CN103751210A

CN103751210A - 一种天然多种形态砷的提取液的应用

Info

Publication number: CN103751210A
Application number: CN201410004115.8A
Authority: CN
Inventors: 张景红; 杨礼
Original assignee: Huaqiao University
Current assignee: Huaqiao University
Priority date: 2014-01-02
Filing date: 2014-01-02
Publication date: 2014-04-30
Anticipated expiration: 2034-01-02
Also published as: CN103751210B

Abstract

本发明提供一种天然多种形态砷的提取液的应用，所述天然多种形态砷的提取液可用来制备抗肿瘤干细胞、抗乙肝和抗艾滋病病毒的药物；所述天然多种形态砷的提取液可以添加药学上可以接受的辅料制备成软胶囊、硬胶囊、滴丸、片剂、颗粒剂、注射剂或者粉针剂、口服液、微囊剂、滴丸剂、气雾剂和栓剂制剂，经口服、注射或直肠方式给药。本发明能够抑制乙肝和抗艾滋病等病毒，为天然砷剂的开发利用扩展了应用范围。

Description

一种天然多种形态砷的提取液的应用

【技术领域】

本发明涉及一种天然多种形态砷的提取液的应用。

【背景技术】

肿瘤是威胁人类健康的最常见恶性肿瘤，尽管放化疗和手术方法不断进展，但是病死率仍然较高。例如，作为常见类型非小细胞肺癌(non-smallcell lung cancer,NSCLC)总的5年生存率仍不足15%。基于肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSC)学说认为，具有自我更新和无限增殖能力的肿癌干细胞是肿癌发生和复发的“根源”（公开文献为：杨明.纳米雄黄对肺癌和肝癌细胞及其肿瘤干细胞的凋亡诱导作用.[D].兰州大学博士学位论文：兰州.2010,P10～15）。为此，针对抑制肿癌干细胞的药物筛选策略，将是目前肿癌治疗的一条新途径。

随着研究的深入，砷剂（包括As₂O₃和雄黄）又重新受到关注，一度因为毒性较大而不被重用As₂O₃，被发现可以通过降低癌蛋白PML水平来消除白血病干细胞LICs，其可能通过消除LICs治愈包括粒系统、淋巴系统的恶性肿瘤（公开文献为：Zhang XW,Yan XJ,Zhou ZR,et al.Arsenic Trioxide Controlsthe Fate of the PML-RAR Oncoprotein by Directly Binding PML.Science[J],2010,328:240-243），最近也发现，纳米雄黄可以有效诱导肺癌和肝癌干细胞发生凋亡。与As₂O₃相比，天然砷剂具有资源丰富、价格低廉、可以口服使用等特点，但是在多靶点、抑制肿瘤干细胞的效应、范围以及作用广度上，As₂O₃都表现出了更强的药物效应。这一差距，也引发国内有关学者，针对天然砷剂的药效物质是粗糙的原粉还是体内代谢砷的争论。现代分析证明：砷在动物体内的代谢产物，可能存在多种砷代谢物种，包括：iAsIII、iAsV、MMAV、DMAV等（公开文献如下：许琚辉，王洪玮，崔蓉等.雄黄及含雄黄中成药中砷的形态分析[J].药物分析杂志，2007，27(3):395～396张景红,李红玉.高效毛细管电泳法测定雄黄微生物炮制液中砷形态成分[J].时珍国医国药，2011.22（2）：409～410），为此，利用现代生物技术，体外仿生代谢天然砷矿粉，产生多种与体内代谢相同或不同的形态的天然可溶解砷，组成组合物，代替价格昂贵，临床使用肝肾毒性加大，难以普及的三氧化二砷注射液，作为现有一线抗癌砷剂三氧化二砷的补充或替代品，将是天然砷剂研究的一个重要方向。

