-氨基丁酸;
Xaa6是脯氨酸、3-羟基脯氨酸、4-羟基脯氨酸、氮丙啶-2-羧酸、吖丁啶-2-羧酸、
哌可酸、4-氧代脯氨酸、3-硫代脯氨酸、4-硫代脯氨酸、3,4-脱氢脯氨酸、4-氨基脯氨酸、4-氟脯氨酸、α-甲基脯氨酸或α-烯丙基脯氨酸;Xaa9是精氨酸、2,3-脱氢精氨酸、瓜氨酸、2,3-脱氢瓜氨酸、刀豆氨酸或2,3-脱氢刀豆氨酸;
n是2、3、4、5、6、7、8、9或10;和
R是-OH、-NH2或–COOH。
在某些实施方案中,Xaa1是赖氨酸、Xaa2和Xaa3各是3-羟基-2,4-二氨基丁酸、Xaa4是甘氨酸、Xaa5是鸟氨酸、Xaa6是脯氨酸、Xaa7是组氨酸、和Xaa9是2,3-脱氢精氨酸。
在某些实施方案中,Xaa1是赖氨酸。
在某些实施方案中,Xaa2是3-羟基-2,4-二氨基丁酸。
在某些实施方案中,Xaa3是3-羟基-2,4-二氨基丁酸。
在某些实施方案中,Xaa4是甘氨酸。
在某些实施方案中,Xaa5是鸟氨酸。
在某些实施方案中,Xaa6是脯氨酸。
在某些实施方案中,Xaa7是组氨酸。
在某些实施方案中,Xaa8是赖氨酸或5-羟基赖氨酸。
在某些实施方案中,Xaa9是2,3-脱氢精氨酸。
在某些实施方案中,Xaa10是赖氨酸或5-羟基赖氨酸。
在某些实施方案中,n=4。
在某些实施方案中,R是–NH2。
在某些实施方案中,Xaa1是赖氨酸、Xaa2和Xaa3各是3-羟基-2,4-二氨基丁酸、Xaa4是甘氨酸、Xaa5是鸟氨酸、Xaa6是脯氨酸、Xaa7是组氨酸、Xaa8是赖氨酸或5-羟基赖氨酸、Xaa9是2,3-脱氢精氨酸、和Xaa10是赖氨酸或5-羟基赖氨酸。
在某些实施方案中,Xaa1是赖氨酸、Xaa2和Xaa3各是3-羟基-2,4-二氨基丁酸、Xaa4是甘氨酸、Xaa5是鸟氨酸、Xaa6是脯氨酸、Xaa7是组氨酸、Xaa8是赖氨酸或5-羟基赖氨酸、Xaa9是2,3-脱氢精氨酸、Xaa10是赖氨酸或5-羟基赖氨酸、n是4和R是NH2。
在氨基酸残基中α碳原子上的构型可以是“D”或“L”,其可以独立于式(I)化合物中的其它氨基酸残基的构型。因而,在某些实施方案中,Xaa1、Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa7、Xaa8和Xaa10各具有氨基酸残基α碳上的“L”构型。在某些实施方案中,一个或多个Xaa1、Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa7、Xaa8和Xaa10具有氨基酸残基α碳上的“D”构型。
氨基酸侧链中羟基上的构型可以是“R”或“S”,且其可独立于式(I)化合物中其它羟基的构型。因而,在某些实施方案中,一个或多个羟基具有“R”构型。在某些实施方案中,一个或多个羟基具有“S”构型。在某些实施方案中,每个羟基都具有“R”构型。在某些实施方案中,每个羟基都具有“S”构型。
在某些实施方案中,式(I)的化合物是式(Ia)的化合物:
式(Ia)的化合物也定义为Lys-(3-羟基-2,4-二氨基丁酸)-(3-羟基-2,4-二氨基丁酸)-Gly-鸟氨酸-Pro-His-(5-羟基赖氨酸)-(2,3-脱氢精氨酸)-(5-羟基赖氨酸)-(1,4-二氨基丁烷)。
术语“OdilomycinA”指式(Ia)的化合物。
在某些实施方案中,式(I)化合物是式(Ib)的化合物:
式(IIb)的化合物也定义为Lys-(3-羟基-2,4-二氨基丁酸)-(3-羟基-2,4-二氨基丁酸)-Gly-鸟氨酸-Pro-His-Lys-(2,3-脱氢精氨酸)-(5-羟基赖氨酸)-(1,4-二氨基丁烷)。
术语“OdilomycinB”指式(Ib)的化合物。
在某些实施方案中,式(I)化合物是式(Ic)的化合物:
式(Ic)的化合物也定义为Lys-(3-羟基-2,4-二氨基丁酸)-(3-羟基-2,4-二氨基丁酸)-Gly-鸟氨酸-Pro-His-Lys-(2,3-脱氢精氨酸)-Lys-(1,4-二氨基丁烷)。
术语“OdilomycinC”指式(Ic)的化合物。
在某些实施方案中,Odilomycin不包括式(Ia)、(Ib)和(Ic)的化合物。
在某些实施方案中,Odilomycin是分离的。
在某些实施方案中,Odilomycin的纯度大于约50%。在某些实施方案中,Odilomycin的纯度大于约60%。在某些实施方案中,Odilomycin的纯度大于约70%。在某些实施方案中,Odilomycin的纯度大于约80%。在某些实施方案中,Odilomycin的纯度大于约85%。在某些实施方案中,Odilomycin的纯度大于约90%。在某些实施方案中,Odilomycin的纯度大于约95%。在某些实施方案中,Odilomycin的纯度大于约98%。在某些实施方案中,Odilomycin的纯度大于约99%。在某些实施方案中,适当时任何所述的纯度值可构成纯度范围较低和/或较高的端点,或其中任何下限可以与任何上限组合。
在某些实施方案中,Odilomycin和/或包含Odilomycin的组合物用作药物、抗生剂、抗微生物剂、或用于治疗微生物疾病、特别是例如由病原体细菌引起的细菌感染。
在某些实施方案中,Odilomycin和/或包含Odilomycin的组合物用于治疗细菌感染,例如,用于治疗医院获得性感染或院内(nosocomial)细菌感染。
在某些实施方案中,本发明提供了用于治疗患有医院获得性细菌感染的受试者的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的式(I)化合物。
在某些实施方案中,本发明提供了用于治疗患有院内细菌感染的受试者的方法,所述方法包括向所述受试者施用有效量的式(I)化合物。
在一个方面,本发明还涉及式(I)化合物用于制备用于治疗微生物感染或微生物疾病的药物中的用途。
在另一方面,本发明还涉及式(I)的化合物用于制备抗生组合物中的用途。
在另一方面,本发明还涉及治疗方法,其包括向有需要的受试者施用式(I)化合物或含有式(I)化合物的药物组合物。Odilomycin和/或包含Odilomycin的组合物可用于,例如治疗、抑制和/或预防细菌感染和/或疾病。
在某些实施方案中,本发明提供了治疗、预防和/或抑制细菌感染的方法,其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的式(I)化合物或含有式(I)化合物的组合物。
在某些实施方案中,本发明提供了用于治疗患有细菌感染的受试者的方法,其包括向所述受试者施用式(I)的化合物。
在某些实施方案中,本发明提供了用于抑制受试者中细菌感染的方法,其包括向所述受试者施用式(I)的化合物。
