CN103763925A

CN103763925A - 高剂量粘膜粘附甲硝唑水基凝胶制剂及其治疗细菌性阴道病的用途

Info

Publication number: CN103763925A
Application number: CN201280040540.1A
Authority: CN
Inventors: M·T·诺德斯基; K·S·巴拉吉
Original assignee: Medicis Pharmaceutical Corp
Current assignee: Medicis Pharmaceutical Corp
Priority date: 2011-06-28
Filing date: 2012-06-28
Publication date: 2014-04-30
Also published as: CN107823123A; JP2017014248A; CA2840571C; BR112013033759A8; MX2014000066A; US10238634B2; AU2012275292A1; US20190183859A1; EP2725904A4; BR112013033759A2; US20130005787A1; EP2725904A1; AU2016200825B2; JP6235087B2; BR112013033759B1; AU2016200825A1; CA2840571A1; AU2012275292B2; US20130005785A1; CA3054236A1

Abstract

本公开提供可用于多种目的的甲硝唑的粘膜粘附水基凝胶制剂，所述目的包括作为治疗方法治疗患有和／或被诊断具有细菌性阴道病的个体的阴道内施加。

Description

高剂量粘膜粘附甲硝唑水基凝胶制剂及其治疗细菌性阴道病的用途

1.相关申请的交叉引用

本申请要求2011年6月28日提交的美国临时申请No.61／502,285和2011年7月14日提交的美国临时申请No.61／508,058的权益，所述专利的内容通过引用整体并入本文。本申请还涉及2011年6月28日提交的美国临时申请No.61／502,288和2011年7月14日提交的美国临时申请No.61／508,054，所述专利的内容通过引用整体并入本文。

2.领域

本公开涉及甲硝唑的水基凝胶制剂及其用途，例如治疗细菌性阴道病。

3.背景

细菌性阴道病(以下为“BV”)据报道为在生育年龄的妇女中发现阴道炎的最常见原因，引起40-50％的所有阴道感染(Sobel，1997，“Review Article：Vaginitis，”New Engl J Med337：1896-1903)。BV可引起麻烦的症状且有时可增加获得性传播疾病(诸如HIV)的危险。BV被认为表示协同的多种细菌感染，特征为最常见作为一部分正常阴道微生物区系的细菌菌种的过度生长(100x-1000x)，包括阴道加德纳菌(Gardnerella vaginalis)、拟杆菌属某些种(Bacteroides spp.)(现在一些被分为普氏菌属某些种(Prevotella spp.))、厌氧革兰式阳性球菌、动弯杆菌属某些种(Mobihuncus spp.)和人型支原体(mycoplasma hominis)。伴随着这种增长通常存在的乳杆菌属(Lactobacilhus)菌种显著下降，据信该菌种调节其它阴道菌群的生长。此外，在健康妇女的阴道菌群中占优势的产过氧化氢的乳杆菌属被妇女中具有BV的非产过氧化氢菌株替换(Amsel等人，1983，Am J.Med74：14；Sobel等人1990，Infect MedMay：24)。一般来讲，研究显示与健康妇女相比，具有BV的妇女的阴道微菌群存在较大量的定量差异，表明BV的一些临床体征和症状可能与一种或多种天然存在的微生物菌种的定量差异相关(Masfari等人，1986，Genitourin Med62：256)。导致阴道生态环境中菌种平衡的初始破坏和最终改变的因素未得到很好理解，并且精确的感染位置为未知的，使研发合适的治疗方法的努力复杂化。

甲硝唑(由FDA在1963年7月18日批准)和克林霉素为两种最古老和最常用的抗生素，它们被开处方用于治疗患有和／或被诊断具有BV的妇女((CDC2006STD Treatment Guidelines MMWR2006；55(No.RR-7))。

甲硝唑可获得自多种来源如口服片剂和胶囊、可注射溶液、0.75重量％的局部用洗剂、乳膏剂和凝胶、1.0重量％的局部用凝胶和0.75重量％的阴道凝胶。局部用乳膏剂、洗剂和凝胶一般被用于治疗酒渣鼻，其中所述阴道凝胶，例如0.75重量％的甲硝唑阴道凝胶由Medicis以商标名METROGEL

出售，被用于治疗BV。

尽管其常见用途，用0.75重量％的阴道甲硝唑凝胶诸如METROGEL

治疗并不理想。为有效，必须将凝胶每天施加一次或两次持续五天。

此外，无论口服还是阴道，通常在多达30％的妇女中于三个月治疗内观察到BV的复发。复发的原因仍不清楚。参见，如，Larsson，1992，Int J Std Aids3：239-247；Wilson，2004，Sex Transm Infect80：8-11。在双盲、安慰剂对照交叉实验中已显示用0.75％甲硝唑凝胶的阴道内治疗在治疗之后一个月内产生约15％的复发率。参见，Hillier等人，1993年6月，“Efficacy of Intravaginal0.75％Metronidazole Gelfor the Treatment of Bacterial Vaginosis，”Obstet Gynecol81(6)：963-967。外阴道念珠菌病，通常被称为酵母菌感染，也在BV治疗之后大约10％的妇女中观察到。

鉴于BV为当前生育年龄的妇女中阴道感染的最普遍形式的事实，实际和立即需要解决当前可用的BV治疗的一个或多个缺点的新疗法。例如，期望利用在单次施加中提供有效的疗法，和／或提供比当前利用0.75重量％的阴道内甲硝唑凝胶更有效的疗法，降低在成功的治疗过程之后BV的复发率，和／或降低在成功的BV治疗过程之后外阴道念珠菌病的发病率的阴道内治疗。

4.概述

已经令人惊讶地发现，在粘膜粘附水基凝胶媒介物中以高于那些当前使用来治疗细菌性阴道病(“BV”)的浓度配制的甲硝唑(“MTZ”)获得克服当前阴道内BV治疗(诸如METROGEL

的若干缺点的治疗。例如，如将在下文更详细论述，包含约1-2重量％(“wt％”)的MTZ的“高剂量”粘膜粘附MTZ水基凝胶递送令人惊讶地显著高于MTZ的预期局部浓度以及显著高于通过与用人类尸体皮肤进行的体外皮肤渗透实验中的METROGEL类似的0.75重量％的MTZ凝胶递送的MTZ的局部浓度。当用于治疗患有和／或被诊断具有BV的妇女时，与METROGEL

相比，包含1.3重量％的MTZ的高剂量粘膜粘附水基凝胶的实施方案获得更优的结果。例如，当每天施加一次持续三天时，用本公开的1.3重量％的高剂量的MTZ凝胶实现的功效约与用当前可用的FDA-批准的0.75重量％的MTZ凝胶根据其标准的5-天治疗方案的治疗在妇女中实现的功效相同。相当令人惊讶地，发现本公开的高剂量的1.3重量％的MTZ凝胶的单次施加与每天施加一次持续五天的0.75重量％的MTZ凝胶的过程同样有效。该发现为重大的，因为其用暴露于低得多的总MTZ提供BV的有效治疗，降低了不良的甚至危险的副作用的危险。

尽管并非旨在受任何操作理论的束缚，据信示例性1.3重量％的MTZ水基凝胶的令人惊讶的功效可能部分是由于本文所述的新型粘膜粘附水基凝胶局部释放的上述出人意料的高水平的MTZ。

也令人惊讶地发现，当将1.3重量％的MTZ高剂量凝胶以每天一次持续五天施加至患有和／或被诊断具有BV的妇女的阴道时，与METROGEL相比功效显著地增加，如由例如，增加的治愈速率、增加症状的分辨时间、增加症状的复发时间和／或降低复发的发病率中的任一者来确定。因此，已经令人惊讶地发现当将高剂量的粘膜粘附MTZ水基凝胶以每天一次持续五天施加至患有和／或被诊断具有BV的妇女的阴道时，与用当前可用的FDA-批准的0.75重量％的甲硝唑凝胶根据其标准的5天治疗方案的治疗的妇女相比，所实现的功效优越的多并且BV复发的发病率显著降低。

此外，用本文所述的高剂量的1.3重量％的MTZ制剂治疗患有和／或被诊断具有BV的妇女持续五天表现出出人意料的和引人关注的结果-处理后外阴道念珠菌病的几乎零发病率。根据申请人的知识，该结果为空前的。

因此，在一个方面，本公开提供新型“高剂量”粘膜粘附MTZ水基凝胶，其可以被局部施加特别是阴道内施加于妇女以治疗(除了其它以外)BV。高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶一般包含约1重量％至约2重量％的MTZ，在一些具体实施方案中，约1.0重量％、约1.1重量％、约1.2重量％、约1.3重量％、约1.4重量％、约1.5重量％、约1.6重量％、约1.7重量％、约1.8重量％、约1.9重量％或约2.0重量％的MTZ和一种或多种胶凝聚合物和／或试剂。MTZ可以游离碱或盐的形式(诸如与药学上可接受的酸形成的盐)包括在凝胶中。

凝胶通常包括总量的胶凝聚合物在25℃下足以获得约200,000-400,000mPa的粘度，例如在25℃下约250,000-350,000mPa，使用受控的剪切率扫描法，Bholin CVO100流变仪和在表11(以下)中提供的流变仪设置。取决于具体的胶凝聚合物和使用的凝胶条件，粘度在该范围内的水基凝胶一般通过将约0.5重量％至约5重量％的总量的胶凝聚合物包括在凝胶中来实现。在一些具体实施方案中，本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶将包括约1重量％至约3重量％的总胶凝聚合物，以及在一些具体实施方案中约2重量％的总胶凝聚合物。

熟练的技术人员将了解不同的胶凝聚合物表现出不同的粘膜粘附度。对于被设计用于阴道内施加以治疗BV的凝胶，胶凝聚合物可为粘膜粘附的。选择的具体的粘膜粘附胶凝聚合物并不是成功的关键且可选自能够在水基溶液中形成凝胶的任何粘膜粘附聚合物。示例性合适的粘膜粘附胶凝聚合物更详细的描述于详述部分。所有这些粘膜粘附胶凝聚合物可单独使用或组合使用。

一般来讲，应选择粘膜粘附胶凝聚合物使得当用于制备粘度在上述范围内水基凝胶时，获得在用示例性高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶MG33PB在相同的测定条件下观察到的粘膜粘附度的表现出约±10％内的粘膜粘附度的凝胶。在具体的示例性实施方案中，粘膜粘附聚合物选自羟烷基纤维素、卡波姆、聚卡波非及其混合物。在另一具体的示例性实施方案中，粘膜粘附聚合物为聚卡波非。

熟练的技术人员将了解尽管在许多实施方案中一种或多种胶凝聚合物将具有粘膜粘附特性，但是它并不是必须的。能够在水基溶液中形成凝胶的聚合物可以与粘膜粘附剂联合使用(不管是否形成凝胶)获得如本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶，所述聚合物不具有粘膜粘附性质或获得不足的粘膜粘附度。

高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶还包含针对MTZ的溶剂系统。众所周知，当试图配制可用于局部用和阴道与由FDA批准用于人体的赋形剂施加的凝胶时，MTZ存在溶解度问题。其它的已经试图在大于0.75重量％或1.0重量％的浓度的水溶液中溶解MTZ。例如，美国专利No.6,881,726描述使用环糊精和β-环糊精以增强MTZ在水基溶液中的溶解度。美国专利No.7,348,317描述另外使用烟酸和烟酰胺以增强MTZ在水基溶液中的溶解度。另外的其它化合物已经试图使用表面活性剂来增加MTZ在水基溶液中的浓度。可以使用这些溶剂系统的任一者以将MTZ溶解至本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的所需浓度。

尽管可以使用溶解度增强剂，但是已经令人惊讶地发现可以以足以获得含有约1重量％至约2重量％MTZ的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的浓度溶解MTZ而不必使用诸如上文所述的那些溶解度增强化合物。这是有利的，因为在许多情况下试剂诸如环糊精和β-环糊精通过形成复合物以增强化合物的水溶性，获得复合制剂，其中所述化合物未均匀地溶解于制剂中，试剂诸如烟酸和烟酰胺自身在某些浓度下可具有不利的药理学性质，并且试剂诸如表面活性剂可引起凝胶呈多相。

因此，还提供可用于制备如本文所述的高剂量MTZ凝胶的新型溶剂系统。所述新型溶剂系统获得均匀的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶，即MTZ溶于凝胶，并且，当储存在约25℃至约40℃范围内的温度时，其在较长的一段时间(诸如六个月或更长)内为稳定的。事实上，已经发现当储存在25℃和40℃时稳定至少18个月的包含1.3重量％的MTZ的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的具体示例性实施方案。

新型溶剂系统一般利用在25℃下共同地具有足以获得含有MTZ的所需浓度的凝胶的饱和MTZ溶解度的一种或多种溶剂。一般来讲，在25℃下此类溶剂将各自具有至少约10mg／g的饱和MTZ溶解度，尽管熟练的技术人员将了解当选择具有相当高的饱和MTZ溶解度的溶剂时，新型溶剂系统可包括具有较低的饱和MTZ溶解度的溶剂。具有可以用作新型溶剂系统的组分的合适的饱和MTZ溶解度的非限制性列表的溶剂提供于实施例部分。

已经发现某些类别的溶剂在25℃下具有至少约20mg／g的饱和MTZ溶解度。例如，已经发现某些醇，例如低级脂肪族醇(诸如乙醇)和低级芳族醇(诸如苯甲醇)、某些二醇，诸如，例如低级脂肪族二醇(包括，例如，低级脂肪族二醇诸如乙二醇和丙二醇)和某些聚醚，诸如，例如，分子量为约200至约600的聚氧化烯(“低级聚氧化烯”)(包括，例如，PEG400)在25℃下在该范围内具有饱和MTZ溶解度。事实上，某些低级芳族醇在25℃下具有显著较高的饱和MTZ溶解度，例如，至少约50mg／g。作为具体的实例，苯甲醇在25℃下具有约72mg／g的饱和MTZ溶解度。所有的这些溶剂和在25℃下具有至少约20mg／g的饱和MTZ溶解度的其它溶剂可以在新型溶剂系统中单独使用和以各种组合使用以在本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶中溶解MTZ。

在一些实施方案中，新型溶剂系统包含在25℃下具有至少约50mg／g的饱和MTZ溶解度的至少一种溶剂以及任选地在25℃下具有至少约20mg／g的饱和MTZ溶解度的一种或多种溶剂。在一些实施方案中，新型溶剂系统包含在25℃下具有至少约50mg／g的饱和MTZ溶解度的至少一种溶剂和在25℃下共同地具有至少约20mg／g的饱和MTZ溶解度的一种或多种溶剂。在一些具体实施方案中，各个溶剂在25℃下具有至少约20mg／g的饱和MTZ溶解度。

在一些具体实施方案中，新型溶剂系统包含约1重量％至约5重量％的在25℃下具有至少约50mg／ml的饱和MTZ溶解度的至少一种溶剂，剩下的约95重量％至约99重量％的由在25℃下共同地具有至少约20mg／ml饱和MTZ溶解度的一种或多种溶剂组成。在一些具体实施方案中，溶剂系统包含约1.0重量％的、约1.5重量％的、约2.0重量％的、约2.5重量％的、约3.0重量％的、约3.5重量％的、约4.0重量％的、约4.5重量％的或约5.0重量％的(或由这些值中的任一者所括在一起的任一范围)在25℃下具有至少约50mg／ml饱和MTZ溶解度的至少一种溶剂并且剩余物由在25℃下共同地具有至少约20mg／ml的饱和MTZ溶解度的一种或多种溶剂组成。

已经发现利用一种或多种低级芳族醇；一种或多种低级脂肪族二醇和一种或多种低级聚氧化烯的三元溶剂系统获得良好的结果。因此，在一些具体实施方案中，本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶利用针对MTZ的新型溶剂系统，其包含一种或多种低级芳族醇、一种或多种低级脂肪族二醇和一种或多种低级聚氧化烯。

在一些具体实施方案中，本文所述的溶剂系统不包括或基本上不含已知增强MTZ在水基溶液中的溶解度(诸如环糊精、β-环糊精、烟酸、烟酰胺和／或表面活性剂)的其它试剂。在一些具体实施方案中，溶剂系统为仅由一种或多种低级芳族醇、一种或多种低级亚烷基二醇和一种或多种聚氧化烯组成的三元溶剂系统且不包括任何其它另外的试剂或溶剂。

一种或多种低级芳族醇可以为酚、伯、仲、叔醇且因此可以包括除了芳族基团之外的脂肪族或杂脂肪族基团。所述一种或多种低级脂肪族二醇和低级聚氧化烯可以为饱和的或不饱和的且可以包括伯、仲和／或叔醇。本文所述的可用于该具体的实施方案的新型溶剂系统和高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的示例性的低级芳族醇、低级脂肪族二醇和低级聚氧化烯更详细的描述于详述部分。在一些具体实施方案中，一种或多种低级芳族醇为苯甲醇，一种或多种低级脂肪族二醇为丙烷-1，2-二醇(丙二醇)以及一种或多种低级聚氧化烯为MW为约400的聚乙二醇(PEG400)。

在一些具体实施方案中，溶剂系统包含约3.5重量％至约5重量％的总低级芳族醇和约95重量％至约96.5重量％的总低级脂肪族二醇，约95重量％至约96.5重量％的总低级聚氧化烯或约95重量％至约96.5重量％的总低级脂肪族二醇和总低级聚氧化烯的混合物。当使用混合物时，总低级脂肪族二醇与总低级聚氧化烯的重量比率可以通常为约1：1至约1：2，在一些具体实施方案中为约1：1.67。

溶剂系统一般将由约30重量％至约60重量％的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶组成。精确用量将取决于，至少部分地取决于待包括于凝胶中的MTZ的所需量。在一些具体实施方案中，溶剂系统表示约40-45重量％的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶。

相对于高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶还可以描述溶剂系统的组分的量。在一些具体实施方案中，高剂量水基粘膜粘附MTZ凝胶包含约1.5重量％至约2重量％的总低级芳族醇(例如，苯甲醇)、约15重量％至约25重量％的总低级脂肪族二醇(例如，丙烷-1，2-二醇)和／或约15重量％至约25重量％的总低级聚氧化烯(例如，PEG400)。在一些具体实施方案中，高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶包含约1.5重量％至约2重量％总低级芳族醇(例如，苯甲醇)、约15重量％的总低级脂肪族二醇(例如，丙烷-1，2-二醇)和／或约25重量％的总低级聚氧化烯(例如，PEG400)。其它具体的实施方案描述于详述部分，如用于溶解与本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶结合的MTZ的另外的溶剂和试剂。

