CN103712954B - 一种用于筛选抗肿瘤药物的spr传感芯片的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，以市售的传感片L1为基板，在所述基板表面偶联含MDR1的微囊泡。本案利用MDR1特异性识别候选药物分子，根据MDR1与药物之间的亲和力，判断药物可被肿瘤细胞耐受的可能性，实现药物筛选，同时该芯片检测的蛋白-药物亲和动力学也可被用于多药耐药机理的研究。本案制备的SPR传感芯片结合了表面等离子共振技术的非标记及高灵敏性的优点，可开发作为有效的高通量药物筛选和药理学研究工具。

Description

一种用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法
技术领域
本发明涉及SPR传感检测领域，特别涉及一种用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法。
背景技术
肿瘤治疗是目前的研究热点，化疗是时下治疗恶性肿瘤的主要方法，然而肿瘤细胞对化疗药物的多药耐药是实现治疗的主要障碍之一，也是多数肿瘤患者治疗后效果不佳的重要因素。多药耐药蛋白(MDR1)属于ATP能量依赖型跨膜转运蛋白，对于外源药物具有选择性与特异性外排的功能。目前的大量研究均表明，MDR1的过表达是多药耐药的重要原因之一。因此，抗肿瘤药物筛选中均将MDR1对药物的识别能力作为重要依据，同时，多药耐药现象的研究中也将MDR1作为主要内容之一。
表面等离子共振传感技术(SPR)发源于上世纪80年代，因其免标记、快速灵敏以及实时监测特性，被广泛应用于生物大分子相互作用、大分子与小分子相互作用、药物筛选以及肿瘤研究中。基于该技术开发的芯片与仪器已经高度商业化，目前国外主要有Biacore、IBIS等系列，国内也有中科院电子所研制的各型号仪器与芯片出售，然而这些芯片中还未有研究多药耐药现象及机理的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，以填补国内市场上研究抗肿瘤药物及多药耐药机理所用SPR传感芯片的空白。
本发明提供一种用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，以市售的传感片L1为基板，在所述基板表面偶联含MDR1的微囊泡。
优选地，所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，以市售的传感片L1为基板，将所述基板放入BIAcore3000仪器中，注入磷酸缓冲液使其以15～25微升／分钟的流速持续流经基板表面，随后又向该仪器中以15～25微升／分钟的流速注入15～25mM的3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸水溶液，注入持续时间为2～4min；用磷酸缓冲液冲洗所述基板，最后向该仪器中注入含MDR1的微囊泡悬浮液，当所述BIAcore3000仪器中折射率的信号变化参数RU值达到5500时，停止注入含MDR1的微囊泡悬浮液，待磷酸缓冲液冲洗掉未结合的微囊泡后，得到表面偶联有MDR1的微囊泡的L1-MDR1芯片。
优选地，所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，所述的含MDR1的微囊泡悬浮液采用如下方法制得：将市售的MDCK-MDR1细胞进行平板培养，待MDCK-MDR1细胞生长至90％融合后，对其进行胰酶-EDTA消化，离心，并重新悬浮于磷酸缓冲液中；将含MDCK-MDR1细胞的磷酸缓冲液放入超声仪中，经超声破碎与蔗糖密度梯度离心后，取离心液的中间层，将所述中间层悬浮于含250mM蔗糖的50mMTris缓冲液中，从而获得含MDR1的微囊泡悬浮液。
优选地，所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，在超声破碎时，超声频率为250Hz，超声时间为3min。
优选地，所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，在蔗糖密度梯度离心时，蔗糖浓度为38wt％，离心速度为10000g，离心时间为100min，温度控制在4±0.1℃。
