CN103739661A

CN103739661A - 从七叶一枝花中提取偏诺皂甙的方法

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Publication number: CN103739661A
Application number: CN201410029382.0A
Authority: CN
Inventors: 唐忠海; 向华; 李兰岚
Original assignee: CHANGSHA XIANGZI BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: CHANGSHA XIANGZI BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2014-01-22
Filing date: 2014-01-22
Publication date: 2014-04-23

Abstract

本发明涉及一种七叶一枝花提取分离偏诺皂甙的工艺技术，将干燥过后的七叶一枝花经用乙醇溶液提取、过滤、减压浓缩、过柱、萃取、脱色结晶制得偏诺皂甙纯品。本发明方法操作简单，极大的降低了七叶一枝花中偏诺皂甙的生产成本，简化了生产过程。采用醇提和柱层析方法快速获得偏诺皂甙等多种皂甙，节省了七叶一枝花资源。浸提后所得到废渣可直接用于肥料的制备，降低了向环境排放废弃物的可能。

Description

从七叶一枝花中提取偏诺皂甙的方法

所属技术领域：

本发明涉及一种七叶一枝花提取分离偏诺皂甙的工艺技术，属于天然产物分离工程的技术领域。

背景技术

七叶一枝花（又名七叶莲、重楼）为百合科多年生草本植物，药用历史悠久，是我国重要的传统中药，国家二类中药保护品种。该植物主要特征是由一圈轮生的叶子（6-7片）中冒出一朵花，花可以分成两个部分，外轮花及内轮花，外轮花与叶子很像，约有六片，而内轮花约有八片。多年生草本，高50-100厘米，3-7年挖根茎入药。喜欢生长在中海拔高度的山坡、阔叶林下或溪边、灌木丛下阴湿处。地下根茎横生，肥厚，黄褐色，有斜行环节，并生须根。茎单一，无毛。叶4-9片，通常为7片，轮生茎顶；叶片长卵形。春夏间在轮生叶的中心抽出花梗，顶端生一朵花，故名七叶一枝花。秋季果熟；葫果球形，内有多数鲜红色种子。广泛分布于云贵、两广、武陵山脉等地区。

七叶一枝花根茎含有甾体皂甙、丙氨酸等18种氨基酸及肌酐等多种成分，能治痈肿肺痨久咳、跌打损伤、蛇虫咬伤、淋巴结核、骨髓炎等症，是云南白药的主要成分之一；近年来，又相继发现其化学成分薯蓣皂甙元具有良好的抗肿瘤、抗菌、消炎和治疗胃溃疡、白血病、心血管疾病、镇静镇痛、止咳平喘以及抑精等生理活性作用，这些发现使薯蓣皂甙元身价百倍。目前世界上有十余个国家和地区在开发薯蓣皂甙元原料及制剂，被喻为继紫杉醇之后的又一新的绿色抗癌药物，被人们广泛关注。

我国是七叶一枝花的原产国，每年的七叶一枝花除国内直接入药外，其它均是通过提取物的形式出口。目前国内七叶一枝花深加工生产厂家甚多，大约有十余家，由于生产技术或设备落后，产品绝大部分以粗产品（提取物）的形式出口，其提取物主要含有薯蓣皂甙和偏诺皂甙等活性成分。

公开号为CN1778305的中国专利公开了一种偏诺皂甙在制备止血药物中的应用，涉及偏诺皂甙作为制备全身性出血、各种内脏出血、月经过多、预防各种出血危象、辐射、化学因素对人的血小板伤害所致出血倾向的药物中的应用。本发明对已知化合物偏诺皂甙发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域。本发明的偏诺皂甙配制成的药物主要为口服剂型，即可单独作为药用有效成分，也可与其它无排斥作用的组分配伍。

公开号为CN1939928的中国专利公开了一种偏诺皂甙类化合物碱式盐及制备方法，涉及具有通式结构的一类化合物。其结构通式为：通式中：R2=H，CH₃，CH₂OH，=CH₂，X=O，N，S，R3=Na，K，Mg，Ca，三乙胺基，叔丁胺基。本发明旨在筛选水溶性高的偏诺皂甙类化合物盐，做为药剂学上一种生物利用度较高的药物原料。

公开号为CN1939321的中国专利公开了一种治疗妇科血症及炎症的药物制剂，涉及一种治疗妇科疾病的药物制剂，所述的治疗妇科血症及炎症的药物制剂由以下重量百分比的成分制成的外用制剂：偏诺皂甙类化合物0.05-5%，助溶剂0.1-5%，表面活性剂0.1-6%，药物基质84-99.5%。本发明主要用于治疗妇科血症及炎症，血症包括子宫功能性出血和计划生育措施引起的出血。

