CN103766409A - 一种核桃青皮的提取物及其抑菌用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种核桃青皮提取物,该提取物的制备方法为:称取核桃青皮,磨碎成浆状,按1g∶2-5ml的比例加甲醇,超声提取20-40min,过滤,残渣用同法再提取2次,合并3次滤液,浓缩、干燥,即得。该提取物对人参根腐病菌具有明显的抑制作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物植物的提取物,尤其是一种核桃青皮的提取物及其抑菌用途,属于中药或药物用植物领域。
背景技术
核桃青皮又名青龙衣,是核桃未成熟时外部的一层厚厚的绿色果皮,随着核桃逐渐成熟青果皮会渐渐变黑,最后自然脱落。它是一种有毒物质,正常人服用过量会导致死亡。据相关资料记载,核桃叶、枝、青皮、树皮都有药用价值,具有杀菌、消毒、利尿、滋补、解毒等功效。但关于核桃青皮在农业病虫害防治方面却报道得较少。
根腐菌是一个广泛分布的土壤病真菌,会传染木本植物引起根部腐烂与溃疡。它需要潮湿的土壤与温暖的温度,特别容易侵害敏感植物(例如夏季干旱受损的植物)。根腐菌威胁林业、园艺业与水果业,超过900个木本多年生的树种会被传染,进而造成族群消减。目前防治根腐菌主要依靠农药,但使用农药不可避免地会有毒性残留,并且施药过程也会对土壤、人员造成一定的伤害。因而,研发一种安全无残留的根腐菌防治药物具有极高的农业应用价值。
发明内容
本发明的目的在于提供一种药用植物提取物,特别是一种核桃青皮提取,用于防治根腐菌等菌类。本发明目的是通过以下技术方案实现的。
一种核桃青皮提取物,其特征在于该提取物是按如下方法制得的:称取核桃青皮,磨碎成浆状,按1g∶2-5ml的比例加甲醇,超声提取20-40min,过滤,残渣用同法再提取2次,合并3次滤液,浓缩、干燥,即得。
优选的,上述提取物是按如下方法制得的:称取核桃青皮100g,磨碎成浆状,加入甲醇250ml,超声提取30min,减压抽滤,残渣用同法再提取2次,合并3次抽滤液,浓缩、干燥,即得。
进一步地,上述方法所得的甲醇提取物还可以用石油醚、乙醚、氯仿、乙酸乙酯或正丁醇进一步萃取纯化,得到相应的提取物。比如,称取核桃青皮甲醇提取物浸膏10ml,加入100ml蒸馏水,装入分液漏斗中,混合均匀;采用液-液分配萃取法依次用石油醚、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次(100ml/次);分别合并各极性萃取液,旋转蒸发仪浓缩得浓缩液,适量无菌水溶解得提取物。
以上述方法获得的各提取物,对菌类,尤其是真菌具有明显的抑制作用,以下实验例用于说明其效果。
有益效果
1材料与方法
1.1试验仪器、材料及试剂
九阳粉碎机、布式漏斗、RE-6000多功能旋转蒸发器;ZHJH-C型智能型垂直流超净工作台(上海智城分析仪器制造有限公司);LS系列立式压力蒸汽灭菌器(江阴滨江医疗设备有限公司);KQ-400KDE型高功率数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
核桃青皮采自北京市密云县。选取外表新鲜干净的青皮核桃,剥下核桃果实的外青皮,用于后续不同极性提取物的制备。
人参根腐病菌C.destructans由中国医学科学院药用植物研究所提供。
其余试剂为分析纯。
1.2试验方法
1.2.1提取物制备
准确称取核桃青皮100g,用植物粉碎机磨碎成浆状。放入1000ml锥形瓶,用250ml甲醇浸泡,超声提取30min。提取物经抽滤,残渣再用250ml甲醇提取,重复2次。合并3次抽滤液,用旋转蒸发器浓缩得浓缩液。
称取核桃青皮甲醇提取物浸膏10ml,加入100ml蒸馏水,装入分液漏斗中,混合均匀。采用液-液分配萃取法依次用石油醚、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次(100ml/次)。分别合并各极性萃取液,旋转蒸发仪浓缩得浓缩液,适量无菌水溶解得提取物水溶液(表1)。
表1供试提取物样品
1.2.2 PDA培养基制备:取200g去皮马铃薯,切成小块后加l L水,沸水煮30min,双层纱布过滤,滤液加20g葡萄糖、20g琼脂粉,用蒸馏水定容至1L。取锥形瓶以100mL分装,于121℃高温湿热灭菌20min,作为马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)。
