CN103820310A - 一种药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒与测试方法 - Google Patents

一种药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒与测试方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103820310A
CN103820310A CN201410051738.0A CN201410051738A CN103820310A CN 103820310 A CN103820310 A CN 103820310A CN 201410051738 A CN201410051738 A CN 201410051738A CN 103820310 A CN103820310 A CN 103820310A
Authority
CN
China
Prior art keywords
medicine
lattice
kit
bacterium
box
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201410051738.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103820310B (zh
Inventor
童明庆
金栋
张怡
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Xintrum Pharmaceuticals Ltd
Original Assignee
Xintrum Pharmaceuticals Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Xintrum Pharmaceuticals Ltd filed Critical Xintrum Pharmaceuticals Ltd
Priority to CN201410051738.0A priority Critical patent/CN103820310B/zh
Publication of CN103820310A publication Critical patent/CN103820310A/zh
Priority to PCT/CN2014/085310 priority patent/WO2015120712A1/zh
Priority to US15/118,958 priority patent/US10443082B2/en
Application granted granted Critical
Publication of CN103820310B publication Critical patent/CN103820310B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/30—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration
    • C12M41/36—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration of biomass, e.g. colony counters or by turbidity measurements
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/02—Form or structure of the vessel
    • C12M23/12—Well or multiwell plates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
    • C12M25/14—Scaffolds; Matrices
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/18—Testing for antimicrobial activity of a material

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Abstract

本发明公开了一种细菌/真菌药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒和测试方法，该检测试剂盒包括测试条单元，所述测试条单元包括条状的培养基盒和药物盒，所述培养基盒和药物盒分别具有径向排列的培养基容格和药物容格，所述培养基容格可对应插入所述药物容格内，药物盒、培养基盒稳定且易于保存运输，可以做成试剂盒长期保存；试验操作简单方便；采用本发明的测试方法，试验结果易于观察和判断；可以用于慢生长细菌/真菌的药敏试验，如真菌、厌氧菌等；实验操作和废物处理具有很高的生物安全性。