本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的pH一般应与预期施加领域的pH相匹配，例如，当预期用于阴道内施加时，pH为健康阴道的pH。尽管不希望受任何特定理论的束缚，据信与健康阴道的pH相匹配允许有益的乳杆菌属繁盛。因此，对于预期用于阴道内施加的凝胶，pH一般应在约pH3至约pH5，例如pH为约pH4。可以在酸、碱或缓冲液的辅助下调节和／或维持pH，这为本领域熟知的。例如，可以通过利用凝胶的水相作为具有合适的当量浓度和pH的缓冲液调节和／或维持凝胶的pH。可选地，可以在加入凝胶剂之前用酸或碱调节水相的pH。在凝胶之后，可以用酸或碱进一步调节pH。后者方法可能对于利用凝胶剂制备凝胶有利，该凝胶在所得凝胶的所需pH范围之外最有效。例如，卡波姆凝胶在中性pH附近最有效。适用于阴道内施加的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶可以通过以下获得，将凝胶溶液的pH调节至大约中性用于凝胶，然后将所得凝胶的pH用酸调节至约pH3至约pH5。然而，已经发现利用某些pH-敏感性粘膜粘附胶凝聚合物(诸如，例如，卡波姆和聚卡波非聚合物)的pH在用于阴道内施加的所需范围内的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶可以在无缓冲液或pH调节的辅助下获得。

本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶还可包括其它的另外的组分，诸如，例如，本领域熟知的一种或多种防腐剂。当使用时，防腐剂一般应包含不超过约1重量％或2重量％的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶。防腐剂的选择并不是关键的。合适的有用的防腐剂更详细地描述于详述部分。在一些具体实施方案中，一种或多种防腐剂为4-羟基苯甲酸的酯，也称为对羟苯甲酸酯。合适的对羟苯甲酸酯包括4-羟基苯甲酸的低级烷基酯，诸如，例如，4-羟基苯甲酸甲酯(对羟苯甲酸甲酯)、4-羟基苯甲酸乙酯(对羟苯甲酸乙酯)和4-羟基苯甲酸丙酯(对羟基苯甲酸丙酯)。

熟练的技术人员将了解用于将MTZ溶于本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的溶剂还可以具有防腐剂性质。作为具体的实例，苯甲醇具有熟知的防腐剂性质。当在新型溶剂系统中用作溶剂时，可以使用防腐剂性质以获利。事实上，包括具有防腐剂性质的溶剂的凝胶不一定必须包括另外的防腐剂。在溶剂可能随着时间降解或氧化的情况下，利用系统溶剂的防腐剂性质的凝胶应当包括考虑降解和／或氧化的过剩的量使得在所需一段时间之后凝胶保留具有有效的防腐剂性质的未经降解或未氧化的溶剂的量。例如，已知苯甲醇可以氧化成苯甲醛，所述苯甲醛不具有防腐剂性质。在本文所述的使用苯甲醇作为MTZ溶剂和作为防腐剂的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的实施方案中，相当数量的苯甲醇应当包括在凝胶中，除了溶解MTZ之外，获得用于凝胶的预期贮存期限期间的防腐剂效果。在溶剂系统中使用的部分用作防腐剂的苯甲醇或其它溶剂的过剩量可以基于降解和／或氧化性质以及特定溶剂在所需储存条件下的动力学来确定。

包括具有防腐剂性质的溶剂的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的实施方案还可以包括一种或多种另外的防腐剂和／或设计保护溶剂免于降解和／或氧化的防腐剂。例如，在苯甲醇的情况下，本文所述的高剂量凝胶可以包括一种或多种另外的防腐剂，所述防腐剂具有抗氧化性质，部分保护苯甲醇免于氧化。在具体的实施方案中，包含苯甲醇或其它氧化溶剂的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶包括一种或多种对羟苯甲酸酯作为另外的防腐剂。在一些具体实施方案中，高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶包含约0.1重量％的总对羟苯甲酸酯，以及在一些具体实施方案中，约0.02重量％对羟苯甲酸甲酯和约0.08重量％对羟苯甲酸丙酯。

高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶还包括可以呈纯化水形式或呈水缓冲液形式的水。通常，包括在凝胶中的水量将小于约70重量％，更通常小于约60重量％，以及在一些具体实施方案中在约45重量％至约55重量％的范围内。

如上所述，用本文所述的新型溶剂系统制备的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的若干实施方案递送出人意料的局部浓度高的MTZ，并且在Franz细胞中用人类尸体皮肤(以及还有硅酮膜)进行的体外皮肤渗透实验中显著高于常规的0.75重量％的MTZ凝胶的局部浓度的MTZ。事实上，如更详细地描述于实施例部分，几乎每个测试的至角质层的高剂量水基MTZ凝胶，当被归一化为浓度时，比常规的0.75重量％的MTZ凝胶局部递送高约25-至约55-倍MTZ。尽管通过本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶递送较高局部MTZ浓度，但是与常规的0.75重量％的MTZ凝胶相比在Franz细胞中用人类尸体皮肤进行的体外皮肤渗透实验中于接受液中观察到显著较少的MTZ。如更详细地描述于详述部分，在该实验中几乎每个于接受液中测试的高剂量MTZ凝胶，当被归一化为浓度时，比常规的0.75重量％的MTZ凝胶获得低约1-至约20-倍MTZ。

尽管并非旨在受任何理论的束缚，据信这些性质可能对于治疗施加有意义和／或重要的，因为它们允许递送可能增加功效的局部浓度高的MTZ，同时在某些局部施加中减少全身性暴露，从而减少不良的副作用。因此，在一些实施方案中，选择高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的各种组分以便获得高剂量凝胶，其中用人类尸体皮肤或硅酮膜进行的体外Franz细胞皮肤渗透研究中测量的MTZ的表面水平，当被归一化为浓度，比用常规的0.75重量％的MTZ凝胶(诸如METROGEL

测量的水平高至少约25倍以及在一些具体实施方案中高约55倍。在一些实施方案中，选择高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的各种组分以便获得高剂量凝胶，其中用人类尸体皮肤或硅酮膜进行的体外Franz细胞皮肤渗透研究中于接受液中测量的MTZ水平，当被归一化为浓度时，比用常规的0.75重量％的MTZ凝胶(诸如METROGEL测量的水平低至少约1倍以及在一些具体实施方案中低约20倍。可用于比较研究的具体的体外Franz细胞实验描述于实施例6。

本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶可以用于任何目的，其中用MTZ的局部治疗是可取的。由于其粘膜粘附度，它们可特别地用于治疗患有和／或被诊断具有BV的妇女。

因此，在另一方面，本公开提供使用本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶治疗患有和／或被诊断具有BV的妇女的方法。所述方法一般涉及向患有和／或被诊断具有BV的妇女阴道内施加如本文所述的足以提供治疗益处的相当数量的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶。诊断的临床标准以及建立治疗益处的标准更详细地描述于详述部分。在一些具体实施方案中，在单次施加中施加的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的量含有约60mg至约100mg MTZ。在其它具体实施方案中，在单次施加中施加的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的量含有约60mg至约90mg MTZ，在又其它具体实施方案中，约60mg至约80mg MTZ，以及在又其它具体实施方案中，约60mg至约70mgMTZ。在又其它具体实施方案中，在单次施加中施加的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的量含有约65mg MTZ。

施加的频率和持续时间可变化且可能取决于所需的结果。一般来讲，将凝胶每天施加一次持续一天、两天、三天、四天或五天。已经发现用含有约65mg MTZ的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的单次施加来实现有意义的治疗益处。因此，在一些实施方案中，高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶以单次施加施加。也已经发现每天施加一次持续五天施加含有约65mg MTZ的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶比用FDA-批准的0.75重量％的MTZ凝胶治疗的类似的过程获得较低的BV复发的发病率，和几乎不存在治疗后外阴道念珠菌病的发病率。因此，在一些实施方案中，将高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶每天施加一次持续五天。

为了使用，可以将高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶包装成对于所需的施加方式便利的任何形式。在可用于阴道内施加的具体的实施方案中，可以将高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶包装成单位剂型，以预装、单剂量注射器型涂药器作为具体实例。

当用于治疗患有和／或被诊断具有BV的妇女时，本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶提供许多令人惊讶的优点，包括，例如：(1)在单次施加之后BV的有效治疗，不像用0.75重量％的MTZ凝胶的现有治疗，例如，METROGEL

其需要每天施加一次或两次持续5天以实现治疗效果；(2)与每天施加一次持续5天之后的METROGEL

相比增加的功效，如由增加治愈率、减少症状的分辨时间、增加症状的复发时间和／或降低外阴道念珠菌病的发病率中的任一者确定。

应当理解以上概述并不预期描述本文公开的各种发明的每个实施方案或每个实施方式。详述和实施例部分进一步例示示例性实施方案。本文所述的各种实施方案预期组合公开，如同每个具体的组合被明确地公开。实施例仅为代表性的且不应解释为排他性的或限制本文公开的各种发明的范围。

5.附图简述

图1提供示出示例性高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶MG32PB和MG33PB至猪胃粘膜的粘膜粘附性质的图表。数据示出胃粘膜中留下的MTZ的百分比作为时间函数。对于本实验，对于第一个5分钟，每15秒采集一次数据。

图2提供示出示例性高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶MG32PB和MG33PB至猪胃粘膜的粘膜粘附性质的图表。数据示出胃粘膜中留下的MTZ的百分比作为时间函数。对于本实验，对于第一个15分钟，每分钟采集一次数据。

图3A-3B提供示出用人类尸体皮肤进行的体外Franz细胞皮肤渗透实验中从来自各种示例性高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶各种皮肤层回收的¹⁴C-标记的MTZ平均量(μg；±SEM)的图表。

图4A-4B分别提供示出图3A和3B的回收数据的图表，表示为施加的总¹⁴C-标记的MTZ平均百分比(±SEM)。

图5A-5B分别提供示出图3A和图3B的不同视图的回收数据的图表。

图6A-6B分别提供示出图4A和图4B的不同视图的回收数据的图表。

图7提供示出用猪阴道组织进行的在体外Franz细胞实验中施加示例性高剂量MTZ粘膜粘附水基凝胶和对照凝胶24小时之后从表面和阴道组织内回收的MTZ的平均量(μg)的图表。数据为平均值±SEM(n=5)。

图8提供示出在图7的Franz细胞实验中渗透通过猪阴道组织(μg／cm²阴道组织)的MTZ的平均量的图表。数据为平均值±SEM(n=5)。

图9提供比较用不同的示例性高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶(对于活性凝胶n=3；对于安慰剂凝胶和对照n=2)处理24小时之后用阴道加德纳菌感染的表皮膜释放的ATP的图表。

图10提供比较在不同的给药时间4、8和24小时用示例性高剂量MTZ凝胶MG33PB处理之后从阴道加德纳菌感染的表皮膜样品释放的ATP的图表(对于MG33PB n=3；对于安慰剂凝胶和对照n=2)。

图11提供比较用不同的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶处理2小时之后从阴道加德纳菌感染的表皮膜样品释放的ATP的图表(对于活性凝胶和对照n=6；对于安慰剂凝胶n=3)。

图12提供示出示例性高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶MG33PB和含有不同量的苯甲醇的各种安慰剂形式的阴道加德纳菌生长的抑菌圈的图表。

6.详述

本文公开的各种发明的更完整的理解及其许多伴随的优点由以下详述提供。

6.1定义

本文使用的在整个说明书和所附权利要求中，以下术语和表达预期具有以下意义：

不定冠词“一个(a)”和“一种(an)”和定冠词“所述(the)”旨在包括单数和复数两者，除非其所使用的上下文清楚地表明。

“至少一种”和“一种或多种”互换使用以意指所述冠词可以包括一种或多于一种的所列元素。

除非另外指出，否则应理解在说明书和权利要求中使用的表达数量、比率的所有数值和成分的数值性质、反应条件等预期在所有情况下能够被术语“约”修饰。

6.2具体的示例性实施方案的详述

如概述中所指出，本公开提供(除了其它以外)高剂量粘膜粘附甲硝唑(“MTZ”)水基凝胶，所述凝胶可用于MTZ的局部用递送以治疗(除了其它以外)各种微生物感染，且在具体的实施方案中用于阴道内施加作为对于治疗患有或被诊断具有细菌性阴道病(“BV”)的妇女的治疗方法。高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶一般包含MTZ和一种或多种胶凝聚合物，在具体的实施方案中为一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物。

MTZ，也称为2-(2-甲基-5-硝基-1H-咪唑-1-基)乙醇，为熟知的抗菌剂，对以下菌种具有活性：厌氧的革兰氏阴性杆菌包括梭菌属(Fusobacterium)菌种和拟杆菌属(Bacteroides)菌种(如，脆弱拟杆菌(B.fragilis)、狄氏拟杆菌(B.distasonis)、卵形拟杆菌(B.ovatus)、多形拟杆菌(B.thetaioaomicron)和畸形拟杆菌(B.vulgates))；厌氧的革兰式阳性杆菌包括梭菌属(Clostridium)菌种和真细菌(Eubacterium)的敏感菌株；和厌氧的革兰式阳性球菌包括消化链球菌属(Peptostreptococcus)菌种。

MTZ可以包括在本文所述呈游离碱形式或与药学上可接受的酸形成的盐的高剂量凝胶中。适用于形成药学上可接受的盐的无机酸包括，例如但不限于氢卤酸(如，盐酸、氢溴酸、氢碘酸等)、硫酸、硝酸、磷酸等。适用于形成药学上可接受的盐的有机酸包括，例如但不限于，乙酸、三氟乙酸、丙酸、己酸、环戊基丙酸、乙醇酸、草酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、棕榈酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、烷基磺酸(如，甲烷磺酸、乙烷磺酸、1，2-乙烷-二磺酸、2-羟基乙烷磺酸等)、芳基磺酸(如，苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸等)、4-甲基双环[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、3-苯丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟基萘酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等。

MTZ可商购获得或可以通过熟知的方法合成。

本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶一般包含约1重量％至约2重量％的量的MTZ。在具体的实施方案中，本文所述的凝胶包含约1.0％、约1.1％、约1.2％、约1.3％、约1.4％、约1.5％、约1.6％、约1.7％、约1.8％、约1.9％或约2.0重量％的MTZ。

剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶还包含一种或多种胶凝聚合物，且在具体的实施方案中包含赋予凝胶其粘膜粘附和凝胶样性质的一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物。适用于本文所述的粘膜粘附水基凝胶在水基溶液中形成的粘膜粘附凝胶的多种聚合物在本领域为已知的，且包括例如但不限于多糖凝胶(包括，例如，粘液、树胶诸如黄原胶和黄著胶，和葡聚糖)、纤维素和修饰的纤维素(包括，例如，烷基纤维素、羟烷基纤维素、羧基纤维素和羧基纤维素钠)、泊洛沙姆(poloxomers)(聚氧乙烯和聚氧丙烯的共聚物，也称为卡波姆(丙烯酸的交联聚合物)、聚卡波非(与二乙烯基二醇交联的聚丙烯酸的聚合物)、维格姆(veegum)(硅酸镁铝)、聚乙烯醇(PVA)、明胶、藻酸钠和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。示例性合适的粘液可见于，例如，Malviya等人，2011，“Applications of Mucilages in Drug Delivery-AReview，”Advan Biol Res5(1)：1-7，以及其中所引用的参考文献，所述专利的公开内容通过引用并入本文。

在一些具体实施方案中，胶凝聚合物为丙烯酸的交联的聚合物，诸如例如卡波姆或聚卡波非和／或纤维素聚合物。合适的纤维素聚合物包括但不限于羧甲基纤维素(CMC)、甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素(NEC或HHX)、羟丙基纤维素(HPC)和羟丙基甲基纤维素(HPMC)。合适的卡波姆包括但不限于按商品名由Lubrizol Advanced Materials，Cleveland，Ohio售出的各种聚合物，包括例如，均聚物(与烯丙基蔗糖或烯丙基季戊四醇交联的丙烯酸的聚合物)诸如

71G NF、

971PNF、

974P NF、980NF和

981NF；

共聚合物(与丙烯基季戊四醇交联的丙烯酸和C10-C30烷基丙烯酸酯的聚合物)诸如PEMULEN^TM TR-1NF和PEMULEN^TM TR-2NF；

互聚合物(含有聚乙二醇和长链烷基酸酯的嵌段共聚物的卡波姆均聚物或共聚合物)诸如

ETD2020NF和

Ultrez10NF；“传统的”卡波姆诸如卡波姆934(

934NF)、卡波姆934P(

934P NF)、卡波姆940(

940NF)、卡波姆941(

941NF)和卡波姆1342(

1342P NF)；和聚卡波非(

AA-1USP)。

在本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶中可以单独或组合使用这些和／或其它粘膜粘附胶凝聚合物中的任一者。

通常以量使用一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物使得25℃下使用受控的剪切率扫描法，Bohlin CVO100流变仪和在表11中指出的流变仪设置(实施例5，下文)测量的所得高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶具有约200,000-400,000mPa的粘度，以及在一些具体实施方案中，在25℃下具有约250,000-350,000mPa的粘度。取决于具体的胶凝聚合物和使用的凝胶条件，粘度在该范围内的水基凝胶一般通过将总量在约0.5重量％至约5重量％范围内的胶凝聚合物包括在凝胶中来实现。在一些具体实施方案中，本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶将包括约1重量％至约3重量％的总胶凝聚合物，以及在一些具体实施方案中约2重量％的总胶凝聚合物。

被设计用于阴道内施加的凝胶应当理想地表现出粘膜粘附度以防止施加时凝胶的泄露。利用粘度在如上论述范围内的纤维素和／或丙烯酸粘膜粘附胶凝聚合物的凝胶应当具有合适的粘膜粘附度。不同的胶凝聚合物表现出不同的粘膜粘附度。可以合适地使用获得高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的胶凝聚合物，所述凝胶的粘膜粘附度在示例性凝胶MG33PB的粘膜粘附度的约±10％内(描述于实施例2和表5)。在具体的示例性实施方案中，粘膜粘附聚合物选自羟烷基纤维素、卡波姆、聚卡波非及其混合物。在另一具体的示例性实施方案中，粘膜粘附聚合物为聚卡波非，诸如，例如，聚卡波非按商品名