本发明人课题组的研究发现，海洋微生物代谢并溶解的各种形态砷，其在动物组织中砷蓄积毒性大幅度降低，在动物体内几乎没有分布（公开文献如下：张景红，樊秦，李红玉.雄黄及微生物炮制液砷形态和毒性分析[J].中药材，2010，11(5):283-285）。与此同时，体内外药理活性试验表明，海洋微生物多形态代砷化合物，不仅可以诱导多药耐药白血病细胞凋亡，而且可以下调MDR1/P-gp耐药基因，达到其逆转多药耐药的作用（公开文献如下：张景红,李红玉.雄黄微生物提取液对K562/ADM细胞P-pg蛋白和MDRI基因表达的影响[J].中国临床药理学与治疗学，2009，14(8):855～861）。而且更重要的是，其诱导效应强于同类砷剂亚砷酸。所以，亚砷酸（As₂O₃在水中溶解的主要形式）并非是逆转肿瘤多药耐药作用的唯一活性物质，从天然矿物资源中开发多种形态的代谢砷作为As₂O₃的重要补充，将是极有应用前景的药物开发方向。

在我国虽有天然砷例如，雄黄矿（As₂S₃）、雌黄（As₂S₃）和雄黄矿（As₂O₃、鸡冠石）等含量丰富，而且已经作为临床药物在治疗肿瘤、寄生虫、疱疹病毒等方面取得显著的疗效。但是现代报道的制剂工艺包括水飞+醋制、纳米化和微粉化等方法，得到仅仅是混悬液，无法满足现在药物制剂的要求，本发明课题组公开中国发明200610200067.5专利，也成功利用多种冶金用嗜酸性硫杆菌，提取雄黄产生含有包含砷酸（III，V）、甲基MMA（V）和大量的辅助元素（铁和铁的化和物）的混合提取液（公开文献如下：李红玉，张景红，支德娟.矿物药中的重金属去除方法.中国专利[P]：200610200067.5,2006-1-02.），这些方法虽然可以得到含有部分形态砷的混合液，但是由于混合有部分其他成分，目前无法确定其确切的活性成分，无法和其他药物或者辅料组成复合物，加之其体外抑制肺癌和肝癌等肿瘤细胞的作用，明显低于As₂O₃，而且更重要的是，目前尚未见到其可以同时抑制肿瘤干细胞、乙肝和艾滋病病毒的类似作用。

为了得到多种天然多种形态、可溶解砷的组合物，申请人在申请号为201010580193.4的中国发明专利公开了一种海洋微生物提取天然、多形态、抑制肿瘤的含砷化合物提取液的制备方法及其应用，其中利用申请人自主分离的多种海洋微生物，代谢雄黄矿（As₂O₃、As₄S₄）和或者雌黄矿（As₂S₃）得到含砷酸（AsIII、AsV）、亚砷酸（V）、一甲基砷酸MMA（III、V）、二甲基砷酸DMA（III、V）（DMA）、一甲基一硫代砷酸MMTA、二甲基二硫代砷酸DMDTA、三甲基胂氧（TMAO）、砷硼烷（AsB，arsenobetaine）和砷胆碱（AsC）等的多种天然多形态砷的提取液。

【发明内容】

本发明要解决的技术问题，在于提供一种天然多种形态砷的提取液的应用，能够抑制乙肝和抗艾滋病等病毒，为天然砷剂的开发利用扩展了应用范围。

本发明是这样实现的：

一种天然多种形态砷的提取液的应用，所述天然多种形态砷的提取液可用来制备抗肿瘤干细胞、抗乙肝和抗艾滋病病毒的药物。

进一步地，所述天然多种形态砷的提取液可以添加药学上可以接受的辅料制备成软胶囊、硬胶囊、滴丸、片剂、颗粒剂、注射剂或者粉针剂、口服液、微囊剂、滴丸剂、气雾剂和栓剂制剂，经口服、注射或直肠方式给药。

本发明具有如下优点：

（1）本发明利用具有仿生代谢能力的特殊海洋微生物对天然药物含砷矿物进行微生物提取，从而得到多种与体内代谢相同或者不同的，具有减毒、增效的多种天然形态砷组合的提取液，在增强其抑制肿癌干细胞效应的同时，拓展其应用范围，同时具有抑制乙肝和艾滋病效应，从而为天然砷剂的开发和利用拓展了应用范围。

（2）本发明提取液可以同时含有含砷酸（AsIII、AsV）、亚砷酸（V）和或一甲基砷酸MMA（III、V）和或二甲基砷酸DMA（III、V）（DMA）和或一甲基一硫代砷酸MMTA和或二甲基二硫代砷酸DMDTA和或三甲基胂氧（TMAO）和或砷硼烷（AsB，arsenobetaine）和或砷胆碱（AsC）等多种可溶性砷形态成分，与纳米雄黄和采用多种冶金用嗜酸性硫杆菌制得雄黄微生物混合浸出液相比，其具有独特的抑制肿癌干细胞效应，而且本发明提取液在抑制肿瘤干细胞的同时，又具有良好的抑制乙肝和艾滋病的作用，显示了良好的药物开发前景。