偏诺皂甙在七叶一枝花根茎中含量最高，取材方便，分布广泛。因而，对七叶一枝花进行综合深加工意义非凡，探索从七叶一枝花中提取偏诺皂甙，其意义相当远大。

发明内容

本发明采用的技术方案包括：干燥过后的七叶一枝花经用乙醇溶液提取、过滤、减压浓缩、过柱、萃取、脱色结晶制得偏诺皂甙纯品。

因此，本发明提供从七叶一枝花提取偏诺皂甙的方法，步骤包括：

(1)粉碎干燥七叶一枝花(过20目筛)，并将七叶一枝花、乙醇水溶液按一定比例进行混合，加热到60-80℃下回流提取一定时间；

(2)过滤除渣后，滤液在50℃下减压浓缩获得干燥物；

(3)将干燥物用60-80%甲醇溶液进行溶解，上硅胶柱进行吸附分离，收集含有目的物的洗脱液，并将其减压浓缩干燥，其中硅胶层析柱的洗脱液为氯仿-甲醇溶液，并且在硅胶层析柱进行2次上柱洗脱；

(4)第(3)步所得干燥物加入35%-40%乙醇水溶液进行溶解，上大孔吸附树脂X-5进行吸附分离，收集含有目的物的洗脱液，并将该洗脱液减压浓缩至原有体积的1/8-1/4，其中洗脱液为甲醇或乙醇水溶液；

(5)向浓缩液中加入70%乙醇水溶液使之充分溶解40℃左右，再加入2-4倍体积的水；

(6)将含有偏诺皂甙的乙醇溶液放置在低温下过夜结晶，得到淡黄色晶体，抽滤，得到偏诺皂甙粗品，重结晶得到偏诺皂甙纯品。

在一个实施方案中，步骤(1)所述的乙醇水溶液为含有60%-80%乙醇的水溶液，所述七叶一枝花与乙醇水溶液的比例按重量(kg)/体积(L)比为1:4-6，所述的回流提取时间为3-10小时。

在一个实施方案中，步骤(2)所述的过滤过程是纱布过滤、陶瓷膜过滤，其中，优选是三层纱布过滤2次、陶瓷膜过滤1次。

在一个实施方案中，步骤(3)所述加入60-80%甲醇的量(L)为所得干燥物(kg)重量的2-4倍；硅胶洗脱杂质用的洗脱液为体积比(40:10-25)的氯仿-甲醇，目的物洗脱用的洗脱液为体积比(40:40)的氯仿-甲醇。