AA-1聚卡波非由Lubrizol，Inc售出。

利用卡波姆934、羟乙基纤维素或聚卡波非作为粘膜粘附胶凝聚合物具有合适的粘度、粘膜粘附和其它可取性质的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶提供于实施例2。

如概述指出，当试图在水基制剂(诸如水基凝胶)中配制MTZ时，MTZ的溶解度存在问题。本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的具体的实施方案利用新型溶剂系统，已经发现所述新型溶剂系统获得含有高达2重量％或更高浓度的MTZ的均匀的凝胶，当储存在约25℃至约40℃的温度下时，所述凝胶在较长的一段时间保持稳定，例如至少约6个月。令人惊讶地，可以在不含通常用于增强MTZ在水溶液(诸如环糊精、β环糊精、烟酸、烟酰胺和／或表面活性剂)中的溶解度的试剂的辅助下制备此类高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶。

本文使用的“稳定的”意指凝胶表现出以下性质：(1)当储存在约25℃下持续至少6周时，至少约95％的MTZ纯度；(2)当储存在约25℃下的温度下持续至少6周时，在放大倍数为40x的显微视觉观察下晶体和／或颗粒的形成与基线值相比无可观增加(如，不超过约2倍至3倍增加)，以及(3)当储存在约25℃下的温度下持续约6周时，与基线值或储存在约2-8℃范围内的温度下的对照样品相比，粘度的改变不超过在25℃下测量的约±50％。此外，稳定的凝胶表现出以下另外的性质为可取的，但不是必须的：(4)当储存在约25℃下的温度下持续6周时，与基线值或储存在约2-8℃范围内的温度下的对照样品相比，pH的改变小于约±0.3pH单位；(5)当储存在约25℃下的温度下持续至少约6周时，与基线值或储存在约2-8℃范围内的温度下的对照样品相比，防腐剂功效的改变不超过约±20％。适用于测量高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的稳定性的测定提供于实施例4和5。通常，选择具体的组分和新型溶剂系统的量以便获得如本文所定义的稳定的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶。通过实施例部分公开的各种示例性高剂量凝胶提供用于选择可用于制备具有具体量的MTZ的稳定的高剂量MTZ水基凝胶的溶剂系统的指导。

在一些具体的实施方案中，当储存在约40℃的温度下持续约6周时，选择新型溶剂系统的组分和量以获得具有如上论述的MTZ纯度、均匀性和粘度性质，以及任选地如上论述的pH和防腐剂功效性质的稳定的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶。在其它具体的实施方案中，当储存在约25-40℃范围内，以及在具体的实施方案中，在约25℃或约40℃的温度下持续约6个月或甚至，例如，持续约18个月时，选择新型溶剂系统的组分和量以获得具有如上论述的MTZ纯度、均匀性和粘度性质，以及任选地如上论述的pH和防腐剂功效性质的稳定的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶。在再其它具体的实施方案中，当储存在约25-40℃范围内，以及在具体的实施方案中，在约25℃或约40℃的温度下持续约6个月或甚至，例如，持续约18个月时，选择新型溶剂系统的组分和量以获得具有如上论述的MTZ纯度、均匀性和粘度性质，以及如上论述的pH以及任选地防腐剂功效性质的稳定的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶。

各种新型溶剂系统描述于(如上)概述部分。在一些具体实施方案中，新型溶剂系统为包含一种或多种低级芳族醇、一种或多种低级脂肪族二醇和／或MW在约200至约600范围内的一种或多种聚氧化烯(“低级聚氧化烯”)的三元系统。

本文使用的“低级醇”包括具有1至15个碳原子的饱和的和不饱和的非芳族和芳族醇且可以任选地包括一种或多种杂原子，例如，一种或多种替换碳原子的氧原子。低级非芳族醇可以包括直链、支链或环状伯、仲或叔低级脂肪族醇和低级杂脂肪族醇。低级脂肪族醇的实例包括但不限于甲醇、乙醇、丙-1-醇、丙-2-醇、丁-1-醇、丁-2-醇、2-甲基丙-1-醇、2-甲基丙-2-醇、戊-1-醇、戊-2-醇、戊-3-醇、3-甲基丁-1-醇、己-1-醇、己-2-醇、己-3-醇和环己醇。低级杂脂肪族醇的实例包括但不限于亚烷基二醇单烷基醚诸如，例如，乙二醇单烷基醚、丙二醇单烷基醚和四甘醇。在一些具体实施方案中，低级非芳族醇诸如低级脂肪族和低级杂脂肪族醇含有包括任何杂原子的1至8个非氢原子。

低级芳族醇包括具有芳族特征的低级醇，这可以由在非芳族醇上的芳族(如，苯基、萘基等)侧基贡献，诸如脂肪族醇或杂脂肪族醇。因此，醇基团可以为酚、伯、仲或叔。低级芳族醇的实例包括但不限于苯酚、苯甲醇、2-甲基苯甲醇和苯氧乙醇。

本文使用的“低级脂肪族二醇”包括含有二至十个碳原子的饱和的或不饱和的、直链、支链或环状脂肪族二醇。所述醇基团可以为彼此独立地伯醇、仲醇或叔醇。在一些具体实施方案中，低级脂肪族二醇为饱和的或不饱和的直链或支链二醇，本文中被称为“低级亚烷基二醇”(也称为“低级二醇”)。在一些具体实施方案中，低级亚烷基二醇为饱和的直链或支链二醇，在本文中被称为“低级烷基二醇”。在一些具体实施方案中，低级烷基二醇为直链二醇，在本文中被称为“低级正烷基二醇。本文所述的可用于溶剂系统和凝胶的低级脂肪族二醇的具体的实例包括但不限于乙烷-1，2-二醇(乙二醇)、丙烷-1，2-二醇(丙二醇)、丙烷-1，3-二醇、丁烷-1，2-二醇、丁烷-1，3-二醇、丁烷-2,3-二醇、丁烷-1，4-二醇、戊烷-1,5-二醇、戊烷-1，2-二醇、2-甲基-2,4-戊烷二醇等。

本文使用的“低级聚氧化烯”包括由低级脂肪族二醇形成且分子量在约200至约600范围内的聚合物。本文所述的可用于溶剂系统和凝胶的低级聚氧化烯的具体的实例包括但不限于聚乙二醇(例如，PEG200、PEG400和PEG600)、聚丙二醇(例如PPG-9)和二丙二醇。

新型三元溶剂系统一般包含约3.5重量％至约5重量％的总低级芳族醇，和约95重量％至约96.5重量％的总低级脂肪族二醇和聚氧化烯的混合物，其中总低级脂肪族二醇与总聚氧化烯的重量比率在约1：1至约1：2的范围内，以及在一些具体实施方案中在约1：1.67。

溶剂系统可以包括另外的试剂和溶剂，诸如，例如，增强MTZ在水溶液中的溶解度的另外的试剂或溶剂，诸如，例如，环糊精、β-环糊精、烟酸和／或烟酰胺。然而，已经发现均匀的且具有良好的贮存稳定性性质的高剂量MTZ水基凝胶可以使用不包括此类另外的溶解剂的溶剂系统来制备，且在具体的实施方案中仅包括低级芳族醇、低级脂肪族二醇和低级聚氧化烯。因此，在一些具体实施方案中，溶剂系统和所得凝胶基本上不含增强MTZ在水溶液中的溶解度的试剂，诸如环糊精、β-环糊精、烟酸和／或烟酰胺。在其它具体实施方案中，所述溶剂系统为仅由一种或多种低级芳族醇、一种或多种低级脂肪族二醇和一种或多种低级聚氧化烯组成的三元系统。

溶剂系统一般将表示约30重量％至约60重量％的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶，在某些实施方案中，约40重量％至约50重量％的凝胶，以及在一些具体实施方案中，约40重量％至约45重量％的凝胶，尽管所述凝胶可以包括较高或较低量的总溶剂。

特别有用的三元溶剂系统包含作为一种或多种低级芳族醇的苯甲醇、作为一种或多种低级脂肪族二醇的丙烷-1，2-二醇(丙二醇)和作为一种或多种低级聚氧化烯的MW为400的聚乙二醇(PEG400)。

在一些具体实施方案中，相对于所得高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶，用于将MTZ溶解于本文所述的高剂量粘膜粘附水基凝胶的溶剂系统包含：(a)聚氧化烯诸如聚乙二醇，如，PEG400，浓度为约10重量％至约50重量％，例如约20重量％至约40重量％或约20重量％至约30重量％，且在具体的实施方案中约25重量％；(b)低级芳族醇诸如苯氧乙醇或苯甲醇，在具体的实施方案中，约1.3重量％至约2.5重量％或约1.5重量％-2.0重量％且在具体的实施方案中约2.0重量％的苯甲醇；和／或(c)低级脂肪族二醇，诸如丙烷-1，2-二醇，浓度大于约3重量％至约20重量％，例如约15重量％-20重量％，且在具体的实施方案中约15重量％。

在又其它具体的实施方案中，溶剂系统包含：(a)PEG400；(b)PEG400和低级芳族醇，诸如苯甲醇；(c)PEG400，低级芳族醇，诸如苯甲醇和丙烷-1，2-二醇；(d)低级芳族醇，诸如苯甲醇；和／或(e)丙烷-1，2-二醇。

在又其它具体的实施方案中，相对于所得高剂量MTZ粘膜粘附水基凝胶，溶剂系统包含：(a)约25重量％的PEG400；(b)约25重量％的PEG400和约2重量％的苯甲醇；或(c)约25重量％的PEG400，约2重量％的苯甲醇和约15重量％的丙烷-1，2-二醇。

对于被设计用于阴道内施加的凝胶，优选使用在阴道区域中的靶位置处不会引起刺激的苯甲醇的浓度。因此，在一些具体实施方案中，其中所述溶剂系统包括苯甲醇，包括在凝胶中的苯甲醇的量的范围为约1.3％至约2.5重量％，例如约1.5重量％至约2重量％，且在具体的实施方案中约2重量％。

在又其它具体的实施方案中，本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶包含浓度为至少约3％至高达约20重量％，例如约15重量％至约20重量％，且在具体的实施方案中约15重量％的丙烷-1，2-二醇。在再其它具体的实施方案中，凝胶包含约1.3重量％的MTZ和约25重量％的PEG400。在再其它具体的实施方案中，它们包含约1.3重量％的MTZ、约25重量％的PEG400和约2重量％的苯甲醇。在再其它具体的实施方案中，它们包含约1.3重量％的MTZ、约25重量％的PEG400、约2重量％的苯甲醇和约15重量％的丙二醇。

在又其它具体的实施方案中，相对于凝胶，本文所述的可用于制备高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的溶剂系统包含以下中的任一者(a)浓度为约10重量％至约50重量％，例如约20重量％至约40重量％或约20重量％至约30重量％且在具体的实施方案中约25重量％的PEG400；(b)约1.3重量％至约2.5重量％，例如约1.5重量％至约2重量％且在具体的实施方案中约2重量％的苯甲醇；(c)浓度为至少约3重量％至高达约20重量％，例如约15重量％至约20重量％且在具体的实施方案中约15重量％的丙烷-1，2-二醇；(d)约25重量％的PEG400；(e)约25重量％的PEG400和约2重量％的苯甲醇；以及(f)约25重量％的PEG400、约2重量％的苯甲醇和约15重量％的丙二醇。

本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的pH一般应当与预期施加的区域的pH相匹配，例如，当预期用于阴道内施加时，pH为健康阴道的pH。因此，对于预期用于阴道内施加的凝胶，pH一般应当在约pH3至约pH5，例如pH约pH4的范围内。可以在酸、碱缓冲液和其它pH-调节剂的辅助下调节和／或维持pH，如本领域熟知的和在概述部分所讨论的。

本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶还可以包括其它另外的组分，诸如，例如，如本领域熟知的一种或多种防腐剂。当使用时，防腐剂一般应当包含不超过约1重量％或2重量％的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶，且通常将包含约0.25重量％至约1.0重量％的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶。防腐剂的选择并不是关键的。适用于药物制剂的许多防腐剂对技术人员为熟知的。可以单独使用这些防腐剂中的任一者和在一些具体实施方案中具有抗菌性质的那些或与本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶组合使用。在一些具体实施方案中，一种或多种防腐剂为4-羟基苯甲酸的酯，也称为对羟苯甲酸酯。合适的对羟苯甲酸酯包括4-羟基苯甲酸的低级烷基酯，诸如，例如，4-羟基苯甲酸甲酯(对羟苯甲酸甲酯)、4-羟基苯甲酸乙酯(对羟苯甲酸乙酯)和4-羟基-苯甲酸丙酯(对羟苯甲酸丙酯)。

熟练的技术人员将了解本文所述的溶剂用于将MTZ溶于高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的溶剂还可以具有防腐剂性质。例如，苯甲醇具有熟知的防腐剂性质。当在新型溶剂系统中用作溶剂时，可以使用防腐剂性质以获利。事实上，包括具有防腐剂性质的溶剂的凝胶不需要包括另外的防腐剂。在溶剂可能随着时间的推移降解和／或氧化的情况下，利用包括在溶剂系统中的防腐剂性质的凝胶应当包括考虑降解和／或氧化的过剩量使得凝胶保留相当数量的未经降解和／或未氧化的溶剂，除了有效的MTZ-溶解性质之外，所述溶剂在所需的一段时间之后具有有效的防腐剂性质。例如，已知苯甲醇可以被氧化成不具有防腐剂性质的苯甲醛。在本文所述的使用苯甲醇作为MTZ溶剂和作为防腐剂的高剂量MTZ凝胶的实施方案中，应当将相当数量的苯甲醇包括在凝胶中，苯甲醇不但溶解MTZ，获得用于凝胶的预期贮存期限期间的防腐剂效果。在溶剂系统中使用的部分用作防腐剂的苯甲醇或其它溶剂的过剩量可以基于降解和／或氧化性质以及特定溶剂在所需储存条件下的动力学来确定。

包括具有防腐剂性质的溶剂的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的实施方案还可以包括一种或多种另外的防腐剂和／或设计保护溶剂免于降解和／或氧化的防腐剂。例如，在苯甲醇的情况下，本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶可以包括一种或多种具有抗氧化性质的另外的防腐剂，部分来保护苯甲醇免于氧化。在具体的实施方案中，包含苯甲醇的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶包括一种或多种对羟苯甲酸酯作为另外的防腐剂。在一些具体实施方案中，高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶包含约0.1重量％的总对羟苯甲酸酯，以及在一些具体实施方案中约0.02重量％的对羟苯甲酸甲酯和约0.08重量％的对羟苯甲酸丙酯。

具体的示例性高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶包含：

(a)至少1.3重量％的MTZ；约1.2重量％至约2重量％的MTZ；约3重量％至约1.5重量％的MTZ；或约1.3重量％的MTZ以及

(b)一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物。

另一具体的示例性高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶包含：

(a)约1.2重量％至约2重量％的MTZ，例如约1.3重量％至约1.5重量％的MTZ，以及在具体的实施方案中，约1.3重量％的MTZ；以及

(b)一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物以及

(i)约25重量％的PEG400；和／或

(ii)约2重量％的苯甲醇；和／或

(iii)约15重量％的丙烷-1，2-二醇。

另一具体的示例性高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶包含：

(a)约1.3重量％的MTZ和25重量％的PEG400；

(b)约1.3重量％的MTZ、约25重量％的PEG400和约2重量％的苯甲醇；或

(c)约1.3重量％的MTZ、约25重量％的PEG400、约2重量％的苯甲醇和约15重量％的丙烷-1，2-二醇。

6.3.制备凝胶的方法

本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶一般可以通过以下制备：将凝胶的水溶性组分溶于水或缓冲液中以获得水溶液，将MTZ溶剂系统的组分混合并将所需量的MTZ溶于MTZ溶剂系统以获得MTZ溶液，将所需量的水溶液和MTZ溶液一起混合，并将所需量的凝胶剂加入至混合物中。取决于使用的胶凝聚合物，在加入胶凝聚合物然后将所得凝胶的pH用酸或碱调节至所需的指定范围之前，将MTZ溶液的pH用酸和／或碱调节至指定范围为可取的。用于制备高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的具体的方法提供于实施例2。

6.4.用途

在任何情况下可以使用本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶以局部施加MTZ，其中此类使用将为有益的。在以下进一步描述的具体的实施方案中，可以方便地阴道内使用所述凝胶以治疗患有或被诊断具有BV的妇女。

本文使用的如果经历一种或多种与BV相关的公认的症状、病患或显示，据说该妇女“患有”或被诊断具有BV。具有BV的个体通常表现出(除了其它以外)使人不快的“鱼腥味”灰白色、薄且均匀的阴道分泌物而无炎症应答。个体还表现出乳酸杆菌(特别是形成产过氧化氢)的流行和浓度的下降且伴有阴道加德那菌、动弯杆菌属某些种、厌氧的革兰式阳性杆菌(拟杆菌属、普氏菌属和紫单胞菌属(Porphyromonas))、消化链球菌属某些种(Peptostreptococcus spp)和支原体人型(Mycoplasma hominis.)的增加。倾向因素为非白人种族、怀孕前、IUD的使用、性活动、新的性伴侣和近来抗生素的使用。BV还与并发的滴虫病相关。

对于建立BV的临床诊断的标准提供于(除了其它文献之外)草案FDA指导，标题为“Guidance for Industry：BacterialVaginosis-Developing Antimicrobial Drugs for Treatment，”起草日期为1998年7月，其通过引用整体并入本文(下文“FDA指导”)。按以下FDA指导，BV的临床诊断包括以下观察：

1.灰白色(乳白色或灰色)、薄、均匀的分泌物，具有极微的或不存在瘙痒症以及外阴和阴道的炎症；

2.在盐水“湿涂片”的显微镜检查下在总上皮细胞中存在≥20％的“线索细胞”；

3.阴道分泌物pH>4.5；且

4.加入一滴10％KOH，阴道分泌物散发出鱼腥味(即，阳性“嗅测试”)。

这些观察通常被称为“Amsel标准”以及呈现所有四个标准的妇女在本文中被称为“Amsel阳性”。

经历被认为为BV的阴道病的妇女通常也具有≥4的革兰氏染色涂片纽金特分数。纽金特分数基于以下三种细菌形态型分数的加权和，所述形态型分数由在放大倍数为1000x的油浸下由涂片检查计算：