Description

一种药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒与测试方法
技术领域
本发明涉及细菌/真菌药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒与测试方法，属于药物测定设备和测定方法的技术领域。
背景技术
抗菌药物的敏感试验常用的方法有纸片法、稀释法和E-test法，纸片法药敏试验属定性试验方法，虽然方便但提供的信息较少，不能对各种敏感药物之间进行比较和择优选用。稀释法有肉汤稀释法和琼脂稀释法，肉汤法又有试管肉汤稀释法和微量稀释法之分。试管稀释法操作繁琐，不利于大量检测；微量稀释法虽然较试管稀释法的试剂和标本用量少，但仍然比较麻烦且结果阅读没有试管稀释法清晰；琼脂稀释法利于大量检测，但不适用于常规个别临床标本的检测，而且只能现做试验现配含药培养平板，亦比较麻烦。E-test法结合了纸片法方便和稀释法可以给出MIC的优点，但价格较贵且MIC结果不是很准。综上所述可知，现有技术的抗菌药物敏感试验的常用方法已经不能满足人们的要求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种细菌/真菌药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒与测试方法，满足目前临床上的要求，既利于单个操作也利于批量标本操作，且又准确方便，各种不同的抗生素和琼脂皆为预制，用时根据需要自由组合，既能定性又能定量地给出MIC的药敏试验方法和试剂，填补了本领域的空白，满足了市场的迫切需要，解决了现有技术存在的缺憾。
本发明采用如下技术方案实现：
细菌/真菌药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒，该检测试剂盒包括测试条单元，所述测试条单元包括条状的培养基盒和药物盒，所述培养基盒和药物盒分别具有径向排列的培养基容格和药物容格，所述培养基容格可对应插入所述药物容格内，所述培养基容格内预制有固态培养基，所述药物容格的底部内壁具有一个凸面，所述凸面上设置有抗菌药物。
进一步的，所述培养基容格内壁的中部设置有腰线，所述腰线是向中轴线方向突出的突起。
进一步的，还包括盒状培养架，所述盒状培养架上具有镂空的通槽，所述测试条单元可卡接于所述通槽内。
进一步的，所述培养基盒的顶部和底部分别设置有片状的、可分离的塑料薄膜。
进一步的，所述盒状培养架上的一侧设置有对照标识板。
进一步的，所述对照标识板包括阳性对照标识、阴性对照标识和数字刻度标识。
本发明还提供一种细菌/真菌药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
⑴  药物盒、药物盒盖、培养基盒主体、培养基盒底部、盒状培养架和培养基包装盒的模压制备；
⑵  药物盒、药物盒盖、培养基盒主体、培养基盒底部的灭菌；
⑶  在相对无菌条件下将一定量的抗菌药物溶液加入药物盒小格中，真空干燥；
⑷  培养基盒底部粘贴有塑料薄膜；
⑸  以液体培养基为溶质，无菌配制一定浓度的溶胶注入培养基盒小格中，使其凝固制成固态培养基；然后在培养基盒上表面封一层塑料薄膜。
⑹  将药物盒、药物盒盖无菌包装于塑料袋或者塑料盒中。
⑺  若干支培养基盒一起装入培养基包装盒。
⑻  大包装的药物盒，培养基盒以钴60辐照方式灭菌。
本发明具备的有益技术效果是：药物盒、培养基盒稳定且易于保存运输，可以做成试剂盒长期保存；试验操作简单方便；试验结果易于观察和判断；可以用于慢生长细菌/真菌的药敏试验，如真菌、厌氧菌等；实验操作和废物处理具有很高的生物安全性。
附图说明
图1是本发明检测试剂盒的分解结构示意图。
图2是培养基盒及塑料薄膜的操作步骤示意图。
图3是培养基盒容格的局部放大图。
图4是药物盒的局部放大图。
具体实施方式
通过下面对实施例的描述，将更加有助于公众理解本发明，但不能也不应当将申请人所给出的具体的实施例视为对本发明技术方案的限制，任何对部件或技术特征的定义进行改变和/或对整体结构作形式的而非实质的变换都应视为本发明的技术方案所限定的保护范围。