在又一些实施方案中,本发明提供了用于治疗患有多重药物抗性的细菌感染的受试者的方法,其包括向所述受试者施用有效量的式(I)的化合物。
在某些实施方案中,本发明的方法对其它药物或抗生素抗性的细菌或其相关的感染提供了抑制。在某些实施方案中,方法提供了对多重药物抗性细菌感染的治疗、抑制和/或预防。
在某些实施方案中,细菌感染是多重药物抗性的。在某些实施方案中,细菌株是异源获得性的。在某些实施方案中,细菌株是院内的。
在某些实施方案中,细菌感染包括革兰氏阴性细菌感染。在某些实施方案中,细菌感染包括革兰氏阳性细菌感染。在某些实施方案中,细菌感染包括一种以上细菌株引起的感染。
在某些实施方案中,细菌或微生物感染是由全部或部分以下细菌引起的感染:无色杆菌属(Achromobacter)、放线杆菌属(Actinobacillus)、放线菌属(Actinomyces)、不动杆菌属(Acinetobacter)、气单胞菌属(Aeromonas)、红孢子虫属(Anaplasma)、杆菌属(Bacillus)、类杆菌属(Bacteroides)、巴尔通体属(Bartonella)、蛭弧菌属(Bdellovibrio)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、博代氏杆菌属(Bordetella)、疏螺旋体属(Borrelia)、布鲁氏菌属(Brucella)、伯克氏菌属(Burkholderia)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、嗜二氧化碳噬细胞菌属(Capnocytophaga)、心杆菌属(Cardiobacterium)、衣原体(Chlamydia)、嗜衣体属(Chlamydophila)、色杆菌属(Chromobacterium)、枸橼酸杆菌属(Citrobacter)、梭状芽孢杆菌属(Clostridium)、棒状杆菌属(Corynebacterium)、立克次体属(Coxiella)、埃立克体属(Ehrlichia)、肠杆菌属(Enterobacter)、肠球菌属(Enterococcus)、丹毒丝菌属(Erysipelothrix)、大肠杆菌属(Escherichia)、弗朗西斯菌属(Francisella)、梭杆菌属(Fusobacterium)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、螺杆菌属(Helicobacter)、血巴东体属(Hemobartonella)、克雷伯菌属(Klebsiella)、乳酸杆菌属(Lactobacillus)、军团菌属(Legionella)、钩端螺旋体属(Leptospira)、李斯特菌属(Listeria)、曼菌属(Mannheimia)、莫拉菌属(Moraxella)、摩根菌属(Morganella)、分枝杆菌属(Mycobacterium)、支原体(Mycoplasma)、淋球菌属(Neisseria)、新立克次体属(Neorickettsia)、诺卡氏菌属(Nocardia)、巴氏杆菌属(Pasteurella)、消化链球菌属(Peptostreptococcus)、发光杆菌属(Photorhabdus)、卟啉单胞菌属(Porphyromonas)、普氏菌属(Prevotella)、丙酸杆菌属(Propionibacterium)、变形杆菌属(Proteus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、立克次体(Rickettsia)、沙门氏菌属(Salmonella)、沙雷菌属(Serratia)、志贺菌属(Shigella)、球状菌属(Sphaerophorus)、螺菌属(Spirillum)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、嗜麦芽寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)、链杆菌属(Streptobacillus)、链球菌属(Streptococcus)、密螺旋体属(Treponema)、Tropheryma(无对应中译文)、脲原体属(Ureaplasma)、弧菌属(Vibrio)或弧菌属(Yersinia)家族。
在某些实施方案中,细菌或微生物感染是由全部或部分以下细菌引起的感染:鲍曼不动杆菌、枯草芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德菌、阴沟肠杆菌、粪肠球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、嗜麦芽寡养单胞菌、粘质沙雷氏菌或绿脓杆菌。优选地,嗜线虫致病杆菌株CNCMI-4530、来自该株的培养物上清和来自该株的细胞提取物呈现对以下细菌的抗生活性:金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、肺炎克雷伯氏菌、产酸克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌、大肠杆菌、卡他莫拉菌、绿脓杆菌和嗜麦芽寡养单胞菌。
在某些实施方案中,本公开提供了含有式(I)化合物的药物组合物和/或药物在治疗细菌感染、和/或由该细菌感染引起的或与其相关的疾病状态、和/或病况的方法中的用途。
在某些实施方案中,所述方法包括向受试者单独施用或与第二抗生化合物组合施用有效量的式(I)化合物,或单独施用或与第二抗生化合物和可药用载体组合施用有效量的含有式(I)化合物的组合物。可药用载体是本领域技术人员公知的,包括,例如,佐剂、稀释剂、赋形剂、填充剂、润滑剂和运载体。通常,可药用载体对活性化合物是化学上惰性的,且在使用条件下是无毒性的。可药用载体的例子可以包括,例如,水或盐溶液,聚合物如聚乙二醇、糖及其衍生物、油、脂肪酸或醇。
在某些实施方案中,治疗、预防和/或抑制与细菌感染相关的病况的方法包括步骤:(i)鉴别需要该治疗的受试者;(ii)单独或与第二抗生化合物组合提供式(I)化合物,或单独或与第二抗生化合物和可药用载体组合提供含有式(I)化合物的组合物;以及(iii)施用治疗有效量的所述化合物或组合物,以治疗、预防和/或抑制有该治疗需要的受试者的细菌感染。
在某些实施方案中,方法包括向受试者施用有效量的式(I)化合物;或含有式(I)化合物和可药用载体的组合物。
在某些实施方案中,治疗、预防和/或抑制与细菌感染相关的病况的方法包括步骤:(i)鉴别需要该治疗的受试者;(ii)提供式(I)化合物或提供含有式(I)化合物和可药用载体的组合物;以及(iii)施用治疗有效量的所述化合物或组合物,以治疗、预防和/或抑制有该治疗需要的受试者中与细菌感染相关的疾病状态或病况。