·乳杆菌属：大的革兰式阳性杆菌

·加德纳菌属／拟杆菌属某些种：小的革兰氏可变球杆菌(coccobacilli)／小的革兰氏阴性杆菌

·动弯杆菌属某些种：细的、弯曲的、革兰氏可变杆菌

根据纽金特标准对于BV的标准为≥7的总分数；4-6的分数被认为是中间的以及0-3的分数被认为是正常的。≥3的分数被FDA认为是不正常的。

形态型得分为每一油浸领域可见的平均数(应当调查最少10-20个领域)。然后对每个形态型给予如下的数值分数：

0=无可见的形态型；1+=<1形态型／领域；2+=1至4形态型／领域；3+=5至30形态型／领域；以及4+=>30形态型／领域。总纽金特分数通过将个体形态型的分数进行求和来计算。关于纽金特得分系统的更多信息参见Nugent等人，1991，“Reliability of DiagnosingBacterial Vaginosis is improved by a Standardized Method of Gram StainInterpretation，”J Clin Micrbiol29(2)：297-301.纽金特分数>4的妇女在本文中被称为“纽金特阳性”。

在一些实施方案中，显示具有至少3个以上Amsel标准的个体被认为患有和／或被诊断具有BV。在一些实施方案中，为纽金特阳性的个体被认为患有和／或被诊断具有BV。在具体的实施方案中，患有和／或被诊断具有BV的个体为Amsel阳性。在又其它具体的实施方案中，患有和／或被诊断具有BV的个体为Amsel阳性和纽金特阳性。

优选地，患有和／或被诊断具有BV的个体将不具有其它的阴道感染，包括但不限于衣原体属(Chlamydia)、毛滴虫属(trichomonas)、淋病(gonorrhea)和念珠菌属(Candida)。优选地，患有和／或被诊断具有BV的个体不能在治疗其它的阴道感染，包括但不限于衣原体属、毛滴虫属、淋病和念珠菌属。在一个实施方案中，患有和／或被诊断具有BV的个体正用氟康唑治疗。

方法一般涉及向患有和／或被诊断具有BV的妇女阴道内施加如本文所述的用于许多用途的足以提供治疗益处的相当数量的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶。本文使用的“治疗益处”为当一种或多种BV的症状和／或一种或多种BV的临床表现包括，例如，一种或多种Amsel标准或纽金特分数，得到缓解、消除、根除或改进时实现。治疗方案可以为受试者提供治疗益处而不会治愈潜在的BV病患。

本文使用的如果在治疗之后量级降低或移至接近认为的正常水平，那么BV的症状或表现得到缓解。例如，如果阴道分泌物回至正常，那么Amsel标准得到缓解；在湿涂片中的线索细胞的数目小于约20％的阴道上皮细胞，例如，小于约19％、18％、17％、16％、15％、10％、5％或甚至更小；阴道分泌物的pH治疗之前的约pH4.7至约pH5.3至治疗之后的约pH4.0至约pH4.5的范围，例如，pH4.3、pH4.2、pH4.1或pH4.0；和／或嗅测试未产生可观的胺或鱼腥味。如果症状使用熟知的检测方法(参见，如，提供于实施例部分的各种检测方法和公开于FDA指导中的那些)不再可检测，那么BV的症状被认为消除或根除。

本文使用的“治疗有效量”是指具有提供治疗益处的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的治疗方案。

在一些实施方案中，将相当数量的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶施加于足以在至少一个Amsel标准且优选地至少2个或3个且最优选地所有4个Amsel标准中和／或纽金特分数小于4的结果提供改进的许多施加。

在一些具体实施方案中，将相当数量的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶施加于足以获得临床治愈的许多施加。当所有四个Amsel标准按以下所述得到中和时，实现本文使用的“临床治愈”：

1.BV的最初分泌物特征已经回至正常的生理分泌物，所述正常的生理分泌物取决于月经周期在外观和一致性中有所不同；

2.盐水湿涂片对于线索细胞为阴性的；

3.阴道分泌物的pH为pH<4.7，通常使用测量pH4.0至pH6.0的pH试纸进行测量；

4.嗅测试对于任何胺(“鱼腥”)味为阴性的。

在一些具体实施方案中，将相当数量的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶施加于足以获得细菌学治愈的许多施加。当实现纽金特分数<4，例如，纽金特分数为1、2或3或在0-3的范围内时，实现本文使用的“细菌学治愈”。

在又其它具体的实施方案中，将相当数量的如本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶施加于足以获得治疗治愈的许多施加。当实现临床治愈和细菌学治愈两者时，实现本文使用的“治疗治愈”。

在又其它具体的实施方案中，将相当数量的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶施加于足以由医师确定无需另外的治疗的许多施加。在再另一具体的实施方案中，将相当数量的如本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶施加于足以实现如FDA指导中所定义的任何水平的治愈的许多施加。

在一些具体实施方案中，在单次施加中施加的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的量含有约60mg至约100mg MTZ。在一些具体实施方案中，在单次施加中施加的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的量含有约60mg至约80mg或约60mg至约70mg MTZ。在一些具体实施方案中，在单次施加中施加的高剂量MTZ水基凝胶的量含有约65mg MTZ。

施加的频率和持续时间可以变化且可能取决于所需的结果。一般来讲，每天施加凝胶一次持续一天、两天、三天、四天或五天。已经发现单次施加含有约65mg MTZ的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶可以实现有意义的治疗益处。因此，在一些实施方案中，将凝胶在单次施加(即，在不存在高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的其它施加中)中施加。还发现每天施加一次持续五天施加含有约65mg MTZ的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶比用FDA-批准的0.75重量％的甲硝唑凝胶治疗的类似的过程获得较低的BV复发的发病率，和几乎不存在治疗后外阴道念珠菌病的发病率。因此，在一些实施方案中，将凝胶每天施加一次持续五天。

本文使用的术语“复发”意指用本文所述的高剂量MTZ凝胶治疗之后如本文所定义的BV的至少一种症状的再现使得在治疗结论之后至少再次诊断受试者患有BV。

“复发的发病率的下降”意指用本文所述的高剂量MTZ凝胶得出治疗结论之后BV症状的复发时间与用常规的0.75重量％的MTZ凝胶，诸如METROGEL观察到的历史复发的时间相比有所增加。在具体的实施方案中，发生的发病率的下降意指在得出治疗结论之后持续至少约19天，例如20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天或更长未观察到BV的症状。在得出治疗结论之后，BV的无复发症状持续至少29天，例如，30天、35天、40天、45天、50天、3个月、6个月、9个月、一年或更长表明在得出治疗结论之后在受试者中不存在复发。

也可以相对于研究人群来定义“复发的发病率的下降”。例如，与用常规的0.75重量％的MTZ凝胶(诸如，例如，METROGEL治疗之后在20天或更长时报道的BV症状的妇女数目相比，用如本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶治疗之后在20天或更长时获得经历BV症状的统计学上显著较少的妇女数目的治疗方案被认为BV的复发的发病率的下降。

为了使用，可以将高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶包装成对于所需的施加方式方便的任何形式。在可用于阴道内施加的具体的实施方案中，可以将高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶包装成单位剂型，以预装、单剂量注射器型涂药器作为具体实例。

6.5.另外的非限制性方面

高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶组合物以及用其以治疗患有和／或被诊断具有BV的妇女方法的另外的非限制性方面提供于下文。

6.5.1.方法

M1.一种治疗患有和／或被诊断具有BV的受试者的方法，其包括向受试者阴道内施加包含一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物、约1重量％至约2重量％的甲硝唑(MTZ)和水的粘膜粘附水基凝胶，其中在单次施加中施加的粘膜粘附水基凝胶的量含有约60mg至约100mgMTZ。

M2.根据方面M1所述的方法，其中用人类尸体皮肤进行的体外Franz细胞皮肤渗透实验中于角质层和接受液中测量的来自粘膜粘附水基凝胶的MTZ水平，当被归一化为浓度时，分别比由METROGEL

测量的MTZ水平高至少约25-55倍和低至少约1-20倍。

M3.根据方面M1所述的方法，其中在25℃下使用控制剪切率方法，Bohlin CVO100流变仪和表11的流变仪设置测量的所述粘膜粘附水基凝胶具有约200,000mPa至约400,000mPa的粘度。

M4.根据方面M1所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶的粘膜粘附度在MG33PB的粘膜粘附度的约±10％内。

M5.根据方面M1所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶包含约30重量％至约60重量％的水。

M6.根据方面M1所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶基本上不含糊精、环糊精、烟酸和烟酰胺。

M7.根据方面M1所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶在25℃下至少6个月内保持稳定。

M8.根据方面M1-M7中任一项所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶包含约1重量％至约3重量％的总粘膜粘附胶凝聚合物和约40-45重量％的针对MTZ的溶剂系统。

M9.根据方面M8所述的方法，其中所述溶剂系统包含在25℃下具有至少约20mg／g的饱和MTZ溶解度的一种或多种溶剂。

M10.根据方面M9所述的方法，其中所述溶剂系统包含在25℃下具有至少约50mg／g的饱和MTZ溶解度的一种或多种溶剂以及在25℃下具有约20mg／g至约25mg／g范围内的饱和MTZ溶解度的一种或多种溶剂。

M11.根据方面M10所述的方法，其中所述溶剂系统包含一种或多种低级芳族醇以及任选地一种或多种低级脂肪族二醇和／或分子量为约200至约400范围内的的一种或多种聚氧化烯(“低级聚氧化烯”)。

M12.根据方面Mi1所述的方法，其中所述溶剂系统包含一种或多种低级芳族醇、一种或多种低级脂肪族二醇和／或一种或多种低级聚氧化烯。

M13.根据方面M12所述的方法，其中所述溶剂系统包含一种或多种低级芳族醇、一种或多种低级脂肪族二醇和一种或多种低级聚氧化烯。

M14.根据方面M11-M13中任一项所述的方法，其中所述一种或多种低级芳族醇选自苯甲醇、苯氧乙醇及其混合物。

M15.根据方面M11-M14中任一项所述的方法，其中所述一种或多种低级亚烷基选自乙烷-1，2-二醇(乙二醇)、丙烷-1，2-二醇(丙二醇)及其混合物。

M16.根据方面M11-M15中任一项所述的方法，其中所述一种或多种低级聚氧化烯选自聚氧乙烯(聚乙二醇)、聚氧丙烯(聚丙二醇)及其混合物。

M17.根据方面M11-M16中任一项所述的方法，其中一种或多种低级脂肪族二醇和一种或多种低级聚氧化烯以重量比率为约1：1至约1：2的总低级脂肪族二醇与总低级聚氧化烯包括在溶剂系统中。

M18.根据方面M13-M17中任一项所述的方法，其中所述溶剂系统包含约3.5重量％至约5重量％的的总低级芳族醇和约95重量％至约95.5重量％的一种或多种低级亚烷基二醇和一种或多种低级聚氧化烯的混合物。

M19.根据方面M18所述的方法，其中总低级亚烷基二醇与总低级聚氧化烯的重量比率为约1：1至约1：1.67。

M20.根据方面M8-M19中任一项所述的方法，其中所述溶剂系统由苯甲醇、丙烷-1，2-二醇和PEG400组成。

M21.根据方面M8-M20中任一项所述的方法，其中所述溶剂系统由约3.5重量％至约5重量％的苯甲醇和约95重量％至约96.5重量％的丙烷-1，2-二醇和PEG400的混合物组成，其中所述丙烷-1，2-二醇与PEG400的重量比率为约1：1至约1：1.67。

M22.根据方面M1-M21中任一项所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶进一步包含一种或多种防腐剂。

M23.根据方面M1-M22中任一项所述的方法，其中所述一种或多种防腐剂为4-羟基苯甲酸的酯(对羟苯甲酸酯)。

M24.根据方面M23所述的方法，其中所述一种或多种防腐剂选自4-羟基苯甲酸甲酯(对羟苯甲酸甲酯)、4-羟基苯甲酸丙酯(对羟苯甲酸丙酯)及其混合物。

M25.根据方面M1-M23任一项所述的方法，所述粘膜粘附水基凝胶的pH范围为约pH3.0至约pH5.0。

M26.根据方面M25所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶的pH为约pH4.0。

M27.根据方面M1-M26任一项所述的方法，其中所述一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物选自羟乙基纤维素、卡波姆、聚卡波非及其混合物。

M28.根据方面M1-M27任一项所述的方法，其中在单次施加中施加的粘膜粘附水基凝胶的量含有约65mg MTZ。

M29.根据方面M1-M28任一项所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶包括约1重量％至约1.5重量％的MTZ。

M30.根据方面M29所述的方法，其中其中将所述粘膜粘附水基凝胶每天施加一次持续一至五天。

M31.根据方面M29所述的方法，其中将所述粘膜粘附水基凝胶每天施加一次持续一天。

M32.根据方面M29所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶每天施加一次持续五天。

M33.根据方面M1-M28所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶包括约1.3重量％的MTZ。

M34.根据方面M33所述的方法，其中将所述粘膜粘附水基凝胶每天施加一次持续一至五天。

M35.根据方面M33所述的方法，其中将所述粘膜粘附水基凝胶每天施加一次持续一天。

M36.根据方面M33所述的方法，其中将所述粘膜粘附水基凝胶每天施加一次持续五天。

M37.根据方面M1-M7中任一项所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶包含约1.3重量％的MTZ、约2重量％的聚卡波非AA-1、约2重量％的苯甲醇、约15重量％的丙烷-1，2-二醇、约25重量％的PEG400、约0.02重量％的4-羟基苯甲酸甲酯和约0.08重量％的4-羟基苯甲酸丙酯。

M38.根据方面M37所述的方法，其中将所述粘膜粘附水基凝胶每天施加一次持续一至五天。

M39.根据方面M37所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶每天施加一次持续一天。

M40.根据方面M37所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶每天施加一次持续五天。

M41.根据方面M37-M40中任一项所述的方法，其中在单次施加中施加的粘膜粘附水基凝胶的量含有约65mg MTZ。

M42.一种治疗患有和／或被诊断具有BV的受试者的方法，其包括向受试者阴道内施加足以实现临床治愈的许多施加的水基凝胶的量，其中所述水基凝胶包含一种或多种粘膜粘附聚合物、约1.3重量％MTZ和水，并具有一种或多种选自以下组的特征或特性：

(a)用人类尸体皮肤进行的体外Franz细胞皮肤渗透实验中于角质层和接受液中测量的来自粘膜粘附水基凝胶的MTZ水平，当被归一化为浓度时，分别比由METROGEL

测量的MTZ水平高至少约25-55倍和低至少约1-20倍；

(b)在25℃下使用控制剪切率扫描方法，Bohlin CVO100流变仪和表11的流变仪设置测量，粘度范围约200,000mPa至约400,000mPa；

(c)粘膜粘附度在MG33PB的粘膜粘附度的约±10％内；

(d)包含约30重量％至约60重量％的水；

(e)基本上不含糊精、环糊精、烟酸和烟酰胺；

(f)在25℃下至少6个月保持稳定；且

(g)包括约1重量％至约3重量％的总粘膜粘附聚合物和约40-45重量％的针对MTZ的溶剂系统。

M43.根据方面M42所述的方法，其中施加水基凝胶的量以足以实现治疗治愈的许多施加。

M44.一种治疗患有和／或被诊断具有BV的妇女的方法，其包括向妇女阴道内施加单剂量的粘膜粘附MTZ水基凝胶，所述凝胶包含约1.3重量％的MTZ、约1重量％至约2重量％的一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物、约40重量％至约50重量％的针对MTZ的溶剂系统和约50重量％至约55重量％的水，其中所述溶剂系统包含约3重量％至约5重量％的在25℃下具有至少约50mg／g的饱和MTZ溶解度的一种或多种溶剂以及约95重量％至约97重量％的在25℃下共同地具有约20mg／g至约25mg／g范围内的饱和MTZ溶解度的一种或多种溶剂，其中施加的粘膜粘附MTZ水基凝胶的量含有约60mg至约100mg MTZ。

M45.根据方面M44所述的方法，其中施加的粘膜粘附MTZ水基凝胶的量含有约65mg MTZ。

M46.根据方面M43-M45中任一项所述的方法，其中在25℃下具有至少约50mg／g的饱和MTZ溶解度的一种或多种溶剂为苯甲醇。

M47.根据方面M43-M46中任一项所述的方法，其中在25℃下共同地具有约20mg／g至约25mg／g的饱和MTZ溶解度的一种或多种溶剂各自地选自由低级脂肪族二醇和低级聚氧化烯组成的组。

M48.根据方面M43-M47中任一项所述的方法，其中所述溶剂系统包含约3重量％至约5重量％的苯甲醇和约95重量％至约97重量％的低级脂肪族二醇与低级聚氧化烯的混合物，其中低级脂肪族二醇与低级聚氧化烯的重量比率在约1：1至约1：2的范围内。

M49.根据方面M48所述的方法，其中低级脂肪族二醇与低级聚氧化烯的重量比率为约1：1.67。

M50.根据方面M48-M49中任一项所述的方法，其中所述低级脂肪族二醇为丙烷-1，2-二醇且所述低级聚氧化烯为PEG400。

M51.根据方面M43-M50中任一项所述的方法，其中一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物各自选自由交联的丙烯酸聚合物和纤维素聚合物组成的组。

M52.根据方面M43-M51中任一项所述的方法，其中一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物各自选自由卡波姆和聚卡波非组成的组。

M53.根据方面M43-M52中任一项所述的方法，其中所述一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物为聚卡波非。

M54.根据方面M43-M53中任一项所述的方法，其中所述粘膜粘附MTZ水基凝胶包含约1.3重量％的MTZ、约2重量％的聚卡波非AA-1、约2％重量的苯甲醇、约15重量％的丙烷-1，2-二醇、约25重量％的PEG400、约0.1重量％的一种或多种防腐剂和约54.6重量％的水。

