CN103749301B - 可降低铁皮石斛组培苗污染率的培养基 - Google Patents
可降低铁皮石斛组培苗污染率的培养基 Download PDFInfo
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Abstract
可降低铁皮石斛组培苗污染率的培养基，包括1/2MS+IBA、AC，还包括茶多酚。该培养基利用天然抗菌素茶多酚的抗菌特性，可解决铁皮石斛组培苗污染率高的问题，将污染率大大降低，在规模化生产中能降低成本，提高效益。
Description
技术领域
本发明涉及植物生物技术领域，具体涉及一种可降低铁皮石斛组培苗污染率的培养基。
背景技术
铁皮石斛，为兰科多年生附生草本植物。生于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上，喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒。石斛可分为黄草、金钗、马鞭等数十种，铁皮石斛为石斛之极品，铁皮石斛因表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛具有独特的药用价值，以其茎入药，中药名：石斛，属补益药中的补阴药，《中国药典》：益胃生津，滋阴清热。铁皮石斛等少数品种之嫩茎，扭成螺旋状或弹簧状，晒干，商品称为耳环石斛，又名枫斗。
多年以来，商品石斛主要依靠野生药用石斛资源，随着药用石斛开发利用的不断深入和国内外需求量的逐年增加，我国野生药用石斛资源遭到了严重破坏，有些地区甚至面临枯竭。为了保护野生兰科植物资源，各国都出台了许多禁止采挖或销售野生兰科植物的法规和条例，如1975年生效的《濒危野生动植物种国际贸易公约》(cITEs)，把所有兰科植物全部列入附录I和II中；于1987年国务院出台的《野生药材资源保护管理条例》中，环草石斛、黄草石斛、金钗石斛、马鞭石斛和铁皮石斛被列为国家三级珍稀濒危保护植物。这些政策措施对野生药用石斛资源的妥善保护起到了重要作用。
传统铁皮石斛组织培养小植株主要依靠培养基中的糖作为碳源，极易引起微生物的污染。培养基被污染后会导致铁皮石斛组培苗停止生长、畸形、死亡等，严重影响工厂生产，损害工厂利益。
申请号为201210374262.5铁皮石斛在非无菌条件下无糖微体快繁技术，提供了一种非无菌条件下无糖微体快繁技术，用松树皮粗粉加入1/2MS培养基为基质，不含糖及琼脂，减少了细菌生长所需要的碳源，降低了培养基的污染率。但是同时也减少了铁皮石斛组培苗生长所需要的碳源，影响了铁皮石斛组培苗的正常生长。
又如用申请号为201310029289.5一种铁皮石斛无糖组织培养方法，用 CO2替代糖作为小植株生长的唯一碳源，通过强制性换气系统供给小植株生长所需 CO2，使其在人工光照下，吸收 CO2进行完全的自养生长，在一定程度上避免了微生物的污染。但是其操作复杂，对于现有设备需要较大投入，可行性不强。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可降低铁皮石斛组培苗污染率的培养基，该配方可解决铁皮石斛组培苗污染率高的问题。
可降低铁皮石斛组培苗污染率的培养基，包括1/2MS+IBA、AC，其特征在于：还包括茶多酚。
本发明中，茶多酚的总酚含量最好要求＞50%。这样可以更好地保证茶多酚的纯度，确保其抗菌效果。
所述培养基的配比为：1／2MS+IBA：0.1～0.5mg／L，AC：10～50mg／L，茶多酚0.5～20mg／L。
更优化的配比为：1／2MS+IBA：0.1～0.5mg／L，AC：15～30mg／L，茶多酚2～10mg／L。
最佳配比为：1／2MS+IBA：0.3mg／L，AC：25mg／L，茶多酚：5mg／L。
培养基中还包括蔗糖。
蔗糖用量为15～25g／L。
最佳蔗糖用量为20g／L。
培养基pH值调节为5.0～6.0。
更优化的方案是将培养基pH值调节为5.2～5.4。
茶多酚(tea polyphenol,TP)是从天然植物茶叶中分离提纯出来的多酚类化合物的复合体,具有多种保健功能和药理效应，如抗菌、抗病毒、抗毒素、防癌、抗癌、抗突变、降血脂、降血糖、防止动脉硬化和血栓形成、保护肝脏、抗衰老、抗龋齿、抗过敏等，此外对于免疫系统的疾病，特别是艾滋病也具有良好的预防和治疗功效。
茶多酚作为一种广谱、强效、低毒的抗菌药物已经被世界上许多国家的学者所公认。在众多的抗菌试验中，人们发现它对普通变形杆菌、金葡球菌、表皮葡萄球菌、变形链球菌、霍乱弧菌、大肠杆菌等许多致病菌，尤其是对肠道致病菌具有不同程度的抑制和杀伤作用。
本发明在培养基中加入茶多酚天然抗菌素，能有效降低培养基的污染率。
本发明的培养基在应用于铁皮石斛组织培养过程中，培养温度为 20℃～28℃，培养光照条件为自然光2000~2500 LUX+人工辅助光1500~2000 LUX，连续光照培养时间为8～20h／天。
本发明的可降低铁皮石斛组培苗污染率的培养基，与传统铁皮石斛培养基相比，添加了茶多酚作为天然抗菌素，在同等的操作环境，培养环境下，使用无添加天然抗菌素的培养基，在铁皮石斛的组织培养全过程中，污染率在3～6%。而添加适量天然抗菌素茶多酚，污染率可控制在1～4%，在规模化生产中能降低成本，提高效益。