【具体实施方式】

本发明涉及一种天然多种形态砷的提取液的应用，所述天然多种形态砷的提取液可用来制备抗肿瘤干细胞、抗乙肝和抗艾滋病病毒的药物。

所述天然多种形态砷的提取液可以添加药学上可以接受的辅料制备成软胶囊、硬胶囊、滴丸、片剂、颗粒剂、注射剂或者粉针剂、口服液、微囊剂、滴丸剂、气雾剂和栓剂制剂，经口服、注射或直肠方式给药。

以下结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1制备天然多种形态砷的提取液

按照申请号为201010580193.4，公开日为2011-04-20的发明专利公开的一种海洋微生物提取天然、多形态、抑制肿瘤的含砷化合物提取液的制备方法及其应用中所述的制备方法处理雄黄矿（As₂O₃，含量36%、As₄S₄，含量62%）和或者雌黄矿（As₂S₃，72%，AsC，25%）矿粉，实施方案具体包括如下步骤：

步骤1：将砷化矿粉20g,粉碎至200目后，按照1：100（重量和混合液体积比）加入1mol/L的硫酸和15%三氯化铁的组成的混合液（体积比8:2）中，然后在转速为180r/min、温度为30℃的恒温摇床中培养15d，得到提取液；将提取液用孔径为0.45μm的滤膜过滤，得到滤液；所述滤液在温度为20℃、磁力搅拌转速为800～1000r/min的条件下进行反应沉淀，2min后过滤，得到沉淀物；然后沉淀物用去离子水洗涤后，在60℃温度下干燥，即得微生物代谢用超微粉体细粉。

步骤2：称取步骤1所得超细粉0.1g，于灭菌后的250mL锥形瓶中，加入LA液体培养基90mL，接种体积分数为20％的组合优选海洋微生物菌种，然后在30℃、pH为5.0振荡速度为180r/min时摇瓶浸出15d；定时进行处理液中含砷酸（AsIII、AsV）、亚砷酸（V）、一甲基砷酸MMA（III、V）、二甲基砷酸DMA（III、V）（DMA）、一甲基一硫代砷酸MMTA、二甲基二硫代砷酸DMDTA、三甲基胂氧（TMAO）、砷硼烷（AsB，arsenobetaine）和砷胆碱（AsC）等检测，当上述多种成分的总含量达到要求后停止震荡培养，13000r/min离心后取上清液，再过滤除菌后，所得上清液就是含有天然多种形态砷的提取液。

所述的含量检测方法为：毛细管电泳分离法：条件为：BGE：PDC/10mmol.L^-1和CTAOH/1mmol.L^-1、电压25KV、温度25℃、pH11.0、紫外检测波长设定在216nm。

所述的天然多种形态砷的提取液A：每单位制剂中含砷化合物含量组成经检测得到为：砷酸（V）15％；；亚砷酸（III）3.5％；甲基砷酸（III）1.5％，甲基砷酸（V）12.5％；二甲基砷酸（DMA）3％；三甲基胂氧（TMAO）7.5％；砷硼烷砷硼烷（AsB）2％；砷胆碱（AsC）5％。;其制备方法按照实施例1制备，采用的砷化矿粉为雄黄矿（As₂O₃，含量36%、As₄S₄，含量62%），优选海洋微生物组合为：A（海水产碱菌）：O（黄色短杆菌）:B(粪产碱杆菌)为5:2:3（体积比）。

所述的天然多种形态砷的提取液B：每单位制剂中含砷化合物含量组成经检测得到为：砷酸（V）7.5％；亚砷酸（III）3.5％；甲基砷酸（III）1.5％，甲基砷酸（V）12.5％；一甲基一硫代砷酸MMTA3.5％；二甲基二硫代砷酸DMDTA4％；二甲基砷酸（DMA）3％；三甲基胂氧（TMAO）7.5％；砷硼烷砷硼烷（AsB）2％；砷胆碱（AsC）5％。。其制备方法按照实施例1制备，采用的砷化矿粉为雄黄矿（As₂O₃，含量36%、As₄S₄，含量62%）优选海洋微生物组合为：A（海水产碱菌）：O（黄色短杆菌）:B(小克银汉霉)为8:3:5（体积比）。