M55.根据方面M54所述的方法，其中所述一种或多种防腐剂各自为对羟苯甲酸酯。

M56.根据方面M55所述的方法，其中所述一种或多种防腐剂为对羟苯甲酸甲酯和对羟苯甲酸丙酯。

M57.根据方面M43-M56中任一项所述的方法，其中所述粘膜粘附MTZ水基凝胶包含约1.3重量％的MTZ、约2重量％的聚卡波非AA-1、约2重量％的苯甲醇、约15重量％的丙烷-1，2-二醇、约25重量％的PEG400、约0.08重量％的对羟苯甲酸甲酯、约0.02重量％的对羟苯甲酸丙酯和约54.6重量％的水。

M58.一种用适于其的组合物的单次施加来治疗患有和／或被诊断具有BV的受试者的方法，其包括向受试者阴道内施加包含一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物、水和约1.3重量％的MTZ的粘膜粘附水基凝胶，其中在单次施加中施加的粘膜粘附水基凝胶的量含有约65mg MTZ；且所述单次施加在完全的或基本上缺乏其它治疗或施加中足以治疗或治愈BV。

M59.一种治疗患有和／或被诊断具有BV的受试者的方法，其包括向受试者阴道内施加单次施用的粘膜粘附水基MTZ凝胶，其中所述粘膜粘附水基MTZ凝胶包含一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物、约1.3重量％MTZ和水，且在单次施用中施加的粘膜粘附水基凝胶的量含有约65mg MTZ。

M60.一种治疗患有和／或被诊断具有BV的受试者的方法，其包括向受试者阴道内施加粘膜粘附水基MTZ凝胶，其中(i)所述粘膜粘附水基MTZ凝胶包含一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物、约1.3重量％MTZ和水，(ii)施加的粘膜粘附水基MTZ凝胶的量含有约65mgMTZ，且(iii)单次施加所述粘膜粘附水基MTZ凝胶而无其它施加。

M61.一种治疗患有和／或被诊断具有BV的受试者的方法，其包括向受试者阴道内施加粘膜粘附水基MTZ凝胶，其中(i)粘膜粘附水基MTZ凝胶包含一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物、约1.3重量％MTZ和水，(ii)在单次施加中施加的粘膜粘附水基凝胶的量含有约65mg MTZ，且(iii)将粘膜粘附水基MTZ凝胶每天施加一次持续总共一天。

M62.一种治疗患有和／或被诊断具有BV的受试者的方法，其包括以每天至少一次向受试者阴道内施加粘膜粘附水基MTZ凝胶持续总共5天，其中(i)所述粘膜粘附水基MTZ凝胶包含一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物、约1.3重量％MTZ,和水，且(ii)在单次施加中施加的粘膜粘附水基MTZ凝胶的量含有约65mg MTZ。

M63.一种治疗患有和／或被诊断具有BV的受试者的方法，其包括向受试者阴道内施加单次施加的足以治愈BV的数量的粘膜粘附水基MTZ凝胶，其中所述粘膜粘附水基MTZ凝胶包含一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物、约1.3重量％的MTZ和水。

M64.根据方面M55-M63中任一项所述的方法，其中所述粘膜粘附水基MTZ凝胶为根据下述方面C1-C32中任一项所述的凝胶。

6.5.2.组合物

C1.一种粘膜粘附水基凝胶，其包含约1重量％至约2重量％的MTZ、约1重量％至约3重量％的一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物、约30重量％至约60重量％的针对MTZ的溶剂系统和水，其中用人类尸体皮肤进行的体外Franz细胞皮肤渗透实验中于角质层和接受液中测量的来自粘膜粘附水基凝胶的MTZ水平，当被归一化为浓度时，分别比由METROGEL

测量的MTZ水平高至少约25-55倍和低至少约1-20倍。

C2.一种粘膜粘附水基凝胶，其包含约1重量％至约2重量％的MTZ、约1重量％至约3重量％的一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物、约30重量％至约60重量％的针对MTZ的溶剂系统和水，其中在25℃下使用控制剪切率方法，Bohlin CVO100流变仪和表11的流变仪设置测量的所述粘膜粘附水基凝胶具有约200,000mPa至约400,000mPa的粘度。

C3.一种粘膜粘附水基凝胶，其包含约1重量％至约2重量％的MTZ、约1重量％至约3重量％的一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物、约30重量％至约60重量％的针对MTZ的溶剂系统和水，其中所述粘膜粘附水基凝胶的粘膜粘附度在MG33PB的粘膜粘附度的约±10％内。

C4.一种粘膜粘附水基凝胶，其包含约1重量％至约2重量％的MTZ、约1重量％至约3重量％的一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物、约30重量％至约60重量％的针对MTZ的溶剂系统和约30重量％至约60重量％的水。

C5.一种粘膜粘附水基凝胶，其包含约1重量％至约2重量％的MTZ、约1重量％至约3重量％的一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物、约30重量％至约60重量％的针对MTZ的溶剂系统和水，其中所述粘膜粘附水基凝胶基本上不含糊精、环糊精、烟酸和烟酰胺以及任选地表面活性剂.

C6.一种粘膜粘附水基凝胶，其包含约1重量％至约2重量％的MTZ、约1重量％至约3重量％的一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物、约30重量％至约60重量％的针对MTZ的溶剂系统和水，其中所述粘膜粘附水基凝胶在25℃下至少6个月保持稳定。

C7.根据方面C1-C6中任一项所述的凝胶，其中所述粘膜粘附水基凝胶包括约1重量％至约3重量％的总粘膜粘附胶凝聚合物和约40-45重量％的针对MTZ的溶剂系统。

C8.根据方面C7所述的凝胶，其中所述溶剂系统包含在25℃下具有至少约20mg／g的饱和MTZ溶解度的一种或多种溶剂。

C9.根据方面C8所述的凝胶，其中所述溶剂系统包含在25℃下具有至少约50mg／g的饱和MTZ溶解度的一种或多种溶剂以及任选地在25℃下具有约20mg／g至约25mg／g范围内的饱和MTZ溶解度的一种或多种溶剂。

C10.根据方面C9所述的凝胶，其中所述溶剂系统包含一种或多种低级芳族醇以及任选地一种或多种低级脂肪族二醇和／或分子量在约200至约400范围内的一种或多种聚氧化烯(“低级聚氧化烯”)。

C11.根据方面C10所述的凝胶，其中所述溶剂系统包含一种或多种低级芳族醇、一种或多种低级脂肪族二醇和／或一种或多种低级聚氧化烯。

C12.根据方面C11所述的凝胶，其中所述溶剂系统包含一种或多种低级芳族醇、一种或多种低级脂肪族二醇和一种或多种低级聚氧化烯。

C13.根据方面C10-C12中任一项所述的凝胶，其中所述一种或多种低级芳族醇选自苯甲醇、苯氧乙醇及其混合物。

C14.根据方面C10-C13中任一项所述的凝胶，其中所述一种或多种低级亚烷基二醇选自乙烷-1，2-二醇(乙二醇)、丙烷-1，2-二醇(丙二醇)及其混合物。

C15.根据方面C10-C14中任一项所述的凝胶，其中所述一种或多种低级聚氧化烯选自聚氧乙烯(聚乙二醇)、聚氧丙烯(聚丙二醇)及其混合物。

C16.根据方面C10-C15中任一项所述的凝胶，其中一种或多种低级脂肪族二醇和一种或多种低级聚氧化烯以重量比率为约1：1至约1：2的总低级脂肪族二醇与总低级聚氧化烯包括在溶剂系统中。

C17.根据方面C10-C16中任一项所述的凝胶，其中所述溶剂系统包含约3.5重量％至约5重量％的总低级芳族醇和约95重量％至约95.5重量％的一种或多种低级亚烷基二醇和一种或多种低级聚氧化烯的混合物。

C18.根据方面C17所述的凝胶，其中总低级亚烷基二醇与总低级聚氧化烯的重量比率为约1：1.67。

C19.根据方面C10-C18中任一项所述的凝胶，其中所述溶剂系统由苯甲醇、丙烷-1，2-二醇和PEG400组成。

C20.根据方面C10-C19中任一项所述的凝胶，其中所述溶剂系统由约3.5重量％至约5重量％的苯甲醇和约95重量％至约96.5重量％的丙烷-1，2-二醇和PEG400的混合物组成，其中丙烷-1，2-二醇与PEG400的重量比率范围为约1：1.67至约1：1。

C21.根据方面C1-C20中任一项所述的凝胶，其进一步包含一种或多种防腐剂。

C22.根据方面C1-C21中任一项所述的凝胶，其中所述一种或多种防腐剂为4-羟基苯甲酸的酯(对羟苯甲酸酯)。

C23.根据方面C22所述的凝胶，其中所述一种或多种防腐剂选自4-羟基苯甲酸甲酯(对羟苯甲酸甲酯)、4-羟基苯甲酸丙酯(对羟苯甲酸丙酯)及其混合物。

C24.根据方面C1-C23中任一项所述的凝胶，其pH在约pH3.0至约pH5.0的范围内。

C25.根据方面C24所述的凝胶，其pH为约pH4.0。

C26.根据方面C1-C25中任一项所述的凝胶，其中所述一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物选自羟乙基纤维素、卡波姆、聚卡波非及其混合物。

C27.根据方面C1-C6中任一项所述的凝胶，其中所述粘膜粘附水基凝胶包含约1.3重量％的MTZ、约2重量％的聚卡波非AA-1、约2重量％的苯甲醇、约15重量％的丙烷-1，2-二醇、约25重量％的PEG400、约0.02重量％的4-羟基苯甲酸甲酯和约0.08重量％的4-羟基苯甲酸丙酯。

C28.一种粘膜粘附水基凝胶，其包含约1.3重量％的MTZ、约1重量％至约3重量％的一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物和约40重量％至约45重量％的针对MTZ的溶剂系统，其中所述溶剂系统包含苯甲醇、丙烷-1，2-二醇和PEG400，并且其中当储存在约25℃至约40℃的范围内的温度下，所述凝胶稳定保持18个月。

C29.根据方面C28所述的凝胶，其中所述一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物选自交联的丙烯酸聚合物和纤维素聚合物。

C30.根据方面C29所述的凝胶，其中所述交联的丙烯酸聚合物选自卡波姆和聚卡波非。

C31.根据方面C29-C30中任一项所述的凝胶，其中所述纤维素聚合物选自羟乙基纤维素、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素。

C32.根据方面C29-C31中任一项所述的凝胶，其包含约2重量％的总粘膜粘附胶凝聚合物。

6.5.3.用途

U1.根据方面C1-C32中任一项所述的粘膜粘附水基凝胶用于治疗患有和／或被诊断具有BV的妇女的用途。

U2.根据方面U1所述的用途，其中将所述粘膜粘附水基凝胶阴道内施加于足以获得细菌学治愈、临床治愈或治疗治愈的许多施加中。

U3.根据方面U1-U2中任一项所述的用途，其中在单次施加中施加的粘膜粘附水基凝胶的量含有约60mg至约100mg MTZ。

U4.根据方面U1-U3中任一项所述的用途，其中在单次施加中施加的粘膜粘附水基凝胶的量含有约65mg MTZ.

U5.根据方面U1-U4中任一项所述的用途，其中将所述粘膜粘附水基凝胶每天阴道内施加一次持续一至五天。

U6.根据方面U1-U5中任一项所述的用途，其中将所述粘膜粘附水基凝胶每天阴道内施加一次持续一天。

U7.根据方面U1-U5中任一项所述的用途，其中将所述粘膜粘附水基凝胶每天施加一次持续五天。

6.5.4.单位剂型

D1.一种适用于阴道内施加的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的单位剂型，其包括根据方面C1-C32中任一项所述的包装在适用于阴道内施加的容器中的含有约65mg至约100mg MTZ的数量的凝胶。

D2.根据方面D1所述的单位剂型，其包括含有约65mg MTZ的数量的凝胶。

除非另外限定，否则本文使用的所有技术和科学术语具有如由本文所述的各种发明所属的领域的普通技术人员通常所理解的相同的意义。尽管类似于或等同于本文所述那些的方法和材料可用于实施或测试所公开的发明，合适的方法和材料描述于下文。本文提及的所有公开、专利申请、专利和其它参考以引用的方式整体并入。如发生矛盾，则本说明书，包括定义，将占据主导地位。此外，材料、方法和实施例仅为示例性的并非旨在限制。

7.实施例

现已总体描述了所公开的本发明，相同的将更易于通过参考以下实施例理解，其通过示例提供且并不旨在限制本文所述的发明范围。

实施例1：用于溶剂系统的示例性溶剂

在25℃下确定MTZ在多种溶剂中的溶解度以鉴定在本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶需要的浓度下可用于溶解MTZ的溶剂。在25℃下许多溶剂的饱和MTZ溶解度提供于以下表1。可以使用这些饱和的溶解度作为指导设计具有MTZ的所需浓度可用于制备高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的溶剂系统。适于与这些(和其它)溶剂使用用于制备如本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶另外的溶剂可以基于其饱和MTZ溶解度而易于鉴定。在25℃下在已与适用于制备高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的水相混合的许多溶剂系统中的饱和MTZ溶解度提供于以下表2。

实施例2：示例性高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶

制备含有不同量的MTZ且利用多种不同的溶剂系统的许多示例性高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶并使其经受如随后实施例中所述的多种不同的均匀性、流变性、稳定性、生物学和临床测试。所有的凝胶使用下文所述的类似的过程制备。

凝胶的制备。将所需量的防腐剂，例如对羟苯甲酸甲酯和对羟苯甲酸丙酯，称重至

瓶中随后加入水相(磷酸盐缓冲液或去离子水)。将内容物充分混合以溶解防腐剂。将剩余的溶剂(如，苯甲醇、乙醇、丙二醇和PEG400)称重至分开的瓶中并充分混合随后加入所需量的甲硝唑。然后将

瓶置于55℃的水浴中并持续搅拌直至甲硝唑溶解。将

瓶从水浴中移除，置于室温下并持续搅拌直至溶液平衡至室温。然后将防腐剂在恒定搅拌下加入至MTZ溶液。将所需量的凝胶剂称重至称重套件并在恒定搅拌下加入至以上溶液并搅拌直至凝胶剂完全水合。小心地充分混合内容物以确保均匀性。

对于利用pH-敏感性或依赖性胶凝聚合物的凝胶，可以在加入胶凝聚合物之前将MTZ溶液的pH调节至对于凝胶为最佳范围的值，其后视需要调节凝胶的pH。

安慰剂凝胶的制备。在本文讨论的若干实验中，安慰剂凝胶被用作比较剂或作为对照。将安慰剂凝胶如上文所述制备。对于安慰剂，省去MTZ并用相等重量％的水或缓冲液(取决于用于活性凝胶的水相)替换。

磷酸盐缓冲液pH4的制备。将二水合磷酸氢二钠(3.9g)称重至500ml

瓶中并加入450ml去离子水。将溶液充分混合以溶解缓冲盐。将溶液的pH使用正磷酸调节至pH4并在500ml容量瓶中用去离子水定容。

含有1.5重量％的MTZ、2.0重量％、1.3重量％和1.18％的MTZ的各种示例性凝胶的组合物分别提供于以下表3、4、5和6。

在表3中所列的制剂MG03、MG04、MG08和MG09形成澄清的厚的浅黄色凝胶而MG26形成白色膏状凝胶。卡波姆、聚卡波非AA-1和卡波姆974P形成凝胶的理想的pH为中性。因为用于阴道内施加的所需凝胶的pH大约为pH4，所以与HEC相比使用大量的这些凝胶剂。MG03含有β-羟丙基环糊精作为增溶剂。

实施例3：示例性凝胶的粘膜粘附性质

使用两种不同的方法测试两种示例性高剂量粘膜粘附MTZ凝胶(MG32PB和MG33PB)的粘膜粘附性质：在存在和不存在粘蛋白的情况下粘附至单独的猪胃粘膜和流变性测量。所述方法和结果描述于下文。

a.使用单独的猪胃粘膜的粘膜粘附

方法。对于该实验，将小部分(15x10cm)的新鲜的猪胃粘膜固定在10°角的斜坡上并在蠕动泵的辅助下用pH4的缓冲液冲洗10分钟。将测试凝胶的少量等份试样(50μl)涂布在斜坡顶部的粘膜上并放置保持10分钟。然后开启泵并在t=1、2、3、4、5、10和15分钟之后在各个时间点处将缓冲液收集至个体小瓶中。还分析任何背景或干扰的不含任何测试凝胶的空白样品。将样品过滤通过0.45μm PVDF注射器过滤器并通过HPLC分析。将来自粘膜的MTZ的损失速率相对于各个测试凝胶的时间作图并比较所得数据来确定各个测试凝胶的相对粘膜粘附。还经5分钟内15s间隔的取样时间点进行第二个实验。

结果。数据示于图1和2。结果示出MG32PB具有比MG33PB稍好的粘膜粘附性，如通过在各个时间点处在粘膜上剩余的甲硝唑的量确定的。

b.流变性测量

方法。将粘蛋白称重至玻璃小瓶中随后在调查研究下加入凝胶。将随动磁铁置于样品中并将样品混合直至所有的粘蛋白水合。使用振荡实验(Bohlin CVO流变仪)分析含有和不含粘蛋白的测试凝胶的流变性参数。使用不含粘蛋白的相应的安慰剂凝胶最初进行振幅扫描随后频率扫描以确定线性粘弹性区域。对于凝胶，用于确定频率扫描的参数在表7中给出。

将测试凝胶(约1g)置于配有平行板的流变仪的底板上。升高较低板以便将样品限制在预先确定的缺口处。然后使样品经受增量为0.15Hz从5至20Hz的系列的正弦振荡。先前确定施加的转矩(4Pa)以使最高和最低频率均在线性粘弹性区域。将各个凝胶测试三次。在各个运行结束时，使用Bohlin计算机软件(版本6.50.5.7)来确定G’，弹性或储存模量。将针对各个参数获得的数据对作为频率的函数作图并以10Hz的固定频率计算G’的平均值。与不含有粘蛋白的活性凝胶的平均G’值相比，使用含有粘蛋白的活性凝胶的平均G’值计算含有和不含粘蛋白的AG’和G’的对数比率。

结果。粘蛋白(其也为聚合物)的加入增加测试凝胶的弹性模量，如由AG’(表8)确定。假定log G’比率的较高值与粘蛋白的较多的相互作用相关并因此具有较好的粘膜粘附。然而，这种增加可能取决于用于制备凝胶的胶凝聚合物和粘蛋白之间的内在的相互作用。log G’的比率，其为含有和不含粘蛋白的测试凝胶的log G’的比率，给予增加制剂的粘弹性质的见解。