具体实施方式
实施例1
选择典型性状健康的铁皮石斛种苗的茎，以茎芽为中心上下各留0．5cm剪下茎段作为铁皮石斛组织培养的外植体。
使用本发明的培养基：1／2MS+IBA：0.3mg／L，AC：25mg／L，茶多酚5mg／L，添加蔗糖量为20g／L。茶多酚的多酚含量为80%。培养基pH值为5.3。
将外植体接种至培养基中，培养温度为 25℃，培养基光照条件为自然光2200 LUX+人工辅助光1800 LUX，连续光照培养时间为12h／天。
另外使用没有添加茶多酚的培养基：1／2MS+IBA：0.3mg／L，AC：25mg／L，添加蔗糖量为20g／L。在上述同样条件下进行培养。
观察检查污染率。使用本发明的培养基的污染率为2%，而使用没有添加茶多酚的培养基的污染率为5%。
实施例2
选择典型性状健康的铁皮石斛种苗的茎，以茎芽为中心上下各留0．5cm剪下茎段作为铁皮石斛组织培养的外植体。
使用本发明的培养基：1／2MS+IBA：0.4mg／L，AC：30mg／L，茶多酚10mg／L，添加蔗糖量为15g／L。茶多酚的多酚含量为60%。培养基pH值为5.0。
将外植体接种至培养基中，培养温度为23℃，培养基光照条件为自然光2500 LUX+人工辅助光1500 LUX，连续光照培养时间为15h／天。
另外使用没有添加茶多酚的培养基：1／2MS+IBA：0.4mg／L，AC：30mg／L，添加蔗糖量为15g／L。在上述同样条件下进行培养。
观察检查污染率。使用本发明的培养基的污染率为1%，而使用没有添加茶多酚的培养基的污染率为4%。
实施例3
选择典型性状健康的铁皮石斛种苗的茎，以茎芽为中心上下各留0．5cm剪下茎段作为铁皮石斛组织培养的外植体。
使用本发明的培养基：1／2MS+IBA：0.2mg／L，AC：15mg／L，茶多酚2mg／L，添加蔗糖量为25g／L。茶多酚的多酚含量为90%。培养基pH值为5．5。
将外植体接种至培养基中，培养温度为 28℃，培养基光照条件为自然光2000 LUX+人工辅助光2000 LUX，连续光照培养时间为20h／天。
另外使用没有添加茶多酚的培养基：1／2MS+IBA：0.2mg／L，AC：15mg／L，添加蔗糖量为25g／L。在上述同样条件下进行培养。
观察检查污染率。使用本发明的培养基的污染率为2%，而使用没有添加茶多酚的培养基的污染率为6%。
实施例4
选择典型性状健康的铁皮石斛种苗的茎，以茎芽为中心上下各留0．5cm剪下茎段作为铁皮石斛组织培养的外植体。
使用本发明的培养基：1／2MS+IBA：0.1mg／L，AC：10mg／L，茶多酚1mg／L，添加蔗糖量为18g／L。茶多酚的多酚含量为70%。培养基pH值为5．3。
将外植体接种至培养基中，培养温度为 20℃，培养基光照条件为自然光2400 LUX+人工辅助光1600 LUX，连续光照培养时间为10h／天。
另外使用没有添加茶多酚的培养基：1／2MS+IBA：0.1mg／L，AC：10mg／L，添加蔗糖量为18g／L。在上述同样条件下进行培养。
观察检查污染率。使用本发明的培养基的污染率为3%，而使用没有添加茶多酚的培养基的污染率为6%。
实施例5
选择典型性状健康的铁皮石斛种苗的茎，以茎芽为中心上下各留0．5cm剪下茎段作为铁皮石斛组织培养的外植体。
使用本发明的培养基：1／2MS+IBA：0.5mg／L，AC：50mg／L，茶多酚2mg／L，添加蔗糖量为22g／L。茶多酚的多酚含量为98%。培养基pH值为5．1。
将外植体接种至培养基中，培养温度为 26℃，培养基光照条件为自然光2300 LUX+人工辅助光1700 LUX，连续光照培养时间为16h／天。
另外使用没有添加茶多酚的培养基：1／2MS+IBA：0.5mg／L，AC：50mg／L，添加蔗糖量为22g／L。在上述同样条件下进行培养。
观察检查污染率。使用本发明的培养基的污染率为1%，而使用没有添加茶多酚的培养基的污染率为5%。
Claims (7)
1.可降低铁皮石斛组培苗污染率的培养基，包括1/2MS+IBA、AC，其特征在于：还包括茶多酚；
茶多酚的总酚含量＞50%；
培养基的配比为：
1／2MS+IBA：0.1～0.5mg／L，AC：10～50mg／L，茶多酚0.5～10mg／L；
培养基pH值调节为5.0～6.0。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：培养基的配比为：
1／2MS+IBA：0.1～0.5mg／L，AC：15～30mg／L，茶多酚2～10mg／L。
3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：培养基的配比为：
1／2MS+IBA：0.3mg／L，AC：25mg／L， 茶多酚：5mg／L。
4.根据权利要求l所述的培养基，其特征在于：还包括蔗糖。
5.根据权利要求l或4所述的培养基，其特征在于：还包括蔗糖15～25g／L。
6.根据权利要求l或4所述的培养基，其特征在于：还包括蔗糖20g／L。
7.根据权利要求l所述的培养基，其特征在于：培养基pH值调节为5.2～5.4。
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