附图标记说明：药物盒盖1、顶部塑料薄膜2、培养基盒3、底部塑料薄膜4、药物盒5、阳性对照标识6、数字刻度标识7、阴性对照标识8、盒状培养架9、培养基10、腰线11、抗菌药物12、凸面13、药物浓度梯度14。
细菌/真菌药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒，该检测试剂盒包括测试条单元，测试条单元包括条状的培养基盒3和药物盒5，培养基盒3和药物盒5分别具有径向排列的培养基容格和药物容格，培养基容格可对应插入药物容格内。检测试剂盒还包括盒状培养架9，盒状培养架9上具有镂空的通槽，测试条单元可卡接于通槽内。检测试剂盒的上方设置有药物盒盖1，在盒状培养架9上的一侧设置有对照标识板，对照标识板包括阳性对照标识6、阴性对照标识8和数字刻度标识7。每个测试条单元可以检测一种药物的MIC，若干测试条单元可以根据使用者的需要组成一组并放入盒状培养架9中，置于特定环境培养，以测量试验菌对于一组药物的MIC。盒状培养架9为长方形的盒状物体，药物盒5与培养基盒3组成的测试条可以横向放在培养架上，每个培养架可以容纳5个测试条，盒状培养架9上表面横向的边缘，标有“+”、“-”标志和数字，纵向的边缘有防呆设计，盒状培养架9可以重复使用。
在本实施例中，培养基盒3和药物盒5的容格为一排，各个容格并列紧邻形成容格组，当然在其他实施例中可以根据需要设置成不同的结构和数量，以满足不同场合的需求，并不局限于本实施例中的应用。在培养基盒3的顶部和底部分别设置有片状的、可分离的塑料薄膜，塑料薄膜包括顶部塑料薄膜2和底部塑料薄膜4，顶部、底部塑料薄膜通过粘贴的方式分别固定在培养基盒3的上、下表面，培养基容格内预制有固态培养基，药物容格的底部内壁具有一个凸面，凸面上设置有抗菌药物，培养基容格内壁的中部设置有腰线11，腰线11是向中轴线方向突出的突起。
在本实施例中，药物盒5的技术关键点在于药物盒容格的不同浓度的药物是预先计算并且配制好的，而且不同浓度的药物是被物理分隔的。每一个单独的药物盒容格的底部设计为凸面，格内底部含有干燥的抗菌药物，这些抗菌药物的量由小到大（或由大到小）规律排列。小格内壁有若干排气槽16，便于培养基盒3插入时排出腔内空气。药物盒5的一头有突出的药物名称标识15，上面用颜色和字母作为标志，表明盒内装有的药物名称，同时可保证正确识别药物浓度梯度的方向，不同类型的抗生素以不同的色系标志，同类的不同抗生素以同一色系的不同颜色标志。
在本实施例中，培养基盒3的技术关键点在于，由一系列独立的培养基容格组成，培养基容格里面装有预制的固态培养基（主要由琼脂组成），底部可以揭去，盒壁设计有特殊的腰线11以防底部揭去时琼脂滑落；将底部揭去之后，培养基盒上的小格可以一一对应地插入药物盒上的小格，培养基盒的设计使得盒盖1的滑入引入的压力使琼脂培养基与药物盒小格底部的抗菌药物接触，同时又保持透气。培养基盒3中预装有培养基，培养基盒3的体积预先设计成抗生素溶解后可以达到设计浓度，成分酷毙适用于不同生长需要的细菌和/或真菌，并且可以长期贮存。一个培养基盒3可以与一个药物盒5组成一个药敏测试条单元，每个测试条单元可以检测一种药物的MIC，可根据实际需要，自由选择若干测试条单元组成一组。
预制抗菌素浓度梯度：在一个条状的塑料药物盒上有一系列小格（药物盒容格），每一个小格（药物盒容格）的底部加入一定量的抗菌药溶液，使各格中的加入量呈递增（或递减）变化，在负压的情况下使抗菌药溶液干燥，加盖4℃保存备用。
预制琼脂（或其他凝胶）培养基：用培养细菌的肉汤培养基配制溶胶液，加入条状培养基盒上的一系列小孔中，利用物理法（如降低温度）或化学法使溶胶凝固，密封包装4℃保存备用。
预制抗菌素和预制培养基组合成一个测试条单元：使用时将培养基盒底部和上表面薄膜揭去，培养基盒上的小格可一一对应插入药物盒上的小格。加盖压紧后，致使小格底部的抗菌药接触固态培养基并溶入琼脂胶块中使抗菌药形成一定的药物浓度。使用时将受试细菌培养液涂布于培养基盒每个小格中固态培养基的上表面，加盖35℃培养16-20小时后肉眼观察结果；当药物浓度高于细菌的MIC时，凝胶表面无菌生长，当药物浓度低于MIC时，细菌在培养基的表面将生长出菌苔；无菌生长的最小药物浓度即受试菌株对于该抗菌药的MIC值。