在某些实施方案中,治疗一般指无论是人或动物(例如,在兽医上的应用)中的治疗和疗法,其中实现一些所需的治疗效果,例如,抑制病况进展。治疗还可以包括,但不局限于,无论是可检测的还是检测不到的,降低进展的速率、停止进展的速率、改善病况、治愈疾病或痛苦的稳定(即,没有恶化)状态、防止疾病或痛苦的传播、延迟或减慢疾病或痛苦的进展、改善或缓和疾病或痛苦的状态和缓解(无论是部分还是全部)。在某些实施方案中,治疗还可以指与不接受治疗的预期生存相比,延长生存。在某些实施方案中,还包括作为预防措施(即,预防)的治疗。例如,应用并没有发展成病况、但是有发展成病况的风险的受试者,其也包含在术语“治疗”中。
在某些实施方案中,治疗包括治疗和疗法的组合,其中组合两种或多种治疗或疗法,例如,相继地或同时地。例如,本发明的活性剂还可以用于进一步的组合疗法中,例如,与其它剂结合,如与其它抗微生物或抗生剂等结合。
受试者在体外或体内系统中,包括例如分离的或培养的细胞或组织、体外的非细胞分析系统和动物(例如,两栖动物、鸟、鱼、哺乳动物、有袋目动物、人、家养动物如例如猫、狗、猴、小鼠或大鼠;或商业动物,如例如马、牛(如奶牛)、火鸡、鸡或猪)。
在某些实施方案中,受试者是哺乳动物。在某些实施方案中,受试者是禽、猪、牛或人。在某些实施方案中,受试者是人。在某些实施方案中,受试者是禽。在某些实施方案中,受试者是猪(swine)或猪(pig)。在某些实施方案中,受试者是火鸡或鸡。
另外,组合物或方法可以进一步包括与单独的式(I)化合物组合的一种或多种额外抗细菌或抗生化合物。这样的化合物的例子包括但不局限于,达托霉素、苯唑西林(oxacillin)、哌拉西林/他唑巴坦、替卡西林(ticaricillin)/克拉维酸、阿莫西林/克拉维酸、红霉素、头孢毗肟(cefepim)、克林霉素、亚胺培南、庆大霉素、环丙沙星、氨曲南、万古霉素、利奈唑胺、利福平、卡那霉素、氨苄青霉素、四环素等。
在某些实施方案中,额外(或第二)抗生素是氨基糖苷抗生素。氨基糖苷抗生素是其中分子的一部分含有氨基修饰的糖的抗生化合物。氨基糖苷抗生素的例子包括但不局限于丁胺卡那霉素、安普霉素、阿贝卡星、阿司米星(astromicin),卡那霉素B、卷曲霉素、地贝卡星、双氢链霉素、依沙芦星、G418、庆大霉素、潮霉素B、异帕米星、卡那霉素、春雷霉素、小诺霉素、新霉素、奈替米星、硫酸巴龙霉素、核糖霉素、西索米星、双链霉素(streptoduocin)、链霉素、妥布霉素和甲基紫苏霉素(verdamicin)。
因而,在某些实施方案中,方法和/或组合物进一步包含与式(I)化合物组合的一种或多种额外的抗细菌化合物。在某些实施方案中,额外的抗细菌化合物选自:达托霉素、苯唑西林、哌拉西林/他唑巴坦、替卡西林(ticaricillin).克拉维酸、阿莫西林/克拉维酸、红霉素、头孢毗肟、克林霉素、亚胺培南、庆大霉素、环丙沙星、氨曲南、万古霉素、利奈唑胺、利福平、卡那霉素、氨苄青霉素、和四环素。在某些实施方案中,额外的抗细菌化合物是卡那霉素。在某些实施方案中,额外的抗生素是氨基糖苷抗生素。
在某些实施方案中,本发明提供了通过组合使用式(I)化合物和第二抗生化合物、用于治疗、抑制和/或预防受试者中细菌感染的方法,其中单独使用式(I)化合物或第二抗生化合物不能提供所需的治疗效果。令人惊奇地,发现当其它抗生化合物与式(I)化合物共同使用时,观察到统计学上显著增加的抗生作用。在某些实施方案中,在第二抗生化合物(如卡那霉素)与式(I)化合物之间具有协同作用。因而,在某些实施方案中,卡那霉素和式(I)化合物以表现协同地降低细菌水平的量施用。在某些实施方案中,卡那霉素和式(I)化合物以表现协同地治疗、抑制和/或预防细菌感染的量施用。
本发明的另一个方面是含有有效量的式(I)化合物的药物组合物。在某些实施方案中,Xaa1是赖氨酸。
在某些实施方案中,Xaa2是3-羟基-2,4-二氨基丁酸。
在某些实施方案中,Xaa3是3-羟基-2,4-二氨基丁酸。
在某些实施方案中,Xaa4是甘氨酸。
在某些实施方案中,Xaa5是鸟氨酸。
在某些实施方案中,Xaa6是脯氨酸。
在某些实施方案中,Xaa7是组氨酸。
在某些实施方案中,Xaa8是赖氨酸或5-羟基赖氨酸。
在某些实施方案中,Xaa9是2,3-脱氢精氨酸。
在某些实施方案中,Xaa10是赖氨酸或5-羟基赖氨酸。
在某些实施方案中,n=4。
在某些实施方案中,R是–NH2。
在某些实施方案中,Xaa1是赖氨酸、Xaa2和Xaa3各是3-羟基-2,4-二氨基丁酸、Xaa4是甘氨酸、Xaa5是鸟氨酸、Xaa6是脯氨酸、Xaa7是组氨酸、以及Xaa9是2,3-脱氢精氨酸。
在某些实施方案中,Xaa1是赖氨酸、Xaa2和Xaa3各是3-羟基-2,4-二氨基丁酸、Xaa4是甘氨酸、Xaa5是鸟氨酸、Xaa6是脯氨酸、Xaa7是组氨酸、Xaa8是赖氨酸或5-羟基赖氨酸、Xaa9是2,3-脱氢精氨酸、以及Xaa10是赖氨酸或5-羟基赖氨酸。
在某些实施方案中,Xaa1是赖氨酸、Xaa2和Xaa3各是3-羟基-2,4-二氨基丁酸、Xaa4是甘氨酸、Xaa5是鸟氨酸、Xaa6是脯氨酸、Xaa7是组氨酸、Xaa8是赖氨酸或5-羟基赖氨酸、Xaa9是2,3-脱氢精氨酸、Xaa10是赖氨酸或5-羟基赖氨酸、n是4,以及R是NH2。
在某些实施方案中,本发明提供了含有式(I)化合物的药物组合物和/或药物在治疗、抑制和/或预防由细菌感染引起的、或与细菌感染相关的疾病状态和/或病况的方法中的用途。
在某些实施方案中,治疗方法包括步骤:(i)鉴别需要该治疗的受试者;(ii)提供式(I)的化合物;以及(iii)施用治疗有效量的所述式(I)的化合物,以治疗、抑制和/或预防有该治疗需要的受试者的疾病状态或病况。
在某些实施方案中,治疗方法包括步骤:(i)鉴别需要该治疗的受试者;(ii)提供含有式(I)的化合物的组合物;以及(iii)施用治疗有效量的所述组合物,以治疗、抑制和/或预防有该治疗需要的受试者的疾病状态或病况。
在某些实施方案中,Odilomycin被配制成药物组合物,用于以适合体内施用的生物相容的形式施用于受试者。根据另一个方面,本发明提供了含有式(I)化合物与可药用稀释剂和/或载体混合的药物组合物。可药用载体是“可接受的”,即与组合物中的其它成分相容,并对其接受者无害。文中采用的可药用载体可以选自可用作药物制剂材料的多种有机或无机物材料,并可作为镇痛剂、缓冲剂、粘合剂、崩解剂、稀释剂、乳化剂、赋形剂、填充剂、助流剂、增溶剂、稳定剂、悬浮剂、等渗剂、运载体及增粘剂掺入。也可加入药物添加剂,如抗氧化剂、芳香剂、着色剂、风味改善剂、防腐剂、和甜味剂。可药用载体的例子包括羧甲基纤维素、结晶纤维素、甘油、阿拉伯胶、乳糖、硬脂酸镁、甲基纤维素、粉末剂、盐水、藻酸钠、蔗糖、淀粉、滑石粉和水等等。在一些实施方案中,术语“可药用”指经联邦或州政府的管理机构批准的,或在美国药典或其它公认的药典中列出的可用于动物、并且更特别地可用于人。