实施例4：示例性凝胶的短期贮存稳定性

在25℃和45℃下，将各种不同实施方案的示例性高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶用于短期(4周)贮存的稳定性测试。将凝胶储存在Vindon Scientific稳定性橱柜中的密封的琥珀色小瓶中。测试的参数包括均匀性(对于存在晶体和／或颗粒的视觉和显微镜观察)、MTZ稳定性、防腐剂功效、粘度和pH。在25±2℃，60±5％RH下和在40±2℃，75±5％RH下，测试的稳定性时间点为t=0、2和4周。将不含MTZ的安慰剂凝胶也储存相同的时间并用于物理和化学稳定性的评估。

为了评价MTZ稳定性，将MTZ从凝胶中提取并通过HPLC方法1分析(表9中的参数，下文)。对于提取，将大约0.5g凝胶置于50mL容量瓶中。加入大约30mL HPLC流动相65：35甲醇／60mM磷酸盐缓冲液(如以下制备)并将混合物涡旋直至观察凝胶已分散在溶液中。将溶液用HPLC流动相定容。对于HPLC分析，将等分试样过滤通过0.45μm PTFE注射器过滤器，弃掉起初的2ml。将剩余的滤液通过HPLC方法1进行分析。

为了制备流动相，将1.5g磷酸氢二钠和1.3g磷酸氢二钠称重至

瓶中并溶解于350ml去离子水。将溶液充分混合，加入650ml甲醇，并将所得溶液用磁力搅拌器充分混合并过滤通过0.22μm过滤器。

对于HPLC分析，将MTZ峰(在254nm下检测保留时间大约为3.312分钟)积分并与对照样品进行比较。将在储存之后剩余的MTZ的量量化为在t=0处的理论浓度(TC)的百分比。使用已知浓度的MTZ原液(通过1mg／ml原液连续稀释制备)获得的校准曲线确定测量浓度(MC)。

凝胶的物理稳定性使用光学显微镜(Leica DME SOP3091)评估。将测试凝胶与相应的安慰剂对照凝胶进行比较以评估颗粒的存在。

结果。从凝胶中回收的MTZ的百分比提供于以下表10。在所有测试浓度下，MTZ在所有凝胶中均为稳定的。在来自4周25℃的样品MG37PB、MG42PB和MG43PB中观察到低回收率。然而，在40℃下储存的相同凝胶的回收率为100％，这表明对于25℃样品可能存在提取／称重的误差。对于所有样品的峰纯度％为100％。

实施例5：示例性凝胶的长期贮存稳定性

在25℃和40℃下，将各种不同的实施方案的示例性高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶进行长期稳定性测试。

为了研究，将20g各个测试凝胶储存于在25±2℃／60±5％RH和40±2℃／75±5％RH下的密封的小瓶中。也将备用样品储存在-20℃、2-8℃和30℃／65％RH用于一旦真实的或加速的时间样品失效的分析。不含MTZ的相应的安慰剂凝胶也与测试凝胶一起储存。

在1、2、3、6、12和18个月之后，将凝胶从储存橱柜中移除并使用如下文所述的显微分析和粘度分析测试物理和化学稳定性。

显微镜分析。将凝胶在光学显微镜

DME)下观察。使用微量刮勺将凝胶的小样品放在显微镜载玻片上。将显微镜载玻片用盖玻片覆盖并使用40x物镜观察。将活性凝胶与安慰剂凝胶在存在晶体的情况下进行比较。

如果观察到晶体，那么使用校准格

ObjectiveMicrometer,0.01mm)上的刻度测量粒径。设置所述显微镜使得照相机(Nikon4500数码相机)连接于显微镜的转像透镜并将40x物镜设置到位以观察样品。照相机设置：图像尺寸：1280x960像素，图像质量：良好。一旦获得清晰独特的视野，拍摄照片(放大倍数为x400)。

粘度分析。将凝胶的流变性在各个时间点处(t=0、1、2、3、6、12和18个月)测量。优选椎体和平板测量系统用于流速曲线测量因为在穿过截椎的直径时剪切率为恒定的。因此，使用受控的剪切率扫描法。使用剪切率为0.16s^-1时流速曲线上的点以比较各个凝胶并确定粘度。使用的流变仪设置在以下表11中：

也对凝胶进行MTZ的含量、苯甲醇的含量、对羟苯甲酸酯的含量、防腐剂功效和pH的测试。除了18个月的样品之外，对短期稳定性样品的MTZ的含量如上文所述进行评估。对于18个月的样品，MTZ的含量如下文所述进行评估。

对于提取，将0.5g±20mg的凝胶称重至25ml容量瓶中并用大约20ml的样品稀释剂(3：7甲醇／10mM KH₂PO₄)进行稀释。将混合物涡旋直至凝胶分散在溶液中(大约5分钟)。将溶液用样品稀释剂定容并涡旋混合大约1分钟。将大约14ml样品在3500rpm下离心10分钟，将所得上清液通过0.45μm PTFE注射器过滤器过滤，弃掉起初的2ml。将剩余的滤液通过HPLC方法2(以下表12中的参数)进行分析。除了MTZ之外，也确定苯甲醇、对羟苯甲酸甲酯和对羟苯甲酸丙酯的回收率。

将防腐剂功效以与EP和US药典规范相一致的方式进行测试。将接种的样品在t=0h、24h、48h、7天、14天、21天和28天时进行测试。

将相应于MG33PB但包括减少量的防腐剂的凝胶进行防腐剂功效的测试。将测试凝胶(以下表13)如实施例2所述进行制备。

也制备凝胶MG33(75％)和MG33(90％)的安慰剂形式。

pH测试在t=0、1、2、3、6、12和18个月时进行。

结果.表14示出MTZ从凝胶的回收％。MTZ从在25℃和40℃下储存6个月的凝胶的回收百分比与t=0的数据可比。发现所有凝胶的峰纯度％为100％，表明MTZ在所有测试的凝胶中为稳定的。MTZ从在25℃和40℃下储存18个月的MG33PB和MG32PB的回收百分比与t=0的数据可比。

甲硝唑凝胶制剂的物理稳定性。在6个月之后将置于25℃和40℃的凝胶对存在任何颗粒或晶体进行视觉和显微镜评估。尽管观察凝胶为物理上稳定的，但是在40℃下储存6个月之后在所有活性凝胶中存在从非常浅的黄色至浅黄色的微小颜色变化。这不存在于相应的安慰剂制剂中(表17)。在储存中观察到pH的微小差异。然而，在活性凝胶中未观察到pH的较大变化，表明凝胶在6个月之后为稳定的(表15)。

使用流速曲线测量凝胶的粘度。在比较凝胶粘度的流速曲线上的点为在0.16s^-1下的剪切率(表11)。在t=0处读取读数(n=2)之后，检查曲线并选择比较点。所有的凝胶表现出假塑性特性或剪切稀化，即，随着剪切率增加，粘度降低。随着剪切率增加，凝胶的即时粘度变得彼此越来越类似使得各个凝胶之间的粘度不再有显著的差异。选择曲线上的点用于将不同的所有流速曲线的凝胶比较。使用0.16s^-1以上和以下的两个最靠近剪切率的插值法计算粘度。将在25℃下储存6个月的所有凝胶和在25℃储存高达18个月的MG33PB进行观察，示出粘度的微小变化，在各个时间点至高达18个月(表16)之间一般为恒定的。在40℃储存时，观察到粘度的下降，然而这对安慰剂凝胶比活性凝胶更有意义。

在2-8℃下储存6个月的备用活性凝胶也检查到晶体形成，与在相同条件下储存的如其相应的最佳凝胶的安慰剂凝胶一样。在凝胶MG32PB和MG35PB中观察到大晶体。大的片样晶体也在凝胶MG33PB和MG36PB中形成。单一微小的晶体在凝胶MG34PB和MG37PB中形成。这些数据表明对于高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶并不推荐储存在2-8℃下。在25℃或40℃下的储存为更合适的，因为在这些温度下未观察到晶体制剂。

在25℃和40℃下储存6个月的安慰剂和测试试剂的物理外观的观察提供于以下表17。

在40℃下储存12个月的MG33PB的PET测试结果。防腐剂功效测试(PET)的结果总结在表18和表19中。在40℃下储存12个月的凝胶MG33PB满足对如由欧洲药典6.3指定的所有测试生物体所需的对数减少。

使用验证的分析方法2分析具有另外6个月环境储存的12个月和18个月的样品。将在25℃下储存12个月的样品在环境温度下储存另外6个月以及在25℃和40℃下储存18个月的样品符合MTZ和防腐剂含量的规格标准(表20和表21)。

75％w／w和90％w／w的防腐剂组合物对MG33PB的影响。用含有减少量的防腐剂的示例性凝胶MG33PB的变体进行PET测试的结果，MG33(75％)和MG33(90％)总结于表22和表23中。MG33(70％)和MG33(90％)符合如由欧洲药典6.3指定的所有测试生物体所需的对数减少。

实施例6：示例性凝胶的局部递送和皮肤渗透性质

将若干示例性高度粘膜粘附MTZ水基凝胶的体外皮肤渗透性质在用知情同意获得的具有全层人类腹部整形术皮肤的Franz细胞中进行测试。对于研究，用解剖刀去除所有的皮下脂肪并将皮肤固定在供体和受体的区室之间。

对于实验，将¹⁴C放射性标记的MTZ凝胶如实施例2所述进行制备，成分的量列于以下表24中。在表24中，所有的量的单位均为mg，除了¹⁴C-标记的MTZ，其单位为μl。

¹⁴C放射性标记的MTZ(GE Healthcare)具有57mCi／mmol的比活，99.2％的放射化学纯度。¹⁴C-标记的MTZ原液通过将3.5ml水加入至37MBq的¹⁴C-标记的MTZ中并涡旋混合直到¹⁴C-标记的MTZ溶解制备。

作为对照，相应于FDA批准的0.75重量％的MTZ凝胶(诸如，例如，METROGEL

的10g的0.75重量％的¹⁴C-标记的MTZ凝胶如下制备：

对羟苯甲酸酯相：将对羟苯甲酸甲酯(8.03mg)、对羟苯甲酸丙酯(2.05mg)和丙二醇(303.28mg)称重至28ml玻璃小瓶中并搅拌直至溶解。然后将小瓶在55℃进行平衡并在搅拌的同时加入水(3.5g)。加入MTZ(75mg)并继续搅拌直至所有的药物已溶解。然后在搅拌的同时加入¹⁴C-标记的MTZ原液(465μl)。

卡波姆相：将EDTA二钠(5.03mg)称重至28ml加入纯化水(5.698g)的玻璃小瓶中。使用磁力搅拌器(magnetic flea)搅拌所述制剂直至所有的EDTA二钠完全溶解。加入卡波姆974P(200.89mg)并将制剂放置搅拌过夜以允许聚合物水合。

组合：将对羟苯甲酸酯相加入至卡波姆相同时搅拌。使用水(200mg)将对羟苯甲酸酯相冲洗至卡波姆相。将凝胶放置过夜以冷却至室温。

对于实验，将全厚的人类皮肤用Ph4的磷酸盐缓冲液(pH4)作为接受液固定在Franz细胞中以确保接收器条件。将等价于10mg／cm²的限定剂量的测试凝胶施加于膜并随着时间的推移确定¹⁴C-标记的MTZ的扩散。

使用正位移移液器将测试凝胶(7μl)施加于膜表面。由于大量的测试凝胶，研究被分割成若干单独的实验。将两个皮肤供体在所有实验中随机分配使得各个凝胶在两个皮肤供体上测试(n=6个细胞／凝胶)。

将Franz细胞的受体区室充满接受液并将细胞固定在维持37℃的水浴中。通过小的随动磁铁连续搅拌受体区室内容物。在t=1、2、3、4、6、8和24h时，从受体区室中取得接受液的样品，用新鲜的受体培养基替换并通过闪烁计数测定。

在实验结束时，进行物料平衡，分析供体区室、表面残余、角质层(SC)、剩余的表皮、真皮和受体区室。方法涉及通过使用标准方法进行胶带剥离和剩余的表皮层和真皮的处理去除SC。方法在下文中进行了简要的描述。

未被吸收的制剂：用棉签将各个Franz细胞供体区室的表面使用5次顺时针方向和逆时针方向的运动轻轻地擦拭。使用交替的湿棉签(先前浸入接受液中)和干棉签将该程序重复四次。在分析之前，将棉签加入至闪烁混合物中。将两个胶带条从皮肤中去除并视为未被吸收的制剂且包括在总表面活性中。将胶带条置于已加入1mL水的闪烁小瓶中。将这些放置浸泡72h以使制剂溶解并分散在水中。在通过液体闪烁(LSC)分析之前，将闪烁混合物(4mL)加入至小瓶中。用棉签将各个Franz细胞受体区室的表面使用五次顺时针方向和逆时针方向的运动轻轻地擦拭。使用交替的湿棉签(先前浸入接受液中)和干棉签将该程序重复两次。在分析之前，将棉签加入至闪烁混合物中。

角质层(SC)：使用Scotch胶带通过十次小心地胶带剥离皮肤去除SC。将第一个五次胶带条一起置于一个闪烁小瓶中并将第二个五次胶带条一起置于下一个小瓶中。将1mL水加入各个小瓶中并将这些放置浸泡72h以使制剂溶解并分散在水中。在通过LSC分析之前将闪烁混合物(4mL)加入至小瓶中。

表皮：将表皮的剩余部分(胶带剥离之后)用解剖刀从真皮中小心地去除。将表皮置于含有2ml的Soluene350的玻璃小瓶中并在通过LSC分析之前在50℃下温育72h。

真皮：将剩余的真皮层置于含有2ml的Soluene350的玻璃小瓶中并在通过LSC分析之前在50℃下温育消化72h。

结果.从各种皮肤层回收的用于各个测试凝胶的¹⁴C-标记的MTZ的量提供于以下表25中。这些都在图3A中以图解表示。表示为施加剂量的百分比的相同数据提供于以下表26中并在图4A中以图解提供。

另外的图解表示提供于图5A和6A中。

对于任何测试的制剂，在供体区室、受体区室、表皮和真皮中检测的MTZ的量不存在统计学上的差异(p>0.05)。然而，与0.75重量％相比，用高剂量MTZ凝胶在接受液和角质层中检测的量观察到显著差异。在施加

(4.83±0.97μg)之后在接受液中观察到的MTZ水平比来自新的PB制剂(最小0.31±0.27μg来自MG33PB且最大1.17±0.25μg来自MG36PB)高4-16倍(当被归一化为浓度时为2-9倍；p<0.05)，可能例外的为MG37PB(3.62±2.02μg)。然而在施加示例性测试凝胶之后在角质层中的¹⁴C-标记的MTZ的水平(最小17.80±3.45μg来自MG36PB且最大33.15±19.86μg来自MG35PB)比

获得的(0.37±0.74μg)高50-90倍(当被归一化为浓度时高29-53倍)。这种差异体现在从皮肤表面回收的未被吸收的放射性标记的MTZ的量，从

制剂中回收的药物的量(45.03±1.20μg)可以与示例性测试凝胶(最小55.69±5.42μg来自MG33PB且最大65.23±3.29μg来自MG34PB)相比较，尽管最初浓度存在差异。

类似的实验用含有1.5重量％的MTZ的示例性凝胶进行，获得类似的结果(提供于图3B、4B、5B和6B)。

因此，如与常规的0.75重量％的MTZ凝胶相比，用本文所述的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶较大量的MTZ被保留在皮肤的表面层，而同时在接受液中获得较低水平，当局部施加于皮肤时相应于预期的较低的全身水平。

实施例7：猪阴道组织的渗透研究

用示例性测试凝胶MG33PB和类似于实施例6中所述的0.75重量％的MTZ对照凝胶的渗透研究在Franz细胞中使用猪阴道组织(去除过量的肌肉)进行。将MTZ使用Soluene从组织中提取。在本实验中，凝胶不包括¹⁴C-标记的MTZ。经由HPLC测量MTZ的回收。在施加测试凝胶或对照凝胶之后24小时之后从阴道组织的表面和阴道组织内回收的MTZ的平均量提供于以下表27中。在以下数据中，n=5，已经消除来自各个测试实验和对照实验中的一个异常值。

数据也在图7中图解表示。渗透通过阴道组织的MTZ的累积量在整个实验过程中随着时间的变化在图8中阐明。在图8中，数据表示为每单位面积的阴道组织渗透的MTZ(μg)的平均(±SEM)量(μg／cm²)。对于测试和对照批次N=5。

在本实验中，仅回收约30％的施加于测试凝胶和对照凝胶两者的MTZ总量。

从实验的测试臂和对照臂中仅回收约30％的MTZ总量。

实施例8：含有1.3重量％的MTZ的示例性高剂量粘膜粘附水基凝胶令人惊讶地有效，且当临床上用于治疗被诊断具有细菌性阴道病的妇女时比FDA-批准的0.75重量％的MTZ凝胶令人惊讶地更有效

引言。进行含有1.3重量％的MTZ的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶，制剂MG33PB，的具体的实施方案的临床评价以评估其安全性和功效。在研究中，将MG33PB针对0.75重量％的METROGEL

(“MGV”)进行评价并且使用不同的测试组来确定在1天、3天和5天之后的治疗功效。

一般方法.为了治疗BV，根据FDA指导(草拟的FDA指导标题为，“Guidance for Industry：Bacterial Vaginosis-DevelopingAntimicrobial Drugs for Treatment，”起草日期1998年7月)进行与MGV(QD x连续5天)比较的MG33PB的多中心、随机的、调查员单盲、剂量范围功效和安全性研究(QD x1天、QD x连续3天和QD x连续5天)。在3个时间点评价受试者：一次筛选／基线就医，一次治疗后电话就医和一次研究结束[EOS]／治愈测试[TOC]就医)。受试者参与高达30天。研究设计示意性地示于表28中：

研究群体.允许满足下文描绘的所有入选标准的参与者参与研究。满足下文描绘的排除标准中的任一者不允许参与研究。

入选标准

1.愿意或能够给予书面的知情同意。

2.至少18岁的女性。

3.良好的一般健康状况，由医学史确认的在筛选就医时在调查员看来无已知的可能干扰研究参与的医学病患。

4.愿意或能够以门诊患者参与研究，对研究中心作出必需的就医且顺从所有的研究要求，包括合并用药和其它治疗限制。

5.对于可能分娩的妇女，在研究治疗开始前，具有阴性尿妊娠测试。

6.具有BV的临床诊断，被定义为具有所有以下标准：

1.灰白色(乳白色或灰色)、薄、均匀的分泌物，

2.在盐水湿涂片的显微镜检查下，存在>20％总上皮细胞的线索细胞，

3.阴道流体的pH>4.7，且

4.10％KOH嗅测试为阳性。

7.同意在研究的整个第一个7天中戒绝性交。在第一个7天之后，当参与性交时，同意使用非润滑的避孕套。

8.在治疗期间和之后1天愿意戒绝酒精摄入。

9.同意在研究期间避免使用阴道内产品(如，冲洗、女性除臭喷雾剂、杀精子剂、润滑的避孕套、卫生棉条和横膈膜)。

排除标准

1.怀孕的、泌乳或在研究期间计划怀孕的。

2.在诊断时为月经来潮或预期在研究的治疗期月经开始

3.在就医的90天内经历临床上重要的医学事件(如，中风、心肌梗死等)。

4.已知或怀疑外阴道炎的其它感染原因(如，念珠菌病、阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)、淋病奈瑟球菌(Neisseriagonorrhoeae)或活化的单纯疱疹(Herpes simplex))或任何其它阴道或外阴病患，在调查员看来，将混淆临床反应的解释(沙眼衣原体和淋病奈瑟球菌的测试结果在随机化时为不可用的)。

5.具有<4的革兰氏染色片纽金特分数(结果在随机化时为不可用的但是可以用来确定研究后分析群体)。

6.在随机化的14天内接受抗真菌或抗微生物治疗(全身或阴道内)。抗病毒治疗(非阴道内)为可接受的。.