测试条单元的制备方法包括如下步骤：
1）药物盒5、药物盒盖1、培养基盒3主体、培养基盒3底部、盒状培养架9和培养基包装盒的模压制备；
2）药物盒5、药物盒盖1、培养基盒3主体、培养基盒3底部的灭菌；
3）在相对无菌条件下将一定量的抗菌药物溶液加入药物盒的药物盒容格中，真空干燥；
4）培养基盒3底部粘贴有塑料薄膜；
5）以液体培养基为溶质，无菌配制一定浓度的溶胶注入培养基盒3的培养基盒容格中，使其凝固制成固态培养基；然后在培养基盒3上表面封一层塑料薄膜。
6）将药物盒5、药物盒盖1无菌包装于塑料袋或者塑料盒中。
7）若干支培养基盒3一起装入培养基包装盒。
8）大包装的药物盒5、培养基盒以钴60辐照方式灭菌，室温或4℃储存。
细菌/真菌药物敏感试验用浓度梯度检测方法的实施例：
实施例1：
细菌/真菌药物敏感试验用浓度梯度检测方法，该方法包括如下步骤：
1）模压制备的药物盒、培养基盒模具，辅照灭菌；
2）将头孢噻肟配成3.75、7.5、15.0、30.0、60.0、120.0、240.0、480.0、960.0、1920.0μg/ml的浓度，分别加入到药物盒的小格，只放到第二格至第十一格，第一格和第十二格不加药液，每格13μl，负压干燥备用；
3）MH肉汤中加入1.2%的琼脂，隔水煮沸使琼脂溶解，高压灭菌，121℃15分钟；
4）吸取适量1.2%的热琼脂溶液无菌注入培养基盒中，培养基盒采用内部尺寸为底面半径3.25mm×高6mm的圆形小格，凝胶条的厚度约为6mm，待其冷却凝固后，装入培养基包装盒中备用；
5）将各种实验菌株（见表1）接种于营养琼脂平板上，35℃过夜培养，翌日取纯培养平板上的4-5个相同形态的菌落用生理盐水制成均匀菌悬液，并调节其浊度至0.5McFarland浊度；
6）将琼脂培养基盒底部薄膜揭去，插入药物盒中，使药物盒中的抗生素扩散至琼脂，含药小格中琼脂的药物最终浓度依次为0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0、64.0和128.0μg/ml；
7）以棉拭蘸取0.5McFarland浊度的菌液涂布于各小格琼脂块的表面，菌液涂布方向为自左至右，即药物浓度自低至高，自右至左滑上盒盖，置湿盒中37℃孵育16-20小时后观察结果，以不长菌之方格的最小药物浓度为MIC值，无药对照琼脂块上的菌苔应生长良好；
8）同时采用试管肉汤稀释法对上述实验菌进行MIC测定。
实施例2：
本实例仍采用圆形小格内部尺寸为4mm×6mm（底面半径×高）的药物盒，分成十二个小格。但实验菌采用肺炎链球菌，有关制备和试验过程如下：
1）模压制备的药物盒、培养基盒模具，辅照灭菌；
2）阿莫西林配成0.9、1.8、3.75、7.5、15、30、60、120、240、480μg/ml的浓度，分别加入到药物盒，第二格至第十一格，第一格和第十二格不加药液，每格13μl，负压干燥备用；
3）CAMHB肉汤中加入1.2%的琼脂，隔水煮沸使琼脂溶解，高压灭菌121℃15分钟，待琼脂温度降至50℃时无菌加入2.5%的LHB混匀，所述CAMHB肉汤为调节过阳离子浓度的MH肉汤；
4）吸取适量热琼脂溶液无菌注入培养基盒中，培养基盒小圆格内部的尺寸为底面半径3.25mm×高6mm，凝胶条的厚度约为6mm，待其冷却凝固后，装入培养基包装盒中备用；
5）各种实验菌株（见表2）接种于羊血琼脂平板上，35℃5%CO2过夜培养，翌日取纯培养平板上的4-5个相同形态的菌落用生理盐水制成均匀菌悬液，并调节其浊度至0.5McFarland浊度；
6）将琼脂培养基盒底部薄膜揭去，插入药物盒中，使药物盒中的抗生素扩散至琼脂，含药小格中的药物最终浓度依次为0.06、0.12、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16和32μg/ml；
7）以棉拭蘸取0.5McFarland浊度的菌液涂布于各小格琼脂块的表面。菌液涂布方向为自左至右即药物浓度自低至高，自右至左滑上盒盖，置湿盒中37℃孵育16-20小时后观察结果，以不长菌之方格的最小药物浓度为MIC值，无药对照琼脂块上的菌苔应生长良好；
8） 同时采用试管肉汤稀释法对上述实验菌进行MIC测定。
两种方法的检测结果见表2。
 