所述的天然多种形态砷的提取液C：每单位制剂中含砷化合物含量组成经检测得到为：砷酸（V）25％；；亚砷酸（III）12.5％；甲基砷酸（III）12.5％，甲基砷酸（V）20％；二甲基砷酸（DMA）10％；三甲基胂氧（TMAO）5％；砷硼烷砷硼烷（AsB）5％；砷胆碱（AsC）9.99％。其制备方法按照实施例1制备，采用的砷化矿粉为雄黄矿（As₂O₃，含量36%、As₄S₄，含量62%），优选海洋微生物组合为：A（海水产碱菌）：O（黄色短杆菌）：B(新月柄杆菌)为7:1:6（体积比）。其制备方法按照实施例1制备，采用的砷化矿粉为雄黄矿（As₂O₃，含量36%、As₄S₄，含量62%）。

实施例2、天然多种形态砷的提取液药效学评价实验例

以下实验例中，受试样品由本发明制备方法实施例提供，以As₂O₃作为阳性对照。

所述天然多种形态砷的提取液A：每单位制剂中含砷化合物含量组成经检测得到为：砷酸（V,3nM）；亚砷酸（III，0.7nM）；甲基砷酸（III，0.3nM），甲基砷酸（V,2.5nM）；二甲基砷酸（DMA，0.6M）；三甲基胂氧（TMAO，1.5nM）；砷硼烷（AsB，0.4nM）；砷胆碱（AsC，1nM）；

提取液B：每单位制剂中含砷化合物含量组成经检测得到为：砷酸（V,1.5nM）；亚砷酸（III，0.7nM）；甲基砷酸（III，0.3nM），甲基砷酸（V,2.5nM）；一甲基一硫代砷酸（0.7nM）；二甲基二硫代砷酸DMDTA（0.8nM）；二甲基砷酸（DMA，0.6M）；三甲基胂氧（TMAO，1.5nM）；砷硼烷（AsB，0.4nM）；砷胆碱（AsC，1nM）；

提取液C：每单位制剂中含砷化合物含量组成经检测得到为：砷酸（V,6nM）；亚砷酸（III，1.4nM）；甲基砷酸（III，0.6nM），甲基砷酸（V,5nM）；二甲基砷酸（DMA，1.2M）；三甲基胂氧（TMAO，3.0nM）；砷硼烷（AsB，0.8nM）；砷胆碱（AsC，1.98nM）；

阳性药物为As₂O₃溶液（10nM）：所述As₂O₃溶液配置：称取60mg As₂O₃于2mL1mol/L的NaOH溶液中，加热水浴溶解，用适量1mol/L HCL调节pH为7.4，加入适量注射用水，配置成0.1mol/L，再用注射用水稀释至10nM即得，每单位制剂中含砷化合物含量组成经检测得到为：砷酸（V,10nM）

1、本发明的3种天然多形态砷提取液对体外培养的人肺癌细胞A549细胞的生长抑制作用

a.普通A549细胞培养：将普通A549细胞在含有10%胎牛血清的RPMI1640培养基中，在37℃，5%CO2培养箱内饱和湿度条件下培养至对数生长期。

b.A549细胞球的肿瘤干细胞培养：将普通对数生长期的A549细胞消化细胞后，转化成含有20l/ml B27，20ng/ml EGF，20ng/ml bFGF的DMEM/F12培养基继续培养至对数生长期后再消化细胞，并将其制成单细胞悬液以20000个/孔的密度种植6孔板中，每孔2ml培养液，每隔2～3d半量换液，在37℃，5%CO₂条件下培养4-5天后，显微镜下观察细胞成球情况和形态，连续传代3次，取第3代细胞球，运用RT-PCR检测A549细胞球的肿瘤干细胞中干细胞转录因子Sox2和Oct4表达情况，筛选Sox2和Oct4表达较高的A549细胞球的肿瘤干细胞进入细胞增殖实验。

c.本发明3种提取液抑制A549细胞球的肿瘤干细胞增殖作用评价

不同提取液抑制A549细胞及细胞球增殖能力检测：将A549细胞和A549细胞球制成单细胞悬液按1×10⁴/孔的密度分别加入96孔板，每孔100ul，分别加入提取液A、B、C和阳性药物为As₂O₃溶液，对照组只加培养基在37℃，5%CO₂条件下培养72h后，加90uL基础培养基和MTT10uL(5mg/ml)，37℃，4h，除去培养液，每孔加入150ul DMSO，摇晃10min酶标仪测定光密度值［D(490)］，采用logit法计算组合物半数抑制浓度IC50，结果判定标准：有效IC50<10nM，有效，IC50>10nM，无效，IC50结果见表1所示：