表面活性剂如,例如去污剂,也适用于本制剂。
对施用于受试者时,本发明的化合物和可药用载体可以是无菌的。合适的药物载体还可以包括赋形剂,如淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、滑石粉(chalk)、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、聚乙二醇300、水、乙醇、聚山梨酯20、等等。本发明组合物,如果需要,还可以含有少量的润湿剂或乳化剂,或pH缓冲剂。
本发明的药物组合物或制剂由药学领域公知的方法制备。例如,将式(I)化合物与载体和/或稀释剂联合,作为悬浮液或溶液。任选地,还可以加入一种或多种辅助成分(例如,缓冲液、调味剂、表面活性剂,等)。载体的选择由化合物的溶解度和化学性质、选择的施用途径和标准药学实践决定。
此外,Odilomycin或包含其的组合物通过已知的步骤施用至受试者,包括但不限于,口服施用、舌下或口腔含化(buccal)施用、肠胃外施用、局部施用、经皮施用、通过吸入或鼻内施用、阴道施用、直肠施用、和肌肉内施用。化合物或组合物通过筋膜上、囊内、颅内、皮内、鞘内、肌肉内、眶内、腹膜内、脊柱内、胸骨内、血管内、静脉内、薄壁组织内、皮下或舌下注射、或通过导管的方式肠胃外施用。
在某些实施方案中,化合物和/或组合物口服施用。在某些实施方案中,化合物和/或组合物皮下施用。在某些实施方案中,化合物和/或组合物静脉内施用。在某些实施方案中,化合物和/或组合物肌肉内施用。在某些实施方案中,化合物和/或组合物局部施用。在某些实施方案中,化合物和/或组合物肠胃外施用。
在某些实施方案中,组合物是单位剂型,如片剂、胶囊或单剂量小瓶。合适的单位剂量,即治疗有效量,可以在为所选化合物的各指定施用条件而恰当地设计的临床试验期间确定,当然,其依据所需的临床端点而不同。
在某些实施方案中,用于口服使用的药物组合物包含Odilomycin连同通常作为稀释剂的赋形剂,如甘露醇、乳糖和山梨醇;粘合剂如淀粉、明胶、糖、纤维素衍生物、天然树胶和聚乙烯吡咯烷酮;润滑剂如滑石、硬脂酸盐/酯、氢化植物油、聚乙二醇和胶体二氧化硅;崩解剂如淀粉、纤维素、藻酸盐/酯、树胶和网状聚合物;和其它着色剂、调味剂和甜味剂。
在某些实施方案中,组合物包含Odilomycin和适合用于局部施用的载体或赋形剂。任何局部制剂可用于本发明中,例如软膏剂、润发油、霜剂、凝胶剂和洗剂。根据本发明用于局部施用的示例性组合物包括软膏剂、润发油、霜剂、凝胶剂和洗剂。
Odilomycin的剂量取决于所需的作用、治疗期间和所用施用的途径。
在某些实施方案中,根据本发明的药物组合物用作抗微生物剂、用作抗生素或用于治疗微生物疾病,特别是由细菌引起的微生物疾病。
根据本发明的药物组合物优选用于治疗细菌感染,特别地用于治疗医院获得性感染或院内细菌感染。
Odilomycin可以与其它表现抗微生物/抗生活性的活性化合物组合。本发明包含的药物组合物还可以包含用于治疗细菌疾病或细菌感染的其它治疗剂。
在某些实施方案中,方法包括施用治疗有效剂量的Odilomycin。施用的剂量可依据已知因素而不同,如活性成分的药效学特征及其施用模式和途径;活性成分的施用时间;接受者的年龄、性别、健康和体重;症状的性质和程度;同时进行的治疗种类、治疗频率和所需的效果;以及排泄率。这些均容易确定,可由技术人员用来调整或滴定剂量和/或剂量方案。组合物中采用的精确剂量还将依赖于施用途径,应根据参与者的判断和每个患者的情况确定。
任何化合物和/或组合物可以以含有该化合物和/或组合物的试剂盒提供。因而,在某些实施方案中,化合物和/或组合物在试剂盒中提供。
本发明的另一个方面是用于生产式(I)化合物的方法,包括以下步骤:
a)在液体培养基上生长嗜线虫致病杆菌株CNCMI-4530;和
b)纯化式(I)的化合物。
在式(I)化合物的某些实施方案中,Xaa1是赖氨酸。在某些实施方案中,Xaa2是3-羟基-2,4-二氨基丁酸。在某些实施方案中,Xaa3是3-羟基-2,4-二氨基丁酸。在某些实施方案中,Xaa4是甘氨酸。在某些实施方案中,Xaa5是鸟氨酸。在某些实施方案中,Xaa6是脯氨酸。在某些实施方案中,Xaa7是组氨酸。在某些实施方案中,Xaa8是赖氨酸或5-羟基赖氨酸。在某些实施方案中,Xaa9是2,3-脱氢精氨酸。在某些实施方案中,Xaa10是赖氨酸或5-羟基赖氨酸。在某些实施方案中,n=4。在某些实施方案中,R是–NH2。
在某些实施方案中,Xaa1是赖氨酸、Xaa2和Xaa3各自是3-羟基-2,4-二氨基丁酸,Xaa4是甘氨酸、Xaa5是鸟氨酸、Xaa6是脯氨酸、Xaa7是组氨酸、Xaa8是赖氨酸或5-羟基赖氨酸、Xaa9是2,3-脱氢精氨酸、以及Xaa10是赖氨酸或5-羟基赖氨酸。
在某些实施方案中,Xaa1是赖氨酸、Xaa2和Xaa3各自是3-羟基-2,4-二氨基丁酸、Xaa4是甘氨酸、Xaa5是鸟氨酸、Xaa6是脯氨酸、Xaa7是组氨酸、Xaa8是赖氨酸或5-羟基赖氨酸、Xaa9是2,3-脱氢精氨酸、Xaa10是赖氨酸或5-羟基赖氨酸、n是4,以及R是NH2。
在某些实施方案中,式(I)化合物是式(Ia)的化合物。
在某些实施方案中,式(I)化合物是式(Ib)的化合物。
在某些实施方案中,式(I)化合物是式(Ic)的化合物。
可以从本发明的嗜线虫致病杆菌细胞中纯化Odilomycin。有利地,可以在除去嗜线虫致病杆菌细胞后从培养物上清纯化化合物。为了制备具有抗细菌活性的培养物上清,在标准条件下在液体培养基中生长嗜线虫致病杆菌株CNCMI-4530,除去细菌细胞,回收上清。可通过例如离心或过滤除去细菌细胞。
可通过任何公知的方法进行进一步的Odilomycin纯化,该公知的方法包括阳离子交换色谱法、反相色谱法和/或反相HPLC。
在某些实施方案中,可通过连续的阳离子交换色谱法、反相色谱法和/或反相HPLC从嗜线虫致病杆菌株CNCMI-4530的培养物上清纯化Odilomycin。
还可以根据本领域标准技术合成Odilomycin,所述技术包括但不局限于溶液相有机合成和固相有机合成。在某些实施方案中,固相有机合成包括通过肽合成仪器进行的合成。这样的实施方案及其执行都是在普通技术人员的范围之内。示例性的合成方法描述于Bodanzky,等人“ThePracticeofPeptideSynthesis,”Springer-Verlag(1994)。