表1：头孢噻肟用本法和试管肉汤稀释法对于30株致病菌的MIC测定结果（mg/L）比较
菌株编号 菌株名称 浓度梯度琼脂条法 试管肉汤稀释法
1 肺炎克雷伯氏菌 4.0 4.0
2 肺炎克雷伯氏菌 4.0 4.0
3 肺炎克雷伯氏菌 4.0 2.0
4 肺炎克雷伯氏菌 2.0 2.0
5 肺炎克雷伯氏菌 2.0 2.0
6 肺炎克雷伯氏菌 4.0 4.0
7 肺炎克雷伯氏菌 8.0 8.0
8 肺炎克雷伯氏菌 4.0 4.0
9 大肠埃希氏菌 8.0 8.0
10 大肠埃希氏菌 1.0 1.0
11 大肠埃希氏菌 2.0 4.0
12 大肠埃希氏菌 4.0 4.0
13 大肠埃希氏菌 4.0 4.0
14 大肠埃希氏菌 8.0 8.0
15 大肠埃希氏菌 2.0 4.0
16 大肠埃希氏菌 4.0 4.0
17 大肠埃希氏菌 4.0 4.0
18 肺炎克雷伯氏菌 16.0 16.0
19 大肠埃希氏菌 16.0 16.0
20 大肠埃希氏菌 4.0 4.0
21 肺炎克雷伯氏菌 8.0 8.0
22 产酸克雷伯氏菌 8.0 8.0
23 大肠埃希氏菌 8.0 8.0
24 肺炎克雷伯氏菌 4.0 4.0
25 产酸克雷伯氏菌 8.0 8.0
26 大肠埃希氏菌 4.0 4.0
27 奇异变形杆菌 8.0 4.0
28 阴沟肠杆菌 16.0 16.0
29 阴沟肠杆菌 16.0 16.0
30 大肠埃希氏菌 8.0 8.0
表2 阿莫西林用本法和试管肉汤稀释法对于20株肺炎链球菌的MIC（μg/ml）测定结果比较
菌株编号 菌株名称 浓度梯度琼脂条法 试管肉汤稀释法
1 肺炎链球菌 0.12 0.12
2 肺炎链球菌 0.12 0.12
3 肺炎链球菌 0.25 0.12
4 肺炎链球菌 0.25 0.25
5 肺炎链球菌 0.5 0.5
6 肺炎链球菌 0.12 0.12
7 肺炎链球菌 0.25 0.25
8 肺炎链球菌 1.0 0.5
9 肺炎链球菌 0.25 0.25
10 肺炎链球菌 2.0 2.0
11 肺炎链球菌 0.12 0.12
12 肺炎链球菌 0.06 0.06
13 肺炎链球菌 0.06 0.12
14 肺炎链球菌 2.0 2.0
15 肺炎链球菌 0.12 0.12
16 肺炎链球菌 0.12 0.12
17 肺炎链球菌 1.0 1.0
18 肺炎链球菌 0.5 1.0
19 肺炎链球菌 0.25 0.12
20 肺炎链球菌 0.12 0.12
结果说明：由表1和表2可见，本方法浓度梯度琼脂条法和肉汤试管稀释法的多数结果相同，虽然偶尔出现结果差一个倍比滴度的情况，但由于肉汤稀释法的方法学允许误差就是上、下一个倍比滴度，因此可以说浓度梯度琼脂条法的结果与稀释法是一致的。
 