优选地，所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，在获得所述的含MDR1的微囊泡悬浮液后，将其注入BIAcore3000仪器前，还包括对所获含MDR1的微囊泡悬浮液进行鉴定：采用磷酸苯二钠比色法检测微囊泡中碱性磷酸酶的活性；采用荧光底物或同位素底物转运法测定MDR1的蛋白活性；采用BCA法检测含MDR1的微囊泡悬浮液中的蛋白总量；将以上测定参数进行比对，得出所获含MDR1的微囊泡悬浮液中微囊泡的纯度及活度；采用动态光散射仪测定微囊泡的直径分布，直径在150～300nm之间的才能注入BIAcore3000仪器中。
优选地，所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，在制得L1-MDR1芯片之后，还包括对其进行表面覆盖率检测：将所述L1-MDR1芯片置于BIAcore3000仪器中，注入含有0.1mg／ml牛血清白蛋白的磷酸缓冲液，当RU值的改变量小于50时，表明芯片表面已完全被微囊泡覆盖，最后取出并用氮气吹干即可用于后续的检测试验。
优选地，所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，动态光散射仪的光源系统为氦离子激光系统，光源波长为633nm，动态光散射仪工作温度为25±0.1℃。
优选地，所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，磷酸缓冲液配制方法为：将0.27g磷酸二氢钾、1.42g磷酸氢二钠、8g氯化钠及0.2g氯化钾溶解于1L双蒸水中，并通过滴加1M的盐酸水溶液或氢氧化钠水溶液来调整pH至7.4。
优选地，所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，Tris缓冲液的pH为7.4。
本发明的有益效果是：利用MDR1特异性识别候选药物分子，根据MDR1与药物之间的亲和力，判断药物可被肿瘤细胞耐受的可能性，实现药物筛选，同时该芯片检测的蛋白-药物亲和动力学也可被用于多药耐药机理的研究。本芯片结合了表面等离子共振技术的非标记及高灵敏性的优点，可开发作为有效的高通量药物筛选和药理学研究工具。
附图说明
图1是L1-MDR1芯片结构示意图，其中1为玻璃片基，2为镀金膜层，3为羧基化葡聚糖膜层，4为亲脂残基，5为微囊泡。
图2是L1-MDR1芯片检测下不同底物的响应曲线。其中A为红霉素，B为甲氨蝶呤，C为罗丹明123，D为利福平，E为肌酐。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
本发明提供了一种用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，包括以下步骤：
步骤1)制备含MDR1的微囊泡悬浮液
将市售的MDCK-MDR1细胞进行平板培养，待MDCK-MDR1细胞生长至90％融合后，对其进行胰酶-EDTA消化，离心，并重新悬浮于磷酸缓冲液中；将含MDCK-MDR1细胞的磷酸缓冲液放入超声仪中，经超声破碎、蔗糖密度梯度离心后，取离心液的中间层，该中间层是高倍浓缩的含MDR1的微囊泡蔗糖溶液，其中磷酸缓冲液和蔗糖溶液的含量极少；随后将中间层悬浮于含250mM蔗糖的50mMTris缓冲液中，从而获得含MDR1的微囊泡悬浮液。
在超声破碎时，超声频率为250Hz，超声时间为3min。在进行蔗糖密度梯度离心时，蔗糖浓度为38wt％，离心速度为10000g(g代表重力加速度)，离心时间为100min，温度控制在4±0.1℃。Tris缓冲液的pH为7.4。
步骤2)对微囊泡悬浮液的鉴定
采用磷酸苯二钠比色法检测微囊泡中碱性磷酸酶的活性；采用荧光底物或同位素底物转运法测定MDR1的蛋白活性；采用BCA法检测含MDR1的微囊泡悬浮液中的蛋白总量；将以上测定参数进行比对，得出碱性磷酸酶的活性与总蛋白量比值、蛋白活性与蛋白总量比值，从而获知含MDR1的微囊泡悬浮液中微囊泡的纯度及蛋白活度；
采用动态光散射仪测定微囊泡的直径分布，直径在150～300nm之间的才能注入BIAcore3000仪器中，直径不在此区间范围的不适用于后续的试验，应舍弃。动态光散射仪的光源系统为氦离子激光系统，光源波长为633nm，动态光散射仪工作温度为25±0.1℃。
步骤3)制作L1-MDR1芯片