本领域技术人员将理解,或可以仅仅使用常规实验确认很多等同于文中所述发明的特定实施方案的等同物。这些等同物意图包含在本发明的范围内。
将进一步理解,除非特别指出不可能,否则本发明的任何或全部组合、实施方案和方面可以以任何方式组合以提供在本发明范围内其它组合、实施方案和方面。
通过以下非限制的实施例进一步描述本发明。
实施例
实施例1:生产和发酵
生物的生产
在Luria-Bertani介质(由细菌蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L和NaCl10g/L组成的LB)上液体培养,在LB琼脂上固体培养生长嗜线虫致病杆菌CNCMI-4530(多样性、基因组以及相互作用微生物-昆虫保藏中心(“Diversité,genomesetinteractionsmicroorganisms-insectscollection”))。通过在NBTA(营养琼脂(Difco)31g/L、溴麝香草酚蓝25mg/L和2,3,5-三苯基四唑鎓氯化物1%40mg/L)上培养、并通过测量抗藤黄微球菌(Micrococcusluteus)的抗细菌活性确定该株的相状态(I或II)。当在体外培养时,致病杆菌属(Xenorhabdus)表现出两个菌落形成或变体。外膜的修饰诱导了变体不同的染料吸收。相I的变体吸收染料,在NBTA板上是蓝色,而相II菌落是红色。指定株的相I和相II作为后缀(分别是,/1和/2)附在株的命名上。该株在15℃、在NBTA介质上维持。
发酵
在28℃、在2升的锥形瓶中在由细菌蛋白胨15g/L、MgSO4·7H2O2g/L和葡萄糖为2g/L组成的500mL肉汤介质中,嗜线虫致病杆菌CNCMI-4530振荡培养72小时。用相同介质中0.1%(v/v)的24小时预培养物接种培养。抗生素的生产通过分析型HPLC监测。
实施例2:分离
通过低速离心(4℃下6000×g,10分钟)除去细菌细胞,在0.22μm孔大小的过滤器上使上清无菌。将上清(1:1;v/v)加入至0.1MNaCl-0.02MTris缓冲液(pH7),在SepPack羧甲基柱上(AccellPlusCM,Waters)进行阳离子色谱交换。用0.1MNaCl-0.02MTris缓冲液(pH7)冲洗,除去未结合的物质,用1MNaCl-0.02MTris缓冲液(pH7)洗脱抗生活性物。该洗脱液被0.1%(v/v)三氟乙酸(TFA)酸化,然后在SepPackC18柱上(Sep-PakPlusC18,Waters)进行反相色谱。通过H2O-TFA0.1%冲洗除去未结合的物质,用乙腈洗脱抗生素池。洗脱液冻干,然后再悬浮于水(1:5;v/v)中。使用C18柱(Waters;SymmetrySymmetryC18;5μm;4.6X150mm)通过反相HPLC从粗提取物中分离纯化合物,H2O/0.1%TFA-乙腈的线性梯度在30分钟内从0%至30%,流速1mL/分钟,UV检测从200至400nm,获得了具有以下HPLC保留时间的Odilomycin:OdilomycinA14.16min(纯度:98%UV),OdilomycinB14.44min(纯度:95%UV),以及OdilomycinC14.6min(纯度:94%UV)。
实施例3:鉴定和物理化学特征
NMR和MS分析
使用质谱和NMR分析纯化的化合物,以确定其化学结构。
在配置有冷冻探针的BrukerAvance光谱仪上,在700MHz下操作、进行NMR研究。样本(10mM)在水(95/5H2O/D2Ov/v)中溶解,用盐酸将pH调节至3.5。在280°K下记录所有数据。根据IUPAC的推荐,相对于4,4-二甲基-硅戊烷-1-磺酸钠表示质子化学位移。使用States-TPPI方法(MarionD.等人,J.Magn.Reson.85,393-399(1989)),在相敏模式下获得双量子过滤-相关光谱(DQF-COSY)、Z-过滤总-相关光谱(Z-TOCSY)和核欧豪斯效应光谱(NOESY)。用80ms混合时间获得z-TOCSY谱,用220ms混合时间获得NOESY谱。用相同的样本进行1H-13CHSQC和1H-13CHSQC-TOCSY实验。通过WATERGATE方法抑制设置在载波频率的水共振(PiottoM.等人J.Biomol.NMR2,661-665(1992))。所有数据用XWINNMR软件处理。从同核和杂化核的数据分析鉴定非经典残基(residue)。使用Wüthrich(WuthrichK.NMRofProteinsandNucleicAcids,JohnWiley&Sons,NewYork(1986))描述的一般策略实现连续指定。
首先进行LC-MS,以获得所有Odilomycin衍生物质子化分子的m/z值。然后在OdilomycinA、B和C上进行MS-MS片段化。在WatersallianceLC-MS系统(WatersZQ质量检测器,Waters光电二极管阵列检测器2696,WatersallianceHPLC系统2790)上,在正模式下获得ESI-LC-MS数据。使用的HPLC柱是维持在35℃的C18柱(WatersSymmetryC185μm4.6X150mm)。溶剂是(A)水+0.1%TFA、(B)乙腈+0.1%TFA,流速为1mL/min。流动相组合物,在0分钟为100%A,在30分钟改变为30%B。样本溶解在溶剂A(100μL)中。样本注射体积为10μL。通过200-400nm处的吸光度进行紫外可见检测。流动到MS的溶剂在最初的5分钟被转向到废液处,以减少盐积聚。在WatersMicromassQ-Tof的微质谱仪上获得MS-MS片段化的数据。
Odilomycin的物理化学特征
称为OdilomycinA、B和C的三种化合物被分离、纯化为白色粉末的均一化物质,并由质谱鉴定。ESI-MS实验揭示了不同Odilomycin的分子量。
OdilomycinA:白色粉末;UV:λmax(MeOH)=214nm;ESI-MS(m/z):1297[M+H]+;
OdilomycinB:白色粉末;UV:λmax(MeOH)=214nm;ESI-MS(m/z):1281[M+H]+;
OdilomycinC:白色粉末;UV:λmax(MeOH)=214nm;ESI-MS(m/z):1265[M+H]+。
化学结构的阐明
由NMR和质谱数据结合的分析建立OdilomycinA的化学结构。