实例3：采用内部尺寸为4mm×6mm(底面半径×高)圆形小格的药物盒与内部尺寸为3.25mm×6mm (底面半径×高)圆形小格的培养基盒，分成十二个小格。凝胶条采用琼脂凝胶。
实例4：采用内部尺寸为4mm×6mm(底面半径×高)圆形小格的药物盒与内部尺寸为3.25mm×6mm (底面半径×高)圆形小格的培养基盒，分成十二个小格。凝胶条采用聚丙烯酰胺凝胶。
实例5：采用内部尺寸为4mm×6mm(底面半径×高)圆形小格的药物盒与内部尺寸为3.25mm×6mm (底面半径×高)圆形小格的培养基盒，分成十二个小格。凝胶条采用植物蛋白胶。
实例6：采用内部尺寸为4mm×6mm(底面半径×高)圆形小格的药物盒与内部尺寸为3.25mm×6mm (底面半径×高)圆形小格的培养基盒，分成十二个小格。凝胶条采用明胶凝胶。
当然，本发明还可以有其他多种实施例，在不背离本发明精神及其实质的情况下，熟悉本领域的技术人员可以根据本发明做出各种相应的改变和变形，但这些相应的改变和变形都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。

Claims (8)

1.细菌/真菌药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒，其特征在于，该检测试剂盒包括测试条单元，所述测试条单元包括条状的培养基盒和药物盒，所述培养基盒和药物盒分别具有径向排列的培养基容格和药物容格，所述培养基容格可对应插入所述药物容格内，所述培养基容格内预制有固态培养基，所述药物容格的底部内壁具有一个凸面，所述凸面上设置有抗菌药物。
2.根据权利要求1所述的细菌/真菌药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒，其特征在于，所述培养基容格内壁的中部设置有腰线，所述腰线是向中轴线方向突出的突起。
3.根据权利要求1或2所述的细菌/真菌药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒，其特征在于，还包括盒状培养架，所述盒状培养架上具有镂空的通槽，所述测试条单元可卡接于所述通槽内。
4.根据权利要求1或2所述的细菌/真菌药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒，其特征在于，所述培养基盒的顶部和底部分别设置有片状的、可分离的塑料薄膜。
5.根据权利要求1或2所述的细菌/真菌药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒，其特征在于，所述药物容格内设置有排气槽，所述排气槽纵向设置在药物容格的内壁上。
6.根据权利要求3所述的细菌/真菌药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒，其特征在于，所述盒状培养架上的一侧设置有对照标识板。
7.根据权利要求6所述的细菌/真菌药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒，其特征在于，所述对照标识板包括阳性对照标识、阴性对照标识和数字刻度标识。
8.细菌/真菌药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
1）模压制备的药物盒、培养基盒模具，辅照灭菌；
2）将头孢噻肟配成浓度成倍递增的十份，分别加入到药物盒的小格，只放到第二格至第十一格，第一格和第十二格不加药液，负压干燥备用；
3）MH肉汤中加入琼脂，隔水煮沸使琼脂溶解，高压灭菌；
4）吸取适量热琼脂溶液无菌注入培养基盒中，待其冷却凝固后，装入培养基包装盒中备用；
5）将各种实验菌株接种于营养琼脂平板上，过夜培养，翌日取纯培养平板上的4-5个相同形态的菌落用生理盐水制成均匀菌悬液，并调节其浊度至0.3~1McFarland浊度；
6）将琼脂培养基盒底部薄膜揭去，插入药物盒中，使药物盒中的抗生素扩散至琼脂；
7）以棉拭蘸取经步骤（5）得到的菌液涂布于各小格琼脂块的表面，菌液涂布方向为自左至右，即药物浓度自低至高，自右至左滑上盒盖，置湿盒中孵育16-20小时后观察结果，以不长菌之方格的最小药物浓度为MIC值，无药对照琼脂块上的菌苔应生长良好；
8）同时采用试管肉汤稀释法对上述实验菌进行MIC测定。
CN201410051738.0A 2014-02-15 2014-02-15 一种药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒与测试方法 Active CN103820310B (zh)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410051738.0A CN103820310B (zh) 2014-02-15 2014-02-15 一种药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒与测试方法
PCT/CN2014/085310 WO2015120712A1 (zh) 2014-02-15 2014-08-27 细菌/真菌药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒与测试方法
US15/118,958 US10443082B2 (en) 2014-02-15 2014-08-27 Concentration gradient test reagent kit and testing method for use in bacterial/fungal drug susceptibility testing

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410051738.0A CN103820310B (zh) 2014-02-15 2014-02-15 一种药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒与测试方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103820310A true CN103820310A (zh) 2014-05-28
CN103820310B CN103820310B (zh) 2017-11-07

Family

ID=50755605

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410051738.0A Active CN103820310B (zh) 2014-02-15 2014-02-15 一种药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒与测试方法

Country Status (3)