结果：在本发明的3种提取液中，提取液A、B和C对体外培养的人肺癌细胞A549和A549细胞球的肿瘤干细胞的生长，具有良好的抑制增殖作用，虽然提取液C中，其含砷总量高于阳性药物As₂O₃组，但是其作用却低于阳性药物。而在与As₂O₃组含砷总量相同的条件下，提取液B其抑制作用则强于阳性药物As₂O₃组。据此说明含有天然多形态砷的提取液B组，其抑制肿瘤干细胞的药物效应更佳。具体结果表1:

表1本发明3种提取液对人肺癌A549细胞和

A549细胞球的肿瘤干细胞的生长抑制作用

2、本发明的3种天然多形态砷提取液，对体外感染艾滋病HIV-1IIIB病毒的TZM-bl细胞的生长抑制作用

取对数生长期的TZM-BL细胞，按2×10⁴/mL孔密度接种于96孔细胞培养板中，100μL/孔，置于细胞培养箱(37℃，5%CO2)中培养。隔日待细胞贴壁且生长良好，吸去培养液，再用无血清培养基稀释的单独提取液A、B、C、和阳性药物为As₂O₃溶液，并分别加入96孔培养板，设置三个平行孔，37℃，5%CO₂培养3h后，加入1000×TCID50的HIV-1IIIB病毒100μL感染细胞，然后继续培养24h后，利用Bright-Glo Luciferase Assay试剂(Promega)测定每孔的相对荧光单位(RLU)，根据Prism Graphruan软件计算化合物的半数抑制浓度IC50，结果判定标准：有效IC50<10nM，无效IC50>10nM。IC50结果见表2所示：

表2本发明3种提取液对体外感染艾滋病HIV-1IIIB病毒的TZM-bl细胞的生长抑制作用

结果：在本发明的3种提取液中，提取液A、B和C能够抑制体外感染艾滋病HIV-1IIIB病毒的TZM-bl细胞的生长，显示其具有有效的体外抗艾滋病病毒作用，虽然提取液C中，其含砷总量高于阳性药物As₂O₃组，但是其作用却低于阳性药物。而在与As₂O₃组含砷总量相同的条件下，提取液B其抑制作用则强于阳性药物As₂O₃组，据此说明含有天然多形态砷的提取液B组，其抑制艾滋病病毒作用的药物效应更佳。具体结果表2:

3、本发明的3种天然多形态砷提取液，对HepG2.2.15细胞的体外HBV抗原抑制的作用

取对数生长期的HepG2.2.15细胞，按2×10⁴/mL孔密度接种于24孔细胞培养板中，1000μL/孔，每个浓度共设3个复孔，置细胞培养箱(37℃，5%CO2)中培养。隔日待细胞贴壁且生长良好，吸去培养液，再分别加入提取液A、B、C和阳性药物为As₂O₃溶液，各浓度的完全培养液1000μL，每个浓度设3个复孔，置细胞培养箱(37℃，5%CO2)中培养。等量的完全培养液作空白对照，在连续培养72h后，吸取细胞培养液分别加于1.5mL无菌Eppnedorf管中，于-20℃保存待检。将-20℃保存的细胞培养液用同时同批乙型肝炎病毒表面抗原、E抗原酶联免疫试剂盒检测HBsAg和HBeAg的效价。采用下列公式计算抗原的的抑制百分率=[l-实验孔抗原OD值/对照孔抗原OD值]×100%。结果判定标准：有效：化合物浓度为10nM时，其抑制HBsAg、HBeAg的抑制率>50%；无效：化合物浓度为10nM时，其抑制HBsAg、HBeAg的抑制率<50%。其结果见表3所示：