在一个实施方案中，其中步骤(4)中加入乙醇水溶液的量(L)为所得干燥物(kg)重量的1/4-1/2倍，所述洗脱液为55-85%的甲醇或乙醇水溶液。

在一个具体实施方案中，步骤(5)中70%乙醇水溶液的用量，与步骤(5)所得干燥物按体积(L)/重量(kg)比为1-4：1。

在另一个具体实施方案中，步骤6的结晶温度是0-4℃。

技术效果

1、本发明方法操作简单，极大的降低了七叶一枝花中偏诺皂甙的生产成本，简化了生产过程。

2、采用醇提和柱层析方法快速获得偏诺皂甙等多种皂甙，节省了七叶一枝花资源。

3、浸提后所得到废渣可直接用于肥料的制备，降低了向环境排放废弃物的可能。

附图说明

图1：偏诺皂甙的H-NMR曲线图。

图2：偏诺皂甙的C-NMR曲线图。

具体实施方式

下面，本发明将用实施例进行进一步的说明，但是它并不限于这些实施例的任一个或类似实例。

实施例1

粉碎干燥七叶一枝花，过20目筛，称取100kg，用80%乙醇450L，加热至60℃下回流提取4h，三层纱布过滤两次、陶瓷膜过滤一次，得滤液，50℃下减压浓缩获得干燥物11.5kg；将干燥物用45L的石油醚进行浸提，陶瓷膜过滤一次，滤液在50℃下减压浓缩回收石油醚；上硅胶柱，用含有氯仿和甲醇的混合液（氯仿与甲醇的体积比为40﹕10-30）400L洗脱杂质，再用含有氯仿和甲醇的混合液（氯仿与甲醇的体积比为40﹕40）800L洗脱得到洗脱物，并减压浓缩至干，加入少量40%乙醇的水溶液溶解，上大孔吸附树脂X-5进行吸附分离，并将洗脱物减压浓缩干燥，其中洗脱液为70%乙醇溶液；减压浓缩获得干燥物，加入无水乙醇使之充分溶解40℃左右，再加入4倍体积的水；将含有偏诺皂甙的乙醇溶液放置在4℃过夜结晶，得到淡黄色晶体，抽滤，得滤渣7.7kg加入3L的40%乙醇水溶液进行溶解，上大孔吸附树脂X-5进行吸附分离，并将洗脱物减压浓缩干燥，其中洗脱液为60%乙醇溶液；减压浓缩获得干燥物2.25kg，加入4L的70%乙醇水溶液使之充分溶解40℃左右，再加入9L的水；将含有薯蓣皂甙的乙醇溶液放置在4℃过夜结晶，得到淡黄色晶体，抽滤，得到偏诺皂甙粗品，重结晶得到314g偏诺皂甙样品。检测设备为Agilent1100高效液相色谱仪，色谱柱为HypersilODS(250mm×4.6mm，5μ)，偏诺皂甙的检测条件∶流动相为50%乙腈水溶液、检测波长为210nm、流速为l ml／min、进样量为20μL，经NMR光谱分析见图1和图2，该产物为偏诺皂甙并且使样品的纯度为98.55%。

实施例2

粉碎干燥七叶一枝花，过20目筛，称取200kg，用75%乙醇1100L，加热至70℃下回流提取5h，三层纱布过滤两次、陶瓷膜过滤一次，得滤液，50℃下减压浓缩获得干燥物；将干燥物用3倍体积的石油醚进行浸提，陶瓷膜过滤一次，滤液在50℃下减压浓缩回收石油醚；加入少量40%乙醇的水溶液溶解，上大孔吸附树脂X-5进行吸附分离，并将洗脱物减压浓缩干燥，其中洗脱液为75%乙醇溶液；减压浓缩获得干燥物，加入无水乙醇使之充分溶解40℃左右，再加入3倍体积的水；将含有偏诺皂甙的乙醇溶液放置在4℃过夜结晶，得到淡黄色晶体，抽滤，得到偏诺皂甙粗品，重结晶得到645g偏诺皂甙样品。按实施例1的检测方法进行检测偏诺皂甙样品，偏诺皂甙样品的纯度为98.05%。

实施例3

粉碎干燥七叶一枝花，过20目筛，称取400kg，用70%乙醇2400L，加热至80℃下回流提取6h，三层纱布过滤两次、陶瓷膜过滤一次，得滤液，50℃下减压浓缩获得干燥物；将干燥物用3倍体积的石油醚进行浸提，陶瓷膜过滤一次，滤液在50℃下减压浓缩回收石油醚；加入少量40%乙醇的水溶液溶解，上大孔吸附树脂X-5进行吸附分离，并将洗脱物减压浓缩干燥，其中洗脱液为80%乙醇溶液；减压浓缩获得干燥物，加入无水乙醇使之充分溶解40℃左右，再加入4倍体积的水；将含有偏诺皂甙的乙醇溶液放置在4℃过夜结晶，得到淡黄色晶体，抽滤，得到偏诺皂甙粗品，重结晶得到1.28kg偏诺皂甙样品。按实施例1的检测方法进行检测偏诺皂甙样品，偏诺皂甙样品的纯度为98.25%。

Claims

1.本发明提供从七叶一枝花提取偏诺皂甙的方法，步骤包括：

(2)过滤除渣后，滤液在50℃下减压浓缩获得干燥物；

2.根据权利要求1的方法，步骤(1)所述的乙醇水溶液为含有60%-80%乙醇的水溶液，所述七叶一枝花与乙醇水溶液的比例按重量(kg)/体积(L)比为1:4-6，所述的回流提取时间为3-10小时。

3.根据权利要求1的方法，步骤(2)所述的过滤过程是纱布过滤、陶瓷膜过滤，其中，优选是三层纱布过滤2次、陶瓷膜过滤1次。

4.根据权利要求1的方法，步骤(3)所述加入60-80%甲醇的量(L)为所得干燥物(kg)重量的2-4倍；硅胶洗脱杂质用的洗脱液为体积比(40:10-25)的氯仿-甲醇，目的物洗脱用的洗脱液为体积比(40:40)的氯仿-甲醇。

5.根据权利要求1的方法，其中步骤(4)中加入乙醇水溶液的量(L)为所得干燥物(kg)重量的1/4-1/2倍，所述洗脱液为55-85%的甲醇或乙醇水溶液。

6.根据权利要求1的方法，步骤(5)中70%乙醇水溶液的用量，与步骤(5)所得干燥物按体积(L)/重量(kg)比为1-4：1。

7.根据权利要求1的方法，步骤6的结晶温度是0-4℃。