Country Link
US (1) US10443082B2 (zh)
CN (1) CN103820310B (zh)
WO (1) WO2015120712A1 (zh)

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104878073A (zh) * 2015-05-25 2015-09-02 苏州吉诺瑞生物科技有限公司 一种获得抗菌素实现抑制或杀灭目的微生物的浓度的方法
CN105219636A (zh) * 2015-10-19 2016-01-06 山东鑫科生物科技股份有限公司 一种药敏板条及其制备方法
CN106770220A (zh) * 2016-11-21 2017-05-31 百奥森（江苏）食品安全科技有限公司 一种抗生素残留检测试剂盒
CN107064076A (zh) * 2017-01-18 2017-08-18 朱红 一种用于药敏的检测系统
CN109136079A (zh) * 2018-09-25 2019-01-04 山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 用于细菌耐药性检测分析的菌原液处理装置及使用方法
CN110684820A (zh) * 2019-10-31 2020-01-14 上海氘峰医疗器械有限公司 通过在凝胶上检测细菌数量快速得到细菌耐药性的方法
CN111175300A (zh) * 2020-01-30 2020-05-19 上海市奉贤区中心医院 一种细菌耐药性产生实时观测系统
CN115369052A (zh) * 2022-05-27 2022-11-22 温州市康泰生物科技有限公司 一种改良的链球菌接种液
WO2022247822A1 (en) * 2021-05-24 2022-12-01 Hong Kong Baptist University Microfluidic barcode-like cell sensor for microscope-free quantitative detection of small amount of cells
CN116574595A (zh) * 2023-05-23 2023-08-11 青岛中创汇科生物科技有限公司 一种药敏检测试剂盒

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110846377B (zh) * 2019-12-03 2023-04-07 西北农林科技大学 一种药敏试剂盒及其制备方法以及细菌药敏检测方法
CN112501002B (zh) * 2020-12-03 2022-02-22 西湖大学 一种浓度梯度芯片及对细菌进行药敏性检测的方法
CN114487452B (zh) * 2021-12-30 2022-09-02 河南黄河科技学院附属医院 基于抗生素浓度梯度的细菌培养药敏自动分析仪

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN2544282Y (zh) * 2002-04-26 2003-04-09 莱芜钢铁集团有限公司医院 可拆装组合的微量稀释药敏试剂盒
CN2911669Y (zh) * 2006-04-24 2007-06-13 上海奥普生物医药有限公司 一种支原体快速定量药敏检测板
CN201245656Y (zh) * 2008-08-08 2009-05-27 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 九十六点阵药敏检测盒
CN101597566A (zh) * 2009-07-22 2009-12-09 郑州安图绿科生物工程有限公司 密闭微孔卡和使用该卡检测结核分支杆菌药敏的方法
CN103421686A (zh) * 2012-05-25 2013-12-04 南京优科生物医药有限公司 抗菌药物敏感试验用的测试盒及其制备方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN202139239U (zh) * 2011-08-01 2012-02-08 郑州博赛生物技术股份有限公司 一种可拆卸阴道炎联合检测板

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN2544282Y (zh) * 2002-04-26 2003-04-09 莱芜钢铁集团有限公司医院 可拆装组合的微量稀释药敏试剂盒
CN2911669Y (zh) * 2006-04-24 2007-06-13 上海奥普生物医药有限公司 一种支原体快速定量药敏检测板
CN201245656Y (zh) * 2008-08-08 2009-05-27 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 九十六点阵药敏检测盒
CN101597566A (zh) * 2009-07-22 2009-12-09 郑州安图绿科生物工程有限公司 密闭微孔卡和使用该卡检测结核分支杆菌药敏的方法
CN103421686A (zh) * 2012-05-25 2013-12-04 南京优科生物医药有限公司 抗菌药物敏感试验用的测试盒及其制备方法