7.在随机化14天内已经服用双硫仑。

8.证明对甲硝唑(口服或局部施用)或任何形式的羟苯甲酸酯具有先前的超敏反应。

9.具有原发性或继发性免疫缺陷。

10.在研究期间正治疗或计划待治疗子宫颈上皮瘤(CIN)或宫颈癌。

11.正使用华法林钠(warfarin)进行抗凝治疗。

12.正使用全身性皮质类固醇或全身性抗生素。

13.先前参与本研究。

14.参与另一临床试验或在过去30天内已经服用实验药物或利用实验装置。

15.不愿意或不能顺从协议的要求。

治疗组.在完成所有的筛选／基线评价和评估之后，指示受试者以适当的技术施加研究药物并通过盲目的药物配制协调器(UnblindedDrug Dispensing Coordinator)将以下治疗组中的任一者以1：1：1：1的比率随机分配：

·MGV：QD x连续5天，

·MG33PB：QD x1天，

·MG33PB：QD x连续3天，和

·MG33PB：QD x连续5天。

各个受试者接受一套研究药物。各套含有以下任一者：

·研究药物，MG33PB，以一个70克管提供，具有适当数目的涂药器，或

·比较剂药物，MGV，以一个70克管提供，具有五(5)个涂药器。

对各种亚组群体进行结果评估(在下文中更详细地讨论).“意向治疗(Intent-to-Treat),(ITT)群体包括随机进入研究的所有受试者。“调整意向治疗(Modified Intent-to-Treat)”(MITT)群体包括所有随机的受试者，其接受任何研究药物、具有至少1次基线后就医／评估、对淋病奈瑟球菌和沙眼衣原体具有阴性测试且在第一次就医时具有≥4的革兰氏染色片纽金特分数。丢失主要功效数据的受试者被认为主要功效终点的失败并包括在MITT群体中。“符合方案集(Per-Protocol)”(PP)群体包括在MITT群体中满足以下标准的受试者：

·满足所有的入选标准和排除标准且无违反协议，

·在随机化的那天之后，在该天或两天内开始研究药物，

·顺从研究药物，

·在研究期间(通过TOC就医随机化)，未使用抗微生物药物(除依计划书中允许之外)，

·在研究期间，未用另外的阴道内产品，且

·相对于第一天治疗，在第20天与31天之间获得TOC革兰氏菌株纽金特分数结果。

·如果数据表明针对细菌性阴道病受试者为临床治疗失败而无另一具体的原因(即，毛滴虫属、衣原体属、淋病)时，那么将受试者包括在PP群体中，所述受试者在第21天之前结束其研究就医。

“安全性”群体包括施加任何量的研究药物的所有随机化的受试者。

盲目.因为将研究药物和比较剂使用不同的治疗方案给药，所以利用调查员-单盲的研究设计。分配疗法对调查员和研究协调员隐瞒以及在各点进行分配疗法和分配的独立的药物分配协调员。

限制药物／治疗.可能潜在地影响研究结果的以下药物、制剂和治疗在研究期间禁止：

1.在治疗期间和之后1天摄入酒精。

2.在治疗期间和之后1天双硫仑。

3.研究期间阴道内产品(如，冲洗、女性除臭喷雾剂、杀精子剂、润滑的避孕套、卫生棉条和横膈膜)。

4.除了口服抗真菌治疗(如，口服氟康唑)以治疗间发的病患(如，念珠菌病)以外，研究期间全身或阴道内抗微生物治疗。抗病毒治疗(非阴道内)为可接受的。

5.治疗CIN或宫颈癌。

6.华法林钠或华法林。

7.全身皮质类固醇。

功效和安全性变量.在PP和MITT群体进行功效分析。

主要的功效变量在第2次就医(EOS／TOC)时评估且为治疗治愈的证据。认为治疗治愈的受试者在EOS／TOC时必须实现临床治愈和细菌学治愈。

临床治愈被定义为解决基线就医的临床发现且进一步被定义为：

1.不存在灰白色(乳白色或灰色)、薄、均匀的分泌物；

2.10％KOH嗅测试为阴性；

3.在盐水湿涂片中不存在线索细胞；且

4.阴道流体pH<4.7

此外，受试者在研究期间必须不能接受任何抗微生物药物(除依计划书中允许之外)且调查员对于在EOS时的问题“在你看来，对于BV感染此时患者需要另外的治疗吗?”的答案为“否”。

细菌学治愈被定义为纽金特分数<4。

本研究的关键次级功效变量为：

·在TOC／EOS就医时临床治愈的受试者的比例。

·在TOC／EOS就医时细菌学治愈的受试者的比例。

·解决症状的时间(不正常分泌物和气味)，定义为从随机化至在受试者日记中表明症状解决那天的时间间隔(以天计)。

·骨盆检查结果包括瘙痒、刺激和炎症。

·受试者问卷和日记数据。

在计划外临时就医时被分类为临床失败的受试者进行EOS／TOC就医时具有其临床和细菌学结果和治疗评估。

安全性分析在安全性群体中进行且包括阴道病史和在先治疗、骨盆检查、合并用药监测和AE／SAE监测的评估。

统计学方法和分析。

分析研究群体.以上定义各种研究群体。使用ITT群体总结受试者安排、人口统计学和基线特性、医学史和在先／合并用药。使用MITT群体支持功效分析。将PP群体用于主要分析。将安全性群体用于研究药物暴露和所有安全性分析。将受试者如处理进行分析。

初级和次级终点的统计学分析.对于比例变量，通过处理组与精确的95％置信区间(CI)一起总结数据。在研究期间，接受其它抗微生物药物(即，除依计划书中允许的那些之外)的受试者(即，从筛选／随机化的日期的任何时间至最后就医的日期)被认为是失败的。

对于症状解决时间的Kaplan-Meier存活曲线对所有的处理组作图。

未进行正式的统计学测试以比较处理组。治疗方案的最终选择基于治愈率、结果的一致性、安全性和便利信息。

安全性分析.安全性数据由所有治疗中出现的不良事件(TEAE)、任何严重的不良事件(AE)、治疗相关的TEAE、严重的TEAE和导致各个处理组研究中止的AE的评估(数目和％)组成。

调查员选择以下术语来描述AE的严重性：微弱的、适度的或严重的。各个AE与研究药物的关系由调查员评价为：不相关、可能不相关、可能相关或相关的。注释：治疗相关的AE包括被分类为可能相关的活相关的那些。

治疗中出现的不良事件(TEAE)被定义为以下那些AE：具有开始时间或研究药物开始之后至研究药物的最后剂量之后不超过过30天，或在研究药物开始的时间进行并在治疗期间或在研究药物最后剂量之后30天期间严重性增加或与研究药物的关系更密切。

通过至少一次事件的总体发病率、系统器官类(SOC)的发病率和SOC的发病率和优先术语总结TEAE。通过严重性和与研究产品的关系也总结TEAE。另外，以下治疗出现的AE总结于以下：严重的TEAE、治疗相关的TEAE、严重的TEAE和导致研究中止的TEAE。

安全性和功效的临床评估结果.

受试者安排.研究受试者安排显示于以下表29中。将总共255名受试者随机分配成四个研究处理组并且对除一个受试者之外所有给药(在MGV组)并包括在安全性群体中。234名受试者(91.8％)完成研究。在21名(8.2％)早期中止的受试者中，9名(3.5％)失去随访，5名(2.0％)具有阳性的淋病奈瑟球菌和／或沙眼衣原体筛选测试结果。

在ITT群体中存在255名(100.0％)受试者，在MITT群体中存在228名(89.4％)受试者以及在PP群体中存在189名(74.1％)受试者。二十七名(10.6％)受试者从MITT群体中排除；大部分23名(90.0％)由于其基线纽金特分数。对于从PP群体排除的66名(25.9％)受试者，在30名(11.8％)受试者中发生的最常见原因为从研究药物的第一剂量的20至31天内未进行纽金特分数。受试者群体的概述提供于以下表30中。

人口统计学.在基线处，纳入研究的受试者的平均年龄为35.1(±9.93)岁。将受试者均匀的分成<35岁(51.4％)和>35岁(48.6％)组且在整个处理组中通过年龄范围进行平衡。人口统计学的概述提供于以下表31中。

细菌性阴道病史和在先细菌性阴道病治疗.对于ITT群体，细菌性阴道病(BV)史和对BV的在先治疗总结于以下表32中。

总之，95名(37.3％)受试者报道BV的先前发作；当前BV的平均持续时间为151.6天。相对于细菌性阴道病史和基线特性处理组为类似的。

功效结果.治愈率的概述。PP群体和MITT群体中的治愈率的概述(主要终点治疗治愈率以及次级终点临床和细菌学治愈率)示于以下表33中。

如以下表34所示，MITT群体的结果类似于PP群体。

在研究／治愈就医测试结束时各个治疗治愈标准不存在或存在概述.在EOS／TOC就医时针对PP群体4个已建立的治疗治愈标准不存在或存在的结果示于表35中。结果类似于MITT群体。

症状解决的时间.在PP群体中，在所有3个甲硝唑1.3％治疗组中解决不正常分泌物和鱼腥味的中值时间和仅解决鱼腥味的中值时间比MGV0.75％组短(中值时间分别为5天对6天以及2天对3天)；解决不正常分泌物的中值时间在所有处理组中相等(中值时间为3天)。解决症状的时间的概述提供于以下表36中。

亚组治疗治愈率的概述.在PP群体中的治疗治愈率通过亚组(年龄组、种族、种族划分、基线处当前BV发作的持续时间和BV的先前发作)示于以下表37中。

在实现治疗治愈中从亚组的分析中无显而易见的明显的趋势。

受试者问卷结果.在研究结束时，要求所有的受试者完成问卷。具体问到受试者的以下问题提供其使用研究药物的反馈：

·施加研究药物的简易性如何?

·使用研究药物治疗长度的便利性如何?

·你对接受治疗的满意度如何?

·如果将来你患有BV症状，你愿意用当前研究药物治疗还是你愿意用另一种治疗?

结果的概述提供于以下表38中。

在4个处理组中，在MG33PB1天组中最高比例的受试者将治疗评价为“施加非常简易”、“非常便利”(对于治疗长度)和“非常满意”(数据未示出)。

安全性结果.药物暴露。在本30天研究的受试者接受MGV QD x连续5天；MG33PB QD x1天；MG33PB QD x连续3天；或MG33PBQD x连续5天。对于安全性群体的研究药物暴露的平均天数的概述提供于以下表39中。

在所有处理组的多数受试者报道无研究产品的渗漏或极微的研究产品的渗漏。

不良事件的概述.总之，92名(36.2％)受试者报道不良事件(AE)。所有的不良事件为治疗中出现的不良事件(TEAE)。在四个处理组中，二十九名(11.4％)受试者具有由调查员评估的与研究药物相关的TEAE。AE的概述提供于以下表40中。

治疗中出现的不良效果.最频繁报道的总体具有TEAE的系统器官类(SOC)为感染和侵染(47名[18.5％]受试者)、神经系统病症(32名[12.6％]受试者)以及生殖系统和乳腺病症(27名[10.6％]受试者)。系统器官类(SOC)的所有TEAES的概述提供于以下表41中。

不管与研究药物的关系，发病率>2.0％的总受试者通过优先术语最频繁报道的TEAE为外阴道念珠菌病(25名[9.8％]受试者)和头痛(21名[8.3％]受试者)。不管与研究药物的关系，通过优先术语和在>2.0％的总受试者中报道的顺序递减的那些所有TEAE的概述提供于以下表42中。

认为可能与研究药物相关或与研究药物相关的最频繁报道的这些TEAE在SOC分类感染和侵染中为外阴道念珠菌病以及在生殖系统和乳腺病症SOC中为外阴道瘙痒症和烧灼感。通过SOC、优先术语和与总体中至少6.0％发病率的研究药物的相关的TEAE的概述提供于以下表43中。

多数不良事件为微弱的或适度的强度。总共五名受试者报道六个严重事件不良事件，其包括：低血糖症、头晕、腹痛、牙脓肿，外阴水肿和阴道烧灼感。一名受试者(#2904，1天达1.3％)报道两个被认为与研究产品相关的严重事件；在研究的第3天开始的阴道烧灼感和外阴水肿。这些事件与外阴道瘙痒症、头痛、背痛和外阴道念珠菌病同时发生。观察处理组之间在严重的AE的发病率中不存在差异。

严重的不良事件.在本研究中存在一个SAE，在MG33PB QD x1天处理组中有1名(1.5％)受试者出现低血糖症。

概述.在本实施例中，探究1.3％阴道凝胶对细菌性阴道病(测试凝胶MG33PB)的功效和安全性。发现每天施加一次持续总共1、3或5天的MG33PB所获得的治疗治愈率类似于或数字上优于推向市场的每天施加一次持续总共5天的MGV0.75％阴道凝胶(MGV)(表33-36)。从分析的亚组的分析中未观察到功效的趋势(表37)。在MG33PB1-天组中，最高比例的受试者将该治疗评价为“施加非常简易”、“对于治疗长度非常便利”和“非常满意”(表38)。发现多数不良事件在强度中为微弱的和适度的(表40-43)。令人惊讶地，发现用MG33PB的5天治疗方案不会产生治疗后观察到的外阴道念珠菌病(表42)。

实施例9：体外皮肤感染模型中的抗微生物功效

对阴道加德那菌的若干示例性高剂量MTZ凝胶的抗微生物功效显示在体外实验中。在实验中，将ATP从用测试凝胶处理的且定量的感染皮肤中回收。回收的ATP的量越少，凝胶对感染越有效。

进行两项研究。初步研究和全面研究。初步研究的一般方法如下：

·根据标准方案制备新鲜的表皮膜并在-20℃下储存冷冻直至需要。

·将该膜切成3mm X3mm片段，在60℃下热处理15分钟(先前实验已经显示这为加热的最佳时间，减少表皮膜的本底干扰，数据未示出)并使用10μL的阴道加德那菌(大约5x10⁷cfu)感染细胞悬液。在制备细胞悬液之后进行活菌计数以获得细胞形成单位的数目。

·建立细胞，将3mL的Ringers加入细胞以确保湿度控制的环境。

·在35℃下温育24h之后，将10μL的测试凝胶施加至表皮膜表面。

·在温育接种的表皮膜之后，通过将2μL的测试凝胶施加至表皮膜样品(对于各个凝胶n=3)进行给药并开始时间点；相同的样品并不测量多个时间点。

·在给药之后，将在4、8和24h之后来自活生物体的样品在存在ATP的情况下进行分析。

·包括阳性对照和阴性对照。阴性对照包含在t=0处未加入生物体或制剂的表皮膜样品且阳性对照包含在t=0处仅加入生物体(无制剂)的表皮膜样品。

对于全面研究，根据方案做以下改变：

·在给药之前将表皮膜的初始感染和厌氧温育时间减至30分钟。

·将凝胶的暴露时间减至2h以最小化生物体活性随时间的自然降低。

·在将凝胶施加至阴道加德那菌感染的表皮膜样品上2h之后通过从温育中移除

细胞并进行ATP测定测试凝胶的功效。

结果.初步研究.图9示出施加示例性活性凝胶MG32PB(n=3，初始时)来自阴道加德那菌感染的EP样品的ATP释放的变化(针对10个施加剂量)以及与未处理的感染的EP样品的比较。相应于安慰剂，将MG32PB-P和对照在n=2时进行测试。ATP回收的量越少，测试凝胶对测试生物体的功效越高。

从示于图10的数据，如所预期的观察到阳性对照(感染的，未处理的表皮膜)产生高回收率的ATP而对于阴性对照(未感染的，未治疗的表皮膜)观察到较少量的本底干扰。制剂的给药时间也示出对ATP回收有影响。可以看出在给药24小时之后，ATP的水平降至接近于本底ATP(阴性对照)水平。对于8小时时间点也观察到这种现象，尽管在较小程度上。从本初步研究中，确定应当减少初始温育时间(4、8和24小时)以便降低随着时间的推移自然细胞死亡的影响。对于全面研究，给药时间被减至2小时。

结果.全面研究.图11示出在施加测试凝胶上(开始时对于活性测试凝胶n=6，且对于安慰剂n=3)来自阴道加德那菌(ATCC14018)感染的表皮膜样品的ATP释放的变化，以及其与商业比较剂的比较。也包括阳性对照(无任何治疗的阴道加德那菌感染的表皮膜样品)和阴性对照(未感染或处理的表皮膜样品)。

