1.一种水稻转基因检测试剂盒,由引物组合和膜芯片组成,其特征在于引物组合为6重双启动寡核苷酸引物组合,各对引物的碱基序列5’-3’如下,其中碱基I为次黄嘌呤核苷酸:
Cry1Ab:正向引物: ATTCAATTCAACGACATGAAIIIIICCTTGAC
反向引物:TTGTAACGGCTATTGATGGTIIIIICATCGAA;
Cry1Ac:正向引物:TTCAGGACCAGGATTCACTGIIIIIGACCTCG
反向引物:AGGTGAATAGGGGTCACAGAIIIIIACCTCAC;
BAR:正向引物: GACGACCTCGTCCGTCTGCGIIIIIGCTATCC
反向引物:CAGCAGGTGGGTGTAGAGCGIIIIICCCAGTC;
CaMV35S:正向引物:GATAAAGGAAAGGCCATCGTIIIIIATGCCTC
反向引物:TGGGATTGTGCGTCATCCCTIIIIICAGTGGA;
NOS 3’:正向引物: TTAAGATTGAATCCTGTTGCIIIIITTGCGAT
反向引物:CGCGCGCGATAATTTATCCTIIIIIGCGCGCT;
gos9:正向引物: ACAGATATATAGGGCAGAAAIIIIIGCTACAA
反向引物:CGTCACGTTCTTCAGGCTATIIIIIGGTACAG;
膜芯片为顺序固定在支持膜表面的6组探针序列和一组阳性对照(Positive)探针序列,6组探针序列和阳性对照探针序列的碱基序列5’-3’如下,各探针的5’端做氨基标志:
Cry1Ab探针: NH2-5’-GCAGCTAATCTTCACCTCAGCGTGCTTCGAGACGTTA
GCGTGTTTGGGCAAAGGTGGGG-3’;
Cry1Ac探针: NH2-5’-TAGAGGGTATATTGAAGTTCCAATTCACTTCCCATCCA
CATCTACCAGATATAGAGTTC-3’ ;
BAR探针: NH2-5’-CGCAACGCCTACGACTGGACGGCCGAGTCGACCGTGTA
CGTCTCCCCCCGCCACCAGCG-3’;
CaMV35S探针: NH2-5’-AGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCA
CGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATG-3’;
NOS 3’探针: NH2-5’-ATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATA
CATTTAATACGCGATAGAAAA-3’;
gos9探针: NH2-5’-GCACAAAGCTTGTTAAGATTGGTCCATGGGGTGGAAAT
GGAGGAGGTTCTGTAGACATA-3’;
Positive探针: NH2-5’-TAGCAAGGATGAGTATTCGAACAGTTAGAGGCAGT
CAGGGAGAATCACTACGTACAAGC-3’。
2. 一种水稻转基因检测试剂盒,由引物组合和膜芯片组成,其特征在于引物组合为6重双启动寡核苷酸引物组合,各对引物的碱基序列5’-3’如下,其中碱基I为次黄嘌呤核苷酸:
Cry1Ab:正向引物: ATTCAATTCAACGACATGAAIIIIICCTTGAC
反向引物:TTGTAACGGCTATTGATGGTIIIIICATCGAA;
Cry1Ac:正向引物:TTCAGGACCAGGATTCACTGIIIIIGACCTCG
反向引物:AGGTGAATAGGGGTCACAGAIIIIIACCTCAC;
BAR:正向引物: GACGACCTCGTCCGTCTGCGIIIIIGCTATCC
反向引物:CAGCAGGTGGGTGTAGAGCGIIIIICCCAGTC;
CaMV35S:正向引物:GATAAAGGAAAGGCCATCGTIIIIIATGCCTC
反向引物:TGGGATTGTGCGTCATCCCTIIIIICAGTGGA;
NOS 3’:正向引物: TTAAGATTGAATCCTGTTGCIIIIITTGCGAT
反向引物:CGCGCGCGATAATTTATCCTIIIIIGCGCGCT;
gos9:正向引物: ACAGATATATAGGGCAGAAAIIIIIGCTACAA
反向引物:CGTCACGTTCTTCAGGCTATIIIIIGGTACAG;
膜芯片为顺序固定在支持膜表面的6组探针序列和一组阳性对照(Positive)探针序列,6组探针序列和阳性对照探针序列的碱基序列5’-3’如下,各探针的5’端做氨基标志:
Cry1Ab探针: NH2-5’-GCAGCTAATCTTCACCTCAGCGTGCTTCGAGACGTTA
GCGTGTTTGGGCAAAGGTGGGG-3’;
Cry1Ac探针: NH2-5’-TAGAGGGTATATTGAAGTTCCAATTCACTTCCCATCCA
CATCTACCAGATATAGAGTTC-3’ ;
BAR探针: NH2-5’-CGCAACGCCTACGACTGGACGGCCGAGTCGACCGTGTA
CGTCTCCCCCCGCCACCAGCG-3’;
CaMV35S探针: NH2-5’-AGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCA
CGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATG-3’;
NOS 3’探针: NH2-5’-ATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATA
CATTTAATACGCGATAGAAAA-3’;
gos9探针: NH2-5’-GCACAAAGCTTGTTAAGATTGGTCCATGGGGTGGAAAT
GGAGGAGGTTCTGTAGACATA-3’;
Positive探针: NH2-5’-TAGCAAGGATGAGTATTCGAACAGTTAGAGGCAGT
CAGGGAGAATCACTACGTACAAGC-3’;
引物组合中有非对称PCR扩增引物,为5’端带生物素标志的Tag引物,其碱基顺序如下所示:
Tag引物:biotin-5’- GACGGACACCTACCCATATCACCCTTGACG -3’。
3. 一种水稻转基因检测试剂盒,由引物组合、膜芯片和辅料组成,其特征在于引物组合为6重双启动寡核苷酸引物组合,各对引物的碱基序列5’-3’如下,其中碱基I为次黄嘌呤核苷酸:
Cry1Ab:正向引物: ATTCAATTCAACGACATGAAIIIIICCTTGAC
反向引物:TTGTAACGGCTATTGATGGTIIIIICATCGAA;
Cry1Ac:正向引物:TTCAGGACCAGGATTCACTGIIIIIGACCTCG
反向引物:AGGTGAATAGGGGTCACAGAIIIIIACCTCAC;
BAR:正向引物: GACGACCTCGTCCGTCTGCGIIIIIGCTATCC
反向引物:CAGCAGGTGGGTGTAGAGCGIIIIICCCAGTC;
CaMV35S:正向引物:GATAAAGGAAAGGCCATCGTIIIIIATGCCTC
反向引物:TGGGATTGTGCGTCATCCCTIIIIICAGTGGA;
NOS 3’:正向引物: TTAAGATTGAATCCTGTTGCIIIIITTGCGAT
反向引物:CGCGCGCGATAATTTATCCTIIIIIGCGCGCT;
gos9:正向引物: ACAGATATATAGGGCAGAAAIIIIIGCTACAA
反向引物:CGTCACGTTCTTCAGGCTATIIIIIGGTACAG;
膜芯片为顺序固定在支持膜表面的6组探针序列和一组阳性对照(Positive)探针序列,6组探针序列和阳性对照探针序列的碱基序列5’-3’如下,各探针的5’端做氨基标志:
Cry1Ab探针: NH2-5’-GCAGCTAATCTTCACCTCAGCGTGCTTCGAGACGTTA
GCGTGTTTGGGCAAAGGTGGGG-3’;
Cry1Ac探针: NH2-5’-TAGAGGGTATATTGAAGTTCCAATTCACTTCCCATCCA
CATCTACCAGATATAGAGTTC-3’ ;
BAR探针: NH2-5’-CGCAACGCCTACGACTGGACGGCCGAGTCGACCGTGTA
CGTCTCCCCCCGCCACCAGCG-3’;
CaMV35S探针: NH2-5’-AGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCA
CGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATG-3’;
NOS 3’探针: NH2-5’-ATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATA
CATTTAATACGCGATAGAAAA-3’;
gos9探针: NH2-5’-GCACAAAGCTTGTTAAGATTGGTCCATGGGGTGGAAAT