以市售的传感片L1为基板，将基板放入BIAcore3000仪器中，注入磷酸缓冲液使其以15～25微升／分钟的流速持续流经基板表面，随后又向该仪器中以15～25微升／分钟的流速注入15～25mM的3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸水溶液，注入持续时间为2～4min；用磷酸缓冲液冲洗基板，最后向该仪器中注入含MDR1的微囊泡悬浮液，当BIAcore3000仪器中折射率的信号变化参数RU值达到5500时，停止注入含MDR1的微囊泡悬浮液，待磷酸缓冲液冲洗掉未结合的微囊泡后，得到表面偶联有MDR1的微囊泡的L1-MDR1芯片。
3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸是一种两性表面活性剂，可以增溶蛋白。
步骤4)L1-MDR1芯片表面覆盖率验证
将L1-MDR1芯片置于BIAcore3000仪器中，注入含有0.1mg／ml牛血清白蛋白的磷酸缓冲液，当RU值的改变量小于50时，表明芯片表面已完全被微囊泡覆盖，最后取出芯片并用氮气吹干即可用于后续的检测试验。L1-MDR1芯片的干燥可采用氮气吹干、空气吹干、烘干或者自然晾干。
值得注意的是，以上所用磷酸缓冲液均采用以下方法制得：将0.27g磷酸二氢钾、1.42g磷酸氢二钠、8g氯化钠及0.2g氯化钾溶解于1L双蒸水中，并通过滴加1M的盐酸水溶液或氢氧化钠水溶液来调整pH至7.4。
实施例1：
步骤1)制备含MDR1的微囊泡悬浮液
将市售的MDCK-MDR1细胞进行平板培养，待MDCK-MDR1细胞生长至90％融合后，对其进行胰酶-EDTA消化，离心，并重新悬浮于磷酸缓冲液中；将含MDCK-MDR1细胞的磷酸缓冲液放入超声仪中，经超声破碎、蔗糖密度梯度离心后，取离心液的中间层，该中间层是高倍浓缩的含MDR1的微囊泡蔗糖溶液，其中磷酸缓冲液和蔗糖溶液的含量极少；随后将中间层悬浮于含250mM蔗糖的50mMTris缓冲液中，从而获得含MDR1的微囊泡悬浮液。
在超声破碎时，超声频率为250Hz，超声时间为3min。在进行蔗糖密度梯度离心时，蔗糖浓度为38wt％，离心速度为10000g(g代表重力加速度)，离心时间为100min，温度控制在4±0.1℃。Tris缓冲液的pH为7.4。
步骤2)对微囊泡悬浮液的鉴定
采用磷酸苯二钠比色法检测微囊泡中碱性磷酸酶的活性；采用荧光底物或同位素底物转运法测定MDR1的蛋白活性；采用BCA法检测含MDR1的微囊泡悬浮液中的蛋白总量；将以上测定参数进行比对，得出碱性磷酸酶的活性与总蛋白量比值、蛋白活性与蛋白总量比值，从而获知含MDR1的微囊泡悬浮液中微囊泡的纯度及蛋白活度；
采用动态光散射仪测定微囊泡的直径分布，直径在150～300nm之间的才能注入BIAcore3000仪器中，直径不在此区间范围的不适用于后续的试验，应舍弃。动态光散射仪的光源系统为氦离子激光系统，光源波长为633nm，动态光散射仪工作温度为25±0.1℃。
步骤3)制作L1-MDR1芯片
以市售的传感片L1为基板，将基板放入BIAcore3000仪器中，注入磷酸缓冲液使其以15微升／分钟的流速持续流经基板表面，随后又向该仪器中以15微升／分钟的流速注入15mM的3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸水溶液，注入持续时间为2min；用磷酸缓冲液冲洗基板，最后向该仪器中注入含MDR1的微囊泡悬浮液，当BIAcore3000仪器中折射率的信号变化参数RU值达到5500时，停止注入含MDR1的微囊泡悬浮液，待磷酸缓冲液冲洗掉未结合的微囊泡后，得到表面偶联有MDR1的微囊泡的L1-MDR1芯片。
步骤4)L1-MDR1芯片表面覆盖率验证
将L1-MDR1芯片置于BIAcore3000仪器中，注入含有0.1mg／ml牛血清白蛋白的磷酸缓冲液，当RU值的改变量小于50时，表明芯片表面已完全被微囊泡覆盖，最后取出芯片并用氮气吹干即可用于后续的检测试验。
实施例2：
步骤1)制备含MDR1的微囊泡悬浮液
将市售的MDCK-MDR1细胞进行平板培养，待MDCK-MDR1细胞生长至90％融合后，对其进行胰酶-EDTA消化，离心，并重新悬浮于磷酸缓冲液中；将含MDCK-MDR1细胞的磷酸缓冲液放入超声仪中，经超声破碎、蔗糖密度梯度离心后，取离心液的中间层，该中间层是高倍浓缩的含MDR1的微囊泡蔗糖溶液，其中磷酸缓冲液和蔗糖溶液的含量极少；随后将中间层悬浮于含250mM蔗糖的50mMTris缓冲液中，从而获得含MDR1的微囊泡悬浮液。
在超声破碎时，超声频率为250Hz，超声时间为3min。在进行蔗糖密度梯度离心时，蔗糖浓度为38wt％，离心速度为10000g(g代表重力加速度)，离心时间为100min，温度控制在4±0.1℃。Tris缓冲液的pH为7.4。