示于图11中的数据示出当与来自用相应的安慰剂凝胶处理的感染的皮肤样品的ATP的回收率相比，对于用活性测试凝胶处理的感染的皮肤样品观察到ATP回收率的减少。相对于活性和安慰剂之间的ATP回收水平(数据未示出)，制剂MG32PB在功效方面示出显著差异。与感染的对照相比对于MG32PB的活性存在显著差异(p<0.05)示出ATP回收率的较大降低，表明制剂的良好功效。

与感染的对照相比，用示例性测试凝胶MG33PB治疗的感染的皮肤样品对活性物和安慰剂均示出显著较低(p<0.05)的ATP回收率。高功效的制剂MG33PB为聚卡波非AA-1、生物粘附聚合物、仅存在于MG33PB制剂中的赋形剂，令人惊讶地安慰剂被认为是本制剂和其它制剂的主要差异。

当与先前未用任何制剂处理的感染的样品相比，制剂MG35PB在降低针对活性物的生物体活性中几乎无影响或无影响。

制剂MG32PB-A、MG33PB-A和MG33PB-P，所有均对人类表皮膜上的阴道加德那菌显示可比的(P<0.05)活性水平。然而，当与MG32PB-P、MG35PB-A和MG35PB-P相比时，

显著(p<0.05)更有效。

概述.观察MG33PB-A和MG32PB-A具有比其它制剂更高的功效。然而，也令人惊讶地发现对阴道加德那菌，MG33PB-P(不含甲硝唑)正与MG33PB(1.3％甲硝唑)一样有效。

实施例10：使用抑制测定的圆盘扩散区新型甲硝唑制剂对抗微生物功效的体外评估

引言.进行研究以确定抑制微生物生长的所需苯甲醇的最小量。在研究中，三种安慰剂和一种活性高剂量MTZ凝胶对阴道加德那菌的抗微生物功效用抑制测定的圆盘扩散区进行测试。

测试的凝胶提供于以下表44中：

对于测定，制备3ml的调节至大约1x10⁹cfu／ml的阴道加德那菌悬液。将悬液的100μl等分试样用移液管吸取至预先倒好的哥伦比亚血液琼脂(CBA)平板的表面并用灭菌涂布器将悬液均匀地涂布在琼脂的表面。然后将琼脂平板在超净工作台下放置干燥。然后通过将20μl的测试凝胶施加至1／4抗生素测定圆盘(对各个凝胶n=6，注释：圆盘不含有任何抗生素)进行抑菌圈测定并允许在超净工作台下风干1分钟。然后将圆盘倒置并置于预先用阴道加德那菌接种的平板的表面且在35℃下于厌氧瓶中温育48h。通过使用AnaeroGen^TM气包将条件维持为厌氧的。在温育之后，用卡尺测量所有制剂的抑菌圈。

结果.示于图12的结果表明MG33PB对阴道加德那菌为有效的，其中在CBA平板上观察到抑菌圈(数据未示出)。与活性制剂相比，用安慰剂中任一的MG33PB安慰剂(0％、1％和2％BA)未看到活性如通过在平板上未观察到抑菌圈所显示的。

概述.与不含有MTZ的安慰剂凝胶相比，MG33PB对阴道加德那菌更有效。

本文引用的公开的专利、专利文件、文章、摘要和其它出版物通过引用整体并入本文如同各个单独地并入。如发生矛盾，则本专利说明书，包括定义，将占据主导地位。在不偏离本发明的范围和精神的情况下，对本发明的各种修改和更改对于本领域技术人员而言将是明显的。例证性实施方案和实施例仅以实施例提供且不旨在限制本发明的范围。本发明的范围仅通过如下所列的权利要求限制。

本申请中引用的所有出版物、专利、专利申请和其它文件为了所有目的在此通过引用整体并入其程度如同各个单独出版物、专利和专利申请或其它文件为了所有目的单独地表示为如此通过引用并入。

尽管已经例证和描述各种具体的实施方案，应理解在不偏离本发明的精神和范围的情况下，可以做出各种改变。

Claims

1.一种治疗患有和／或被诊断具有BV的受试者的方法，其包括向所述受试者阴道内施加包含一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物、约1重量％至约2重量％的甲硝唑(MTZ)和水的粘膜粘附水基凝胶，其中在单次施加中施加的粘膜粘附水基凝胶的量含有约60mg至约100mg的MTZ。

2.根据权利要求1所述的方法，其中用人类尸体皮肤进行的体外Franz细胞皮肤渗透实验中于角质层和接受液中测量的来自粘膜粘附水基凝胶的MTZ水平，当被归一化为浓度时，分别比由METROGEL

测量的MTZ水平高至少约25-55倍和低至少约1-20倍。

3.根据权利要求1所述的方法，其中在25℃下使用控制剪切率方法，Bohlin CVO100流变仪和表11的流变仪设置测量的所述粘膜粘附水基凝胶具有约200,000mPa至约400,000mPa的粘度。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶的粘膜粘附度在MG33PB的粘膜粘附度的约±10％内。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶包含约30重量％至约60重量％的水。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶基本上不含糊精、环糊精、烟酸和烟酰胺以及任选地表面活性剂。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶在25℃下至少6个月保持稳定。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶包括约1重量％至约3重量％的总粘膜粘附胶凝聚合物和约40-45重量％的针对MTZ的溶剂系统。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述溶剂系统包含在25℃下具有至少约20mg／g的饱和MTZ溶解度的一种或多种溶剂。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述溶剂系统包含在25℃下具有至少约50mg／g的饱和MTZ溶解度的一种或多种溶剂以及任选地在25℃下约20mg／g至约25mg／g范围内的饱和MTZ溶解度的一种或多种溶剂。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述溶剂系统包含一种或多种低级芳族醇以及任选地一种或多种低级脂肪族二醇和／或具有约200至约400的分子量的一种或多种聚氧化烯(“低级聚氧化烯”)。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述溶剂系统包含一种或多种低级芳族醇、一种或多种低级脂肪族二醇和／或一种或多种低级聚氧化烯。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述溶剂系统包含一种或多种低级芳族醇、一种或多种低级脂肪族二醇和一种或多种低级聚氧化烯。

14.根据权利要求11所述的方法，其中所述一种或多种低级芳族醇选自苯甲醇、2-甲基苯甲醇、苯氧乙醇及其混合物。

15.根据权利要求11所述的方法，其中所述一种或多种低级亚烷基二醇选自乙烷-1，2-二醇(乙二醇)、丙烷-1，2-二醇(丙二醇)及其混合物。

16.根据权利要求11所述的方法，其中所述一种或多种低级聚氧化烯选自聚氧乙烯(聚乙二醇)、聚氧丙烯(聚丙二醇)及其混合物。

17.根据权利要求11所述的方法，其中一种或多种低级脂肪族二醇和一种或多种低级聚氧化烯以重量比率为约1：1至约1：2的总低级脂肪族二醇与总低级聚氧化烯包括在所述溶剂系统中。

18.根据权利要求11所述的方法，其中所述溶剂系统包含约3.5重量％至约5重量％的总低级芳族醇和约95重量％至约95.5重量％的一种或多种低级亚烷基二醇和一种或多种低级聚氧化烯的混合物。

19.根据权利要求18所述的方法，其中总低级亚烷基二醇与总低级聚氧化烯的重量比率为约1：1至约1：1.67。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述溶剂系统由苯甲醇、丙烷-1，2-二醇和PEG400组成。

21.根据权利要求11所述的方法，其中所述溶剂系统由约3.5重量％至约5重量％的苯甲醇和约95重量％至约96.5重量％的丙烷-1，2-二醇和PEG400的混合物组成，其中所述丙烷-1，2-二醇与PEG400的重量比率为约1：1至约1：1.67。

22.根据权利要求1所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶进一步包含一种或多种防腐剂。

23.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种防腐剂为4-羟基苯甲酸的酯。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述一种或多种防腐剂选自4-羟基苯甲酸甲酯、4-羟基苯甲酸丙酯及其混合物。

25.根据权利要求1所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶的pH范围为约pH3.0至约pH5.0。

26.根据权利要求25所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶的pH为约pH4.0。

27.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物选自羟乙基纤维素、卡波姆、聚卡波非及其混合物。

28.根据权利要求1所述的方法，其中在单次施加中施加的粘膜粘附水基凝胶的量含有约65mg的MTZ。

29.根据权利要求1所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶包括约1重量％至约1.5重量％的MTZ。

30.根据权利要求29所述的方法，其中将所述粘膜粘附水基凝胶每天施加一次持续一至五天。

31.根据权利要求29所述的方法，其中将所述粘膜粘附水基凝胶每天施加一次持续一天。

32.根据权利要求29所述的方法，其中将所述粘膜粘附水基凝胶每天施加一次持续五天。

33.根据权利要求1所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶包括约1.3重量％的MTZ。

34.根据权利要求33所述的方法，其中将所述粘膜粘附水基凝胶每天施加一次持续一至五天。

35.根据权利要求33所述的方法，其中将所述粘膜粘附水基凝胶每天施加一次持续一天。

36.根据权利要求33所述的方法，其中将所述粘膜粘附水基凝胶每天施加一次持续五天。

37.根据权利要求1所述的方法，其中所述粘膜粘附水基凝胶包含约1.3重量％的MTZ、约2重量％的聚卡波非AA-1、约2重量％的苯甲醇、约15重量％的丙烷-1，2-二醇、约25重量％的PEG400、约0.02重量％的4-羟基苯甲酸甲酯和约0.08重量％的4-羟基苯甲酸丙酯。

38.根据权利要求37所述的方法，其中将所述粘膜粘附水基凝胶每天施加一次持续一至五天。

39.根据权利要求37所述的方法，其中将所述粘膜粘附水基凝胶每天施加一次持续一天。

40.根据权利要求37所述的方法，其中将所述粘膜粘附水基凝胶每天施加一次持续五天。

41.根据权利要求37所述的方法，其中在单次施加中施加的粘膜粘附水基凝胶的量含有约65mg的MTZ。

42.一种治疗患有和／或被诊断具有BV的受试者的方法，其包括向受试者阴道内施加足以实现临床治愈的许多施加的水基凝胶的量，其中所述水基凝胶包含一种或多种粘膜粘附聚合物、约1.3重量％的MTZ和水，并具有一种或多种选自以下组的特征或特性：

测量的MTZ水平高至少约25-55倍和低至少约1-20倍；

(b)在25℃下使用控制剪切率方法，Bohlin CVO100流变仪和表11的流变仪设置测量的粘度范围在约200,000mPa至约400,000mPa；

(c)粘膜粘附度在MG33PB的粘膜粘附度的约±10％内；

(d)包含约30重量％至约60重量％的水；

(e)基本上不含糊精、环糊精、烟酸和烟酰胺，以及任选地表面活性剂；

(f)在25℃下至少6个月保持稳定；且

(g)包括约1重量％至约3重量％的的总粘膜粘附聚合物和约40重量％至45重量％的针对MTZ的溶剂系统。

43.根据权利要求42所述的方法，其中施加水基凝胶的量以足以实现治疗治愈的许多施加。

44.一种粘膜粘附水基凝胶，其包含约1重量％至约2重量％的MTZ、约1重量％至约3重量％的一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物、约30重量％至约60重量％的针对MTZ的溶剂系统和水，其中用人类尸体皮肤进行的体外Franz细胞皮肤渗透实验中于角质层和接受液中测量的来自粘膜粘附水基凝胶的MTZ水平，当被归一化为浓度时，分别比由METROGEL

测量的MTZ水平高至少约25-55倍和低至少约1-20倍。

45.一种粘膜粘附水基凝胶，其包含约1重量％至约2重量％的MTZ、约1重量％至约3重量％的一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物、约30重量％至约60重量％的针对MTZ的溶剂系统和水，其中在25℃下使用控制剪切率方法，Bohlin CVO100流变仪和表11的流变仪设置测量，所述粘膜粘附水基凝胶具有约200,000mPa至约400,000mPa的粘度。

46.一种粘膜粘附水基凝胶，其包含约1重量％至约2重量％的MTZ、约1重量％至约3重量％的一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物、约30重量％至约60重量％的针对MTZ的溶剂系统和水，其中所述粘膜粘附水基凝胶具有在MG33PB的粘膜粘附度的约±10％内的粘膜粘附度。

47.一种粘膜粘附水基凝胶，其包含约1重量％至约2重量％的MTZ、约1重量％至约3重量％的一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物、约30重量％至约60重量％的针对MTZ的溶剂系统和约30重量％至约60重量％的水。

48.一种粘膜粘附水基凝胶，其包含约1重量％至约2重量％的MTZ、约1重量％至约3重量％的一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物、约30重量％至约60重量％的针对MTZ的溶剂系统和水，其中所述粘膜粘附水基凝胶基本上不含糊精、环糊精、烟酸和烟酰胺。

49.一种粘膜粘附水基凝胶，其包含约1重量％至约2重量％的MTZ、约1重量％至约3重量％的一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物、约30重量％至约60重量％的针对MTZ的溶剂系统和水，其中所述粘膜粘附水基凝胶在25℃下至少6个月保持稳定。

50.根据权利要求44所述的凝胶，其中所述粘膜粘附水基凝胶包括约1重量％至约3重量％的总粘膜粘附胶凝聚合物和约40重量％至45重量％的针对MTZ的溶剂系统。

51.根据权利要求50所述的凝胶，其中所述溶剂系统包含在25℃下具有至少约20mg／g的饱和MTZ溶解度的一种或多种溶剂。

52.根据权利要求51所述的凝胶，其中所述溶剂系统包含在25℃下具有至少约50mg／g的饱和MTZ溶解度的一种或多种溶剂以及任选地在25℃下具有约20mg／g至约25mg／g的饱和MTZ溶解度的一种或多种溶剂。

53.根据权利要求52所述的凝胶，其中所述溶剂系统包含一种或多种低级芳族醇，以及任选地一种或多种低级脂肪族二醇和／或分子量为约200至约400的一种或多种聚氧化烯(“低级聚氧化烯”)。

54.根据权利要求53所述的凝胶，其中所述溶剂系统包含一种或多种低级芳族醇、一种或多种低级脂肪族二醇和／或一种或多种低级聚氧化烯。

55.根据权利要求54所述的凝胶，其中所述溶剂系统包含一种或多种低级芳族醇、一种或多种低级脂肪族二醇和一种或多种低级聚氧化烯。

56.根据权利要求53所述的凝胶，其中所述一种或多种低级芳族醇选自苯甲醇、2-甲基苯甲醇、苯氧乙醇及其混合物。

57.根据权利要求53所述的凝胶，其中所述一种或多种低级亚烷基二醇选自乙烷-1，2-二醇(乙二醇)、丙烷-1，2-二醇(丙二醇)及其混合物。

58.根据权利要求53所述的凝胶，其中所述一种或多种低级聚氧化烯选自聚氧乙烯(聚乙二醇)、聚氧丙烯(聚丙二醇)及其混合物。

59.根据权利要求53所述的凝胶，其中一种或多种低级脂肪族二醇和所述一种或多种低级聚氧化烯以重量比率为约1：1至约1：2的总低级脂肪族二醇与总聚氧化烯包括在所述溶剂系统中。

60.根据权利要求53所述的凝胶，其中所述溶剂系统包含约3.5重量％至约5重量％的的总低级芳族醇和约95重量％至约95.5重量％的一种或多种低级亚烷基二醇与一种或多种低级聚氧化烯的混合物。

61.根据权利要求60所述的凝胶，其中总低级亚烷基二醇与总低级聚氧化烯的重量比率为约1：1.67。

62.根据权利要求53所述的凝胶，其中所述溶剂系统由苯甲醇、丙烷-1，2-二醇和PEG400组成。

63.根据权利要求53所述的凝胶，其中所述溶剂系统由约3.5重量％至约5重量％的苯甲醇和约95重量％至约96.5重量％的丙烷-1，2-二醇和PEG400的混合物组成，其中所述丙烷-1，2-二醇与PEG400的重量比率为约1：1.67至约1：1。

64.根据权利要求44所述的凝胶，其中所述粘膜粘附水基凝胶进一步包含一种或多种防腐剂。

65.根据权利要求64所述的凝胶，其中所述一种或多种防腐剂为4-羟基苯甲酸的酯(对羟苯甲酸酯)。

66.根据权利要求65所述的凝胶，其中所述一种或多种防腐剂选自4-羟基苯甲酸甲酯(甲基对羟苯甲酸酯)、4-羟基苯甲酸丙酯(丙基对羟苯甲酸酯)及其混合物。

67.根据权利要求44所述的凝胶，其中所述粘膜粘附水基凝胶的pH范围为约pH3.0至约pH5.0。

68.根据权利要求67所述的凝胶，其中所述粘膜粘附水基凝胶的pH为约pH4.0。

69.根据权利要求44所述的凝胶，其中所述一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物选自羟乙基纤维素、卡波姆、聚卡波非及其混合物。

70.根据权利要求44所述的凝胶，其中所述粘膜粘附水基凝胶包含约1.3重量％的MTZ、约2重量％的聚卡波非AA-1、约2重量％的苯甲醇、约15重量％的丙烷-1,2-二醇、约25重量％的PEG400、约0.02重量％的4-羟基苯甲酸甲酯和约0.08重量％的4-羟基苯甲酸丙酯。

71.一种粘膜粘附水凝胶，其包含约1.3重量％的MTZ、约1重量％至约3重量％的一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物和约40重量％至约45重量％的针对MTZ的溶剂系统，其中所述溶剂系统包含苯甲醇、丙烷-1，2-二醇和PEG400并且其中当储存在约25℃至约40℃的温度下时，所述粘膜粘附水凝胶稳定保持18个月。

72.根据权利要求71所述的凝胶，其中所述一种或多种粘膜粘附胶凝聚合物选自交联的丙烯酸聚合物和纤维素聚合物。

73.根据权利要求72所述的凝胶，其中所述交联的丙烯酸聚合物选自卡波姆和聚卡波非。

74.根据权利要求72所述的凝胶，其中所述纤维素聚合物选自羟乙基纤维素、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素。

75.根据权利要求71所述的凝胶，其包含约2重量％的总粘膜粘附胶凝聚合物。

76.一种适用于阴道内施加的高剂量粘膜粘附MTZ水基凝胶的单位剂型，其包含根据权利要求45含有约65mg至约100mg包装在适用于阴道内施加的容器中的MTZ的凝胶的量。

77.根据权利要求76所述的单位剂型，其包括含有约65mgMTZ的凝胶的量。