CN103805551A - 一株用于生产meso-2,3-丁二醇的基因工程菌及其应用 - Google Patents
一株用于生产meso-2,3-丁二醇的基因工程菌及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103805551A CN103805551A CN201410051821.8A CN201410051821A CN103805551A CN 103805551 A CN103805551 A CN 103805551A CN 201410051821 A CN201410051821 A CN 201410051821A CN 103805551 A CN103805551 A CN 103805551A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- meso
- butyleneglycol
- grams
- glucose
- bacterium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一株用于生产meso-2,3-丁二醇的基因工程菌，该菌是含有阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae subsp.dissolvens）SDM CGMCC No.4230的2,3-丁二醇合成基因簇budRABC的大肠埃希氏菌，已于2013年12月31日保藏于“中国典型培养物保藏中心”，保藏号为：CCTCC NO：M2013733。利用本发明的工程菌以葡萄糖为底物，meso-2,3-丁二醇最高产量可达到85克/升以上，纯度大于96%，且生产过程简便，成本低，具有很好的应用价值和可观的经济效益。
Description
技术领域
本发明涉及一株基因工程菌及其应用，尤其涉及一株用于生产meso-2,3-丁二醇的基因工程菌及其应用。
背景技术
2,3-丁二醇可以广泛应用于化工、食品、燃料及航天航空等多个领域（Syu M J.,Appl.Microbiol.Biotechnol.,2001,55:10-18）。2,3-丁二醇在常温下是一种无色无味透明的液体，有三种同分异构体：meso-2,3-丁二醇、(2R,3R)-2,3-丁二醇和(2S,3S)-2,3-丁二醇；其中meso-2,3-丁二醇可以和2,5-呋喃二甲酸发生酯化反应，生成的聚合物可用于服装和合成材料等领域(Gubbels et al.,J.Polym.Sci.,2012,51:890-898)。
在2,3-丁二醇的生产菌种中，肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）和产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）以meso-2,3-丁二醇为主要代谢产物，但是其纯度较低（Celinska E.&Grajek W.,Biotechnol.Adv.,2009,27:715-725;Ji et al.,Biotechnol.Adv.,2011,29:351-364）。
1997年，Ui等克隆来源于肺炎克雷伯氏菌的2,3-丁二醇合成基因簇，利用大肠杆菌工程菌生产meso-2,3-丁二醇，其产量能达到17.7克/升，生产速率0.31克/升/小时（Ui et al.,J.Ferment.Bioeng.1997,84:185-189）。之后，有研究尝试不同菌株来源的2,3-丁二醇合成基因簇以及不同的宿主，均实现了meso-2,3-丁二醇的生产（Lee et al.,Appl.Biochem.Biotechnol.2012,166:1801-1813;Li et al.,Appl.Microbiol.Biotechnol.2010,87:2001-2009;Nielsen et al.,Biotechnol.J.2010,5:274-284）。但由于受产物浓度和生产速率的限制，上述方法无法满足工业生产需求，只处于实验室研究阶段。基于此，迫切需要寻找更好的方法或生产meso-2,3-丁二醇的基因工程菌，以实现meso-2,3-丁二醇的高效生产。
发明内容
针对上述现有技术中，meso-2,3-丁二醇的产量低，难以大规模生产的不足，本发明要解决的问题是构建一株表达来源于阴沟肠杆菌SDM的2,3-丁二醇合成基因簇的大肠杆菌，并应用该工程菌发酵葡萄糖高效生产meso-2,3-丁二醇。
进一步的，本发明所述用于生产meso-2,3-丁二醇的基因工程菌，是含有阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae subsp.dissolvens）SDM CGMCC No.4230的2,3-丁二醇合成基因簇budRABC的大肠埃希氏菌，其中，budRABC的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；该菌株命名为大肠埃希氏菌BL21/pET-RABC（Escherichia coli BL21/pET-RABC），菌株已于2013年12月31日保藏于“中国典型培养物保藏中心”（中国.武汉.武汉大学），保藏号为：CCTCCNO：M2013733。
上述2,3-丁二醇合成基因簇budRABC包括lysR（编码2,3-丁二醇合成调控因子）、Pabc（2,3-丁二醇合成启动子）、budA/budB/budC（编码ALS/ALDC/BDH），序列长度为4248个碱基。
上述用于生产meso-2,3-丁二醇的基因工程菌的制备：克隆Enterobacter cloacae subsp. dissolvens SDM来源的2,3-丁二醇合成基因簇；将获得的基因簇使用BglII/HindIII双酶切和表达载体pET28a连接，得到重组质粒pETRABC，将质粒pETRABC转化到E.coli（优选E.coli BL21）中，获得重组基因工程菌株，命名为E.coli（E.coli BL21）/pETRABC。
上述基因工程菌大肠埃希氏菌E.coli BL21/pETRABC为革兰氏阴性菌，需氧或兼性厌氧生长，该菌的较佳培养温度为37±1℃，可以在含有50毫克/升硫酸卡那霉素的LB培养基上生长。
本发明所述用于生产meso-2,3-丁二醇的基因工程菌在发酵底物葡萄糖生产meso-2,3-丁二醇中的应用。
其中：上述发酵培养的方法是：在无菌条件下，取活化好的大肠埃希氏菌E.coli BL21/pETRABC菌液，以体积比为5～10%的接种量接种到发酵培养基中，在温度37±1℃，pH5.0～8.0、搅拌转速100～500rpm、通气量0.5～2.5vvm条件下培养36～72小时，其间，待检测培养基中葡萄糖的浓度降至20克/升以下时，补加800克/升的葡萄糖母液至培养基中葡萄糖的浓度为20～50克/升，当检测发酵液中meso-2,3-丁二醇的浓度不再增加时，发酵结束，分离出培养液，按常规方式提取meso-2,3-丁二醇；
其中，上述的发酵培养基配方为：1升蒸馏水中含：酵母粉4克，玉米浆干粉8克，磷酸二氢钾4克，乙酸钠6克，氯化钾2克，硫酸镁0.2克，1M MgSO4溶液1毫升，1M CaCl2溶液0.3毫升。
上述应用中：所述pH范围优选6.0～7.5。
上述应用中：所述搅拌转速优选300～450rpm。
上述应用中：所述通气量优选1.0～2.0vvm。
上述应用中：所述大肠埃希氏菌E.coli BL21/pETRABC菌液的活化方法是：
（1）平板培养：将基因工程菌大肠埃希氏菌E.coli BL21/pETRABC菌株划线到含有质量体积比为1.5～1.8%琼脂的并含有50毫克/升硫酸卡纳霉素的LB培养基平板上，37±1℃培养12±2小时；
（2）种子培养：无菌条件下，用无菌的牙签挑取步骤（1）平板上的一个单菌落，然后接种到含有50克/升葡萄糖和50毫克/升硫酸卡那霉素的M9培养基中，37±1℃摇床震荡培养12±2小时，得到大肠埃希氏菌E.coli BL21/pETRABC活化菌液；
其中，上述步骤（1）中所述的LB培养基配方为：1升蒸馏水中含：酵母粉5克，蛋白胨10克，氯化钠10克，121℃灭菌15分钟。
上述步骤（2）中所述的M9培养基配方为：1升蒸馏水中含：Na2HPO4·12H2O12.069克，KH2PO43克，NaCl0.5克，NH4Cl0.5克，1M MgSO4溶液1毫升，1M CaCl2溶液0.3毫升，微量元素溶液（100×）10毫升，调节pH为7.5，121℃灭菌20分钟。其中，微量元素溶液（100×）配方为：1升蒸馏水中含：EDTA5克，FeCl3·6H2O0.83克，ZnCl284毫克，CuCl2·2H2O13毫克，CoCl2·2H2O10毫克，H3BO310毫克，MnCl2·4H2O1.6毫克。
上述应用中：底物葡萄糖的检测方法是：
样品进行设定的稀释后，采用生物传感分析仪SBA-40C（山东省科学院生物研究所）测 定。测定原理为利用固定化葡萄糖氧化酶膜专一性测定葡萄糖含量。
上述应用中：发酵产物meso-2,3-丁二醇的检测方法是：
每500毫升乙酸乙酯中加入0.4毫升异戊醇，作为萃取剂；利用该萃取剂，对发酵液中发酵产物样品进行等体积萃取，利用涡旋振荡器对萃取的样品震荡30秒钟，然后静置，取上层样品进行气相检测。具体的气相检测条件如下：
所用气相色谱仪的型号为Agilent6820，氮气作为载气，进样器和检测器的温度均设为280℃，检测过程的柱温设定为：40℃保持3分钟；然后以每分钟1.5℃的速率升温到80℃；以每分钟0.5℃的速率升温到86℃；以每分钟30℃的速率升温到200℃。进样量1.5微升，进行气相检测。
本发明成功的实现了将2,3-丁二醇合成基因簇在E.coli BL21中表达，并以此重组菌株E.coli BL21/pETRABC发酵葡萄糖高效生产meso-2,3-丁二醇，具有培养基简单，成本低，产物分离方便等特点。
本发明具有的突出特点是：
（1）应用表达2,3-丁二醇合成基因簇的重组菌株E.coliBL21/pETRABC发酵葡萄糖生产meso-2,3-丁二醇。
（2）本发明方法构建的工程菌株要求的培养基简单、成本低。
（3）本发明生产meso-2,3-丁二醇操作过程简单，产物分离方便。
（4）本发明的重组菌能发酵葡萄糖生产meso-2,3-丁二醇，最高产量可达到85克/升以上，纯度大于96%。
附图说明
图1载体pET-RABC图谱。
其中：lacI：编码lac启动子的调控因子；ori：复制起始位点；Kan：编码卡那霉素抗性基因；BglII，HindIII：核酸内切酶位点；lysR：编码2,3-丁二醇合成调控因子；Pabc：2,3-丁二醇合成启动子；budA/budB/budC：编码ALS/ALDC/BDH。
具体实施方式
下面通过实施例进一步阐明本发明，但不仅限于此。
实施例1：基因工程菌株E.coli BL21/pETRABC的构建
1、2,3-丁二醇合成基因簇的克隆
采用常规的方法制备菌株Enterobacter cloacae subsp.dissolvens SDM的基因组DNA，该过程可参考科学出版社出版的《精编分子生物学指南》中细菌基因组的小量制备的方法，提取Enterobacter cloacae subsp.dissolvens SDM的基因组DNA；使用合成的引物从Enterobacter cloacae subsp.dissolvens SDM基因组DNA中PCR扩增得到2,3-丁二醇合成基因簇。
2,3-丁二醇合成基因簇的来源菌Enterobacter cloacae subsp.dissolvens SDM（CGMCC No.4230）为申请人实验室前期筛选得到的高产2,3-丁二醇菌株，其已进行了保藏和基因组测序。
通过PCR扩增Enterobacter cloacae subsp.dissolvens SDM来源的2,3-丁二醇合成基因 簇，引物设计如下：
上游引物5’-CGGTAGATCTCTACTCCTCGCTTATCATCG-3’，携带一个BglII位点；
下游引物5’-GCCTAAGCTTTTAGTTGAACACCATCCCA-3’，携带一个HindIII位点。
上述基因簇序列长度为4248个碱基，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2、将PCR扩增得到的DNA片段使用BglII/HindIII双酶切，和表达载体pET28a连接，得到重组质粒pETRABC，见图1。
3、将上述重组质粒经过转化导入宿主E.coli BL21，得到工程菌株E.coliBL21/pETRABC。
上述得到的工程菌菌株E.coli BL21/pETRABC已于2013年12月31日保藏于中国典型培养物保藏中心（武汉大学，中国武汉），保藏中心编号为：CCTCC NO：M2013733。
上述重组大肠埃希氏菌E.coli BL21/pETRABC CCTCC NO：M2013733为革兰氏阴性菌，需氧或兼性厌氧生长，可以用于发酵葡萄糖生产手性纯meso-2,3-丁二醇。
上述重组大肠埃希氏菌E.coli BL21/pETRABC CCTCC NO：M2013733的较佳培养温度为37±1℃，可以在含有50毫克/升硫酸卡纳霉素的LB培养基上生长。
实施例2：制备E.coli BL21/pETRABC CCTCC M2013733菌株的细胞液体培养物
1、平板培养：将E.coli BL21/pETRABC CCTCC M2013733划线到含有质量体积比为1.5%琼脂的并含有50毫克/升硫酸卡那霉素的LB平板上，37℃培养12小时；
2、种子：在无菌的条件下，用无菌的牙签挑取步骤（1）平板上的一个单菌落，然后接种到5毫升的含有50克/升葡萄糖和50毫克/升硫酸卡那霉素的M9培养基中，37℃摇床震荡培养12小时；
3、摇瓶：在无菌条件下，取步骤（2）所培养的菌液以体积比1～3%的接种量，接种到30～150毫升含有50克/升葡萄糖和50毫克/升硫酸卡那霉素的M9培养基中，37±1℃摇床震荡培养24±1小时；
其中，上述步骤1中所述的LB培养基配方为：1升蒸馏水中含：蛋白胨10克，酵母粉5克，氯化钠10克，121℃灭菌15分钟。上述步骤2～3中所述的M9培养基配方为：1升蒸馏水中含：Na2HPO4·12H2O12.069克，KH2PO43克，NaCl0.5克，NH4Cl0.5克，1M MgSO4溶液1毫升，1M CaCl2溶液0.3毫升，微量元素溶液（100×）10毫升。调节pH为7.5，121℃灭菌20min。其中，微量元素溶液（100×）配方为：1升蒸馏水中含：EDTA5克，FeCl3·6H2O0.83克，ZnCl284毫克，CuCl2·2H2O13毫克，CoCl2·2H2O10毫克，H3BO310毫克，MnCl2·4H2O1.6毫克。
实施例3：重组E.coli在发酵培养基1中发酵葡萄糖生产meso-2,3-丁二醇
将通过实施例2的方法获得的E.coli BL21/pETRABC CCTCC M2013733菌株的细胞液体培养物，以体积比为10%的接种量接种到含有50克/升葡萄糖和50毫克/升硫酸卡那霉素的发酵培养基1中，在37℃、pH6.5、300rpm、1.0vvm通气量条件下发酵。发酵中每隔4 小时取样，样品以8,000×g离心10分钟，检测上清中meso-2,3-丁二醇和葡萄糖的浓度，根据葡萄糖浓度补加800克/升葡萄糖母液，使葡萄糖浓度维持在20～50克/升；对上清进行气相色谱分析测定发酵液中meso-2,3-丁二醇的浓度，当meso-2,3-丁二醇的浓度不再增加时，停止发酵。
其中，上述步骤中所述的发酵培养基1配方为：1升蒸馏水中含：Na2HPO4·12H2O12.069克，KH2PO43克，NaCl0.5克，NH4Cl0.5克，1M MgSO4溶液1毫升，1M CaCl2溶液0.3毫升，微量元素溶液（100×）10毫升。调节pH为7.5，121℃灭菌20分钟。其中，微量元素溶液（100×）配方为：1升蒸馏水中含：EDTA5克，FeCl3·6H2O0.83克，ZnCl284毫克，CuCl2·2H2O13毫克，CoCl2·2H2O10毫克，H3BO310毫克，MnCl2·4H2O1.6毫克。
68小时后检测结果显示：meso-2,3-丁二醇的浓度为68.8克/升。
实施例4：重组E.coli在发酵培养基1中发酵葡萄糖生产meso-2,3-丁二醇
将通过实施例2的方法获得的E.coli BL21/pETRABC CCTCC M2013733菌株的细胞液体培养物，以体积比为5%的接种量接种到含有50克/升葡萄糖和50毫克/升硫酸卡那霉素的发酵培养基1中，在37℃、pH7.0、400rpm、1.5vvm通气量条件下发酵。发酵中每隔4小时取样，样品以8,000×g离心10分钟，检测上清中meso-2,3-丁二醇和葡萄糖浓度，根据葡萄糖浓度补加葡萄糖，使葡萄糖浓度维持在20～50克/升；对上清进行气相色谱分析测定发酵液中meso-2,3-丁二醇的浓度，当meso-2,3-丁二醇的浓度不再增加时，停止发酵。
60小时后检测结果显示：meso-2,3-丁二醇的浓度为73.8克/升。
实施例5：重组E.coli在发酵培养基2中发酵葡萄糖生产meso-2,3-丁二醇
将通过实施例2的方法获得的E.coli BL21/pETRABC CCTCC M2013733菌株的细胞液体培养物，以体积比为10%的接种量接种到含有50克/升葡萄糖和50毫克/升硫酸卡那霉素的发酵培养基2中，在37℃、pH6.0、350rpm、2.0vvm通气量条件下发酵。发酵中每隔4小时取样，样品以8,000×g离心10分钟，检测上清中meso-2,3-丁二醇和葡萄糖的浓度，根据葡萄糖浓度补加800克/升葡萄糖母液，使葡萄糖浓度维持在20～50克/升；对上清进行气相色谱分析测定发酵液中meso-2,3-丁二醇的浓度，当meso-2,3-丁二醇的浓度不再增加时，停止发酵。
40小时后检测结果显示：meso-2,3-丁二醇的浓度达到85.0克/升。
上述发酵培养基2配方如下：
酵母粉4克/升，玉米浆干粉8克/升，磷酸二氢钾4克/升，乙酸钠6克/升，氯化钾2克/升，硫酸镁0.2克/升，1M CaCl2溶液0.3毫升/升。
实施例6：重组E.coli在发酵培养基2中发酵葡萄糖生产meso-2,3-丁二醇
将通过实施例2的方法获得的E.coli BL21/pETRABC CCTCC M2013733菌株的细胞液 体培养物，以体积比为10%的接种量接种到含有50克/升葡萄糖和50毫克/升硫酸卡那霉素的发酵培养基2中，在37℃、pH6.5、400rpm、1.0vvm通气量条件下发酵。发酵中每隔4小时取样，样品以8,000×g离心10分钟，检测上清中meso-2,3-丁二醇和葡萄糖的浓度，根据葡萄糖浓度补加800克/升葡萄糖母液，使葡萄糖浓度维持在20～50克/升；对上清进行气相色谱分析测定发酵液中meso-2,3-丁二醇的浓度，当meso-2,3-丁二醇的浓度不再增加时，停止发酵。
36小时后检测结果显示：meso-2,3-丁二醇的浓度达到80.5克/升。
Claims (6)
1.一株用于生产meso-2,3-丁二醇的基因工程菌，其特征在于：所述基因工程菌是含有阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae subsp.dissolvens）SDM CGMCC No.4230的2,3-丁二醇合成基因簇budRABC的大肠埃希氏菌，其中，budRABC的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；该菌株命名为大肠埃希氏菌E.coli BL21/pETRABC，菌株已于2013年12月31日保藏于“中国典型培养物保藏中心”，保藏号为：CCTCC NO：M2013733。
2.权利要求1所述用于生产meso-2,3-丁二醇的基因工程菌在发酵底物葡萄糖生产meso-2,3-丁二醇中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述发酵培养的方法是：在无菌条件下，取活化好的大肠埃希氏菌E.coli BL21/pETRABC菌液，以体积比为5～10%的接种量接种到发酵培养基中，在温度37±1℃，pH5.0～8.0、搅拌转速100～500rpm、通气量0.5～2.5vvm条件下培养36～72小时，其间，待检测培养基中葡萄糖的浓度降至20克/升以下时，补加800克/升的葡萄糖母液至培养基中葡萄糖的浓度为20～50克/升，当检测发酵液中meso-2,3-丁二醇的浓度不再增加时，发酵结束，分离出培养液，按常规方式提取meso-2,3-丁二醇；
其中，上述的发酵培养基配方为：1升蒸馏水中含：酵母粉4克，玉米浆干粉8克，磷酸二氢钾4克，乙酸钠6克，氯化钾2克，硫酸镁0.2克，1M MgSO4溶液1毫升，1MCaCl2溶液0.3毫升。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述pH范围选6.0～7.5。
5.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述搅拌转速为300～450rpm。
6.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述通气量为1.0～2.0vvm。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410051821.8A CN103805551A (zh) | 2014-02-14 | 2014-02-14 | 一株用于生产meso-2,3-丁二醇的基因工程菌及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410051821.8A CN103805551A (zh) | 2014-02-14 | 2014-02-14 | 一株用于生产meso-2,3-丁二醇的基因工程菌及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103805551A true CN103805551A (zh) | 2014-05-21 |
Family
ID=50702940
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410051821.8A Pending CN103805551A (zh) | 2014-02-14 | 2014-02-14 | 一株用于生产meso-2,3-丁二醇的基因工程菌及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103805551A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104560848A (zh) * | 2014-10-20 | 2015-04-29 | 南京工业大学 | 一种实现高密度发酵并联产2,3-丁二醇的基因工程菌及其构建方法和应用 |
| CN107201374A (zh) * | 2017-06-28 | 2017-09-26 | 广西科学院 | 光学纯meso‑2,3‑丁二醇高产工程菌株的构建方法及应用 |
| CN107201375A (zh) * | 2017-06-28 | 2017-09-26 | 南宁邦尔克生物技术有限责任公司 | 生产(r,r)‑2,3‑丁二醇基因工程菌株的构建方法及其应用 |
| CN108570440A (zh) * | 2018-03-23 | 2018-09-25 | 山东大学深圳研究院 | 一株重组大肠杆菌及其在生产光学纯meso-2,3-丁二醇中的应用 |
-
2014
- 2014-02-14 CN CN201410051821.8A patent/CN103805551A/zh active Pending
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| XU Y等: "Systematic metabolic engineering of Escherichia coli for high-yield production of fuel bio-chemical 2,3-butanediol", 《METAB ENG.(EPUB)》 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104560848A (zh) * | 2014-10-20 | 2015-04-29 | 南京工业大学 | 一种实现高密度发酵并联产2,3-丁二醇的基因工程菌及其构建方法和应用 |
| CN104560848B (zh) * | 2014-10-20 | 2018-10-30 | 南京工业大学 | 一种实现高密度发酵并联产2,3-丁二醇的基因工程菌及其构建方法和应用 |
| CN107201374A (zh) * | 2017-06-28 | 2017-09-26 | 广西科学院 | 光学纯meso‑2,3‑丁二醇高产工程菌株的构建方法及应用 |
| CN107201375A (zh) * | 2017-06-28 | 2017-09-26 | 南宁邦尔克生物技术有限责任公司 | 生产(r,r)‑2,3‑丁二醇基因工程菌株的构建方法及其应用 |
| CN107201374B (zh) * | 2017-06-28 | 2020-11-10 | 广西科学院 | 光学纯meso-2,3-丁二醇高产工程菌株的构建方法及应用 |
| CN108570440A (zh) * | 2018-03-23 | 2018-09-25 | 山东大学深圳研究院 | 一株重组大肠杆菌及其在生产光学纯meso-2,3-丁二醇中的应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101565685B (zh) | 一株基因重组菌及在手性纯乙偶姻和2,3-丁二醇生产中的应用 | |
| CN104894047A (zh) | 基于d-丙氨酸缺陷型筛选标记的表达d-阿洛酮糖3-差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌的构建方法 | |
| CN107129959B (zh) | 生产(r)-乙偶姻基因工程菌株的构建方法及其应用 | |
| CN102272316A (zh) | 蔗糖作为底物用于发酵产生1,2-丙二醇的用途 | |
| CN104774792B (zh) | 一株耐受高浓度甲醇的甲基单胞菌及其应用 | |
| CN103805551A (zh) | 一株用于生产meso-2,3-丁二醇的基因工程菌及其应用 | |
| CN103898037A (zh) | 一种联产香叶醇和橙花醇的基因工程菌及其构建方法和应用 | |
| CN104046586B (zh) | 一株基因工程菌及其在生产(2r,3r)-2,3-丁二醇中的应用 | |
| CN105368767A (zh) | D-丙氨酸缺陷型筛选表达纤维二糖-2-差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法 | |
| CN102154384B (zh) | 一种生产手性纯(2s,3s)-2,3-丁二醇的方法 | |
| WO2023143136A1 (zh) | 一种发酵生产α-檀香烯的酵母工程菌及其应用 | |
| CN105219667B (zh) | 用于木糖发酵制氢的菌株及制氢方法 | |
| CN103602626A (zh) | 一种以油脂为原料生产甲羟戊酸的方法及其构建的基因工程菌 | |
| CN100558884C (zh) | 一种产酸克雷伯氏菌及其应用 | |
| CN105274041B (zh) | 一株重组大肠杆菌及其在生产2-丁醇中的应用 | |
| CN111411134B (zh) | 一种海洋芽孢杆菌Bacillus sp.JIN118发酵生产嘌呤的制备方法 | |
| Zhou et al. | Study on the effect of key genes ME2 and adhE during Luzhou-flavor Baijiu brewing | |
| Christen et al. | Evaluation of four Candida utilis strains for biomass, acetic acid and ethyl acetate production from ethanol | |
| CN101613707A (zh) | 一种用代谢工程菌生产谷胱甘肽的方法 | |
| CN115838682A (zh) | 一种利用甘露聚糖高效生产2′-岩藻糖基乳糖的地衣芽孢杆菌工程菌株 | |
| CN109486871A (zh) | 一种利用地衣芽孢杆菌工程菌株发酵生产乙偶姻的方法 | |
| CN111411135B (zh) | 嘌呤的发酵生产工艺 | |
| CN102417888A (zh) | 一株利用木薯为原料生产丁醇的丙酮丁醇梭菌及其应用 | |
| CN107201375A (zh) | 生产(r,r)‑2,3‑丁二醇基因工程菌株的构建方法及其应用 | |
| CN103468606A (zh) | 一株产酸克雷伯氏菌及其在生产蒜糖醇中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20140521 |