步骤2)对微囊泡悬浮液的鉴定
采用磷酸苯二钠比色法检测微囊泡中碱性磷酸酶的活性；采用荧光底物或同位素底物转运法测定MDR1的蛋白活性；采用BCA法检测含MDR1的微囊泡悬浮液中的蛋白总量；将以上测定参数进行比对，得出碱性磷酸酶的活性与总蛋白量比值、蛋白活性与蛋白总量比值，从而获知含MDR1的微囊泡悬浮液中微囊泡的纯度及蛋白活度；
采用动态光散射仪测定微囊泡的直径分布，直径在150～300nm之间的才能注入BIAcore3000仪器中，直径不在此区间范围的不适用于后续的试验，应舍弃。动态光散射仪的光源系统为氦离子激光系统，光源波长为633nm，动态光散射仪工作温度为25±0.1℃。
步骤3)制作L1-MDR1芯片
以市售的传感片L1为基板，将基板放入BIAcore3000仪器中，注入磷酸缓冲液使其以20微升／分钟的流速持续流经基板表面，随后又向该仪器中以20微升／分钟的流速注入20mM的3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸水溶液，注入持续时间为3min；用磷酸缓冲液冲洗基板，最后向该仪器中注入含MDR1的微囊泡悬浮液，当BIAcore3000仪器中折射率的信号变化参数RU值达到5500时，停止注入含MDR1的微囊泡悬浮液，待磷酸缓冲液冲洗掉未结合的微囊泡后，得到表面偶联有MDR1的微囊泡的L1-MDR1芯片。
步骤4)L1-MDR1芯片表面覆盖率验证
将L1-MDR1芯片置于BIAcore3000仪器中，注入含有0.1mg／m1牛血清白蛋白的磷酸缓冲液，当RU值的改变量小于50时，表明芯片表面已完全被微囊泡覆盖，最后取出芯片并用氮气吹干即可用于后续的检测试验。
实施例3：
步骤1)制备含MDR1的微囊泡悬浮液
将市售的MDCK-MDR1细胞进行平板培养，待MDCK-MDR1细胞生长至90％融合后，对其进行胰酶-EDTA消化，离心，并重新悬浮于磷酸缓冲液中；将含MDCK-MDR1细胞的磷酸缓冲液放入超声仪中，经超声破碎、蔗糖密度梯度离心后，取离心液的中间层，该中间层是高倍浓缩的含MDR1的微囊泡蔗糖溶液，其中磷酸缓冲液和蔗糖溶液的含量极少；随后将中间层悬浮于含250mM蔗糖的50mMTris缓冲液中，从而获得含MDR1的微囊泡悬浮液。
在超声破碎时，超声频率为250Hz，超声时间为3min。在进行蔗糖密度梯度离心时，蔗糖浓度为38wt％，离心速度为10000g(g代表重力加速度)，离心时间为100min，温度控制在4±0.1℃。Tris缓冲液的pH为7.4。
步骤2)对微囊泡悬浮液的鉴定
采用磷酸苯二钠比色法检测微囊泡中碱性磷酸酶的活性；采用荧光底物或同位素底物转运法测定MDR1的蛋白活性；采用BCA法检测含MDR1的微囊泡悬浮液中的蛋白总量；将以上测定参数进行比对，得出碱性磷酸酶的活性与总蛋白量比值、蛋白活性与蛋白总量比值，从而获知含MDR1的微囊泡悬浮液中微囊泡的纯度及蛋白活度；
采用动态光散射仪测定微囊泡的直径分布，直径在150～300nm之间的才能注入BIAcore3000仪器中，直径不在此区间范围的不适用于后续的试验，应舍弃。动态光散射仪的光源系统为氦离子激光系统，光源波长为633nm，动态光散射仪工作温度为25±0.1℃。
步骤3)制作L1-MDR1芯片
以市售的传感片L1为基板，将基板放入BIAcore3000仪器中，注入磷酸缓冲液使其以25微升／分钟的流速持续流经基板表面，随后又向该仪器中以25微升／分钟的流速注入25mM的3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸水溶液，注入持续时间为4min；用磷酸缓冲液冲洗基板，最后向该仪器中注入含MDR1的微囊泡悬浮液，当BIAcore3000仪器中折射率的信号变化参数RU值达到5500时，停止注入含MDR1的微囊泡悬浮液，待磷酸缓冲液冲洗掉未结合的微囊泡后，得到表面偶联有MDR1的微囊泡的L1-MDR1芯片。
步骤4)L1-MDR1芯片表面覆盖率验证
将L1-MDR1芯片置于BIAcore3000仪器中，注入含有0.1mg／m1牛血清白蛋白的磷酸缓冲液，当RU值的改变量小于50时，表明芯片表面已完全被微囊泡覆盖，最后取出芯片并用氮气吹干即可用于后续的检测试验。
实施例4：使用上述方法获得的L1-MDR1芯片进行SPR检测
步骤1)将L1-MDR1芯片放入BIAcore3000仪器中，首先通入磷酸盐缓冲液(含有5mMATP)，直至得到平稳基线。
