CN1038028A - 栝楼属蛋白针剂及其生产方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种栝楼属蛋白的针剂及其生产方 法，本发明方法以结晶栝楼属蛋白为原料，用加入多 羟基类化合物的稳定剂或用微量酸或二氧化碳调节 pH方法生产水针剂，经脱水成粉针剂。用本发明方 法生产的针剂不仅能用于引产，抗肿瘤、艾滋病和病 毒，而且针剂不易变性，能较长时间贮存，生产方法简 便，适于工业生产。

Description

本发明属于含括楼属蛋白的医用配制品及其生产方法，具体地说是一种括楼属蛋白针剂及其生产方法。

从葫芦科（Cucurbitaceae）包括瓜 、日本括楼、双变括楼、南方括楼、长萼括楼、王瓜等括楼属（Trichosanthes）植物的块根中分离、提取得到的能引产、抗肿瘤、抗艾滋病病毒或其它病毒的活性物质，我们称为括楼属蛋白（Trichosanthins）。括楼属植物的块根是我国常用的中药，在“神农本草经”和“本草纲目”中均有记载。括楼属植物块根具有泻热、生津、破血、消瘀和引产的功能。有抗癌（陈思义等，南京药学院学报、4，1959;北京医学院药学系中药研究小组，北京医学院学报，1，104，1959）和抗菌（刘国声等，Cin.Med.J.，68（9-10），307，1950;曹仁烈等，中华皮肤科杂志，4，286，1957）作用。括楼属蛋白对胎盘滋养叶细胞有选择性的损伤作用，可用来作为流产药物。对妊娠六个月以下的妇女引产均具有疗效高、剂量小、出血少、安全和付反应小的优点，对死胎、宫外孕、葡萄胎及恶性葡萄胎等妇科疾病有独特疗效（中华医学杂志，57（4），215，1976），对肿瘤细胞（欧州专利255，424，1987）和被爱滋病毒感染的T-淋巴细胞，巨噬细胞有明显的抑制作用（美国专利4，795，739，1989）。

括楼属蛋白可以从括楼属植物块根的汁中用溶剂或无机盐沉淀或分级沉淀法，结晶方法，凝胶层析或透析法制得。中国科学院上海有机化学研究所等曾报导精制天花粉蛋白的制备及其应用（中草药通讯，4，14，1976），但所获针剂含有少量无效的、且具有抗原性蛋白质和糖类等其它的杂质，有热源反应。金善炜、汪猷等报导了结晶天花粉蛋白的制备（化学学报，39，917，1981），可进一步提高疗效、减少用药量和减轻付反应。汪猷等测定了天花粉蛋白的一级结构（Pure    &    Appl.Chem.，58，789，1986）表明分子量为25682。杨显荣等从王瓜根中用溶剂沉淀和层析方法也提取了括楼属蛋白，表明也有相似二级结构和疗效。由于括楼属蛋白对热不稳定、受冲击或振荡易产生泡沫而变性，变性后蛋白难溶于水，且不可逆转。所以，生产符合医药要求能长期贮存和能配制澄明无色的针剂的粉针剂和注射液的方法仍是人们渴望解决的课题。

本发明目的是提供一种稳定性好、可较长期保存的括楼属蛋白针剂，所述的针剂包括粉针剂和注射液。

本发明另一目的是提供一种上述括楼属蛋白针剂的简便生产方法。

本发明提供的括楼属蛋白的针剂采用从括楼属植物块根中提取分离得到的结晶括楼属蛋白，通过活性炭处理可以除去变性物质和剩余的产生热源的物质。为了解决括楼属蛋白的变性问题，可以加入稳定剂或用微量酸或二氧化碳调节控制pH，使其能较长期贮存而不变性。

本发明提供的括楼属蛋白注射液是含有0.002-2%的结晶括楼属蛋白，0或0.9%氯化钠、0-30%糖类化合物，0-10%稳定剂，可以含微量酸调节pH值，pH为2.0-7.0，最佳为2.0-6.0，其余为水的注射液。

本发明提供的上述括楼属蛋白注射液针剂中，所述的糖类化合物可以是葡萄糖、乳糖、果糖、甘露糖或山梨糖，所述的稳定剂可以是氨基酸、吐温或多羟基类化合物，其中氨基酸可以是色氨酸、甘氨酸、精氨酸等，多羟基类化合物可以是丙三醇、甘露醇、肌醇、山梨醇或葡萄糖醇等。所述的酸是硫酸、盐酸、磷酸、醋酸或碳酸。

本发明提供的括楼属蛋白粉剂是由下述重量比的物质组成：0.02-20的结晶括楼属蛋白∶0或9的氯化钠∶0-300的糖∶0-100的稳定剂，还可以含有微量的酸。其中糖类化合物、稳定剂及微量酸如前所述。

本发明的括楼属蛋白注射液，当结晶括楼属蛋白含量大于0.005%时，一定要加入稳定剂，或用微量酸或二氧化碳调节pH至2.0-7.0，最佳为2.0-6.0，或控制pH外再加入稳定剂。当含有结晶括楼属蛋白等于或小于0.005%时，由于浓度较低，可以不用微量酸或二氧化碳调节pH或加入稳定剂，可用于皮试。当加入上述稳定剂时，稳定剂含量为0.1-10%，推荐0.1-5%。

本发明的括楼属蛋白注射液，可以是水溶液，也可以是生理盐水溶液或者是葡萄糖等的糖类化合物的水溶液。

本发明的括楼属蛋白粉针剂是除水以外的上述物质组成，可以单独混料配制而成，也可以是由上述括楼属蛋白注射液脱水而成，但最好是由括楼属蛋白注射液脱水制成。

具体地说，本发明的括楼属蛋白的注射液的生产方法是将0.02-30份重量的结晶括楼属蛋白，加入800-1500份重量的注射用水，然后在室温或更低温度条件下放置溶解，最佳温度在0-10℃，放置时间为1-24小时，推荐16小时以下，随后按结晶括楼属蛋白投入量的10-50%，即加入0.02-15份重量的医用活性炭，以除去变性的括楼属蛋白等不溶物杂质和色素，搅拌后静置5-100分钟，过滤除去活性炭，可以加入或不加入0或9份重量的氯化钠、0-300份重量上述的糖类化合物、0-100份重量上述的稳定剂，然后加入微量的上述酸或二氧化碳调节pH至2.0-7.0，推荐pH2.0-6.0，经除菌过滤，灌装成注射液针剂。

本发明的上述括楼属蛋白注射液生产方法，当加入稳定剂时，一般加入1-100份重量稳定剂，推荐加入1-50份重量稳定剂，这时也可以不用微量酸或二氧化碳调节pH。但为了能更稳定地长期保存，最好还是用微量酸或二氧化碳调pH值。也可以不加稳定剂，而用上述微量酸或二氧化碳调pH方法。当生产的括楼属蛋白注射液中结晶括楼属蛋白含量等于或小于0.005%时，可以不加稳定剂或用微量酸或二氧化碳调节pH。

本发明的括楼属蛋白粉针剂的生产方法，可以是将上述经活性炭处理过的结晶括楼属蛋白溶液经脱水后与其它物质混合，除菌，再分装成粉针剂，或经活性炭处理过的结晶括楼属蛋白溶液与其它物质混合，除菌和脱水或脱水再除菌，再分装成粉针剂，也可以将前述的结晶括楼属蛋白注射液脱水，再分装成粉针剂。脱水方法推荐采用薄膜蒸发或冷冻干燥。

结晶括楼属蛋白能溶解于水，但极不稳定，易变性。变性后的蛋白就难溶于水。用本发明方法生产和提供的括楼属蛋白针剂，不易变性和产生不溶物，适宜于较长期贮存，通常贮存三年也不会产生不溶物，且疗效不变，克服了因蛋白质易变性而引起的澄明度的难题。

本发明方法提供的括楼属蛋白针剂中，括楼属蛋白具有免疫电泳一条，聚丙烯酰胺凝胶电泳只有一条区带，无括楼属多糖杂质和热源反应。具有安全、用药量小的优点。

本发明方法提供的括楼属蛋白针剂。可以配制成0.02-20mg/ml的括楼属蛋白针剂，可满足皮试和医治疾病用的针剂需要。而皮试针剂含有括楼属蛋白小于0.05毫克就能适用。

用本发明方法提供的注射液或粉针剂在临床上配制成注射液，具有无色透明、澄明度好、符合治疗艾滋病、肿瘤、抗病毒、和引产的医用要求，不仅稳定性好、无热源反应，而且生产方法简易，适于工业生产。

下述实施例将有助于进一步理介本发明

实施例1

1.将结晶天花粉蛋白240克，加入11000毫升注射用水，室温静置10小时，加入医用活性炭120克，轻轻搅拌均匀，静置20分钟，过滤除活性炭和不溶物，滤液加入90克氯化钠溶解，配成0.9%的氯化钠溶液，用盐酸调节pH至5.0，蔡氏过滤器除菌过滤，经滤球灌装1毫升/安瓿瓶内，封口约得10000支结晶天花粉蛋白的注射液，每支含15毫克的结晶天花粉蛋白。

2.或者将上述注射液在无菌条件下冷冻干燥，分装成每支含15毫克的结晶天花粉蛋白针剂约10000支。

上述针剂适用于艾滋病、肿瘤、肝炎或流产的医治。

实施例2

将300毫克结晶天花粉蛋白，加入11000毫升注射用水，静置过夜，再加入50毫克医用活性炭，搅拌后静置60分钟，过滤除活性炭，用或不用醋酸调节pH至4.0，再经除菌过滤，分装1毫升安瓿瓶，约得每支含量0.02毫克/毫升的结晶天花粉蛋白的皮试注射液约10000支。

实施?

取结晶天花粉蛋白19克，加入11000毫升注射液用水溶解，在10℃时静置5小时，然后取出溶液加入6克医用活性炭，搅拌、静置30分钟后，过滤。

1.滤液用盐酸调节pH至3.0，除菌过滤，以1毫升/安瓿瓶的量灌装，封口约得10000支注射液。或者在无菌条件下冷冻干燥或喷雾干燥可得粉针约10000支。每支1.2毫克。

2.或者滤液中加90克氯化钠，1500克葡萄糖，500克吐温-80，溶解后除菌过滤。以1毫克/安瓿瓶的量灌装和封口，约得10000支注射液，或者在无菌条件下干燥分装，可得10000支粉针剂。

本针剂用于早期妊娠流产成功率在92%以上，用于中期妊娠引产成功率在99%。特别适用于多次手术人流史、近期剖腹产史、以及哺乳期怀孕及子宫畸形等妇女的流产。

实施例4

将浙江省采集的新鲜王瓜根10斤，洗净去皮，压汁得1100毫升。取500毫升王瓜根原汁在10℃加入1000毫升丙酮，放置片刻，倾去上清液，过滤得固体。加丙酮脱水后，固体经干燥获干品8克。再用柱层析和凝胶电泳分离获结晶括楼属蛋白0.5克。加入205毫升注射用水，静置10小时，加入医用活性炭0.2克，搅拌后静置10分钟，过滤除去活性炭，用盐酸调节pH至4.5后，除菌过滤，灌装在1毫升安瓿瓶内，约得190支，每支含括楼属蛋白1.5毫克。

Claims (9)

1、一种含有结晶括楼属蛋白的针剂，其特征是由0.002-2%重量的结晶括楼属蛋白、0或0.9%重量的氯化钠、0-30%重量的糖类化合物、0-10%重量的稳定剂，可以含有微量酸调节pH为2.0-7.0，最佳pH为2.0-6.0，其余为水所组成，所述的糖类化合物是葡萄糖、乳糖、果糖、甘露糖或山梨糖，所述的稳定剂是多羟基类化合物、氨基酸或吐温，其中多羟基类化合物可以丙三醇、甘露醇、肌醇、山梨醇或葡萄糖醇，氨基酸是色氨酸、甘氨酸或精氨酸，所述的酸是硫酸、盐酸、磷酸或醋酸。

2、如权利要求1所述的含有结晶括楼属蛋白的针剂，其特征是含有0.1-10%重量的上述稳定剂，推荐为0.1-5%重量的稳定剂。

3、如权利要求1、2所述的含有结晶括楼属蛋白的针剂，其特征是不含微量酸。

4、如权利要求1、2和3所述的含有结晶括楼属蛋白的针剂，其特征是无水。

5、如权利要求1所述的一种含有结晶括楼属蛋白的针剂的生产方法，其特征是将0.02-30份重量的结晶括楼属蛋白，加入800-1500份重量的注射用水，在室温或更低温度至0℃时，静置1-24小时，加入0.002-15份重量份的医用活性炭，搅拌后静置5-100分钟，过滤，滤液可以加入0或9份重量氯化钠、0-300份重量的糖、0-100份重量的稳定剂，可以用微量酸或二氧化炭调节pH至2.0-7.0，最佳为2.0-6.0，经除菌过滤、灌装，所述的糖类化合物是葡萄糖、乳糖、果糖、甘露糖或山梨糖，所述的稳定剂是化合物、氨基酸或吐温，其中多羟基类化合物是丙三醇、甘露醇、肌醇、山梨醇或葡萄糖醇，氨基酸是色氨酸、甘氨酸、精氨酸，所述的酸是硫酸、盐酸、磷酸或醋酸。

6、如权利要求5所述的一种含有结晶括楼属蛋白的针剂的生产方法，其特征是所述的稳定剂用量是1-100份重量，推荐1-50份重量。

7、如权利要求5、6所述的一种含有结晶括楼属蛋白的针剂的生产方法，其特征是不用微量酸或二氧化碳调节pH。

8、如权利要求5、6和7所述的一种含有结晶括楼属蛋白的针剂的生产方法，其特征是将除菌过句后的溶液脱除水。

9、如权利要求8所述的一种含有结晶括楼属蛋白的针剂的生产方法，其特征是用薄膜蒸发或冷冻干燥法脱水。