1.2.3抑菌试验
分别向15ml事先灭菌的PDA培养基中加入7.5ml、0.25ml、25μl和2.5μl不同极性的核桃青皮提取物水溶液,充分混匀后倒平板。然后在垂直流超净工作台的无菌环境下接种人参根腐病菌,培养10天后,用十字交叉法统计人参致病菌的菌落直径。每种处理设置3次重复。
1.2.4统计分析
试验结果用Excel软件(2003版)进行数据处理,利用SPSS 11.0中的单因素方差分析(One-way ANOVA)结合LSD法对统计结果进行显著性方差分析。不同处理间不含相同英文字母表示差异显著(P<0.05),含有相同英文字母表示差异不显著(P>0.05)。
2试验结果
2.1低浓度提取物水溶液的抑菌效果
先吸取0.25ml提取物原液,再与15ml的PDA培养基混匀,相当于60倍的稀释液培养基;另通过10倍稀释法获得600倍和6000倍的稀释液培养基。在研究发现,处理2(石油醚水溶液)和处理6(正丁醇水溶液)中的高浓度(60倍稀释)样本与中(600倍稀释)、低浓度(6000倍稀释)样本间存在显著性差异;另外,处理2中的高浓度(60倍稀释)和中浓度(600倍稀释)样本以及处理6中的高浓度(60倍稀释)样本与对照存在显著性差异。除处理2和处理6外,其他处理与对照均无显著性差异。
2.2高浓度提取物水溶液的抑菌效果
先向PDA培养基中加入等体积的提取物水溶液,充分混匀后倒平板,制成1倍稀释液培养基。研究发现,处理2与处理5之间,以及二者与对照之间均存在显著性差异。特别值得关注的是,处理5中的人参根腐菌均未生长,说明该浓度的提取物对致病菌存在显著的抑制活性。处理1、处理3与处理4之间无显著性差异,三者与处理2、处理5及对照间存在显著性差异。
3结论
石油醚和正丁醇萃取物在较高浓度(60倍稀释液)下,对人参根腐菌有显著的抑制作用,其余4种萃取液无显著抑菌活性;但在高浓度(1倍稀释)下,乙醚、石油醚、氯仿、乙酸乙酯和甲醇萃取物均有显著的抑菌活性,且甲醇提取物对人参根腐病菌的抑制效果最佳,抑制率达100%。
具体实施方式
实施例1:核桃青皮甲醇提取物的制备
准确称取核桃青皮100g,用植物粉碎机磨碎成浆状。放入1000ml锥形瓶,用250ml甲醇浸泡,超声提取30min。提取物经抽滤,残渣再用250ml甲醇提取,重复2次。合并3次抽滤液,用旋转蒸发器浓缩,即得。
实施例2:核桃青皮石油醚提取物的制备
准确称取核桃青皮100g,用植物粉碎机磨碎成浆状。放入1000ml锥形瓶,用250ml甲醇浸泡,超声提取30min。提取物经抽滤,残渣再用250ml甲醇提取,重复2次。合并3次抽滤液,用旋转蒸发器浓缩得浸膏。
称取核桃青皮甲醇提取物浸膏10ml,加入100ml蒸馏水,装入分液漏斗中,混合均匀。采用液-液分配萃取法依次用石油醚萃取3次(100ml/次),合并萃取液,旋转蒸发仪浓缩后即得。
实施例3:核桃青皮乙醚提取物的制备
准确称取核桃青皮100g,用植物粉碎机磨碎成浆状。放入1000ml锥形瓶,用250ml甲醇浸泡,超声提取30min。提取物经抽滤,残渣再用250ml甲醇提取,重复2次。合并3次抽滤液,用旋转蒸发器浓缩得浸膏。
称取核桃青皮甲醇提取物浸膏10ml,加入100ml蒸馏水,装入分液漏斗中,混合均匀。采用液-液分配萃取法依次用乙醚萃取3次(100ml/次),合并萃取液,旋转蒸发仪浓缩后即得。
Claims (6)
1.一种核桃青皮提取物,其特征在于该提取物是按如下方法制得的:称取核桃青皮,磨碎成浆状,按1g∶2-5ml的比例加甲醇,超声提取20-40min,过滤,残渣用同法再提取2次,合并3次滤液,浓缩、干燥,即得。
2.根据权利要求1所述的提取物,其特征在于该提取物是按如下方法制得的:称取核桃青皮100g,磨碎成浆状,加入甲醇250ml,超声提取30min,减压抽滤,残渣用同法再提取2次,合并3次抽滤液,浓缩、干燥,即得。
3.根据权利要求1或2所述的提取物,其特征在于获得的甲醇提取物还可以用石油醚、乙醚、氯仿、乙酸乙酯或正丁醇进一步萃取纯化。
4.权利要求1至3中任一项所制得的核桃青皮提取物在抑菌上的用途。
5.权利要求1至3中任一项所制得的核桃青皮提取物在抑制真菌上的用途。
6.权利要求1至3中任一项所制得的核桃青皮提取物在抑制人参根腐病菌上的用途。
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