步骤2)5种对于MDR1具有不同亲和力的底物红霉素、甲氨蝶呤、罗丹明123、利福平以及肌酐溶解于磷酸缓冲液中，并通过L1-MDR1芯片表面，获得相应的响应曲线(见图2，其中A为红霉素，B为甲氨蝶呤，C为罗丹明123，D为利福平，E为肌酐)。
步骤3)对比文献中各底物与转运蛋白的亲和力，排序与响应曲线结果一致，验证本方法在多药耐药现象研究以及药物筛选中应用的可行性。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。

Claims (9)

1.一种用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，其特征在于，以市售的传感片L1为基板，在所述基板表面偶联含MDR1的微囊泡；
具体为：以市售的传感片L1为基板，将所述基板放入BIAcore3000仪器中，注入磷酸缓冲液使其以15～25微升/分钟的流速持续流经基板表面，随后又向该仪器中以15～25微升/分钟的流速注入15～25mM的3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸水溶液，注入持续时间为2～4min；用磷酸缓冲液冲洗所述基板，最后向该仪器中注入含MDR1的微囊泡悬浮液，当所述BIAcore3000仪器中折射率的信号变化参数RU值达到5500时，停止注入含MDR1的微囊泡悬浮液，待磷酸缓冲液冲洗掉未结合的微囊泡后，得到表面偶联有MDR1的微囊泡的L1-MDR1芯片。
2.根据权利要求1所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，其特征在于，所述的含MDR1的微囊泡悬浮液采用如下方法制得：将市售的MDCK-MDR1细胞进行平板培养，待MDCK-MDR1细胞生长至90％融合后，对其进行胰酶-EDTA消化，离心，并重新悬浮于磷酸缓冲液中；将含MDCK-MDR1细胞的磷酸缓冲液放入超声仪中，经超声破碎、蔗糖密度梯度离心后，取离心液的中间层，将所述中间层悬浮于含250mM蔗糖的50mMTris缓冲液中，从而获得含MDR1的微囊泡悬浮液。
3.根据权利要求2所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，其特征在于，在超声破碎时，超声频率为250Hz，超声时间为3min。
4.根据权利要求2所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，其特征在于，在蔗糖密度梯度离心时，蔗糖浓度为38wt％，离心速度为10000g，离心时间为100min，温度控制在4±0.1℃。
5.根据权利要求2所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，其特征在于，在获得所述的含MDR1的微囊泡悬浮液后，将其注入BIAcore3000仪器前，还包括对所获含MDR1的微囊泡悬浮液进行鉴定：采用磷酸苯二钠比色法检测微囊泡中碱性磷酸酶的活性；采用荧光底物或同位素底物转运法测定MDR1的蛋白活性；采用BCA法检测含MDR1的微囊泡悬浮液中的蛋白总量；将以上测定参数进行比对，得出所获含MDR1的微囊泡悬浮液中微囊泡的纯度及活度；采用动态光散射仪检测并确定微囊泡的直径分布，直径在150～300nm之间的才能注入BIAcore3000仪器中。
6.根据权利要求1所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，其特征在于，在制得L1-MDR1芯片之后，还包括对其进行表面覆盖率检测：将所述L1-MDR1芯片置于BIAcore3000仪器中，注入含有0.1mg/ml牛血清白蛋白的磷酸缓冲液，当RU值的改变量小于50时，表明芯片表面已完全被微囊泡覆盖，最后取出并用氮气吹干即可用于后续的检测试验。
7.根据权利要求5所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，其特征在于，动态光散射仪的光源系统为氦离子激光系统，光源波长为633nm，动态光散射仪工作温度为25±0.1℃。
8.根据权利要求1所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，其特征在于，磷酸缓冲液配制方法为：将0.27g磷酸二氢钾、1.42g磷酸氢二钠、8g氯化钠及0.2g氯化钾溶解于1L双蒸水中，并通过滴加1M的盐酸水溶液或氢氧化钠水溶液来调整pH至7.4。