表3本发明的3种提取液对HepG2.2.15细胞系

HBsAg、HBeAg表达的抑制作用

结果：在本发明的3种提取液中，提取液A、B和C均能具有剂量依赖性地抑制HepG2.2.15细胞的HBV抗原（HBsAg、HBeAg）的作用，显示其具有有效的体外抗乙肝病毒作用，具体结果表3。虽然提取液C中，其含砷总量高于阳性药物As₂O₃组，但是其作用与阳性药物相当。而在与As₂O₃组含砷总量相同的条件下，提取液B其抑制作用则强于阳性药物As₂O₃组，据此说明含有天然多形态砷的提取液B组，其体外抗乙肝病毒作用的药物效应更佳。具体结果表3:

4、本发明的3种提取液，对小鼠的急性毒性实验

设置提取液A、B、C和阳性药物为As₂O₃溶液（10nM）各自试验组。每组取小鼠50只，雌雄各半，体重18－20g，把小鼠随机分为5小组，每小组10只，实验前小鼠禁食（不禁水）14小时后，腹腔注射或灌胃给小鼠给药，给药体积均为每20g体重0.2mL。给药后于常温下观察动物行为活动，记录死亡情况，观察至7天，进行大体解剖，肉眼观察。

结果：本发明的3种提取液和阳性对照组As₂O₃溶液，均未观察到明显的动物死亡情况，由此说明该剂量属于一个安全的给药剂量。

本本发明的3种提取液均能显著抑制体外培养的肿瘤干细胞、艾滋病和乙肝病毒细胞的生长，抑制作用具有明显的剂量依赖性，表明上述提取液对肿瘤干细胞、艾滋病和乙肝比较有效。

单一砷剂，特别是As₂O₃和纳米雄黄抑制肿瘤干细胞的作用已经得到了证实，但是由于As₂O3注射液价格昂贵，而且可以引发强烈的体内肝、肾毒副作用，纳米雄黄虽然与As₂O3相比其毒性降低，但是其相抑制肿瘤干细胞的活性则明显弱于As₂O₃，而在另一方面，采用多种冶金用嗜酸性硫杆菌，提取雄黄产生含有包含砷酸（III，V）、甲基MMA（V）和大量的辅助元素（铁和铁的化和物）的混合提取液（专利号200610200067.5），其作用虽然强于纳米雄黄，但其抑制肿瘤干细胞的药理效应并不明确，为了克服上述发明局限，得到大量的可溶的、代谢减毒后的更多种形态的砷组合的提取液，在发挥其抑制肿癌干细胞独特效应的同时，拓展其应用范围，同时可以在制备抗乙肝和艾滋病药物方面应用，从而为天然砷剂的开发和利用建立基础。

由上述可知本发明的利用具有仿生代谢能力的特殊海洋微生物对天然药物含砷矿物进行微生物提取，从而得到多种与体内代谢相同或者不同的，而且具有减毒、增效、天然的多种形态砷组合的提取液，本发明提取液，在安全的、较低的含砷剂量下，具有显著的抑制肿瘤干细胞、艾滋病和乙肝病毒细胞的生长的效应，而且其药物效应均高于阳性对照As₂O₃溶液。与As₂O₃相比，本发明组合拓展了药物治疗的适应症，具有同时抑制肿瘤干细胞、艾滋病和乙肝病毒的良好作用，本发明为新型砷剂提取液开发，提供了广阔的应用前景。

虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是熟悉本技术领域的技术人员应当理解，我们所描述的具体的实施例只是说明性的，而不是用于对本发明的范围的限定，熟悉本领域的技术人员在依照本发明的精神所作的等效的修饰以及变化，都应当涵盖在本发明的权利要求所保护的范围内。

Claims

1.一种天然多种形态砷的提取液的应用，其特征在于：所述天然多种形态砷的提取液可用来制备抗肿瘤干细胞、抗乙肝和抗艾滋病病毒的药物。

2.如权利要求1所述的一种天然多种形态砷的提取液的应用，其特征在于：所述天然多种形态砷的提取液可以添加药学上可以接受的辅料制备成软胶囊、硬胶囊、滴丸、片剂、颗粒剂、注射剂或者粉针剂、口服液、微囊剂、滴丸剂、气雾剂和栓剂制剂，经口服、注射或直肠方式给药。