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104878073A (zh) * 2015-05-25 2015-09-02 苏州吉诺瑞生物科技有限公司 一种获得抗菌素实现抑制或杀灭目的微生物的浓度的方法
CN105219636A (zh) * 2015-10-19 2016-01-06 山东鑫科生物科技股份有限公司 一种药敏板条及其制备方法
CN106770220A (zh) * 2016-11-21 2017-05-31 百奥森（江苏）食品安全科技有限公司 一种抗生素残留检测试剂盒
CN107064076A (zh) * 2017-01-18 2017-08-18 朱红 一种用于药敏的检测系统
CN109136079A (zh) * 2018-09-25 2019-01-04 山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 用于细菌耐药性检测分析的菌原液处理装置及使用方法
CN109136079B (zh) * 2018-09-25 2021-10-26 山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 用于细菌耐药性检测分析的菌原液处理装置及使用方法
CN110684820B (zh) * 2019-10-31 2023-01-03 上海氘峰医疗科技有限公司 通过在凝胶上检测细菌数量快速得到细菌耐药性的方法
CN110684820A (zh) * 2019-10-31 2020-01-14 上海氘峰医疗器械有限公司 通过在凝胶上检测细菌数量快速得到细菌耐药性的方法
CN111175300A (zh) * 2020-01-30 2020-05-19 上海市奉贤区中心医院 一种细菌耐药性产生实时观测系统
WO2022247822A1 (en) * 2021-05-24 2022-12-01 Hong Kong Baptist University Microfluidic barcode-like cell sensor for microscope-free quantitative detection of small amount of cells
CN115369052A (zh) * 2022-05-27 2022-11-22 温州市康泰生物科技有限公司 一种改良的链球菌接种液
CN115369052B (zh) * 2022-05-27 2024-04-05 温州市康泰生物科技有限公司 一种改良的链球菌接种液
CN116574595A (zh) * 2023-05-23 2023-08-11 青岛中创汇科生物科技有限公司 一种药敏检测试剂盒

Also Published As

Publication number Publication date
CN103820310B (zh) 2017-11-07
WO2015120712A1 (zh) 2015-08-20
US10443082B2 (en) 2019-10-15
US20170058312A1 (en) 2017-03-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103820310A (zh) 一种药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒与测试方法
US4153512A (en) Storage stable antibiotic susceptibility test kit and method of testing
US4090920A (en) Disposable antibiotic susceptability test package
TWI661043B (zh) 微生物培養器、微生物檢驗套組、透析液的檢驗方法、微生物的培養方法、微生物的檢驗方法及微生物培養器的製造方法
CN104140994B (zh) 一种含鸡肉基质的金黄色葡萄球菌标准物质
CN102864208B (zh) Av/bv联合检测试剂盒的质控品及其制备方法
ES2739905T3 (es) Método para determinar la sensibilidad de microorganismos a sustancias antimicrobianas
CN203715637U (zh) 细菌/真菌药物敏感试验用浓度梯度检测试剂盒
JP6920212B2 (ja) 嫌気性微生物用培養デバイス
BR112016020570B1 (pt) Dispositivo para cultivar e detectar microrganismos e método de detecção de uma bactéria aeróbia em uma amostra
JP6448818B2 (ja) 乳酸菌用培養デバイス
CN103421686A (zh) 抗菌药物敏感试验用的测试盒及其制备方法
CN105219634A (zh) 微生物快速检测多环测试片、无菌培养基及其制备方法
CN102251018A (zh) 基于喷墨打印原理测定抗生素最低抑菌浓度的方法
CN104293661B (zh) 一种快速抗菌试验方法及试剂盒
CN202754992U (zh) 一种新型微生物培养皿
CN201089771Y (zh) 厌氧菌活菌计数培养平板
CN106770220A (zh) 一种抗生素残留检测试剂盒
Egwaikhide et al. Physicochemical and bacteriological analyses of locally manufactured yoghurt.
CN201512534U (zh) 一种血液培养皿
CN208023007U (zh) 一种多格培养皿
CN206671203U (zh) 一种用于检测食品中多种微生物的检测盒
CN104651455A (zh) 一种沙门氏菌显色培养基
CN105219636B (zh) 一种药敏板条及其制备方法
CN218665996U (zh) 一种b族维生素检测试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant