CN103816147A - 藤黄酸、新藤黄酸及其组合物的医药新用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种藤黄酸、新藤黄酸及其组合物在具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的药物中的新用途。本药物组合物是从藤黄科植物藤黄GarciniahanbaryiHook.f.分泌的干燥树脂中提取制备得到后按照一定比例配比组成。藤黄酸、新藤黄酸可各自以单体形式制成降血糖药物,也可以按一定的配比以组合物的形式制成降血糖药物。并阐述了组合物的药物制剂,可以是片剂、胶囊剂、软胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂中的任何一种。
Description
技术领域
本发明涉及一种以藤黄酸、新藤黄酸及其组合物在制备具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的药物中的应用。本发明也涉及该药物的药物制剂,属于医药技术领域。
背景技术
糖尿病(diabetes mellitus,DM)已成为严重威胁人类健康的主要慢性病之一。糖尿病人餐后高血糖加重糖尿病并引发各种并发症,是导致患者死亡的主要原因。
α-葡萄糖苷酶是人体糖代谢过程中最为重要的酶,它对包括糖蛋白及糖脂的形成以及碳水化合物在小肠内部的消化过程中起着重要的作用,通常按照其所催化裂解的糖苷键的构型不同,分为α-葡萄糖苷酶与β-葡萄糖苷酶。其中α-葡萄糖苷酶又分为葡萄糖苷酶Ⅰ与葡萄糖苷酶Ⅱ(葡萄糖苷酶Ⅱ一般存在于内质网中,并在膜结合多体中合成)。在众多糖苷键裂解酶中,葡萄糖苷酶由于其可以在糖蛋白合成过程中,通过催化裂解糖苷键,从寡糖链的非还原末端释放出游离的葡萄糖。故在临床治疗中,关键步骤就是通过一定手段,使葡萄糖苷酶活性受到抑制,从而达到降低人体血液中葡萄糖浓度的目的。α-葡萄糖苷酶抑制剂(α-glucosidase inhibitors,α-GI)能有效控制餐后高血糖,且不导致低血糖;另外,α-葡萄糖苷酶抑制剂还可以通过调节α-葡萄糖苷酶的活性治疗病毒感染、肿瘤、溶酶体贮积症、肥胖、高三酰甘油血脂症等多种疾病。
藤黄为藤黄科植物藤黄Garcinia hanbaryi Hook. f.分泌的干燥树脂。中医药记载具有破毒蚀疮、破血散结之功效。中医用于攻毒、消肿、祛腐敛疮、止血、杀虫。主治痈疽肿毒、溃疡、湿疮、肿瘤、顽癣、跌打损伤、创伤出血及烫伤。近年实验研究证实, 藤黄中的藤黄酸( gambogic acid)、新藤黄酸( neogambogic acid)为藤黄抗肿瘤作用的有效成分,具有抗瘤谱广,毒性较低的特点。藤黄酸可显著抑制人肝癌及胃腺癌细胞的增殖,诱导肿瘤细胞分化和凋亡(临床肿瘤学杂志,2005年10卷3期 274-277页),藤黄酸对于多数肿瘤细胞都具有抑制作用。赵爱国发明专利(公开号:CN1951382A)报道,新藤黄酸具有抗肿瘤作用。有报道新藤黄酸的抗肿瘤活性约为藤黄酸的2倍,抗肿瘤作用尤为显著(时珍国医国药,2010年21卷9期 2347-2349页)。张连茹等报道藤黄酸在制备炎症抑制剂的应用( CN102198127A)。张连茹等报道藤黄酸作为5′-AMP激活的蛋白激酶激动剂的用途( CN102772399A)。王训翠等报道新藤黄酸诱导人胃癌M G C -803细胞线粒体途径凋亡的实验研究(中药材,2014年第37卷第1期 99-103页)。晏烽根等报道新藤黄酸诱导人鼻咽癌细胞CNE-1 凋亡以及对p-p38和p-ERK1/2蛋白的影响(中国药理学通报,2011年第27卷第3期355-359页)。
本发明完成前未发现有关藤黄酸、新藤黄酸及其组合物在具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的药物中的应用的报道,本发明具有广泛的应用前景。
发明内容
本发明提供了一种藤黄酸、新藤黄酸及其组合物,具有抑制α-糖苷酶的活性。具体的说是藤黄酸、新藤黄酸用于制备防治高血糖药物的新用途,具有明显的创新性。
藤黄药材具有毒性作用,经过本提取工艺除掉杂质后,经过急性毒性试验表明藤黄酸、新藤黄酸及其组成的组合物在有效剂量范围内无毒副作用;所以,本发明提供了一种安全有效的α-葡萄糖苷酶抑制剂,具有明显的创新性。
本发明的另一主要贡献在于,由藤黄酸与新藤黄酸组成的组合物具有比单一成分藤黄酸及新藤黄酸具有更强的抑制α-糖苷酶的活性。体现了两种成分的协同作用,具有更强的实用性。
本发明提供的藤黄药物组合物,有效成分清楚,质量可控,服用剂量小,成药性强,提供了一种可用于临床的中药创新药物,具有很强的应用价值。
本发明的另一目的是提供藤黄酸、新藤黄酸及其组合物的药物制剂。主要的药物形态为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸剂中的任何一种。
发明人经动物试验证明,藤黄酸、新藤黄酸及其组合物具有显著抑制α-糖苷酶的活性,能延缓正常小鼠餐后血糖升高、能延缓四氧嘧啶诱导的高血糖小鼠餐后血糖升高;降低四氧嘧啶高血糖小鼠的血糖。
本发明中藤黄酸和新藤黄酸是从藤黄科植物藤黄Garcinia hanbaryi Hook. f.分泌的干燥树脂中直接提取分离获得。本试验中用到的原料通过以下方法制备得到:
藤黄药材用乙酸乙酯回流提取2-3次,每次1-2小时,回收乙酸乙酯至干,用pH=8-11的水溶液溶解,直接经D101或AB-8大孔树脂柱吸附纯化,先用碱水洗至中性,再用水洗,再用30-60%乙醇(pH=8-11)洗脱,收集乙醇洗脱液,调pH至中性,回收溶剂至干,得总藤黄酸。
取总藤黄酸,加入甲醇溶解,放置室温,以常压ODS柱分离,流动相为甲醇-水(92:8),合并相同组分,回收溶剂,析晶,过滤,得到高纯度藤黄酸和新藤黄酸(含量均大于95%)。
本发明组合物其特征在于:按重量百分比计:藤黄酸占30~85%,新藤黄酸占10~50%。
藤黄酸(gambogic acid)结构式:
新藤黄酸(neogambogic acid)结构式:
为实现上述目的,本发明提供以下技术解决方案。
组合物的含量通过以下方法测定:
1、藤黄酸、新藤黄酸利用高效液相色谱法测定:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.1%磷酸水溶液(92:8)为流动相;流速为1.0ml/min;检测波长为360nm。
对照品溶液的制备 分别精密称取藤黄酸、新藤黄酸对照品,置容量瓶中,用甲醇溶解制成1ml含藤黄酸0.05mg、新藤黄酸0.03mg的对照品溶液。
供试品溶液的制备 取组合物粉末50mg,精密称定,置50ml量瓶中,加甲醇40ml,超声30min,放置至室温,用甲醇定容至刻度,摇匀,取1.0ml加甲醇定容至10ml,摇匀,作为供试品溶液。
测定方法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
2、组合物中总藤黄酸利用紫外比色法测定:
对照品溶液的制备 精密称取藤黄酸对照品,用甲醇溶解制成每1ml含1mg的溶液。取该溶液1.0ml,置50ml量瓶中,加入2% ZrOCl2甲醇试液1.0ml,加甲醇至刻度并摇匀,作为对照品溶液。
供试品溶液的制备 取组合物10mg,精密称定,置50ml量瓶中,加乙醇40ml,超声30min,放置至室温,加甲醇定容至刻度,摇匀,精密量取1.0ml,置10ml量瓶中,加入2% ZrOCl2甲醇试液1.0ml,加甲醇至刻度并摇匀,作为供试品溶液。
将供试液与对照液于室温放置15min,于390nm测定吸收度,计算总藤黄酸含量。
藤黄组合物中含总藤黄酸以藤黄酸计应为90-110%。
藤黄酸、新藤黄酸及其组合物可以抑制α-糖苷酶的活性、具有在制备预防和治疗高血糖药物中的用途。这些药理作用,通过以下药效学试验例得到证实。
、藤黄酸、新藤黄酸及其组合物对α-糖苷酶的抑制作用
1.1标准反应体系 67mmol/L pH为6.8磷酸钾缓冲液150μL,1mg/ml谷胱甘肽溶液50μL,0.1mg/ml α-葡萄糖苷酶溶液100μL,37℃保温10min,20mmol/L PNPG溶液100μL,37℃反应20min后加入0.2mol/L Na2CO3溶液400uL终止反应,测定400nm处光吸收值。样品对酶活性的抑制率计算公式:
抑制率(%)=(A对照-A样品)/A对照 ×100% 1.2拜糖平对α-葡萄糖苷酶活性的影响 取研磨后的拜糖平配制成50mg/ml的原溶液,并以此稀释成10.0,5.0,2.5,1.0,0.5,0.25,0.1mg/ml不同浓度。将100ul拜糖平加入到酶反应体系中,先与酶在37℃保温10min,再加底物反应20min,用Na2CO3溶液终止反应,测定400nm处光吸收值。
1.3藤黄酸、新藤黄酸及其组合物对α-葡萄糖苷酶活性的影响 藤黄酸、新藤黄酸及其组合物用二甲基亚砜溶解,然后用缓冲液稀释至0.025,0.05,0.1,0.25,0.5,1.0,2.5mg/ml,二甲基亚砜于反应体系中终含量<1%。将100ul藤黄酸、新藤黄酸及其组合物加入到反应体系中,测定藤黄酸、新藤黄酸及其组合物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。实验结果见表1。
表1 藤黄酸、新藤黄酸及其组合物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用
组别 | 药物浓度(mg/ml) | 抑制率(%) |
藤黄酸 | 0.025 | 0.34 |
藤黄酸 | 0.05 | 15.24 |
藤黄酸 | 0.1 | 32.24 |
藤黄酸 | 0.25 | 60.6 |
藤黄酸 | 0.5 | 76.68 |
藤黄酸 | 1 | 86.54 |
藤黄酸 | 2.5 | 90.28 |
新藤黄酸 | 0.025 | 0.28 |
新藤黄酸 | 0.05 | 8.62 |
新藤黄酸 | 0.1 | 20.4 |
新藤黄酸 | 0.25 | 52.36 |
新藤黄酸 | 0.5 | 62.1 |
新藤黄酸 | 1 | 74.83 |
新藤黄酸 | 2.5 | 82.97 |
组合物 | 0.025 | 4.84 |
组合物 | 0.05 | 23.28 |
组合物 | 0.1 | 42.62 |
组合物 | 0.25 | 65.12 |
组合物 | 0.5 | 84.62 |
组合物 | 1 | 90.16 |
组合物 | 2.5 | 97.91 |
拜糖平 | 0.1 | 6.52 |
拜糖平 | 0.25 | 12.66 |
拜糖平 | 0.5 | 25.62 |
拜糖平 | 1 | 53.65 |
拜糖平 | 2.5 | 68.94 |
拜糖平 | 5 | 86.48 |
拜糖平 | 10 | 96.52 |
从表1可以看出,拜糖平对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用具有良好的量效关系。藤黄酸、新藤黄酸及其组合物在实验浓度下对α-葡萄糖苷酶的活性具有明显的抑制作用,量效关系明显。组合物的体外抑制α-葡萄糖苷酶活性优于藤黄酸,藤黄酸的活性优于新藤黄酸。
、藤黄酸、新藤黄酸及其组合物对正常小鼠糖耐量影响
取小鼠110只,每组10只,随机分成11组,按表2分组。阴性对照组灌生理盐水,阳性对照为拜糖平灌胃30mg/kg,按照表2给药,连续给药7天,末次给药前禁食8h,给药后灌胃淀粉(5g/kg),测定给予淀粉后0.5h,1h,2h,3h的血糖值。眼眶静脉窦采血。用葡萄糖氧化酶试纸法测定血糖值。结果见表2。
表2 藤黄酸、新藤黄酸及其组合物对正常小鼠糖耐量影响结果
组别 | 剂量(mg/kg) | 0h(mmol/l) | 0.5h(mmol/l) | 1h(mmol/l) | 2h(mmol/l) | 3h(mmol/l) |
阴性对照 | - | 3.92±0.86 | 8.89±0.91 | 9.02±0.94 | 8.58±1.28 | 7.99±1.68 |
藤黄酸 | 40 | 3.88±0.92 | 4.58±0.90** | 5.31±1.67** | 5.28±0.98** | 5.23±0.98** |
藤黄酸 | 20 | 3.78±0.96 | 5.39±1.90* | 5.79±1.55* | 5.62±1.18* | 5.64±1.24* |
藤黄酸 | 10 | 4.12±1.18 | 5.88±0.82* | 6.45±1.64* | 6.20±1.32* | 5.98±1.34* |
新藤黄酸 | 40 | 3.90±0.98 | 4.24±0.96** | 5.83±1.49* | 5.68±1.09* | 5.68±1.21* |
新藤黄酸 | 20 | 4.01±0.93 | 5.39±1.90* | 6.78±1.78* | 6.43±1.28* | 5.98±1.24* |
新藤黄酸 | 10 | 3.92±0.86 | 7.88±1.02 | 7.87±2.35 | 7.64±1.96 | 6.98±1.75 |
组合物 | 40 | 4.13±1.08 | 4.87±1.08** | 5.56±1.49** | 5.28±0.92** | 5.08±1.06** |
组合物 | 20 | 4.06±1.32 | 5.65±0.98* | 6.05±2.01* | 5.65±1.78* | 5.58±1.18* |
组合物 | 10 | 3.92±1.02 | 6.12±1.03* | 6.85±0.99* | 6.86±0.62* | 6.12±1.28* |
拜糖平 | 30 | 4.14±1.14 | 6.22±0.86* | 6.92±1.16* | 6.44±1.28* | 6.08±0.92* |
*与阴性对照组比较,*P<0.05;**P<0.01
从表2可以看出,藤黄酸、新藤黄酸及其组合物高中低三个剂量组均能不同程度抑制正常小鼠餐后血糖升高。
、藤黄酸、新藤黄酸及其组合物对四氧嘧啶诱导的高血糖小鼠耐糖量影响
取雄性小鼠200只,禁食14h后,腹腔注射2%四氧嘧啶(30mg/kg)生理盐水溶液,注射72h后,眼眶静脉窦采血测定空腹血糖(取血前禁食10h),用葡萄糖氧化酶试纸法测定血糖值。血糖高于11.1mmol/l的为糖尿病模型小鼠。模型按照表3分组。模型对照组灌生理盐水,阳性对照为灌胃拜糖平30mg/kg,按照表3给药,连续给药10天,末次给药前禁食6h,给药后淀粉(5g/kg)灌胃,测定给淀粉后0.5h,1h,2h的血糖值。结果见表3。
表3 藤黄酸、新藤黄酸及其组合物对高血糖小鼠糖耐量影响结果
组别 | 动物(只) | 剂量(mg/kg) | 0h(mmol/l) | 0.5h(mmol/l) | 1h(mmol/l) | 2h(mmol/l) |
模型对照 | 10 | - | 20.69±1.42 | 28.99±1.78 | 36.12±2.21 | 34.73±2.14 |
藤黄酸 | 10 | 40 | 20.64±1.37 | 22.48±1.64** | 23.64±2.98** | 24.34±3.35** |
藤黄酸 | 10 | 20 | 21.27±1.36 | 23.29±1.86** | 28.37±2.32* | 25.96±3.08** |
藤黄酸 | 10 | 10 | 20.94±1.69 | 25.14±2.02* | 31.07±3.26 | 28.17±3.68* |
新藤黄酸 | 10 | 40 | 20.69±1.39 | 24.37±1.98* | 29.27±2.12* | 27.34±2.98* |
新藤黄酸 | 10 | 20 | 21.12±1.46 | 25.08±2.06* | 32.17±2.96 | 28.24±3.18* |
新藤黄酸 | 10 | 10 | 20.97±1.39 | 26.34±2.28 | 31.69±3.16 | 32.18±4.08 |
组合物 | 10 | 40 | 20.96±1.78 | 25.67±1.93* | 25.68±1.98** | 25.83±2.58** |
组合物 | 10 | 20 | 20.99±1.67 | 24.38±1.82* | 28.98±2.09* | 24.64±2.36** |
组合物 | 10 | 10 | 20.89±1.46 | 26.98±2.12 | 31.62±1.69* | 29.14±3.06* |
拜糖平 | 10 | 30 | 21.18±1.13 | 22.34±1.67** | 22.68±1.49** | 25.98±2.54** |
*与模型对照组比较,*P<0.05;**P<0.01
从表3可以看出,藤黄酸、新藤黄酸及其组合物高中低三个剂量组均能不同程度延缓四氧嘧啶诱导的高血糖小鼠餐后血糖升高。
、藤黄酸、新藤黄酸及其组合物对四氧嘧啶诱导的高血糖小鼠血糖影响
取雄性小鼠200只,禁食14h后,腹腔注射2%四氧嘧啶(30mg/kg)生理盐水溶液,注射72h后,眼眶静脉窦采血。测定空腹血糖(取血前禁食10h),用葡萄糖氧化酶试纸法测定血糖值。血糖高于11.1mmol/l的为糖尿病模型小鼠。模型按照表4分组。模型对照组灌生理盐水,阳性对照为灌胃拜糖平30mg/kg,按照表4给药,连续给药10天,末次给药后禁食10h,眼眶静脉窦采血,离心取血清,按葡萄糖氧化酶法测定血糖水平,结果见表4。
表4 藤黄酸、新藤黄酸及其组合物对四氧嘧啶诱导的高血糖小鼠血糖影响结果
组别 | 动物(只) | 剂量(mg/kg) | 血糖值(mmol/l) |
模型对照 | 10 | - | 21.69±2.06 |
藤黄酸 | 10 | 40 | 10.94±0.56** |
藤黄酸 | 10 | 20 | 14.21±1.59** |
藤黄酸 | 10 | 10 | 16.01±1.99* |
新藤黄酸 | 10 | 40 | 15.34±1.86* |
新藤黄酸 | 10 | 20 | 18.23±2.21 |
新藤黄酸 | 10 | 10 | 19.14±2.08 |
组合物 | 10 | 40 | 12.24±1.14** |
组合物 | 10 | 20 | 15.84±1.23* |
组合物 | 10 | 10 | 17.26±0.72* |
拜糖平 | 10 | 30 | 14.08±1.02** |
*与模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01;
从表4可以看出,藤黄酸、新藤黄酸及其组合物高中低三个剂量组均能不同程度降低四氧嘧啶引起小鼠的高血糖。
本发明是通过如下的实验施例得以证实,但本发明不受实施例的任何限制。
实施例1、藤黄酸、新藤黄酸的提取制备
藤黄药材用乙酸乙酯回流提取3次,每次2小时,回收乙酸乙酯至干,用pH=10的水溶液溶解,直接经AB-8大孔树脂柱吸附纯化,先用碱水洗至中性,再用水洗,再用60%乙醇(pH=10)洗脱,收集乙醇洗脱液,调pH至中性,回收溶剂至干,得总藤黄酸。
取总藤黄酸,加入甲醇溶解,放置室温,以常压ODS柱分离,流动相为甲醇-水(92:8),合并相同组分,回收溶剂,析晶,过滤,得到高纯度藤黄酸和新藤黄酸(含量均大于95%)。
实施例2、组合物的制备
取藤黄酸 70g,新藤黄酸 30g,混合均匀得到本发明组合物。
Claims (5)
1.藤黄酸、新藤黄酸在制备具有α-葡萄糖苷酶活性抑制作用的药物中的应用。
2.藤黄酸、新藤黄酸组成的组合物在制备具有α-葡萄糖苷酶活性抑制作用的药物中的应用。
3.根据权利要求2所述组合物,其特征在于:按重量百分比计:藤黄酸占30~85%,新藤黄酸占10~50%。
4.根据权利要求1、2所述的用途其特征在于:在制备具有α-葡萄糖苷酶活性抑制作用的药物中的应用是指含有效治疗剂量的藤黄酸及新藤黄酸各自单独使用或组成的组合物与一种或多种药学上可接受的药用赋形剂。
5.根据权利要求4所述的药物制剂,其特征在于所说的制剂选自于片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸剂中的任何一种。
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