CN103724423A - 一种通过去热原提纯尿促性素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种通过去热原纯化尿促性素的方法。利用吸附的特性，在去热原的工序中，通过加入磷酸钠溶液、醋酸钙溶液吸附热原，从而达到去除热原的效果。技术方案是绝经期妇女尿液经过盐溶、离心，树脂吸附、乙醇沉淀、干燥得到的尿促性素干粉加入纯化水、乙醇、醋酸铵等溶解，并加入磷酸钠溶液、醋酸钙液吸附，后用氢氧化钠溶液调节pH值搅拌后离心，上清液调pH值后加乙醇离心后脱水、干燥得尿促性素成品。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体地说涉及通过去热原提纯尿促性素。
背景技术
尿促性素是由人脑下垂体前叶部分分泌的一种糖蛋白促性腺激素，一般是从绝经期或绝经期后妇女的尿中经提取纯化而制得。妇女在行经期间HMG的含量有所波动，但较低，只有妇女进入绝经期或之后的十几年中，其尿中HMG的含量方达到高峰(60-100iu/L尿)，并能维持在一个稳定的水平上，HMG含有卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)，其所含比例近似1∶1。
临床主要用于治疗妇女因功能性不排卵所致的不育症；男性因激素水平低下所引起的精子过少或活力不足。另外，还用于治疗诸如妇女闭经、月经不调、男女之性机能失调等症。
至今为止，关于尿促性素提取方面的专利不多，有一篇名为乙酸铵提纯尿促性素方法(申请号为CN201210598002.6)的专利正在审核中，这篇专利主要讲述了如何利用乙酸铵提纯尿促性素粗品，从而得到尿促性素中间品，而本专利是在此基础上利用磷酸钠溶液、醋酸钙溶液吸附热原继续纯化尿促性素中间品，从而得到纯度更高，热源合格的尿促性素成品。
发明内容
本发明公开了一种通过去热原纯化尿促性素的方法。利用吸附的特性，在去热原的工序中，通过加入相应浓度的磷酸钠溶液、醋酸钙溶液吸附热原，从而达到去除热原的效果。技术方案是通过在尿促性素柱分离干粉中加入纯化水、乙醇、醋酸铵等溶解，并加入磷酸钠溶液、醋酸钙液吸附，后用氢氧化钠溶液调节pH值搅拌后离心，上清液调pH值后加乙醇离心后脱水、干燥得尿促性素成品。
在发明的技术方案中，还具有以下技术特征：所述磷酸钠溶液、醋酸钙溶液吸附法包括如下步骤：
1.溶液配制
1.10.2-0.8mol/L醋酸钙：称取醋酸钙，加纯化水溶解，溶液澄清；
1.20.1-0.8mol/L磷酸钠：称取磷酸钠，加纯化水溶解，溶液澄清。
2.操作工序
2.1按柱分离干粉按1-3∶20-80(Kg∶L)比例加纯化水搅拌溶解；
2.2在搅拌下加入等体积冷乙醇，再加入总体积8％(V∶Kg)的醋酸铵，溶液澄清；
2.3再缓慢加入0.1-0.8mol/L磷酸钠溶液，其用量为投料量的10-20倍量，搅拌15分钟后，再加入0.1-0.8mol/L醋酸钙溶液，用量为投料量的约10-20倍；
2.4然后，用5mol/L NaOH调节pH至6.5-9.5，稳定后搅拌1-1.5小时，结束后，置六罐离心机中离心，弃去沉淀物；
2.5上清液用5mol/L HCl调pH至5.5-9.5，在搅拌下，加入5倍量(V/V)95％乙醇，置低温间静止过夜；
2.6次日虹吸弃去上清液，沉淀物离心收集，并用无水乙醇研磨洗涤，沉淀物离心反复2次；
2.7最后，沉淀物置五氧化二磷做吸水剂的真空干燥箱内干燥，干燥品即为成品。
利用吸附的特性，在去热原的工序中，通过加入相应浓度的磷酸钠溶液、醋酸钙溶液吸附热原，从而达到去除热原的效果。技术方案是通过在尿促性素柱分离干粉中加入纯化水、乙醇、醋酸铵等溶解，并加入磷酸钠溶液、醋酸钙液吸附，后用氢氧化钠溶液调节pH值搅拌后离心，上清液调pH值后加乙醇离心后脱水、干燥得尿促性素成品。
具体实施方式
实施例1
1.取柱分离干粉9g加入225ml纯化水搅拌溶解；在搅拌下加入等体积冷乙醇，再加入36g醋酸铵，溶液澄清；
2.再缓慢加入0.2mol/L磷酸钠溶液54ml，搅拌15分钟后，再加入0.3mol/L醋酸钙溶液54ml；
3.用5mol/L NaOH调节pH至8.5，稳定后继续搅拌1-1.5小时，结束后，置6罐离心机离心，弃去沉淀物；
4.上清液用5mol/L HCl调pH至6.5-7.0，在搅拌下，加入2800ml95％乙醇，沉淀析出，置冰箱过夜；
5.次日，虹吸上清液，沉淀离心收集，并用无水乙醇研磨洗涤，沉淀物，离心，反复2次；
6.最后，沉淀物置五氧化二磷干燥箱内干燥，得干燥品8.5g即为成品。
经热原检查法检测，尿促性素中的热原检查符合规定。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (8)
1.一种纯化尿促性素的方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)配制0.2-0.8mol/L醋酸钙溶液以及0.1-0.8mol/L磷酸钠溶液；
(2)操作工序：将尿促性素干粉加入纯化水中搅拌溶解，之后加入乙醇和醋酸铵，搅拌溶解，再加入上述配制好的磷酸钠溶液和醋酸钙溶液进行吸附；调节pH后离心，取上清液调pH，加入乙醇后静置沉淀，上清液脱水干燥后得尿促性素成品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：将尿促性素干粉按1-3∶20-80(Kg∶L)的比例加入纯化水中搅拌溶解。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：加入纯化水溶解搅拌后，加入等体积的乙醇以及总体积的8％(V∶Kg)的醋酸铵搅拌。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，相对于1公斤尿促性素干粉，加入10-20升0.1-0.8mol/L磷酸钠溶液，搅拌15分钟后，相对于1公斤尿促性素干粉，再加入10-20升0.2-0.8mol/L醋酸钙溶液。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：用5mol/L的NaOH调节pH至6.5-9.5，搅拌1-1.5小时；离心，取上清液。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：上清液用5mol/L的HCl调节pH至5.5-9.5，搅拌，加入5倍量(V/V)95％乙醇，置低温间静止，沉淀物用无水乙醇脱水，离心后将沉淀物真空干燥即得尿促性素成品。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述尿促性素干粉是通过将绝经期妇女的尿液经过盐溶、离心，树脂吸附、脱附、乙醇沉淀、干燥得到的。
8.一种由权利要求1-6任意之一所述的制备方法制备得到的尿促性素成品。
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