在水中获得NMR数据,并记录了一组实验,包括DQF-COSY、TOCSY、NOESY、1H-13CHSQC和1H-13CHSQC-TOCSY实验(图1和2)。1D的光谱揭示了肽化合物的性质,其在跨越8.9-7.0ppm化学位移区就有至少6个酰胺信号,在4.8-3.7ppm区具有α质子信号,并在3.7-1.1ppm区具有β质子信号。在高场区域没有观察到甲基信号,指示不存在Ala、Thr、Leu、Val和Ile残基。与此相反,观察到包括9.60ppm的单峰和6.17ppm的三重峰的信号,表明非经典残基的存在。除同核数据以外,1H-13C杂化核数据特别有助于鉴定非经典残基的自旋系统。
所有这些数据的组合分析允许鉴定出11个自旋系统,包括4种非经典残基:α,γ-二氨基β-羟基丁酸(Dab(βOH))、δ-羟基赖氨酸(Dhl)、α,β-脱氢精氨酸(Dha)和α,δ-二氨基丁烷(Dbt)。这些非经典残基的不对称碳的构型,以及经典残基的构型均不能确定。强烈的Orn5Hα-Pro6Hδδ'NOE强度表明Orn5-Pro6酰胺键采用了反式构象。通过使用连续NOE,这种假肽的序列被确定为如下:
Lys1-Dab(βOH)2-Dab(βOH)3-Gly4-Orn5-Pro6-His7-Dhl8-Dha9-Dhl10-Dbt11
NMR数据在表1(OdilomycinA)、表2(OdilomycinB)和表3(OdilomycinC)中报告了。
该序列与由质谱数据测量的1297Da的分子量完全一致,并于由MS/MS片段化数据确认的非经典残基完全一致。
表1:OdilomycinA的化学位移(水,280K)
表2:OdilomycinB的化学位移(水,280K)
表3:OdilomycinC的化学位移(水,280K)
表4:OdilomycinA的1297[M+H]+离子主要的片段化
172 | [Gly4/Orn5]+ |
233 | [Dab(βOH)2/Dab(βOH)3]+ |
235 | [Pro6/His7]+23 --> |
245 | [Lys1/Dab(βOH)2]+ |
282 | [His7/Dhl8]+ |
299 | [Dhl8/Dha9]+或[Dha9/Dhl10]+ |
361 | [Lys1/Dab(βOH)2/Dab(βOH)3]+ |
370 | [Dha9/Dhl10/Dbt11]+-NH3+ |
379 | [Pro6/His7/Dhl8]+ |
396 | [Pro6/His7/Dhl8]++NH3+ |
406 | [Gly4/Orn5/Pro6/His7]+ |
436 | [His7/Dhl8/Dha9]+ |
530 | [Dhl8/Dha9/Dhl10/Dbt11]+ |
533 | [Lys1/Dab(βOH)2/Dab(βOH)3/Gly4/Orn5]+或[Pro6/His7/Dhl8/Dha9]+ |
550 | [Gly4/Orn5/Pro6/His7/Dhl8]+ |
567 | [Gly4/Orn5/Pro6/His7/Dhl8]++NH3+ |
683 | [Dab(βOH)3/Gly4/Orn5/Pro6/His7/Dhl8]++NH3+ |
704 | [Gly4/Orn5/Pro6/His7/Dhl8/Dha9]+ |
765 | [Pro6/His7/Dhl8/Dha9/Dhl10/Dbt11]+ |
820 | [Dab(βOH)3/Gly4/Orn5/Pro6/His7/Dhl8/Dha9]+ |
936 | [Gly4/Orn5/Pro6/His7/Dhl8/Dha9/Dhl10/Dbt11]+ |
964 | [Dab(βOH)3/Gly4/Orn5/Pro6/His7/Dhl8/Dha9/Dhl10]+ |
1052 | [Dab(βOH)3/Gly4/Orn5/Pro6/His7/Dhl8/Dha9/Dhl10/Dbt11]+ |
1064 | [Lys1/Dab(βOH)2/Dab(βOH)3/Gly4/Orn5/Pro6/His7/Dhl8/Dha9]+ |
1297 | [Lys1/Dab(βOH)2/Dab(βOH)3/Gly4/Orn5/Pro6/His7/Dhl8/Dha9/Dhl10/Dbt11]+ |
表5:OdilomycinB的1281[M+H]+离子主要的片段化
172 | [Gly4/Orn5]+ |
233 | [Dab(βOH)2/Dab(βOH)3]+ |
235 | [Pro6/His7]+ |
245 | [Lys1/Dab(βOH)2]+ |
266 | [His7/Lys8]+ |
361 | [Lys1/Dab(βOH)2/Dab(βOH)3]+ |
370 | [Dha9/Dhl10/Dbt11]+-NH3+ |
363 | [Pro6/His7/Lys8]+ |
380 | [Pro6/His7/Lys8]++NH3+ |
406 | [Gly4/Orn5/Pro6/His7]+ |
514 | [Lys8/Dha9/Dhl10/Dbt11]+ |
517 | [Pro6/His7/Lys8/Dha9]+ |
533 | [Lys1/Dab(βOH)2/Dab(βOH)3/Gly4/Orn5]+ |
534 | [Gly4/Orn5/Pro6/His7/Lys8]+24 --> |
551 | [Gly4/Orn5/Pro6/His7/Lys8]++NH3+ |
667 | [Dab(βOH)3/Gly4/Orn5/Pro6/His7/Lys8]++NH3+ |
688 | [Gly4/Orn5/Pro6/His7/Lys8/Dha9]+ |
749 | [Pro6/His7/Lys8/Dha9/Dhl10/Dbt11]+ |
804 | [Dab(βOH)3/Gly4/Orn5/Pro6/His7/Lys8/Dha9]+ |
920 | [Gly4/Orn5/Pro6/His7/Lys8/Dha9/Dhl10/Dbt11]+ |
948 | [Dab(βOH)3/Gly4/Orn5/Pro6/His7/Lys8/Dha9/Dhl10]+ |
1036 | [Dab(βOH)3/Gly4/Orn5/Pro6/His7/Lys8/Dha9/Dhl10/Dbt11]+ |
1048 | [Lys1/Dab(βOH)2/Dab(βOH)3/Gly4/Orn5/Pro6/His7/lys8/Dha9]+ |
1281 | [Lys1/Dab(βOH)2/Dab(βOH)3/Gly4/Orn5/Pro6/His7/lys8/Dha9/Dhl10/Dbt11]+ |
表6:OdilomycinC1264[M+H]+离子主要的片段化
172 | [Gly4/Orn5]+ |
233 | [Dab(βOH)2/Dab(βOH)3]+ |
235 | [Pro6/His7]+ |
245 | [Lys1/Dab(βOH)2]+ |
266 | [His7/Lys8]+ |
361 | [Lys1/Dab(βOH)2/Dab(βOH)3]+ |
354 | [Dha9/Lys10/Dbt11]+-NH3+ |
363 | [Pro6/His7/Lys8]+ |
380 | [Pro6/His7/Lys8]++NH3+ |
406 | [Gly4/Orn5/Pro6/His7]+ |
498 | [Lys8/Dha9/Lys10/Dbt11]+ |
517 | [Pro6/His7/Lys8/Dha9]+ |
533 | [Lys1/Dab(βOH)2/Dab(βOH)3/Gly4/Orn5]+ |
534 | [Gly4/Orn5/Pro6/His7/Lys8]+ |
551 | [Gly4/Orn5/Pro6/His7/Lys8]++NH3+ |
688 | [Gly4/Orn5/Pro6/His7/Lys8/Dha9]+ |
733 | [Pro6/His7/Lys8/Dha9/Lys10/Dbt11]+ |
804 | [Dab(βOH)3/Gly4/Orn5/Pro6/His7/Lys8/Dha9]+ |
904 | [Gly4/Orn5/Pro6/His7/Lys8/Dha9/Lys10/Dbt11]+ |
932 | [Dab(βOH)3/Gly4/Orn5/Pro6/His7/Lys8/Dha9/Lys10]+ |
1020 | [Dab(βOH)3/Gly4/Orn5/Pro6/His7/Lys8/Dha9/Lys10/Dbt11]+ |
1048 | [Lys1/Dab(βOH)2/Dab(βOH)3/Gly4/Orn5/Pro6/His7/lys8/Dha9]+ |
1265 | [Lys1/Dab(βOH)2/Dab(βOH)3/Gly4/Orn5/Pro6/His7/lys8/Dha9/Lys10/Dbt11]+ |
实施例4:体外研究
抗细菌易感性的测试方法
根据表7详细指明的临床和实验室标准研究所(CLSI)条件指南,确定最小抑制浓度(MIC)。每个试验一式三份进行。
表7:MIC确定参数
接种物的制备。挑选5至10个良好分离的菌落,并重新悬浮于3ml无菌盐水。通过在涡旋混合器上15秒剧烈振荡再悬浮接种物。浊度调节至McFarland标准0.5(1-5×106CFU/ml)。接种物进一步稀释在适当的介质中(表7),以得到每孔~2-8×105CFU/ml的最终接种物。
测试物的添加。在适当的介质中稀释OdilomycinA或比较物的存储液,以获得试验中50μg/mL的最高起始浓度。将50μL介质分注到96孔板的列2至12的每孔。将100μL合适的测试化合物溶液(100μg/mL)分注到列1的每孔中。在卡他莫拉菌、溶血性曼氏杆菌和多杀巴斯德杆菌的情况下,这些值加倍(使用最终试验体积200μL)。从列1至列10进行两倍的系列稀释,以得到分析中50至0.1μg/mL浓度范围的各化合物。列11和12分别为阳性(无药物或测试物,加接种物)和阴性(无药物、测试物、或不添加接种物)生长对照。
细菌株的添加。向合适的孔中添加50μL各接种物悬液,得到最终体积100μL,其由50μL稀释的化合物或稀释剂,和50μL接种物或单独的肉汤组成。
通过扩展MIC程序建立最小杀菌浓度(MBC),以评估杀细菌活性。24小时后,从孔中吸取10μL,系列稀释,然后点样到适当的琼脂板。板在37℃下孵育过夜。18小时后,MBC读取为在次代培养中获得0.1%存活的最低抗生素浓度。所有的实验重复进行三次。
还在50%和95%(v/v)人血清存在时确定MBC,以评估蛋白结合。
Odilomycin对生长的金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌的杀细菌作用
使用相当于MIC四倍的OdilomycinA浓度,接种金黄色葡萄球菌ATCC13709和绿脓杆菌ATCC27853,绘制细菌杀伤曲线。使用四倍的其MIC的万古霉素或多粘菌素。从MHB中过夜生长的菌落中制备金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌的接种物。根据所需浓度在MHB中调节烧瓶中的抗生素浓度。用金黄色葡萄球菌或绿脓杆菌以大约105CFU/mL的接种物去接种含10mL的培养管。吸取样本,在37℃、在孵育0、1、2、3、4、6和24h时计数细菌。因而,在涡旋培养管后,取两个50μL样本,用MHB系列稀释。每一稀释步骤后,用20μL铺板至LB琼脂板,在37℃孵育24小时。而后计数菌落,并反推原始体积,以确定初始浓度(CFU/mL)。
体外生物特征
检测OdilomycinA对抗院内和动物感染中涉及的宽范围细菌的抗微生物活性。其具有对抗革兰氏阳性和革兰氏阴性病原体的广谱抗细菌活性(表8)。对于革兰氏阳性菌,OdilomycinA的抗细菌活性强,其抗金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和枯草芽孢杆菌株,包括对抗一些多重抗性的临床分离株(isolates)的MIC低于1μg/mL(表9)。对粪肠球菌、乳酸肠球菌、肺炎球菌和产脓链球菌观察到弱的或无抗细菌活性。对于革兰氏阴性菌,OdilomycinA对抗肺炎克雷伯氏菌和抗产酸克雷伯菌的抗细菌活性强,并且对抗鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌、大肠杆菌、卡他莫拉菌、绿脓杆菌和嗜麦芽寡养单孢菌株,包括一些多重抗性的临床分离株的抗细菌活性优良,MIC低于10μg/mL(表8,表9)。
表8:OdilomycinA、B、C的抗细菌活性
*来自Nimes大学医院的临床分离株。a环丙沙星;b甲硝唑;c多粘菌素;d万古霉素。
表9:OdilomycinA抗多重抗性临床分离株的抗细菌活性
a哌拉西林/他唑巴坦,b替卡西林/克拉维酸、R:抗性,S:敏感、I:中间。
在金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌上评价了OdilomycinsA-C的MBC。揭示这些分子是抗细菌的(表9)。
表10:OdilomycinsA、B、C的杀细菌活性
杀伤时间实验实现了OdilomycinsA对生长的金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌的杀细菌作用的评估。在四倍的MIC时,OdilomycinsA分别在2和3小时内杀死100%绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌,使该分子称为快速强效的杀细菌剂(图3和4)。
在50%(v/v)和95%(v/v)人血清存在时评估了OdilomycinsA的MBC(表10)。结果表明该分子的抗细菌活性受血清蛋白存在的影响弱。
表11:血清对OdilomycinA杀细菌活性的作用
血清%(v/v) | MBC金黄色葡萄球菌ATCC13709 |
0 | 0.78 |
50 | 1.56 |
95 | 1.56 |
细胞毒性测试
研究了OdilomycinA-C抗人结肠腺癌(HT29)细胞和人正常肺成纤维细胞(MRC-5)的细胞毒性。在补充有10%(v/v)胎牛血清的RPMI1640+1%L-谷氨酰胺中制备的200μLHT29(人结肠直肠腺癌)细胞悬液、以及在补充有25mM葡萄糖和10%(v/v)胎牛血清的Dulbecco’s改良Eagle’s介质中制备的200μLMRC5(人肺成纤维细胞)细胞悬液接种在96孔板中。
HT29的接种细胞数是每孔800个细胞,MRC-5的接种细胞数是每孔2100个细胞。微板在5%CO2、37℃下孵育24小时。
24小时后,持续72小时加入溶于水中的OdilomycinA、B、或C,使得在固定体积的水中的最终浓度从0.78μg/mL至100μg/mL(1%终浓度)。使用MTS试剂(Promega,Madison,WI)在490nm处测量活细胞数,LD50计算为引起抑制50%细胞增殖的化合物浓度。实验重复三次。
对于各OdilomycinA、B和C,抗两种细胞系的LD50均高于100μg/mL。在高达100μg/mL的剂量时,观察到100%的细胞活力。
实施例5:与其它抗微生物剂协同作用的研究
使用96孔微滴定板,通过微量稀释棋盘技术,研究了OdilomycinA与利福平、环丙沙星、卡那霉素、庆大霉素、氨苄青霉素、四环素和万古霉素各组合间的体外相互作用。
万古霉素、利福平、卡那霉素、庆大霉素、氨苄青霉素、环丙沙星和四环素(Sigma-Aldrich)是由制造商提供的标准粉末。
在MHB中2倍系列稀释的抗微生物剂单独、或组合放置于孔中,用适当的金黄色葡萄球菌ATCC25923接种物或肺炎克雷伯氏菌ATCC43816接种,使每孔含大约104CFU/mL。在37℃孵育16-20小时后,MIC被认为是观察不到可见生长的含有两种药物最低浓度的孔。在组合中测试的各抗微生物剂的浓度在1/8×MIC和2×MIC之间。
与其它抗微生物剂的协同作用
研究了OdilomycinA与来自不同种类的其它抗生素对抗金黄色葡萄球菌的相互作用(表11)。观察到与氨基糖苷抗生素卡那霉素和庆大霉素的协同相互作用。在抗肺炎克雷伯氏菌中也观察到该协同相互作用(表12)。
表12:OdilomycinA与其它抗生素对抗金黄色葡萄球菌的协同相互作用
表13:OdilomycinA与氨基糖苷对抗肺炎克雷伯氏菌的协同相互作用
实施例6:体内研究
OdilomycinA的体内生物活性
从HarlanLaboratories(Indianapolis,IN)订购的雌性ICR小鼠,重19-21g,用于急性致死性感染实验。小鼠是免疫功能健全的。通过小鼠腹腔内接种金黄色葡萄球菌SmithATCC13709的细菌悬液诱导感染。细菌挑战液(ca5log10CFU/小鼠)悬浮于0.5mL的20%猪粘蛋白中给予。通过静脉注射挑战后1小时施用1次治疗(挑战后立即施用利奈唑胺)(表13)。死亡率跟踪至挑战后5天。在研究结束时对仍然存活的动物人道安乐死。
表14:挑战和剂量日程
从HarlanLaboratories(Indianapolis,IN)订购的雌性BALB/c小鼠,重19-21g,用于急性致死性感染实验。小鼠是免疫功能健全的。通过小鼠腹腔内接种绿脓杆菌ATCC27853的细菌悬液诱导感染。细菌挑战液(8.6log10CFU/小鼠)悬浮于0.1mL无菌盐水中给予。通过静脉注射挑战后1小时施用1次治疗(挑战后立即通过腹腔注射施用妥布霉素)(表13)。死亡率跟踪至挑战后2天。在研究结束时对仍然存活的动物人道安乐死。
表15:挑战和剂量日程
体内生物特征
未治疗的动物在金黄色葡萄球菌感染后24-48小时内死亡。用剂量5.0mg/kg和2.5mg/kg的利奈唑胺和OdilomycinA治疗的所有小鼠存活到感染后第5天(表14)。一只用剂量1.0mg/kgOdilomycinA治疗的小鼠在感染后第2天死亡。
表16:金黄色葡萄球菌挑战和治疗后小鼠的生存
未治疗的动物在绿脓杆菌感染后24-48小时内死亡。用妥布霉素治疗的所有小鼠存活到感染后第5天(表14)。一只用剂量15mg/kgOdilomycinA治疗的小鼠在第1天死亡,4只用剂量7.5mg/kgOdilomycinA治疗的小鼠在第1天死亡。表17:绿脓杆菌挑战和治疗后小鼠的生存
Claims (12)
1.一种式(I)的化合物:
Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-NH-(CH2)n-R(I)
其中
Xaa1是赖氨酸;
Xaa2和Xaa3各自是3-羟基-2,4-二氨基丁酸;
Xaa4是甘氨酸;
Xaa5是鸟氨酸;
Xaa6是脯氨酸;
Xaa7是组氨酸;
Xaa8是赖氨酸或5-羟基赖氨酸;
Xaa9是2,3-脱氢精氨酸;
Xaa10是赖氨酸或5-羟基赖氨酸;其中当Xaa10是赖氨酸时,Xaa8是赖氨酸;
n是4;和
R是NH2。
2.根据权利要求1所述的化合物,其中所述化合物是式(Ia)的化合物:
3.根据权利要求1所述的化合物,其中所述化合物是式(Ib)的化合物:
4.根据权利要求1所述的化合物,其中所述化合物是式(Ic)的化合物:
5.根据前述权利要求中任一项所述的化合物在制备用于治疗受试者中细菌感染的药物中的用途。
6.一种组合物,其包含权利要求1-4中任一项的化合物,进一步包含第二抗生化合物。
7.根据权利要求6的组合物,其中所述第二抗生化合物是氨基糖苷抗生素。
8.根据权利要求6或7的组合物,其中所述的第二抗生化合物是卡那霉素和/或庆大霉素。
9.一种药物组合物,其含有权利要求1-4任一项的化合物和可药用载体。
10.一种用于生产根据权利要求1-4任一项的化合物的方法,包括以下步骤:
a)在液体培养基中生长嗜线虫致病杆菌株CNCMI-4530;和
b)纯化根据权利要求1-4任一项的化合物。
11.一种嗜线虫致病杆菌株,其于2011年9月21日保藏于CNCM,登陆号CNCMI-4530,其用于生产根据权利要求1-4所述的化合物。
12.具有抗生活性的培养物上清,其来自权利要求11的嗜线虫致病杆菌株。
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