9.根据权利要求2所述的用于筛选抗肿瘤药物的SPR传感芯片的制备方法，其特征在于，Tris缓冲液的pH为7.4。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0945721A2 (en) * 1998-03-24 1999-09-29 Dai Nippon Printing Co., Ltd. Biosensitive element for surface plasmon resonance measurements, and its method of manufacture
CA2360932A1 (en) * 1999-02-01 2000-08-10 Vir A/S A surface plasmon resonance sensor
CN1918467A (zh) * 2004-02-13 2007-02-21 欧姆龙株式会社 表面等离子共振传感器
CN101271066A (zh) * 2007-03-19 2008-09-24 吉林大学 用表面等离子体子共振传感器研究药物与生物分子相互作用的方法
CN102866132A (zh) * 2012-09-27 2013-01-09 广州高通生物技术有限公司 一种芯片、制备方法、用途及筛选药物的方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3647267B2 (ja) * 1998-05-29 2005-05-11 キヤノン株式会社 面発光レーザーを用いた表面プラズモン共鳴センサ装置

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0945721A2 (en) * 1998-03-24 1999-09-29 Dai Nippon Printing Co., Ltd. Biosensitive element for surface plasmon resonance measurements, and its method of manufacture
CA2360932A1 (en) * 1999-02-01 2000-08-10 Vir A/S A surface plasmon resonance sensor
CN1918467A (zh) * 2004-02-13 2007-02-21 欧姆龙株式会社 表面等离子共振传感器
CN101271066A (zh) * 2007-03-19 2008-09-24 吉林大学 用表面等离子体子共振传感器研究药物与生物分子相互作用的方法
CN102866132A (zh) * 2012-09-27 2013-01-09 广州高通生物技术有限公司 一种芯片、制备方法、用途及筛选药物的方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Microvesicles as mediators of intercellular communication in cancer—the emerging science of cellular ‘debris’";Tae Hoon Lee 等;《Semin Immunopathol》;20110212;第455-467页 *
"Rationally designed anti-HER2/neu peptide mimetic disables P185HER2/neu tyrosine kinases in vitro and in vivo";Byeong-Woo Park 等;《NATURE BIOTECHNOLOGY》;20000229;第18卷;第194-198页 *
"多药耐药相关蛋白及其在肿瘤耐药中的作用";张慧 等;《药学学报》;20111231;第46卷(第5期);第479-486页 *
"表面等离子体共振技术在药物研究中的应用";申刚义 等;《生命科学》;20100930;第22卷(第9期);第942页左栏第4段、第943页左栏第3段 *
"表面等离子体子共振传感器研究头孢菌素类药物与白蛋白的相互作用";田媛 等;《分析化学(FENXI HUAXUE)研究简报》;20060731;第34卷(第7期);第967-970页 *

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