GGAGGAGGTTCTGTAGACATA-3’;
Positive探针: NH2-5’-TAGCAAGGATGAGTATTCGAACAGTTAGAGGCAGT
CAGGGAGAATCACTACGTACAAGC-3’;
所述引物组合中有非对称PCR扩增引物,为5’端带生物素标志的Tag引物,其碱基顺序如下所示:
Tag引物:biotin-5’- GACGGACACCTACCCATATCACCCTTGACG -3’;
辅料为脱氧核糖核苷三磷酸、EX-Taq聚合酶和5’端带生物素标志的阳性寡核苷酸单链DNA,5’端带生物素标志的阳性寡核苷酸单链DNA的碱基顺序为biotin-5'- GCTTGTACGTAGTGATTCTCCCTGACTGCCTCTAACTGTTCGAATACTCATCCTTGCTA-3’。
4. 一种水稻转基因检测试剂盒,由引物组合、膜芯片、辅料和配液组成,其特征在于引物组合为6重双启动寡核苷酸引物组合,各对引物的碱基序列5’-3’如下,其中碱基I为次黄嘌呤核苷酸:
Cry1Ab:正向引物: ATTCAATTCAACGACATGAAIIIIICCTTGAC
反向引物:TTGTAACGGCTATTGATGGTIIIIICATCGAA;
Cry1Ac:正向引物:TTCAGGACCAGGATTCACTGIIIIIGACCTCG
反向引物:AGGTGAATAGGGGTCACAGAIIIIIACCTCAC;
BAR:正向引物: GACGACCTCGTCCGTCTGCGIIIIIGCTATCC
反向引物:CAGCAGGTGGGTGTAGAGCGIIIIICCCAGTC;
CaMV35S:正向引物:GATAAAGGAAAGGCCATCGTIIIIIATGCCTC
反向引物:TGGGATTGTGCGTCATCCCTIIIIICAGTGGA;
NOS 3’:正向引物: TTAAGATTGAATCCTGTTGCIIIIITTGCGAT
反向引物:CGCGCGCGATAATTTATCCTIIIIIGCGCGCT;
gos9:正向引物: ACAGATATATAGGGCAGAAAIIIIIGCTACAA
反向引物:CGTCACGTTCTTCAGGCTATIIIIIGGTACAG;
膜芯片为顺序固定在支持膜表面的6组探针序列和一组阳性对照(Positive)探针序列,6组探针序列和阳性对照探针序列的碱基序列5’-3’如下,各探针的5’端做氨基标志:
Cry1Ab探针: NH2-5’-GCAGCTAATCTTCACCTCAGCGTGCTTCGAGACGTTA
GCGTGTTTGGGCAAAGGTGGGG-3’;
Cry1Ac探针: NH2-5’-TAGAGGGTATATTGAAGTTCCAATTCACTTCCCATCCA
CATCTACCAGATATAGAGTTC-3’ ;
BAR探针: NH2-5’-CGCAACGCCTACGACTGGACGGCCGAGTCGACCGTGTA
CGTCTCCCCCCGCCACCAGCG-3’;
CaMV35S探针: NH2-5’-AGGAGCATCGTGGAAAAAGAAGACGTTCCAACCA
CGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATG-3’;
NOS 3’探针: NH2-5’-ATGAGATGGGTTTTTATGATTAGAGTCCCGCAATTATA
CATTTAATACGCGATAGAAAA-3’;
gos9探针: NH2-5’-GCACAAAGCTTGTTAAGATTGGTCCATGGGGTGGAAAT
GGAGGAGGTTCTGTAGACATA-3’;
Positive探针: NH2-5’-TAGCAAGGATGAGTATTCGAACAGTTAGAGGCAGT
CAGGGAGAATCACTACGTACAAGC-3’;
所述引物组合中有非对称PCR扩增引物,为5’端带生物素标志的Tag引物,其碱基顺序如下所示:
Tag引物:biotin-5’- GACGGACACCTACCCATATCACCCTTGACG -3’;
辅料为脱氧核糖核苷三磷酸、EX-Taq聚合酶和5’端带生物素标志的阳性寡核苷酸单链DNA,5’端带生物素标志的阳性寡核苷酸单链DNA的碱基顺序为biotin-5'- GCTTGTACGTAGTGATTCTCCCTGACTGCCTCTAACTGTTCGAATACTCATCCTTGCTA-3’;
配液为10×PCR缓冲液、预杂交液、杂交液、洗液、封闭液、链酶亲和素标记辣根过氧化物酶和四甲基联苯胺显色液。
5.根据权利要求1或2或3或4所述的水稻转基因检测试剂盒,其特征在于所述支持膜为硝酸纤维素膜或尼龙膜。